DK145665B - Analogifremgangsmaade til fremstilling af et peptid eller funktionelle derivater heraf - Google Patents

Description

(19) DANMARK (%¾)

(12) FREMLÆGGELSESSKRIFT (ii) 145665 B

DIREKTORATET FOR PATENT- OG VAREMÆRKEVÆSENET

(21) Ansøgning nr. 1716/75 (51) Int.CI.3 C 07 C 103/52 (22) Indleveringsdag 29· mar. 1973 (24) Løbedag 29 · mar. 1973 (41) Aim. tilgængelig 1. okt. 1973 (44) Fremlagt 17· jan. 1983 (86) International ansøgning nr. - (86) International indleveringsdag (85) Videreførelsesdag - (62) Stamansøgning nr. -

(30) Prioritet 31 . mar. 1972, 7204422, NL

(71) Ansøger AKZO N.V., Arnhem, NL.

(72) Opfinder Hendrik Marie Greven, NL.

(74) Fuldmægtig Firmaet Chas. Hude.

(54) Analogifremgangsmåde til frem= stilling af et peptid eller funktionelle derivater heraf.

Den foreliggende opfindelse angår en analogifremgangsmåde til fremstilling af et hidtil ukendt peptid af den almene formel A-L-Glu(X)-L-His-L-Phe-D-Lys(eller D-Arg)-Y χ hvori A betegner H-L-Met, H-D-Met, H-L-Met(O), H-D-Met(O), 3 H-L-Met (02) / H-D-Met (Oj) # des-amino-Met, des-amino-Met (O) , ) des-amino-Met(O2) eller gruppen HjN-B-CO-, hvori B er en ^ ligekædet eller forgrenet alkylengruppe med henholdsvis 1-6 ) og 2-6 carbonatomer, X betegner gruppen -OH eller -NH0, og l Y betegner gruppen hydroxy, -L-Trp-OH, -L-Phe-OH, , -L-Trp-Gly-OH, -L-Phe-Gly-OH, en (N-phenylalkyl)-aminogruppe ) af formlen 2 145665 -NH-Alk —^ eller en (Ν-β-indolylalkyl)-aminogruppe, hvori Alk betegner en ligekædet eller forgrenet alkylengruppe med henholdsvis 1-6 og 2--6 carbonatomer,R betegner hydrogen, halogen, hydroxy, eller en alkyl- eller alkoxygruppe med 1-4 carbonatomer, eller funktionelle derivater deraf i form af farmaceutisk acceptable syreadditionssalte, eller N-acylderivater afledt af en alifatisk carboxylsyre med 1-6 carbonatomer, eller usubstituerede amider eller C^-Cg-alkylsubstituerede amider, eller estere afledt af alifatiske eller aralifatiske alkoholer med 1-18 carbonatomer, eller metalkomplekser af de ovennævnte peptider med et tungt opløseligt salt, hydroxid eller oxid af et metal.

Era European Journal of Pharmacology 2, 14 (1967) er det kendt, at visse peptidfragmenter af de naturlige adrenocorticotrope hormoner (ATCH) hæmmer ophævelsen af den betingede afværgereaktion. Peptidet med aminosyresequensen eller aminosyrerækken 1-10 i ACIH har specielt vist sig, at være virksom i denne henseende. Det viste sig yderligere, at de første tre aminosyrer (Ser-Tyr-Ser) endog kunne udelades fuldstændig uden større aktivitetstab. Artiklen ender med den konklusion, at peptidet med aminosyresequensen 4-10 i ACTH, nemlig H-Met-Glu-His-Phe-Arg-Trp-Gly-OH, er det korteste peptid, og måske nøglesequensen for nævnte aktivitet.

Peptidet med aminosyresequensen 4-10 i ACTH udøver imidlertid ikke blot den psykofarmakologiske egenskab, der er nævnt ovenfor, men også en svag MSH-aktivitet, som sædvanlig i denne type af ACTH-fragmenter. Selv om virkningen af en lav dosering af et MSH-virksomt peptid til mennesker stadig er ukendt, blev der forsket for at finde frem til peptider med mindst den samme psykofarmakologiske virkning, men uden nogen eller i det mindste med reduceret MSH-aktivitet.

3

1456 δ B

I ansøgernes danske patentansøgning nr. 953/73 er det allerede angivet, at N-terminalaminosyren Ι-Met i det oprindelige 4-10 ACTH-pep-tid uden aktivitetstab kan erstattes med D-Met, L- eller D-Met(£ 0),..

I- eller D-Met (-¾ 02), desamino-Met, desamino-Met (-> O), desamino-Met (-> 02) eller gruppen: HgN-B-CO, hvori B betegner: en forgrenet eller uforgrenet alkylengruppe med 1-6 carbonatomer, såsom glycyl, valyl, alanyl, β-alanyl eller a-methylalanyl.

Yderligere beskrives i ansøgernes danske patentansøgning nr. 958/73, at en erstatning af C-terminalpeptidradikalet -I-Trp-Gly-OH i det oprindelige 4-10 ACIH-peptid med en gruppe valgt blandt L-Phe-OH,

I-Phe-Gly-OH og gruppen _^ R

-NH-Alk-^ (N-phenylalkylaminodel) forårsager en betydelig forøgelse af den psykofarmakologiske virkning.

Det har nu overraskende vist sig, at der opnås en yderligere forøgelse af den psykofarmakologiske virkning ved erstatning af aminosyren I-arginin eller L-lysin i det oprindelige 4-10 ACIH-peptid eller ethvert af de modificerede peptider, som er beskrevet i de ovennævnte tidligere indleverede danske patentansøgninger,med den tilsvarende D-aminosyre.

Ved at erstatte aminosyreradikalet L-Arg eller 1-lys i det oprindelige 4-10 ACTH-peptid med det tilsvarende D-Arg- eller D-Iiys-amino= syreradikal stiger den observerede psykofarmakologiske aktivitet almindeligvis med en faktor 10.

Denne modifikation (l-lys eller Ι-Arg mod D-Lys eller D-Arg) inkorporeret i peptiderne, som er angivet i de før nævnte patentansøgninger, forårsager en yderligere aktivitetsforøgelse.

Specielt foretrækkes peptider i overensstemmelse med den almene formel I, hvori I betegner L-Phe-OH, 1-Phe-Gly-OH, en (N-p-indolylal= kyl)-amino- eller (N-phenylalkyl)-aminogruppe, som tidligere defineret, og A kan have de før nævnte betydninger, men bør fortrinsvis betegne L-Met, l-Met(-*0), I-Met(-+02), desamino-Met, desamino-Met(-*0), desamino-Met(-^02) eller β-Ala.

. 145665 4

Specielt de følgende peptider viste sig at have en meget høj psyko-farmakologisk aktivitet: H-l-Met-l-Glu-I-His-Ii-Phe-D-Arg (eller D-lys)-I-Phe-OH, og det tilsvarende sulfoxid eller den tilsvarende sulfon, H-L-Met-L-Glu-I-His-Ii-Phe-D-Arg (eller D-lys)-I-Phe-Gly-OH, og det tilsvarende sulfoxid eller den tilsvarende sulfon, H-I-Met-L-Glu-I-His-L-Phe-D-Arg (eller D-Lys)-Ira (Tra = tryptamid) og sulfoxidet eller sulfonen, desamino-Met-Ir-Glu-l-His-L-Phe-D-Arg (eller D-Iys)-L-Phe-OH, eller det tilsvarende sulfoxid eller den tilsvarende sulfon, Η-β-Ala-L-Glu-Ii-His-Ii-Phe-D-Arg (eller D-lys)-L-Phe-OH, desamino-Met-l-Glu-l-His-Ii-Phe-D-lys (eller D-Arg)-Ira eller det tilsvarende sulfoxid eller den tilsvarende sulfon.

Udfra syntetisk-kemiske overvejelser .foretrækkes D-Lys-peptideme fremstillet ifølge den foreliggende opfindelse i forhold til de tilsvarende D-Arg-peptider. De lysinholdige peptider synthetiseres i almindelighed lettere end de argininholdige peptider.

Fremgangsmåden ifølge opfindelsen til fremstilling af de omhandlede hidtil ukendte forbindelser er ejendommelig ved det i kravets kendetegnende del anførte. Fremgangsmåderne, som almindeligvis anvendes til fremstilling af de omhandlede forbindelser, kan resumeres på følgende måde: a) kondensation af en forbindelse (aminosyre, peptid) med en fri carboxylgruppe og andre beskyttede reaktive grupper med en forbindelse (aminosyre, peptid eller amin) med en fri aminogruppe og andre beskyttede reaktive grupper i nærværelse af et kondensationsmiddel, b) kondensation af en forbindelse (aminosyre, peptid) med en aktiveret carboxylgruppe og eventuelt andre beskyttede reaktive grupper med en forbindelse (aminosyre, peptid, amin) med en fri NH2-SruPPe og eventuelt andre beskyttede reaktive grupper, 5 145665 c) kondensation af en forbindelse (aminosyre, peptid) med en fri carboxylgruppe og eventuelt andre beskyttede reaktive grupper med en forbindelse (aminosyre, peptid, amin) med en aktiveret aminogrup-pe og eventuelt andre beskyttede reaktive grupper, hvorefter beskyttelsesgrupperne fjernes om nødvendigt.

Aktiveringen af carboxylgruppen kan f.eks. gennemføres ved at omdanne carboxylgruppen til et syrehalogenid, et azid, anhydrid, imida= zolid, eller en aktiveret ester, såsom N-hydroxysuccinimidesteren eller p-nitrophenylesteren.

Aminogruppen kan aktiveres ved at den omdannes til et phosphitamid eller ved hjælp af "phosphor-azo"-metoden.

Fremgangsmåder, som sædvanligvis anvendes til de ovennævnte kondensationsreaktioner er: carbodiimidmetoden, azidmetoden, den blandede anhydridmetode og den i "Ihe Peptides" bind I, 1965 (Acad. Press) af E. Schroder og K. I/ubke beskrevne aktiverede estermetode. Yderligere kan Merrifields såkaldte fast-fase-metode, der er beskrevet i J.Am.Chem.Soc. 85, 2149 (1963)»anvendes til fremstillingen af de foreliggende peptider og peptidderivater.

De reaktive grupper, som ikke får lov til at deltage i kondensationsreaktionen, beskyttes effektivt ved hjælp af de såkaldte beskyttelsesgrupper, der let kan fjernes igen, f.eks. ved hydrolyse eller reduktion. En carboxylgruppe kan således beskyttes effektivt ved forestring med methanol, ethanol, tertiær butanol, benzylalkohol eller p-nitrobenzylalkohol, eller ved omdannelse til et amid. Denne sidstnævnte beskyttelsesgruppe er det imidlertid meget vanskeligt at fjerne, således at det anbefales kun at anvende denne gruppe til beskyttelse af carboxylgruppen i C-terminalaminosyren i det sidste peptid eller γ-carboxylgruppen i glutaminsyre. I dette tilfælde fører peptidsyntesen direkte til amidet af et peptid i overensstemmelse med formlen I.

Grupper, som er i stand til at beskytte en aminogruppe effektivt, er sædvanligvis syregrupper, f.eks. en syregruppe afledt af en ali-fatisk, aromatisk, aralifatisk eller heterocyclisk carboxylsyre, så- 145665 6 som eddikesyre, benzoesyre eller pyridinearboxylsyre eller en syregruppe afledt af en carbonsyre såsom gruppen ethoxycarbonyl, ben= zyloxycarbonyl, t-butyloxyearbonyl eller p-methyloxybenzyloxycarbo= nyl eller en syregruppe afledt af en sulfonsyre, såsom gruppen ben= zensulfonyl eller p-toluensulfonyl, men der kan også anvendes andre grupper, såsom substituerede eller usubstituerede aryl- eller aral= kylgrupper f.eks. benzyl og triphenylmethyl eller sådanne grupper, som ortho-nitrophenylsulfenyl og 2-benzoyl-l-methylvinyl.

For det meste kan det også anbefales, at beskytte arginins guani= dingruppe, lysins e-aminogruppe og histidins imidazolgruppe, men denne beskyttelse er ikke absolut nødvendig. Almindelige beskyttelsesgrupper i denne forbindelse er en tertiær butyloxyearbonylgruppe eller en tosylgruppe for lysins e-aminogruppe, en nitrogruppe for arginins guanidingruppe og en benzylgruppe, en dinitrophenylgruppe eller en tritylgruppe for histidins imidazolgruppe.

Beskyttelsesgrupperne kan afspaltes ved hjælp af forskellige sædvanlige metoder, afhaaigig af arten af den foreliggende gruppe, f.eks. ved hjælp af trifluoreddikesyre eller ved mild reduktion f.eks. med hydrogen og en katalysator såsom palladium eller med HBr i iseddi= kesyre.

De ifølge den foreliggende opfindelse fremstillede peptider, der som N-terminalgruppen har en methionylsulfoxid- eller desaminomethionyl= sulfoxidgruppe, kan fremstilles udfra det tilsvarende Met- eller desamino-Met-peptid ved hjælp af en i og for sig kendt mild oxidation, f.eks. med fortyndet hydrogenperoxid eller en persyre. En sådan oxidation giver en blanding af S- og R-sulfoxidet (= d- eller 1-sulfoxid), hvilken blanding kan separeres i de særskilte diaste-reomere forbindelser på sædvanlige måde.

Ted kobling af S- eller R-sulfoxidet (= d- eller 1-sulfoxid) af methionin eller desaminomethionin med peptidet H-Glu(X)-His-Phe-D-Arg(eller D-Lys)-Y, hvori X og Y har de ovenfor anførte betydninger, kan de særskilte enantiomere også fås ad direkte vej.

Ifølge opfindelsen frenstillede peptider, der som N-terminalgruppen har en me= thionylsulfon- (Met402) eller desaminomethionylsulfongruppe (des= amino-Met-»02) kan mest hensigtsmæssigt fremstilles ved hjælp af en i og for sig kendt oxidation af det tilsvarende Met- eller desamino-

Met-peptid, f.eks. med #2^2 eller en persyre.

7 U5655

Med funktionelle derivater af peptiderne og peptidderivaterne, jder kan fremstilles ifølge opfindelsen, menes: 1. De farmaceutisk acceptable syreadditionssalte af peptiderne og peptidderivaterne, 2. peptider og peptidderivater, hvori én eller flere frie amino= grupper er blevet acyleret med en acylgruppe afledt af en alifatisk carboxylsyre med 1-6 carbonatomer, såsom en acetyl= gruppe, 3. usubstituerede amider eller med lavere alkyl (1-6 C) substituerede amider af de peptider og peptidderivater fremstillet ifølge opfindelsen, som har en fri carboxylgruppe, såsom en N(CH3)2-eller N(C2H5l2-rgruppe.

4. estere af de foreliggende peptider afledt af alifatiske eller aralifatiske alkoholer med 1-18 carbonatomer, specielt de lavere alifatiske (1-6 C) alkoholer, såsom methanol, ethanol, bu= tanol, pentanol eller cyclohexanol og de lavere aralifatiske (7-10 C) alkoholer, såsom benzylalkohol, phenylethylalkohol, phenylpropylalkohol eller cinnamylalkohol, 5. metalkomplekser dannet ved at bringe peptiderne af peptidderivaterne i kontakt med et tungt opløseligt salt, hydroxid eller oxid af et metal, fortrinsvis zink.

Syreadditionssaltene opnås ved at omsætte de foreliggende forbindelser med en farmaceutisk acceptabel, organisk eller uorganisk syre såsom HC1, phosphorsyre, eddikesyre, maleinsyre, vinsyre eller ci= tronsyre.

Som allerede kort fortalt har de foreliggende peptider og peptidde= rivater såvel som deres funktionelle derivater, der er defineret ovenfor, værdifulde psykofarmakologiske virkninger. De foreliggende forbindelser hæmmer ophævelsen af den betingede afværgereaktion, g 145S65 dette betyder, at de i almindelighed kan anvendes som antidepressions-midler. Mere specielt kan de anvendes til behandling af bestemte mentale forstyrrelser, hvorved en stimulering af den mentale optræden ønskes, såsom ved visse neurosetyper og ved alderdomsskrøbeligheder (senilitet).

De ifølge opfindelsen fremstillede forbindelser kan administreres parenteralt, oralt, sublingualt, rektalt eller intranasalt. Peptiderne tilberedes fortrinsvis til en form, som er velegnet til parenteral administration til hvilket formål de opløses, suspenderes eller emulgeres i en egnet væske. Blandet med egnede hjælpestoffer og/eller fyldstoffer kan peptiderne imidlertid også tilberedes i en form, som er velegnet til oral, sublingual, rektal eller intranasal administration.

De omhandlede peptider eller peptidderivater administreres fortrinsvis parenteralt i en daglig dosis fra 0,01 ug til 50 yg per kg legemsvægt, afhængig af peptidets aktivitetsniveau. Til oral, sublingual, rektal eller intranasal administration kan den daglige dosis være betydelig højere, fortrinsvis fra 0,1 mg til 50 mg per kg legemsvægt.

Metalkomplekser kan opnås ved at bringe peptiderne i kontakt med tungtopløselige metalsalte, metalhydroxider eller metaloxider. Som tungtopløselige metalsalte anvendes almindeligvis metalphosphaterne, metalpyrophos= phaterne og metalpolyphosphaterne.

Metaller, som kan anvendes ved denne fremgangsmåde, er metallerne, som hører til B-grupperne i det periodiske system, f.eks. cobolt, nikkel, kobber, jern og fortrinsvis zink, såvel som metallerne som hører til hovedgrupperne i det periodiske system, og er i stand til at danne komplekser såsom magnium og aluminium. Tilberedningen af de nævnte metalkomplekser finder sted på den sædvanlige måde.

Således kan et metalkompleks f.eks. fås ved at tilsætte peptidet og et tungtopløseligt metalsalt, metalhydroxid eller metaloxid til et vandigt medium. Metalkomplekset kan også fås ved at tilsætte et al= kalisk medium til en vandig opløsning af peptidet og et uopløseligt metalsalt til dannelse af det uopløselige peptid-/metalhydroxid-kompleks.

9 145666

Metalkomplekset kan yderligere fås ved at tilsætte peptldet et opløseligt metalsalt og et opløseligt salt til et vandigt, fortrinsvis alkalisk medium, til dannelse af et uopløseligt peptid-/metalsalt-kompleks in situ.

Metalkomplekserne kan anvendes straks som suspensioner, eller f.eks. lyophiliseres og derefter suspenderes igen.

Biologisk aktivitet: Ophævelse af den betingede afværgereaktion.

Hvide hanrotter, der hver vejer ca. 150 g, blev konditioneret ved hjælp af den såkaldte stangspringeprøve. Det betingede stimulus var et lys, der fandtes over buret i 5 sek., hvorpå det ikke-betingede chokstimulus blev leveret gennem burets gittergulv, I tre efter hinanden følgende dage blev der gennemført 10 prøver hver dag med et gennemsnitlig interval på 60 sek. Dagen efter denne tilegnelsesperiode blev ekstinktionen (ophævelsen) studeret i sessioner på 10 prøver. Alle dyrene, som havde 8 eller flere positive reaktioner i den første ekstinktionssession,blev behandlet med stoffet, som skal afprøves eller med placebo. Herefter blev ekstinktionssessioner på hver 10 prøver gennemført 2 og 4 timer efter behandlingen af dyrene med stoffet, som skal afprøves.

I den følgende tabel sammenlignes resultaterne med det kendte pep= tid 4-10 ACTH med nogle peptider fremstillet ifølge denne opfindelse.

10 145665

Peptid *) Dosis i Første Anden Tredie Styr- ·

Ug per sessi- sessi- sessi- kefor- dyr sub- on 0 on e£- on e£- hold cutant timer ter 2 ter 4 sammentimer timer lignet med 4- ____10Æ3H- H-Met-Glu-His-Phe-Arg-Trp-Gly- 100 887 OH (4-10 ACIH) 30 9 7 5 __________10_______9______6______3______1___ H-Met-Glu-His-Phe-D-Iys-OH 10 9 8 6 3 9 7 4 >3 H-Met-Glu-His-Phe-D-Arg- OH 10 9 7 6 3 9 6 4 >3 H-Met-Glu-His-Phe-D-lys-Trp-OH 10 10 9 9 3 9 7 7 >10 H-Met-Glu-His-Phe-D-Iys-Phe-OH 0,3 8 8 9 0,1 9 8 5 300 H-Met-Glu-His-Phe-D-Iys-Tra 0,3 9 9 8 0,1 9 8 7 500 H-Met-Glu-His-Phe-D-lys-Phe-Gly-OH 0,3 9 8 8 0,1 9 8 4 300 H-Met (->0) -Glu-His-Phe-D-Lys-Phe-OH 0,03 9 8 8 0,01 9 7 5 >1000 Η- β - Ala-Glu-His-Phe-D-Ity s-Phe-OH 0,3 8 9 8 0,1 9 8 7 500 H-Met-Glu-His-Phe-D-Iys-L-Ami 1 997 0,3 9 8 4 100 H-Met (-*09) -Glu-His-Phe-D-lys-Phe- 0,1 10 9 7 OH ^ 0,03 9 7 4 1000 desamino-Met-Glu-His-Phe-D-Iys-Phe- 0,1 8 8 8 OH 0,03 10 10 7 0,01 9 6 2 1000 desamino-Met(-»0?)-Glu-His-Phe-D- 0,03 9 9 8 lys-Phe-OH 0,01 9 7 5 0,003 8 6 3 >1000 *iled hensyn til de forskellige forkortelser, som anvendes i denne beskrivelse, skal følgende bemærkes: I Hvis der ikke er blevet angivet nogen optisk konfiguration, menes 1-formen.

li 145665 II De følgende forkortelser er blevet anvendt for de beskyttende eller aktiverende grupper: Z = benzyloxycarbonyl

Boc = tertiær butyloxycarbonyl tBu = tertiær butyl

Me = methyl ONP = p-nitrophenyloxy

Su = succinimido III Bor opløsningsmidlerne eller reagenserne er blevet anvendt følgende forkortelser:

Bz = benzen lo = toluen

EtOH = ethanol

Bu = butanol

Py = pyridin

Ac eller HAc = eddikesyre

Bo = myresyre

Am = amylalkohol iPro = isopropanol DMB = dimethylformamid THE = tetrahydrofuran DCCI = dicyclohexylcarbodiimid DCHU = dicyclohexylurinstof IAA = triethylamin TEA = trifluoreddikesyre

Wa = vand IV Bor aminosyren er der blevet anvendt følgende forkortelser:

Met = methiony1 12 U5666

Met(*0) = methi onyIsulf oxid (racemisk)

Met(d, ->0) = methionyl(d) sulf oxid

Met(l,-»0) = methionyl(l)sulfoxid

Met(-*02) = methionylsulf on

Glu(X) eller Glu = glutamyl (X = OH)

Glu(X) eller Gin = glutaminyl (X = NH2)

His = histidyl

Phe = phenylalanyl

Arg = arginyl lys = lysyl

Gly = glycyl

Val = valyl

Ala = alanyl β-Ala = β-alanyl (a-Me)Ala = a-methylalanyl V forkortelser anvendt for andre rester:

Amf = (N-l-phenylis opropyl)-aminogruppe (afledt af amfetamin)

Ira = (N-p-indolylethyl)-aminogruppe (afledt af tryptamin) PEA = (N-phenylethyl)-aminogruppe PPA = (N-phenylpropyl)-aminogruppe HPEA = (N-p-hydroxyphenylethyl)-aminogruppe desamino-Met = desaminomethionyl (eller γ-methyl= thiobutyryl) desamino-Met (-^0) = desaminomethionyl sulf oxid desamino-Met (-»02) = desaminomethionylsulf on.

fremstilling af udgangsstoffer A. fremstilling af Boc-Met-Glu (OtBu) -His-I^H^ 1) Boc-Met-Glu(OtBu)-His-OMe

Boc-Met-N2H^ (10,52 g) opløst i 75 ml DME afkøles til 0°C, hvor- 13 145665 efter der tilsættes 25,6 ml 3,4 N HC1 i THE1 og ved -20°C 5,85 ml (43,3 mmol) isoamylnitrit. Blandingen omrøres i 7 minutter ved -20°C og tilsættes derpå til en opløsning af 17,05 g H-Glu(OtBu)-His-OMe, 2HC1 i 50 ml dimethylformamid og tilstrækkeligt triethylamin til at indstille blandingens endelige pH-værdi på 6,9. Blandingen omrøres i 3 dage ved 0°C, hvorefter det dannede triethylamin,HC1 filtreres fra og filtratet inddampes til tørhed. Resten opløses i 150 ml ethyl= acetat/vand. Tandlaget skilles fra og ethylacetatlaget vaskes 2 gange med vand. Derpå forenes vandlagene og der ekstraheres igen med ethylacetat (2 gange med 25 ml). Ethylacetatlagene tørres, hvorefter opløsningen inddampes til ca. 100 ml og henstilles ved 0°C.

Smeltepunkt: 138-142°C.

Rf i Bu:Ac:Wa (4:1:1) = 0,59 på Si02· 2) Boc-Met-Glu(OtBu)-His-N2H5 3,7 g af den ovennævnte methylester opløses i 70 19I methanol, hvorefter der tilsættes 3,7 ml hydrazinhydrat. Blandingen omrøres i 5 timer ved stuetemperatur. Opløsningen inddampes til tørhed og omrøres derpå med vand og tørres.

Rf i Am:iPro:Wa (10:4:5) = 0,39 på Si02.

B. Fremstilling af Boc-D-Met-Glu(0tBu)-His-N2H^ 1) Boc-D-Met-Glu(OtBu)-His-OMe

Boc-D-Met-N2H^ (10,52 g) opløst i 75 ml DMF afkøles til 0°C, hvorefter 25,6 ml 5,4 N saltsyre i THE1 tilsættes og ved -20°C 5,85 ml isoamylnitrit tilsættes. Blandingen omrøres i 7 minutter, hvorefter 17,05 g H-Glu(0tBu)-His-0Me,2HCl i 50 ml DMF tilsættes, og pH-værdi-en indstilles på 6,9 med triethylamin. Blandingen omrøres i 3 dage ved 0°C, hvorefter den filtreres og filtratet inddampes til tørhed i vakuum. Resten optages i 150 ml ethylacetat/vand og vaskes med vand. Efter tørring inddampes den organiske fase til 100 ml og henstilles ved 0°C. De resulterende krystaller tørres.

Rf i Bu:Ac:Wa (4:1:1) = 0,63 på Si02·

Smeltepunkt: 69-71°C.

14 145685 2) . Boc-D-Met-Glu( OtBu)-His-NgH^ 3,2 g (5,45 mmol) af den ovennævnte methylester opløses i 60 ml methanol, hvorefter der tilsættes 3,7 ml hydrazinhydrat. Blandingen omrøres i 5 timer ved stuetemperatur, hvorefter methanolet sidestilleres i vakuum og resten omrøres med vand. Efter tørring vi-derebehandles hydrazidet straks.

Rf i Am:iPro:Wa (10:4:5) = 0,37 (Si02).

C. Fremstilling af Boc-Val-Glu(OtBu)-His-NgH^ 1) Boc-Val-Glu(OtBu)-His-OMe

Boc-Var-OH (3,26 g, 15 mmol) opløses i 20 ml methylenchlorid, hvorefter 1,73 g N-hydroxysuccinimid tilsættes. Blandingen afkøles til -20°C, hvorefter der tilsættes 3,09 g DCCI opløst i 20 ml afkølet methylenchlorid. Den resulterende opløsning omrøres i 1 time ved -20°C og derpå i 20 timer ved +20°C.

Efter filtrering af det resulterende DCHU inddampes filtratet til tørhed og resten opløses i 30 ml DMF, hvorefter 7,33 g Z-Glu(OtBu)-His-OMe (fremstillet ifølge Kappier Helv. 44» 1991» 1961) og 1,4 g 10io palladium-på-carbon tilsættes. Hydrogen bobles gennem blandingen i 5 timer, hvorefter blandingen omrøres i 1 nat, filtreres og filtratet inddampes til tørhed.

Resten opløses i vandig ethylacetat og vaskes med vand, natriumhy= drogencarbonat og vand. Den organiske fase tørres, hvorefter ethyl= acetatet inddampes i vakuum. Resten omkrystalliseres fra ethylacetat/ petroleumsether.

Udbytte: 3,95 g, smeltepunkt: 117-119°C.

Rf i Bz:EtOH (8:2) = 0,55 (Si02).

2) Boc-Val-Glu(OtBu)-His-N2H3 3,73 g af den ovennævnte methylester opløses i 85 ml methanol, hvorefter 3,72 ml hydrazinhydrat tilsættes. Blandingen omrøres i 7 timer ved stuetemperatur, hvorefter opløsningen inddampes til tørhed og resten sønderdeles med ether.

25 145365

Rf i Am:iPro:Wa (10:4:5) = 0,55 på Si02.

D. Fremstilling af Boc^-Ala-GluiOtBui-His-NgH^ 1) Boc^-Ala-Glu(OtBu)-His-OMe

Boc-p-Ala-OH (5,78 g) opløses i methylenchlorid. Opløsninge afkøles til 0°C, hvorefter 2,3 g N-hydroxysuccinimid tilsættes. Blandingen afkøles yderligere til -22°C, hvorefter der tilsættes 4,12 g DCCI. Blandingen omrøres successivt i 30 minutter ved -22°C, i 3 timer ved 0°C og i 12 timer ved stuetemperatur. Det dannede bundfald (DCHU) filtreres fra, filtratet inddampes til tørhed og resten optages i dimethylformamid. Til denne blanding tilsættes 9,77 g Z-Glu(OtBu)-His-OMe og yderligere 1,5 g palladium-på-carbon som katalysator. Hydrogengassen bobles gennem gassen i 5 timer, hvorefter blandingen omrøres i 12 timer. Katalysatoren affiltreres derpå og filtratet inddampes til tørhed. Resten optages i ethylacetat og opløsningen vaskes successivt med natriumhydrogencarbonatopløsning (5%) og vand. Ethylacetatfasen tørres, hvorefter opløsningen inddampes til tørhed og resten omkrystalliseres fra ethylacetat/petro= leumsether (1:1).

Smeltepunkt: 93-95°C.

Rf i Bz:EtOH (8:2) = 0,25 på Si02.

2) Boc-3-Ala-Glu(OtBu)-His-N2H5

Den under 1) opnåede methylester (3,0 g) opløses i 60 ml methanol, hvorefter der tilsættes 3 ml hydrazinhydrat. Blandingen omrøres i 6,5 timer ved stuetemperatur, hvorefter opløsningen inddampes til tørhed og resten sønderdeles med tør ether. Stoffet blev straks anvendt til yderligere reaktioner.

Rf i Am:iPro:Wa (10:4:5) = 0,42 på SiOg.

E. Fremstilling af Boc-Gly-Glu(OtBu)-His-N2H^ 1) Boc-Gly-Glu(OtBu)-His-OMe På samme måde som beskrevet under C. l) fremstilles Boc-Gly-Glu(OtBu)-His-OMe ved at omsætte Boc-Gly-OH med H-Glu(OtBu)-His-OMe.

16 145665

Smeltepunkt: 103-108°C.

Rf i Bz:EtOH (8:2) = 0,43 på SiOg.

2) Boc-Gly-Glu(OtBuJ-His-NgH^

Yed at omsætte dette stof med hydrazinhydrat som beskrevet under A.

2).fremstilles Boc-Gly-Glu(OtBu)-His-N2H^.

Rf i Am:iPro:Wa (10:4:5) = 0,32 på SiOg.

E. På samme måde som beskrevet under C og D fremstilles: 1) Boc-Ala-Glu(0tBu)-His-N2H3

Rf = 0,33 (Am:iPro:Wa = 10:4:5)· 2) . Boc- (cc-Me) Ala-Glu( OtBu) -His-NgH^

Rf = 0,31 (Am:iPro:Wa = 10:4:5)· 3) Des amino-Me t-Glu (OtBu) -Hi s -NgH^

Rf = 0,52 (Bu:Ac:¥a = 4:1:1).

G. fremstilling af Boc-Met-Gln-His-NgH^ På samme måde som beskrevet under C. l) kobles aminosyrederivatet boc-Met-OH til H-Gln-His-OMe opnået ud fra det tilsvarende Z-beskyt-tede peptid (Helv. 44, 476, 1961) ved hydrogenering med 10$ palla= dium-på-carbon, hvilket giver den beskyttede peptidester: Boc-Met-Gln-His-OMe, hvilket peptid middelbart efter viderebearbejdes til det tilsvarende hydrazid ved hjælp af den under C. 2) beskrevne fremgangsmåde .

Rf i Am:iPro:Wa (10:4:5) = 0,28 på SiOg.

H. Syntese af H-Phe-D-Arg-OH

1) Z-Phe-D-Arg (N02)-OMe

En opløsning af 12,8 g H-D-Arg(NOg)-OMe,HCl i 200 ml DME afkøles til +5°C, hvorefter der tilsættes 4,8 g IAA. Den resulterende tri= ethylamin, HC1 filtreres fra, hvorefter 20 g Z-Phe-ONP tilsættes.

17 145665

Blandingen omrøres i 4 dage ved stuetemperatur, hvorpå en del af DMP-mængden afdestilleres og resten fortyndes med 400 ml ethyl= acetat/vand. Den organiske fase vaskes med citronsyre, ammonium= hydroxid og vand, hvorefter ethylacetatlaget tørres og inddampes. Efter omkrystallisation fra ethylacetat/petroleumsether er smeltepunktet 89-93°C.

Rf i Bz:EtOH (8:2) = 0,62 (Si02).

2) Z-Phe-D-Arg(N02)-OH

5 g af det ovennævnte dipeptid opløses i dioxan og forsæbes derpå med 1,1 ækvivalent natriumhydroxid. Denne opløsning omrøres i 2 timer og syrnes derpå med IN saltsyre (pH-værdi = 2) og fortyndes med en tidobbelt vandmængde. Det resulterende bundfald omrøres i 3 timer ved 0°C og affiltreres.

Udbytte: 3,1 g. Smeltepunkt: 118-121°C (dekomponering).

Rf i Bz:EtOH (8:2) = 0,11 (Si02).

3) H-Phe-D-Arg-OH,acetat 1 g af Z-Phe-D-Arg(N02)-OH fra 2) opløses i 20 ml 90 $ig eddikesyre, hvorefter der tilsættes 100 mg 10$ palladium-på-carbon. Hydrogen bobles gennem blandingen i 2 dage og herefter filtreres den sorte reaktionsblanding over hyflo, filtratet inddampes til tørhed og resten opløses i t-butanol/vand (l:l) og lyophiliseres.

Udbytte: 0,4 g dipeptidacetat.

Rf i Bu:Py:Ac:Wa (4:3/4:1/4:1) = 0,21 (SiOg).

4) På samme måde som beskrevet under 3) omdannes Z-Phe-D-Arg(N02)-OMe (fra 1)) til H-Phe-D-Arg-OMe,acetatet.

Rf i Bu:Py:Ac:Wa (4:3/4:1/4:1) = 0,40 (Si02).

E. Syntese af H-Phe-D-lys(Boc)-OH

l) Z-Phe-D-lys(Boc)-OBzl

Ud fra 17,7 g H-D-Iiys(Boc)-OBzl,HCl fremstilles dipeptidet Z-Phe-

18 U566S

D-lys(Boc)-OBzl på samme måde som beskrevet i eksempel H. l).

Udbytte efter krystallisation fra ethylacetat/ether: 72fo (olie).

Rf i Bz:EtOH (9:1) = 0,54 (Si02).

2) H-Phe-D-lys(Boc)-OH

2 g Z-Phe-Iys(Boc)-OBzl opløses i 50 ml methanol, hvorefter 0,2 g 10fo palladium-på-carbon tilsættes og hydrogen bobles gennem blandingen i 5 timer. Blandingen filtreres derpå og filtratet inddampes til tørhed.

Rf i Bu:Py:Ac:Wa (4:3/4:1/4:1) = 0,31 (Si02).

I. Syntese af H-Phe-D-Lys(Boc)-Trp-OH og derivater

1) Z-Phe-D-lys(Boc)-2!rp-0H

Z-Phe-ONP (4,6 g) opløses i 60 ml DMF. Derpå tilsættes 4j4 g H-D-Iys(Boc)-Irp-OMe og blandingen omrøres i 20 timer ved 20°C, hvorefter der tilsættes 0,2 g 2-dimethylaminoethylamin. Reaktionsblandingen omrores i yderligere 2 timer, hvorefter opløsningsmidlet inddampes og resten opløses i 250 ml ethylacetat/vand. Denne opløsning vaskes successivt med en opløsning af 5f« kaliumcarbonat i vand, 0,5 N saltsyre og vand, hvorefter den organiske fase tørres på natrium= sulfat.

Efter filtrering inddampes filtratet til tørhed og den olieagtige rest forsæbes. lil dette formål opløses 6,54 g af esteren i 100 ml dioxan, hvorefter der tilsættes 11,8 ml 1,5 N NaOH. Blandingen omrøres i 2 timer, hvorefter den opnåede reaktionsblanding syrnes med 1,5 N saltsyre til en pH-værdi 7, hvorpå dioxanet bringes til at fordampe i vakuum. lil resten tilsættes ethylacetat/vand og det vandige lags pH-værdi indstilles på 2 med fortyndet saltsyre uden separering af lagene. Den organiske fase vaskes med vand og tørres. Fjernelse af ethylacetatet ved destillation i vakuum gav en olie, der størknede efter omrøring med ether.

Rf i Am:Py:Wa (5:3:2) = 0,81 (Si02). Smeltepunkt 85°C (dekomponering).

2) H-Phe-D-lys(Boc)-Trp-OH,HC1 19 145665 1,85 g af tripeptidsyren fra 1) opløses i 40 ml DM]? og 1 ækvivalent saltsyre. Derpå tilsættes 350 mg 105¾ palladium-på-carbon, hvorefter hydrogen bobles gennem blandingen i 6 timer. Efter reduktionen fra-filtreres katalysatoren og filtratet viderebehandles straks yderligere.

Rf i Am:Py:Wa (5:3:2) = 0,70 (Si02).

3) Z-Phe-D-Lys(Boc)-Trp-NH2 eller Z-Phe-D-Iys(Boc)-!Drp-N(CH^)2 2 g af den rå ester (opnået ved hjælp af den under 1) beskrevne fremgangsmåde) tilsættes til 25 ml af en 10 N ammoniakopløsning eller dimethylaminopløsning i methanol. Blandingen omrøres derpå i 2 dage, hvorefter den inddampes til tørhed og resten omkrystalliseres fra methanol.

Rf i Bz:Et0H (8:2) = 0,35 (Si02) for amidet og 0,41 for dimethylami= det.

4) Z-Phe-D-Iys(Boc)-Trp-OC^ H23 Z-Phe-D-Iys(Boc)-Trp-OH fra l) (3,6 g) opløses i 45 ml DM3?, hvorefter der tilsættes 1,35 g undecylbromid og 1,0 g dicyclohexylamin. Blandingen omrøres i 48 timer ved 35°C og i 2 timer ved 0°C, hvorefter det dannede dicyclohexylammoniumbromid filtreres fra og filtratet inddampes til tørhed i vakuum. Resten optages i ethylacetat, vaskes med 0,1 N HC1, vand, en 10$ig hydrogencarbonatopløsning og vand. Den organiske fase tørres i et kort tidsrum på natriumsulfat, inddampes derpå delvis i vakuum og krystalliseres ved tilsætning af n-hexan. Udbytte: 3,2 g.

Rf i Bz:Et0H (8:2) = 0,45 (Si02).

5) Fjernelse af Z-gruppe På tilsvarende måde som beskrevet under 2) hydrogeneres 1 g af tripeptiderne fremstillet under 3) og 4) med hydrogen i nærværelse af palladium-på-carbon.

Der blev opnået HCl-saltene af de følgende peptider: 1. H-Phe-D-lys(Boc)-Irp-NH2 Rf* = 0,73 på Si02 20 145865 2. H-Phe-D-Lys(Boc)-Trp-N(CH^)2 Rf* = 0,77 på SiOg 3. H-Phe-D-Lys(Boc)-Irp-OCi;LH25 Rf* = 0,78 på Si02

Rf i Am:Py:¥a (5:3:2).

M. Syntese af H-Phe-D-Lys(Boc)-Tra 1) Z-Phe-D-Iys(Boc)-!Era

Udfra Z-Phe-ONP og H-D-Lys(Boc)-Tra (olie; Rf i Am:Po:¥a (7:2:1) = 0,70) fremstilles peptidet Z-Phe-D-lys(Boc)-Tra på samme måde som beskrevet i eksempel 1. 1).

Omkrystallisation fra methanol/ether/petroleumsether gav efter få dages forløb et krystallinsk materiale.

Smeltepunkt: 159-162°C.

Rf i Bz:EtOH (8:2) = 0,73 (SlOg).

2) H-Phe-D-Lys(Boc)-Ira

Hydrogenering af dipeptidamidet fra l) i methanol med 10fo palladium-på-carbon som katalysator gav H-Phe-D-lys(Boc)-Tra.

Udbytte: 92<fo.

Rf i Am:Py:¥a (5:3:2) = 0,75 på Si02 Rf i Bu:Ac:¥a (4:1:1) = 0,80 på SiOg.

N. Syntese af H-Phe-D-Arg-Tra 1) Z-Phe-D-Arg(NOg)-Ira A-Phe-ONP (2,1 g) opløses i 20 ml DM3?, hvorefter denne lysegule opløsning afkøles til -5°C. Derpå tilsættes en afkølet opløsning af 1,81 g H-D-Arg(NOg)-Tra, opnået ud fra Boc-D-Arg(NOg)-Tra (smeltepunkt 114°C, dekomponering), til denne opløsning. Blandingen omrøres i 20 timer ved 0°C og i 5 timer ved stuetemperatur. Reaktionsblandingen inddampes til tørhed og resten omrøres tre gange med ether.

Det lysegule bundfald krystalliseres nogle få gange fra ethanol/ 21 145665 ether.

Rf i Bz:Et0H (8:2) = 0,41 på Si02.

2) H-Phe-D-Arg-Tra,acetat 1,5 g af det ovennævnte peptid opløses i 20 ml 90 $ig eddikesyre, hvorefter der tilsættes 150 mg 10 <?<> palladium-på-carbon. Derpå bobles hydrogen gennem blandingen i 2 dage, hvorefter reaktionsblandingen filtreres over hyflo, filtratet inddampes til tørhed, resten opløses i t-butanol/vand (1:1) og derpå lyophiliseres.

Rf i Bu:Py:Ac:Wa (4:3/4?l/4:l) = 0,26 på SiOg.

0. Syntese af H-Phe-D-Arg-Irp-Gly-OH,acetat

1) Boc-D-Arg(N02)-Irp-Gly-0H

Boc-D-Arg(N02)-OH (5,76 g) opløses i 70 ml DMF og 2,52 ml TAA. Denne opløsning afkøles til -10°C, hvorefter der tilsættes 2,38 ml isobutylchlorformiat og blandingen omrøres i 10 minutter ved -10°C.

En opløsning af 4,7 g H-Trp-Gly-OH i 40 ml DME og 2,0 ml triethyl= amin afkøles til -5°C og tilsættes til det blandede anhydrid, hvorefter slut-pH-værdien indstilles på 7,2 med SAA. Blandingen omrøres i 2 timer ved 0°C og i 20 timer ved stuetemperatur, hvorefter bundfaldet filtreres fra og filtratet inddampes til tørhed. Derpå opløses reaten i vandig ethylacetat. Den organiske fase vaskes med ci= tronsyre, derpå med saltholdigt vand ag tørres derpå.

Efter filtrering afdampes en del af ethylacetatet til et volumen på ca. 100 ml, hvorefter der tilsættes tilstrækkeligt ether til at forårsage uklarhed. Blandingen henstår i nogen tid, hvorefter det på denne måde opnåede bundfald filtreres fra.

Rf i Bz:EtOH (8:2) = 0,65 på Si02· 2) H-D-Arg(N02)-Trp-Gly-OH,HC1 6 g tripeptid suspenderes i methylenchlorid, hvorefter tør hydrogen= chloridgas bobles gennem i 30 minutter. Efter nogen tid påbegyndes udfældningen af HCl-saltet af tripeptidet. Blandingen filtreres ef- 22 145665 ter 2 timers omrøring ved 20°C. Resten vaskes 3 gange med tør ether og tørres over fast kaliumhydroxid.

Rf i Am:Py:Wa (5:3:2) = 0,54 på Si02.

3) Udfra tripeptidet H-D-Arg(N02)-Srp-Gly-0H,HCl beskrevet under 2) fremstilles tetrapeptidet ved kondensation med Z-Phe-ONP på den i eksempel N. l) beskrevne måde. Udbytte af Z-Phe-D-Arg(N02)-Trp-Gly-OH: 63$.

Rf i BzrEtOH (8:2) = 0,12 på Si02.

4) H-Phe-D-Arg-Trp-Gly-OH,acetat 1,5 g af peptidet fra 3) hydrogeneres på samme måde som beskrevet i eksempel N. 2).

Rf i Bu:Py:Ac:Wa (4:3/4:1/4:1) = 0,21 på Si02· P. Syntese af H-Phe-D-Lys(Boc)-Phe-OtBu 1) Z-D-Lys(Boc)-Phe-OtBu Z-D-lys(Boc)-ONP (10,03 g) opløses i 50 ml DMF. Denne opløsning afkøles til -20°C, hvorefter den tilsættes til en opløsning af 4,1 ' g H-Phe-OtBu i 75 ml DME. Blandingen omrøres i 1 time ved 0°C og i 20 timer ved 20°C, hvorefter reaktionsblandingen inddampes til tørhed. Den gule rest opløses i ethylacetat/vand og vaskes med 5$ ka= liumcarbonat, vand, 5$ citronsyre og vand. Den organiske fase tørres og inddampes til tørhed. Resten opløses i ethylacetat, hvorefter der tilsættes tilstrækkeligt petroleumsether 40/60 til at forårsage uklarhed. Det resulterende bundfald filtreres fra.

Rf i Bz:EtOH (9:1) = 0,64 på Si02.

2) H-D-lys(Boc)-Phe-OtBu 3 g af dipeptidet opløses i 60 ml methanol. Derpå tilsættes 10$ pal= ladium-på-carbon, hvorefter hydrogen bobles gennem blandingen, indtil der ikke undslipper mere C02 (2 timer). Efter filtrering inddampes filtratet til tørhed til opnåelse af skum.

Rf i To.-EtOH (9:1) = 0,21 på Si02· 23 145665 3) Z-Phe-D-lys(Boc)-Phe-OtBu Z-Phe-ONP (2,18 g) opløses i 15 ml DM3?. Derpå tilsættes en opløsning af 2,24 g H-D-lys(Boc)-Phe-OtBu fra 2) i 30 ml DM3?, hvorefter blandingen omrøres ved 20°C i 15 timer. Efter fordampning af den gule opløsning opløses resten i 15 ml ethylacetat, hvorefter der tilsættes 50 ml petroleumsether. Derpå henstilles blandingen i ·3 timer ved 0°C, hvorpå det dannede bundfald filtreres fra.

Smeltepunkt: 135-138°C.

Rf i To:EtOH (8:2) = 0,60 på Si02.

4) H-Phe-D-lys(Boc)-Phe-OtBu 2,5 g af det under 3) opnåede tripeptid hydrogeneres på samme måde som beskrevet under 2).

Rf i To:EtOH (8:2) = 0,43 på Si02.

Q. Syntese af H-Phe-D-lys(Boc)-Phe-Gly-0tBu 1) Z-D-lys(Boc)-Phe-Gly-OtBu 2-D-lys(Boc)-0NP (10,03 g) kondenseres med en opløsning af 5>1 g H-Phe-Gly-OtBu i 20 ml DM3? på samme måde som beskrevet i eksempel P. l), og inddampes derpå. Den resulterende rest opløses i ethyl= acetat på den beskrevne måde, vaskes og inddampes til tørhed. Resten viderebehandles straks yderligere.

Rf i To:EtOH (9:1) = 0,63 på Si02· 2) H-D-Iys(Boc)-Phe-Gly-OtBu

Hydrogenering som beskrevet i eksempel P. 2) giver tripeptidet som et skum i et praktisk taget kvantitativt udbytte.

Rf i To:EtOH (9:1) = 0,24 på Si02.

3) Z-Phe-D-Iys(Boc)-Phe-Gly-OtBu

Reaktion af 2,18 g Z-Phe-ONP med 2,6 g H-D-Iys(Boc)-Phe-Gly-OtBu i 30 ml DM3? i 24 timer på den i eksempel P. 3) beskrevne måde giver tetrapeptidet i et udbytte på 75$ efter krystallisation fra ethyl= acetat/petroleumsether. Pør krystallisation blev ethylacetatlaget 24 145665 vasket med citronsyre.

Smeltepunkt: 78-80°C.

Rf i Io:EtOH (8:2) = 0,85 på Si02.

4) H-Phe-D-Iys(Boc)-Phe-Gly-OtBu

Hydrogenering af det under 3) opnåede tetrapeptid i overensstemmelse med eksempel P. 2) giver H-Phe-D-lys(Boc)-Phe-Gly-OtBu som et skum.

Rf i Bu:Py:Ac:Wa (4:3/4:1/4:1) = 0,57 på Si02· R. Syntese af H-Phe-D-Lys(Boc)-(N-uhenylalkyl)-amidderivater

1) Z-D-Iys(Boc)-PPA

Z-D-lys(Boc)-ONP (10,33 g) opløses i 80 ml methylenchlorid. Opløsningen afkøles til 0°C, hvorefter der tilsættes 2,7 g 3-phenylpro= pylamin og blandingen omrøres i 30 minutter ved 0°C og i 20 timer ved 20°C. Reaktionsblandingen inddampes til tørhed og resten optages i ethylacetat. Den organiske fase vaskes successivt med vand, citronsyre, vand, 5$ natriumhydrogencarbonat og vand og tørres derpå. Herefter afdestllleres ethylacetatet i vakuum. Resten omkrystalliseres fra ethylacetat/ether.

Rf i Bz:EtOH (9:1) = 0,53 på Si02.

2) H-D-lys(Boc)-PPA

8,75 g af amidet fra l) opløses i 120 ml methanol, hvorefter der tilsættes 105¾ palladium-på-carbon. Derpå bobles hydrogen gennem blandingen i 4 timer, hvorefter blandingen filtreres. Piltratet inddampes derpå til tørhed og resten (olie) viderebehandles straks yderligere.

Rf i Am:Po:¥a (7:2:1) = 0,58 på Si02·

3) Z-Phe-D-lys(Boc)-PPA

6,39 g af amidet 2) opløses i 68,5 ml DMF, hvorefter der tilsættes 7,61 g Z-Phe-ONP i 20 ml DMP. Blandingen omrøres i 20 timer ved stuetemperatur, hvorefter opløsningsmidlet bringes til at fordampe i va- 25 145665 kuum. Resten opløses 1 170 ml ethylacetat og ethylacetatfasen vaskes som beskrevet uner l) og tørres. Resten opløses i den mindst mulige mængde ethylacetat og henstilles ved 0°C. Efter 3 dages forløb affiltreres bundfaldet.

Rf i Bz:EtOH (8:2) = 0,72 (Si02).

4) H-Phe-D-lys(Boc)-PPA,HC1

Dipeptid-amidet fra 3) (9~,07 g) opløses i 300 ml DME, hvorefter der tilsættes 4 il 4 K HC1 og 1,5 g 10$ palladium-på-carbon. Derpå bobles hydrogen gennem blandingen i 4 timer under omrøring, hvorefter katalysatoren filtreres fra og,filtratet inddampes til tørhed. Den tilbageblevne olie omrøres med ether.

Rf i Bu:Ac:Wa (4:1:1) = 0,65 (Si02).

5) På tilsvarende måde fremstilles: H-Phe-D-Iys(Boc)-Amf Rf* = 0,39 på Si02 H-Phe-D-Iys(Boc)-PEA Rf* = 0,34 på Si02 H-Phe-D-Iys(Boc)-HPEA Rf* = 0,29 på Si02 *^Rf i To:EtOH (8:2).

Eksempel I.

H-Met-Glu-His-Phe-D-Arg-OH og den tilsvarende methvlester

1. Bos-Met-Glu(OtBu)-His-Phe-D-Arg-OH

1,17 g Boc-Met-Glu(0tBu)-His-N2H^ (A. 2)) opløses i 20 ml DME. Denne opløsning afkøles til 0°C, hvorefter der tilsættes 3 ml 2 N HCl/ THE og derpå ved -20°C 0,27 ml isoamylnitrit. Blandingen omrøres i 7 minutter ved -20°C, hvorefter den tilsættes til en opløsning af 0,76 g H-Phe-D-Arg-OH,acetat (H. 3)), hvorefter pH-værdien indstilles på 7,2 med TAA. Blandingen omrøres i 70 timer ved 0°C, hvorefter DME afdestilleres i vakuum, hvorpå resten optages i vandig ethylace= tat og vaskes tre gange med saltholdigt vand.

26 U56B5

Ethylacetatet afdestilleres og resten omkrystalliseres fra tør e thylacetat/petroleums ether,

Udbytte: 1,2 g»

Rf i Bu:Py:Ac:¥a (2:3/4:1/4:1) = 0,56.

2. Fjernelse af beskyttelsesgrupper 1 g peptid opløses i 10 ml 90 fo trifluoreddikesyre, hvorefter opløsningen omrøres i 30 minutter. Derpå tildryppes reaktionsblandingen til peroxidfri ether. Det dannede bundfald filtreres fra og sønderdeles med ether. Resten tørres over fast KOH. Derpå opløses stoffet i 25 ml t-butanol/vand, hvorefter "Dowex" wX-8 i acetatform tilsættes til ionbytning af trifluoracetatet med acetatet (pH-værdi til slut 4-5). Ionbytteren filtreres fra, hvorefter filtratet lyophiliseres.

Rf i Bu:Py:Ac:Wa (2:3/4:1/4:1) = 0,18 (Si02).

3. På samme måde som beskrevet under 1. og 2. kobles peptidet Boc-Met-Glu(0tBu)-His-N2H5 (A. 2)) til H-Phe-D-Arg-OMe (H. 4)), hvilket efter fjernelse af beskyttelsesgrupperne resulterer i H-Met-Glu-His-Phe-D-Arg-OMe,acetat.

Rf i Bu:Py:Ac:Wa (4:3/4:1/4:1) = 0,22 på Si02.

Eksempel II.

H-Met-Glu-His-Phe-D-Lys-OH

1. Boc-Met-Glu(OtBu)-His-Phe-D-lys(Boc)-0H

1,17 g Boc-Met-Glu(0tBu)-His-N2Ej (A. 2)) opløses i 20 ml DMF, hvorefter 3 ml 2N HC1 i IHF tilsættes ved 0°C og 0,27 ml isoamylnitrit tilsættes ved -20°C. Blandingen omrøres i 7 minutter, hvorefter den tilsættes til en opløsning af 0,9 g H-Phe-D-Iys(Boc)-OH (K. 2)) i 10 ml DMF, hvorpå pH-værdien til sidst indstilles med TAA på 7,2. Blandingen omrøres i 70 timer ved 0°C, hvorefter DMF afdestilleres og resten optages i vandig ethylacetat.

27 145665

Den organiske fase vaskes med. saltholdigt vand, derpå med vand og tørres derpå og inddampes. Resten omkrystalliseres fra ethylacetat/ petroleumsether.

Rf i Io:EtOH (8:2) = 0,27 på Si02· 2. fjernelse af beskyttelsesgrupper fjernelsen gennemføres på samme måde som beskrevet i eksempel I. 2., men omrøring finder sted med 90$ trifluoreddikesyre i 1 time.

Rf i Bu:Py:Ac:Wa (4:3/4:1/4:1) = 0,19 på Si02.

3. På tilsvarende måde fremstilles:

Rf i Bu:Py: Ac:Wa (4:3/4: 1/4:1) H-D-Met-Glu-His-Phe-D-lys-OH man starter med B. 2 0,18 og K. 2 Η-β-Ala-Glu-His-Phe-D-Lys-OH man starter med D. 2 0,16 og K. 2 H-Val-Glu-His-Phe-D-Lys-OH man starter med D. 2 0,18 og K. 2 desamino-Met-Glu-His-Phe-D-Lys- man starter med F. 3 0,26 OH og E. 2 H-Met-Gln-His-Bhe-D-Iys-OH man starter med G og 0,25 E. 2

Eksempel III.

A-Glu-His-Phe-D-Iiys-Trp-Y

1. Boc-Ala-Glu(OtBu)-His-Phe-D-Iys(Boc)-Irp-OH

Udfra 1,05 g (2 mmol) Boc-Ala-Glu(OtBu)-His-N2H^ (f. l)) fremstilles azidet ved hjælp af den i eksempel II. 1. beskrevne fremgangsmåde. Dette azid tilsættes til 1,23 g H-Phe-D-Iys(Boc)-Irp-OH,HCl (eksempel L. 2)) opløst i 10 ml DMB, hvorefter pH-værdien til slut indstilles på 7,3- med TAA. Reaktionsblandingen omrøres i 70 timer, 28 145665 hvorefter den inddampes til tørhed og resten omrores med vandig ethylacetat.

Ethylacetatet vaskes to gange med vand og inddampes derpå til tørhed. Resten omkrystalliseres fra alkohol-peroxidfri ether (l:l).

Smeltepunkt: 173°C, dekomponering.

. Rf i BzrEtOH (8:2) = 0,27 på Si02.

2. Boc-Yal-Glu(OtBu)-His-Phe-D-Lys(Boc)-Trp-NHg

Udfra 1,11 g Boc-Yal-Glu(OtBu)-His-N2H5 (C. 2)) og 1,22 g H-Phe-D-Iys(Boc)-frp-NH2,HCl (1. 5) 1.) fås det ovennævnte peptidamid på samme måde som beskrevet under 1. Yed at hælde reaktionsblandingen i den tidobbelte mængde vand fås et bundfald. Dette bundfald omrøres med ethylacetat/petroleumsether, hvilket giver 1,3 g peptid.

Rf i Am:Py:Wa (5:3:2) = 0,84 på Si02.

3. På samme måde som beskrevet vinder 1. eller 2. fås:

Boc-Ala-Glu(OtBu)-His-Phe-D-lys(Boc)-Trp-OC11H2^ (fra E.l og 1.5.3) Boc-Yal-Glu(OtBu) -His-Phe-D-lys (Boc-3?rp-0H (fra C.2 og 1.2)

Boc-Yal-Glu(OtBu)-His-Phe-D-lys(Boc)-Trp-N(CH^)2 (fra C.2 og L.5.2) Boc-Yal-Glu(OtBu)-His-Phe-D-lys(Boc)-Trp-0C11H2^ (fra C.2 og 1.5.3) Boc-Met-Glu(OtBu)-His-Phe-D-lys(Boc)-Trp-OH (fra A.2 og 1.2) desamino-Met-Glu(OtBu)-His-Phe-D-lys(Boc)-Trp-0H (fra F.3 og 1.2) 4. fjernelse af beskyttelsesgrupper

En times behandling af de vinder 1, 2 og 3 nævnte peptider i 9 Of trifluoreddikesyre som beskrevet i eksempel I. 2 giver hexapepti= derne, som acetaterne: 29 145665

Rf* H-Ala-Glu-His-Phe-D-Lys-Trp-OH 0,23 på Si02 H-Val-Glu-His-Phe-D-Lys-iDrp-NH2 0,31 på Si02 H-Ala-Glu-His-Phe-D-Iys-Trp-OCi;LH25 0,38 på Si02 H-Yal-Glu-His-Phe-D-Iiys-Trp-OH 0,26 på Si02 H-Yal-Glu-His-Phe-D-lys-Trp-N(CH3)2 0,33 på Si02 H-Val-Glu-His-Phe-D-Iys-Trp-OCi:LH23 0,40 på Si02 H-Met-Glu-His-Phe-D-iys-Trp-OH 0,25 på S102 desamino-Met-Glu-His-Phe-D-Lys-Trp-OH 0,29 på Si02 *^Rf i BuiPy:Ac:¥a (4:3/4:1/4:1)-

Eksempel IY.

H-Gly-Glu-His-Phe-D-Arg-Jra 1. Boc-Gly-Glu(OtBu)-His-Phe-D-Arg-Tra 2 mmol Boc-Gly-Glu(OtBu)-His-N2H3 (E. 2)) omdannes til azidet ved hjælp af den i eksempel I beskrevne fremgangsmåde og kobles med 2 mmol af det tidligere beskrevne peptid H-Phe-D-Arg-Tra,acetat (N. 2)). pH-værdien til slut indstilles på 7,1 med TAA. Efter 70 timers omrøring ved 0°C fortyndes DMP-opløsningen med ethylacetat og denne fase vaskes med vand og en natriumhydrogencarbonatopløs-ning (5$). Pasen vaskes igen med vand, hvorefter ethylacetatet af-destilleres.

Rf i Bz:EtOH (8:2) = 0,39 på Si02.

2. Fjernelse af beskyttelsesgrupper 1 g af stoffet opløses i 20 ml 90 TEA under forsigtig opvarmning og behandles yderligere som beskrevet før (eksempel I. 2). Eør fjernelse af “Bewex" ^ionhytteren ved filtrering opvarmes stoffet forsigtigt.

Acetat af H-Gly-Glu-His-Phe-D-Arg-Tra: 30 145666

Rf i Bu:Py:Ac:¾¾ (4:5/4:1/4:1) = 0,19 på Si02<

Eksempel Ύ.

A-Glu-His-Phe-D-Arg-Tra og A-Glu-His-Phe-D-Lys-Ira 1·. Boc-Met-Glu(OtBu)-His-Phe-D-Arg-Ira 2 mmol H-Phe-D-Arg-Ira,acetat (N. 2)) tilsættes til det ifølge eksempel I. 1 fremstillede azid og tilstrækkeligt TAA til at indstille pH-værdien på 7,2 til slut.

Blandingen omrøres i 70 timer, hvorefter reaktionsblandingen filtreres og filtratet inddampes til tørhed. Resten omrøres tre gange med tør ethylacetat, hvorefter resten opløses i alkohol og tildryppes til tør ethylacetat til opnåelse af en bundfald, som affiltreres.

Rf i Bz:EtOH (8:2) = 0,25 på Si02· 2. Boc-Met-Glu(OtBu)-His-Phe-D-Lys(Boc)-Ira 2 mmol H-Phe-D-Lys(Boc)-Ira (M. 2)) tilsættes til det i eksempel I.

1 opnåede azid, og tilstrækkeligt ΪΑΑ til opnåelse af en pH-værdi til slut på 7,2.

Reaktionsblandingen inddampes til tørhed, hvorefter den ledes i vandig ethylacetat, hvorunder peptidet udkrystalliserer. Efter 3 timers omrøring ved +5°C finder filtrering sted.

Udbytte: 1,2 g.

Rf i Bz:EtOH (8:2) = 0,37 på SiOg.

På tilsvarende måde fremstilles: Boc-D-Met-Glu(OtBu)-His-Phe-D-lys (Boc)-Tra,

Boc-p~Ala-Glu(OtBu)-His-Phe-D-Iys(Boc)-Tra og desamino-Met-Glu(OtBu)-His-Phe-D-lys(Boc)-Ira.

3. Fjernelse af beskyttelsesgrupper i peptiderne fra 1 og 2.

31 165565

De ovennævnte peptider behandles på den tidligere beskrevne måde.

Før lyophilisering tilsættes ekstra eddikesyre for at forøge opløseligheden.

På denne måde opnås acetaterne af:

Rf*) Η-Met-Glu-His-Phe-D-Arg-Ira 0,18 på SiOg H-Met-Glu-His-Phe-D-Iys-lra 0,23 på Si02 H-D-Met-Glu-His-Phe-D-Iys-Tra 0,20 på Si02 H-p-Ala-Glu-His-Phe-D-Iys-Ura 0,19 på Si02 desamino-Met-Glu-His-Phe-D-lys-Tra 0,26 på Si02 * ^Rf i Bu:Py:Ac:Wa (4:3/4:1/4:1).

Eksempel 71.

A-Glu-His-Phe-D-Arg-Irp-Gly-OH

1 o Boc-Yal-Glu(OtBu)-His-Phe-D-Arg-Trp-Gly-OH

Udfra Boc-Yal-Glu(0tBu)-His-N2H^ (C. 2)) og acetatet af H-Phe-D-Arg-Trp-Gly-OH (0. 4)) fremstilles det ovennævnte heptapeptid på en 2 mmol skala ved hjælp af den i eksempel I beskrevne fremgangsmåde. Blandingen omrøres i 70 timer ved 0°C, hvorefter reaktionsblandingen hældes i vand og omrøres i yderligere 3 timer. Derpå affiltreres bundfaldet.

Rf i Bu:Py:Ac:Wa (4:3/4:1/4:1) = 0,57 på Si02.

2. Fjernelse af beskyttelsesgrupper

Behandling af dette peptid, som beskrevet i eksempel I. 2, giver H-Yal-Glu-His-Phe-D-Arg-Trp-Gly-OH,acetatet.

Rf i Bu:Py:Ac:Wa (4:3/4:1/4=1) = 0,21 på Si02.

3. På samme måde fremstilles acetaterne af: 32 145665

Rf (i Bu:Py:Ac;Wa -4:3/4:1/4:1) . H-rMet-Glu-His-Phe-D-Arg-lrp-Gly-OH 0,17 på Si02 Η-β-Ala-Glu-His-Phe-D-Arg-Irp-Gly-OH 0,14 på Si02 desamino-Met-Glu—His-Phe-D-Arg-Trp-Gly-OH 0,22 på Si02.

Eksempel VII.

A-Glu-His-Phe-D-Iiys-Phe-OH

1. Boc-p-Ala-Glu(OtBu)-His-Phe-D-lys(Boc)-Piie-OtBu 4 mmol Boc-p-Ala-Glu(0tBu)-His-N2H^ (D. 2)) opløses i 25 ml DM3?.

Denne opløsning afkøles til -5°C, hvorefter der tilsættes 4 ml 3 N HC1/TH3? og 0,55 ml isoamylnitrit ved -20°C. Blandingen omrøres i 7 minutter ved -20°C, hvorefter halvdelen af denne azidopløsning tilsættes til en opløsning af 1,2 g H-Phe-D-Lys(Boc)-Phe-OtBu (P.

4)) i 10 ml DM3?, forud afkølet til -10°C. Blandingens pH-værdi indstilles med IAA på 7,3, hvorefter reaktionsblandingen omrøres ved 0°C i 71 timer, hvorpå den hældes i vand. Filtrering af det resulterende bundfald giver det rå peptid i et udbytte på 62$, og dette omkrystalliseres 3 gange fra ethylacetat/petroleumsether.

Smeltepunkt: 193°C, dekomponering.

Rf i Io:EtOH (8:2) = 0,51 på Si02· 2. Behandling af det ovennævnte peptid ved hjælp af den i eksempel I. 2 beskrevne fremgangsmåde giver acetatet af Η-β-Ala-Glu-His-Phe-D-Lys-Phe-OH i et udbytte på 75$.

Rf i Bu:Py:Ac:Wa (4:3/4:1/4:1) = 0,21 på Si02_.

3. På samme måde fremstilles acetaterne af:

Peptid Rf Udgangsprodukt Η-Met-Glu-His-Phe-D-lys-Phe-OH 0,58* A. 2 + P. 4 H-Yal-Glu-His-Phe-D-Iys-Phe-OH 0,35* C. 2 + P. 4 33 145665 desamino-Met-Glu-His-Phe-D-lys-Phe-OH 0,24 P.3 + Ρ·4 H-Met-Gln-His-Phe-D-Lys-Phe-OH 0,25* G + P.4 *Rf i Bu:Py:Ac:¥a (2:3/4:1/4:1) på Si02 **Rf i Bu:Py:Ac:¥a (4:3/4:1/4:1) på SiOg.

Eksempel VIII.

H-B-Ala-Glu-His-Fhe-D-hys-Phe-Gly-OH

1. Boc^-Ala-Glu(OtBu)-His-Phe-D-I.ys(Boc)-Phe-Gly-OtBu

Udfra den (anden halvdel af) azidopløsningen, som blev fremstillet i eksempel VII. 1, fås det ovennævnte heptapeptid ved kondensation på samme måde med 2 mmol H-Phe-D-Lys(Boc)-Phe-Gly-OtBu (Q. 4)) og produktet isoleres.

Rf i Bz:EtOH (8:2) = 0,53 på SiOg.

2. Fjernelse af beskyttelsesgrupper

Behandling af dette peptid på samme måde som beskrevet i eksempel I. 1 giver acetatet af:

Η-β-Ala-Glu-His-Phe-D-Iys-Phe-Gly-OH

Rf i Bu:Py:Ac:Wa (4:3/4:1/4:1) = 0,19 på SiOg.

3. På samme måde fremstilles acetaterne af: H-Met-Glu-His-Phe-D-lys-Phe-Gly-OH Rf* =0,28 H-(α-Me)Ala-Glu-His-Phe-D-lys-Phe-Gly-OH Rf* = 0,26 desamino-Met-Glu-His-Phe-D-Iys-Phe-Gly-OH Rf = 0,31 *Rf i Bu:Py:Ac:¥a (2:3/4:1/4:1) på SiOg.

Eksempel IX.

34 145665 Η-(α-Me)Ala-Glu-His-Phe-D-Iys-phenylalkylamider

1. Boc(α-Me)Ala-Glu(OtBu)-His-Phe-D-lys(Boc)-PPA

0,96 g Boc-(a-Me)Ala-Glu(OtBu)-His-N,pH.j (F. 2)) opløses i 10 ml DMF, hvorefter hydrazidet omdannes til azidet med 3 ml 1 N HCl/ IHF og 0,13 ml isoamylnitrit på sædvanlig måde. Dette azid tilsættes til 1 mmol H-Phe-D-Iys(Boc)-PPA,HCl (fremstillet under R. 4)), hvorefter pH-værdien indstilles på 7,3 med IAA.

Reaktionsblandingen omrøres i 75 timer, hvorefter den inddampes og resten omrøres med vand (tre gange). Den uopløselige del renses yderligere ved opløsning af denne i ethylacetat og ved at hælde den i den samme mængde petroleumsether til udfældning af peptidet 'igen.

Rf i Bz:EtOH (8:2) = 0,31 (SiOg).

2. Fjernelse af beskyttelsesgrupper

Behandling i trifluoreddikesyre som beskrevet i eksempel I. 2 giver trifluoracetatet, som ved hjælp af "Dowex" ®Xt8 i acetatf ormen omdannes til det tilsvarende acetat H-(a-Me)Ala-Glu-His-Phe-D-lys-PPA.

Fif i Bu:Py:Ac:Wa (2:3/4:1/4:1) = 0,34 på SiOg.

3. På samme måde fremstilles acetaterne af: H-(α-Me)Ala-Glu-His-Phe-D-Iys-Amf Rf* =0,33 H-(α-Me(Ala-Glu-His-Ehe-D-Lys-PEA Rf* = 0,35 Η-β-Ala-Glu-His-Phe-D-Iy s-PPA Rf* =0,30 desamino-Met-Glu-His-Phe-D-Iys-Amf Rf* = 0,45 *Rf i Bu:Py:Ac:Wa (2:3/4:1/4:1) på SiOg.

Eksempel X.

H-Met-Glu-His-Phe-D-Lys-phenylalkylamider 55 145665 På samme måde, som beskrevet i eksempel IX, bliver ved kondensation af Boc-Met-Glu(OtBu)-His-N^ (opnået ved at behandle hydrazi= det fra A. 2) med isoamylnitrit på sædvanlig måde) med et af de peptidamidderivater fremstillet under R. 4) og R. 5) efterfulgt af fjernelsen af beskyttelsen af peptidet opnået fra dem, fremstilles acetaterne af: Η-Me t-Glu-Hi s-Phe-D-Lys-PPA Rf* =0,39 H-Met-Glu-His-Phe-D-Lys-PEA Rf* = 0,38 Η-Me t-Glu-Hi s - Phe-D- ly s - Amf Rf* = 0,42 H-Met-Gly-His-Phe-D-lys-HPEA Rf* =0,35 *Rf i Bu:Py:Ac:¥a (2:3/4:1/4:1) på Si02.

Eksempel XI.

Sulfoner af Met- eller desamino-Met-holdige peptider 1. 175 mg af peptidet H-Met-Glu-His-Phe-D-lys-Phe-OH opløses i en blanding af 0,5 ml vand, 0,1 ml 4 N perchlorsyre, 0,02 ml 0,5 M ammoniummolybdæt, hvorefter 0,06 ml 30 $ig Hg Og tilsættes. Blandingen omrøres ved en temperatur på ca. 10°C i 2 timer og fortyndes derpå med 25 ml t-butanol/vand, hvorefter der tilsættes "Dowex" ® i acetatformen. Efter 30 minutters omrøring affiltreres ionbytteren og filtratet lyophiliseres, hvilket givet H-Met(-*02)-Glu-His-Phe-D-lys-Phe-OH.

Rf i Bu:Ac:Wa (4:1:1) = 0,25 på Si02.

2. På samme måde fremstilles følgende sulfoner:

Peptider Rf på Si02 (Bu:Ac:Wa 4:1:1) Η-Met (-»02) -Gly-His-Phe-D-lys-Phe-Gly-OH 0,23 H-Met (->02) -Glu-His-Phe-D-ly s-PPA 0,32 desamino-Met (-»02 )-Glu-His-Phe-D-lys-Phe-OH 0,33 desamino-Met (->02)-Glu-His-Phe-D-lys-!ra 0,37 36 145665 desamino-Met (^02)-Glu-His-Phe-D-lys-Amf 0,42 desamino-Met (-fC>2 ) -Glu-His-Ph.e-D-Arg-Trp-Gly-OH 0,27 H-Met(402)-Gln-His-Phe-D-Lys-Fhe-OH 0,29.

Eksempel XII.

Sulfoxider af Met- og desamino-Met-peptider 50 mg af peptidet, som skal oxideres, opløses i 5 ml eddikesyre, hvorefter der tilsættes 15 μΐ 30 $ig hydrogenperoxid.

Blandingen omrores ved 20°C i 1 time, hvorefter der tilsættes en suspension af 40 mg platinsort i iseddikesyre og blandingen omrøres i 50 minutter.

Efter filtrering afdestilleres eddikesyren i vakuum.

Den resulterende rest opløses i en blanding af t-butanol/vand (1:1) og lyophiliseres derpå.

På denne måde fås følgende sulfoxider:

Peptid Rf1 på Si02 H-Met (-+0)- Glu-Hi s -Phe -D-Ar g- OH 0,16 H-Met(40)-Gly-His-Phe-D-Iys-OH 0,20 H-Met(40)-Glu-His-Phe-D-lys-Irp-0H 0,19 H-Met (-vO) -Glu-His-Phe-D-Arg-Irp-Gly-OH 0,17 H-Met (-j-O) -Glu-His-Phe-D-lys-Phe-OH 0,19 H-Met (-40) -Glu-His-Phe-D-iys-PPA 0,24 H-Met(^O)-Glu-His-Phe-D-lys-Tra 0,17 desamino-Met (-40) -Glu-His-Phe-D-Iy s-Phe-OH 0,25 desamino-Met(»Oj-Glu-His-Phe-D-lys-Sra 0,22 desamino-Met (-10)-Glu-His-Phe-D-ly s-PPA 0,26

Rf i Bu:Py:Ac:Wa (4:3/4:1/4:1).

Eksempel XIII.

37 145665

Fremstilling af H-Met(l,-»Q)-Glu-His-Phe-D-lys-Phe-OH

Boc-l-Met(l,-»0)-OH fremstilles ved at omsætte Boc-azid med H-L-Met (l,->0)-0H, beskrevet i J. Biol. Chem. 169, 477 (1947)· Boc-L-Met (l,-*0)-0H: smeltepunkt 68°C; [a]p® = -58° (c = 1, DMF).

Denne N-beskyttede aminosyre omdannes til den tilsvarende N-hydroxy= succinimidester ved behandling med DCCI og HOSu. Den opnåede aktive ester anvendes straks til en koblingsreaktion med H-Glu(OtBu)-His-Phe-D-Lys(Boc)-Phe-OH (opnået ved kondensation af Z-Glu(OtBu)-His-azid med H-Phe-D-Lys(Boc)-Phe-OH efterfulgt af hydrogenering af Z-delen) i nærværelse af N-ethylmorpholin. Det resulterende peptid= derivat: Boc-l-Met(1,40)-Glu(OtBu)-His-Phe-D-Lys(Boc)-Phe-0H,

Rf i Bu:Ac:¥a (4:1:1) = 0,45 på Si02, får fjernet beskyttelsen på samme måde som tidligere beskrevet ved hjælp af TEA og omdannes til acetatet: H-1-Met(l,AO)-Glu-His-Phe-D-lys-Phe-OH,acetat:

Rf i Bu:Py:Ac:Wa (2:3/4:1/4:1) = 0,23.

På samme måde fremstilles peptid-sulfoxidet H-I-Met(d,-»0)-Glu-His-Phe-D-lys-Phe-OH,acetat udfra Boc-l-Met(d,-*0)-OH, smeltepunkt 135°C.

Eksempel XIV.

Zinkkomplekser

Af en opløsning af zinkchlorid indeholdende 50 mg zink per ml tilsættes 1,5 ml til en opløsning af 31,5 mg NagHPO^,2H20 i 30 ml destilleret vand. Det dannede bundfald af zinkphosphat opløses igen ved at tilsætte 4 N HC1. Derpå tilsættes 175 mg NaCl og 0,5 g ben= zylalkohol til denne blanding. Herefter opløses 1,5 mg af hexapep= tidet H-l-Met-l-Glu-l-His-l-Phe-D-lys-l-Phe-OH i denne blanding, hvorpå der tilsættes tilstrækkeligt 1 N natriumhydroxid til at indstille blandingens pH-værdi på 6,5. Herefter bringes voluminet på 50 ml med destilleret vand.

1 ml suspension indeholder:

Claims (1)

1. 38 145865 30 μg hexapeptid 1.5 mg zink 0,63 mg Na2HP0^,2H20 3.5 mg NaCl 10 mg benzylalkohol. Analogifremgangsmåde til fremstilling af et peptid af den almene formel A-L-Glu(X)-L-His-L-Phe-D-Lys(eller D-Arg)-Y hvori A betegner H-L-Met, H-D-Met, H-L-Met(0), H-D-Met(0), H-L-Met(02), H-D-Met(02)f des-amino-Met, des-amino-Met(0), des-amino-Met(02) eller gruppen H2N-B-C0-, hvori B er en ligekædet eller forgrenet alkylengruppe med henholdsvis 1-6 og 2-6 carbon-atomer, X betegner gruppen -OH eller -NH2, og Y betegner gruppen hydroxy, -L-Trp-0H, -L-Phe-OH, -L-Trp-Gly-0H, -L-Phe-Gly-OH, en (N-phenylalkyl)-aminogruppe af formlen -NH-Alk *—(/ y eller en (Ν-β-indolylalkyl)-aminogruppe, hvori Alk betegner en ligekædet eller forgrenet alkylengruppe med henholdsvis 1-6 og 2-6 carbonatomer, R betegner hydrogen, halogen, hydroxy eller en alkyl- eller alkoxygruppe med 1-4 carbonatomer, eller funktionelle derivater deraf i form af farmaceutisk acceptable syreadditionssalte, eller N-acylderivater afledt af en alifatisk carboxylsyre med 1-6 carbonatomer, eller usubstituerede amider eller C-^-Cg-alkylsubstituerede amider, eller estere afledt af alifatiske eller aralifatiske alkoholer med 1-18 carbonatomer, eller metalkomplekser af de ovennævnte peptider med et tungt opløseligt salt, hydroxid eller oxid af et metal, kende-