Verfahren zur Reinigung und Trennung der Vitamine der Bt2-Gruppe durch
Verteilungschromatographie an Zellulose-Säulen Zusatz zum Patent 930 651
In dem Patent
930 65I wurde ein Verfahren zur chromatographischen Trennung von Vitaminen der B12-Gruppe
an Säulen aus Zellulosepulver unter Verwendung von cyanid- und wasserlha'ltigem
n-Butanol als Entwickler besdhrieben.Process for purifying and separating the vitamins of the Bt2 group by
Distribution chromatography on cellulose columns Addition to patent 930 651
In the patent
930 65I became a method for the chromatographic separation of vitamins of the B12 group
on columns made of cellulose powder using cyanide and water-containing
Use n-butanol as a developer.
Erfindungsgem:.ß kann das Verfahren des Hauptpatents auf Grun.d der
überraschenden Beobachtung, daß die Wanderungsgeschwindigkeit der Vitamine der Bl2-Gruppe
an der Zellulosepulver-Säule während der Entwicklung mit cyamd- und wasserhaltigem
n-Butanol stark beeinflußt werden kann, wenn der Entwickler geringe Mengen an Salzen
enthält, wesentlich verbessert werden. Derartige Salze können außerdem die Trennschärfe,
d. h. die
Breite der einzelnen Zonen, beeinflussen. Viele anorganische
Salze verursachen diffuse Zonen und erschweren somit die Trennung. Andere Salze
jedoch bewirken eine Verschärfung der Zonen. Gew.isse Salze der Perchlorsäure, so
z. B. das Kaliumperchlorat, besitzen völlig überraschend die Eigenschaft, in sehr
geringer Konzentration auf die zu entwickelnden Zonen bremsend zu. wirken, und zwar
in dem Sinne, daß die sich langsam auf der Chromatographiersäule bewegenden Zonen
der Cobaiamine, wie z. B. der Cobalamincarbonsäuren, sowie des Vitamin B12-Faktors
III, stark abgebremst werden. Die schnellen Zonen der Cobalamine, wie z. B. des
Ätiocohalamins, werden dagegen weniger gebremst. Außerdem verursacht das im Entwickler
gelöste Kaliumperchlorat eine beträchtliche Verschärfung (verschmälerung) der Zonen.
Der Endeffekt ist der, daß bei Verwendung von Kaliumperchlorat sich das Auflösungsvermögen
der Zellulosepuiver-Säule beträchtlich erhöht. According to the invention: .ß the process of the main patent can be based on the
surprising observation that the migration speed of the vitamins of the Bl2 group
on the cellulose powder column during development with cyamd- and water-containing
n-Butanol can be strongly influenced if the developer contains small amounts of salts
contains, are significantly improved. Such salts can also reduce the selectivity,
d. H. the
Width of the individual zones. Many inorganic ones
Salts cause diffuse zones and thus make separation more difficult. Other salts
however, cause a tightening of the zones. Certain salts of perchloric acid, see above
z. B. the potassium perchlorate, surprisingly have the property in very
with a low concentration on the zones to be developed. work, namely
in the sense that the zones moving slowly on the chromatography column
the cobaiamine, such as. B. the cobalamine carboxylic acids, as well as the vitamin B12 factor
III, must be slowed down sharply. The fast zones of the cobalamins, such as B. des
Etiocohalamins, on the other hand, are slowed down less. Also, this causes in the developer
dissolved potassium perchlorate causes a considerable tightening (narrowing) of the zones.
The bottom line is that when you use potassium perchlorate, the resolving power is reduced
the cellulose powder column increased considerably.
Ausführungsbeispiel Ein Kieselgur-Trockenpräparat, enthaltend ein
Gemisch verschiedener Cobalamine, wird mit einer solchen Menge an Kaliumperchlorat
innig vermischt, die zur Sättigung der vorgesehenen Menge an Entwickler ausreicht,
sodann auf eine Zellulosepulver-Säule gebracht und nach dem Hauptpatent mit cyanidhaltigem,
wassergesättigtem n-Butanol entwickelt. Gleichzeitig wird ein analoger Versuch ohne
Kaliumperchlorat durchgeführt. Wie aus der Tabelle ersic'htlidh ist, ermöglicht
der Zusatz des Kaliumperchlorates eine gute Trennung des Faktors 1 a vom Vitamin
B12 sowie des V,itaminBt2-Faktors III von Atiocobalamin-carbonsäuren, die ohne diesen
Zusatz viel schlechter ist. Exemplary embodiment A kieselguhr dry preparation containing a
Mixture of various cobalamins, is made with such an amount of potassium perchlorate
intimately mixed, sufficient to saturate the intended amount of developer,
then placed on a cellulose powder column and according to the main patent with cyanide-containing,
water-saturated n-butanol. At the same time, an analog experiment without
Potassium perchlorate carried out. As ersic'htlidh from the table allows
the addition of potassium perchlorate a good separation of factor 1 a from the vitamin
B12 as well as the V, itaminBt2 factor III of atiocobalamin-carboxylic acids, which without this
Addition is much worse.
Tabelle Chromatographie von Vitaminen der Bl2-Gruppe an Säulen aus
Zellulosepulver unter Verwendung von cyanid- und wasserhaltigem n~Butanol mit und
ohne Zusatz von Kakumperchlorat
R - W e r t
Vitamin Bl2-Faktor ohne I mit
Kaliumperchlorat
Ätiocobalamin-carbonsäure 0,06 0,02
Vitamin Bl2-Faktor III 0,1 0,05
5,6-Dimethylbenzimidazol- 0,25 o,I2
cobalamin
Faktor 1 a 0,3 0,2
Ätiocobalamin 0,5 0,4
PATENTANSPRVCHE: I. Verfahren zur verteilungschromatographischen Reinigung und Trennung
der Vitamine der Bl2-Gruppe auf Zellulose-Säulen nach Patent 930 65I unter Verwendung
von wasserhaltigem n-Butanol als Entwickler, dadurch gekennzeichnet, daß dem Entwickler
Salze zugesetzt werden, die die Trennschärfe erhöhen.Table of chromatography of vitamins of the Bl2 group on columns made of cellulose powder using cyanide and water-containing n ~ butanol with and without the addition of kakumper chlorate R - value
Vitamin Bl2 factor without I with
Potassium perchlorate
Etiocobalamin carboxylic acid 0.06 0.02
Vitamin Bl2 factor III 0.1 0.05
5,6-dimethylbenzimidazole-0.25 o, I2
cobalamin
Factor 1 a 0.3 0.2
Etiocobalamin 0.5 0.4
PATENT CLAIM: I. Process for partition chromatographic purification and separation of the vitamins of the Bl2 group on cellulose columns according to Patent 930 65I using aqueous n-butanol as developer, characterized in that salts are added to the developer which increase the selectivity.