DK149908B - Fremgangsmaade, analysesaet og biotin-maerket antistof til paavisning og/eller kvantitativ bestemmelse af et biologisk stof i en proeve. - Google Patents
Fremgangsmaade, analysesaet og biotin-maerket antistof til paavisning og/eller kvantitativ bestemmelse af et biologisk stof i en proeve. Download PDFInfo
- Publication number
- DK149908B DK149908B DK182279AA DK182279A DK149908B DK 149908 B DK149908 B DK 149908B DK 182279A A DK182279A A DK 182279AA DK 182279 A DK182279 A DK 182279A DK 149908 B DK149908 B DK 149908B
- Authority
- DK
- Denmark
- Prior art keywords
- antibody
- enzyme
- biotin
- digoxin
- avidin
- Prior art date
Links
Classifications
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
- G01N33/536—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor with immune complex formed in liquid phase
- G01N33/537—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor with immune complex formed in liquid phase with separation of immune complex from unbound antigen or antibody
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
- G01N33/531—Production of immunochemical test materials
- G01N33/532—Production of labelled immunochemicals
- G01N33/535—Production of labelled immunochemicals with enzyme label or co-enzymes, co-factors, enzyme inhibitors or enzyme substrates
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
- G01N33/536—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor with immune complex formed in liquid phase
- G01N33/537—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor with immune complex formed in liquid phase with separation of immune complex from unbound antigen or antibody
- G01N33/538—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor with immune complex formed in liquid phase with separation of immune complex from unbound antigen or antibody by sorbent column, particles or resin strip, i.e. sorbent materials
-
- Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC
- Y10S—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10S435/00—Chemistry: molecular biology and microbiology
- Y10S435/81—Packaged device or kit
-
- Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC
- Y10S—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10S435/00—Chemistry: molecular biology and microbiology
- Y10S435/975—Kit
-
- Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC
- Y10S—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10S436/00—Chemistry: analytical and immunological testing
- Y10S436/807—Apparatus included in process claim, e.g. physical support structures
- Y10S436/808—Automated or kit
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Immunology (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Hematology (AREA)
- Urology & Nephrology (AREA)
- Food Science & Technology (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Cell Biology (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Analytical Chemistry (AREA)
- Microbiology (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- General Physics & Mathematics (AREA)
- Pathology (AREA)
- Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
- Enzymes And Modification Thereof (AREA)
- Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
Description
i 149908
Opfindelsen angår en fremgangsmåde til påvisning og/eller bestemmelse af et biologisk stof, fortrinsvis et antigen eller et hapten, i en prøve, ved hvilken man sammenblander prøven med en kendt mængde af et kob-5 lingsprodukt mellem det biologiske stof og et enzym og en kendt mængde af et antistof, som er aktivt overfor det biologiske stof, og efter reaktionen bestemmer enzymaktiviteten som et mål for mængden af det biologiske stof i prøven 10 Indenfor medicinsk praksis og forskning er der til stadighed behov for hurtige, nøjagtige kvantitative bestemmelser af biologiske stoffer i yderst lave koncentrationer. Tilstedeværelsen af lægemidler eller narkotica i legemsvæsker, såsom spyt, blod eller urin, skal kunne 15 bestemmes i meget små mængder med tilfredsstillende nøjagtighed. Endvidere er det ved medicinske diagnoser ofte vigtigt at kende tilstedeværelsen af forskellige stoffer, som syntetiseres naturligt af legemet, eller som er indført. Disse stoffer omfatter hormoner, både steroider og 20 polypeptider, prostaglandiner og toksiner samt andre materialer, som kan indgå i legemsfunktionen.
Til opfyldelse af disse behov er der blevet anvist en række metoder til analyse for spormængder af materialer. En sædvanlig anvendt fremgangsmåde til isola-25 tion og påvisning af stoffer i biologisk fluidum er tyndtlagschromatografi (TLC), f.eks. kombineret med massespektroskopi eller gasfasechromatografi. Imidlertid har TCL flere mangler, idet denne fremgangsmåde er langsom, kan lide af interferens fra mange forskellige ma-30 terialer og har manglende pålidelighed. Mangelen på tilfredsstillende alternativer har således fremkaldt en intens forskning for at finde forbedrede fremgangsmåder til adskillelse og identifikation.
Et alternativ til TLC har været radioaktivitets-35 immun-undersøgelse (radioimmunoassay, RIA). Ved denne fremgangsmåde anvendes antistoffer for specifikke hapte-ner eller antigener. Ved blanding af et antistof med opløsninger af haptenet eller antigenet og med en radio- 2 149808 aktiv hapten- eller antigen-analog, vil den radioaktive analoge hindres i at hindes til antistoffet i en udstrækning, som er direkte afhængig af koncentrationen af haptenet eller antigenet i opløsningen. Ved derefter 5 at separere og bestemme den frie radioaktive analoge fra den til antistof bundne radioaktive analoge, kan man indirekte bestemme mængden af hapten eller antigen i den oprindelige opløsning. Imidlertid kan anvendelsen af radioisotoper ved en sådan bestemmelse være potentielt 10 sundhedsskadeligt, og den instrumentation, som sædvanligvis er nødvendig til radioaktivitets-immun-undersøgelse, er forholdsvis kompliceret og er sædvanligvis for kostbar til at mindre hospitaler og læger rutinemæssigt kan foretage f.eks. analyse af en patients blod eller urin.
15 Enzym-immun-bestemmelse afhjælper de ovennævnte ulemper og har endvidere den særlige fordel at give mulighed for forstærkning af den målte parameter.
Principielt erstattes ved denne fremgangsmåde den radioaktive analoge til det biologiske stof med et enzym-20 mærket biologisk stof (hapten eller antigen). Sådanne modificerede enzymmolekyler bevarer deres enzymatiske aktivitet, og det enzym-mærkede biologiske stof vil konkurrerer med den ukendte mængde af frit biologisk stof i systemet med hensyn til antistof-kompleksdannelse.
25 Komplekserne kan separeres (jf. britisk patentbeskrivelse nr. 1.348.935) ved udnyttelse af deres uopløselighed i visse tilfælde, og aktiviteten af det uopløselige stof eller den del, der forbliver i opløsning, anvendes som et mål for den oprindeligt tilstedeværende mængde anti-30 gen. Det samme princip kan anvendes til et omvendt system, hvor der anvendes enzym-mærkede antistoffer, hvis den umodificerede form af det samme antistof i en biologisk væske skal bestemmes.
Det har nu vist sig, at covalent binding af biotin 35 (vitamin H) til antistofmolekylet fører til et opløseligt biotin-mærket kompleks, hvilket muliggør bekvem separering af alle antistofformer, indbefattet alle enzym-mærkede og ikke-mærkéde biologiske stof-antistof-komplekser.
3 149908
Separationen kan derefter udføres ved anvendelse af det biotin-specifikke receptor-protein avidin, som immobili-seres i en uopløselig form. Den meget kraftige affinitet mellem avidin og biotin, som nærmer sig karakter af en 5 covalent binding, resulterer i uopløseliggørelse af alle antistofformer og muliggør som følge heraf en særdeles effektiv og nem fjernelse af alle biotin-mærkede antistoffer og komplekser, der er dannet med sådanne antistoffer.
10 Ifølge en udførelsesform for fremgangsmåden i- følge opfindelsen tilvejebringes således en fremgangsmåde til påvisning og/eller bestemmelse af et biologisk stof i en prøve, hvilken fremgangsmåde er ejendommelig ved det i krav l's kendetegnende del anførte.
15 Ved fremgangsmåden ifølge opfindelsen kan påvises og/eller bestemmes et hvilket som helst biologisk stof, for hvilket der kan fremstilles et passende antistof med tilfredsstillende specificitet og affinitet til det biologiske stof. Nyere litteratur indeholder et stigende 20 antal beskrivelser af antistoffer for stadig flere forskellige biologiske stoffer. Forbindelser, for hvilke der kan tilvejebringes antistoffer varierer fra simple phe-nylalkylaminer, f.eks. amphetamin, til polymerer:::med meget høje molekylvægte, f.eks. proteiner.
25 De biologiske stoffer, som kan påvises og/eller bestemmes ved fremgangsmåden ifølge opfindelsen kan opdeles i tre forskellige kategorier afhængigt af deres biologiske forhold til antistoffet. Den første kategori er antigener, som, når de indføres i blodstrømmen af et 30 hvirveldyr, resulterer i dannelse af antistoffer. Den anden kategori er haptener, som, når de bindes til en antigenbærer, og den haptenbundne antigenbærer indføres i blodstrømmen af et hvirveldyr, giver dannelse af antistoffer, som er specifikke for haptenet. Den tredie ka-35 tegori af biologiske stoffer indbefatter de, som har naturligt forekommende antistoffer i en levende organisme, hvor antistofferne kan isoleres i en form, som er 149908 4 specifik for det biologiske stof.
Den vigtigste gruppe biologiske stoffer med hensyn til fremgangsmåden ifølge opfindelsen er stofferne fra anden kategori, haptenerne. Fremgangsmåde til frem-5 stilling af antistoffer for de tre forskellige kategorier af biologiske stoffer er kendte.
Udvælgelse af enzymet til anvendelse ved fremgangsmåden ifølge opfindelsen er afhængig af forskellige forhold. Det skal således have potentielt reaktionsdygti-10 ge grupper, til hvilke det biologiske stof kan kobles uden at enzymaktiviteten ødelægges, og det må ikke forekomme naturligt i væsentlig grad i den type væv, som skal analyseres for det pågældende biologiske stof. Endvidere skal enzymet have forholdsvis lang holdbarhed, 15 høj’ specifik aktivitet og være i stand til let at kunne bestemmes, f.eks. ved hjælp af et spektrophotometer med synligt lys.
Eksempler på enzymer, som sædvanligvis kan anvendes ved fremgangsmåden ifølge opfindelsen, er malat-20 dehydrogenase, staphylococ-nuclease, delta-5-ketosteroidm isomerase, fra gær stammende dehydrogenase, fra gær stammende glykose-6-phosphat-dehydrogenase, a-glycero-phosphatdehydrogenase, triosephosphatisomerase og ræd-dike-peroxidase, mere foretrukket alkalin-phosphatase, 25 asparaginase, glykoseoxidase, β-galactosidase og ribo-nuclease. Sædvanligvis foretrækkes det at rense enzymet, f.eks. ved dialyse mod saltvand, før anvendelsen.
Fremstillingen af de enzym-mærkede biologiske stoffer til anvendelse ved fremgangsmåden ifølge opfin-30 delsen kan foregå på flere kendte måder. Nogle biologiske stoffer kan allerede indeholde grupper, som kan krydsbindes med reaktive grupper på overfladen af enzymet, medens andre stoffer skal forsynes med sådanne grupper ved organisk kemiske omsætninger. Det skal fremhæves, at 35 hverken de oprindelige immunologiske egenskaber af det biologiske stof eller aktiviteten af enzymet må ændres væsentligt ved denne proces. De grupper i enzymet, som er specielt egnet til koblingsreaktioner, er amino- og 5 149908 carboxyl-grupper. Hvis dét modificerede eller ikke-modi-ficerede biologiske stof også indeholder sådanne grupper, kan koblingen f.eks. udføres ved reaktioner, der er kendte fra peptidsynteser. Endvidere kan sådanne stoffer, som f.eks. glutaraldehyd, difluordinitrodiphenylsulphon, 5 toluendiisocyanat, di- og tri-chlor-s-triazin og andre anvendes ved koblingsreaktionen.
Eksempler på kobling af biologiske stoffer til enzymer er f.eks. beskrevet i L.A.Steinberger, Immuno-cytochemistry, Prentice Hall, New Jersey, (1974).
10 Specielle eksempler på kobling af haptener til proteiner er f.eks. beskrevet i C.A.Williams og N.W.
Chase, Methods of Immunology and Immunochemistry bind 1,
Academic Press, New York, 1967. De omtalte fremgangsmåder anvendes til fremstilling af conjugerede for immu-15 nisering, men de kan også anvendes til fremstilling af enzym-mærkede biologiske stoffer, som er afgørende ved fremgangsmåden ifølge opfindelsen.
Biotin-mærket antistof fremstilles sædvanligvis ved omsætning af et biotinderivat, fiieks. et biotinester-20 derivat, sådom N-hydroxysuccinimidesteren af biotin, med antistoffet. Biotinesterderivatet opløses i et polært, aprotisk opløsningsmiddel,.f.eks. dimethylformamid, og sættes derefter i et 20 til 300 molært overskud til antistoffet i 0,01 M til 1,0 M, fortrinsvis 0,05 M til 0,5 M, 25 mest foretrukket 0,1 M phosphatpuffer, f.eks. kalium-phosphatpuffer ved en pH-værdi på 6,5 til 8,5, fortrinsvis 7,5. Efter sammenblanding af reaktanterne tillades reaktionen at forløbe ved en temperatur på fra 2-10°C, fortrinsvis ved 4°C, i tilstrækkelig tid til at den 30 kan afsluttes. Sædvanligvis tager dette ca. 10 timer.
Efter afslutning af reaktionen kan det biotin-mærkede antistof separeres fra reaktionsblandingen ved kendte fremgangsmåder, f.eks. ved gelpermeationschromatografi1 på f.eks. en krydsbundet dextran.
35 Uopløseliggjort avidin, dvs. avidin, der er im- mobiliseret ved tilknytning til et fast bærestof, kan fremstilles ved en fremgangsmåde, der er kendt fra prak- 6 149908 sis eller fra litteraturen, f.eks. ved covalent binding med makromolekylære uopløselige bærere, såsom agarose, polystyren, polyacrylamid, nylon, krydsbundet dextran eller filterpapir, eller ved fysisk kobling til uopløse-5 lige bærere, såsom glasperler eller plastikgenstande, eller til indersiden af reagensglas fremstillet af enten plastik eller glas eller til mikrotiter-plader.
Specielle eksempler på koblinger af haptener og andre biologiske molekyler til agarose og polyacrylami-10 der er beskrevet af Cuatrecasas i J.Biol. Chem., 245, 3059-3065, (1970). W.B.Jacoby og M.Wilcheck, Methods in Enzymology, bind 34, Academic Press, New York 1974.
Disse fremgangsmåder kan principielt også anvendes til fremstilling af (a) avidin-fast bærer, (b) hapten-prote-15 inconjugerede og (c) biotin-antistof-conjugerede. Sædvanligvis aktiveres enten avidin eller bæreren før den covalente binding finder sted, men sædvanligvis aktiveres bæreren før den covalente binding. Ved en anden form for fremgangsmåden ifølge opfindelsen anvendes der som 20 bærer agarose, da dette har en udmærket evne til kobling af avidin og bevarelse af evne til binding af biotin.
Mest foretrukket anvendes benzoquinon-aktiveret agarose, da det er nemt at fremstille, og på grund af dets manglende evne til ikke-specifik absorption af enzym. Ved 25 andre former for fremgangsmåden ifølge opfindelsen kobles avidin til nylønringe eller -stænger, eller til indersiden af polystyren-reagensglas.
En skematisk fremstilling af bestemmelsen er vist i fig. 1. Til den beholder, hvor reaktionen skal finde 30 sted, sættes ved stuetemperatur nær fysiologisk pH-værdi, fortrinsvis ved pH-værdi på 7 efter hinanden med et minimalt tidsrum mellem tilsætningerne: frie biologiske stoffer, f.eks. indeholdt i en serumprøve, en vandig opløsning af enzym-mærket biologisk stof og en tilstrækkelig 35 mængde forud mærket antistof til at neutralisere (dvs. danne kompleks med) 50%-80% af det enzym-mærkede biologiske stof. Disse tre komponenter blandes og netop uop-løseliggjort avidin tilsættes til reaktionsblandingen 149908 7 til frembringelse af et heterogent system, og blandingen rystes til der opnås et forud bestemt ligevægtspunkt.
Den anvendte mængde avidin er sædvanligvis flere hundrede gange større end den teoretisk krævede. Den faste fase 5 fjerner det frie antistof samt antistof bundet til det biologiske stof. Den overstående væske indeholder enzym-mærket biologisk stof i en mængde, der er direkte proportional med indholdet af frit biologisk stof, medens den udfældede faste fase indeholder enzym-mærket biolo-10 gisk stof i en mængde, der er omvendt proportional med mængden af frit biologisk stof. Enten den udfældede faste fase eller den overstående væske kan undersøges for enzymatisk aktivitet til bestemmelse af biologisk stof i den ukendte prøve.
15 Målingen af enzymaktivitet af den faste og/eller væskeformige fase af reaktionsblandingen fra fremgangsmåden ifølge opfindelsen kan udføres ved kendte fremgangsmåder. Se f.eks. H.U.Bergmeyer, Method for Enzymatic Analysis, Academic Press, New York (1965). Analysen af 20 den omhyggeligt separerede og skyllede faste fase kan finde sted ved fjernelse af den overstående væske ved f.eks. frasugning.
De forskellige former i hvilke reagenserne ifølge opfindelsen kan anvendes er mangfoldige. F.eks. kan det 25 enzym-mærkede biologiske stof være frysetørret eller opløst i en puffer. Endvidere kan anvendes en fast bærer, f.eks. en papirstrimmel imprægneret med det enzym-mærkede, biologiske stof.
Opfindelsen angår endvidere et analysesæt til 30 anvendelse ved fremgangsmåden, hvilket sæt er ejendommeligt ved det i krav 6’s kendetegnende del anførte.
Eventuelt kan sættet også indeholde de nødvendige hjælpemidler til fremstilling af seriefortyndinger af prøven, på hvilken der skal udføres en kvantitativ ber -35 stemmelse, såsom reagensglas, pipetter og flasker med fortyndingsmiddel.
149903 8
Opfindelsen angår også et biotin-mærket antistof til anvendelse ved fremgangsmåden og til inkorporering i analysesættet ifølge opfindelsen.
Opfindelsen belyses nærmere ved hjælp af de føl-5 gende eksempler.
Eksempel 1
Kobling af digoxin til enzymer.
Digoxin blev koblet til enzym på følgende måde: 3 10 H-digoxin (250 yCi/mg) i ethanol blev omsat med et lille molært overskud natriummetaperiodat i to timer.
En portion på 50 nmol H-digoxin blev sat til 5 nmol enzym i 1 ml natriumacetatpuffer (200 mM, pH-værdi 7).
Den endelige koncentration af ethanol var sædvanligvis 1510-20%. 10-20mg natriumcyanborhydrid blev tilsat, og reaktionen fik lov at forløbe i tre dage ved 4°C. Mærket enzym blev separeret fra Reaktanterne ved gel-eksklusions chromatografi på SephadexG-50. Tabellen nedenfor viser graden af substitution med digoxin (beregnet ved hjælp 20 af radioaktivitetsmålinger) og bevarelsen af enzymatisk aktivitet for fire enzymer efter reaktion under de beskrevne betingelser.
Digoxin-substi- Opnået specifik 25 Enzym tution (M/M) aktivitet som % 3 __H tælling RIA af kontrol_
Malat-dehydrogenase 0,50 0,10 36,7
Alkalin-phosphatase 1,10 0,15 92,3
Glucose-oxidase 1,70 0,30 100,0 3 Q [Asparaginase_1,00_0,60_100,0_ 3
Konjugering af H-digoxin med malat-dehydrogenase blev undersøgt grundigere (fig. 2). Oxideret digoxin blev omsat i forskellige koncentrationer (det molære 35 overskud varierede fra 5 til 50) med portioner af enzym, og bevarelsen af enzymspecifik aktivitet blev bestemt i hvert tilfælde. Endvidere blev graden af substitution af digoxin bestemt både ved tritiumtælling til bestem- 149903 9 melse af det absolutte antal haptener og ved RIA til bestemmelse af antallet af immunologisk reaktive digoxin-rester. Resultaterne viser, at malat-dehydrogenase er meget følsom for graden af mærkningen med digoxin, og at 5 kun 20% af de tilknyttede grupper er funktionelt til rådighed til at reagere med antistof.
Uopløseliggørelse af avidin.
Avidin blev koblet direkte til en fast bærer af 10 benzoquinon-aktiveret sepharose. Avidingelen blev fortyndet efter ønske med uomsat sepharose.
En 50%'s suspension af agarose i natriumphosphat-puffer (100 mM, pH-værdi = 8,0) blev i et forhold på 4:1 volumen/volumen sat til p-benzoquinon (250 m mo-:; 15 lær) i ethanol. Efter omrøring af suspensionen i en time ved stuetemperatur blev den aktiverede gel vasket ved filtrering under sugning ved anvendelse af lige store volumener efter hinanden af ethanol (20%), vandig natri-umchlorid (1,0 M), vand og natriumphosphat (pH-værdi 20 8, 100 m molær). Gelen (1 volumen) blev derefter sat til avidin (1 volumen, 10 mg/ml) opløst i natriumphosphat-puffer (pH 8, 100 mM) , og den resulterende suspen sion blev omrystet i 15 timer ved 4°C. Derefter blev den avidin-gel-conjugerede vasket efter hinanden med 5 25 volumener af hver af natriumacetat (0,1 M, pH-værdi 4,0) indeholdende natriumchlorid (500 mM) , natrium- bie arbonat (0,1 M, pH-værdi 9,0) indeholdende natriumchlorid (500 m M) og vand. Substitutionen af avidin på gelen var i området 4-5 mg/ml pakket gel. Den substi-30 tuerede avidin viste sig at have 100% af sin biotinbindingsevne.
Substitution af antistof med biotin.
Portioner af fåre-antidigoxin-antistof blev be-35 handlet i kaliumphosphat (0,1 M, pH-værdi 7,5) med forskellige mængder af N-hydroxysuccinimidesteren af biotin i dimethylformamid (DMF) svarende til et molært overskud andragende fra 20 til 300. Slutkoncen- 10 149908 trationen af DMF var 50%. Efter inkubation natten over ved 4°C blev det biotinbehandlede antistof separeret fra reaktanterne Ved gelpermeationschromatografi på Sephadex G-50. Titeren af det biotinbehandlede antistof blev be- 125 5 stemt ved anvendelse af I-digoxin og dextranovertruk-ket trækul. Sensibiliteten af det biotiniserede antistof overfor avidin-gel blev bestemt ved anvendelse af forud ioderet antistof og måling af nedbringelsen af 125 I med avidin-gel. Ved biotiniseringsniveauer over 10 3 biotinmolekyler pr. antis to fmolekyl bevarede antistoffet sin titer overfor digoxin og blev fuldstændig absorberet af avidin-gel. Det empirisk valgte antistof-biotin-præparat til enzym-immun-bestemmelsen opfyldte disse kriterier .
15 Gljicoseoxidase-digoxin-conjugerede med forskellige niveauer af substitution af digoxin blev titreret med forskellige fortyndinger af biotiniseret antistof og overskud af avidin-gel (fig. 3). Det var forud påvist, at enzymderivaterne ikke blev hæmmet af endog meget høje 20 koncentrationer af anti-digoxin-antistof. Dataene viser at ved fortyndinger på mellem 1:100 og lt 10-00 af stamopløsningen af antistof foreligger digoxin-enzym og antistof i omtrent støkiometriske mængder, således at i det væsentlige al enzymaktivitet udfældes af gelen.
25 Dataene viser også, at der med forøget digoxinsubstitution kræves mindre antistof til udfældning af 50% af enzymaktiviteten, hvilket viser, at immun-aktiviteten af den enzym-conjugerede forøges med substitution.
30 -Reaktionen mellem antidigoxin-antistof og digoxin.
Ved anvendelse af passende mængder glucoseoxidase-digoxin, biotinmærket antistof og overskydende avidin-gel fulgtes det tidsforløb af analysen, som krævedes til opnåelse af ligevægt mellem de tre komponenter.
35 Glucoseoxidase-digoxin og avidin-gel blev forud inkuberet ved stuetemperatur. Ved t = 0 blev tilsat biotinmærket antistof, og blandingen blev omrystet ved stuetemperatur. Med forskellige tidsintervaller blev portio- 11 149908 ner af forsøgsblandingen centrifugeret, og den overstående væske blev undersøgt for enzymaktivitet. Sædvanligvis opnåedes maksimal formindskelse af enzym-mærket digoxin forårsaget af antistof-avidin-gel-kompleks inden-5 for 90 minutter, medens binding af biotin-mærket antistof af avidin-gel i det væsentlige er fuldstændig indenfor 10 minutter.
Enzym-immun-bestemmelse for digoxin.
10 50 yl serum-digoxin, 50 yl glucoseoxidase-mærket digoxin, som indeholdt 1 ng/ml bundet digoxin, og 50 yl passende fortyndet biotin-mærket antidigoxin-antistof blev blandet i et reagensglas (fig. 1). Der blev straks tilsat en 50¾ vandig suspension af 50 yl avidin-sepha-15 rose, som forud var fortyndet i forholdet 1:10 med nativ sepharose. Alle analysereagenser var i phosphat-puffer (50 mM, ’ pH-værdi 7) indeholdende 0,1% bovin-seramalbumin. Reaktionsblandingen blev derefter inkuberet i 2 timer ved stuetemperatur under omrystning, hvor-20 efter den blev suspenderet i 5 ml iskold puffer indeholdende 0,1% bovinserumalbumin. Blandingen blev centrifugeret, og den overstående væske blev frasuget efterladende en gel-pellet. Efter vaskning af denne pellet blev tilsat 1,0 ml analysepuffer indeholdende glucose 25 (100 mM), o-dianisidin (0,1 mg/ml) og ræddike-per- oxidase (7,5 yg/ml) i natriumphosphatpuffer (100 mM, pH-værdi 6), og der blev omrystet i 1 time. Alternativt kan 0,1 mM, , 2,2-azino-bis-(3-ethylbenzthiozolin-sulphonsyre)(ABTS) anvendes i stedet for o-dianisidin 30 som enzymsubstrat.
Derefter blev blandingen afkølet, og den optiske tæthed af den overstående væske blev bestemt ved en bølgelængde på 450 nm, og værdierne for patientsera blev sammenlignet med en standardkurve fastlagt med kontrol-35 sera.
Fig. 4 viser virkningerne af tilsætninger af forskellige mængder fri digoxin til inkubationsblandingen (afsat som logarithmen af digoxinkoncentrationen i ng/ml 12 149908 mod % total enzymaktivitet på gelen). Forholdet mellem mængden af fri digoxin og enzymaktiviteten er lineær i området fra 0,15 til 10,00 ng/ml fri digoxin.
5 Eksempel 2: Codein.
Til påvisning af den almene anvendelighed af den beskrevne enzym-immun-bestemmelse blev det narkotiske lægemiddel codein bestemt ved denne fremgangsmåde.
10 Kobling af codein til glucoseoxidase.
20 ymol codeinhemisuccinat opløst i 600 til tør, gendestilleret dimethylformamid blev sat til 200 ymol N-hydroxysuccinimid opløst i 300 yl tør gendestilleret dioxan og 20 ymol dicyclohexylcarbodiimid i 30 yl tør, 15 gendestilleret dioxan. Blandingen blev henstillet til reaktion ved stuetemperatur i 5-6 timer i et tætlukket reagensglas. Det således in situ fremstillede codein-hemisuccinat-N-hydroxysuccinimid blev anvendt uden rensning til kobling til enzymet. Til 5 mM enzym (glucose· 2o oxidase) opløst i 600-900 yl natriumacetatpuffer (100 mM, pH-værdi 7,0) blev sat 100-500 yl (fortrinsvis 300 yl) af den som overfor beskrevet fremstillede codein-N-hydroxysuccinimidester-opløsning. Efter 12-24 timer ved stuetemperatur blev enzymet (conjugeret med codein 25 samt eventuelt ikke-conjugeret enzym) separeret fra reaktanterne ved geleksklusionschromatografi. Graden af codeinsubstitution i forhold til giucoseoxidase blev bestemt ved radioaktivitets-immunbestemmelse. Som i tilfældet med dioxin varierer graden af substitution af codein 30 afhængigt af reaktionsbetingelserne. En substitution med 3-5 codeinmolekyler pr. enzymmolekyle (glucoseoxidase) viste sig at være ideel for den nærværende analysemetode.
Kobling af biotin til anti-codein-antistof.
35 Denne reaktion blev udført som beskrevet i eksem pel 1 for kobling af biotin til anti-digoxin-antistof.
Titeren af biotiniseret antistof var i det væsentlige 13 149908 uændret i forhold til antistof, der ikke var overført i et derivat. Antistof-præparater med 3 eller flere co-valentbundne biotinmolekyler kunne udfældes fuldstændigt med avidin i fast fase og viste sig at være ideelt egnecfe 5 for den nærværende bestemmelse.
Enzym-immunbestemmelse af codein.
Med passende, forudbestemte mængder af enzym-codein-conjugeret, biotiniseret anti-codein-antistof og 10 avidin i fast fase bestemtes den tid, som krævedes til opnåelse af ligevægt mellem de tre analysekomponenter. Sædvanligvis opnåede systemets ligevægt efter 45-60 minutters forløb.
Codeinstandard (50 μΐ 0,1-10.000 ng/ml opløsning), 15 50 μΐ. glucoseoxidase-codeinconjugeret (indeholdende 1-20 m mol codein) og passende fortyndet biotin-mærket anti-codein-antistof blev blandet i et reagensglas. 50 μΐ af en 50% vandig suspension af avidin i fast fase blev sat til ovennævnte blanding. Alle analysereagenser blev 20 fremstillet i 50 i molær phosphatpuffer, pH-værdi 7 indeholdende 0,1% bovinserumalbumin. Reaktionsblandingen blev efter inkubation i 2 timer ved stuetemperatur fortyndet med 5 ml iskold puffer indeholdende 0,1% bovinserumalbumin. Blandingen blev centrifugeret og den over-25 stående væske blev frasuget. Efter vaskning af den opnåede pellet blev tilsat 1 ml af analysepufferen indeholdende glucose (100 mM ) o-dianisidin (o,l mg/ml) og ræddike-peroxidase (7-5 μg/ml) i phosphatpuffer (100 mM , pH-værdi 6). Analyseblandingen blev in-30 kuberet i 30-90 minutter (fortrinsvis 60 minutter) ved stuetemperatur, afkølet i isbad, og den optiske tæthed ved 450 nm blev bestemt. På denne måde konstrueredes en standardkurve med forskellige codeinkoncentrationer (fig. 5) .
Applications Claiming Priority (2)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
GB1774978 | 1978-05-04 | ||
GB1774978 | 1978-05-04 |
Publications (3)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
DK182279A DK182279A (da) | 1979-11-05 |
DK149908B true DK149908B (da) | 1986-10-20 |
DK149908C DK149908C (da) | 1987-03-09 |
Family
ID=10100551
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
DK182279A DK149908C (da) | 1978-05-04 | 1979-05-03 | Fremgangsmaade, analysesaet og biotin-maerket antistof til paavisning og/eller kvantitativ bestemmelse af et biologisk stof i en praeve. |
Country Status (8)
Country | Link |
---|---|
US (1) | US4298685A (da) |
EP (1) | EP0005271A3 (da) |
JP (1) | JPS5510590A (da) |
DE (1) | DE2953449A1 (da) |
DK (1) | DK149908C (da) |
FR (1) | FR2458072A1 (da) |
GB (1) | GB2055851A (da) |
NL (1) | NL7915050A (da) |
Families Citing this family (124)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US4446231A (en) * | 1979-10-03 | 1984-05-01 | Self Colin H | Immunoassay using an amplified cyclic detection system |
GB2059421A (en) * | 1979-10-03 | 1981-04-23 | Self C H | Assay method and reagents therefor |
US4656252A (en) * | 1980-01-24 | 1987-04-07 | Giese Roger W | Amidobiotin compounds useful in a avidin-biotin multiple layering process |
FR2486657A1 (fr) * | 1980-07-09 | 1982-01-15 | Pasteur Institut | Procede de detection et de dosage d'une substance biologique par erythroadsorption |
NL8102178A (nl) * | 1981-05-02 | 1982-12-01 | Stichting Centraal Lab | Werkwijze voor het aantonen van tegen bepaalde antigenen gerichte antistoffen, alsmede inrichting en reagentia voor het uitvoeren van deze werkwijze. |
US4684609A (en) * | 1981-06-15 | 1987-08-04 | Vector Laboratories, Inc. | Method and substance for the enhanced labelling of cellular material |
AU8594382A (en) * | 1981-08-05 | 1983-02-10 | F. Hoffmann-La Roche Ag | Immunoassay using biotin-avidin-enzyme complex |
US4395486A (en) * | 1981-08-19 | 1983-07-26 | Medical College Of Ga. Research Inst., Inc. | Method for the direct analysis of sickle cell anemia |
EP0072902B1 (de) * | 1981-08-21 | 1985-04-24 | F. HOFFMANN-LA ROCHE & CO. Aktiengesellschaft | Verfahren zur Bestimmung von carcinoembryonalem Antigen (CEA) und zur Bestimmung geeignete Antikörperlösung |
US4444878A (en) * | 1981-12-21 | 1984-04-24 | Boston Biomedical Research Institute, Inc. | Bispecific antibody determinants |
US4506009A (en) * | 1982-03-30 | 1985-03-19 | University Of California | Heterogeneous immunoassay method |
US4535057A (en) * | 1982-07-26 | 1985-08-13 | Amf Incorporated | Immunoassay employing monoclonal herpes simplex antibody and biotin-avidin detection system |
US4530900A (en) * | 1982-09-13 | 1985-07-23 | Seragen Diagnostics Inc. | Soluble insoluble polymers in enzymeimmunoassay |
GB8307156D0 (en) * | 1983-03-15 | 1983-04-20 | Celltech Ltd | Heterogeneous binding assays |
US4496654A (en) * | 1983-04-08 | 1985-01-29 | Quidel | Detection of HCG with solid phase support having avidin coating |
US5200313A (en) * | 1983-08-05 | 1993-04-06 | Miles Inc. | Nucleic acid hybridization assay employing detectable anti-hybrid antibodies |
US4582810A (en) * | 1983-09-30 | 1986-04-15 | Becton, Dickinson And Company | Immuno-agglutination particle suspensions |
WO1985003356A1 (en) * | 1984-01-27 | 1985-08-01 | Molecular Biosystems, Inc. | Assay for immobilized reporter groups |
US4849505A (en) * | 1984-01-30 | 1989-07-18 | Enzo Biochem, Inc. | Detectable molecules, method of preparation and use |
US4943523A (en) * | 1984-01-30 | 1990-07-24 | Enzo Biochem, Inc. | Detectable molecules, method of preparation and use |
US5002885A (en) * | 1984-01-30 | 1991-03-26 | Enzo Biochem, Inc. | Detectable molecules, method preparation and use |
AU3844485A (en) * | 1984-02-09 | 1985-08-15 | Enzo Biochem Inc. | Heterologous detection of cabeled dna |
US4704354A (en) * | 1984-02-15 | 1987-11-03 | University Of Cincinnati | Virion assay method for use in in vitro screening of teratogens and carcinogens |
CA1260372A (en) * | 1984-04-27 | 1989-09-26 | Elazar Rabbani | Hybridization method for the detection of genetic materials |
US4632901A (en) * | 1984-05-11 | 1986-12-30 | Hybritech Incorporated | Method and apparatus for immunoassays |
JPS60252265A (ja) * | 1984-05-29 | 1985-12-12 | Toray Ind Inc | 発光試薬およびそれを用いる生物学的に活性な物質の測定法 |
GB8422452D0 (en) * | 1984-09-05 | 1984-10-10 | Serono Diagnostics Ltd | Assay |
US5310687A (en) * | 1984-10-31 | 1994-05-10 | Igen, Inc. | Luminescent metal chelate labels and means for detection |
US4692403A (en) * | 1984-11-28 | 1987-09-08 | The Texas A&M University System | Methods and compositions for the detection of acquired immune deficiency syndrome |
US4737453A (en) * | 1984-12-12 | 1988-04-12 | Immunomedics, Inc. | Sandwich immunoassay utilizing a separation specific binding substance |
US4704355A (en) * | 1985-03-27 | 1987-11-03 | New Horizons Diagnostics Corporation | Assay utilizing ATP encapsulated within liposome particles |
US4935339A (en) * | 1985-05-07 | 1990-06-19 | Nichols Institute Diagnostics | Delayed solid phase immunologic assay |
US4801532A (en) * | 1985-08-15 | 1989-01-31 | Wake Forest University | Immunological methods for diagnosing neurocysticercosis |
US4740456A (en) * | 1985-08-15 | 1988-04-26 | Wake Forest University | Immunological methods for diagnosing neurocysticercosis |
US5073341A (en) * | 1985-08-21 | 1991-12-17 | Biotope, Inc. | Devices for conducting specific binding assays |
JPH0614041B2 (ja) * | 1985-09-18 | 1994-02-23 | 帝人株式会社 | 肺表面活性物質の検出方法及びそれに用いる試薬キツト |
US4806631A (en) * | 1985-09-30 | 1989-02-21 | Miles Inc. | Immobilization of nucleic acids on solvolyzed nylon supports |
US4806546A (en) * | 1985-09-30 | 1989-02-21 | Miles Inc. | Immobilization of nucleic acids on derivatized nylon supports |
US4933275A (en) * | 1985-10-24 | 1990-06-12 | The General Hospital Corporation | Method for the detection of a polypeptide subunit in the presence of a quaternary protein containing the subunit |
US5501949A (en) * | 1985-12-10 | 1996-03-26 | Murex Diagnostics Corporation | Particle bound binding component immunoassay |
US5225353A (en) * | 1986-01-30 | 1993-07-06 | Fred Hutchinson Cancer Research Center | Method for immunoselection of cells using avidin and biotin |
US5262334A (en) * | 1986-01-30 | 1993-11-16 | Fred Hutchinson Cancer Research Center | Method for immunoselection of cells using avidin and biotin |
AU7032787A (en) * | 1986-02-06 | 1987-08-25 | Microbiological Associates, Inc. | Latex agglutination using avidin/biotin system |
US4772550A (en) * | 1986-02-10 | 1988-09-20 | Miles Inc. | Heterogeneous specific binding assay employing an aggregatable binding reagent |
FR2601455B1 (fr) * | 1986-07-11 | 1989-08-04 | Stallergenes Lab | Nouveaux reactifs biologiques en phase solide et leur procede d'obtention |
US4959307A (en) * | 1986-09-05 | 1990-09-25 | Syntex (U.S.A.) Inc. | Immunoseparating strip |
US5085988A (en) * | 1986-09-05 | 1992-02-04 | Syntex (U.S.A.) Inc. | Immunoseparating strip |
US5192507A (en) * | 1987-06-05 | 1993-03-09 | Arthur D. Little, Inc. | Receptor-based biosensors |
US5001048A (en) * | 1987-06-05 | 1991-03-19 | Aurthur D. Little, Inc. | Electrical biosensor containing a biological receptor immobilized and stabilized in a protein film |
IL82873A0 (en) * | 1987-06-15 | 1987-12-20 | Orgenics Ltd | Reversed competitive solid phase immunoassay for detecting single epitope analytes and kit therefor |
US5196351A (en) * | 1987-09-30 | 1993-03-23 | Beckman Instruments, Inc. | Bidentate conjugate and method of use thereof |
EP0310361A3 (en) * | 1987-09-30 | 1989-05-24 | Beckman Instruments, Inc. | Tridentate conjugate and method of use thereof |
US5534620A (en) * | 1987-09-30 | 1996-07-09 | Beckman Instruments, Inc. | Method of heterogenous purification using a bidentate conjugate |
US4859612A (en) * | 1987-10-07 | 1989-08-22 | Hygeia Sciences, Inc. | Metal sol capture immunoassay procedure, kit for use therewith and captured metal containing composite |
DE3882040T2 (de) * | 1987-12-01 | 1993-09-30 | Biotope Inc | Verfahren und vorrichtungen zur durchführung von untersuchungen. |
US4870007A (en) * | 1987-12-18 | 1989-09-26 | Eastman Kodak Company | Immobilized biotinylated receptor in test device, kit and method for determining a ligand |
CA1312277C (en) * | 1987-12-18 | 1993-01-05 | Richard C. Sutton | Avidin- and biotin-immobilized reagents, analytical elements and methods of use |
US5459078A (en) * | 1988-01-29 | 1995-10-17 | Abbott Laboratories | Methods and reagents for performing ion-capture digoxin assays |
US5866322A (en) * | 1988-01-29 | 1999-02-02 | Abbott Laboratories | Method for performing Rubella assay |
US5459080A (en) * | 1988-01-29 | 1995-10-17 | Abbott Laboratories | Ion-capture assays using a specific binding member conjugated to carboxymethylamylose |
US6326136B1 (en) | 1988-04-01 | 2001-12-04 | Digene Corporation | Macromolecular conjugate made using unsaturated aldehydes |
US5362624A (en) * | 1988-05-25 | 1994-11-08 | Boehringer Mannheim Gmbh | Process for the determination of an immunologically detectable substance and a suitable reaction vessel therefor |
IE64286B1 (en) * | 1988-05-25 | 1995-07-26 | Boehringer Mannheim Gmbh | Process for the determination of an immunologically detectable substance and a suitable vessel therefor |
DE3822750A1 (de) * | 1988-07-05 | 1990-01-11 | Boehringer Mannheim Gmbh | Verfahren zur bestimmung einer spezifisch bindefaehigen substanz |
DE3907651A1 (de) * | 1988-07-08 | 1990-01-11 | Boehringer Mannheim Gmbh | Verfahren zur bestimmung von antikoerpern |
DE3829245A1 (de) * | 1988-08-29 | 1990-03-01 | Boehringer Mannheim Gmbh | Verfahren zur bestimmung einer spezifisch bindefaehigen substanz |
US5888728A (en) | 1988-10-17 | 1999-03-30 | Molecular Devices Corporation | Hapten derivatized capture membrane and diagnostic assays using such membrane |
WO1990004786A1 (en) | 1988-10-17 | 1990-05-03 | Molecular Devices Corporation | Hapten derivatized capture membrane and diagnostic assays using such membrane |
DE3836348A1 (de) * | 1988-10-25 | 1990-04-26 | Boehringer Mannheim Gmbh | Verfahren zur bestimmung von fuer ein antigen klassenspezifischen antikoerpern und dazu geeignetes reagenz |
JPH04502107A (ja) * | 1988-12-07 | 1992-04-16 | ザ・ジェネラル・ホスピタル・コーポレーション | 挿入を有するかまたは欠失に相当するdnaの豊富化およびクローニングの方法 |
US5028535A (en) * | 1989-01-10 | 1991-07-02 | Biosite Diagnostics, Inc. | Threshold ligand-receptor assay |
US5939272A (en) * | 1989-01-10 | 1999-08-17 | Biosite Diagnostics Incorporated | Non-competitive threshold ligand-receptor assays |
CA2008100A1 (en) * | 1989-01-20 | 1990-07-20 | Hubert Bayer | Method for the determination of immunologically detectable substance |
JP2619549B2 (ja) * | 1989-06-29 | 1997-06-11 | 日本商事株式会社 | 抗原の定量法およびそれに用いる固相 |
JPH0350138A (ja) * | 1989-07-18 | 1991-03-04 | Canon Inc | 光学ガラス |
DE69032383T2 (de) * | 1989-08-04 | 1998-12-10 | Behringwerke AG, 35041 Marburg | Heterogene Bindungstests |
US5512659A (en) * | 1989-08-04 | 1996-04-30 | Syntex (U.S.A.) Inc. | Compositions useful in heterogeneous immunoassays |
US5176999A (en) * | 1989-12-07 | 1993-01-05 | Eastman Kodak Company | Buffered wash composition, insolubilizing composition, test kits and method of use |
US5180828A (en) * | 1990-02-09 | 1993-01-19 | Molecular Devices Corporation | Chromophoric reagents for incorporation of biotin or other haptens into macromolecules |
DE4006054A1 (de) * | 1990-02-26 | 1991-08-29 | Boehringer Mannheim Gmbh | Verfahren zur immunologischen bestimmung von liganden |
US5922615A (en) | 1990-03-12 | 1999-07-13 | Biosite Diagnostics Incorporated | Assay devices comprising a porous capture membrane in fluid-withdrawing contact with a nonabsorbent capillary network |
US5143852A (en) * | 1990-09-14 | 1992-09-01 | Biosite Diagnostics, Inc. | Antibodies to ligand analogues and their utility in ligand-receptor assays |
JP2968039B2 (ja) * | 1990-11-29 | 1999-10-25 | 株式会社京都第一科学 | 化学発光免疫測定法 |
IE920778A1 (en) * | 1991-03-12 | 1992-09-23 | Du Pont | Method for specific binding assays using a releasable ligand |
CA2064953A1 (en) * | 1991-04-03 | 1992-10-04 | John Joseph Rejman | Immunoassay for immunoglobulins |
EP0507587A3 (en) * | 1991-04-03 | 1993-03-03 | Syntex (U.S.A.) Inc. | Immunoassay for immunoglubulins |
US6168956B1 (en) | 1991-05-29 | 2001-01-02 | Beckman Coulter, Inc. | Multiple component chromatographic assay device |
US5998220A (en) | 1991-05-29 | 1999-12-07 | Beckman Coulter, Inc. | Opposable-element assay devices, kits, and methods employing them |
US5877028A (en) | 1991-05-29 | 1999-03-02 | Smithkline Diagnostics, Inc. | Immunochromatographic assay device |
US5464749A (en) * | 1991-07-22 | 1995-11-07 | Bayer Corporation | Immunoassay of free substances in biological fluids |
US6007999A (en) * | 1991-07-31 | 1999-12-28 | Idexx Laboratories, Inc. | Reversible flow chromatographic binding assay |
US5726010A (en) * | 1991-07-31 | 1998-03-10 | Idexx Laboratories, Inc. | Reversible flow chromatographic binding assay |
US7713528B1 (en) | 1993-02-18 | 2010-05-11 | Enzo Therapeutics, Inc. | Method for in vivo delivery of active compounds using reagent conjugate |
US5536820A (en) * | 1993-02-26 | 1996-07-16 | E. I. Du Pont De Nemours And Company | Avidin-binding azo reagents |
US5677196A (en) * | 1993-05-18 | 1997-10-14 | University Of Utah Research Foundation | Apparatus and methods for multi-analyte homogeneous fluoro-immunoassays |
US5919712A (en) * | 1993-05-18 | 1999-07-06 | University Of Utah Research Foundation | Apparatus and methods for multi-analyte homogeneous fluoro-immunoassays |
US5512492A (en) * | 1993-05-18 | 1996-04-30 | University Of Utah Research Foundation | Waveguide immunosensor with coating chemistry providing enhanced sensitivity |
DE4319506A1 (de) * | 1993-06-12 | 1994-12-15 | Boehringer Mannheim Gmbh | Verfahren zum Nachweis metabolisch markierter DNA |
US5518882A (en) * | 1993-12-21 | 1996-05-21 | Biotex Laboratories, Inc. | Immunological methods of component selection and recovery |
WO1995021942A1 (en) * | 1994-02-15 | 1995-08-17 | T Cell Diagnostics, Inc. | Immunoassay kit comprising universal reagents |
US5747352A (en) * | 1994-05-23 | 1998-05-05 | Beckman Instruments, Inc. | Reagents and methods for the rapid and quantitative assay of pharmacological agents |
DE4434093A1 (de) * | 1994-09-23 | 1996-03-28 | Boehringer Mannheim Gmbh | Verfahren zum qualitativen oder/und quantitativen Nachweis einer zu bestimmenden Substanz |
US5814565A (en) * | 1995-02-23 | 1998-09-29 | University Of Utah Research Foundation | Integrated optic waveguide immunosensor |
AU6720096A (en) | 1995-08-09 | 1997-03-05 | Quidel Corporation | Test strip and method for one step lateral flow assay |
US5773224A (en) * | 1996-02-12 | 1998-06-30 | Grandics; Peter | Immunoselection system for cell elution |
DE69842017D1 (de) * | 1997-06-10 | 2011-01-05 | Lpath Inc | Verfahren zum frühzeitigen nachweis herzerkrankungen |
US7087420B1 (en) | 1997-07-17 | 2006-08-08 | Cambia | Microbial β-glucuronidase genes, gene products and uses thereof |
US6391547B1 (en) * | 1997-09-09 | 2002-05-21 | Center For The Application Of Molecular Biology To International Agriculture | Microbial β-glucuronidase genes, gene products and uses thereof |
US6222619B1 (en) | 1997-09-18 | 2001-04-24 | University Of Utah Research Foundation | Diagnostic device and method |
US6210978B1 (en) * | 1998-03-02 | 2001-04-03 | Bayer Corporation | Method and device for the detection of analyte in a fluid test sample |
US6153442A (en) * | 1998-05-20 | 2000-11-28 | Dade Behring Inc. | Reagents and methods for specific binding assays |
US6153394A (en) * | 1998-09-18 | 2000-11-28 | Board Of Trustees Operating Michigan State University | Immunoassay for equine protozoal myeloencephalitis in horses |
US7262019B2 (en) * | 2001-05-03 | 2007-08-28 | Immunetics, Inc. | System and methods for detection of Bacillus anthracis related analytes in biological fluids |
WO2002090961A2 (en) * | 2001-05-03 | 2002-11-14 | Immunetics, Inc. | Systems and methods for detection of analytes in biological fluids |
KR20040058229A (ko) | 2001-10-22 | 2004-07-03 | 더 스크립스 리서치 인스티튜트 | 항체 표적화 화합물 |
ES2327398T3 (es) * | 2001-11-20 | 2009-10-29 | Duke University | Biomateriales interfaciales. |
US7754155B2 (en) * | 2002-03-15 | 2010-07-13 | Ross Amelia A | Devices and methods for isolating target cells |
US20070134739A1 (en) * | 2005-12-12 | 2007-06-14 | Gyros Patent Ab | Microfluidic assays and microfluidic devices |
WO2007069940A1 (en) | 2005-12-12 | 2007-06-21 | Gyros Patent Ab | Microfluidic assays and microfluidic devices |
US20080255004A1 (en) * | 2006-11-15 | 2008-10-16 | Invitrogen Dynal As | Methods of reversibly binding a biotin compound to a support |
JP2016164554A (ja) * | 2015-02-27 | 2016-09-08 | 株式会社リコー | 標的検査装置、標的検査キット、標的検査方法、転写媒体、及び標的検査装置の製造方法 |
WO2019175745A1 (en) * | 2018-03-13 | 2019-09-19 | Kunaparaju, Venkata Subba Raju | Methods and composition for preparing viscous substrate |
EP3791167A1 (en) | 2018-05-07 | 2021-03-17 | Immundiagnostik AG | System for analysing quantitative lateral flow chromatography |
EP3924735A1 (en) | 2019-02-15 | 2021-12-22 | Immundiagnostik AG | Rapid test for diagnosis of bacterial infections in neonates |
Family Cites Families (5)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
NL154599B (nl) * | 1970-12-28 | 1977-09-15 | Organon Nv | Werkwijze voor het aantonen en bepalen van specifiek bindende eiwitten en hun corresponderende bindbare stoffen, alsmede testverpakking. |
US3852157A (en) * | 1971-05-14 | 1974-12-03 | Syva Corp | Compounds for enzyme amplification assay |
US3966556A (en) * | 1972-11-06 | 1976-06-29 | Syva Company | Compounds for enzyme amplification assay methadone analogs |
US4017597A (en) * | 1974-10-30 | 1977-04-12 | Monsanto Company | Unitized solid phase immunoassay kit and method |
US4134792A (en) * | 1976-12-06 | 1979-01-16 | Miles Laboratories, Inc. | Specific binding assay with an enzyme modulator as a labeling substance |
-
1979
- 1979-05-02 JP JP5466779A patent/JPS5510590A/ja active Pending
- 1979-05-03 DK DK182279A patent/DK149908C/da not_active IP Right Cessation
- 1979-05-03 US US06/035,619 patent/US4298685A/en not_active Expired - Lifetime
- 1979-05-03 GB GB8026150A patent/GB2055851A/en not_active Withdrawn
- 1979-05-03 DE DE19792953449 patent/DE2953449A1/de not_active Ceased
- 1979-05-03 EP EP79101354A patent/EP0005271A3/en not_active Withdrawn
- 1979-05-03 NL NL7915050A patent/NL7915050A/nl unknown
-
1980
- 1980-07-11 FR FR8015865A patent/FR2458072A1/fr active Granted
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
FR2458072B1 (da) | 1982-05-21 |
DK182279A (da) | 1979-11-05 |
FR2458072A1 (fr) | 1980-12-26 |
EP0005271A2 (en) | 1979-11-14 |
DE2953449A1 (de) | 1981-06-04 |
EP0005271A3 (en) | 1980-03-19 |
NL7915050A (nl) | 1980-09-30 |
DK149908C (da) | 1987-03-09 |
US4298685A (en) | 1981-11-03 |
JPS5510590A (en) | 1980-01-25 |
GB2055851A (en) | 1981-03-11 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
DK149908B (da) | Fremgangsmaade, analysesaet og biotin-maerket antistof til paavisning og/eller kvantitativ bestemmelse af et biologisk stof i en proeve. | |
US4434236A (en) | Immunoassay wherein labeled antibody is displaced from immobilized analyte-analogue | |
US4870007A (en) | Immobilized biotinylated receptor in test device, kit and method for determining a ligand | |
US4157280A (en) | Test set for detecting the presence of antigens associated with hepatitis | |
US4474878A (en) | Sandwich EIA for antigen associated with hepatitis | |
FI102921B (fi) | Menetelmä biologisesti aktiivisten reagenssien valmistamiseksi sukkiin i-imidiä sisältävistä polymeereistä, analyysielementti ja menetelmiä n iiden käyttämiseksi | |
EP0406473A1 (en) | Ion capture reagents and methods for performing binding assays | |
JPH0566547B2 (da) | ||
US4642285A (en) | Sandwich EIA for antigen | |
EP0455735B1 (en) | Avidin-biotin assisted immunoassay | |
CA2046130A1 (en) | Biologically active reagent, analytical element and methods for use of the reagent | |
EP0328413B1 (en) | Sodium decyl sulfate wash solution, test kit and method for the determination of an immunological ligand | |
DK174032B1 (da) | Sæt samt fremgangsmåde til immunometrisk dosering, der kan anvendes på hele celler | |
US5017474A (en) | Wash solution, test kit and method for the determination of an immunological ligand | |
EP0840895B1 (en) | Methods of obtaining receptor:release ligand (reland) complexes and test assays | |
US4729961A (en) | Process for the detection and assay by erythroadsorption | |
CN108732344B (zh) | 一种用于快速检测紫杉醇的试纸及其制备方法、试剂盒 | |
JP2579972B2 (ja) | 膜親和濃縮免疫測定方法 | |
US5525476A (en) | Immunoassay, monoclonal antibody, and hybridoma | |
CA1106281A (en) | Detection of antigen associated with hepatitis by "sandwich" method | |
JPH0232258A (ja) | ヒトの体液中の抗体力価の測定法及びクラス特異性抗体の測定法 | |
EP0152254A2 (en) | Chromogenic support immunoassay utilizing labeled complement components | |
EP0132292A2 (en) | Method of measuring biological ligands | |
EP0451687A2 (en) | Chlamydia half-sandwich immunoassay | |
EP0101886A2 (de) | Antikörper gegen bakterielle Peptidoglycane, Verfahren zu ihrer Herstellung und Methoden zu ihrer quantitativen Bestimmung |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
PBP | Patent lapsed |