DK142912B - Fremgangsmåde til fremstilling af 7-aminocephalosporansyre eller derivater heraf. - Google Patents

Description

(11) FREMLÆGGELSESSKRIFT 142912 DANMARK (BDlnt. Cl.3 C 07 D 501/18 UMΠίνίΜΠΙΝ. c 07 D 501/04 «(21) Ansøgning nr. 5720/68 (22) Indleveret den 1. au®* 1^68 (24) Løbedag 1 . aug. 1968 (44) Ansøgningen fremlagt og . 1 ng) fremlaeggelsesskriftet offentliggjort den 25· leu* -7

DIREKTORATET FOR

PATENT-OG VAREMÆRKEVÆSENET <3°> Prioritet begæret fra den

7. aug· 1967, 6710855, NL

(71) KONINKLIJKE NEDERLANDSCHE GIST- EN SPIRITUSFABRIEK N.V., Delft, NL.

(72) Opfinder: Helmut Wilhelm Otto Weissenburger, 52, Cromhoutlaan, Rijs® wijk (Z.H.), NL.

(74) Fuldmagtig under sagens behandling:

Ingeniørfirmaet Budde, Schou & Co.

(54) Fremgangsmåde til fremstilling af 7-aminocephalosporansyre eller derivater heraf.

Den foreliggende opfindelsen angår en særlig fremgangsmåde til fremstilling af 7-aminocephalosporansyre eller derivater deraf med formlen

S

H,N-.-S' ''V,

/-NN^~CH2"R

0 COOH

hvori R betegner hydrogen, acyloxy eller -SR^, hvor R^ repræsenterer en eventuelt substitueret aliphatisk, aromatisk eller heterocyclisk gruppe, ved hvilken fremgangsmåde en tilsvarende 7N-acylamidocephalo- 2 142912 sporansyre, hvis funktionelle gruppex- i acyIdelen er blokeret, este-rificeres ved sin fri carboxylsyregruppe, behandles med et middel, der danner en iminobinding, hvorpå der indføres en etherbinding ved iminocarbonatomet, hvorefter iminodobbeltbindingen hydrolyseres eller alkoholyseres, og estergruppen spaltes under dannelse af en fri carboxylsyregruppe.

7-aminocephalosporansyre fremstilles ifølge britisk patentskrift nr. 953695 ved 7N-deacylering af cephalosporin C, som har formlen I, hvori R er acetoxy og 7-aminogruppen er acyleret med en 4-amino-adipoylgruppe.

7-aminodesacetoxycephalosporansyre fås ifølge britisk patentskrift nr. 957569, ved katalytisk hydrogenering af cephalosporin C efterfulgt af sur hydrolyse. I det herved dannede produkt er R hydrogen i formel I.

7-aminocephalosporansyre og dens derivater, hvori R i 3-stil-lingen i formel I har ovenstående betydninger,, er. kendte forbindelser til brug som udgangsmateriale ved fremstilling af en række kendte cephalosporiner (de såkaldt halvsyntetiske cephalosporiner) ved 7--acylering, hvilke cephalosporiner normalt også har antibiotisk aktivitet af samme art som cephalosporin C.

Dette gør det muligt at erstatte α-aminoadipoylsidekæden i cephalosporin C med forskellige alternative sidekæder i 7-stillingen. Denne teknik er f.eks. beskrevet i beskrivelserne til britisk patent nr. 953695, 957543, 957569, 976225, 988527 og 1054806, som sigter på at tilvejebringe andre cephalosporiner ud over dem, der fås ved rene forgæringsmetoder.

Det er kendt at foretage 7N-deacylering af cephalosporiner ved ifølge fransk patentskrift nr. 1394820 at omdanne 7-amidogruppen i en cephalosporin til en iminohalogenidgruppe, som igen omdannes til en iminoethergruppe, som derefter hydrolyseres til fremstilling af 7-aminoforbindelsen. Man må omhyggelig beskytte 4-carboxylgruppen i cephalosporinen under deacyleringen, og det er kendt at blokere gruppen ved esterificering før iminohalogenidets dannelse og at fjerne den blokerende estergruppe efter deacylering, f.eks. ved hydrolyse eller hydrogenolyse, f.eks. som beskrevet i beskrivelserne til britisk patent nr. 1041985 og 1119806 (svarende til beskrivelserne til offentlig tilgængelige hollandske ansøgninger nr. 6401421 og 6513095}.

Ifølge britisk patentskrift nr. 1041985 beskyttes de frie amino- og carboxylsyregrupper i cephalosporin C eller et derivat deraf med formlen 3 142912 HOOC^ g

CH-(CH2)3-CO-HN —........s' X

h2N

1-

0 COOH

i hvilken R betegner en acyloxygruppe (der eventuelt kan hidhøre fra 4-carboxylgruppen til dannelse af en lactonring), før deacyleringen. Denne beskyttelse af de frie amino- og carboxylsyregrupper tjener til at hindre uønskede bireaktioner med reagenserne. Aminogruppen beskyttes især med phenacetyl, carbobenzoxy, 2,4-dinitrophenyl, N,N--phthaloyl- eller N-benzoyl, og carboxylsyregruppen beskyttes især med benzyl, methyl, p-methoxybenzyl, benzhydryl, tetrahydropyranyl eller p-nitrophenyl. Først og fremmest beskyttes disse reaktive grupper i 7-acylkæden ved omdannelse af cephalosporin C til dibenzhydrylesteren af Ν,Ν-phthaloylcephalosporin C.

Forbindelsen med de således beskyttede amino- og syregrupper behandles derpå med et middel til frembringelse af en iminohalogenid-gruppe i 7-amidostillingen med delformlen -C=N- lial hvor hal betyder halogenatom. Typiske iminohalogeniddannende midler er sådanne syrehalogenider som phosphorpentachlorid (PClg) eller phos-phoroxychlorid (POCl^) eller phosgen (COC^) .

Iminohalogenidet omdannes derefter til en iminoether med delformlen —C=N— i-alkyl ved behandling med en alkohol, især methanol eller ethanol.

Dannelsen af iminohalogenidet og/eller iminoetheren gennemføres fortrinsvis i nærværelse af en tertiær amin såsom triethylamin, pyridin eller dimethylanilin.

I det næste trin hydrolyseres iminoethergruppen i vandig sur eller basisk opløsning. Eksempler på hensigtsmæssige syrer er svovlsyre, phosphorsyre eller saltsyre, eller organiske syrer, såsom tri-fluoreddikesyre eller p-toluensulfonsyre. Herved fås den tilsvarende 4-ester af 7-aminocephalosporansyre.

For at nå frem til den tilsvarende forbindelse indeholdende en fri 4-carboxylgruppe må man dernæst fjerne den blokerende gruppe ved hydrogenolyse eller syrehydrolyse, f.eks. hydrogenolyse i iseddi 4 142912 ke med Pd på kul eller med vandig trifluoreddikesyre i anisol. Udbyttet bliver herved 24-59%.

Britisk patentskrift nr. 1119806 beskriver en lignende imino-halogenid/iminoether-deacyleringsfremgangsmåde, men foreskriver som udgangsmateriale specifikt Ν,Ν-phthaloyl-cephalosporin C-dibenzhydryl-ester. Dibenzhydrylesteren af 7-aminocephalosporansyre hydrolyseres med trifluoreddikesyre, som derefter omdannes til en trifluoracetat ved reaktion med en tertiær amin i et polært opløsningsmiddel, og 7--aminocephalosporansyren fås ved krystallisation fra opløsningsmidlet. Det er dog fortsat nødvendigt at fraspalte estergruppen ved 4-carb-oxyl-stillingen i et senere særskilt trin.

Fremgangsmåden ifølge den foreliggende opfindelse udgør i forhold til ovennævnte kendte teknik en forbedring ved 7N-deacyle-ring af cephalosporiner, ved hvilken der fås bedre udbytter af de ønskede produkter end de i britisk patentskrift nr. 1041985 og 1119806 beskrevne metoder, nemlig en forbedring af udbyttet til godt og vel 90% af det teoretiske. Samtidig undgås den hidtil nødvendige gennemførelse af et særskilt trin til fjernelse af beskyttelsesgruppen for 4-carboxyl.

Fremgangsmåden ifølge opfindelsen er ejendommelig ved, at nævnte esterificering af den fri carboxylsyregruppe i udgangsmaterialet gennemføres under dannelse af en di- eller trialkylsilylester-gruppe, og at iminobindingens dannelse og etherbindingens indførelse gennemføres ved en temperatur under -15°C.

Ved fremgangsmåden ifølge opfindelsen indføres specielt en dialkyl- eller trialkylsilylestergruppe som beskyttelse for den fri carboxylsyregruppe i cephalosporansyrens 4-stilling (der tælles ud fra S), og dette forløber uden væsentlige sidereaktioner, når temperaturen blot holdes under -15°C. Også den i sig selv kendte dannelse af iminobindingen som forstadium ved deacyleringen i 7-N-amidogruppen forløber uden særlige bireaktioner, når temperaturen blot holdes under -15°C. Af hensyn til opnåelsen af optimale udbytter foretrækkes dog ifølge opfindelsen, at iminoetherens dannelse gennemføres ved en temperatur under -30°C.

Til dannelsen af iminohalogenidet benyttes de sædvanlige syre-halogenider, jfr. ovenstående kendte teknik, og navnlig phosphorpenta-chlorid eller phosphoroxychlorid. Det var dog ikke uden videre til at forudse, at denne kendte reaktion også var glat gennemførlig med de her omhandlede med silylestere beskyttede 4-carboxygrupper hos 7--acylamidocephalosporansyrer. Det er nemlig rapporteret i bl.a. Tetrahedron Letters nr. 7 side 885-888 (1969) af L. Birkhofer og K. Krebs, 5 U2912 at PC15 kan omdanne silylestere til syrechlorider. Denne bireaktion ville ikke være særlig gunstig her, da den ville gribe ukontrollabelt ind i ovennævnte imidohalogeniddannelse og den efterfølgende imino-etherdannelse og afsluttende deacylering.

Det har nu vist sig, at der ikke forekommer en sådan ukontrollabel bireaktion; men at man tvært imod får et lang gunstigere og simplere reaktionsforløb, idet hydrolysen eller alkoholysen af imino- etherbindingen ved 7-N-iminoethergruppen spaltes under samtidig fraspal tning af silylestergruppen fra 4-carboxygruppen, således at man herved sparer ovennævnte særskilte deesterificering i et efterfølgende trin. Som helhed forenkles fremgangsmådesekvensen, og udbyttet forøges drastisk (fra 25-60% ved den kendte teknik til ca. 90% ved fremgangsmåden ifølge opfindelsen). Dette udgør et tydeligt teknisk fremskridt og en overraskende forbedring.

De ved fremgangsmåden ifølge opfindelsen fremstillede forbindelser med formlen I kan anvendes som mellemprodukter ved ovennævnte fremstilling af halvsyntetiske cephalosporiner med formlen

RCHN -N

III

j-ά 4,J-CH2-R

° COOH

hvori R er som defineret under formel I, og Rc er en inden for cephalosporankemien sædvanlig 7N-acylgruppe ved gængse acylerings-fremgangsmåder, ved hvilke man indfører en ønsket acylgruppe på 7-aminogruppen i forbindelser med formlen I.

Det kunne synes bagvendt først at deacylere og dernæst at acylere det samme sted (ved 7N-aminogruppen i cephalosporansyre og dens derivater); men dels er det vanskeligt at lave alle de kendte cephalosporiner ved billige forgæringsmetoder, og dels er visse halvsyntetiske cephalosporiner lettere tilgængelige, billiger og/ eller renere (lettere at isolere) end andre måske mere aktive eller af andre tekniske årsager mere ønskede cephalosporiner. Derfor er en sådan omacylering ofte ønsket og kan med de nu opnåede gode udbytter og det glatte forløb, der fås ved fremgangsmåden ifølge opfindelsen, gøres økonomisk fordelagtig som helhed.

På denne måde kan man fremstille en lang række værdifulde farmaceutisk aktive cephalosporiner med kendt struktur eller eventuelt forstadier hertil under anvendelse af de ved fremgangsmåden ifølge opfindelsen i stort udbytte rent fremstillede forbindelser med formlen I som mellemprodukt.

6 142912

Hensigtsmæssige udgangsmaterialer til brug ved fremgangsmåden ifølge opfindelsen er cephalosporin C og dens 3-substituerede derivater og andre 7-N-acylamidocephalosporansyrer eller 3-substituerede derivater deraf såsom cephalothin, der har formlen i[^ -ch2-co-hn--/ 'N.

y,-N 4 Å —CH „ -OCOCH

/ 2 3 COOH

og N-phenylacetyl-3-desacetoxy-7-aminocephalosporansyre. Det er også muligt at gå ud fra salte af en 7N-acylamido-cephalosporansyre eller 3-substituerede derivater deraf, f.eks. et natriumsalt. Sådanne cepha-losporiner er f.eks. også cephaloridin (kendt fra f.eks. fransk patentskrift nr. 1329119 og belgisk patentskrift nr 641338) og de halvsyntetiske cephalosporiner der er beskrevet i irsk ansøgning nr. 528/65, britisk patentskrift nr. 1104937, canadisk patentskrift nr. 793322, schweizisk patentskrift nr. 469740, USA patentskrift nr.

3502665 og 3252973 samt belgisk patentskrift nr. 664645, hollandsk tilgængelig ansøgning nr. 65/06818 og fransk patentskrift nr. 1465394. Disse kendte cephalosporiner lader sig behandle ved fremgangsmåden ifølge opfindelsen, dvs. når 4-carboxylsyregruppen i 7-aminocephalo-sporansyredelen er beskyttet ved omdannelse til en di- eller trialkyl-estergruppe, under deacylering ved 7N-acylamido-gruppen, nemlig ved de i og for sig kendte trin med dannelse af en iminohalogenidgruppe, der så omdannes til en iminoethergruppe (men ved lav temperatur) efterfulgt af opspaltning af iminoethergruppen (men med samtidig fraspalt-ning af silylestergruppen). I disse udgangsmaterialer kan acyldelen i cephalosporinerne være modificeret ved kemiske metoder eller ved forgæringsmetoder, f.eks. ved substituering af 4-aminogruppen i amino-adipoyldelen (hos cephalosporin C) til f.eks. en 4-carboxylbutanamido-gruppe, eller med en phenylacetyl- eller en phenoxygruppe hidrørende fra acylgruppen hos penicillin G eller penicillen V hos desacetoxy-cephalosporiner der fås ved ringudvidelse af penicillinsulphoxider.

Af betydning for valget af udgangsmateriale er, at dette skal kunne omdannes til et iminohalogenid, uden at gruppen R reagerer. Sådanne indifferente R-substituenter er ligeleds alment kendt hos cephalosporiner, der i 3-stillingen f.eks. kan være modificeret til en hetero-cyclisk thiomethylgruppe eller en carbamoyloxymethylgruppe, hvor acyl-oxy under definitionen på R f.eks. betyder acetoxy eller carbamoyloxy, og 7 142912 -SR1 f.eks. omfatter l,l-dimethyl-2-amino-2-carboxyethylthiogruppen og heterocycliske thiogrupper såsom thiadiazolylthio, eventuelt substitueret med alkyl, f.eks. 5-methyl-l,3,4-thiadiazyl-2-ylthio, eller azido.

4-silylesteren kan dannes ved anvendelsen af forskellige kendte silyleringsmidler såsom bifunktionelle silyleringsmidler som dialkyldihalogensilaner og trifunktlonelle silyleringsmidler som di-alkyldihalogensilaner. Dialkyldihalogensilaner er særlig hensigtsmæssige f.eks.:hexaalkylcyclotrisilazaner og octaalkylcyclotetrasila-zaner, og andre hensigtsmæssige silyleringsmidler er trialkylsilyl-acetamider eller bis-trialkylsilylacetamider.

På grund af pålidelighed, lav pris og god reaktivitet foretrækkes ifølge opfindelsen,at esterificeringen gennemføres ved behandling med trimethylchlorsilan eller med dimethyldichlorsilan.

Iminohalogenidet kan fremstilles ud fra silylesteren ved i og for sig kendte metoder under reaktion med et syrehalogenid såsom phosphorpentachlorid eller phosphoroxychlorid, ved en temperatur på under -15°C og især under -30°C. Hensigtsmæssige opløsningsmidler til anvendelse på dette fremgangsmådetrin er f.eks. methylenchlorid, chloroform (alkoholfri), dialkylether, tetrachlorethan og nitromethan.

Under iminohalogenidets omdannelse til iminoetheren eller under iminoetherens fraspaltning sker der samtidig fraspaltning af 4-silylgruppen, idet den frie-carboxylsyre dannes. Iminoetheren kan også spaltes, efterhånden som den dannes under behandlingen af iminohalogenidet med en alkohol. Iminohalogenidets alkoholyse kan gennemføres med ethanol eller methanol, men gennemføres fortrinsvis med en alkanol med 2 eller flere carbonatomer og med fordel ved en temperatur under -30°C.

Til at binde den under reaktionerne frigivne syre tilsættes en tertiær amin, f.eks. en trialkylamin, dimethylanilin, quinolin, lutidin eller pyridin til reaktionsblandingen. Mængden af anvendt tertiær amin kan være en sådan, at kun en del af den dannede syre bindes med syrebindingsmidlet. Fortrinsvis er den anvendte mængde tertiær amin en sådan, at reaktionsblandingens pH ikke ville være større end 1, hvis man kun satte vand og ikke yderligere neutraliseringsmiddel dertil. Mængden af tertiær amin, beregnet på f.eks.

PCl^ og et lille overskud af syredannende halogensilanderivat, er således mindre end fire ækvivalenter og med fordel mindre end tre ækvivalenter.

8 142912

Til illustration af fremgangsmåden ifølge opfindelsen tjener følgende eksempler.

Eksempel 1 2,51 g natriumsalt af cephalotin omdannes i 35 ral methylen-chlorid, hvortil der er blevet sat 1,60 ml dimethylanilin, med 0,6 ml dimethyldichlorsilan til 4-dimethylchlorsilylesteren af cephalotin.

Efter afkøling af opløsningen til ca. -55°C tilsættes der 1,35 g PCl^, som følge af hvilket temperaturen stiger til -40°C. I 2 1/4 time holdes temperaturen ved -40°C, hvorefter blandingen afkøles til -70°C.

Derefter tilsættes der 0,30 ml dimethylanilin til opløsningen, og efter ca. 1 1/2 minut tilsættes 15 ml butanol. Temperaturen holdes da ved -40°C.

Efter ca. 2 1/2 time hældes reaktionsblandingen ud i en blanding af 33 ml vand og 16,5 ml methanol, hvorefter blandingens pH indstilles til 3,5 ved hjælp af ammoniumbicarbonat. Efter ca. 20 timers o opbevaring filtreres bundfaldet ved 5 C. Rensning af produktet gennemføres ved opløsning i vand ved et pH på 7,3 og behandling med aktivt carbon.

Efter filtrering sættes der til den vandige opløsning 3/2 gange dens rumfang af methanol, hvorefter pH indstilles til 3,5 ved hjælp af 4 N saltsyre. De dannede krystaller filtreres fra ved ca. 5°C efter 2 timers lagring.

Udbyttet er 1,51 g 7-aminocephalosporansyre (92,5$ af det teoretiske).

Eksempel 2 3,12 g vandfri cephalosporin C suspenderes i 42 ml methyl-enchlorid, og der tilsættes under omrøring 1,1 ml triethylamin, 3,15 ml trimethylchlorsilan og 6,7 ml dimethylanilin til dannelse af den tilsvarende 4-trimethylsilylester.

Efter en reaktionstid på 1 time afkøles blandingen til ca. -60°C, hvorefter der tilsættes 3,3 S phosphorpentachlorid under grundig omrøring. Temperaturen stiger derpå til ca. -40°C.

Efter 2 1/2 times reaktion ved denne temperatur afkøles blandingen til ca. -70°C, og der tilsættes hurtigt 0,4 ml dimethylanilin og 30 ml n-butanol under omrøring, som følge af hvilket temperaturen stiger igen. Temperaturen holdes ved -40°C i 2 1/2 time.

9 142912

Derpå hældes reaktionsblandingen under grundig omrøring ud i en blanding af 33 ml vand og 16,5 ml methanol, hvorefter blandingens pH straks indstilles til 3,5 ved hjælp af ammoniumbicarbonat.

Efter ca. 20 timers lagring ved 5°C filtreres bundfaldet fra og vaskes med methylenchlorid og acetone. Krystallernes rensning gennemføres ved opløsning i vand ved et pH på 7,3 og behandling med aktivt carbon.

Efter filtrering sættes der til den vandige opløsning 3/2 gange dens rumfang af methanol, hvorefter pH indstilles til 3,5 ved hjælp af 4 N saltsyre. Efter 2 timers lagring filtreres krystallerne fra ved ca. 5°C.

Udbyttet er 1,86 g 7-aminocephalosporansyre (ca. 91$).

Eksempel 5 2,80 g N-phthaloylcephalosporin C suspenderes i 40 ml methylenchlorid, og der tilsættes 3,2 ml af en 20 vægt#’s opløsning af triethyl-amin i methylenchlorid og 2,85 ml dimethylanilin. Den praktisk talt klare opløsning omdannes derpå med 0,6 ml dimethyldichlorsilan til fremstilling af N-phataloylcephalosporin C, hvis carboxylsyregrupper begge er silyleret.

Efter en reaktionstid på 1 time afkøles blandingen til -50°C, og der tilsættes 1,4 g PCl^. Under fortsat grundig omrøring holdes temperaturen i 2 1/4 time ved -40°C, og derpå afkøles blandingen til-65°C. Nu tilsættes der hurtigt en blanding af 0,2 ml dimethylanilin og 25 ml n-butanol til reaktionsblandingen.

Blandingens temperatur holdes derefter i 2 timer ved -40°C, og blandingen ophældes derpå i en blanding af 30 ml vand og 15 ml methanol. Den nye blandings pH indstilles derpå til 3,5 ved hjælp af ammoniumbicarbonat. Efter ca. 20 timers lagring ved 5°C frafiltreres bundfaldet, vaskes med acetone/vand (1:1), methylenchlorid og acetone og tørres derefter.

Udbyttet er 1,18 g krystaller af 7-aminocephalosporansyre (84*).

Eksempel 4 2,23 g N-ethylpiperidinsalt af N-phenacetyl-3-desacetoxy-7- 142912 ίο -aminocephalosporansyre suspenderes i 18 ml methylenchlorid og omdannes efter tilsætning af 1,5 ml dimethylanilin med 1 ml trimethyl-ehlorsilan til den tilsvarende 4-silylester.

Efter 1 time afkøles blandingen til -50°C, og der tilsættes 1,1 g PCI,-. I 2 1/4 time holdes blandingens temperatur ved -40°C og sænkes derpå til -65 C. Til den afkølede blanding sættes en opløsning af 0,5 ml dimethylanilin og 12 ml butanol, og derpå holdes temperaturen ved -40°C i 2 1/4 time.

Reaktionsblandingen hældes derefter ud i en blanding af 55 ml vand og 17 ml methanol og pH indstilles straks på 5,5 ved hjælp af ammoniumbicarbonat. Efter ca. 20 timers lagring ved 5°C frafiltreres bundfaldet, vaskes med methanol/vand (1:1), methylenchlorid og acetone og tørres.

Udbyttet er 0,956 g krystaller af 5-desacetoxy-7-amino-cephalosporansyre (92$).

Eksempel 5 3,5 g (10 mmol) N-phenoxyacetyl-3-desacetoxy-7-aminocephalo-sporansyre suspenderes i 20 ml methylenchlorid. Efter tilsætning af 4,4 ml (35 mmol) dimethylanilin ved 25°C og 2,1 ml (17 mmol) trimethyl-ehlorsilan omrøres reaktionsblandingen i 15 minutter ved 32°C. Derpå afkøles blandingen til -45°C, hvorefter tilsættes 2,2 g (11 mmol) PC15· Dér omrøres herefter i yderligere et tidsrum på 75 minutter ved -30°C. Derefter sænkes temperaturen til -65°C, hvorefter blandingen omrøres 1 yderligere et tidsrum på 30 minutter.

Til den afkølede blanding tilsættes 11 ml isobutanol (118 mmol), hvorved temperaturen stiger til -50°C. Blandingen omrøres i yderligere 2 timer ved denne temperatur.

Efter at blandingen under stadig omrøring er hældt i 15 ml vand, indstilles den herved fremkomne blandings pH-værdi med en 8%'s NH^OH-opløsning til 7,8. De opståede lag adskilles, hvorefter det vandige lag vaskes med 20 ml methylenchlorid. Derpå indstilles det vandige lags pH hurtigt med IN saltsyre til 3,6. Efter afkøling til 0°C fra-filtreres 7-aminodesacetoxycephalosporansyren på et nutschtfilter, vaskes med vand og acetone og tørres i vakuum. Udbyttet udgør 1,97 g (92%) .