DK153231B

DK153231B - Kulturmedium til fremstilling af en bakteriel starterkultur

Info

Publication number: DK153231B
Application number: DK397175A
Authority: DK
Inventors: Delmar Lloyd Andersen; Louis Russell Boston; William Arvid Seleen
Original assignee: Borden Inc
Priority date: 1974-09-05
Filing date: 1975-09-04
Publication date: 1988-06-27
Also published as: IE42336L; JPS5154976A; DK397175A; DK153231C; DE2539629C2; IE42336B1; CA1047952A; DE2539629A1; GB1516333A

Description

DK 153231 B

Anvendelsen af dyrkningsmedier tilsat citrat og phosphat re-suiterer i fagresistens og et større og mere ensartet bakterietal i en starterkultur. Ost fremstillet ved anvendelse af en sådan starterkultur lagres hurtigere og har en bedre aroma.

Det er kendt at sætte citrater til forskellige dyrkningsmedier, f.eks. sådanne indeholdende decalcificerede mælkeprodukter eller forøgede koncentrationer af simple sukkerarter for at fremme bakter ie vasks t jf. f.eks. USA patentskrift nr. 3.086.866 og nr. 3.192.124. Det er tillige kendt at sætte citronsyre til et dyrkningsmedium for at fremkalde en komponent med behagelig smag, som derefter sættes til et osteprodukt, jf. f.eks. USA patentskrift nr. 2.971.847.

2

DK 153231 B

Det er endvidere kendt at sætte phosphater til et ostestar-terdyrkningsmedium for at hæmme vasksten af bacteriofager, der i det følgende kaldes fager, jf. f.eks. USA patentskrift nr. 3.354.049.

Denne kendte fremgangsmåde kræver høj phosphatkoncentration og lav calciumkoncentrationer og kræver derfor anvendelse af komponenter såsom demineraliseret valle.

Generelt er de kendte fagresistente medier ikke så aktive som medier, der ikke er fagresistente, hvilket delvis skyldes elimineringen af. divalente calciummetaller og andre mineraler i medierne.

Årsagen til at der ved de kendte fremgangsmåder anvendes calciumfri komponenter i starterdyrkningsmedier er, at det har været antaget, at calcium er essentiel for faginfektion af bakterieceller.

Den foreliggende opfindelse er baseret på dyrkningsmedier indeholdende sød valle, mælk, en nitrogenkilde, citrat og phosphat og som ikke kræver en decalcificeringskilde. Det her omhandlede dyrkningsmedium resulterer i en hurtig bakterievækst, retention af yderst dygtige bakteriepopulationer under hele inkuberingsperioden og i bak-teriofagresistens i dyrkningsmediet.

Det her omhandlede dyrkningsmedium indeholder pr. 100 vægtdele på tørbasis følgende bestanddele: (a) 20 til 95 dele mælkeprodukt indeholdende en større mængde sød valle og en mindre mængde mælk, (b) 0,1 til 30,0 dele nitrogenkilde, (c) 1 til 30 dele af et tilsat citrat, og (d) 1 til 20 dele af et tilsat phosphat.

Det foretrækkes, at mælkeproduktet forekommer i en mængde på fra ca. 65 til 85 dele.

Det foretrækkes, at nitrogenkilden er til stede i en mængde på fra 0,2 til ca. 10 dele.

Det foretrækkes, at citratet er til stede i en mængde på fra ca. 5 til ca. 20 dele.

Det foretrækkes, at phosphatet er til stede i en mængde på fra ca. 1 til ca. 7 dele.

Ovenstående medier bevirker højere bakterietal end de kendte fagresistente starterdyrkningsmedier og bevirker tillige et mere ensartet bakterietal. Resultatet er, at starterkulturerne fremstillet under anvendelse af de her omhandlede dyrkningsmedier kræver en kortere inkuberingstid end de kendte fagresistente medier.

DK 153231B

3

En anden fordel ved det her omhandlede system er, at der kan anvendes calciumholdig sød valle som mælkeproduktet, og at der kan opnås bakterietal, som er større end de, der normalt fås med de kendte fagresistente medier indeholdende fedtfri tørmælk. Den søde valle er ikke decalcificeret og indeholder mindst 0,1 del calcium pr. 1000 dele sød valle i den oprindelige flydende tilstand.

Det foretrækkes, at hovedkomponenten i mælkeproduktet er sød valle, og at en bikomponent i produktet er fedtfri (non-fat) mælk. Sød valle er valle med en pH-værdi på ca. 5,5 til ca. 6,5 i den oprindelige flydende tilstand.

Mælken i mælkeproduktet er fortrinsvis fedtfri tørmælk, men kan indbefatte tør sød mælk. De tilsvarende flydende mælkeformer kan også anvendes. Mindre foretrukne, men dog anvendelige, er de tilsvarende tørrede kærnemælksfaststoffer og flydende kærnemælk.

Nitrogenkilden er valgt blandt gruppen bestående af syre- og enzymnedbrydningsprodukter eller hydrolysater af animalske, vegetabilske og mælkeproteiner såsom gærekstrakt, gærautolysat, “solubilized yeast", spisegær, aminosyrer, kødekstrakt, pancreasekstrakt, leverekstrakt og andre organekstrakter, caseinhydrolysater, sojahydrolysa-ter, albuminhydrolysater, peptoner, peptider og blandinger deraf. Nitrogenkilden er valgt blandt sådanne, der er kendt som vækststimulerende stoffer i bakteriedyrkningsmedier og beskrives ikke nærmere i det følgende. De ovennævnte gærprodukter er de foretrukne nitrogenkilder.

Det foretrukne citrat er natriumcitrat. Kalium- og ammoniumcitrater virker også udmærket i starterkulturer med den her omhandlede sammensætning. Der kan også anvendes andre ugiftige vandopløselige citratsalte. Endvidere kan der anvendes citronsyre, hvilket dog ikke foretrækkes på grund af fomindskelsen af mediets pH-værdi.

De foretrukne phosphater, som anvendes ved den praktiske gennemførelse af den foreliggende opfindelse, er polyphosphaterne, især na-triumhexametaphosphat. Kalium- og ammoniumpolyphosphater kan også udmærket anvendes i starterkulturer med den her omhandlede sammensætning. Andre anvendelige phosphater indbefatter de phosphater, der er beskrevet i USA patentskrift nr. 3.354.049 og nr. 3.041.248. Disse indbefatter primære, sekundære og tertiære phosphatsalte såsom mononatrium-, dinatrium-, trinatrium-, monokalium-, dikalium-, trikalium-, monoammonium- , diammoniumnatriumhydrogenpyrophosphat, tetranatriumpyrophosphat, tetrakaliumpyrophosphat, natriumtripolyphosphat, kaliumtripolyphosphat, kaliumpolymetaphosphat, natriumtrimetaphosphat og natriumtetrameta-phosphat.

DK 153231B

4

De nødvendige tilsætte mængder phosphat og citrat er indbyrdes afhængige på den måde, at jo mere phosphat der tilsættes for at opnå bacteriofagresistens, desto mindre citrat er nødvendig, og vise versa. Når eksempelvis citratkoncentrationen er ca. 20 dele, kræves der kun ca. 1 del phosphat. Når phosphatkoncentrationen er ca. 7 dele, kræves der kun ca. 1 del citrat for at forøge fagresistensen og fremme bakterievæksten. I praksis overskrider den totale mængde phosphat og citrat ikke 30 dele. I dette tilfælde er den minimale mængde mælkeprodukt 40 dele. Fortrinsvis overskrider den totale mængde phosphat og citrat ikke 20 dele. I dette tilfælde er den minimale mængde mælkeprodukt 70 dele.

Produktionen af store mængder mælkesyre i starterkulturen og opretholdelsen af en god bakterieflora står i forbindelse med det tilstedeværende citrats og phosphats pufferevne. Kombinationen af natriumcitrat og natriumhexametaphosphat har vist sig at være nyttig i denne henseende.

Andre bestanddele, som eventuelt kan sættes til det ovenfor anførte materiale til anvendelse i et ostestarterdyrkningsmedium indbefatter følgende: 1. Vand kan eksempelvis tilsætte en sådan mængde, at den færdige opløsning eller suspension indeholder 30-40% faste stoffer.

2. Vitaminer såsom folinsyre, ascorbinsyre, thiamin, riboflavin og pantothensyre.

3. Syrer såsom oliesyre og aminobenzoesyre.

4. Mineraler såsom mangan, magnesium, jern og kalium.

5. Puriner og pyrimidiner såsom adenin, guanin, uracil og xanthin.

6. Saccharider såsom lactose, saccharose, dextrose, hydrolyseret stivelse og majssirupfaststof.

Med henblik på opbevaring, transport og opretholdelse af stabile betingelser foretrækkes det, at blandingen forefindes i tør tilstand. Fremstillingsproceduren for dyrkningsmedier er velkendt og beskrives derfor ikke nærmere.

De anvendte bakterier er sådanne, der normalt anvendes i starterkulturer ved fremstillingen af ost og indbefatter Streptococcus cremoris, Streptococcus lactis, Streptococcus citrovorus, Streptococcus paracitrocorus, Streptococcus thermophilus, Streptococcus faeca-lis, Lactobacillus acidophilus, Lactobacillus bulgaricus, Lactobacillus fermenti, Lactobacillus helveticus, Lactobacillus lactis, Lactobacillus plantarum, Lactobacillus thermophilus, Leuconostoc mesente- rni Λλο nrr Dr*An-5 irm enonτ ^c? orr Kl n/r/ar /laraf

DK 153231B

5

De bakterier, der normalt anvendes ved ostefremstilling, og som foretrækkes ved den foreliggende opfindelse, er Streptococcus cremoris, Streptococcus thermophilus, Lactobacillus bulgaricus, Streptococcus lactis, Streptococcus citrovorus, Propionibacterium shermanii og blandinger deraf.

Den her omhandlede starterkultur anvendes på stort set samme måde som konventionelle starterkulturer er blevet anvendt. En bemærkelsesværdig forskel er, at der kræves mindre af den her omhandlede starterkultur end af de kendte starterkulturer. Andre bemærkelsesværdige forskelle er, at den her omhandlede starterkultur kan anvendes tidligere end eller senere end konventionelle starterkulturer med et væsentligt bedre resultat, end der normalt opnås ved anvendelse af de kendte starterkulturer.

Opfindelsen forklares nærmere i de følgende eksempler, hvor alle dele er på vægtbasis medmindre andet er anført. Aciditeten er titrerbar aciditet udtrykt i procent mælkesyre, medmindre andet er anført.

Eksempel 1

Der fremstilles et dyrkningsmedium ved tørblanding af følgende bestanddele: 69 bestanddele sød valle 11 dele fedtfri tørmælk 2 dele autolyseret gær 16 dele natriumcitrat 2 dele natriumhexametaphosphat.

Til 88,5 dele vand ved 43°C sættes 11,5 dele af det tørre dyrkningsmedium under god omrøring. Efter at tørblandingen er opløst, opvarmes opløsningen til 85°C og holdes ved denne temperatur i 40 minutter til pasteurisering af mediet. Derefter afkøles opløsningen hurtigt til 21°C. Opløsningen opdeles i 3 dele, og hver del podes med en koncentreret kultur. Forholdet mellem koncentreret kultur og opløsning er 1 del koncentreret kultur pr. 5000 dele opløsning. De tre koncentrerede kulturer er Hansen's nr. 70, Hansen's nr. 72 og Marschall's MD. Alle disse tre kulturer er kommercielle kulturer af cheddarostetypen indeholdende en blanding af Streptococcus lactis og Streptococcus cremoris.

De inokulerede kulturopløsninger inkuberes ved 22°C, og der fore tages en standardpladeoptælling på hvert af de inkuberede starterkulturmedier efter 8, 10, 12, 14, 16 og 24 timer. Resultaterne er anført i nedenstående tabel.

6

DK 153231 B

Tabel

Timer Nr. 70 Nr. 72 MD

8 18 24 62 10 58 95 138 12 132 420 450 14 31 115 83 16 470 310 360 24. 271 520 169

Til sammenligningsformål fremstilles to starterkulturer af den kendte type på nøjagtig samme måde. Tørblandingen af det første dyrkningsmedium indeholder 17,0 dele demineraliseret valle, 67,5 dele fedtfri tørmælk, 0,2 dele pancreasekstrakt, 5,1 dele diammoniumphosphat og 5,1 dele dinatriumphosphat. Tørblandingen for det andet dyrkningsmedium indeholder 16,9 dele demineraliseret valle, 51,0 dele fedtfri tørmælk, 0,2 dele pancreasekstrakt, 3,8 dele monoammoniumphosphat, 4,8 dele diammoniumphosphat, 6,5 dele natriumphosphat og 16,8 dele lactose.

De inokulerede medier inkuberes ved 22°C som ovenfor, og en stan-dardpladeoptælling foretages på hver af de inkuberede starterkulturmedier efter 8, 10, 12, 14, 16 og 24 timer. Resultaterne er anført i nedenstående tabel.

Tabel

Dyrkningsmedium I

Timer Nr. 70 Nr. 72 MD

8 0,1 0,3 2,7 10 6,3 4,0 16,4 12 14 17 33 14 22 39 4 16 123 118 13 24 72 94 2

Dyrkningsmedium II

Timer Nr. 70 Nr. 72 MD

8 0,1 0,2 1,1 10 0,5 0,6 1,6 12 4 2 4 14 111 16 5 36 6 24 36 160 1 7

DK 155231B

Den anvendte pladetællingsmetode er standardplademetoden, der er beskrevet i the Standard Method for the Examination of Dairy Products udgivet af the American Public Health Association, 13. udgave

C

(1972) (resultaterne angives i levedygtige celler x 10 pr. ml).

Eksempel 2-8

Der er fremstillet en række starterkulturer ved tørblanding af følgende bestanddele:

Eksempel 2 69.0 dele sødvallepulver 11.0 dele fedtfri tørmælk 2.0 dele autolyseret gær 10.0 dele natriumcitrat 8.0 dele natriumhexametaphosphat

Eksempel 3 69.0 dele sødvallepulver 11.0 dele fedtfri tørmælk 2.0 dele autolyseret gær 12.0 dele natriumcitrat 6.0 dele natriumhexametaphosphat

Eksempel 4 69.0 dele sødvallepulver 11.0 dele fedtfri tørmælk 2.0 dele autolyseret gær 14.0 dele natriumcitrat 4.0 dele natriumhexametaphosphat

Eksempel 5 69.0 dele sødvallepulver 11.0 dele fedtfri tørmælk 2.0 dele autolyseret gær 16.0 dele natriumcitrat 2.0 dele natriumhexametaphosphat

Eksempel 6 69.0 dele sødvallepulver 11.0 dele fedtfri tørmælk 2.0 dele autolyseret gær 17.0 dele natriumcitrat 1.0 dele natriumhexametaphosphat

DK 153231B

8

Eksempel 7 69.0 dele sødvallepulver 11.0 dele fedtfri tørmælk 2.0 dele autolyseret gær 17,5 dele natriumcitrat 0,5 dele natriumhexametaphosphat

Eksempel 8 69.0 dele sødvallepulver 11.0 dele fedtfri tørmælk 2.0 dele autolyseret gær 18.0 dele natriumcitrat I hvert enkelt eksempel sættes 11,5 dele af det tørre dyrkningsmedium til 88,5 dele vand ved 43°C under god omrøring. Efter at tørblandingen er opløst opvarmes opløsningen til 85°C og holdes ved denne temperatur i 40 minutter til pasteurisering af mediet. Derefter afkøles opløsningen hurtigt til 21°C. De enkelte opløsninger inokule-res med en koncentreret kultur af Streptococcus lactis og Streptococcus cremoris. Forholdet mellem koncentreret kultur og opløsning er 1 del kultur pr. 5000 dele opløsning. En kontrol baseret på fedtfri tørmælk inokuleres ligeledes med samme kultur. Hver enkelt opløsning og kontrollen podes tillige med en fag, som er i stand til at lysere strepto-coccusbakterierne i forhold på ca. én fag pr. 1000 bakterieceller.

Den anvendte fag er isoleret fra en kommerciel kultur. Prøverne inkuberes i 16 timer ved 22°C og testes for titrerbar aciditet. Testen dækker tre rækkeoverføringer fra hvert eksempel.

Det fremgår af resultaterne, at de i eksempel 2-6 anvendte medier udviser faginhibering, medens de i eksempel 7 og 8 anvendte medier ikke udviser faginhibering. Dette fremgår af de i den følgende tabel anførte resultater.

DK 153231B

9

Tabel y

Eksempel Overføringer 12 3

Pedtfrit medium w/fag 0,17 0,16 0,16

Fedtfrit medium w/o fag 0,76 6,70 0,73 2 w/fag 1,13 1/14 1/14 2 w/o fag 1,14 1,13 1,14 3 w/fag 1,14 1,13 1,17 3 w/o fag 1,09 1,13 1,17 4 w/fag 1,12 1,14 1,15 4 w/o fag 1,08 1,13 1,15 5 w/fag 1,11 1,11 1,14 5 w/o fag 1,09 1,11 1,12 6 w/fag 1,06 1,11 1,10 6 w/o fag 1,07 1,11 1,08 7 w/fag 1,08 0,62 0,17 7 w/o fag 1,08 1,12 1,08 8 w/fag 1,05 0,73 0,16 8 w/o fag 1,02 1,14 1,05 KTitrerbar aciditet i disse eksempler og i beskrivelsen i øvrigt er procent mælkesyre.

Eksempel 9

Der fremstilles et dyrkningsmedium ved tørblanding af følgende bestanddele: 68.0 dele sødvallepulver 11.0 dele fedtfri tørmælk 2.0 dele autolyseret gær 11.0 dele natriumcitrat 8.0 dele natriumhexametaphosphat 11 dele af det tørre dyrkningsmedium sættes til 89 dele vand ved 43°C under god omrøring. Efter opløsning af tørblandingen opvarmes opløsningen til 85°C og holdes ved denne temperatur i 40 minutter til pasteurisring af mediet. Derefter afkøles opløsningen hurtigt til 21°C. Opløsningen inokuleres med en koncentreret kultur af Streptococcus lactis og Streptococcus cremoris. Forholdet mellem koncentreret kultur og opløsning er 1 del koncentreret kultur pr. 5000 dele opløsning. Hver af opløsningerne inokuleres ligeledes med en fag, som er i stand til at lysere streptococcusbakterierne i forhold på ca. en fag pr. 1000 bakterieceller.

DK 153231 B

10 Φϋ saiBBiSRligningsformål fremetillei en anden starterKultur Få nøjagtig samme måde, idet der dog anvendes 11. dele fedtfri tørmælk sat til 89 dele vand som dyrkningsmedium. Prøverne inkuberes i 16 timer ved-22°C.

Resultaterne viser, at der er fuldstændig fagresistens i citrat--phosphatmediet, hvorimod kontrolmediet indeholdende fedtfri mælk ikke udviser resistens mod fagvækst.

Eksempel 10

Der fremstilles dyrkningsmedier ved tør blanding af følgende bestanddele:

Prøve 1 69 dele sødvallepulver 11 dele fedtfri tørmælk 2 dele autolyseret gær 16 dele natriumcitrat 2 dele natriumhexametaphosphat

Prøve 2 69 dele sødvallepulver 11 dele fedtfri tørmælk 2 dele autolyseret gær 14 dele natriumcitrat 4 dele natriumhexametaphosphat

Prøve 3 69 dele sødvallepulver 11 dele fedtfri tørmælk 2 dele autolyseret gær 12 dele natriumcitrat 6 dele natriumhexametaphosphat

De enkelte medier fremstilles ved at sætte 88,5 dele vand ved 43°C under god omrøring til 11,5 dele af de enkelte tørre dyrkningsmedier. Efter opløsning af tørblandingen opvarmes opløsningen til 85°C og holdes ved denne temperatur i 40 minutter til pasteurisering af mediet. Derefter afkøles opløsningen hurtigt til 21°C.

Til sammenligningsformål fremstilles en starterkultur på nøjagtig samme måde, dog med den undtagelse, at 11,5 dele fedtfri tørmælk sættes til 88,5 dele vand og anvendes som dyrkningsmedium.

Et sæt af testprøverne og kontrolprøven med fedtfri tørmælk inokuleres med en kultur af Streptococcus lactis 7962, som fås fra

DK 153231B

11

University of Minnesota, og inokuleres tillige med en fag, som er i stand til at lysere bakterierne i et forhold på ca. én fag pr. 1000 bakterieceller. Prøverne inkuberes i 16 timer ved 22°C og testes for titrerbar aciditet, standardpladetal, fagtal og pH. Testen dækker tre rækkeoverføringer fra hver prøve.

I nedenstående tabel er (TA)^ titrerbar aciditet ved afslutningen af de 16 timer minus titreraciditet ved 0 timer. TPC er det totale bakteriepladetal i levende celler pr. ml, og PFU er det totale plaque-dannende enheder pr. ml. MSND er fedtfri tørmælkepulver.

12

DK 153231 B

ιη ιη ιη f Ύ Ψ νριηρ-ρ- ΟΟΟ ΟΟΟ ΟΟΟΟ

LO ι—I ι—1 ι—I OO rH ι—I ι—I ι—I ι—I ' I ι—I

D ΟΧ**! ο κ χ *: η κ κ χ h Η 00 Ο LO Η ο Ο Η Ο'ΨίΝοο Ρ J ^ ^ ^ ^ ^ *·».*.«* Ο ri Μ Μ Ο ΙΟ σι ri ΰ Ί1 γΙ η οο ο σι «λ Is σ σ σ σι σ σι οοοο οοοο ο ο ο ο

ι—I ι—I [—I ι—I ι—I ι—I ι—I ι—I ι—I ι—I ι—I ι—I

Ό X X X X X X X X X X X X

(¾ Η ο Ο ιη ιη Η 'ί η in cm ο ΕΗ «»*»»»»» s κ s s *»*»«»*»

On O'· ι—1 ι—I i—I CM ι—I ι—! ι—I Η* i—! ι—I i—1 Π3 m lo in in in in in Ό lo Η O on to Ο Ο on lo O on on (J)£Q S ^ s S S V *»

S| £, VO VD V£> LT) VO VO VO LO VO VO LT) LO

q ^ vo ro^r-vo h h oo in Ο Η Η Η Ο Η Η Η ΟΉγ·Η*—Ι ftf* k S S K S K ·» N S K S \ £* oooo oooo oooo

oo oo oo oo co ση ση ση on on on on cm OOOO OOOO OOOO

LO ι—IHHr—I iHHrHiH i-HHHrH

on U X X X X X X X X X X X X

r" ft p oo to m r^roHin lo lo ro cm

Eh >· > > «· 03 oo on CO i—It—I CO ι—l <—! I—I I—ι

H

H Eh <D O

,q rfj m in in m in (¾ t-3 cm ι—ι Ο O cm H O O rH rH o on

Eh Μ " - “· * ' - • Qh lo lo lo lo lo lo lo lo lo lo lo in

W on tO

m s

<D

OQ co H in cm p N in ni on co r>· cm

iO —, Ο *—I ι—I 1—I OHrHrH OHtHiH

rtl KKWK K ^ ^ ^ K ·* *> *.

Eh OOOO OOOO OOOO

rl N n H CM CO >H CM CO

S

O (1)0)0) 0)0)0) 0)0)0) IH Ih ^ ^ ^

Q g S S S S

H WMMM WMMM CQMMM

S SOjPhCU S ft Pi Pi S ft ft ft bn

G

H

M

•s m h cm co 5h 0 >

O

13 DK 153231B

Eksempel 11

Der fremstilles dyrkningsmedier ved tørblanding af følgende bestanddele:

Prøve 2 62 dele sødvallepulver 11 dele fedtfri tørmælk 2 dele autolyseret gær 14 dele natriumcitrat 4 dele natriumhexametaphosphat

De enkelte medier fremstilles ved at sætte 88,5 dele vand ved 43°C under god omrøring til 11,5 dele af det tørre dyrkningsmedium. Efter opløsningen af tørblandingen opvarmes opløsningen til 85°C og holdes ved denne temperatur i 40 minutter til pasteurisering af mediet. Derpå afkøles opløsningen hurtigt til 70°C.

Til sammenligningsformål fremstilles et startermedium på nøjagtigt samme måde, idet dog 11,5 dele fedtfri tørmælk sættes til 88,5 dele vand og anvendes som dyrkningsmedium.

Et sæt af testprøverne og kontrolprøven med fedtfri tørmælk inokuleres med en kultur af Streptococcus cremoris HP, som fås fra University of Minnesota, og inokuleres tillige med en fag, som er i stand til at lysere bakterierne i forhold på ca. én fag pr. 1000 bakterieceller. Prøverne inkuberes i 16 timer ved 21°C og testes for ti-trerbar aciditet, pladetal, fagtal og pH. Testen dækker tre serieoverføringer fra hver prøve.

I nedenstående tabel betyder (TA)D titrerbar aciditet efter afslutningen af 16 timer minus den titrerbare aciditet ved 0 timer.

TPC er det totale bakteriepladetal i levende celler pr. ml, og PFU er det totale plaquedannende enheder pr. ml, MSNF er fedtfri tørmælkpulver.

14

DK 153231 B

oo co in cm co cm r*·

O O O O O O O

CD i—li—I i—li—i i—I O <—I O i—I O O O

ft * * * * *0*0 *000 ft N W S η O Ή O Ή γΗΗγΗιΗ « ^ ^ « *» h ^ r-i cm H oo co in t-i σι σι σι σι ic οι σι σι Is σι w ffi tu ΟΟΟΟ ΟΟΟΟ Ο Ο Ο Ο

id Ο ι—) ι—f i—I i—i i—I i—i i—) i—f iHHiHrH

w ft * * * * * * * * * * * *

Eh O O oo co OHHO O oo σι σ> Γζ3 * * ft. Η * ft»ft.^ft,

0 (O CM Η Η Η CM CM CM CO ι—1 r-1 r—I

s m m in m m m mm CG ro ο σι oo σι Ο σι σι moooooo ft. ^ *ft ft. k. V ft. ft. ftk ^ ^ co m 'd* o' ίο m ic d1 co^'^'S* Q „

^ CO Γ·~ Γ~ r—1 CO CO CO CO O CO CO

rij or^r^co O r- r- co Oooooco

0-) ft ft S ft ft ft ft ft ^ W ft. W

—- oooo oooo oooo σι σι σι σι οι οι σι m οι οι οι οι ΟΟΟΟ ΟΟΟΟ ΟΟΟΟ ft Ο ι—) —( ι—C —t ri ri Η Η ι—I i—I ι—I ι—! a o. * * * * * * * * * * * *

Eh ic (M h oo co co O η η- σι oo m JQ ».*.*.·. ».«.»* . ^ s H iH CM ι—I Η H CM CM CM CM CM H m a

Ή O

0 s jq h m mm td pj ffi m οι σι οι co o σι σι co οι æ »

En U O' ft ^ ‘ " * * * *· ^ ^ v Π5 ^ rji m ^ M’ t • m ω C! 0 ό

p Q

O-. f" CO CM CM m Γ" H CM CO CO 00 rij ^ r*·* r- r- mr»coi^> co r- co £H ^ ^ I» . ·»«.>-.·. *·.**

·— oooo OOOO OOOO

i—l CM CO i—1 CM CO i—1 CM CO

s a ø ø ø 0)0)0 øøø H ft > > > ft > > > ft > > > Q s s. ·& s. g ΰι & s.

HWMMi-l Ui U U U W k Μ M

S S (¾ (¾ 1¾ 2 Pi ft ft S ft ft ft tn

G

H

u •Θ.

IH H CM CO

u 0 >

O

15 DK 153231 B

Eksempel 12

Der fremstilles dyrkningsmedier ved tørblanding af følgende bestanddele:

De enkelte medier fremstilles ved at sætte 88,5 dele vand ved 43°C under god omrøring til 11,5 dele af ovennævnte tørblandinger.

Efter opløsning af tørblandingen opvarmes opløsningen til 85°C til pasteurisering af mediet og holdes ve ddenne temperatur i 40 minutter. Derefter afkøles opløsningerne hurtigt til 21°C.

Til sammenligningsformål fremstilles en starterkultur på nøjagtig samme måde, idet dog 11,5 dele fedtfri tømælk sættes til 88,5 dele vand og anvendes som dyrkningsmedium.

Ét sæt af testprøveme og kontrollen med fedtfri tørmælk inoku-leres med en kultur af Streptococcus lactis ML 3, som fås fra University of Minnesota, og der inokuleres tillige med en fag, som er i stand til at lysere bakterierne i forhold på ca. én fag pr. 1000 bakterieceller. Prøverne inkuberes i 16 timer ved 21°C og testes for titrerbar aciditet, pladetal og fagtal samt pH. Testen dækker tre seriefortyndinger fra hver prøve.

I nedenstående tabel betyder (TA)D titrerbar aciditet efter 16 timers forløb minus den titrerbare aciditet ved O timer. TPC er det totale bakteriepladetal i levende celler pr. ml, og PFU er total plaque-dannende enheder pr. ml. MSNF er fedtfri tørmælkepulver.

16 DK 153231B

co -ί 'ϊ ® r-· in to ιο ιο σι oo r- οοοο ο ο ο ο οοοο

Ω ιΗγ—Ιι—|ιΗ γΗ ι—| ι—I Η r-H ri Η ρI

h χ χ χ χ ax*:*: χ χ χ χ dt ·*? Ο Ο co Γ' co cn en Ο Ο « to Κ k Κ ^ ^ s Κ Η Κ Κ Si VO ΙΟ 00 Η ΜΗΝΗ Ν h Η Ν ιο οι σι οι co οο σι σι σ σ οο ΟΟΟΟ οοοο οοοο ι—I ι—I ι—ii—i ι—ii—li—ii—1 i—Ir-Il—! I—)

0 X X X X X X X X X X X X

fit cmooO^d ^ in in oo cm σι ρ- oo £-t * * * * ^ i« v ^ ^ ^ k vo cm ro cm cm ro ro cm σι cm H cm U> φ m 'd (D LO tf)

S EC w σι m o 'j m σι σι σι Η H

ft - “ ' - **>» *·

ΙΟ 'ί "O1 'ϊ ΙΟ ^ ri* in ri* ΙΠ ID

Q

—N ro σι ri1 Η o H o ni in οι to o

rij o θ' O- θ' ΟΟΟΟ-Ο- fOO'LDiH

£-J * * * *» * * * *> K s K S

— OOOO O O O O OOOO

m σι m m σ σ m σ σι σι σι σι ΟΟΟΟ οοοο οοοο

ΓΟ rH ι—1 ι—i ι—I ι—) ι—1 i—I rH ι—! ι—I ι—il—I

Ο X X X X XX X« χχχχ id (it m «ί ο m ιο in σι Η f" ρ~ σι ·π gj £η ' ' ' ' W ^ κ ·> ». κ * »k ri Ν CO Ν ri (Ο Μ Ν Η 00 Μ 00 Η U1 Φ Η Λ EH cn (0 Ο Φ Εη ri! m t_q in in in in in in d K oo σι co co oo co co O o oo oo σι * φ ft ι. ^ n k. ^ ^ v ^ oi >d <f <f <ί m in <ί 'j

D

Ω ^ oooitoni ro n η· H ^ O in m rij si· r·* in co p^ p- n1 co p p * * * - ^ - - - » * - *

- OOOO OOOO OOOO

H n cn η ni ro H cm m

S

p ΦΦΦ ΦΦΦ ΦΦΦ H ft > > > ft > > > fr, > > > ω a «ι «ι «ι 3¾¾¾. a ·& ®. &

g cn d M d cos-iS-tM cns-idM

a s ft ft ft aftftft s ft ft ft 01 a

H

14Ί H CM CO

U Φ >

O

17 DK 153231 B

Eksempel 13

Dyrkningsmedier fremstilles ved tørblanding af følgende bestanddele:

De enkelte medier fremstilles ved at sætte 88,5 dele vand ved 43°C under god omrøring til 11,5 dele af tørblandingerne. Efter opløsningen af tørblandingen opvarmes opløsningen til 185°C til pasteurisering af mediet og holdes ved denne temperatur i 40 minutter. Derpå afkøles opløsningen hurtigt til 21°C.

Til sammenligningsformål fremstilles en anden starterkultur på nøjagtig samme måde, idet dog 11,5 dele fedtfri tørmælk sættes til 88,5 dele vand og anvendes som dyrkningsmedium.

Ét sæt af testprøveroe og kontrollen med fedtfri tørmælk ino-kuleres med en kultur af Streptococcus lactis C2, som fås fra University of Minnesota, og der inokuleres tillige med en fag, som er i stand til at lysere bakterierne i forhold på ca. én fag pr. 1000 bakterieceller. Prøverne inkuberes i 16 timer ved 21°C og testes for titrerbar aciditet, pladetal, fagtal og pH. Testen dækker tre seriefortyndinger fra hver prøve.

I nedenstående tabel betyder (TA)D titrerbar aciditet efter 16 timer minus den titrerbare aciditet ved 0 timer. TPC er det totale bakteriepladetal i levende celler pr. ml, og PFU er total plaquedannende enheder pr. ml, MSNF er fedtfri tørmælkepulver.

DK 153231B

18 r- vo vo p> ro ^

OOO OOOO O O O

00 i—i i—1 i—i (HrHrHiH rH 10 i—I i—i

O O X X X X X X X X O X X

Ai Η σι O O ΰ n O O 'ΨΗΟγο

Aj X h * * * * h ^ * X * *

ro H m ro ro 10 H lO H ro ίο H

n m m ® σι σι σι σι οι σι σι οοοο οοο οοοο

U ι—ι ι—ι t—ι ι—ι ιο [—ι ι—ι ι—ι ι—ι ι—ι ι—ι ι—I

ΡΜ X X X X Ο X X X X X X X

Εη ιο'Ψγίοο Η'^'ϊΟ Ο t" Ο Ο

^ ^ ^ ^ X «. Κ Κ V ». V

tn ro cm ro ro ro ro ro ro h -¾1 ro cm Π) Ή 'ΰ

<D

2 m mm m mm M Η Ο Ο ιοοσιΟ m οι ο η 0, - - - - - - - - - ' - > lommm lom^m m ># m ^ Ο ro ο ro r- cm η r·» m m ο m ρ~ rtj O p- Γ" p* Ocor^p' ro to r> r>

S· OOOO OOOO OOOO

CM

U

. W

Η σι σι σι σι οι οι οι οι σι οι οι γ-ηβ ΟΟΟΟ ΟΟΟΟ Ο ΟΟ G) Ο ι-ΗγΙιΗΗ ι—1 ι—I ι—I ι—I Η ι—ΙΗ ,α < ο χ χ χ χ χ χ χ χ χ < χ χ ιβ A (¾ 'f Ο ^ οι cm cm σ ιο ιο μ ιο m £4 £-4 ^ κ ^ s *. κ • Η ^ 00 ro Η ΓΟ CNJ CM H CN ΓΟ ω en ro in mmm mmmm O >H O O σιΟΟσι οοΟσισι £* f£{ K ^ < *.*.*.%. V, k » «> (Dili m in in in ^ m in n« τ) o

Q

cmOi-ih Hcncom <ø σι ro ^ <; m oo p· p* ^a« p* r* r* m ρ» ρ»

Eh - - - - - - - - - - - - "" ΟΟΟΟ ΟΟ ΟΟ ΟΟΟΟ Η cm m rH cm rn Η cm ro

S

JD 0)0)(1) 0)0)0) 0)0)0) H ^ ^ ^ ^ ^ ^

Q 3«.·θ.·θ. J3 «l «ι «ι W W Μ M Pi COMMM CO Μ Μ M

a a A PM Ai a PM Al Pi a PM Ai PM

&> ti •ri ti •G· Ή H CM ro SH 0) >

O

19 DK 153231B

Eksempel 14

Der fremstilles dyrkningsmedier ved tørblanding af følgende bestanddele:

Prøve 1 60 dele sødvallepulver 20 dele fedtfri tørmælk 3 dele autolyseret gær 2 dele natriumcitrat 15 dele natriumhexametaphosphat

Prøve 2 61 dele sødvallepulver 20 dele fedtfri tørmælk 3 dele autolyseret gær 8 dele natriumcitrat 8 dele natriumhexametaphosphat

Prøve 3 59 dele sødvallepulver 20 dele fedtfri tørmælk 3 dele autolyseret gær 14 dele natriumcitrat 4 dele natriumhexametaphosphat

Prøve 4 57 dele sødvallepulver 20 dele fedtfri tørmælk 3 dele autolyseret gær 18 dele natriumcitrat 2 dele natriumhexametaphosphat

Prøve 5 52 dele sødvallepulver 20 dele fedtfri tørmælk 3 dele autolyseret gær 24 dele natriumcitrat 1 del natriumhexametaphosphat

Prøve 6 61,8 dele sødvallepulver 20.0 dele fedtfri tørmælk 0,2 dele autolyseret gær 16.0 dele natriumcitrat 2,0 dele natriumhexametaphosphat

2° DK 153231 B

Prøve 7 62 dole Bødrallepuluer 10 dele fedtfri tørmælk 10 dele autolyseret gær 16 dele natriumcitrat 2 dele natriumhexametaphosphat

Prøve 8 52 dele sødvallepulver 10 dele fedtfri tørmælk 20 dele autolyseret gær 16 dele natriumcitrat 2 dele natriumhexametaphosphat

Prøve 9 47 dele sødvallepulver 10 dele fedtfri tørmælk 25 dele autolyseret gær 16 dele natriumcitrat 2 dele natriumhexametaphosphat

Prøve 10 69 dele sødvallepulver 11 dele fedtfri tørmælk 2 dele autolyseret gær 16 dele natriumcitrat 2 dele natriumhexametaphosphat

Prøve 11 25 dele sødvallepulver 25 dele dextrin 20 dele fedtfri tørmælk 10 dele autolyseret gær 16 dele natriumcitrat 4 dele natriumhexametaphosphat

Prøve 12 40 dele sødvallepulver 29 dele lactose 11 dele fedtfri tørmælk 2 dele autolyseret gær 16 dele natriumcitrat 2 dele natriumhexametaphosphat

Prøve 13

2i DK 153231 B

40 dele sødvallepulver 29 dele dextrose 11 dele fedtfri tørmælk 2 dele autolyseret gær 16 dele natriumcitrat 2 dele natriumhexametaphosphat

De enkelte opløsninger fremstilles ved at sættes 88,5 dele vand ved 43°C under god omrøring til 11,5 dele af tørblandingerne. Efter opløsning af tørblandingen opvarmes opløsningen til 85°C og holdes ved denne temperatur i 40 minutter til pasteurisering af mediet. Derpå afkøles opløsningen hurtigt til 21°C.

Ét sæt af prøverne inokuleres med en kommerciel kultur, Hansen's 72, og et andet sæt af prøverne inokuleres med en anden kommerciel kultur, Marschall's MRD. Prøverne inkuberes i 16 timer ved 21°C og testes for titrerbar aciditet.

I nedenstående tabel betyder (TA)^g den titrerbare aciditet efter 16 timer.

Tabel

Prøve Kultur (TA)16 1 Hansens nr. 72 1,15

Marschall MRD 1,00 2 Hansens nr. 72 1,20

Marschall MRD 1,07 3 Hansens nr. 72 1,20

Marschall MRD 1,09 4 Hansens nr, 72 1,21

Marschall MRD 1,13 5 Hansens nr. 72 1,28

Marschall MRD 1,23 6 Hansens nr. 72 1,07

Marschall MRD 1,06 7 Hansens nr. 72 1,25

Marschall MRD 1,16 8 Hansens nr. 72 1,35

Marschall MRD 1,25 9 Hansens nr. 72 1,38

Marschall MRD 1,26 10 Hansens nr. 72 1,15

Marschall MRD 1,08 11 Hansens nr. 72 1,26

Marschall MRD 1,16 12 Hansens nr. 72 1,09

Marschall MRD 0,99 13 Hansens nr. 72 1,09

Marschall MRD 1,06

Claims

1. Kulturmedium til fremstilling af en bakteriel startekultur, kendetegnet ved, at det pr. 100 vægtdele på tørbasis indeholder følgende bestanddele: (a) 20 til 95 dele af et mælkeprodukt indeholdende en større bestanddel af sød valle og en mindre bestanddel af mælk, (b) 0,1 til 30,0 dele af en nitrogenkilde, (c) 1 til 30 dele af et tilsat citrat, og (d) 1 til 20 dele af et tilsat phosphat.

2. Medium ifølge krav 1, kendetegnet ved, at mælkeproduktet er til stede i en mængde på fra 63 til 85 dele.

3. Medium ifølge krav 1 eller 2, kendetegnet ved, at nitrogenkilden er til stede i en mængde på fra 0,2 til 10,0 dele.

4. Medium ifølge et af kravene 1-3, kendetegnet ved, at citratet er til stede i en mængde på fra 5 til 20 dele.

5. Medium ifølge et af kravene 1-4, kendetegnet ved, at phosphatet er til stede i en mængde på fra 1 til 7 dele.

6. Medium ifølge et af kravene 1-5, kendetegnet ved, at citratet er natriumcitrat.