DK148902B - Analogifremgangsmaade til fremstilling af trh-analoge derivater af n-substitueret histidylprolinamid eller farmaceutisk anvendelige syreadditionssalte heraf - Google Patents

Description

148902

Den foreliggende opfindelsen angår en analogifremgangsnåde til fremstilling af hidtil ukendte TRH-analoge derivater af histidyl-prolinamid eller farmaceutisk anvendelige syreadditionssalte heraf, idet den ene eller begge aminosyrer i dette dipeptidamid kan være optisk aktiv eller racemisk, men dog fortrinsvis foreligger i L-konfigurationen. De ved fremgangsmåden ifølge opfindelsen fremstillede derivater af N-substitueret histidylprolinamid er forbindelser med den i kravet anførte almene formel I eller salte af disse forbindelser med farmaceutisk anvendelige syrer, i hvilken 1 2 formel R og R er ens eller forskellige og (med det forbehold, 1 2 at ikke begge symboler R og R samtidig kan betyde hydrogen) betegner hydrogen, alkylgrupper med op til 6 carbonatomer eller 2 148902 en cyclohexyl- eller benzylgruppe, eller sammen med det nitrogenatom, hvortil de er knyttet, danner en piperidinring, og Z betegner en af grupperne a) -NH-CO-CH- (der også kan skrives i den tautomere form • 4 c R R6 -N = C - CH -) eller b). — C - S - CH0~ I I4 ic 2 OH R r5 3 4 hvorhos R sammen med R betegner en yderligere binding mellem de carbonatomer, hvortil de er knyttet, eller, når Z er gruppen b) , R~* betegner et hydrogenatom, medens R"3 og R® er ens eller forskellige og betegner hydrogen eller alkylgrupper med 1-3 carbonatomer.

Hvad angår den til dipeptidet knyttede carboxylsyre med formlen II

I t ' 1 3

• 1 RJ

I I / TT

.C C XI

^ COOH I

H

er der fortrinsvis tale om orotsyre, thiomorpholin-(5)-on-(3)-carboxylsyre eller thiomorpholin-(6)-methyl-(5) -on- (3)-carboxylsyre.

Når Z er gruppen b), og/eller når R og R er forskellige fra hinanden, kan også syreresterne af syrerne med formlen II foreligge i racemisk eller optisk aktiv form (med op til to asymmetri-centre, som det er antydet med de indsatte i den nedenståendé formel for thiomorpholin-(6)-methyl-(5)-on-(3)-carboxylsyre), fortrinsvis i L-foruten, i forbindelserne med foralen I: "3^S-CH2 H^f |2„ *C /

COOH

N

H

2

Dersom R er hydrogen, betegner R fortrinsvis en ligekædet alky lgruppe med 1-6 carbonatomer, navnlig med 1-4 carbonatomer.

2

Som følge af histidinrestens basicitet er forbindelserne med formlen I i stand til at danne salte med syrer. Ind under fremgangs- 3 148902 måden ifølge opfindelsen hører derfor også fremstillingen af salte af disse forbindelser med farmaceutisk (i saltform) anvendelige uorganiske eller organiske syrer som f.eks. saltsyre, hydrogenbromidsy-re, svovlsyre, phosphorsyre, myresyre, eddikesyre, propionsyre, benzoesyre, salicylsyre, phenyleddikesyre eller benzensulfonsyre.

De ved fremgangsmåden ifølge opfindelsen opnåede forbindelser udviser biologiske egenskaber, som i vidtgående grad ligner egenskaberne af pyroglutamyl-histidyl-prolinamid, der sædvanligvis betegnes som "Thyrotropin-Releasing-Hormon" eller "TRH", med hensyn til virkningskvalitet, men vedvarer betydeligt længere end det kendte produkts. Det er desuden af terapeutisk betydning, at forholdet mellem de centralstimulerende virkninger og de endokrinologiske virkninger for de ved fremgangsmåden ifølge opfindelsen opnåede forbindelser i sammenligning med det kendte produkt (TRH) er forskudt til fordel for de farmakologisk værdifulde egenskaber. De omhandlede forbindelser er aktive ved parenteral og oral administrering, hvor virkningens indtræden sker hurtigt, f.eks. ved parenteral administrering efter ca. 10 minutters forløb.

De fremherskende symptomer svarer ved farmakologiske prøver til en central stimulering. Dersom man indgiver forsøgsdyr lige store doser af TRH og et ved fremgangsmåden ifølge opfindelsen opnået produkt, viser det sig, at det sidstnævnte virker centralstimulerende flere gange længere end TRH.

Forbindelsernes toksicitet er meget ringe, således at forbindelserne f.eks. kan benyttes som psychostimulanter eller som anti-depressiva. Produkterne kan finde anvendelse såvel til mennesker som til dyr. Egnede farmaceutisk anvendelige præparatformer er tabletter, drageer, granulater, kapsler, dråber, safter eller syrup,, spraypræparater til intranasal administrering eller til indgift af stofferne via bronchierne, samt vandige, sterile opløsninger til parenteral administrering.

Fra svensk fremlæggelsesskrift nr. 400.074 og fra beskrivelsen til dansk patentansøgning nr. 994/75 kendes TRH-analoger, hvor ringen i pyroglutamylresten i TRH (pyroglutamyl-histidyl-prolin-amid) er erstattet med forskellige, hovedsageligt 5-leddede hetero-cycliske ringe, og den terminale NH2~gruppe er usubstitueret. I beskrivelsen til dansk patentansøgning nr. 4637/75, der er offent-liggjort efter prioritetsdagen for nærværende opfindelse, er der beskrevet TRH-analoger, hvor ringen i pyroglutamylresten er erstat- 4 148902 tet med forskellige 6-leddede heterocycliske ringe, og hvor den terminale NH^-gruppe ligeledes er usubstitueret. Disse sidste TRH-analoger udmærker sig frem for de ovennævnte kendte TRH-analoger bl.a. ved, at de er mere bestandige mod enzymatisk nedbrydning forårsaget af i legemet forekommende enzymer. Det har nu overraskende vist sig, at de ved fremgangsmåden ifølge den foreliggende opfindelse fremstillede forbindelser, der kun adskiller sig fra de i beskrivelsen til dansk patentansøgning nr. 4637/75 beskrevne forbindelser ved, at de er alkyl-, cyclohéxyl- eller benzylsubstituerede i deri terminale Nik,-gruppe,, er. endnu mere bestandige mod den nævnte enzymatiske nedbrydning. Disse 'forhold vil fremgå af de i nedenstående tabel anførte forsøgsdata.

Tabel

Nedbrydning af TRH og dets analoger med formlen A-His-Pro-B , forårsaget af forskellige i legemet forekommende enzymer (% af TRH-spaltning).

Forbindelse A B Pyroglutamat- Desamidase __aminopeptidase_ TRH t—i -NH- (100) (100)

H

Eksempel 3 c

Svensk freml. / V

skrift 400.074 -NH, 92,5 96,1

H

Eksempel 1

Dansk ans. V

nr. 994/75 Λ,η 0 li -NH0 201,7 94,6 Γ o

Ϊ »A

0*SAo- _1®2 0 1°4'4

N

T I -NH2 0 66,8 0*>Ν^0-

H

._\_____ 5 148902 _Tabel (fortsat)_

Forbindelse A B Pyroglutamat- Desamidase _aminopeptidase_

Foreliggende beskrivelse _

Eksempel / 2 og 9 \ / i -NHCH3 0 8,2

r I

Eksempel 4V ^ | S -mc.Ua \ 4 9 0 0 H -

Eksempel 3 /-NH—^ H - 0 0

Eksempel 6 ^ ^ 0 0 -NHCH, 0 7,9

Eksempel ΐ I

1, 8 og 10

H

Heller ikke for forbindelserne ifølge eksempel 5 (A = orotyl, B = -NH“CgH13) og eksempel 7 (A = orotyl, B = -NHC^CgHj.) blev der iagttaget nogen nedbrydning forårsaget af pyroglutamataminopepti-dase eller desamidase.

Fremgangsmåden ifølge opfindelsen er ejendommelig ved det i kravets kendetegnende del anførte.

Forbindelserne med den almene formel I kan således efter fremgangsmåde a) ifølge opfindelsen fremstilles ved, at man omsætter et N-substitueret histidylprolinamid med formlen III (se kravet), 1 2 hvori R dg R har de ovennævnte betydninger, og hvori de to aminosyrer foreligger i den ønskede optiske konfiguration, med en syre 3 med formlen II, hvori R og Z har de ovennævnte betydninger, i nærværelse af et vandbindende middel, navnlig et carbodiimid (fortrins-; vis dicyclohexylcarbodiimid), eller med et funktionelt derivat af. en syre med formlen II, f.eks. et syrehalogenid, et anhydrid eller et blandet anhydrid, et azid eller en aktiveret ester.

6 148902

Til fremstilling af forbindelserne med formlen I kan man også ved fremgangsmåde b) ifølge opfindelsen gå således frem, at-man omsætter en forbindelse med formlen IV (se kravet), hvori R^' og Z.har de ovennævnte betydninger, i nærværelse af et vandbindende middel, navnlig et carbodiimid, fortrinsvis dicyclohexylcar-bodiimid, eller et funktionelt derivat af en forbindelse med formlen IV, f.eks. et syrehalogenid, et blandet anhydrid eller en aktiveret ester, med en forbindelse med formlen V (se kravet), 12 hvori R og R har de ovennævnte betydninger.

Forbindelserne med formlen I kan også efter fremgangsmåde c) ifølge opfindelsen opnås ved, at man omsætter en forbindelse 3 med formlen VI (se kravet), hvori R og Z har de ovennævnte betydninger, og W betegner en hydroxy- eller acyloxygruppe, en p-nitrophenoxy-, tri- eller pentachlorphenoxy-, pentafluorphenoxy-, pyridyloxy-, phenylmercapto-, p-nitrophenylmercapto- eller cyano- methyloxygruppe eller en N-hydroxysuccinimidgruppe, med en amin 1 2 med formlen VII (se kravet) , hvori R og R har de ovennævnte betydninger.

Som blandede anhydrider af syrer med formlerne II og IV kommer navnlig de i betragtning, der afledes af monoestere af kulsyre med alifatiske alkoholer, som indeholder 1-4 carbonatomer, eller f.eks. af trimethyleddikesyre (pivalinsyre). Egnede aktiverede estere af de nævnte syrer afledes f.eks. af p-nitrophenol, tri- eller pentachlorphenol, , pentafluorphenol, U-hydroxysuccinimid, 2- eller 4-hydroxypyridin, thiophenyl, p-nitrothiophenol, glycolsyrenitril, l-hydroxybenzotriazol og øvrige i peptidkemien til dannelse af aktiverede estere sædvanlige hydroxy- eller mercaptoforbindelser.

De ved fremgangsmåden ifølge opfindelsen opnåede forbindelser er relativt stabile og kan derfor renses ved f.eks. omfældning og omkrystallisation, men også ved søjlechromatografi, modstrømsforde-ling osv.

Fremgangsmåden ifølge opfindelsen belyses nærmere ved hjælp af de efterfølgende eksempler, hvori alle temperaturangivelser er ukorrigerede, og véd hvis udførelse der ikke blev lågt vægt på opnåelsen af optimale udbytter.

7 148902

Eksempel 1 a) Til en opløsning af 12/7 g methylamin i 350 ml absolut tetrahy-drofuran sættes under omrøring ved 0°C 71 g benzyloxycarbonyl-L-pro-lin-N-hydroxy-succinimidester. Man omrører i 15 minutter ved 0°C og i 2 timer ved stuetemperatur, afdamper opløsningsmidlet i vakuum, optager remanensen i eddikeester og vasker eddikeesteropløsningen efter hinanden med 5%'s kaliumhydrogensulfatopløsning, mættet natri-umhydrogencarbonatopløsning og vand. Ved inddampning af den over natriumsulfat tørrede eddikeesteropløsning opnår man 46 g (85%) ben-zyloxycarbonyl-L-prolin-methylamid i form af en farveløs, sejtflydende olie, som krystalliserer helt igennem ved 3-5°C, men smelter igen ved stuetemperatur.

b) 102,3 g benzyloxycarbonyl-L-prolin-methylamid hydrogeneres i methanolisk opløsning i nærværelse af frisk tilbedredt palladiumsort og 22,3 ml iseddikesyre. Efter frafiltrering af katalysatoren tilsætter man 100 ml ca. 4 N saltsyre, inddamper opløsningen i vakuum og gentager inddampningen tre gange efter tilsætning af nogle ml ethanol (absolut). Den krystallinske remanens omkrystalliseres af metha-nol-ether (60:200). Efter tørring i vakuum over phosphorpentoxid opnår man 49,7 g (77%) L-prolin-methylamid-hydrochlorid med smp. 165°C. [a]^ = -55,3° (c = 1, methanol).

c) I en ned til -15 til -20°C afkølet suspension af 60,8 g benzyl-oxycarbonyl-L-histidinhydrazid i 400 ml dimethylformamid sættes der 228 ml af en 4,38 M opløsning af hydrogenchlorid i absolut tetrahy-drofuran. Ved -15 til -20°C tildryppes der under omrøring 24,0 ml tert-butylnitrit på en sådan måde, at temperaturen ikke overstiger -15°C. Efter endt tildrypning omrører man i endnu 30 minutter ved -15°C. Derpå afkøler man reaktionsopløsningen til -45°C og tildrypper 139,0 ml triethylamin på en sådan måde, at temperaturen ikke overstiger -30°C. Derefter tilsætter man 32,9 g L-prolinmethylamid-hydro-chlorid og derefter 27,8 ml triethylamin (absolut). Efter 15 minutters reaktionstid tilsætter man endnu 22,0 ml N-methylmorpholin, lader temperaturen stige inden for 24 timer under omrøring til stuetemperatur og frasuger derefter bundfaldet. Den ved inddampning af filtratet opnåede remanens opløses i 300 ml vand under tilsætning af noget saltsyre. Opløsningen tilsættes koncentreret ammoniakopløsning til pH 9, hvorved der udskilles en olie. Det vandige lag fradekanteres, og olien opløses i tetrahydrofuran. Efter tilsætning af en lige så stor mængde eddikeester udryster man flere gange med vand. Den over natriumsulfat tørrede organiske fase inddampes i vakuum. Efter 8 148902 tørring-i vakuum over phosphorpentoxid opnår man 46,5 g (58%) ben-zyloxycarbonyl-L-histidyl-L-prolin-methylamid i form af en skumag -tigt størknet masse, [a]^4 = -40,3° (c = 1, methanol)’, d) 30 g benzyloxycarbonyl-L-histidyl-L-prolinmethylamid opløses i 100 ml iseddikesyre, og efter tilsætning af 100 ml af en 40%'s opløsning af hydrogenbromid i iseddikesyre omrøres blandingen i 1 time ved stuetemperatur. Det ved tilsætning af 500-600 ml tørt ether udfældede bundfald frasuges, vaskes med tør ether og tørres over phos-phorpentoxid/kaliumhydroxid i vakuum. Def således opnåede hydrobro-mid af L-histidyl-L-prolin-methylamid samt 12,8 g thiomorpholin-βίο, L) -fflethyl-5-on-3- (L) -carboxylsyre og 10,5 g 1-hydroxybenzotriazol opløses i 150 ml dimethylformamid og tilsættes under afkøling i isbad -den til det i saltform foreliggende hydrogenbromid ækvivalente mængde af triethylamin og derpå 15,0 g Ν,Ν'-dicyclohexylcarbodiimid, opløst i lidt dimethylformamid. Man omrører i 10 minutter i isbadet og derefter i 12 timer ved stuetemperatur. Det udfældede bundfald frasuges, filtratet inddampes i vakuum,og den derved opnåede remanens opløses i 150 ml vand.

Efter, henstand i køleskab ved cå. 3°C frasuges bundfaldet* Fil-: tratet tilsættes et lige så stort rumfang methanol og omrøres med en kationbytterharpiks, nemlig det under handelsnavnet "Dowex^BO WX 4 (syreform)" kendte produkt. Harpiksadsorbatet frasuges, vaskes med methanol og vand, opslemmes i methanol-vand (1:1) og tilsættes under omrøring 1 N ammoniakvand til pH 9,5. Harpiksen frasuges, og filtratet inddampes i vakuum. Remanensen krystalliseres af lidt vand. Efter omkrystallisation to gange af vand og efterfølgende tørring i vakuum over phosphorpentoxid opnår man 9,4 gthiomorpholin-6(D,L)-methyl-5-on-3(L)-carbonyl-L-histidyl-L-prolin-methylamid med smp. 138-139°C. [a]p4 = -48,0° (c — 1, methanol).

Eksempel 2

Man går frem som i eksempel Id, idet man dog i stedet for thio- morpholin-6(D,L)-methyl-5-on-3(L)-carboxylsyre anvender 11,4 g orot- syre (vandfri). Inddampningsremanensen fra eluatet fra ionbytteren omfældes to gange af ethanol/ether (4:1) og én gang af ethanol. Fæid- - ningsproduktet optages derpå i vand og frysetørres. Efter yderligere tørring over phosphorpentoxid opnår man 5,4 g orotyl-L-histidyl-L- 24 o prolin-methylamid. Smeltepunktet er ukarakteristisk, [a]D = -46,6 (0=1, methanol).

9 148902

De samlede moderlude inddampes, og der omfældes flere gange af varmt isopropanol. Efter tørring i vakuum opnår man yderligere 3,6 g af det ønskede produkt.

Eksempel 3

Man går frem som i eksempel ld, idet man dog i stedet for ben-zyloxycarbonyl-L-histidyl-L-prolin-methylamid anvender 35 g (0,073 mol) benzyloxycarbonyl-L-histidyl-L-prolin-cyclohexylamid og (som i eksempel 2) anvender 11,4 g orotsyre (vandfri). Den yderligere rensning af det som i eksempel ld med en kationbytter forrensede produkt foretages ved chromatografi på en kiselgelsøjle og eluering med ethanol-vand (5:1). Ved inddampning af eluatet opnår man orotyl-L- 24 o histidyl-L-prolin-cyclohexylamid i et udbytte på 8,6 g. [a]p = -54,3 (c = 0,3, methanol).

Eksempel 4 a) Man går frem som i eksempel la, idet man dog i stedet for me-thylamin anvender 20,0 ml n-butylamin, som omsættes med 69,2 g ben-zyloxycarbonyl-L—prolin-N-hydroxysuccinimidester. Slutproduktet omkrystalliseres af eddikeester-petroleumsether (100:100). Efter tørring i vakuum opnår man 49,8 g (82%) benzyloxycarbonyl-L-prolin-n-butylamid med smp. 84-85°C [a]^5 = -48,9° (c = 1, methanol).

b) 60,8 g benzyloxycarbonyl-L-prolin-n-butylamid hydrogeneres som i eksempel lb i nærværelse af 11,6 ml iseddikesyre, tilsættes efter endt hydrogenolyse 50 ral 4 N saltsyre og oparbejdes som beskrevet.

Det efter afdampning af ethanolet som en olie opnåede L-prolin-n-bu-tylamid-hydrochlorid anvendes efter tørring i vakuum uden yderligere behandling i det næste trin.

c) Man går frem som i eksemepl lc, idet man dog i stedet for det deri benyttede L-prolin-methylamid-hydrochlorid anvender det i eksempel 4b ud fra 60,8 g benzyloxycarbonyl-L-prolin-n-b.utylamid opnåede L-prolin-n-butylamid-hydrochlorid. Den efter inddampning af den filtrerede reaktionsblanding i vakuum opnåede remanens tilsættes vand og ammoniak (til pH 9,5). Derpå ekstraheres der flere gange med eddikeester. De samlede eddikeesterekstrakter udrystes flere gange med vand, 10%'s sodaopløsning og igen med vand. Fra eddikeesteropløsnin-gen opnår man efter tørring over natriumsulfat afdampning af opløsningsmidlet og tørring i vakuum benzyloxycarbonyl-L-histidyl-L-prolin-n-butylamid som en skumagtigtstørknet masse. Udbytte: 53 g (60%).

[ajp3 -47,6° (c = 1, methanol).

148902 ίο d) Man går frem som i eksempel Id, idet man dog anvender 33,1 g benzyloxycarbonyl-L-histidy1-L-prolin-n-butylamid og (som i eksempel 2) 11,4 g orotsyre. Eluatet fra ionbytteren inddampes i vakuum. Det derved opnåede skumagtige produkt renses ved chromatografi på en i methanol tilberedt søjle af kiselgel (kornstørrelse 0,063-0,200 mm).

Der elueres med methanol. Man opnår på denne måde 10,8 g (33,4%) a- 2 2 o morft orotyl-L-histidyl-L-prolin-n-butylamid. [a]D = -55,0° (c = 0,5, methanol).

Eksempel 5

Man går frem som i eksempel ld, idet man dog anvender 35,2 g benzyloxycarbonyl-L-histidy1-L-prolin-n-hexylamid og (som i eksempel 2) 11,4 g orotsyre. Efter afdampning af dimethylformamidet optages remanensen i methanol-vand (1:1) og behandles som i eksempel Id med en kationbytterharpiks. Inddampningsremanensen fra eluatet fra ion-bytteren tilsættes 50 ml vand og opløses ved tilsætning af 4 N saltsyre til pH 3. En ringe uklarhed frafiltreres. Filtratet inddampes i vakuum. Remanensen omkrystalliseres to gange af med vand mættet n-butanol. Det således opnåede stof opløses i vand, og opløsningen eks-traheres derefter flere gange med n-butanol. De samlede organiske ekstrakter inddampes i vakuum og giver efter tørring 7,9 g (21%) orotyl-L-histidyl-L-prolin-n-hexylamid-hydrochlorid med smp. 180-185°C.

[a]p^ = -57,8° (c = 1, methanol).

De samlede moderlude inddampes og underkastes modstrømsfordeling i et system af n-butanol og vand. På denne måde opnås der yderligere 5,7 g (15%) af det ønskede produkt.

Eksempel 6 a) Man opløser 24,9 g benzyloxycarbonyl-L-prolin i 150 ml absolut tetrahydrofuran, tilsætter under omrøring 13,9 ml triethylamin, afkøler til -15°C og tildrypper ved denne temperatur en opløsning af 13 ml chlormyresyreisobutylester i 50 ml absolut tetrahydrofuran, omrører videre i endnu 5 minutter ved -15°C og tildrypper derefter ved denne temperatur en opløsning af 10,1 ml piperidin i 50 ml absolut tetrahydrofuran. Efter yderligere omrøring i 2 timer ved stuetemperatur inddamper man i vakuum, optager remanensen i eddikeester og eks-traherer eddikeesteropløsningen med vand, 5%'s kaliumhydrogensulfatop løsning, mættet natriumhydrogencarbonatopløsning og vand. Efter inddampning af den over natriumsulfat tørrede eddikeesteropløsning behandler man remanensen med ether og omkrystalliserer den af eddike- 1Λ8902 11 ester-petroleumsether (50:75). Efter tørring opnår man 21,2 g (67%) benzyloxycarbonyl-L-prolin-piperidid med smp. 92°C. [et]33 = -21,9° (c = 1, methanol).

b) 63,2 g benzyloxycarbonyl-L-prolin-piperidid behandles med hydrogen som i eksempel lb i nærværelse af 11,6 ml iseddikesyre, tilsættes efter endt hydrogenolyse 50 ml 4 N saltsyre og oparbejdes som beskrevet. Det efter afdampning af ethanolet som en olie opnåede L-pro-lin-piperidid-hydrochlorid anvendes efter tørring direkte i det næste trin.

c) Man går frem som i eksempel lc, idet man dog i stedet for det deri benyttede L-prolin-methylamid-hydrochlorid anvender det i eksempel 6b ud fra 63,2 g benzyloxycarbonyl-L-prolin-piperidid opnåede L-prolin-piperidid-hydrochlorid. Den efter inddampning af den filtrerede reaktionsblanding i vakuum opnåede remanens oparbejdes på analog måde som i eksempel 4c.Den efter inddampning af eddikeesteropløs-ningen dannede olie opløses i lidt methanol og udfældes igen ved tilsætning af ether. Efter fradekantering af den ovenstående opløsning og fjernelse af de vedhæftende opløsningsmiddelrester i vakuum opnår man benzyloxycarbonyl-L-histidyl-L-prolin-piperidid som en skumagtigt størknet masse. Udbytte: 46,5 g (51%). [a]33 = -51,3° (c = 1, methanol) .

d) Man går frem som i eksempel ld, idet man dog anvender 33,6 g benzyloxycarbonyl-L-histidyl-L-prolin-piperidid og (som i eksempel 2) 11,4 g orotsyre (vandfri). Eluatet fra ionbytteren inddampes i vakuum og frysetørres. Den yderligere rensning foretages ved chromato-grafi på en i ethanol tilberedt søjle af kiselgel. Der elueres med ethanol. Man opnår på denne måde 10,9 g (32%) amorft orotyl-L-histi- 24 o dyl-L-prolin-piperidid. [a]D = -62,5 (c = 0,5, methanol).

Eksempel 7 a) Man går frem som i eksempel 6a, idet man dog i stedet for pipe-ridinet anvender 11,2 ml benzylamin. Til rensning omkrystalliseres der flere gange af eddikeester-petroleumsether (150:150). Efter tørring i vakuum opnår man 24,3 g (72%) benzyloxycarbonyl-L-prolin-ben-zylamid med smp. 93-94°C.[a]33 = -43,5° (c = 1, methanol).

b) Man opløser 67,7 g benzyloxycarbonyl-L-prolin-benzylamid i 300 ml iseddikesyre, tilsætter denne opløsning 240 ml af en 40%'s opløsning af hydrogenbromid i iseddikesyre og omrører i 90 minutter ved stuetemperatur. Derpå inddampes der i vakuum. Remanensen opløses i lidt methanol og udfældes igen ved tilsætning af ether. Efter frade- 12 148902 kantering af den ovenstående opløsning rives remanensen to gange med ether og tørres derpå i vakuum. Det således opnåede L-prolin-benzyl-amid-hydrobromid anvendes uden yderligere behandling i det næste trin.

c) Blandingen foretages på analog måde som i eksempel lc, idet man dog i stedet for L-prolinmethyiamid-hydrochloridet anvender det i eksempel 7b ud fra 67,7 g benzyloxycarbonyl-L-prolin-benzylamid op-ijåede L-prolin-benzylamid-hydrobromid. Oparbejdningen af reaktionsblandingen foretages som beskrevet i eksempel 4c. Efter inddampning af eddikeesteropløsningen og tørring i vakuum opnår man benzyloxycar-bonyl-L-histidyl-L-prolinbenzylamid som en skumagtigt størknet masse. Udbytte 80,7 g (85%). [a]33 = -39,1° (c = 1, methanol).

d) Man går frem som i eksempel ld, idet man dog anvender 35,6 g benzyloxycarbonyl-L-histidy1-L-prolin-benzylamid og (som i eksempel 2) 11,4 g orotsyre. Inddampningsresten fra eluatet fra ionbytteren renses ved søjlechromatografi som beskrevet i eksempel 4d. Man opnår på denne måde 11,7 g (33,3%) amorft orotyl-L-histidyl-L-prolinbenzyl-amid-[a]33 = -50,5° (c = 1, methanol).

Eksempel 8 410 mg thiomorpholin-6-(D,L)-methyl-5-on-3-carbonyl-L-histi-dyl-L-prolin [smp. 205-229°C under sønderdeling] opløses i vand, tilsættes 1 ml 1 N saltsyre og frysetørres. Den opnåede remanens og 126 mg N-hydroxysuccinimid opløses i 12 ml dimethylformamid og tilsættes under omrøring ved stuetemperatur en opløsning af 206 mg N,N'-dicyclohexylcarbodiimid i 3,4 ml tetrahydrofuran. Efter 2 timers omrøring ved stuetemperatur sættes der til den således opnåede opløsning af esteren af thiomorpholin-6-(D,L)-methyl-5-on-3-carbonyl-L-histidyl-L-prolin og N-hydroxysuccinimid 2 ml af en ca.

40%'s vandig methylaminopløsning. Man omrører i endnu 5-10 minutter ved stuetemperatur og inddamper derefter under formindsket tryk. Remanensen tilsættes vand og filtreres. Filtratet tilsættes et ligeså stort rumfang methanol og oparbejdes derefter på den i eksempel ld beskrevne måde, hvorved man opnår det samme produkt som i eksempel ld i et udbytte på 87 mg.

Eksempel 9 587 mg orotyl-L-histidin opløses i 25 ml vand under tilsætning af 2 ml 1 N saltsyre og frysetørres derpå. Remanensen samt 288 mg 1-hydroxybenzotriazol og 329 mg L-prolin-N-methylamid-

Claims (1)

148902 hydrochlorid opløses i 10 ml dimethylformamid. Under omrøring ved stuetemperatur tilsættes der efter hinanden 0f56 ml triethyl-amin og en opløsning af 412 mg N,N'-dicyclohexylcarbodiimid i 7,4 ml dimethylformamid. Efter omrøring i endnu 15 timer ved stuetemperatur frafiltreres der, og filtratet inddampes under formindsket tryk. Remanensen tilsættes vand og filtreres, og til filtratet sættes derpå et ligeså stort rumfang methanol. Man behandler ligesom i eksempel ld med en kationbytterharpiks, vasker med methanol og vand og eluerer derefter i.methanol/vand under ammoniaktilsætning til pH 9,5. Afdampningsremanensen fra eluatet oparbejdes som beskrevet i eksempel 2, hvorved man opnår det samme produkt som i eksempel 2 i et udbytte på 289 mg. Eksempel 10 Man går frem som i eksempel 9, idet man dog i stedet for orotyl-L-histidinet anvender 625 mg thiomorpholin-6-methyl-5-on- 3-carbonyl-L-histidin, og oparbejder det til sidst opnåede eluat fra kationbytterharpiksen som i eksempel ld. På denne måde opnår man det samme produkt som i eksempel ld i et udbytte på 257 mg. Analogifremgangsmåde til fremstilling af TRH-analoge derivater af N-substitueret histidylprolinamid med den almene formel I ' '^r3 ch 1 >c. jr i 2 \ > .r1 cr \C0 - NH CH- CO - N_L CO - H 1 2 hvori R og R er ens eller forskellige og (med det forbehold, at 1 2 ikke begge symboler R og R samtidig kan betyde hydrogen) betegner hydrogen, alkylgrupper med op til 6 carbonatomer eller en cyclohexyl-eller benzylgruppe, eller sammen med det nitrogenatom, hvortil de er knyttet, danner en piperidinring, og Z betegner en af grupperne a) - NH - CO - CH- (^±-N = C-CH- ) eller R4 Ah R4 R6 b) -C—S —CH0— k5 148902 3 4 hvorhos R sammen med R betegner en yderligere binding mellem de carbonatomer, hvortil de er knyttet, eller, når Z er gruppen b),R3 C C betegner et hydrogenatom, medens R og R er ens eller forskellige og betegner hydrogen eller alkylgrupper med 1-3 carbonatomer, eller salte heraf med farmaceutisk anvendelige syrer, kendetegnet ved, at man a) omsætter en forbindelse med den almene formel CH2 R1 ΗΛί - CH - CO - N-L CO - , III A 'NT 1 2 hvori R og R har de ovennævnte betydninger, med en carboxylsyre med den almene formel - Z_ / 'n / > / 1 » «’ II ' ' R3 C c "^COOH H hvori R og Z har de ovennævnte betydninger, i nærværelse af et vandbindende middel eller med et funktionelt derivat af en syre med formlen II, eller b) omsætter en forbindelse med den almene formel I i 3h i ! R3 V ijT XIO - NH - CH - COOH H hvori R^ og Z har de ovennævnte betydninger, i nærværelse af et vandbindende middel, eller et funktionelt derivat af en forbindelse med formlen IV med en forbindelse med den almene formel