DE977478C

DE977478C - Process for the manufacture of injectable insulin preparations with delayed action

Info

Publication number: DE977478C
Application number: DEN8968A
Authority: DE
Inventors: Karl Petersen; Jorgen Schlichtkrull
Original assignee: Novo Terapeutisk Laboratorium AS
Current assignee: Novo Terapeutisk Laboratorium AS
Priority date: 1953-06-04
Filing date: 1954-05-27
Publication date: 1966-08-04
Also published as: CH326787A; GB751425A; DK87403C

Description

Verfahren zur Herstellung injizierbarer Insulinpräparate mit verzögerter Wirkung Die vorliegende Erfindung betrifft ein Verfahren zur Herstellung inj izierbarer Insulinpräparate mit verzögerter Wirkung.Process for the manufacture of injectable insulin preparations with delayed Effect The present invention relates to a method for producing injectables Delayed action insulin preparations.

Es sind klinisch verwendbare, injizierbare Insulinzubereitungen bekannt, die als aktiven Bestandteil amorph gefälltes Zinkprotamininsulin in wäßriger Suspension enthalten (pH etwa 7). Auf dem Markt befindliche Präparate dieser Art enthalten etwa 2 mg Zink und entweder 8,5 oder 12,5 mg Protamin auf iooo Insulineinheiten. Da die zur Insulinfällung notwendige Menge Protamin durchweg etwa 6 bis 7 mg auf iooo Insulineinheiten beträgt, enthalten die in Rede stehenden Zubereitungen einen wesentlichen Über schuß an Protamin. Zwar ist in der Literatur die Herstellung von wäßrigen Zink-Protamin-Insulin-Präparaten beschrieben, die keinen Überschuß an Protamin enthalten. Solche Präparate, bei deren Herstellung jedoch Phosphatpuffer verwendet werden, haben aber infolge fehlender Stabilität in der Praxis keine Verwendung finden können. Ein Überschuß an Protamin ist deshalb stets für notwendig gehalten worden, um sicher zu sein, daß keine wechselnden Mengen Insulin im gelösten Zustand vorhanden sind, da dies zu einer Änderung der biologischen Wirkung der Präparate führen würde.There are known clinically usable, injectable insulin preparations, the amorphous zinc protamine insulin precipitated as an active ingredient in aqueous suspension included (pH about 7). Contains preparations of this type on the market about 2 mg zinc and either 8.5 or 12.5 mg protamine per 100 units of insulin. Since the amount of protamine necessary for insulin precipitation is consistently around 6 to 7 mg iooo insulin units, the preparations in question contain one substantial excess of protamine. It is true that in the literature the production of Aqueous zinc-protamine-insulin preparations are described which do not contain an excess of protamine contain. Such preparations, however, used phosphate buffers in their manufacture but are not used in practice due to a lack of stability can. An excess of protamine has therefore always been considered necessary to be sure that there are no varying amounts of insulin in the dissolved state as this would lead to a change in the biological effect of the preparations.

Diese Zubereitungen haben eine sich über mehr als 2q. Stunden erstreckende Wirkung und sind in ausgedehntem Maße verwendet worden. Es wurde aber gefunden, daß die Wirkung in vielen Fällen stärker als gewünscht verzögert wurde, so daß der Blutzuckerspiegel der Diabetiker zur Tageszeit zu hoch und zur Nachtzeit zu tief wird. Es ist deshalb versucht worden, die Wirkung der Präparate durch Beimischung von Insulin in gelöstem Zustand zu beeinflussen. Diese Beimischung ist industriell ausgewertet worden, so daß Ampullen oder Flaschen mit der amorphen Zinkprotamininsulinsuspension auch Insulin in gelöstem Zustand enthalten. Man hat auch das gelöste Insulin in getrennte Ampullen gebracht, so daß es durch die Injektionsspritze zusammen mit der Zink-Protamin-Insulin-Suspension aufgenommen werden mußte. Das gewöhnlich verwendete Mischungsverhältnis betrug 2 Volumteile Insulinlösung auf i Volumteil Zink-Protamin-Insulin, womit in solchen Fällen eine sich von 18 bis 24 Stunden erstreckende Wirkung erzielt worden ist.These preparations have a spread over more than 2q. Hours stretching Effect and have been used extensively. It was but found that the effect was delayed more than desired in many cases, so that the blood sugar level of diabetics is too high at daytime and at nighttime gets too deep. Attempts have therefore been made to increase the effect of the preparations by adding them of insulin in a dissolved state. This admixture is industrial been evaluated so that ampoules or bottles with the amorphous zinc protamine insulin suspension also contain insulin in a dissolved state. You also have the dissolved insulin in separate ampoules so that it can be put through the syringe along with the zinc-protamine-insulin suspension had to be taken. Usually used Mixing ratio was 2 parts by volume of insulin solution to 1 part by volume of zinc-protamine-insulin, which in such cases has an effect that extends from 18 to 24 hours has been.

Indessen besitzen die so hergestellten Zubereitungen nicht die notwendige chemische und biologische Haltbarkeit, vor allem wenn sie über einen ausgedehnten Zeitraum aufbewahrt werden. Außerdem bietet das Mischen des gelösten Insulins mit der Zink-Protamin-Insulin-Suspension. in der Injektionsspritze leicht Anlaß zu Irrtümern bei der Dosierung, vor allem, wenn es durch die Patienten selber ausgeführt wird.However, the preparations produced in this way do not have what is necessary chemical and biological shelf life, especially if over an extended period Be kept for a period of time. In addition, mixing the dissolved insulin with the zinc-protamine-insulin suspension. in the syringe easy to make mistakes in terms of dosage, especially if it is carried out by the patient himself.

Die vorliegende Erfindung beruht nun auf der Erkenntnis, daß der Mangel an Stabilität bei den bisher ohne Überschuß an Protamin hergestellten Suspensionen von amorph gefälltem Zinkprotamininsulin lediglich dem verwendeten Phosphatpuffer zuzuschreiben ist, der bei neutraler Reaktion eine hohe Bindungskraft für Zinkionen aufweist. Für die Beständigkeit der Suspension ist es nämlich entscheidend, daß freie Zinkionen die Löslichkeit des Insulins bei neutraler Reaktion unterdrücken. Wenn nun die Herstellung der Präparate ohne die Stoffe erfolgt, die an sich bei den Reaktionsbedingungen in der Lage wären, eine Reaktion zwischen Insulin und Zink zu verhindern, beispielsweise durch Bildung schwer löslicher komplexer Zinkverbindungen, so lassen sich beständige Zubereitungen, ohne daß dazu ein Überschuß an Protamin notwendig ist, nur dann erzielen, wenn die angewandte Zinkmenge ausreichend ist, die Löslichkeit des Insulins zu unterdrücken, was zahlenmäßig durch einen Gehalt von über i/4 mg auf iooo internationale Insulineinheiten erreicht wird.The present invention is based on the knowledge that the defect of stability in the suspensions produced so far without an excess of protamine of amorphous precipitated zinc protamine insulin only the phosphate buffer used It is attributable to the high binding force for zinc ions in the case of a neutral reaction having. For the stability of the suspension it is crucial that Free zinc ions suppress the solubility of the insulin in the case of a neutral reaction. If now the preparation of the preparations takes place without the substances in themselves the reaction conditions would be able to cause a reaction between insulin and zinc to prevent, for example by the formation of difficult to dissolve complex zinc compounds, in this way stable preparations can be made without adding an excess of protamine necessary, can only be achieved if the amount of zinc used is sufficient, to suppress the solubility of insulin, which is numerical by a content of over / 4 mg is achieved in 1,000 international units of insulin.

Das erfindungsgemäße Verfahren wird dadurch gekennzeichnet, daß Protamin, Insulin und eine Zinkverbindung zusammen mit Hilfsstoffen, wie Puffersubstanzen, Isotonica, Konservierungsmittel, und das pH korrigierenden Stoffen in einem wäßrigen Medium unter Erzielung einer sterilen Suspension von amorph gefälltem Zinkprotamininsulin zusammengebracht werden, die einen pH-Wert von 6 bis 8, einen Protamingehalt von 2 bis 5 mg und einen Zinkgehalt von über o,25 mg auf iooo internationale Insulineinheiten aufweist. Man verwendet bei der Herstellung der Suspension solche Hilfsstoffe, die unter den angewendeten Reaktionsbedingungen keine schwer löslichen und bzw. oder komplexen Zinkverbindungen bilden, die das Ausfällen des Insulins mittels Zink bei neutraler Reaktion verhindern.The inventive method is characterized in that protamine, Insulin and a zinc compound together with auxiliary substances such as buffer substances, Isotonica, preservatives, and pH correctors in an aqueous solution Medium to obtain a sterile suspension of amorphously precipitated zinc protamine insulin which have a pH of 6 to 8, a protamine content of 2 to 5 mg and a zinc content of over 0.25 mg per 1,000 international insulin units having. In the preparation of the suspension, such auxiliaries are used which no sparingly soluble and / or under the reaction conditions used complex zinc compounds that cause the precipitation of insulin by means of zinc prevent neutral reaction.

Es ist bekannt, daß Zink-Insulin mit Natriumacetat als Hilfsstoff bei einem pH-Wert von 7 kaum noch gelöstes Insulin enthält, daß also ein solches Insulin-Präparat eine außerordentlich starke retardierende Wirkung besitzt. Da nun das Bindungsvermögen von Protamin gegenüber Insulin ebenfalls bekannt ist, so wird man annehmen, daß bei Zusatz von Protamin zu Zink-Insulin-Natriumacetat eine verstärkte retardierende Wirkung zu verzeichnen ist, auch wenn das Protamin im Unterschuß zugegeben wird.It is known that zinc insulin is used with sodium acetate as an adjuvant at a pH value of 7 hardly contains any dissolved insulin, so that Insulin preparation has an extremely strong retarding effect. Because now the ability of protamine to bind insulin is also known, so will it is believed that when protamine is added to zinc insulin sodium acetate, an increased retarding effect is recorded, even if the protamine is added in deficit will.

Es war somit nicht vorauszusehen, daß bei Zugabe von 2 bis 5 mg auf i ooo internationale Insulineinheiten, also einem Unterschuß, trotz des Vorliegens von Natriumacetat als Puffer, eine zunehmende Lösung an Insulin eintritt, d. h. eine gemäßigte retardierende Wirkung zu verzeichnen ist und daß bei Vorliegen von Natriumacetat-Puffer und trotz des Vorliegens einer bestimmten Menge gelösten Insulins eine genügende Stabilität zu verzeichnen ist.It was therefore not foreseeable that when adding 2 to 5 mg i ooo international insulin units, i.e. a shortfall, despite the presence of sodium acetate as a buffer, an increasing solution of insulin occurs, d. H. a moderate retarding effect is recorded and that in the presence of Sodium acetate buffer and despite the presence of a certain amount of dissolved insulin there is sufficient stability.

Nach der Erfindung ist es angemessen, einen Zinkzusatz von i bis 5 mg auf iooo internationale Insulineinheiten zu verwenden, doch lassen sich indessen auch beträchtlich größere Zinkzusätze anwenden. Zum Beispiel kann man einen Zinkzusatz von 2o mg oder mehr auf iooo internationale Insulineinheiten sehr wohl verwenden, vorausgesetzt, daß die zugesetzte Zinkmenge nicht so groß ist, daß unerwünschte Erscheinungen erhalten werden, z. B. Schmerzen an der Injektionsstelle.According to the invention, it is appropriate to add from 1 to 5% zinc mg can be used on iooo international units of insulin, but it can be used in the meantime also use considerably larger zinc additives. For example you can add a zinc additive Use 20 mg or more on 10000 international insulin units, provided that the amount of zinc added is not so great that undesirable Appearances are obtained, e.g. B. Injection site pain.

Die hergestellte Suspension 'weist ferner am zweckmäßigsten einen pH-Wert von etwa 7 auf, da hierdurch die beste Stabilität erreicht wird.The suspension produced also has most expediently one pH value of about 7, as this achieves the best stability.

Wenn ein Zusatz von Pufferstoffen verwendet wird, sind Acetat-, Barbiturat-, Borat- und Maleat-Puffer geeignet. Andererseits ist ein Citratpuffer ungeeignet, da Citrationen mit Zink komplexe Verbindungen bilden.If an addition of buffer substances is used, acetate, barbiturate, Borate and maleate buffers are suitable. On the other hand, a citrate buffer is unsuitable, because citrate ions form complex compounds with zinc.

Mittels der vorliegenden Erfindung wird es nicht allein möglich, auf der Basis von amorph gefälltem Zinkprotamininsulin Präparate mit 18 bis 24 Stunden Wirkung herzustellen, sondern es wird auch möglich, die Wirkung gewünschtenfalls nach unten abzustufen, indem der Protamingehalt der Zubereitungen vermindert wird, ohne daß die Stabilität derselben leidet, da das vorhandene Zink die Beständigkeit sichert. Schon aus diesem Grunde bedeutet die vorliegende Erfindung einen beträchtlichen Fortschritt, da sie die Möglichkeit eröffnet, eine gesteigerte klinische Anwendbarkeit von Insulinpräparaten zu erzielen, die auf amorph gefälltem Zinkprotamininsulin aufgebaut sind, was lange Zeit vergeblich gesucht worden ist.By means of the present invention it is not only possible to the basis of amorphous precipitated zinc protamine insulin preparations with 18 to 24 hours Produce effect but it also becomes possible to produce the effect if desired downgrading by reducing the protamine content of the preparations, without the stability thereof being impaired, since the zinc present reduces the stability secures. For this reason alone, the present invention represents a considerable one Progress as it opens up the possibility of increased clinical applicability of insulin preparations based on amorphous precipitated zinc protamine insulin are built up, which has been sought in vain for a long time.

Das erfindungsgemäße Verfahren läßt sich ausführen, indem die angewendeten Ausgangsmaterialien (amorphes Insulin, Protamin, Zinkverbindung, destilliertes Wasser und gewünschtenfalls Puffer, ein Isotonicum und ein Konservierungsmittel ) in jeder beliebigen Reihenfolge gemischt werden und dann nötigenfalls der pH-Wert der erhaltenen :Mischung auf 6 bis 8, vorzugsweise etwa 7, eingestellt wird. Hierbei wird unter aseptischen Bedingungen gearbeitet, wenn die Ausgangsmaterialien in steriler Form vorliegen, z. B. als sterile Lösungen, wobei man sich versichern muß, daß im Fall, daß nach dem Verfahren eine nicht sterile insulinhaltige Mischung erhalten wird, das Insulin in gelöstem Zustand vorliegt und eine Sterilisation, z. B. eine Keimfiltration, eingeschaltet wird, bevor das Insulin unter aseptischen Bedingungen gefällt wird und die nachfolgenden Zusätze in steriler Form ausgeführt werden.The inventive method can be carried out by the applied Starting materials (amorphous insulin, protamine, zinc compound, distilled water and if desired, buffer, an isotonic and a preservative ) mixed in any order and then the pH if necessary the obtained: mixture is adjusted to 6 to 8, preferably about 7. Here is carried out under aseptic conditions if the starting materials are in sterile conditions Present form, e.g. B. as sterile solutions, where you have to ensure that im In the event that a non-sterile mixture containing insulin is obtained after the process is, the insulin is in a dissolved state and sterilization, e.g. Legs Germ filtration, is turned on before the insulin under aseptic conditions is precipitated and the following additives are carried out in sterile form.

Als Zinkverbindung läßt sich ein anorganisches oder organisches Salz verwenden, beispielsweise das Chlorid, Sulfat, Nitrat oder Acetat, ferner das Hydroxyd oder Oxyd.An inorganic or organic salt can be used as the zinc compound use, for example, the chloride, sulfate, nitrate or acetate, also the hydroxide or oxide.

An Stelle von amorphem Insulin läßt sich auch kristallisiertes Insulin als Ausgangsmaterial verwenden, doch ist in diesem Fall Bedingung, daß das kristalline Insulin in einer der Stufen des Verfahrens in Lösung gebracht wird.Instead of amorphous insulin, crystallized insulin can also be used as a starting material, but in this case it is a condition that the crystalline Insulin is brought into solution in one of the stages of the procedure.

Außerdem ist es zweckmäßig, das Insulin in Form einer sauren Lösung von amorphem oder kristallinem Insulin zu verwenden, so daß die Ausfällung des amorphen Insulins während der Zubereitung selbst stattfindet, wodurch die günstigsten physikalischen Bedingungen für die Ausfällung geschaffen werden.It is also useful to have the insulin in the form of an acidic solution of amorphous or crystalline insulin to use, so that the precipitation of the amorphous Insulin takes place during the preparation itself, making the most beneficial physical Conditions for precipitation are created.

Nach einer bevorzugten Ausführungsform des Verfahrens wird eine saure Insulinlösung mit einer Lösung der anderen Ausgangsstoffe gemischt, ausgenommen den Pufferstoff, wonach eine Keimfiltration ausgeführt wird und dann unter aseptischen Bedingungen eine sterilisierte Lösung des Pufferstoffes, gegebenenfalls zusammen mit pH einstellenden Stoffen, zugesetzt wird, um einen pH-Wert zwischen 6 und 8, vorzugsweise etwa 7, zu erhalten.According to a preferred embodiment of the process, an acidic Insulin solution mixed with a solution of the other starting materials, except the buffer substance, after which a bacterial filtration is carried out and then under aseptic Conditions a sterilized solution of the buffer substance, if necessary together with pH adjusting substances, added to a pH value between 6 and 8, preferably about 7 to get.

Amorphes Insulin läßt sich mit verschiedenen Zinkmengen kombinieren. Demzufolge ist es auch möglich, bei der Ausführung des Verfahrens nach der Erfindung amorphes Insulin mit einem solchen Zinkgehalt zu verwenden, daß der Zinkgehalt der Endsuspension ganz oder teilweise von dem angewandten amorphen Insulin herrührt.Amorphous insulin can be combined with various amounts of zinc. Accordingly, it is also possible when carrying out the method according to the invention to use amorphous insulin with a zinc content such that the zinc content of the Final suspension originates in whole or in part from the amorphous insulin used.

An Stelle von amorphem Insulin läßt sich auch kristallines Insulin mit einem entsprechenden Zinkgehalt verwenden, doch muß in diesem Fall das kristalline Insulin in gelöstem Zustand vorliegen oder während der Herstellung für die nachfolgende Ausfällung in amorphem Zustand in Lösung gebracht werden.Instead of amorphous insulin, crystalline insulin can also be used with an appropriate zinc content, but in this case the crystalline Insulin may be in a dissolved state or during manufacture for subsequent Precipitation can be brought into solution in an amorphous state.

Um eine isotonische Lösung zu erhalten, können Substanzen, wie Glucose, Natriumchlorid und Glycerin verwendet werden. Beispiele geeigneter Konservierungsmittel sind Methyl-p-oxybenzoat, Propyl-p-oxybenzoat und Phenylmercuriacetat.To obtain an isotonic solution, substances such as glucose, Sodium chloride and glycerin can be used. Examples of suitable preservatives are methyl p-oxybenzoate, propyl p-oxybenzoate and phenyl mercuric acetate.

Um das erfindungsgemäße Verfahren näher zu veranschaulichen, wird auf die entenstehenden Beispiele Bezug genommen, die verschiedene Ausführungsformen zeigen. Zur Ausführung der Erfindung lassen sich folgende sterile Stammlösungen verwenden: Stammlösung 1: 2,2 g umkristallisiertes Insulin werden in 25 ccm o, i n-Salzsäure gelöst und mit destilliertem Wasser auf 125 ccm aufgefüllt.In order to illustrate the method according to the invention in more detail, Reference is made to the resulting examples, the various embodiments demonstrate. The following sterile stock solutions can be used to carry out the invention use: Stock solution 1: 2.2 g of recrystallized insulin are dissolved in 25 ccm o, i Dissolved n-hydrochloric acid and made up to 125 cc with distilled water.

Stammlösung 2: 5oo mg Protaminsulfat werden in Wasser unter Erhalt eines Volumens von iooccm gelöst.Stock solution 2: 500 mg of protamine sulfate are dissolved in water to obtain a volume of iooccm solved.

Stammlösung 3 : 20 ccm einer wäßrigen Zinkchloridlösung mit i '°/o Zink werden mit destilliertem Wasser auf 125 ccm aufgefüllt.Stock solution 3: 20 cc of an aqueous zinc chloride solution with 100% zinc are made up to 125 cc with distilled water.

Stammlösung q.: 1,36 g Natriumacetat mit 3 Mol Kristallwasser werden in destilliertem Wasser unter Erhalt eines Volumens von ioo ccm gelöst.Stock solution q .: 1.36 g of sodium acetate with 3 mol of water of crystallization dissolved in distilled water to obtain a volume of 100 cc.

Stammlösung 5: 1,16 g Maleinsäure werden in destilliertem Wasser unter Erhalt eines Volumens von ioo ccm gelöst.Stock solution 5: 1.16 g of maleic acid are taken in distilled water Obtaining a volume of 100 cc solved.

Stammlösung 6: 2,o6 g barbitursaures Natrium werden in destilliertem Wasser unter Erhalt eines Volumens von ioo ccm gelöst.Stock solution 6: 2.06 g of sodium barbiturate are distilled in Water dissolved to give a volume of 100 cc.

Stammlösung 7: 0,95 g Borax werden in destilliertem Wasser unter Erhalt eines Volumens von wo ccm gelöst. Beispiel i 1,3 ccm Glycerin werden mit o,5 ccm einer 25o/oigen Lösung von Methyl-p-oxybenzoat in Äthanol gemischt, worauf So ccm destilliertes Wasser zugefügt werden. Zu dem erhaltenen Gemisch werden nach sterilem Filtrieren io ccm Stammlösung i, i ccm Stammlösung 2, 2,5 ccm Stammlösung 3 und io ccm Stammlösung q. zugesetzt, worauf 3 ccm einer sterilen o, i n-NaOH zugefügt werden und die Mischung mit sterilem destilliertem Wasser auf ein Volumen von ioo ccm aufgefüllt wird.Stock solution 7: 0.95 g of borax are dissolved in distilled water to obtain a volume of wo ccm. Example i 1.3 cc of glycerol are mixed with 0.5 cc of a 25% solution of methyl p-oxybenzoate in ethanol, whereupon 50 cc of distilled water are added. After sterile filtration, io ccm stock solution i, i ccm stock solution 2, 2.5 ccm stock solution 3 and 10 ccm stock solution q are added to the mixture obtained. added, whereupon 3 cc of sterile o, i n-NaOH are added and the mixture is made up to a volume of 100 cc with sterile distilled water.

Durch den Zusatz von NaOH wird das Zinkprotamininsulin amorph ausgefällt, und die erhaltene Suspension zeigt den pH-Wert 7. Sie enthält etwa i mg Zink und 1,25 mg Protamin auf iooo internationale Insulineinheiten. Beispiel 2 Die Verfahrensweise ist dieselbe wie im Beispiel i, jedoch wird die Menge der verwendeten Stammlösungen 2 und 3 verdoppelt mit dem Ergebnis, daß die erzielte Suspension etwa 2 mg Zink und 21/z mg Protamin auf iooo internationale Insulineinheiten enthält.By adding NaOH, the zinc protamine insulin is amorphously precipitated, and the suspension obtained has a pH value of 7. It contains about 1 mg of zinc and 1.25 mg of protamine per 1000 international insulin units. EXAMPLE 2 The procedure is the same as in Example i, but the amount of the stock solutions 2 and 3 used is doubled, with the result that the suspension obtained contains about 2 mg of zinc and 21 / z mg of protamine per 100 international insulin units.

Beispiel 3 Die Verfahrensweise ist dieselbe wie im Beispiel 2, doch wird die Menge (q. ccm) der Stammlösung 2 verdoppelt mit dem Ergebnis, daß die Endsuspension etwa 2 mg Zink und 5 mg Protamin auf iooo internationale Insulineinheiten enthält. Beispiel q.Example 3 The procedure is the same as in Example 2, but the amount (q. ccm) of the stock solution 2 is doubled with the result that the final suspension Contains about 2 mg zinc and 5 mg protamine per 1,000 international units of insulin. Example q.

Die Verfahrensweise ist dieselbe wie im Beispiel 3 mit der Ausnahme, daß 2o ccm anstatt von 5 ccm der Stammlösung 3 verwendet werden. Die Endsuspension enthält darauf 8 mg Zink und 5 mg Protamin auf iooo internationale Insulineinheiten. Beispiel 5 i,3 ccm Glycerin werden mit o,5 ccm einer 2511/oigen Lösung von Methyl-p-oxybenzoat in Äthanol gemischt, worauf 50 ccm destilliertes Wasser zugesetzt werden. Zum erhaltenen Gemisch werden nach sterilem Filtrieren io ccm der Stammlösung i, 5 ccm der Stammlösung 3, 4 ccm der Stammlösung 2 und io ccm der Stammlösung 5 hinzugesetzt, worauf 21,5 ccm einer sterilen o,i n-NaOH zugesetzt werden und das Gemisch mit Wasser bis auf ein Volumen von ioo ccm verdünnt wird. Die erhaltene Suspension von amorphem Zinkprotamininsulin besitzt einen pH-Wert von 7 und enthält etwa 2 mg Zink und 5 mg Protamin auf iooo internationale Insulineinheiten. Beispiel 6 Die Verfahrensweise ist dieselbe wie im Beispiel 5, mit der Ausnahme, daß io ccm der Stammlösung 6 an Stelle von io ccm der Stammlösung 5 verwendet und darüber hinaus 4,5 ccm einer sterilen o, i n-HCl verwendet werden an Stelle von 2,4 ccm einer o,i n-NaOH. Die erhaltene Suspension enthält 2 mg Zink und 5 mg Protamin auf iooo internationale Insulineinheiten. Beispiel -7 Die Verfahrensweise ist dieselbe wie im Beispiel 6 mit der Ausnahme, daß io ccm der Stammlösung 7 an Stelle von io ccm der Stammlösung 6 verwendet werden und weiterhin o,9 ccm einer 5 sterilen o,i n-HCl an Stelle von 4,5 ccm verwendet werden.The procedure is the same as in Example 3 with the exception that 20 cc instead of 5 cc of the stock solution 3 are used. The final suspension then contains 8 mg of zinc and 5 mg of protamine in 1,000 international insulin units. EXAMPLE 5 1.3 cc of glycerol are mixed with 0.5 cc of a 2511 per cent solution of methyl p-oxybenzoate in ethanol, whereupon 50 cc of distilled water are added. After sterile filtration, 10 cc of the stock solution 1.5 cc of the stock solution 3, 4 cc of the stock solution 2 and 10 cc of the stock solution 5 are added to the resulting mixture, whereupon 21.5 cc of a sterile o, i n NaOH are added and the mixture is diluted with water to a volume of 100 cc. The resulting suspension of amorphous zinc protamine insulin has a pH value of 7 and contains about 2 mg zinc and 5 mg protamine per 100 international insulin units. Example 6 The procedure is the same as in Example 5, with the exception that 10 cc of stock solution 6 is used in place of 10 cc of stock solution 5 and, in addition, 4.5 cc of sterile o, i n-HCl is used in place of 2.4 cc of o, i n NaOH. The suspension obtained contains 2 mg of zinc and 5 mg of protamine per thousand international insulin units. Example -7 The procedure is the same as in Example 6 with the exception that 10 cc of stock solution 7 is used in place of 10 cc of stock solution 6, and 0.9 cc of 5 sterile o, i n-HCl is used in place of 4 .5 cc can be used.

Claims

PATENT CLAIMS i. Process for the manufacture of injectable insulin preparations with delayed action, the main active ingredient, amorphous precipitated zinc protamine insulin contained in aqueous suspension, with protamine, insulin and a zinc compound together with auxiliary substances such as buffer substances, isotonics, preservatives and PH-correcting substances are brought together in an aqueous medium for the purpose Formation of a sterile suspension of amorphous precipitated zinc protamine insulin, which a pH of 6 to 8, preferably about 7, a protamine content of about 2 up to 5 mg per 1,000 international insulin units, and a zinc content of over contains i / 4 mg, preferably i to 5 mg zinc, to 1000 international insulin units, characterized in that such auxiliaries are used in the preparation of the suspension used which are not sparingly soluble under the reaction conditions used and / or form complex zinc compounds.

2. The method according to claim i, characterized characterized in that an acidic insulin solution with a solution of the other starting materials with the exception of the buffer substance is mixed, whereupon germ filtration is carried out and then under aseptic conditions a sterilized solution of the buffer substance along with the pH changing substances is added if necessary to adjust the pH between 6 and 8, preferably about 7, can be obtained.

3. The method according to claim i or 2, characterized in that amorphous insulin with such a zinc content used that the zinc content of the final suspension depends entirely or partially on the applied amorphous insulin.

4. The method according to claim 3, characterized in that that instead of amorphous insulin, crystalline insulin is used, which is converted into an amorphous state by solution and subsequent precipitation. In Publications considered: German Patent No. 835 499.