DK150600B

DK150600B - Cephalosporinderivater

Info

Publication number: DK150600B
Application number: DK478983A
Authority: DK
Inventors: Marc Montavon; Roland Reiner
Original assignee: Hoffmann La Roche
Priority date: 1978-05-30
Filing date: 1983-10-17
Publication date: 1987-04-06
Also published as: DK388984A; DK478983A; DK478983D0; DK388984D0; DK150600C; DK149283C; DK149283B

Description

150600

Den foreliggende opfindelse angår hidtil ukendte cephalosporinderiva-ter, som er ejendommelige ved, at de har den almene formel II

Η H

f ϊ,sx

CH3ON-=C— CONH—i-J I

//Λ S—X " RHN^\g /

COOH

hvor X betegner en 1,2,5,6-tetrahydro-2-methyl-5,6-dioxo-as-triazin-5 3-ylgruppe eller en 2,5-dihydro-6-hydroxy-2-methyl-5-oxo-as-triazin- 3-yl-gruppe, R betegner en fraspaltelig beskyttelsesgruppe, som kan være tert.butoxycarbonyl, trityl, trifluoracetyl eller chlor-, bromeller iodacetyl, og carboxygruppen kan foreligge som silylester eller _^-alkyl-COO-C^_^-alkylester eller være beskyttet ved saltdannelse 10 med en uorganisk eller tertiær organisk base.

Cephalosporinderivaterne med formlen II er værdifulde mellemprodukter til fremstilling af farmakologisk værdifulde cephalosporinderivater.

De kan ved fraspaltning af beskyttelsesgruppen R og eventuelt også den eventuelt tilstedeværende carboxybeskyttelsesgruppe omdannes til 15 det farmakologisk værdifulde cephalosporinderivat med den almene formel I

Η H

! } s CH3ON=tC- conh —:—^ ^ r\ ' Η2ΝΛδ/ .

COOH

2 150600 hvor X har den ovenfor anførte betydning, eller C-j^-alkyl-COO-Ci_4~alkylestere/ethere eller salte af denne forbindelse eller hydrater af forbindelsen med formlen I eller af de nævnte estere/ethere eller salte.

5 Ved estere af forbindelsen med formlen I forstås forbindelser svarende til formlen I, hvis carboxygruppe foreligger i form af en estergruppe som ovenfor defineret. Eksempler på sådanne estere er aceto-xymethyl-, pivaloyloxymethyl-, 1-acetoxyethyl- og 1-pivaloyloxyethyl-estere.

10 Ved ethere af forbindelsen med formlen I forstås forbindelser svarende til formlen I, hvor X betegner en 2,5-dihydro-6-hydroxy-2-me-thyI-5-oxo-as-triazin-3-ylgruppe, hvis enoliske OH-gruppe foreligger i form af en ethergruppe som ovenfor angivet. Som ethergrupper kan anvendes samme grupper, som ovenfor er omtalt som estergrupper.

15 Eksempler på sådanne ethere er altså fx acetoxymethyl-, pivaloyloxymethyl-, 1-acetoxyethyl- og 1 -pivaloyloxyethylether.

Estere/ethere (diderivater) dannes for begge betydninger af X; det drejer sig om tilsvarende, tautomere former af X, der står i ligevægt med hinanden.

20 Eksempler på salte af forbindelsen med formlen I er alkalimetalsalte, fx natrium- og kaliumsaltet; ammoniumsaltet; jordalkalimetalsalte, fx calciumsaltet; salte med organiske baser, fx salte med aminer såsom salte med N-ethylpiperidin, procain, dibenzylamin, Ν,Ν'-dibenzyl-ethylethylendiamin, alkylaminer eller dialkylaminer samt salte med 25 aminosyrer, fx salte med arginin eller lysin.

Saltene kan være monosalte eller disalte. Den anden saltdannelse kan optræde i forbindelser med hydroxygruppen i 2,5-dihydro-6-hydro-xy-2-methyl-5-oxo-as-triazin-3-ylgruppen.

Forbindelsen med formlen I danner ligeledes additionssalte med orga- 30 niske eller uorganiske syrer. Eksempler på sådanne salte er hydroha-logenider, fx hydrochlorider, hydrobromider og hydroiodider, samt 3 150600 andre mineralsyresalte såsom sulfater, nitrater og phosphater, alkyl-og mono-arylsulfonater såsom ethansulfonater, toluensulfonater og benzensulfonater samt andre organiske syresalte såsom acetater, tartrater, maleater, citrater, benzoater, salicylater og ascorbater.

5 Forbindelsen med formlen I samt salte og estere/ethere deraf kan . være hydratiserede. Hydratiseringen kan foretages under fremstil- t lingsfremgangsmåden eller efterhånden på grund af hygroskopiske egenskaber i et i starten vandfrit produkt.

' *

Forbindelserne I og II kan foreligge i den syn-isomere form N--— C—CONH-? jTii. * H2N \ S / och3 10 eller i den anti-isomere form ' Μ} Λ ch30 eller som blandinger af disse to former. Der foretrækkes den syn-isomere form eller blandinger, i hvilke den syn-isomere form er overvejende.

Foretrukne slutprodukter med formlen I er 15 (6R,7R)-7-[2-(2-amino-4-thiazolyl)-2-(Z-methoxyimino)-acetamido] -3-([C2,5-dihydro-6-hydroxy-2-methyl-5-oxo-as-triazin-3-yl)thio] -methyl) -8-oxo-5-thia-1 -azabicyclo [4.2.0] oct-2-en-2-carboxylsyre og salte deraf samt de tilsvarende hydrater.

4 150600

Et foretrukket mellemprodukt II er (6R,7R)-7-(2-[2-(2-chloracetami-do) -4-triazolyl] -2- (Z-methoxyimino) acetamido) -3- ([ (2,5-dihydro-6-hy-droxy-2-methyl-5-oxo-as-triazin-3-yl) -thio] methyl) -8-oxo-5-thia-1 -azabicyclo[4.2.0]oct-2-en-2-carboxylsyre.

5 Det ovenfor anførte cephalosporinderivat med formlen I eller ^-al-kyl-COO-C^_^-alkylestere/ethere eller salte af denne forbindelse eller hydrater af forbindelsen med formlen I eller af de nævnte estere/-ethere eller salte fremstilles ved, at a) beskyttelsesgruppen R som ovenfor defineret og eventuelt også en 10 eventuelt tilstedeværende silylgruppe eller _^-alkyl-COO-C^ ^-al-

kylgruppe eller carboxybeskyttelsesgruppe i saltform som ovenfor defineret, spaltes fra forbindelser med den almene formel II

Η H

! I g CH-,ΟΝ ~=C- CONH---\ N-1 i ΐΓ\ 0^~ S~X "

RHN-^\g / J

COOH

hvor X og R har den ovenfor anførte betydning, og carboxygruppen 15 kan foreligge som ovenfor defineret, hvorhos sidstnævnte beskyttelsesgruppe om nødvendigt eller ønsket også fraspaltes, og eventuelt til fremstilling af en C^ ^-alkyl-COO-C^ ^-alkylester/ether af forbindelsen med formlen I denne omsættes med et C^ ^-alkyl-COO-C^_^-alkyl-halogenid, og eventuelt til fremstilling af salte eller hydrater eller 20 hydrater af disse salte den vundne forbindelse omdannes til et salt eller hydrat eller et hydrat af saltet, eller b) til fremstilling af en C^-alkyl-COO-C^-alkylester/ether af forbindelsen med formlen I denne omsættes med et C.j^-alkyl-COO- C.j^-alkylhalogenid, eller 5 150600 c) tif fremstilling af salte eller hydrater af forbindelsen med formlen I eller hydrater af disse salte forbindelsen med formlen I omdannes til et salt eller et hydrat eller et hydrat af dette salt.

Den i forbindelsen med formlen II tilstedeværende carboxygruppe kan 5 om ønsket foreligge som silylesteren, fx trimethylsilylesteren, eller som en _^-alkyl-COO-C^_^-alkylester. Carboxygruppen kan også være beskyttet ved saltdannelse med en uorganisk eller tertiær organisk base såsom triethylamin. Beskyttelsesgrupper R er fx ved sur hydrolyse fraspaltelige beskyttelsesgrupper, fx tert.butoxycarbonyl 10 eller trityl, eller ved basisk hydrolyse fraspaltelige beskyttelsesgrupper, fx trifluoracetyl. Foretrukne beskyttelsesgrupper R er chlor-, - · brom- og iodacetyl, især chloracetyl. De sidste beskyttelsesgrupper kan fraspaltes ved behandling med thiourinstof.

Forbindelserne med formlen II kan fx fremstilles ved N-acylering af 15 den tilsvarende 7-aminoforbindelse, idet en forbindelse med den almene formel 111

H H

» - M

H2N—^f X

o'^ \^·~°Η2_3-Χ

COOH

hvor X har den ovenfor anførte betydning, og carboxygruppen og/-eller aminogruppen kan foreligge i beskyttet form, omsættes med en 20 syre med den almene formel IV

CH^N — C- COOH

ri

RHN ^\s X

6 150600 hvor R har den ovenfor anførte betydning, eller med et reaktivt funktionelt derivat af denne syre, og en eventuelt tilstedeværende carboxybeskyttelsesgruppe eventuelt fraspaltes.

Den i 7-aminoforbindelsen med formlen III tilstedeværende carboxy-5 gruppe kan om ønsket være beskyttet, hvilken beskyttelse kan være foretaget på den måde, der ovenfor er beskrevet i forbindelse med den udgangsforbindelse med formlen II, der skal fremstilles. Amino-gruppen i forbindelsen med formlen III kan fx være beskyttet med en silylbeskyttelsesgruppe såsom trimethylsilyl.

10 Som reaktive funktionelle derivater af syrer med formlen IV kan fx nævnes halogenider, dvs. chlorider, bromider og fluorider; azider; anhydrider, især blandede anhydrider med stærke syrer; reaktive estere såsom N-hydroxysuccinimidester; og amider såsom imidazolider.

Omsætningen mellem 7-aminoforbindelsen med formlen III og syren med 15 formlen IV eller et reaktivt funktionelt derivat deraf kan udføres på i og for sig kendt måde. Således kan fx en fri syre med formlen IV kondenseres med et til den omtalte ester med formlen III svarende derivat ved hjælp af et carbodiimid, fx dicyclohexylcarbodiimid, i et inert opløsningsmiddel, fx ethylacetat, acetonitril, dioxan, chloroform, 20 methylenchlorid, benzen eller dimethylformamid, hvorefter estergruppen fraspaltes. I stedet for carbodiimider kan der som kondensationsmidler også anvendes oxazoliumsalte, fx N-ethyl-5-phenyl-isoxazoli-um-3'-sulfonat.

Ved en anden udførelsesform omsættes et salt af en syre med formlen 25 III, fx et trialkylammoniumsalt, fx triethylammoniumsaltet, med et reaktivt funktionelt derivat af en syre med formlen IV som ovenfor omtalt i et inert opløsningsmiddel, fx et af de ovenfor anførte.

Ved en yderligere udførelsesform omsættes et syrehalogenid, fortrinsvis chloridet, af en syre med formlen IV, med aminen med formlen 30 III. Omsætningen foretages fortrinsvis i nærværelse af et syrebindende middel, fx i nærværelse af vandig base, fortrinsvis natriumhydroxidopløsning, eller i nærværelse af et alkalimetalcarbonat, fx kalium- 7 150600 carbonat, eller i nærværelse af en lavere alkyleret amin, fx triethyl-amin. Som opløsningsmiddel anvendes fortrinsvis vand, eventuelt i blanding med et inert organisk opløsningsmiddel såsom tetrahydrofu-ran eller dioxan. Der kan også arbejdes i et aprot organisk opløs-5 ningsmiddel, fx dimethylformamid, dimethylsulfoxid eller hexamethyl-phosphorsyretriamid. Ved anvendelse af silylerede udgangsforbindelser med formlen III arbejdes der i vandfrit medium.

Omsætningen mellem 7-aminoforbindelsen med formlen III og syren med formlen IV eller et reaktivt funktionelt derivat deraf kan hensigts-10 mæssigt foretages ved temperaturer mellem ca. -40°C og stuetempera- * · tur, fx ved ca. 0-10°C.

Ved fremstilling af forbindelsen I ved fremgangsmådevariant a) spaltes aminobeskyttelsesgruppen R som ovenfor defineret fra en forbindelse med formlen II. Tert.butoxycarbonylgruppen og en tritylgruppe R 15 fjernes fortrinsvis ved hjælp af en lavere alkancarboxylsyre, som eventuelt kan være halogeneret. Især anvendes myresyre eller triflu-oreddikesyre. Temperaturen er i reglen stuetemperatur, selv om der kan anvendes lidt højere eller lidt lavere temperaturer, fx i området mellem ca. 0 og +40°C. Når R betegner trifluoracetyl, kan denne 20 beskyttelsesgruppe generelt hydrolyseres med fortyndede vandige baser ved 0-30°C. Chloracetyl-, bromacetyl- og iodacety(beskyttelsesgrupper R kan fraspaltes ved hjælp af thiourinstof i surt, neutralt eller alkalisk miljø ved ca. 0-30°C.

Efter fremstillingen af forbindelsen I ved anvendelse af fremgangs-25 mådevariant a) kan, om ønsket, en eventuelt i reaktionsproduktet tilstedeværende carboxybeskyttelsesgruppe fraspaltes. Når carboxy-gruppen foreligger som en silylgruppe (silylester), kan denne gruppe fraspaltes særlig let ved behandling af omsætningsproduktet med vand. C^_^-Alkyl-COO-C^_^-alkylestere fraspaltes fortrinsvis enzyma-30 tisk ved hjælp af en egnet esterase (ved ca. 20-40°C). Når carboxyl-gruppen er beskyttet Ved saltdannelse (fx med triethylamin), kan fraspaltningen af denne saltdannende beskyttelsesgruppe foretages ved behandling med syre. Som syre kan der til dette formål fx anvendes saltsyre, svovlsyre, phosphorsyre eller citronsyre.

8 150600

Carboxybeskyttelsesgruppen kan fraspaltes på lignende måde som ovenfor beskrevet før fraspaltning af beskyttelsesgruppen R.

Ved det fakultative trin i fremgangsmådevariant a) og i fremgangsmådevariant b) til fremstilling af ^-alkyl-COO-C^ ^-alkylestere af 5 forbindelsen I omsættes carboxylsyren med det tilsvarende halogenid, fortrinsvis med iodidet. Reaktionen kan fremskyndes ved hjælp af en base, fx et alkalimetalhydroxid eller -carbonat eller en organisk amin såsom triethylamin. 2,5-Dihydro-6-hydroxy-2-methyl-5-oxo-as-triazin- 3-ylgruppen X med sin enoliske funktion forethres under dannelse af 10 en tilsvarende, let hydrolyserbar ether. (De således vundne, samtidig forestrerede og forethrede produkter benævnes ovenfor og nedenfor "estere/ethere"). Der anvendes dertil fortrinsvis et overskud af det tilsvarende halogenid. Forestrings-/forethringsreaktionen udføres fortrinsvis i et inert organisk opløsningsmiddel, fx dimethylacetamid, 15 hexamethylphosphorsyretriamid, dimethylsulfoxid eller, fortrinsvis, dimethylformamid. Temperaturen ligger fortrinsvis i området mellem ca. 0 og 40°C.

Fremstillingen af saltene og hydraterne af forbindelsen med formlen I eller hydraterne af disse salte kan foretages på i og for sig kendt 20 måde, fx ved omsætning af carboxylsyren med formlen I med en ækvivalent mængde af den ønskede base, hensigtsmæssigt i et opløsningsmiddel såsom vand eller i et organisk opløsningsmiddel såsom ethanol, methanol eller acetone. Ved anvendelse af yderligere ét ækvivalent base foregår saltdannelse også på den tautomere enolform (2,5-dihy-25 dro-6-hydroxy-2-methyl-5-oxo-as-triazin-3-ylgruppe X), hvorved der dannes et disalt. Temperaturen ved saltdannelsen er ikke kritisk. Den ligger almindeligvis ved stuetemperatur, men kan også ligge lidt derover eller derunder, fx i området mellem 0 og +50°C.

Fremstillingen af hydraterne foretages ofte automatisk under frem-30 stillingsprocessen eller på grundlag af et i starten vandfrit produkts hygroskopiske egenskaber. Et hydrat kan fremstilles ud fra et helt eller delvis vandfrit produkt (carboxylsyre med formlen I eller ester, ether eller salt deraf) ved at udsætte det for en fugtig atmosfære, fx ved ca. 10-40°C.

9 150600

De ovenfor anvendte 7-aminoforbindelser med formlen III kan fremstilles ud fra forbindelser med den almene formel V

Η H

1 I

H2N—ί-ν'

o' ϊ V

COOH

hvor Y betegner en fraspaltelig enhed, og carboxygruppen kan fore-5 ligge i beskyttet form, ved omsætning med en thiol med den almene formel VI

HS - X VI

hvor X har den ovenfor anførte betydning.

Som fraspaltelig enhed Y i en forbindelse med formlen V kan der fx 10 nævnes halogener, fx chlor, brom eller iod, acyloxygrupper, fx lavere alkanoyloxygrupper såsom acetoxy, lavere alkyl- eller arylsul-fonyloxygrupper såsom mesyloxy eller tosyloxy eller azido.

Omsætningen af forbindelsen med formlen V med thiolen med formlen VI kan foretages på i og for sig kendt måde, fx ved en temperatur 15 mellem ca. 40 og 80°C, hensigtsmæssigt ved ca. 60°C, i vand eller i en pufferopløsning med en pH-værdi på ca. 6-7, fortrinsvis 6,5.

En eventuelt vundet syn/anti-blanding af forbindelsen med formlen I kan opspaltes på sædvanlig måde i de tilsvarende syn- og anti-former, fx ved omkrystallisation eller ved chromatografiske metoder 20 under anvendelse af et egnet opløsningsmiddel eller en egnet opløsningsmiddelblanding.

Forbindelserne med formlen I samt de tilsvarende let hydrolyserbare estere/ethere og salte eller hydraterne af disse produkter er antibio 10 150600 tisk, især baktericidt virksomme. De har et bredt virkningsspektrum mod gram-positive og gram-negative mikroorganismer, herunder (5-lac-tamase-dannende staphylococcer og forskellige β-lactamase-dannende gram-negative bakterier, fx Pseudomonas aeruginosa, Haemophilus 5. influenzae, Escherichia coli, Serratia marcescens, Proteus- og Klebsi-ellaarter.

Forbindelserne med formlen I samt de tilsvarende estere/ethere og salte eller hydraterne af disse produkter kan anvendes til behandling og profylakse af infektionssygdomme. Til voksne kan anvendes en 10 daglig dosis på ca. 0,1 - ca. 2 g. Den parenterale administration af de omhandlede forbindelser er særlig foretrukket.

Til påvisning af den antimikrobielle aktivitet af forbindelserne med formlen I er følgende repræsentative forbindelse afprøvet: C6R,7R) -7- [2- (2-amino-4-thiazolyl) -2- (Z-methoxyimino)acet-15 amido] -3- C [ (2,5-dihyd ro-6-hydroxy-2-methyl-5-oxo-as-tri- azin-3-y l)thio]-methyl)-8-oxo-5-thia-1-azabicyclo[4.2.0]oct-2-en-2-carboxylsyre.

Aktivitet in vitro: Mindste hæmmende koncentration (vg/ml).

i 11 150600

Haemophilus influenzae Stamme 1 0,08

Stamme 2 0,005

Stamme 3 0,005

Stamme 4 0,005

Stamme 5 0,0025

Stamme 6 0,0025 _Stamme 7__0,0025

Klebsiella pneumoniae 1,2

Escherichia coli Stamme 1 0,02

Stamme 2 0,6

Proteus mirabilis Stamme 1 ^0,01

Stamme 2 ~0,01

Proteus vulgaris — 0,01

Proteus rettgeri Ξ=0,01

Staphylococcus aureus Stamme ATCC 6538 2,5

Penicillinresistent stamme 2,5

Pseudomonas aeruginosa Stamme 1 0,3

Stamme 2 10

Stamme 3 2,5

Stamme 4 5

Stamme 5 5

Stamme 6 10

Stamme 7 5

Serratia marcescens 0,08 ! , _ I_i

Aktivitet in vivo

Grupper på hver 5 mus inficeres intraperitonealt med en vandig suspension af Escherichia coli. Tre gange, dvs. 1 time, 2 1/2 timer og 4 12 150600 timer efter infektionen administreres forsøg s stoffet subcutant i fysiologisk kogsaltopløsning. Antallet af overlevende dyr bestemmes den 4. dag. Der administreres forskellige doseringer, og ved interpolering bestemmes den dosis, ved hvilken 50% af forsøgsdyrene overlever 5 (CD50, mg/kg).

CD^q: <0,005 mg/kg

Toxicitet l_D50, mg/kg intravenøst 250-500 10 subcutant >4000 peroralt >5000 I vesttysk fremlæggelsesskrift nr. 27 15 385 og 27 07 565 er der beskrevet cephalosporinderivater, der i lighed med cephalosporinerne med formlen I indeholder en 7-[2-(2-amino-4-thiazolyl)-2-(Z-methoxy-15 imino)-acetamido]-gruppe. Cephalosporinerne med formlen I adskiller sig imidlertid på karakteristisk måde fra de kendte forbindelser ved konfigurationen af substituenten i 3-stilling, og der er således tilvejebragt hidtil ukendte forbindelser med overraskende virkningsfordele. Således har en sammenligning med en strukturelt nærliggende, 20 sammenlignelig forbindelse fra den kendte teknik (den eneste forbindelse, som i 3-stilling, i lighed med cephalosporinerne med formlen I, indeholder en 6-leddet N-heterocyclisk thiolmethylgruppe, nemlig en (6-methyl-1-oxido-pyridazin-3-yl)-thiomethyIgruppe) vist, at en repræsentativ forbindelse for cephalosporinerne med formlen I, hvor X 25 er en 1,2,5,6-tetrahydro-2-methyI-5,6-dioxo-as-triazin-3-ylgruppe eller dennes tilsvarende tautomere form, en 2,5-dihydro-6-hydroxy-2-methyl-5-oxo-as-triazin-3-ylgruppe, har en massiv (over 50 gange kraftigere) virkningsoverlegenhed i en profylaktisk in vivo test på mus imod de patogene mikroorganismer Serratia marcescens, Klebsiella 30 pneumoniae, Proteus mirabilis og Proteus vulgaris.

Opfindelsen belyses nærmere ved nedenstående eksempler, hvor eksempel 1 belyser fremstillingen af en omhandlet forbindelse med formlen II, og eksempel 2 belyser omdannelsen af II til en farmakologisk værdifuld forbindelse med formlen I.

13 150600 EKSEMPEL 1

Fremstilling af (6R,7R)-7-(2- [2-(2-chloracetamido)-4-thiazolyl]-2-(Z-methoxyimino)acetamido)-3-( [(2,5-dihydro-6-hydroxy-2-methyl-5-oxo-as-triazi n-3-y I)-thio] methyl )-8-oxo-5-thia- 1-azabicyclo [4.2.0]oct-2-5 en-2-carboxylsyre: 22,24 g 2-(2-chloracetamido-thiazol-4-yl)-2-(Z-methoxyimino)eddikesy-re suspenderes i 240 ml methylenchlorid. Til denne suspension sættes 13,39 ml triethylamin, hvorved der dannes en lysebrun opløsning.

Denne opløsning afkøles til 0-5°C, tilsættes 16,72 g phosphorpenta-10 chlorid og omrøres i 5 minutter ved 0-5°C og i 20 minutter uden afkøling. Den gule opløsning inddampes i vakuum ved 35°C. Inddamp-ningsremanensen udrystes to gange med n-heptan, som fradekanteres.

Den harpiksagtige remanens behandles med 240 ml tetrahydrofuran, og det uopløste triethylamin-hydrochlorid frafiltreres. Det gule filtrat 15 indeholder syrechloridet.

22 g (7R)-7-amino-3-desacetoxy-3-[(2,5-dihydro-6-hydroxy-2-methyl- 5-oxo-as-triazin-3-yl)thio]cephalosporansyre suspenderes i en blanding af 300 ml vand og 150 ml tetrahydrofuran. Til suspensionen dryppes under godt dække af nitrogengas 2N natriumhydroxidopløs-20 ning ved hjælp af en autotitrator, til der dannes en brunrød opløsning med pH-værdi 8. Denne afkøles til 0-5°C og tilsættes i løbet af 15 minutter dråbevis den ovenfor fremstillede opløsning af syrechloridet i tetrahydrofuran. Derefter omrøres der i 2 1/2 timer ved 25°C. pH-Værdien i acyleringsblandingen holdes konstant på 8 ved tilsæt-25 ning af 2N natriumhydroxidopløsning. Den praktisk taget sorte opløsning befries for tetrahydrofuran i vakuum ved 40°C. Der tilsættes derefter 100 ml 2N svovlsyreopløsning. Det derved udfældede stof isoleres ved sugefiltrering, vaskes med vand og afsuges grundigt.

Det fugtige, brune filtreringsprodukt opløses i 1,5 liter acetone. Den 30 mørke opløsning frafiltreres en ringe mængde mørkt uopløst materiale over "Hyflo"®, tilsættes kul, omrøres i 30 minutter og filtreres igen over "Hyflo"®. Det orangerøde filtrat tørres over natriumsulfat, inddampes i vakuum og afdampes med ethylacetat. Derved udfældes en sort harpiks, som frafiltreres og kasseres. Det 2-fasede, stadig 14 150600 vandholdige filtrat underkastes azeotrop destillation 3 gange med -benzen i vakuum ved 40°C. Det derved udfældede stof isoleres ved sugefiltrering og tørres i vakuum ved 40°C. Stoffet udrøres 2 gange med hver gang 1 liter acetone, hvorved der som remanens fås en 5 brun harpiks, som kasseres. De samlede orangefarvede acetoneekstrakter inddampes i vakuum til 150 ml ved 40°C, hvorhos en brun harpiks frafiltreres og kasseres. Til filtratet sættes 1 liter ethylacet-at, og der inddampes i vakuum ved 40°C. Det derved udfældede stof isoleres ved sugefiltrering, vaskes med ethylacetat og derefter med 10 ether [(6R,7R)-7-(2-[2-(2-chloracetamido)-4-thiazolyl]-2-(Z-methoxy-imino)acetamido)-3-([(2,5-dihydro-6-hydroxy-2-methyl-5-oxo-as-tri-azin-3-yl)thio]methyl-8-oxo-5-thia-1-azabicyclo[4.2.0]oct-2-en-2-carb-oxylsyre, fraktion I: en beigefarvet, amorf syre]. Denne fraktion I kan direkte anvendes til fremstilling af det ønskede slutprodukt, 15 jævnfør eksempel 2.

Ethylacetatmoderluden inddampes kraftigt i vakuum ved 40°C og fortyndes med ether, og det udfældede stof isoleres ved sugefiltrering [ (6R, 7R) -7- (2- [2- (2-chloracetamido) -4-thiazolyl] -2- (Z-methoxyimino) -acetamido) -3- ([ (2,5-dihydro-6-hydroxy-2-methyl-5-oxo-as-triazin-3-20 yl)thio]methyl)-8-oxo-5-thia-1-azabicyclo[4.2.0]oct-2-en-2-carboxyl- syre, fraktion II: en iysbeige, amorf syre, tyndtlagschromatografisk noget renere end fraktion I].

Til fremstilling af dinatriumsaltet opløses 3,5 g syre (fraktion II) i en blanding af 20 ml acetone og 11 ml vand. Til denne opløsning sættes 7 25 ml af en 2N opløsning af 2-ethylcapronsyre-natriumsalt i ethylacetat, hvorved dinatriumsaltet krystalliserer. Der tilsættes derefter portionsvis 25 ml acetone, og blandingen opbevares i dybfryser i 2 timer.

Derefter isoleres krystallisatet ved sugefiltrering, vaskes med 25 ml af en iskold acetone-vand-blanding (80:20), rent acetone og lavtko-30 gende petroleumsether i den anførte rækkefølge og tørres natten over i højvakuum ved 40°C. Der fås dinatriumsaltet af (6R,7R)-7-(2-[2-(2-chloracetamido)-4-thiazoIyl]-2-(Z-methoxyimino)-acetamido)-3-([(2,5-dihydro-6-hydroxy-2-methyl-5-oxo-as-triazin-3-yl)thio]-meth-yi)-8-oxo-5-thia-1-azabicyclo[4.2.0]oct-2-en-2-carboxylsyre i form af 35 lysegule krystaller.

2 0 150600 15

Oq - -142,7 (c - 1 i vand). Kerneresonansspektrum og mikroanalyse svarer til den angivne struktur.

NMR-Spektrum (D20): δ (ppm) = 3,6 (2-CH2), 3,63 (NCHg), 4,05 (OCH3), 4,27 (3-CH2), 4,43 (-CH2CI), 5,23 (H-6), 5,83 (H-7), 7,47 5 (5-thiazolyl-H).

EKSEMPEL 2

Fremstilling af dinatriumsaltet af (6R,7R)-7-[2-(2-amino-4-thiazolyl)-2-(Z-methoxyimino)acetamido]-3-([(2,5-dihydro-6-hydroxy-2-methyl- 5-oxo-as-triazin-3-yl)thio]-methyl)-8-oxo-5-thia-1 -azabicyclo [4.2.0]-10 oct-2-en-2-carboxylsyre.

15,3 g (6R,7R)-7-(2-[2-(2-chloracetamido)-4-thiazolyl]-2-(Z-methoxy-imino)acetamido)-3-([(2,5-dihydro-6-hydroxy-2-methyl-5-oxo-as-tri-azin-3-yl)thio] methyl)-8-oxo-5-thia-1 -azabicyclo [4.2.0] oct-2-en-2-car-boxylsyre (fraktion I, se ovenfor) suspenderes sammen med 5 g 15 thiourinstof i 150 ml vand. Under god nitrogenbegasning og omrøring indstilles pH-værdien på 6,8-7,0 med mættet natriumhydrogencarbon-atopløsning, hvorved der dannes en orangefarvet opløsning. Ved hjælp af autotitrater holdes pH-værdien i reaktionsopløsningen konstant på 6,8 i 6 timer under tilsætning af natriumhydrogencarbonat-20 opløsning. Derefter tilsættes yderligere 2,5 g thiourinstof, og opløsningen omrøres i yderligere 3 timer, medens pH-værdien holdes på 6,8 under tilsætning af mættet natriumhydrogencarbonatopløsning.

Derefter opbevares den røde opløsning natten over i køleskab, hvorved den bliver mørkere. pH-Værdien i denne opløsning indstilles på 25 2,0-2,5 ved tilsætning af 100%'s myresyre, hvorved stoffet udfælder.

Dette isoleres ved sugefiltrering og vaskes med 100 ml 10%'s myresyreopløsning. Moderluden kasseres. Det brunlige sugefiltreringsprodukt suspenderes i 200 ml vand, og pH-værdien indstilles på 7 med trieth-ylamin, hvorved der dannes en brun opløsning. Denne opløsning 30 røres med 2 g aktivkul i 30 minutter, kullet frafiltreres, og det stadig brune filtrat indstilles under kraftig omrøring på pH-værdi 3,5 med 100%’s myresyre. Det derved udfældede stof isoleres ved sugefil- 16 150600 trering, vaskes med 50 ml 10%'s myresyreopløsning og kasseres. Det mørkegule filtrat indstilles på pH-vaerdi 2-2,5 med 100%'s myresyre, hvorved stoffet udfældes. Dette isoleres ved sugefiltrering, vaskes med isvand og tørres. Den vundne cephalosporinsyre suspenderes med 5 henblik på omdannelse til dinatriumsaltet i en blanding af 40 ml acetone og 40 ml vand og tilsættes 20 ml af en 2-N-opløsning af 2-ethyl-capronsyre-natriumsalt i ethylacetat. Til den derved dannede orangefarvede opløsning sættes 50 ml acetone, hvorved der udfældes en brun harpiks, som fraskilles ved filtrering. Det gule filtrat omrøres i 10 30 minutter, hvorved dinatriumsaltet krystalliserer. Til blandingen sættes 50 ml acetone portionsvis, og blandingen opbevares natten over i køleskab. Krystallisatet isoleres ved sugefiltrering, vaskes med en acetone-vand-blanding i forholdet 85:15, rent acetone og lavtkogende petroleumsether i den anførte rækkefølge og tørres natten over i 15 vakuum ved 40°C. Der fås den i overskriften nævnte forbindelse i 20 form af beigefarvede krystaller, = -144° (c = 0,5 i vand). Kerne-resonansspektrum og mikroanalyse svarer til den angivne struktur.

NMR-Spektrum (D2O): δ (ppm) = ca. 3,58 (2-01^) (AB-q, 2), 3,62 (NCH3) (s, 3), 3,98 (OCH3) (s, 3,4,22) (3-CH2) (AB-q,2), 5,20 20 (H-6) (d, 1) 5,77 (H-7), 6,99 (thiazol-H) (s, 1).

Mikroanalyse:

Beregnet for C^gH^gNg0yS3Na2.3,5H20: C 32,68 H 3,50 N 16,94 S 14,54 F^O 9,53 Fundet: C 32,89 H 3,46 N 16,96 S 14,54 F^O 9,50 25 Beregnet molvægt: 661,59.

Fremstilling af methylen- (6R, 7R) -7- [2- (2-amino-4-thiazolyl) -2- (Z-me-thoxyimino)acetamido]-3-[[[2,5-dihydro-2-methyl-5-oxo-6-[(pivaloyl-oxy)methoxy3-as-triazin-3-yl]thio] methyl]-8-oxo-5-thia-1-azabicyclo-[4.2.0]oct-2-en-2-carboxylat-pivalat.

30 1,85 g af det på den ovenfor beskrevne måde fremstillede cephalosporin-dinatriumsalt suspenderes i 50 ml dimethylformamid og tilsættes under nitrogen atmosfære ved 0-5°C 1,35 g pivaloyloxymethyl-iodid. Reaktionsblandingen omrøres i 30 minutter ved 0-5°C og hældes

Claims

150600 derefter ud i 500 ml ethylacetat. Blandingen vaskes 3 gange med vand, 2 gange med 5%'s natriumhydrogencarbonatopløsning og derefter igen med vand. Opløsningen tørres over natriumsulfat og inddampes kraftigt i vakuum ved 35°C. Efter tilsætning af ether udfældes den i 5 overskriften nævnte forbindelse i amorf form. Denne forbindelse isoleres ved sugefiltrering, vaskes med ether og lavtkogende petrole-umsether og tørres natten over i højvakuum ved 25°C. Der fås den i overskriften nævnte forbindelse i form af et beigefarvet amorft pulver. Kerneresonansspektrum og mikroanalyse er i overensstemmelse 10 med den angivne struktur. NMR-Spektrum (DMSO-dg): δ (ppm) = 1,17 (2x (CH^CO-) (s, 18), ca. 3,6 (2-CH2) (AB-q, 2), 3,64 (NCH3) (s,3), 3,83 (OC^) (s,3), 4,28 (3-CH2) (AB-q, 2), 5,18 (H-6) (d,1), ca. 5,8 (H-7) (q,1), ca. 5,9 (2x-0-CH2-0-) (m,4), 6,75 (thiazolyl-H) (s, 1), 7,17, (NH2) 15 (b,2), 9,70 (NH) (d,1). Mikroanalyse: Beregnet for C3øH38N8°11S3: C 46,03 H 4,89 N 14,31 Fundet: C 45,82 H 4,90 N 14,13 Beregnet molvægt: 782,86.

20 PATENTKRAV

1. Cephalosporinderivater, kendetegnet ved, at de har den almene formel II Η H I Ϊ g ch3on= c— C0HN—11-^ N—i J,-J— CH2_s_X i, RHN ''Vs ' I COOH