DK143248B - Fremgangsmaade til fremstilling af et produkt med biologisk aktivitet over for et humant animalsk eller vegetabilsk organ - Google Patents

Description

(19) DANMARK

® (12) FREMLÆGGELSESSKRIFT (11) 143248 B

DIREKTORATET FOR PATENT- OG VAREMÆRKEVÆSENET

(21) Ansøgning nr. W76 (51) |nt.CI.3 A 61 K 35/74 (22) Indleveringsdag 7· jan. 1976 C12 P1/04 (24) Løbedag 7· jan· 1976 // C 12 N 15/00 (41) Aim. tilgængelig 9* Jul. 1976 (44) Fremlagt 5· aug. 19^1 (86) International ansøgning nr. - (86) International indleveringsdag - (85) Videreførelsesdag - (62) Stamansøgning nr. -

(30) Prioritet 8. jan. 1975* 129/75, CH

(71) Ansøger ETABLISSEMENT ANI, Vaduz, LI.

(72) Opfinder Roger _Paul, ER.

(74) Fuldmægtig Patentagentfirmaet Magnus Jensens Eftf.

(54) Fremgangsmåde til fremstilling af et produkt med biologisk aktivi= tet over for et humant, animalsk eller vegetabilsk organ.

Opfindelsen angår en fremgangsmåde til fremstilling af et produkt med biologisk aktivitet over for et animalsk, humant eller vegetabilsk organ, hvilken fremgangsmåde er ejendommelig ved det i kravets kendetegnende del anførte.

D De produkter, som fås ved iværksættelse af fremgangsmå- ® den ifølge opfindelsen, udgøres ikke af definerede kemiske for- \j bindeiser og heller ikke af en blanding. De kan kun defineres ^ ved deres fremstillingsmåde og deres biologiske egenskaber.

- Det har vist sig, at den gramnegative fakultativt ^ aerobe polymorfe bakterie med meget kort form, som er isoleret D af floraen i en lægeigles fordøjelseskanal, efter mutation og ved industriel dyrkning muliggør fremstillingen af produkter med flerfoldige og specifikke biologiske aktiviteter.

143248 - 2 -

Denne bakterie, som er beslægtet med familien af Ente-robacteriaceae, skal beskrives og karakteriseres i det følgende ligesom den muterede stamme, NCIB 11.144, som anvendes ved fremgangsmåden ifølge opfindelsen. Ligeledes skal i det følgende forklares fremgangsmåden til fabrikation af et produkt, og dets biologiske egenskaber skal forklares.

Substratet til dyrkning af oprindelsesbakterien med henblik på frembringelse af den nye stamme podes enten i reagensglas eller i petriskåle. Inkubationen i varmeskab udføres ved en temperatur på 18-22°C, og dens varighed er 2-3 dage.

Man isolerer da let efter nogle ompodninger den yderst korte næsten coccusformede gramnegative bakterie. Undersøgt i frisk tilstand er den meget bevægelig. Den foreligger som oftest som uafhængige kim ved vilkårlig orientering.

Identifikationsforsøgene for oprindelsesbakterien (samtidig med den for den muterede stamme) skal angives nedenfor i en tabel, som gør det muligt bedre at klargøre sig forskellene i henseende til morfologi og reaktioner mellem den muterede stamme og oprindelsesstammen.

Når inkubationen af bakterien (renisoleret stamme) er foretaget ved en temperatur på ca. 18°C med en varighed på 3-5 dage, foretager man mutationsdyrkningen.

Med henblik på opnåelsen af en muteret stamme, som forventes ved industriel dyrkning at give et højt udbytte af aktivt produkt og biologiske faktorer, er der udført talrige undersøgelser af aktiviteten af de muterede stammer hidrørende fra successive forsøg. Deraf udledes, at mutationsprocessen bør udføres som følger:

Man fremstiller først mutationssubstratet.

Dette substrat bør være fattigt på totalt nitrogen, men forholdsvis rigt på svovlholdige aminosyrer, hvilket er en ufravigelig betingelse, idet stammerne har vist sig mere aktive i det industrielle dyrkningssubstrat, som skal beskrives nedenfor«

En relativ isotonicitet af substratet opnås ved tilsætning af natriumchlorid.

Nedenstående eksempel angiver en sammensætning af mutationssubstratet .

143248 - 3 -

Pepton 2 g

Methionin 0,5 - 1 g

Cystin 0,5 - 1 g

NaCl 5 g vand 1000 ml

Den benyttede pepton kan være pancreas, trypsin- eller papalnpepton fra kød eller casein eller fortrinsvis en pepsin-pepton. Man indstiller pH-værdien til 6,8 med natriumhydroxidopløsning.

Ved fremgangsmåden til mutationsdyrkning kan peptonen i sin egenskab af nitrogenkilde erstattes med ethvert andet passende nitrogenholdigt materiale af animalsk eller vegetabilsk oprindelse, idet det væsentlige er, at substratet er forholdsvis rigt på svovlholdige aminosyrer.

Methioninet og cystinet kan helt eller delvis (i praktisk taget de samme vægtmængder) erstattes med andre svovlholdige aminosyrer såsom glutathion, cystein eller homocystein.

Det ovenfor beskrevne dyrkningssubstrat filtreres fortrinsvis efter at være fremstillet ved opløsning af de forskellige bestanddele i vand. Man kontrollerer pH-værdien og indstiller den eventuelt til 6,8.

Dette substrat steriliseres derpå ved 120°C i ca, 30 min.

Efter afkøling af substratet poder man dette med et podemateriale, som er taget fra den rene oprindelsesstamme, som er dyrket på fast albuminøst substrat af animalsk oprindelse, efter 3-5 dages inkubation som angivet ovenfor under teknikken for isolering og dyrkning af bakterien.

Mutationskulturen anbringes i enhver passende beholder såsom reagensglas, erlenmeyerkolber eller andre kolber. Den udvikler sig hurtigt. Mutationen opnås efter inkubation i 9-12 dage ved en temperatur på 18-22°C.

Den muterede stamme vedligeholdes derpå ved ompodning hver uge på friskblod-agar og i dyrkning ved 18°C ~ 2°C.

Disse kulturer kan derpå opbevares i lyofiliseret tilstand eller i køleskab i længere eller kortere tid, endog i årevis, hvilket gør det muligt at sikre stammens videreleven, og det så meget lettere som fornyede og successive passager over mutationssubstrat som beskrevet ovenfor regenererer og forynger stammerne, hvis dette er nødvendigt.

143248 - 4 -

Man foretager derefter den industrielle dyrkning, som udgør fremgangsmåden ifølge opfindelsen.

Denne industrielle dyrkning foretages på følgende substrat, som skal tjene som illustrerende eksempel: pepton 18-20 g

NaCl 5 g ammoniakalsk jerncitrat, 1% 4 ml monokaliumphos-phat, 1% 1 ml dinatrium- phosphat, 1% 4 ml vand 1000 ml

Man indstiller pH-værdien på 6,8 ved hjælp af natriumhydroxidopløsning .

Denne sammensætning af substratet i henseende til mineralsalte er det væsentlige element i recepten for det industrielle dyrkningssubstrat, fordi den befinder sig ved oprindelsen til de biosynteser, hvoraf de biologiske egenskaber af substratet under hele udviklingsforløbet udløber.

Den benyttede pepton kan være pancreas-, trypsin- eller papainpepton af kød eller casein eller fortrinsvis en pepsin-pepton.

Peptonen kan i sin egenskab af nitrogenkilde ved den industrielle dyrkningsmetode erstattes med ethvert andet passende nitrogenholdigt materiale af animalsk eller vegetabilsk oprindelse, idet det væsentlige hele tiden er, at den mineralske sammensætning af substratet som angivet ovenfor respekteres. En del af peptonen kan eventuelt erstattes med de frie aminosyrer, som blev benyttet ovenfor til tilvejebringelse af substratet for den første mutation.

Det substrat, hvis sammensætning er beskrevet ovenfor, kompletteres med et "animalsk væv".

Udtrykket "animalsk væv" skal her tages i sin bredeste forstand. "Animalsk væv" betegner altså lige såvel "blodvæv", altså blod, taget i sin helhed eller i alene en del af elementerne (blodceller, serum, plasma, fibrin) som ethvert andet dyrisk materiale udtaget fra musklerne, organerne, kirtlerne, knoglerne eller en bestemt del af det dyriske legeme.

- 5 - 143248 Vægten af den tørre ekstrakt hidrørende fra dette "dyriske væv" er en sådan, at den repræsenterer 10-50% af vægten af de peptoner, som er benyttet i basisformen for det industrielle dyrkningssubstrat, som er præciseret ovenfor.

Det dyriske væv erstattes til andre fabrikationer eventuelt med interne sekreter af animalsk oprindelse, f.eks. amni-otisk væske. I dette tilfælde tilsætter man supplerende pepton til opnåelse af samme totale nitrogenindhold.

Det animalske væv fremstilles efter de normale regler for opoterapeutiske præparationer, dvs. i affedtet tilstand og ved lav temperatur indtil anvendelsesøjeblikket.

I tilfælde af anvendelse af "blodvæv" benyttes blodet enten i sin helhed (stabiliseret eller ikke) eller i en eller flere af sine bestanddele.

Det animalske væv formales straks. Disse operationer udføres under iagttagelse af maksimal forsigtighed til sikring af asepti i den videst mulige udstrækning.

Ifølge en anden udførelsesmåde benytter man i stedet for animalsk væv i frisk tilstand animalsk væv, som er lyofiliseret og sterilt.

Det animalske væv sættes til peptonsubstratet, der er fremstillet som angivet ovenfor. Man kontrollerer pH-værdien og indstiller den eventuelt til ca. 6,8.

Den industrielle dyrkning foretages i enhver passende beholder, f.eks. i koniske erlenmeyerkolber eller kolber af enhver dimension i overensstemmelse med det ønskede bouillonrumfang. Til betydelige produktioner udføres dyrkningen eventuelt i ethvert i og for sig kendt materiel, som kan steriliseres, og hvor de forskellige operationer (podning, prøveudtagning, pH-indstilling) kan foretages aseptisk.

Substratet steriliseres i autoklav ved 120°C i ca.

30 min.

Efter afkøling af substratet poder man med et sediment med et rumfang på fortrinsvis fra 1/20 til 1/200 af rumfanget af det industrielle substrat, som skal podes. Dette sediment med en sammensætning i nærheden af sammensætningen af det industrielle substrat (men uden tilsætning af animalsk væv) hidrører 143248 - 6 - fra dyrkningen efter podningen med podemateriale udtaget fra kulturer til vedligeholdelse af den muterede stamme, NCIB 11.144.

Dyrkningen foretages ved en temperatur på 18-20°C i to uger.

Den bouillon, som er tilvejebragt ved slutningen af den industrielle dyrkning, tjener til opnåelse af produktet med biologisk aktivitet.

Til udførelse af denne fremstilling filtreres bouillonen aseptisk.

Ifølge en anden udførelsesform filtreres bouillonen på en vilkårlig i og for sig kendt måde (på papir, på stof, under vakuum) og tilsættes et passende antiseptisk stof til den brug, hvortil den er beregnet.

Oprindelsesbakterien og den muterede bakterie, NCIB 11.144, har følgende karakteristik:

Aktivitet af kulturer ved forskellige temperaturer.

Oprindelses- Muteret bakterie bakterie ved 10°C + - + ved 15°0 + + + ved 18°C + + + + + + + ved 25°C + + ved 30°C - + ved 37°C - + -

ved 42°C

Morfologiske karakteristika.

Oprindelsesbakterier Muterede bakterier let polymorfisme fra coccus- udtalt polymorfisme = kort bakform til formen af en meget terie, til længere form (længde kort bakterie, bevægelig, som varierende fra simpel værdi til oftest i afhængige kim med det dobbelte = fra 3 til 6 μ) vilkårlig orientering, gram- med nogle bacillære former, som negativ, fakultativt aerob kan have en længde på 10 μ, be vægelig, gramnegativ, fakultativt, aerob - 7 - 143248

Biokemiske karakteristika

Oprindelsesbakterie Muteret bakterie catalase - + oxydase + + urinstof - - glucose uden gas + med gas + lactose o-nitrophenylgalactopyranosid + +

Hg S - + mannitol + + bevægelighed + + EDO + + indol + + no2 + + citrat-agar + + xylose - + arabinoae - - levulose + + gelatine + +++ friskblod-agar gråbrune kolonier i lysere grå kolonier, pladeform, ingen el- tæt cremekultur, ler kun ringe hemo- fuldstændig hemolyse lyse i løbet af 12-24 tim.

koaguleret ægge- uden virkning hurtig lyse med albumin flydendegørelse, som udstrækker sig i bred zone koaguleret striber meget svagt dybt hulede striber, okseserum hulede, meget svag hurtig udvikling, lyse meget kraftig lyse

Udvikling af pH-værdierne af dyrkningsbouilloner.

Mutationskultur Industriel kultur pH-værdi 6,8 - 7,2 6,8 - 8,8 143248 - 8 - I betragtning af morfologien af mikroorganismen ITCIB 11,144 og dens oxidase "+" er der foretaget sammenligning med mikroorganismer fra "Familie I BACILIACEAE" beskrevet i Bergey's Manual of Determinative Bacteriology, 8, udgave.

Sammenligningerne er udført med de mikroorganismer, som synes at stå NCIB 11,144 nærmest, og især dem, som har den egenskab at flydendegøre gelatine.

Der angives kun den eller de væsentlige biokemiske egenskaber hos de sammenlignede mikroorganismer, som adskiller sig fra ITCIB 11.144, med angivelse af side, tabel og nummer iBergey's Manual,

Familie I BACIllACEAE.

gruppe I side 531 ff, tabel 15,3, 15,5 og 15.6 4 - B, cereus mannitol - indol - (ikke nævnt i Bergey) 13 - B. alvei nitrater ikke reduceret - man ni to 1- citrat - (ikke nævnt i Bergey) 16 - B, brevis indol - citrat - (ikke nævnt i Bergey)

Gruppe II side 545 32 - B, laevo- lacticus nitrater ikke reduceret - ringe eller ingen vækst i 5$'s NaOl 43 - B, macro- ides tabel 15.6 side 542

Egenskaber overensstemmende med B, sphaericus inannitol -indol -

Hedenfor følger nogle karakteristika for de komplekser med biologiske aktiviteter, som fås ved fremgangsmåden ifølge opfindelsen: reaktion med ninhydrin: negativ reaktion med biuret: positiv reaktion med kogende H2S0^: mørk orange Undersøgelsen foretages in vitro for komplekserne med biologiske aktiviteter. Forsøg har desuden vist, at den antimikrobi-elle og antivirale aktivitet in vivo er betydeligt forøget og mere effektiv som følge af, at der er sat formalet dyrisk væv svarende til vævene af de organer, som mere specielt skal behandles, til det industrielle dyrknings substrat, .som angivet nedenfor.

143248 - 9 -

Forsøgene med ninhydrin og biuret på de opnåede produkter har vist, at proteinerne ikke er særlig meget nedbrudt, da der ikke forekommer nogen frigørelse af aminosyrer. Derimod er der en nedbrydning til peptider, som har bevaret tilstrækkelig specificitet til at virke som medikamenter, men som ikke giver proteinchok i tilfælde af indgift ad parenteral vej, hvad enten intravenøst eller intramuskulært.

Blandt de generelle biokemiske egenskaber af de opnåede produkter belyses følgende proteolytiske egenskab, som er et af særkendemærkerne som følgers 1. produktet med biologisk aktivitet steriliseres først med et antiseptisk stof med det minimumindhold, som fører til destruktion af de muterede bakterier, 2. en platintråd (eller en tråd af ikke-oxyderbart metal, f.eks. en tråd som normalt benyttes til udtagning med henblik på podning af dyrkningssubstrater) neddyppes i substratet, hvortil der i forvejen er sat antiseptisk stof, 3. aseptisk, som hvis det drejede sig om en podning, foretages et stik i næringsgelatinen i et reagensglas med normal kultur, 4. reagensglasset holdes i varmeskab ved 18°C.

Selv ved denne temperatur, hvor den enzymatiske aktivitet er meget afbremset, konstateres en flydendegørelse, som først optræder på overfladen (omkring det punkt på overfladen af næringsgelatinen, som har modtaget stikket), og som udbreder sig med form som en handskefinger og endog kan gå så vidt som til fuldstændig flyd end egørelse.

Denne flydendegørelse ved proteolytisk virkning svarer til en slags "skånsom (begrænset) lyse". Den frembringer i virkeligheden en helt klar og viskos væske, som ikke på nogen måde ligner den væske, som hidrører fra en flydendegørelse af bakteriolytisk oprindelse, hvilken væske er langt mere flydende og uklar.

Denne karakteristiske egenskab ved de opnåede produkter kompletterer reaktionerne med ninhydrin, biuret og svovlsyre, som er beskrevet ovenfor til identifikation af disse produkter.

143248 - 10 -

Eksempel på fremstilling af et "Pancreas11-produkt.

To liter dyrkningssubstrat fremstilles således: - peptoner 36 g - ammoniakalsk Jerncitrat, 1% 8 ml - monokaliumphosphat, 1$ 2 ml - dinatriumphosphat, 8 ml - destilleret vand ad 2000 ml - affedtet, formalet svinepancrees 40 g - pH-værdi indstillet.til 6,8

Blandingen steriliseres i 30 min. ved 120°C. Efter afkøling podes substratet med ca. 50 mg dyrkningsbouillon for muteret bakterie (rumfanget på bunden af en kolbe fra 20 til 36'timer).

Efter to uger ved 18°C standses dyrkningen ved tilsætning af en 30%’s formaldehydopløsning i tilstrækkelig mængde til opnåelse af et formolindhold på max. 1%. Substratet omrøres i nogle timer før filtrering. Det klare filtrat opbevares fortrinsvis ved en temperatur på 4-18°C og i mørke.

Undersøgelse af virkningen af Pancreas—produkt.

1. Porsøg på kanin.

a) I det første trin foretager man et forsøg med hyper-glycemi fremkaldt på to kaniner, idet man i maven på dem indfører en 30#'s glucoseopløsning i en mængde på 4 ml pr, kg.

Glucose fastende Glyoemi i g/liter 20*'s JES/1- 1/2 «« 1 11/2 2«».

opløs- begyndelse *ime ning___ _ _ kanin nr.l 1,400 kg 5,6 ml 0,96 1,99 0,92 1,10 0,90 kanin nr.2 1,500 kg 6 ml 0,74 1,70 0,80 0,95 0,70 b) 4 dage senere modtager disse to kaniner, hvis reaktioner var ens, samme kvantum glucose som ovenfor, men nr. 1 modtager ad intravenøs vej 0,28 enheder insulin (0,7 ml i en fortynding på 1/50 af en opløsning på 20 enheder/ml), og nr, 2 modtager 0,75 ml "Pancreas-produkt” fortyndet til 1/100 i fysiologisk vand en halv time efter glucoseabsorptionen.

Resultaterne er som følger: 143248 - 11 -

Glycemi Glycemi efter glycoseindglft !/2 time 1 time 1 1/2 2 1/2 tilstand Injektion _ _ time 2 tim. tim« kanin insulin nr. 1 1,10 0,28 enh. 2,05 1,40 0,90 0,45 0,82 kanin Pancreas- nr. 2 0,85 kompleks 0,90 0,80 0,85 0,80 0,75 ml fortyndet til 1/100

Virkningen af insulinet har med en vis forsinkelse fremkaldt et voldsomt fald i glyoemien, medens "Pancreas-produktet" har spillet en rolle soa regulator. Er der altså ikke noget væsentligt fald i niveauet for glycemi, er der ikke nogen vanskelighed under hyperglycemi.

2. Porsøg nå menneske.

På en sund forsøgsperson udføres prøven med provokeret hyperglycemi med et interval på 48 timer (indgift af 50 g glucose), den anden gang har forsøgspersonen absorberet: - dagen før, om aftenen, to dråber "Pancreas-produkt" - en time før indgiften af glucose, to dråber "Pancreas-produkt** (Porsøg 1 er uden, forsøg 2 er med pancreas-produkt).

Glycemi i g/liter.

i fastende 1 1/2 tilstand 1/2 time 1 time time 2 timer 3 timer 1 2 hyperglycemi 0,92 1,45 1,20 1,05 0,80 1,08 2 hyperglycemi 0,80 1,15 1,00 0,96 0,80 0,88

Pette forsøg har gjort det muligt at vise en stimulerende virkning af "Pancreas-produktet". Porsøget på kanin viser på samme tid som denne stimulerende effekt en regulerende effekt, hvilket er meget vigtigt i tilfælde af behandling af diabetikere, da der er mindre risiko for brat overgang i hypoglycemi.

En stimulerende effekt angiver, at funktionen af et organ påvirkes på en sådan måde, at den normale funktion starter, og en regulerende effekt betyder, at en overfunktion kan reduceres til en normal funktion.

143248 - 12 -

Sammensætningen af mutationssubstraterne og de industrielle dyrkningssubstrater er blot angivet som eksempler, idet mutationssubstratet er defineret ved sin fattigdom på nitrogen og en relativ berigelse med svovlholdige aminosyrer, medens det industrielle dyrkningssubstrat er defineret ved sin særlige sammensætning med hensyn til mineralsalte, og i begge tilfælde kan det nitrogen, som hidrører fra peptonerne, hidrøre fra en anden kilde, f.eks. næringsbouillon, idet man som internt sekret af animalsk oprindelse benytter ethvert andet sekret såsom ammoni-otisk væske. Dyrkningerne foretages enten i varmeskab eller på vandbad eller i klimatiseret rum eller zone. Mutationsdyrkningerne og/eller de industrielle dyrkninger kan foretages i enhver kendt beholder med eller uden omrøring ved luftning under indifferent gas eller under isolerende væskelag, idet den muterede bakterie vilkårligt er aerob eller anaerob, alt efter dyrkningssubstratet. Inkubationstemperaturerne i de forskellige trin kan variere med 2°C mere eller mindre end dem, som er angivet i beskrivelsen ovenfor. pH-værdieme af slutprodukterne med aktiviteter kan indstilles i afhængighed af den terapeutiske brug, hvortil de er beregnet. Produktet kan underkastes en fysisk eller kemisk behandling til svækkelse eller eliminering af antiinfektionsaktiviteter under bibeholdelse af virkningen som medikament og stimulator.

Det er blevet bemærket, at produktet har en særlig affinitet og en særlig specificitet, selv indgivet per os og så meget mere ved anvendelse ad parenteral vej, for de væv, kirtler eller organer, som det delvis hidrører fra som følge af komplementeringen af det industrielle dyrknings substrat med disse væv, kirtler-eller organer af animalsk oprindelse. Produktet er således rettet mod disse pågældende væv, kirtler og organer, og den effektive aktivitet af disse forskellige biologiske faktorer og antiinfek-tionsfaktorer, som er tilvejebragt under den industrielle dyrkning, er i høj grad forøget.

Således vil det produkt, som fås med dyrisk levervæv, være velegnet som basis til behandling af leversygdomme, idet det virker i sig selv og tillige som leverstimulator.

Det er bemærkelsesværdigt, at disse produkter fortyndet på behørig måde kan anvendes per os i form af drikke-kelige opløsninger. De kan tillige benyttes i opløsninger til anvendelse ad parenteral vej. Desuden kan de i den tilstand, hvori de - 13 -

1Λ 3 2 Λ S

fås ved slutningen af den industrielle dyrkning, anvendes direkte til fremstilling af produkter til indgift per os eller i fast form (dragées, piller, tabletter, oblater).

I samme eller i fortyndet tilstand kan de yderligere indgå i recepter på stikpiller i de tilfælde, hvor man vil unddrage det terapeutiske produkt indvirkningen af fordøjelsesvæskerne, men hvor man ikke vil anvende produktet parenteralt.

Desuden er det yderligere muligt at lyofilisere produkterne med henblik på opnåelsen af basisprodukter, som benyttes i sammensatte recepter eller beregnet til at benyttes i opløsninger til brug på stedet.

Til kosmetisk brug kan de opnåede produkter inkorporeres i creme eller salve.

De produkter, som fås ved fremgangsmåden ifølge opfindelsen, med biologiske aktiviteter over for animalske væv egner sig til talrige terapeutiske anvendelser. De kan især forenes med et aktivt medikament med henblik på forøgelse af dettes aktivitet. De egner sig til benyttelse i alle medikamentkomplekser, som kan indgives ad parenteral eller oral vej, men ofte kan produkterne benyttes alene under hensyn til deres egen specificitet.

Til behandling af lungetuberkulose kan man f.eks. parallelt og samvirkende benytte et produkt på basis af lungevæv og et produkt på basis af blod. I tilfælde af nyretuberkulose benytter man parallelt og samvirkende et produkt pa basis af nyrevæv og et produkt på basis af blod.

De ved fremgangsmåden ifølge opfindelsen opnåede produkter kan ligeledes benyttes i kosmetikken, på hvilket område effekterne af organerne er særlig bemærkelsesværdig, idet hudsygdomme påvirkes på en sådan måde, at der atter fås normal hud efter behandlingen.

Fremgangsmåden ifølge opfindelsen kan også benyttes til tilvejebringelse af en plantestimulator, hvis fabrikationsejendommeligheder er som følger: Intet ændres i fremgangsmåden oven for, men i stedet for at tilsætte et animalsk væv i peptonsubstrat tilsætter man formalede unge kimplanter. Dqt substrat, som fås efter dyrkningen, tilsættes et passende antiseptisk stof i meget vidtgående vandig fortynding, og man får en stimulator for vegetationen.