DK148281B - Analogifremgangsmaade til fremstilling af 8a-substituerede 8,8a-desoxy-8,8a-dihydrooleandomycin-forbindelser eller farmaceutiskacceptable syreadditionssalte deraf - Google Patents

Description

i 148281

Opfindelsen angår en analogifremgangsmåde til fremstilling af hidtil ukendte 8a-substituerede 8,8a-desoxy-8,8a-dihydro-oleandomycin-forbindelser med den i kravets indledning angivne almene strukturformel A eller farmaceutisk acceptable syreadditionssalte deraf.

Oleandomycin, dets fremstilling'i gæringsvæsker og dets anvendelse som antibakterielt middel blev først beskrevet i US patentskrift nr. 2 757 123. Den naturligt forekommende forbindelse vides at have strukturformlen 8a -r-0 V ?«-3>2

Vn h3° Id J -

o I

och3 i

Det konventionelt accepterede nummereringsskema og stereo-kemisk repræsentation for oleandomycin og lignende forbindelser er vist ved en række stillinger i formel 1.

Der kendes flere syntetiske modifikationer af denne forbindelse, især de, hvori 1 - 3 af de frie hydroxygrupper, som findes i 2'-, 4"- og Il-stillingerne, er esterificeret som acétylestere. Desuden er der i US patentskrift nr. 3 022 219 beskrevet lignende modifikationer, hvori acetylgruppen i de ovennævnte estere er erstattet med en anden, fortrinsvis uforgrenet, lavere alkanoylgruppe med 2-6 carbonatomer eller en trifluoracetylgruppe.

Der kendes også halvsyntetiske oleandomyciner, hvori et eller flere af hydrogenatomerne i de ovennævnte hydroxy- 148281 2 grupper er erstattet med en trialkylsilyl- og fortrinsvis .en trimethylsilylgruppe.

De hidtil ukendte forbindelser med formel A eller deres syreadditionssalte fremstilles ved fremgangsmåden ifølge opfindelsen, som er ejendommelig ved det i kravets kendetegnende del anførte.

De hidtil ukendte oleandomycinderivater, som fremstilles ved fremgangsmåden ifølge opfindelsen, er i stand til at bekæmpe infektioner forårsaget af følsomme organismer og er værdifulde som antibiotica, og især som antibakterielle midler over for Gram-positive bakterier og med en overraskende større aktivitet over for Neisseriae sicca end de kendte oleandomycinderivater.

Af interesse i denne forbindelse er flere foretrukne udførelsesformer af opfindelsen. Disse udførelsesformer inkluderer fremstillingen af 8,8a-desoxy-8,8a-dihydro-8a-hydroxy-oleandomycin, 8,8a-desoxy-8,8a-dihydro-8a-tosyloxyoleando-mycin, 8,8a-desoxy-8,8a-dihydro-8a-aminooleandomycin, 8,8a-desoxy-8,8a-dihydro-8a-(N-acetyl)aminooleandomycin, 8,8a-desoxy-8,8a-dihydro-8a-(N-formyl)aminoolenadomycin, 8,8a-desoxy-8,8a-dihydro-8a-chloroleandomycin, 8,8a-desoxy-8,8a-dihydro-8a-(imidazol-l-yl )oleandomycin og 8,8a-desoxy-8,8a-dihydro-8a-azidooleandomycin samt de esterificerede derivater af disse forbindelser, dvs. de derivater, hvori en af eller begge hydroxygrupperne i stillingerne 2' og 4" er esteri-ficeret med acetyl.

De hidtil ukendte oleandomycinderivater fremstilles ved fremgangsmåden ifølge opfindelsen ud fra naturligt oleandomycin og dets 2'- og/eller 4"-acetylerede derivater. De fremgangsmåder, hvorved de acetylerede derivater af naturligt oleandomycin fremstilles er beskrevet i US patentskrift nr. 3 022 219.

Det ses ved sammenligning af den i kravet angivne struktur- 3 148281 formel A og strukturformlen 1 for oleandomycin, at forskellen mellem de ifølge opfindelsen fremstillede forbindelser og oleandomycin ligger i delstrukturen B og grupperne R1 og R2.

ch2z Y^i

Derfor vil de ved fremgangsmåden ifølge opfindelsen fremstillede forbindelser i det følgende blive repræsenteret ved delstrukturen B.

I den følgende omtale skal esterificerede derivater forstås at betyde oleandomycinforbindelser, hvori en af eller begge hydroxygrupperne i stillingerne 2' og 4" er esterificeret med acetyl.

Den som reaktion 1 nedenfor viste fremgangsmåde til fremstilling af det hidtil ukendte 8,8a-desoxy-8,8a-dihydro-8a-hydroxyoleandomycin, formel C, eller dets 2'-acetyl-, 4"-acetyl- eller 2',4"-diacetylderivater er en reduktiv spaltning af 8,8a-epoxidgruppen i naturligt oleandomycin, 2'-acetyl-, 4"-acetyl- eller 2',4"-diacetyloleandomycin med metalamalgam, som frembringer en selektiv reduktion af epoxidet til den primære alkohol. Typiske reagenser inkluderer zinkamalgam, magnesiumamalgam og især aluminiumamalgam .

CH20H

f"· 0 0 i 1. *A1(Hg) * oleandomycin 8,8a-desoxy-8,8a-

dihydro-8a-hydroxy-oleandomycin, C

Den typiske procedure for fremgangsmåden ifølge reaktion 1 består i at bringe oleandomycin eller dets ovennævnte ace-tylerede derivat i kontakt med metalamalgamet i et opløs- 148281 4 ningsmiddel for oleandomycin, såsom alkanol, ether, vandholdig ether, benzen, vandig alkanol, tetrahydrofuran, vandigt tetrahydrofuran, dioxan, vandigt dioxan eller blandinger deraf, indtil reaktionen er i det væsentlige fuldført. Temperaturområdet for reaktionen inkluderer området fra stuetemperatur op til opløsningsmidlets tilbagesvalingstemperatur, og den typiske procedure vil gennemføres ved stuetemperatur.

Efter fraskillelse af de komplekse uorganiske salte kan produktet isoleres og renses ved passende metoder, som vil afhænge af produktets fysiske egenskaber. Anvendelige former for teknik inkluderer omkrystallisation, lyofilisering, chromatografi, højtryksvæskechromatografi og ekstraktion.

Fremstillingen af det hidtil ukendte 8,8a-desoxy-8,8a-di-hydro-8a-chloroleandomycin, formel D, eller dets esterifi-cerede derivater gennemføres ved den nedenfor som reaktion 2 viste fremgangsmåde, hvorved 8,8a-desoxy-8,8a-dihydro-8a-hydroxyoleandomycin eller dets esterificerede derivater bringes i kontakt med N-chlorsuccinimid og triphenylphosphin, fortrinsvis i et polært, aprotisk opløsningsmiddel, såsom dime-thylformamid, ved temperaturer på fra -30 °C til stuetemperatur .

ch2oh ch2ci · ^ώ. — Λ

oleandomycinderivat C oleandomycinderivat D

Efter at reaktionen er i det væsentlige fuldført, kan produktet isoleres ved opdeling af remanensen mellem en pufret basisk vandig fase og en organisk fase, hvori produktet er opløseligt. Endelig rensning kan opnås ved chromatografi, krystallisation, lyofilisering eller højtryksvæskechromatografi, hvor valget af metode afhænger af produktets fysiske egenskaber.

5 148281

Den som reaktion 3 viste fremstilling af det hidtil ukendte 8,8a-desoxy-8,8a-dihydro-8a-(toluensulfonyloxy)oleandomycin, formel E, eller dets esterificerede derivater gennemføres ved at bringe 8,8a-desoxy-8,8a-dihydro-8a-hydroxyoleandomycin, formel C, eller dets esterificerede derivater i kontakt med toluensulfonylchlorid.

ch2oh ch2oso2ch2c6h5 3· Cl ww1 j Cl

oleandomycinderivat C oleandomycinderivat E

Den typiske procedure til gennemførelse af reaktion 3 er som følger :

Oleandomycinderivatet C eller dets esterificerede derivater bringes i kontakt med omkring et ækvivalent toluensulfonylchlorid opløst i en organisk amin, såsom tri-ethylamin, pyridin eller lutidin, om ønsket fortyndet med et inert organisk opløsningsmiddel, såsom chloroform, benzen, methylenchlorid eller toluen.

Produktet kan derpå isoleres ved opdeling af reaktionsblandingen mellem en pufret basisk vandig fase og en organisk fase, hvori produktet er opløseligt, efterfulgt af rensning af produktet ved chromatografi, krystallisation eller lyo-filisering, hvor valget vil afhænge af produktets fysiske egenskaber.

Det hidtil ukendte 8,8a-desoxy-8,8a-dihydro-8a-(imidazol-1-yl)oleandomycin, formel G, eller dets esterificerede derivater fremstilles ved erstatning af 8a-toluensulfonyl-gruppen i 8,8a-desoxy-8,8a-dihydro-8a-(toluensulfonyloxy) oleandomycin, formel E, eller dets esterificerede derivater med imidazol.

148281 6

En typisk procedure består i at opvarme en opløsning af oleandomycinderivat E og imidazol i et polært aprotisk opløsningsmiddel, såsom dimethylformamid eller dimethylsul-foxid, ved temperaturer på 25 - 100 °C, indtil udskiftningen er i hovedsagen fuldført. Isolering af produktet kan opnås ved opdeling af remanensen mellem en pufret basisk vandig fase og en organisk fase, hvori produktet er opløseligt, typisk ethylacetat. Det resulterende rå produkt kan derpå renses ved chromatografi, omkrystallisation eller lyofilisering, hvor valget vil afhænge af produktets fysiske egenskaber.

/-N

CH20S02CH2C6H5 ch2-n *· vs DrS " — lmidazol

oleandomycinderivat E oleandomycinderivat G

På lignende måde kan toluensulfonyloxygruppen i oleandomycinderivat E eller dets esterificerede derivater erstattes med en azidion til fremstilling af det hidtil ukendte 8,8a-desoxy-8,8a-dihydro-8a-azidooleandomycin, formel H, eller dets esterificerede derivater.

CH20S02CH2C6H5 ^H2N3 5·

oleandomycinderivat E oleandomycinderivat H

De forbindelser med formel A, hvori Z er en aminogruppe eller et aminderivat, kan fremstilles ud fra 8,8a-desoxy-8,8a-dihydro-8a-azidooleandomycin eller dets esterificerede derivater ved reduktion af azidet under forskellige betingelser og, om ønsket i visse tilfælde, kondensation af det resulterende 8,8a-desoxy-8,8a-dihydro-8a-aminooleandomycin eller dets esterificerede derivater med amideringsmidler.

De oleandomycin-forbindelser, som opnås ved sådanne omdan- 148281 7 neiser, består af 8,8a-desoxy-8,8a-dihydro-8a-aminoolean-domycin, formel I, 8,8a-desoxy-8,8a-dihydro-8a-N-(dialky1)-aminooleandomycin, formel J, 8,8a-desoxy-8,8a-dihydro-8a-N-(R CO)aminooleandomycin, formel L, og deres esterificere-de derivater. Fremstillingen af hver af disse oleandomycin-forbindelser er beskrevet nedenfor.

Under normale lavtryks (op til 690 kPa) katalytiske hydrogeneringsbetingelser reduceres 8a-azido-forbindelsen, ole-andomycinderivat H, eller dens esterificerede derivater til 8,8a-desoxy-8,8a-dihydro-8a-aminooleandomycin, formel I, eller dets esterificerede derivater.

ch2n3 cm2nh2 6· xX w* xx

oleandomycinderivat H oleandomycinderivat I

Ved en typisk fremgangsmåde anvendes opløsningsmidler, hvori oleandomycinderivat H er opløseligt, såsom vand, methanol, ethanol, 2-propanol eller blandinger deraf, og ædelmetalkatalysatorer, såsom palladium på kul og platinoxid, til hydrogenering af oleandomycinderivat H til oleandomycinderivat I. Efter at hydrogeneringen er i det væsentlige fuldført, kan produktet isoleres ved chromatogra-fi, lyofilisering eller omkrystallisation af remanensen, hvor valget vil afhænge af produktets fysiske egenskaber.

Alternativt kan oleandomycinderivat I fremstilles ved reduktiv aminering af det tilsvarende oleandomycin-8a-alde-hyd. 8a-Hydroxyforbindelsen, oleandomycinderivat C, oxideres til det tilsvarende oleandomycin-8a-aldehyd ved anvendelse af sådanne oxidationsmetoder som Jones' reaktion, dimethylsulfoxid-og-carbodiimid-reaktionen eller Corey's chromtrioxid-hydrochloridsalt-reaktion. Dette oleandomycin- 148281 8 8a-aldehyd-mellemprodukt omdannes derpå til 8a-aminofor-bindelsen, oleandomycinderivat I, ued behandling med ammoniak under katalytiske hydrogeneringsbetingelser.

N,N-dialkyl-8,8a-desoxy-8,8a-dihydro-8a-aminooleandomycin-forbindelserne, formel J eller deres esterificerede derivater dannes ud fra 8,8a-desoxy-8,8a-dihydro-8a-azidoolean-domycin, formel H, eller dets esterificerede derivater ved katalytisk reduktiv alkylering som vist i reaktion 7.

Linder anvendelse af den samme katalytiske hydrogeneringsmetode som beskrevet ovenfor til dannelsen af oleandomycinderivat I, og idet der i opløsningsmidlet inkluderes passende mængder n-alkanal med 1-3 carbonatomer, vil hydrogenering af oleandomycinderivat H eller dets esteri-ficerede derivater, in situ danne 8,8a-desoxy-8,8a-dihydro-8a-aminooleandomycin, formel I, eller dets esterificerede derivater, som derpå alkyleres reduktivt med n-alkanalen.

CH2N3 Γ CH2NH2l CH2N(alkyl)2

oleandomycinderivat H oleandomycinderivat J

Efter at det alkylerede derivat er blevet dannet ved denne fremgangsmåde, kan produktet isoleres ved opdeling af remanensen mellem en pufret basisk vandig fase og en organisk fase, hvori produktet er opløseligt. Det renses derpå ved omkrystallisation eller chromatografi, hvor valget vil afhænge af produktets fysiske egenskaber.

0 3 "

Amidderivaterne (R C-), formel L, af 8,8a-desoxy-8,8a-dihydro-8a-aminooleandomycin, formel I, eller dets esteri-ficerede derivater dannes ved at bringe oleandomycinderivat I eller dets esterificerede derivater i kontakt med et amideringsmiddel med formlen: 148281 9 ch3coch, (cvh2v/+1c)20, CvH2v+1CC1, 0 0 0 0 benzoylchlorid, nicotinoylchlorid eller isonicotinoylchlo-rid, hvor v er et helt tal fra 1 til 6.

0 CH2NH2 ch2nhcr3 n f middel 0 i

»· °X^ —” XX

oleandomycinderivat I oleandomycinderivat L

Ved den sædvanlige procedure anvendes fortyndet alkali eller en organisk amin, såsom pyridin, triethylamin eller lutidin, som base i tilfælde af syrechloridmidlerne, for at neutralisere det dannede hydrochlorid. Udvælgelsen af basen vil afhænge af produktets type og det anvendte middel. Desuden kan den organiske amin også fungere som opløsningsmiddel, eller den kan fortyndes med et inert organisk opløsningsmidddel, såsom chloroform, benzen eller methylenchlorid. Både med vand blandbare og med vand ubland-bare opløsningsmidler, såsom tetrahydrofuran eller chloroform, kan anvendes med den fortyndede alkalibase. I tilfælde af anhydrid- og blandet-anhydrid-midlerne kan der med held anvendes et opløsningsmiddel, hvori både oleandomycinderivat I og midlet er opløselige, og en base er ikke nødvendig. Sådanne opløsningsmidler inkluderer methanol, ethanol, ethylacetat, acetone, isopropylalkohol, n-propanol, chloroform, methylenchlorid, tetrahydrofuran, dioxan, dimethoxyethan og methylethylketon. Temperaturområdet for reaktionen inkluderer i alle tilfælde fra is-badtemperatur til det tilbagesvalende opløsningsmiddels temperatur og vil typisk være stuetemperatur. Efter at omsætningen er i hovedsagen fuldført, kan remanensen opdeles mellem en pufret basisk vandig fase og en organisk fase, hvori produktet er opløseligt, typisk chloroform eller ethylacetat. Det resulterende rå isolerede produkt kan der 148281 10 på renses ved chromatografi, lyofilisering, omkrystallisation, højtryksvæskechromatografi eller ekstraktions/ind-dampnings-teknik, hvor valget vil afhænge af produktets fysiske egenskaber.

De ovenfor beskrevne fremgangsmåder giver tilsammen alle de hidtil ukendte produkter med den almene formel A. Ud fra beskrivelsen af disse fremgangsmåder er det klart, at de er indbyrdes forbundne og i nogle tilfælde afhængige af et tidligere dannet produkt, fremstillet ifølge opfindelsen. Den indbyrdes afhængighed er vist i skema A, hvor de hele tal angiver den bestemte reaktion blandt de ovenstående fremgangsmåder.

SKEMA A

Naturligt oleandomycin l1· CH2C1 ch2oh 2. °Λ-

D * C

1,

CH20S02C6H5CH3 ,CH2O

ϋώ * w .

E G

l5· CH2N3 CH2N(alkyl)2 ";ώ- , "ώ.

H > J

I6' o CH2NH2 CtLNHCR3 "•Φ- - "six

L

148281 11

De farmaceutisk acceptable syreadditionssalte af de ved fremgangsmåden ifølge opfindelsen fremstillede oleando-mycin-forbindeiser kan fremstilles ved, at en opløsning af forbindelsen i et egnet opløsningsmiddel, såsom acetone, bringes i kontakt med et støkiometrisk ækvivalent af en uorganisk syre, såsom saltsyre, hydrogenbromidsyre, phosphor-syre eller svovlsyre, en organisk syre udvalgt blandt aspara-ginsyre, citronsyre, vinsyre, gluconsyre, ravsyre og stearinsyre, eller en alkylsvovlsyre, såsom laurylsvovlsyre.

Saltene udfældes efter neutraliseringsreaktionen eller, om nødvendigt, efter delvis inddampning af reaktionsopløsningen. Produktet kan udvindes ved filtrering, centrifugering eller lyofilisering.

De ved fremgangsmåden ifølge opfindelsen fremstillede ole-andomycin-forbindelser er effektive til inhibering af væksten af mikroorganismer, især Gram-positive organismer, dvs. den høje aktivitet over for Gram-positive organismer i almindelighed, som vises af disse forbindelser, kan i nogle henseender kontraheres med den lavere aktivitet, som udvises over for visse særlige virulente og velkendte Gram-negative organismer. Den følgende tabel belyser det antibiotiske spektrum in vitro af de ved fremgangsmåden ifølge opfindelsen fremstillede forbindelser. Prøvningerne blev foretaget efter den metode med "minimal inhiberende koncentration" (MIC), som er beskrevet af Ericsson and Sherris [H.M. Ericsson and J.C. Sherris, Acta. Pathol.

Microbiol. Scand. Suppl., 217JB, 64 (1971]. Til sammenligning er optaget MIC-værdier for den kendte forbindelse triacetyloleandomycin (TAO) med det generiske navn trolean-domycin.

TABEL I

MIC-værdier (yug/ml) for nogle halvsyntetiske oleandomycin-derivater - Cg-modifikationer 148281 12 ΑΧ5’1

h3C.1 . JlcH

H3c“l X'V^^ • τ"CI13l X 2 ο Olf och3 148281 13

CO

ϋ o •ri

CO

ω co

•H

9+OVCMVO°mvoaO ¢-1 0) O (Λ I-H I-H ·Η ΙΛ CM CM 1Λ-ΗΙΝΙ 03

0} O Λ *> Λ *. *. Λ ^ ΛΛί* -P

•P O O O ΑΛ O Ή ° Ό '—I O ° O to ω ό tA -p

Vi Vi Vi ^ ξ ω • Η <13 X p 9-. x ££ o α o α o o o o o o o o tu • O o o o o ° o ° o o o o u-v p E O CM CM CM CM CM CM CM CMCMCMCM 03 «g Λ A A A Λ Λ Λ Λ Λ A .°1 in 1Λ _) , “α c ·η ο. -Ρ ™ c 3 = 1) t ο ο ο ο ο ο ο ο ο ο α χ ε •η ον ο ο ο α ο ο ° οοασο jij § CM CM CM CM CM cm cm cm cm cm cm ιλ ·> ω < Α Λ A Α Λ Λ Λ Α Λ Α ^ - γΗ ΙΛ ΰ ii ΙΛ CI3 Ρ •Η + X Ο |Μ3οοοοο ο ο ο α ο α α ¢(- Ο ΟΊ Ο Ο Ο Ο Ο Ο Ο ΟΟΟΟΙΛ u ^ Ν Ν Ν Ν Ν CM CM CMCMCMCM 03 u£A ΑΛΛ Α A Λ A A £ ω >, "σ Ο* VO VO CM I V0 Ο 00 • q ιΛ ιΛ f-H lA LA ι—ii-ΗΓ*·* ·Η 9r CN r.^^1 r.

ri U Η Η ΙΛ Ο rM Ο «ΝΟίΛΟΟ Ή jjN LA Ο ι—I LA ε in ° cm \ αι to Α 3 .

3 '•njJ

S Ο ω 3 * ΙΛ CM ΙΛ ΙΛ 3 ffl Q in CM ΙΑ Η Ν to •q^ ·. (03 q_<J· CM Ο Ο 10 Ο Ο Ο Ο ΙΛ CM ΡΛ VO ·Η 15 φ < ,—Ι ιΛ Ο .Λ LA Ο Ο CM —I -Ρ ·Η

4-1 Χ| CM CM Ή C

tn ο a +J I

Λ u ο (D ® 2

^ C(— CM

03 E

P .j. ,Λ (Λ CM CM 03 "D

5 ιΛ ΙΛ CM OS CM CM —I .—I .—( C03 . O CM rH ΓΛ ·> ·>·>·*· C > £ O K . ο “ 1A VO Ο ιΛνΟ(Λ(ΛΡΛ 03

0-2 VO ΡΛ Ο O CM O CM °-P

CO g CM 03 in Λ c -u

vn 3 -H

CM CJOOOCOUOCJO -X >

Ε I < I < < < < < < C < I -H

5· -P

ω 2£ I—( ο ϋ Η Ο

CE eC X ‘ <C X X X X XXXXI

•Η Ή c •Ρ -P c 03 ^ ή to 03 cn

>, 0) 03 O C

I O 03 C -H

,—I Q. C -H

I I I C P

i—i >*. Ε E 03 O CM X ΡΛ CO CO S (0 cm i x mucht-i CO ΡΛ ΧΡΛ o ο ο o. > X X X X I o

ο ·η o 0=0 0=0 0=0 cm o o ii ii ii XrHCOE'-' X X XX ΓΛ X <C OOI--HX X X XXXXI- % + X

14 148281

Evnen hos nogle forbindelser, fremstillet ved fremgangsmåden ifølge opfindelsen, til at beskytte over for in vivo infektioner blev bestemt ved subcutan eller oral indgivning til mus inficeret med Staph, aureus 01A005. Under anvendelse af prøvningsproceduren ifølge Retsema [J. A. Retsema et al., Antimicr. Agents and Chemother., £ 975 (1976)7 , blev. det bestemt, at især 8,8a-desoxy-8,8a-dihydro-8a-azido-4"-acetyloleandomycin, 8,8a-desoxy-8,8a-dihydro-8a-hydroxy-2'-acetyloleandomycin, 8,8a-desoxy-8,8a-dihydro-8a-chlor-4"-acetyloleandomycin, 8,8a-desoxy-8,8a-dihydro-8a-(imidazol-l-yl)-4"-acetyloleandomycin og 8,8a-desoxy-8,8a-(N-acetyl)amino-4"-acetyloleandomycin alle gav en beskyttelse over for infektion, som var sammenlignelig med naturligt oleandomycin.

Til effektiv profylaktisk og anti-infektiøs brug in vivo kan de ved fremgangsmåden ifølge opfindelsen fremstillede oleandomycin-forbindelser indgives enten alene eller i kombination med en farmaceutisk acceptabel bærer ad den orale eller parenterale vej.

Det endelige valg af indgivning sve j og dosis foretages af lægen og baseres på den enkelte patients tilstand. Imidlertid ligger den sædvanlige dosering for mennesker i området fra omkring 500 til 2000 mg p.o. pr. dag og fortrinsvis i 1-4 doser. Imidlertid kan.denne dosering, variere noget med det behandlede individs vægt; i almindelighed kan der anvendes fra omkring 10 til omkring 40 mg/kg legemsvægt pr. dag.

De ved fremgangsmåden ifølge opfindelsen fremstillede forbindelser kan kombineres med inerte farmaceutiske excipienter, såsom lactose, mannitol og stivelse, og sammensættes til doseringsformer, såsom tabletter, kapsler og lignende. Til parenteral indgivning kan disse forbindelser sammensættes med et inert, parenteralt acceptabelt medium, såsom vand, saltvand, sesamolie, propylenglycol og lignende. Disse forskellige farmaceutiske doseringsformer sammensættes ved velkendte metoder indenfor farmacien.

De følgende eksempler tjener til nærmere at belyse fremgangsmåden ifølge opfindelsen.

148281 15 8,8a-Desoxy-8,8a-dihydro-8a-hydroxy-2',4"-diacetyloleandomycin EKSEMPEL 1

Til en suspension af 10 g amalgameret aluminium (fremstillet ud 2 fra 6,2 mm aluminiumfolie ved metoden ifølge Ferris, Sanchez and Manusco, Org. Syn. Coll. Vol. V, side 32) i 200 ml 10?(> vandigt tetrahydrofuran ved stuetemperatur, indeholdt i en 1 liters trehalset rundbuet kolbe forsynet med en mekanisk omrører, sattes dråbevis en opløsning af 5,0 g (6,4 mmol) 2’,4"-diacetyloleando-mycin i 50 ml 10% vandigt tetrahydrofuran. Den resulterende suspension blev omrørt ved stuetemperatur i 48 timer, og aluminiumsaltene skilt fra ved filtrering gennem diatoméjord. Filtratet sattes til en blanding af ethylacetat og vand, og den organiske fase blev skilt fra og vasket to gange med vand, en gang med mættet natriumchloridopløsning, tørret over vandfrit natriumsulfat, filtreret og opløsningsmidlet afdampet fra filtratet under formindsket tryk. Det resulterende materiale blev anbragt på en søjle af silicagel og élueret med ethylacetat, hvorved der blev opnået 850 mg af den ovennævnte forbindelse som et hvidt skum. Produktets NMR-spektrum udviste de følgende karakteristiske resonanser: NMR (CDC13) δ ppm: 5,43 (IH) m; 3,40 (3H) s; 2,25 (6H) s; 2,10 (3H) s; 2,06 (3H) s.

EKSEMPEL 2 8,8a-Desoxy-8,8a-dihydro-8a-hydroxy-21-acetyloleandomycin

Ved anvendelse af proceduren fra eksempel 1 blev 2f-acetyloleandomycin omdannet til den ovennævnte forbindelse. Den udviste de følgende karakteristiske resonanser i NMR-spektret: NMR (CDC13) S ppm: 5,46 (IH) m; 3,46 (3H) s; 2,30 (6H) s; 2,08 (3H) s.

EKSEMPEL 3 8,8a-Desoxy-8,8a-dihydro-8a-hydroxyoleandomycin 16 148281

Ved anvendelse af proceduren fra eksempel 1 blev oleandomycin omdannet til den ovennævnte forbindelse. Den havde de følgende karakteristiske resonanser i NMR-spektret: NMR (CDCl^) S ppm: 5,40 (IH) m; 4,95 (IH) m; 4,20 (IH) d; 3,56 (3H) s; 2,23 (6H) s.

EKSEMPEL 4 8,8a-Desoxy-8,8a-dihydro-8a-tosyloxy-21,4"-diacetyloleandomycin

Til en opløsning af p-toluensulfonylchlorid (988 mg?'5,16 mmol) i 3 ml pyridin afkølet til 0 °C sattes 2,0 g (2,58 mmol) 8,8a-desoxy-8,8a-dihydro-8a-hydroxy-2',4"-diacetyloleandomycin fremstillet som beskrevet i eksempel 1 som et fast stof i én portion.

Efter omrøring ved 0 °C i 3 timer blev opløsningen hældt ud i en blanding af ethylacetat og vand, og pH-værdien indstillet til 8,5 med mættet natriumhydrogencarbonatopløsning. Den organiske fase blev skilt fra og vasket successivt med vand, fortyndet saltsyre med pH 3,5, vand, natriumhydrogen-carbonatopløsning med pH 8,5 og mættet natriumchloridopløsning Inddampning af det organiske lag under formindsket tryk gav 2,30 g hvidt skum, som blev chromatograferet på en 15 x 8,5 cm søjle af silicagel. Eluering med ethylacetat og acetone i volumenforholdet 9:1 gav 1,62 g af den ovennævnte forbindelse som et hvidt skum. NMR spektret udviste de følgende karakteristiske resonanser: HMR (CDCl3)£ppm: 7,56 (4H) q; 5,35 (IH) m; 3,35 (3H) s; 2,43 (3H) s; 2,25 (6H) s; 2,10 (3H) s; 2,05 (3H) s.

8,8a-Desoxy-8, 8a-dihydro-8a-tosyloxy-21-acetyloleandomycin 17 EKSEMPEL 5 148281

Ifølge proceduren fra eksempel 4 fremstilledes den ovennævnte forbindelse ud fra 8,8a-desoxy-8,8a-dihydro-8a-hydroxymethyl-2'-acetyloleandomycin fremstillet som beskrevet i eksempel 2.

NMR-spektret udviste de følgende karakteristiske resonanser: NMR (CDCl3)<5ppm: 7,56 (4H); 5,38 (IH) m; 3,43 (3H) s; 2,46 (3H) sj 2,30 (6H) s; 2,05 (3H) s.

EKSEMPEL 6 8,8a-Desoxy-8,8a-dihydro-8a-hydroxy-4"-acetyloleandomycin

En opløsning af 3,43 g (4,4 mmol) 8,8a-desoxy-8,8a-dihydro-8a-hydroxy-21,4"-diacetyloleandomycin fremstillet som beskrevet i eksempel 1 i 50 ml methanol blev omrørt ved stuetemperatur i 20 timer. Afdampning af opløsningsmidlet under formindsket tryk gav den ovennævnte forbindelse som et hvidt skum. NMR-spektret udviste de følgende karakteristiske resonanser: NMR (CDCl^ppm: 5,43 (IH) m; 3,35 (3H) s; 2,28 (6H) s; 2,08 (3H) s.

EKSEMPEL 7 8,8a-Desoxy-8,8a-dihydro-8a-tosyloxyoleandomycin

Ved anvendelse af proceduren fra eksempel 6 blev 8,8a-desoxy-8,8a-dihydro-8a-tosyloxy-2'-acetyloleandomycin omdannet til den ovennævnte forbindelse. Den udviste de følgende karakteristiske NMR-resonanser: NMR (CDClj)4ppm: 7,56 (4H) q; 5,43 (IH) m; 3,40 (3H) s; 2,43 (3H)£ ; 2,31 (6H) s.

EKSEMPEL 8 8,8a-Desoxy-8,8a-dihydro-8a-tosyloxy-4"-acetyloleandomycin 1Λ8281 18

Ved anvendelse af proceduren fra eksempel 6 blev 8,8a-desoxy-8,8a-dihydro-8a-tosyloxy-2',4"-diacetyloleandomycin omdannet til den ovennævnte forbindelse. Den udviste de følgende karakteristiske NMR-resonanser: NMR (CDC13) ppm: 7,56 (4H) q; 5,38 (IH) m; 3,36 (3H) s; 2,43 (3H) s? 2,31 (6H) s; 2,10 (3H) s.

EKSEMPEL 9 8,8a-Desoxy-8,8a-dihydro-8a-azido~4"-acetyloleandomycin

En opløsning af 2,65 g (3 mmol) 8,8a-desoxy-8,8a-dihydro-8a-tosyloxy-4"-acetyloleandomycin i 30 ml dimethylsulfoxid indeholdt i en 200 ml tre-halset rundbundet kolbe forsynet med magnetomrører, termometer og en nitrogenindførsel, blev behandlet med 585 mg (9 mmpl) fast natriumazid i en portion. Kolben blev neddyppet i et.oliebad og opvarmet til 50 °C i 5,5 timer, hvorefter indholdet blev hældt ud i en blanding af is, vand og ethylacetat, og pH-værdien indstillet til 8,5 med natrium-hydrogencarbonat. Den organiske fase blev skilt fra og vasket to gange med lige så store volumener vand, en gang med et lige så stort volumen mættet natriumchloridopløsning, tørret over vandfrit natriumsulfat, filtreret, og opløsningsmidlet afdampet fra filtratet under formindsket tryk, hvorved der blev opnået 2,25 g af den ovennævnte forbindelse som et hvidt skum. Den gav et stærkt bånd i det infrarøde område ved 2095 cm~^ og udviste de følgende karakteristiske NMR-resonanser: NMR (CDCl3)^ppm: 5,46 (IH) m; 5,33 (3H) s; 2,28 (6H) s; 2,10 (3H) s.

EKSEMPEL 10 8,8a-Desoxy-8,8a-dihydro-8a-azidooleandomycin

Ved anvendelse af proceduren fra eksempel 9 blev 8,8a-desoxy-8,8-dihydro-8a-tosyloxyoleandomycin omdannet til den ovennævnte forbin- 14828 1 19 delse. Dens infrarøde spektrum viste et stærkt bånd ved 2100 cm-·*·, og dens NMR-spektrum havde de følgende karakteristiske resonanser: NMR (CDC13) Λppm: 5,11 (IH) m; 3,45 (3H) s; 2,30 (6H) s.

EKSEMPEL 11 8,8a-Desoxy-8,8a-dihydro-8a-amino-4'l-acetyloleandomycin

Til en opløsning af 9,34 g (12,3 mmol) 8,8a-desoxy-8,8a-dihydro-8a-azido-4"-acetyloleandomycin i 200 ml methanol sattes 9,0 g 10% palladium på kul, og blandingen blev hydrogeneret på et rystehydro-generingsapparat i en time. Efter fjernelse af katalysatoren fra reaktionsopløsningen ved filtrering igennem diatoméjord og afdampning af opløsningsmidlet fra filtratet under formindsket tryk blev remanensen chromatograferet på en 80 x 4,5 cm søjle af MSep-hadexS'LH-20" (Pharmacia Fine Chemicals, Piscataway, N.J.) ved eluering med tetrahydrofuran, hvorved der blev opnået 7,6 g af den ovennævnte forbindelse som et hvidt skum. Den udviste de følgende karakteristiske NMR-resonanser: NMR (CDC13) 4ppm: 5,30 (IH) m; 3,36 (3H) s; 2,30 (6H) s; 2,10 (3H) s.

EKSEMPEL 12 8,8a-Desoxy-8,8a-dihydro-8a-aminooleandomycin

Ved anvendelse af proceduren fra eks. 11 blev 8,8a-desoxy-8,8a-dihydro-8a-azidooleandomycin omdannet til den ovennævnte forbindelse. Den udviste det følgende karakteristiske NMR-delspektrum: NMR (CDC13)£ ppm: 5,13 (IH) m, 3,38 (3H) s; 2,26 (6H) s.

EKSEMPEL 13 8,8a-Desoxy-8,8a-dihydro-8a-chlor-4"-acetyloleandomycin

En opløsning af 2,5 g (3,23 mmol) 8,8a-desoxy-8,8a-dihydro-8a-hydroxy-2',4"-diacetyloleandomycin i 8 ml dimethylformamid, indeholdt i en 50 ml trehalset rundbundet'kolbe forsynet med magnetomrører, termometer og nitrogenindførsel, blev afkølet til 0 °C og behand- 20 148281 let med 861 mg (6,46 mmol) n-chlorsuccinimid. Efter omrøring ved 0°C i ti minutter blev opløsningen afkølet til -10°C, og der tilsattes 1,69 g (6,46 mmol) triphenylphosphin som et fast stof i små portioner i løbet af 30 minutter, medens opløsningens temperatur holdtes mellem -10 og 0°C. Efter at tilsætningen var fuldført, fik reaktionsblandingen lov at opvarmes til stuetemperatur, og omrøringen fortsattes i 30 minutter. Blandingen blev derpå hældt ud i en tofase-blanding af ethylacetat og vand, pH-værdien indstillet til 8,5, og den organiske fase blev vasket med vand og mættet natriumchloridopløsning. Den organiske fase blev tørret over vandfrit natriumsulfat, filtreret til fjernelse af tørringsmidlet, og opløsningsmidlet afdampet fra filtratet under formindsket tryk, hvorved der blev opnået 2,6 g af et hvidt fast stof.

Dette materiale blev optaget i 50 ml methanol og omrørt ved stuetemperatur i tyve timer. Opløsningsmidlet blev afdampet fra denne reaktionsopløsning under formindsket tryk, og remanensen blev chro-matograferet på "SephadexP'LH-20" (Pharmacia Pine Chemicals, Pis-cataway, N.J.) med methanol som elueringsmiddel, hvorved der blev opnået 1,24 g af den ovennævnte forbindelse som et hvidt skum.

Den viste de følgende karakteristiske NMR-resonanser: mm. (CDC13) ^ppm: 5,43 (IH) m; 3,33 (3H) s; 2,28 (6H) s; 2,06 (3H) s.

EKSEMPEL 14 8,8a-Desoxy-8,8a-dihydro-8a-dimethylamino-4ll-acetyloleandomycin

Til en opløsning af 1,51 g (2,0 mmol) 8,8a-desoxy-8,8-dihydro-8a-azido-4"-acetyloleandomycin i 30 ml methanol sattes 1,5 ml af en 37% vandig opløsning af formaldehyd (~ 20 mmol formaldehyd) og 1,5 g 10% palladium på kul, og blandingen blev hydrogeneret på et rys-tehydrogeneringsapparat ved 345 kPa natten over. Efter fjernelse af katalysatoren fra reaktionsopslæmningen ved filtrering gennem diatomejord og afdampning af opløsningsmidlet fra filtratet under formindsket tryk blev remanensen krystalliseret fra ethylacetat og derpå omkrystalliseret fra isopropylalkohol, hvorved der blev opnået 800 mg af den ovennævnte forbindelse, smp. 180,5-182°C. Den viste de følgende karakteristiske NMR-resonanser: NMR (CDC15) ^ppm: 5,53 (IH) m,· 3,38 (3H) s; 2,31 (6H) s; 2,20 (6H) s; 1,26 (3H) s.

8,8a-Desoxy-8,8a-dihydro-8a-(N-benzoyl)amino-4"-acetyloleandomycin EKSEMPEL 15 148281 21

Til en opløsning af 500 mg (0,685 mmol) 8,8a-desoxy-8,8a-dihydro-8a-amino-4"-acetyloleandomycin i 100 ml 25 volumenpct. vandigt tetra-hydrofuran sattes 1 N vandig natriumhydroxidopløsning til indstilling af pH-værdien til 9. Til denne basiske opløsning sattes derpå dråbevis en opløsning af 140 mg (1,71 mmol) benzoylchlorid i 30 ml tørt tetrahydrofuran, og opløsningen blev omrørt, indtil reaktionen var i det væsentlige fuldført ifølge forskellen i Rf mellem produkt- og udgangsmaterialepletterne ved tyndtlagschroma-tografi. Tetrahydrofuranet blev derefter fjernet i vakuum, og det resulterende vandige lag blev dækket med 100 ml ethylacetat, medens det vandige lag holdtes ved pH 9. Efter ekstraktion af det vandige lag med 2 x 50 ml portioner af ethylacetatet blev de organiske lag kombineret, tørret over magnesiumsulfat og filtreret til fjernelse af tørringsmidlet. Fjernelse af opløsningsmiddel fra filtratet ved vakuuminddampning gav en remanens, som blev chromatograferet på en 25 g søjle af silicagel pakket i chloroform. Eluering med chloroform og derpå med 2% methanol i chloroform efterfulgt af fjernelse af opløsningsmidlet fra produktfraktionerne tillod isolering af 270 mg af den ovennævnte forbindelse.

Den udviste de følgende karakteristiske NMR-resonanser: NMR (CDCl3)^ppm: 7,50 (5H) m; 6,90 (IH) m; 5,28 (IH) m; 3,36 (3H) s; 2,30 (6H) s; 2,16 (3H) s.

EKSEMPEL 16 8,8a-Desoxy-8,8a-dihydro-8a-(N-nicotinoyl)amino-4"-acetyloleando-mycin ______________

Den ovennævnte forbindelse blev fremstillet ifølge proceduren fra eksempel 15 ved anvendelse af nicotinoylchlorid i stedet for benzoylchlorid.

NMR (delspektrum)S ppm (CDC13): 68,10(IH)m; S 7,26(3H:m; S 5,08(IH)m; <£3,36(3H)s; $2,30(6H)s$ $2,10(3H)s.

8,8a-Desoxy-8,8a-dihydro-8a-(N-acetyl)amino-4"-acetyloleandomycin EKSEMPEL 17 148281 22

Til en opløsning af 500 mg (0f685 mmol) 8,8a-desoxy-8,8a-dihydro-8a-amino-4"-acetyloleandomycin i 5 ml methanol sattes dråbevis 75 mg (0,75 nmol) eddikesyreanhydrid i 0,5 ml methanol. Efter omrøring i 30 minutter udvikledes et tyndtlagschromatogram af en prøve af udgangs-oleandomycinen og reaktionsopløsningen, og viste at der ikke var noget resterende udgangs-oleandomycin. Derpå sattes 20 ml vand og 50 ml ethylacetat til reaktionsopløsningen, medens den vandige fases pH-værdi blev indstillet 9. Den vandige fase blev ekstraheret med 2 x 30 ml ethylacetat, og de kombinerede organiske lag blev tørret over magnesiumsulfat. Fjernelse af tørringsmidlet ved sugefiltrering efterfulgt af fjernelse af opløsningsmidlet fra filtratet i vakuum gav en remanens, som blev chromatograferet på en 40 x 3,5 cm søjle af silicagel. Eluering med chloroform og 2% methanol i chloroform tillod udskillelse og rensning af 340 mg af den ovennævnte forbindelse. Den havde de følgende karakteristiske NMR-resonanser: NMR (GDC13) <£ppm: 6,15 (IH) m; 5,33 (IH) m; 3,36 (IH) s; 2,28 (6H) s; 2,10 (3H) s; 1,90 (3H) s.

EKSEMPEL 18 8,8a-Desoxy-8,8a-dihydro-8a- (N-formyl)amlno-411-acetyloleandomycin

Ved anvendelse af proceduren fra eksempel 17 blev 8,8a-desoxy-8,8a-dihydro-8a-amino-4"-acetyloleandomycin formyleret ved anvendelse af en passende mængde eddikesyre-myresyre-anhydrid i stedet for eddikesyreanhydrid til dannelse af den ovennævnte forbindelse.

Den havde de følgende karakteristiske NMR-resonanser: NMR (DCClj) 5PPm: 8,08 (IH) m; 6,96 (IH) s; 5,30 (IH) m; 3,38 (3H) s; 2,30 (6H) s; 2,11 (3H) s.

EKSEMPEL 19 8,8a-Desoxy-8,8a-dihydro-8a-(imidazol-l-yl)-4"-acetyloleandomycin 148281 23

Til en opløsning af 2,5 g (2,8 iranol) 8,8a-desoxy-8,8a-dihydro-8a-tosyloxy-4"-acetyloleandomycin i 25 ml dimethylsulfoxid sattes 1,906 g (28 mmol) imidazol som et fast stof. Opløsningen blev opvarmet til 50°C og omrørt i 65 timer. Efter afkøling blev reaktionsopløsningen hældt ud i en tofase-blanding af 50 ml vand og 100 ml ethylacetat, medens pH-værdien blev indstillet til 9,5· Det organiske lag blev vasket med to portioner på hver 25 ml vand og en portion på 25 ml mættet saltvand. Det organiske lag blev tørret over magnesiumsulfat, filtreret for at fjerne tørringsmidlet, og opløsningsmidlet fjernet fra filtratet i vakuum. Remanensen blev chromatograferet på en 50 g søjle af silicagel pakket i chloroform. Eluering med chloroform og 5% methanol i chloroform tillod udskillelse og rensning af 1,0 g af den ovennævnte forbindelse. Den havde de følgende karakteristiske resonanser i NMR-spektret: NMR (CDC13) S ppm: 7,55 (IH) s; 7,00 (2H) bs; 5,46 (IH) m; 3,40 (3H) s; 2,33 (6H) s; 2,13 (3H) s.

Claims (3)

148281 Patentkrav : Analogifremgangsmåde til fremstilling af 8a-substituerede 8,8 a-desoxy-8,8a-dihydropleandomycin-forbindelser med den almene strukturformel ?H2Z f(CK3>2 OyA. H.cT 1,CH3 I I HDv< II — H cA^ J-CH3 3.h3c‘| JT’'-ο· ^ 0^. ch3 I “3 ψ*»* OCH3 hvori 1

2 R og R hver for sig betyder hydrogen eller acetyl, og Z betyder hydroxy, toluensulfonyloxy, chlor, amino, dialkylamino med 1-3 carbonatomer i hver alkyldel, azido, imidazol-l-yl eller NHCOR3, hvor

3 R betyder hydrogen, alkyl med 1-6 carbonatomer, phenyl eller pyridyl, eller farmaceutisk acceptable syreadditionssalte deraf, kendetegnet ved, at oleandomycin eller et acetylderivat deraf, hvori en af eller begge hydroxygrupperne i stillingerne 2’ og 4" er acetyleret, omsættes med et metalamalgam til dannelse af en forbindelse med formlen 143281 QH OH f(CV2 °v^N *VS H„cJ l,ra3 I I HO γ> c HCX XcH 3 3 h3c] CH3 I CH3 ΙγΧ«2 0CH3 hvori 1 2 R og R har den ovenstående betydning, hvorpå forbindelsen C, om ønsket, sulfoneres ved omsætning med toluensulfonylchlorid til omdannelse af OH-gruppen i 8a-stillingen til en toluensulfonyloxygruppe, eller forbindelsen C, om ønsket, omsættes med N-chlorsuccinimid og triphenylphosphin til omdannelse af OH-gruppen i 8a-stil-lingen til en chlorsubstituent. eller forbindelsen C, om ønsket, oxideres til omdannelse af -CH2OH i 8-stillingen til -CHO, og aldehydgruppen derpå reduceres katalytisk med hydrogen i nærvær af ammoniak til dannelse af den tilsvarende forbindelse med formlen A, hvori Z er ΝΗ3, og, om ønsket, en dannet forbindelse med formlen A, hvori R1 er acetyl, omdannes til den tilsvarende forbindelse med formlen A, hvori R' er hydrogen, og, om ønsket, en dannet forbindelse med formlen A, hvori Z er toluensulfonyloxy, omsættes med et alkalimetal- eller jord-alkalimetalazid eller med en imidazol til dannelse af en tilsvarende forbindelse med formlen A, hvori Z er azido eller imidazol-l-yl,