DK149283B

DK149283B - Analogifremgangsmaade til fremstilling af cephalosporinderivater

Info

Publication number: DK149283B
Application number: DK388984A
Authority: DK
Inventors: Marc Montavon; Roland Reiner
Original assignee: Hoffmann La Roche
Priority date: 1978-05-30
Filing date: 1984-08-10
Publication date: 1986-04-21
Also published as: DK388984D0; DK388984A; DK150600C; DK478983D0; DK478983A; DK149283C; DK150600B

Description

1Λ9283

Den foreliggende opfindelse angår en analogifremgangsmåde til fremstilling af terapeutisk virksomme cephalosporin-derivater med den almene formel I

Η H

5 IIs

CH3ON=rC- C0NH —r-N

ri r^nAs/ .

10 COOH

hvor X betegner en 1,2,5,6-tetrahydro-2-methyl-5,6-dioxo--as-triazin-3-ylgruppe eller den tautomere 2,5-dihydro--6-hydroxy-2-methyl-5-oxo-as-triazin-3-yl-gruppe, og R° be-15 tegner hydrogen eller en fraspaltelig gruppe,som kan være tert.butoxycarbonyl, trityl, trifluoracetyl eller chlor-, brom- eller iodacetyl, eller farmaceutisk tolerable salte eller hydrater af forbindelser med formlen I, hvor R° betegner hydrogen, eller hydrater af disse salte.

20

Eksempler på farmaceutisk tolerable salte af forbindelser med formlen I er alkalimetalsalte, f.eks. natrium- og kaliumsaltet; ammoniumsaltet; jordalkali-metalsalte, f.eks. calciumsaltet; salte med organis-25 ke baser, f.eks. salte med aminer såsom, salte med N-ethylpiperidin, procain, dibenzylamin, Ν,Ν'-dibenzyl-ethylethylendiamin, alkylaminer eller dialkylaminer samt salte med aminosyrer, f.eks. salte med arginin eller lysin. Saltene kan være monosalte eller disalte. Den anden salt-30 dannelse kan optræde i forbindelser med hydroxygruppen i 2,5-dihydro-6-hydroxy-2-methyl-5-oxo-as-triazin-3-ylgruppen.

Forbindelserne med formlen I danner ligeledes additionssalte med organiske eller uorganiske syrer. Eksempler på 35 sådanne salte er hydrohalogenider, f.eks. hydrochlorider, hydrobromider og hydroiodider, samt andre mineralsyresalte såsom sulfater, nitrater og phosphater, alkyl- og mono-arylsulfonater såsom ethansulfonater, toluensulfonater og 2 149283 benzensulfonater samt andre organiske syresalte såsom acetater, tartrater, maleater, citrater, benzoater, sa-licylater og ascorbater.

5 Forbindelserne med formlen I (herunder deres salte) kan være hydratiserede. Hydratiseringen kan foretages under fremstillingsfremgangsmåden eller efterhånden på grund af hygroskopiske egenskaber i et i starten vandfrit produkt.

10

De omhandlede produkter kan foreligge i den syn-isomere form N — C—CONH_? 15 'JCS u * 0CH3 eller i den anti-isomere form 20 v CH,0

25 J

eller som blandinger af disse to former. Der foretrækkes den syn-isomere form eller blandinger, i hvilke den syn--isomere form dominerer.

30 Foretrukne produkter er (6R,7R)-7-[2-(2-amino-4-thiazolyl)-2-(Z-methoxyimino)--acetamido]-3-([(2,5-dihydro-6-hydroxy-2-methyl-5-oxo-as--triazin-3-yl)thio]-methyl)-8-oxo-5-thia-l-azabicyclo-35 [4.2.0]oct-2-en-2-carboxylsyre og salte deraf samt de tilsvarende hydrater.

Fremgangsmåden ifølge opfindelsen til fremstilling af de ovenfor anførte acylderivater I er ejendommelig ved, at man 3 149283

omsætter en forbindelse *ed den almene formel XII Η H

5 H2N—[—[ ^ J— * ch2— s— x 111

COOH

10 hvor X har den ovenfor anførte betydning, og carboxy-

gruppen og/eller aminogruppen kan foreligge i beskyttet form, med en syre med den almene formel IV

CHjONrsrC- COOH

Å RHN / hvor R betegner en fraspaltelig gruppe som defineret oven-20 for, eller med et reaktivt funktionelt derivat af denne syre, om nødvendigt fraspalter beskyttelsesgruppen R og/eller en eventuelt tilstedeværende carboxybeskyttelsesgruppe og om ønsket til fremstilling af salte eller hydrater af en forbindelse med formlen I, hvor R° betegner hydrogen, eller 25 af hydrater af disse salte omdanner en forbindelse med formlen I til et salt eller hydrat eller et hydrat af dette salt.

Den i udgangsforbindelsen med formlen III tilstedeværende 3q carboxygruppe kan om ønsket være beskyttet, f.eks. ved forestring til en let spaltelig ester, f.eks. en silyl-ester såsom trimethylsilylesteren. Der kan også komme let hydrolyserbare estere på tale. Ved let hydrolyserbare estere forstås forbindelser, hvis carboxygruppe foreligger 35 i form af en let hydrolyserbar estergruppe. Eksempler på sådanne estere, der kan være af sædvanlig natur, er de lavere alkanoyloxyalkylestere, f.eks. acetoxymethyl-, pivaloyloxymethyl-, 1-acetoxyethyl- og 1-pivaloyloxyethyl- 149283 4 ester; de lavere alkoxycarbonyloxyalkylestere, f.eks. methoxycarbonyloxymethyl-, 1-ethoxycarbonyloxyethyl- og 1-isopropoxycarbonyloxyethylestere; lactonylestere, f.eks. phthalidyl- og thiophthalidylestere; de lavere alkoxyme-5 thylestere, f.eks. methoxymethylester; og de lavere alkan- oylaminomethylestere, f.eks. acetamidomethylester. Carb-oxygruppen kan også være beskyttet ved saltdannelse med en uorganisk eller tertiær organisk base såsom triethyl-amin. Aminogruppen i forbindelsen med formlen III kan 10 f.eks. være beskyttet med en silylbeskyttelsesgruppe så som trimethylsilyl. Mulige R-beskyttelsesgrupper i udgangs-forbindelserne med formlen IV er f.eks. ved sur hydrolyse fraspaltelige beskyttelsesgrupper, f.eks. tert.butoxycarbo-nyl eller trityl, eller ved basisk hydrolyse fraspalte-15 lige beskyttelsesgrupper, f.eks. trifluoracetyl. Foretrukne R-beskyttelsesgrupper er chlor-, brom- og iodacetyl, især chloracetyl. De sidste beskyttelsesgrupper kan fraspaltes ved behandling med thiourinstof.

20 Som reaktive funktionelle derivater af syrer med formlen IV kan f.eks. nævnes halogenider, dvs. chlorider, bromider og fluorider; azider; anhydrider, især blandede anhydrider med stærke syrer; reaktive estere såsom N-hydroxysuccinimid-· ester; og amider såsom imidazolider.

25

Omsætningen mellem 7-aminoforbindelsen med formlen III og syren med formlen IV eller et reaktivt funktionelt derivat deraf kan udføres på i og for sig kendt måde.

Således kan f.eks. en fri syre med formlen IV kondenseres 2Q med en af de nævnte estere svarende til form len III ved hjælp af et carbodiimid, f.eks. dicyclohexyl-carbodiimid, i et inert opløsningsmiddel, f.eks. ethyl-acetat, acetonitril, dioxan, chloroform, methylenchlorid, benzen eller dimethylformamid, hvorefter estergruppen fraspaltes. I stedet for carbodiimider kan der som kondensationsmidler også anvendes oxazoliumsalte, f.eks. N-ethyl-5-phenyl-isoxazolium-3'-sulfonat.

5 149283

Ved en anden udførelsesfonn omsættes et salt af en syre med formlen III, f.eks. et trialkylammoniumsalt, f.eks. triethylammoniumsaltet, med et reaktivt funktionelt derivat af en syre med formlen IV som ovenfor omtalt i et 5 inert opløsningsmiddel, f.eks. et af de ovenfor anførte.

Ved en yderligere udførelsesform omsættes et syrehalogenid, fortrinsvis chloridet, af en syre med formlen IV, med aminen med formlen III. Omsætningen foretages fortrinsvis 10 i nærværelse af et syrebindende middel, f.eks. i nærværelse af vandig base, fortrinsvis natriumhydroxidopløsning, eller i nærværelse af et alkalimetalcarbonat, f.eks. kalium-carbonat, eller i nærværelse af en lavere-alkyleret amin, f.eks. triethylamin. Som opløsningsmiddel anvendes for-15 trinsvis vand, eventuelt i blanding med et inert organisk opløsningsmiddel såsom tetrahydrofuran eller dioxan. Der kan også arbejdes i et aprot organisk opløsningsmiddel, f.eks. dimethylformamid, dimethylsulfoxid eller hexamethyl-phosphorsyretriamid. Ved anvendelse af silylerede udgangs-20 forbindelser med formlen III arbejdes der i vandfrit medium.

Omsætningen mellem 7-aminoforbindelsen med formlen III og syren med formlen IV eller et reaktivt funktionelt 25 derivat deraf kan hensigtsmæssigt foretages ved tempera turer mellem ca. -40°C og stuetemperatur, f.eks. ved ca.

0 - 10°C.

Omsætning af forbindelserne med formlen III med carboxyl-30 syrerne med formlen IV eller et reaktivt funktionelt de

rivat deraf fører til cephalosporinderivater roed den almene formel II

Η H

35 CH3ON=C—CONH--

//c^>nJ-CH2_s_-x II

ς/ i

COOH

6 149283 hvor X har den ovenfor anførte betydning, og R betegner en fraspaltelig beskyttelsesgruppe. Disse forbindelser med formlen II kan omdannes til forbindelser med formlen I, hvor R° betegner hydrogen, ved fraspaltning af amino-5 beskyttelsesgruppen R. Ved sur hydrolyse fra spaltelige beskyttelsesgrupper fjernes fortrinsvis ved hjælp af en lavere alkancarboxylsyre, som eventuelt kan være halogeneret. Især anvendes myresyre eller trifluor-eddikesyre. Temperaturen er i reglen stuetemperatur, selv XO om der kan anvendes lidt højere eller lidt lavere tempe ratur, f.eks. i området mellem 0 og +40°C. Alkalisk fraspaltelige beskyttelsesgrupper hydrolyseres generelt med fortyndede vandige baser ved 0 - 30°C. Chloracetyl-, bromacetyl- og iodacetylbeskyttelsesgrupper kan fra-15 spaltes ved hjælp af thiourinstof i surt, neutralt eller alkalisk miljø ved ca. 0 - 30°C. Hydrogenolytisk fraspalt-ning (f.eks. fraspaltning af benzyl) er uegnet her, da oximfunktionen ved hydrogenolysen reduceres til en amino-gruppe.

20

Efter fraspaltning af aminobeskyttelsesgruppen R kan, om ønsket, en eventuelt i reaktionsproduktet tilstedeværende carboxy-beskyttelsesgruppe fraspaltes. Når beskyttelsesgruppen er en silylgruppe (silylester), kan denne gruppe fraspaltes 25 særlig let ved behandling af omsætningsproduktet med vand. Lavere alkanoyloxyalky1-, alkoxycarbonyloxyalkyl-, lactonyl-, alkoxymethyl- og alkanoylaminomethylestere fraspaltes fortrinsvis enzymatisk ved hjælp af en egnet esterase (ved ca. 20 - 40°C). Når carboxylgruppen er be-30 skyttet ved saltdannelse (f.eks. med triethylamin), kan fraspaltningen af denne saltdannende beskyttelsesgruppe foretages ved behandling med syre. Som syre kan der til dette formål f.eks. anvendes saltsyre, svovlsyre, phosphor-syre eller citronsyre.

Carboxybeskyttelsesgruppen kan fraspaltes på lignende 35 7 149283 måde som ovenfor beskrevet også før fraspaltningen af beskyttelsesgruppen R.

Fremstillingen af saltene og hydraterne af forbindelser med 5 formlen I, hvor R° betegner hydrogen, eller hydraterne af disse salte kan foretages på i og for sig kendt måde, f.eks. ved omsætning af carboxylsyren med formlen I, hvor R° betegner hydrogen, med en ækvivalent mængde af den ønskede base, hensigtsmæssigt i et opløsningsmiddel såsom vand eller i 10 et organisk opløsningsmiddel såsom ethanol, methanol eller acetone. Ved anvendelse af et yderligere ækvivalent base foregår saltdannelse også på den eventuelt tilstedeværende tautomere enolform (2,5-dihydro-6-hydroxy-2-methy1-5-oxo--as-triazin-3-ylgruppe X), hvorved der dannes et disalt.

15 Temperaturen ved saltdannelsen er ikke kritisk. Den ligger almindeligvis ved stuetemperatur, men kan også ligge lidt derover eller derunder, f.eks. i området mellem 0 og +50°C.

Fremstillingen af hydraterne foretages ofte automatisk under 20 fremstillingsprocessen eller på grund af et i starten vand frit produkts hygroskopiske egenskaber. Et hydrat kan fremstilles ud fra et helt eller delvis vandfrit produkt (carboxylsyre med formlen I eller ester, ether eller salt deraf) ved at udsætte det for en fugtig at-25 mosfære, f.eks. ved ca. 10 - 40°C.

De ovenfor anvendte 7-aminoforbindelser med formlen III kan fremstilles ud fra forbindelser med den almene formel VII 30

Η H

: I s.

h2n-^—y J—K^—cs^ VI1

35 I

COOH

8 149283

hvor Y betegner en fraspaltelig enhed, og carboxygruppen kan foreligge i beskyttet form, ved omsætning med en thiol med den almene formel VI

5 HS - X VI

hvor X har den ovenfor anførte betydning, i nærværelse af vand.

Som fraspaltelig enhed Y i en forbindelse med formlen VII 10 kan der f.eks. nævnes halogener, f.eks. chlor, brom eller iod, acyloxygrupper, f.eks. lavere alkanoyloxygrupper, såsom acetoxy, lavere alkyl- eller arylsulfonyloxygrupper såsom mesyloxy eller tosyloxy eller azido. Forbindelserne VII kan ved carboxygruppen være beskyttet på den for udgangsfor-15 bindeisen med formlen III beskrevne måde.

Omsætningen af forbindelsen med formlen VII med thiolen med formlen VI kan foretages på i og for sig kendt måde, f.eks. ved en temperatur mellem ca. 40 og 80°C, hensigts-20 mæssigt ved ca. 60°C, i vand eller i en pufferopløsning med en pH-værdi på ca. 6-7, fortrinsvis 6,5.

En eventuelt vundet syn/anti-blanding af en forbindelse med formlen I kan opspaltes på sædvanlig måde i de til-25 svarende syn- og anti-former, f.eks. ved omkrystallisation eller ved chromatografiske metoder under anvendelse af et egnet opløsningsmiddel eller en egnet opløsningsmiddelblanding. 1 2 3 4 5 6

Forbindelserne med formlen I samt de tilsvarende salte eller hydraterne 2 af disse produkter er antibiotisk., især baktericidt virk 3 somme. De har et bredt virkningsspektrum mod gram-positive 4 og gram-negative mikroorganismer, herunder β-lactamase- 5 dannende Staphylococcer og forskellige β-lactamase-dannende 6 gram-negative bakterier, f.eks. Pseudomonas aeruginosa, Haemophilus influenzae, Escherichia coli, Serratia marcescens, Proteus- og Klebsiellaarter.

9 149283

Forbindelserne ned formlen I samt de tilsvarende salte eller hydraterne af d.isse produkter kan anvendes til behandling ag profylakse af infektionssygdomme. Til voksne kan anvendes én daglig dosis på ca. 0,1 - ca. 2 g. Den parenterale admi-5 nistration af de omhandlede forbindelser er særlig foretrukket.

Til påvisning af den antimikrobielle aktivitet af de omhandlede produkter er følgende repræsentative forbindelser 10 afprøvet:

Produkt A: (6R,7R)-7-[2-(2-amino-4-thiazolyl)-2-(Z- -methoxyimino)acetamido]-3-([(2,5-dihydro-6--hydroxy-2-methyl-5-oxo-as-triazin-3-yl)thio]-15 -methyl)-8-oxo-5-thia-l-azabicyclo[4.2.0.]oct- -2-en-2-carboxylsyre.

Produkt B: (6R,7R)-7-(2-[2-(2-chloracetamido)-4- -thiazolyl]-2-(Z-methoxyimino)acetamido)-3-20 -([(2,5-dihydro-6-hydroxy-2-methyl-5-oxo-as- -triazin-3-yl)thiolmethyl)-8-oxo-5-thia-l--azabicyclo[4.2.0]oct-2-en-2-carboxylsyre.

Aktivitet i vitro: Mindste hæmmende koncentration ( ,ug/ml) 25 10 149283 ___________A__B_

Haemophilus influenzae Stamme 1 0,08 1,2 5 Stamme 2 0,005 0,3

Stamme 3' 0,005 0,16

Stamme 4 0,005 0,16

Stamme 5 0,0025 0,08

Stamme 6 0,0025 0,16 10 __Stamme 7 0,0025 0,16

Klebsiella pneumoniae 1,2 10

Escherichia coli Stamme 1 . 0,02 0,16

Stamme 2 0,6 5 15 Proteus mirabilis Stamme 1 ^0,01 0,08

Stamme 2 ^0,01 0,16

Proteus vulgaris ^0,01 0,16

Proteus rettgeri ^0,01 0,16 20 Staphylococcus aureus Stamme ATCC 6538 2,5 2,5

Penicillinresistent stamme 2,5 5

Pseudomonas aeruginosa Stamme 1 0,3 1,2

Stamme 2 10 ^80 25 Stamme 3 2,5 40

Stamme 4 5 80

Stamme 5 5 80

Stamme 6 10 80

Stamme 7 '5 80 30 " — — ' " -1- —- " "

Serratia marcescens 0,08 2,5

Aktivitet in vivo.

35 Grupper på hver 5 mus inficeres intraperitonealt med en vandig suspension af Escherichia coli. Tre gange, dvs. 1 time, 2 1/2 timer og 4 timer efter infektionen administreres forsøgsstoffet subcutant i fysiologisk kogesaltop- 149283 11 løsning. Antallet af overlevende dyr bestemmes den 4, dag.

Der administreres forskellige doseringer, og ved inter-polering bestemmes den dosis,, ved hvilken 50% af forsøgs-^ dyrene overlever (CD5q, mg/kg)

Forsøgsstof A B

CD50, mg/kg £ 0,005 0,16 10

Toxicitet ....

Forsøgsstof A B

ης LD,.n, mg/kg intra- 250 - 500 250 - 500 venøst subcu- >4000 2000 - 4000 tant pero- >5000 ^5000 ralt 20 I tysk fremlæggelsesskrift nr. 27 15 385 og 27 07 565 er der beskrevet cephalosporinderivater, der i lighed med de ved fremgangsmåden ifølge den foreliggende opfindelse fremstillede cephalosporiner indeholder en 25 7-[2-(2-amino-4-thiazolyl)-2-(Z-methoxyimino)-acetami- do]-gruppe. De ifølge den foreliggende opfindelse fremstillede cephalosporiner adskiller sig imidlertid på karakteristisk måde fra de kendte forbindelser ved konfigurationen af substituenten i 3-stilling, og der er så-30 ledes tilvejebragt hidtil ukendte forbindelser med over raskende virkningsfordele. Således har en sammenligning med en strukturelt nærtliggende, sammenlignelig forbindelse fra den kendte teknik (den eneste forbindelse, som i 3-stilling, i lighed med de omhandlede 35 cephalosporiner, indeholder en 6-leddet N-heterocyclisk 12 149283 thiomethylgruppe, nemlig en (6-methyl-l-oxido-pyridazin--3-yl)thiomethylgruppe), vist, at en repræsentativ forbindelse blandt de ifølge opfindelsen fremstillede ce-g phalosporiner med formlen I, hvor X er en 1,2,5,6-tetra- hydro-2-methyl-5,6-dioxo-as-triazin-3-ylgruppe eller dennes tilsvarende tautomere form, en 2,5-dihydro-6--hydroxy-2-methyl-5-oxo-as-triazin-3-ylgruppe, har en massiv (over 50 gange kraftigere) virkningsoverlegen-hed i en profylaktisk in vivo test på mus imod de patogene mikroorganismer Serratia marcescens, Klebsiella pneumoniae, Proteus mirabilis og Proteus vulgaris.

De omhandlede produkter kan anvendes som lægemidler, f.eks.

^ i form af farmaceutiske præparater, som indeholder dem eller salte deraf i blanding med et til enteral eller parenteral applikation egnet farmaceutisk, organisk eller uorganisk inert bærestof.

2q Fremgangsmåden ifølge opfindelsen belyses nærmere ved nedenstående eksempler:

Eksempel 1.

25 Fremstilling af (6R,7R)-7-(2-[2-(2-chloracetamido)-4- -thiazolyl]-2-(Z-methoxyimino)acetamido)-3-([(2,5-dihydro--6-hydroxy-2-methyl-5-oxo-as-triazin-3-yl)-thio]methyl)-8--oxo-5-thia-l-azabicyclo[4.2.0]oct-2-en-2-carboxylsyre. 1 2 3 4 5 6 22,24 g 2-(2-chloracetamido-thiazol-4-yl)-2-(Z-methoxy 2 imino) eddikesyre suspenderes i 240 ml methylenchlorid.

3

Til denne suspension sættes 13,39 ml triethylamin, hvor 4 ved der dannes en lysebrun opløsning. Denne opløsning af 5 køles til 0 - 5°C, tilsættes 16,72 g phosphorpentachlorid 6 og omrøres i 5 minutter ved 0 - 5°C og i 20 minutter uden afkøling. Den gule opløsning inddampes i vakuum ved 35°C. Inddampningsremanensen udrystes to gange med n-heptan, som fradekanteres. Den harpiksagtige remanens behandles med 13 149283 240 ml tetrahydrofuran, og det uopløste triethylamin-hydro-chlorid frafiltreres. Det gule filtrat indeholder syre-chloridet.

5 22 g (7R)-7-amino-3-desacetoxy-3-[ (2,5-dihydro-6-hydroxy- - · -2-methyl-5-oxo-as-triazin-3-yl)thio]cephalosporansyre suspenderes i en blanding af 300 ml vand og 150 ml tetrahydrofuran. Til suspensionen dryppes under godt dække af nitrogengas 2N natriumhydroxidopløsning ved hjælp af ^0 en autotitrator, til der dannes en brunrød opløsning med pH-værdi 8. Denne afkøles til 0 - 5°C og tilsættes i løbet af 15 minutter dråbevis den ovenfor fremstillede opløsning af syrechloridet i tetrahydrofuran. Derefter omrøres der i 2 1/2 timer ved 25°C. pH-værdien i acyleringsblandingen ^ holdes konstant på 8 ved tilsætning af 2N natriumhydroxid opløsning. Den praktisk taget sorte opløsning befries for tetrahydrofuran i vakuum ved 40°C. Der tilsættes derefter 100 ml 2N svovlsyreopløsning. Det derved udfældede stof isoleres ved sugefiltrering, vaskes med vand og afsuges 20 grundigt. Det fugtige, brune filtreringsprodukt opløses i 1,5 liter acetone. Den mørke opløsning frafiltreres en ringe mængde mørkt uopløst materiale over "Hyflo" 'S/ tilsættes kul, omrøres i 30 minutter og filtreres igen over "Hyflo"®. Det orangerøde filtrat tørres over natrium-25 sulfat, inddampes i vakuum og afdampes med ethylacetat.

Derved udfældes en sort harpiks, som frafiltreres og kasseres. Det 2-fasede, stadig vandholdige filtrat underkastes azeotrop destillation 3 gange med benzen i vakuum ved 40°C. Det derved udfældede stof isoleres ved sugefil-^ trering og tørres i vakuum ved 40°C. Stoffet udrøres 2 gange med hver gang 1 liter acetone, hvorved der som remanens fås en brun harpiks, som kasseres. De samlede orangefarvede acetoneekstrakter inddampes i vakuum til 150 ml ved 40°C, hvorhos en brun harpiks frafiltreres og kasse-35 res. Til filtratet sættes 1 liter ethylacetat, og der inddampes i vakuum ved 40°C. Det derved udfældede stof isoleres ved sugefiltrering, vaskes med ethylacetat og derefter med ether [(6R,7R)-7-(2-[2-(2-chloracetamido)- 14 149283 -4-thiazolyl]-2-(Z-methoxyimino)acetamido)-3-([(2,5-di-hydro-6-hydroxy-2-methyl-5-oxo-as-triazin-3-yl)thio]methyl--8-oxo-5-thia-l-azabicycloί4.2.0]oct-2-en-2-carboxylsyre, fraktion I: en beigefarvet, amorf syre]. Denne fraktion I 5 kan anvendes direkte til fremstilling af det ønskede slut produkt.

Ethylacetatmoderluden inddampes kraftigt i vakuum ved 40°C og fortyndes med ether, og det udfældede stof isole-res ved sugefiltrering [(6R,7R>-7-(2-[2-(2-chloracetamido)--4-thiazolyl]-2-(Z-methoxyimino)acetamido)-3-([(2,5-dihydro-6--hydroxy-2-methyl-5-oxo-as-triazin-3-yl)thio]methyl)-8-oxo--5-thia-l-azabicyclo[4.2.0]oct-2-en-2-carboxylsyre, fraktion II: en lysbeige, amorf syre, tyndtlagschromatografisk ]_5 noget renere end fraktion I].

Til fremstilling af dinatriumsaltet opløses 3,5 g syre (fraktion II) i en blanding af 20 ml acetone og 11 ml vand.

Til denne opløsning sættes 7 ml af en 2N opløsning af 20 2-ethylcapronsyre-natriumsalt i ethylacetat, hvorved di natriumsaltet krystalliserer. Der tilsættes derefter portionsvis 25 ml acetone, og blandingen opbevares i dybfryser i 2 timer. Derefter isoleres krystallisatet ved sugefiltrering, vaskes med 25 ml af en iskold acetone-vand-blan-25 ding (80:20), rent acetone og lavtkogende petroleumsether i den anførte rækkefølge og tørres natten over i høj-vakuum ved 40°C. Der fås dinatriumsaltet af (6R,7R)-7--(2-[2-(2-chloracetamido)-4-thiazolyl]-2-(Z-methoxyimino)-acetamido)-3-([(2,5-dihydro-6-hydroxy-2-methyl-5-oxo-as-30 -triazin-3-yl)thio]-methyl)-8-oxo-5-thia-l-azabicyclo[4.2.0]— oct-2-en-2-carboxylsyre i form af lysegule krystaller.

= -142,7° (c = 1 .i vand), Kerneresonansspektrum og mikroanalysen svarer til den angivne struktur.

35

Eksempel 2.

Fremstilling af dinatriumsaltet af (6R,7R)-7-[2-(2--amino-4-thiazolyl)-2-(Z-methoxyimino)acetamido]-3-([2,5- 15 149283 -dihydro-6-hydroxy-2-methyl-5-oxo-as-triazin-3-yl)thiol--methyl)-8-oxo-5-thia-l-azabicyclo[4.2.0]oct-2-en-2-car-boxylsyre.

5 15/3 g (6R,7R)-7-(2-[2-(2-chloracetamido)-4-thia- zolyl]-2-(Z-methoxyimino)acetamido)-3-([2,5-dihydro-6--hydroxy-2-methyl-5-oxo-as-triazin-3-yl)thio]methyl)-8--oxo-5-thia-1-azabicyclo[4.2.0]oct-2-en-2-carboxylsyre (fraktion I, se ovenfor) suspenderes sammen med 5 g 10 thiourinstof i 150 ml vand. Under god nitrogenbegasning og omrøring indstilles pH-værdien på 6,8 - 7,0 med mættet natriumhydrogencarbonatopløsning, hvorved der dannes en orangefarvet opløsning. Ved hjælp af autotitratbr holdes pH-værdien i reaktionsopløsningen konstant ved 6,8 i 6 15 timer under tilsætning af natriumhydrogencarbonatopløsning.

Derefter tilsættes yderligere 2,5 g thiourinstof, og opløsningen omrøres i yderligere 3 timer, medens pH-værdien holdes på 6,8 under tilsætning af mættet natrium-hydrogencarbonatopløsning. Derefter opbevares den røde 20 opløsning natten over i køleskab, hvorved den bliver mørkere. pH-værdien i denne opløsning indstilles på 2,0 - 2,5 ved tilsætning af 100%'s myresyre, hvorved stoffet udfælder. Dette isoleres ved sugefiltrering og vaskes med 100 ml 10%'s myresyreopløsning. Moderluden kasseres.

25 Det brunlige sugefiltreringsprodukt suspenderes i 200 ml vand, og pH-værdien indstilles på 7 med triethylamin, hvorved der dannes en brun opløsning. Denne opløsning røres med 2 g aktivkul i 30 minutter, kullet frafiltreres, og det stadig brune filtrat indstilles under kraftig om-30 røring på pH-værdi 3,5 med 100%'s myresyre. Det derved udfældede stof isoleres ved sugefiltrering, vaskes med 50 ml 10%'s myresyreopløsning og kasseres. Det mørkegule filtrat indstilles på pH-værdi 2-2,5 med 1001's myresyre, hvorved stoffet udfældes. Dette isoleres ved suge-35 filtrering, vaskes med isvand .og tørres. Den vundne cephalosporinsyre suspenderes med henblik på omdannelse til dinatriumsaltet i en blanding af 40 ml acetone og 40 ml vand og tilsættes 20 ml af en 2-N-opløsning af

Claims

149283 2-ethylcapronsyre-natriumsalt i ethylacetat. Til den derved dannede orangefarvede opløsning sættes 50 ml acetone, hvorved der udfældes en brun harpiks, som fraskilles ved filtrering. Det gule filtrat omrøres i 30 minutter, hvorved dinatriumsaltet krystalliserer. Til blandingen sættes 50 ml acetone portionsvis, og blandingen opbevares natten over i køleskab. Krystallisatet isoleres ved sugefiltrering, vaskes med en acetone-vand-blanding i forholdet 85:15, rent acetone og lavtkogende petroleumsether i den anførte rækkefølge og tørres natten over i vakuum ved 10 o

40 C. Der fås den i overskriften nævnte forbindelse, i form 20 o af beigefarvede krystaller, = -144 (c = 0,5 i vand). Kerneresonansspektrum og mikroanalyse svarer til den angivne struktur. 15 Patentkrav.

1. Analogifremgangsmåde til fremstilling af terapeutisk virk-2Q somme cephalosporinderivater med den almene formel I Η H 5. s CH30N=tC- conh —i—'N. 1 //—l KNJ-CH2-S-X R°HN^\S/ . ] COOH hvor X betegner en l,2,5,6-tetrahydro-2-methyl-5,6-dioxo-2Φ -as-triazin-3-ylgruppe eller den tautomere 2,5-dihydro- -6-hydroxy-2-methy1-5-oxo-as-triazin-3-yl-gruppe, og R° betegner hydrogen eller en fraspaltelig gruppe, som kan være tert.butoxycarbonyl, trityl, trifluoracetyl eller chlor-, brom- eller iodacetyl, eller farmaceu-22 tisk tolerable salte eller hydrater af forbindelser med formlen I, hvor R° betegner hydrogen, eller hydrater af disse salte. 149283 kendetegnet ved, at man omsætter en forbindelse med den almene formel III Η H 5 i h2n——r J— ^ s~x 111

10 COOH hvor X har den ovenfor anførte betydning, og carboxy-gruppen og/eller aminogruppen kan foreligge i beskyttet form, med en syre med den almene formel IV

15 CH30Nr=-C COOH RHN / 20 hvor R betegner en fraspaltelig gruppe som ovenfor defi neret, eller med et reaktivt funktionelt derivat af denne syre, om. nødvendigt fraspalter beskyttelsesgruppen R og/eller. en eventuelt tilstedeværende carboxybeskyttelsesgruppe og om ønsket til fremstilling af salte eller hydrater af en for- 25 bindelse med formlen I, hvor R° betegner hydrogen, eller af hydrater af disse salte omdanner en forbindelse med formlen I til et salt eller hydrat eller et hydrat af dette salt.

2. Fremgangsmåde ifølge krav 1 til fremstilling af forbin delser med den almene formel II H H

35 CH3ON=pCONH-|--j^ >j „ jj oJ—N S— X RHN " \/ I s COOH