DE966372C

DE966372C - Process for obtaining vitamin B.

Info

Publication number: DE966372C
Application number: DEM31606A
Authority: DE
Inventors: Norman George Brink; Frank James Wolf
Original assignee: Merck and Co Inc
Current assignee: Merck and Co Inc
Priority date: 1949-10-08
Filing date: 1950-10-08
Publication date: 1957-08-01

Description

Verfahren zur Gewinnung von Vitamin B12 Die Schwierigkeit der Isolierung von Vitamin Bt2, insbesondere aus Fermentationsmedien, besteht im wesentlichen darin, daß Vitamin B12 in diesen Fermentationsmedien gewöhnlich in außerordentlich geringer Menge - die den zehnmillionsten Teil nicht überschreitet - vorliegt und außerdem von Substanzen begleitet ist, die ihm in chemischer wie auch physiologischer Hinsicht außerordentlich ähnlich sind.Process for obtaining vitamin B12 The difficulty of isolation of vitamin Bt2, especially from fermentation media, essentially consists of that vitamin B12 is usually extremely low in these fermentation media Quantity - which does not exceed the ten millionth part - is present and also is accompanied by substances that are chemically as well as physiological are extraordinarily similar.

Bei den Vitamin-B12-ähnlichen Substanzen handelt es sich um prächtig rot gefärbte Verbindungen, die in verschieden starkem Maße LLD-, Küken-und Antiperniciosa-Aktivität ausüben, jedoch wesentlich weniger wirksam als das reine Vitamin B:2 sind. Wenn es sich auch bei diesen Verbindungen um Substanzen handelt, die dem Vitamin B1, in chemischer und biologischer Hinsicht außerordentlich ähnlich sind, so ist doch notwendig, um ein Präparat von mindestens 950/obiger Reinheit zu erhalten, diese Substanzen von dem Vitamin B12 abzutrennen. The substances similar to vitamin B12 are splendid red colored compounds which, to varying degrees, are LLD, chick and antiperniciosa activity exercise, but are much less effective than pure vitamin B: 2. if these compounds are also substances that contribute to vitamin B1, are extraordinarily similar chemically and biologically, it is necessary to obtain a preparation of at least 950 / above purity, this Separate substances from the vitamin B12.

Es wurde gefunden, daß man diese Schwierigkeiten in einfacher Weise umgehen kann, indem man das Vitamin B12 mittels eines Gegenstromverteilungsverfahrens zwischen den beiden Lösungsmitteln eines zweiphasigen Lösungsmittelsystems, dessen eine Phase aus Wasser und dessen andere Phase aus einer Mischung von Kresol-Toluol oder Kresol-Tetrachlorkohlenstoff besteht, isoliert. Dieses Verfahren kann mit den bis dahin benutzten Methoden zur Isolierung von VitaminBt2, die eine Reihe von Reinigungsstufen umfassen, wie Adsorption, Chromatographie, fraktionierte Fällung usw., kombiniert werden. It has been found that these difficulties can be overcome in a simple manner can deal with the vitamin B12 using a countercurrent distribution process between the two solvents of a two-phase solvent system whose one phase of water and the other phase of a mixture of cresol-toluene or cresol carbon tetrachloride, isolated. This procedure can be used with the used until then Methods of Isolating VitaminBt2 That include a number of purification stages such as adsorption, chromatography, fractionated Precipitation, etc., can be combined.

Mit dem Verfahren der Erfindung gelingt es, Vitamin B12 sowohl von Verunreinigungen abzutrennen, die in Wasser leichter löslich als Vitamin B12 sind, als auch von solchen zu trennen, die sich in der erfindungsgemäßen Lösungsmittelmischung leichter als Vitamin B12 lösen. Es gelingt weiterhin, das Vitamin B12 in kristalliner Form in einem 95 °/e übersteigenden Reinheitsgrad mit nahezu quäntitativer Ausbeute zu isolieren. Ein weiterer Vorteil des Isolierungsverfahrens der Erfindung besteht darin, daß es auch in großtechnischem Maßstab durchgeführt werden kann. With the method of the invention it is possible to obtain vitamin B12 from both To separate impurities that are more soluble in water than vitamin B12, as well as to be separated from those which are in the solvent mixture according to the invention dissolve more easily than vitamin B12. It continues to make the vitamin B12 in crystalline form Form in a degree of purity exceeding 95 ° / e with an almost quantitative yield to isolate. Another advantage of the isolation method of the invention is in that it can also be carried out on an industrial scale.

Das Trennverfahren beruht auf den verschieden großen Löslichkeiten, die Vitamin B12 und dessen unerwünschte Begleitstoffe iln den beiden Flüssigkeitsphasen des Gegenstromverteilungssystems, der wäßrigen und der au:s einer Kresol-Toluol- oder Kresol-Tetrachlorkolhlenstoff-Mischung - fortan kurz mit Lösungsmittelmischung bezeichnet bestehenden Phase, aufweisen. The separation process is based on the different solubilities, the vitamin B12 and its undesirable accompanying substances in the two fluid phases the countercurrent distribution system, the aqueous and the outside of a cresol-toluene or cresol-carbon tetrachloride mixture - henceforth briefly with solvent mixture denotes existing phase.

Wenn auch die Gegenstromverteilung schon früher bei bestimmten Gelegenheiten mit anderen Lösungsmitteln angewandt wurde, so ist es jedoch überraschend, daß man mit diesem einfachen Verfahren unter der erfindungsgemäßen Verwendung dieser Lösungsmittelmischungen einerseits und Wasser andererseits das Vitamin B12 in sehr reiner Form von den natürlich vorkommenden Vitamin-Bl2-ähnlichlen Begleitsubstanzen abtrennen kann. Even if the countercurrent distribution was used earlier on certain occasions was used with other solvents, it is surprising, however, that one with this simple process using these solvent mixtures according to the invention on the one hand and water on the other hand the vitamin B12 in a very pure form from the natural can separate occurring vitamin Bl2-like accompanying substances.

Dies ist besonders überraschend im Hinblick auf die extreme Verdünnung, in der Vitamin B1.2 gewöhnlich in den Ausgangsmaterialien vorliegt.This is particularly surprising in view of the extreme dilution, in which vitamin B1.2 is usually present in the starting materials.

Das Verfahren soll an Hand der Zeichnung, die das Schema einer Gegenstromverteilung mit acht Stufen darstellt, näher erläutert werden. The procedure should be based on the drawing, which shows the scheme of a countercurrent distribution represents with eight stages, are explained in more detail.

Das Gegenstromverteilungsverfahren wird in folgender Weise durchgeführt: Das Gefäß Nr. I wird mit einer bestimmten Menge Wasser WI und einer bestimmten Menge Lösungsmittelmischung L r beschickt. Wie der Figur zu entnehmen ist, wird in dem Wasser WI das Vitamin-B12-Konzentrat gelöst, bevor die Lösungsmittelmischung zugegeben wird. Man kann aber auch umgekehrt verfahren und das Vitamin-Bl2-Konzentrat in derLösungsmittelmischung lösen. The countercurrent distribution process is carried out in the following way: The vessel no. I is filled with a certain amount of water WI and a certain amount Solvent mixture L r charged. As can be seen from the figure, in the Water WI dissolved the vitamin B12 concentrate before adding the solvent mixture will. But you can also proceed in reverse and the vitamin B1 concentrate in the solvent mixture to solve.

Dann schüttelt man die Mischung in Gefäß Nr. I, das beim Arbeiten im Laboratoriumsmaßstab ein Scheidetrichter sein kann, kräftig durch und läßt zur Entmischung stehen. Währenddessen verteilen sich Vitamin B12 und die Verunreinigungen zwischen der wäßrigen und der Lösungsmittelmischungsphase. Then shake the mixture in jar No. I, the one while working can be a separating funnel on a laboratory scale, vigorously through and allows Stand segregation. Meanwhile, vitamin B12 and the impurities spread out between the aqueous and solvent mixture phases.

Nach der Entmischung wird die Lösungsmittelmischungsschicht / I abgetrennt und zu einer bestimmten Menge frischen Wassers W2 in Gefäß Nr. 2 gegeben. In das Gefäß Nr. I, das noch die wäßrige Schicht W1 enthält, wird eine frische Menge Lösungsmittelmisc'hungL2 gegeben. Beide Gefäße werden dann kräftig geschüttelt, wobei sich wiederum das Vitamin B12 und die Begleitstoffe auf die beiden Flüssigkeitsphasen verteilen. After the separation, the solvent mixture layer / I is separated and added to a certain amount of fresh water W2 in vessel no. In the Vessel no. I, which still contains the aqueous layer W1, is a fresh amount of solvent mixture L2 given. Both vessels are then shaken vigorously, which in turn releases the vitamin Distribute B12 and the accompanying substances between the two liquid phases.

Anschließend wird die Lösungsmittelmischungsschicht L I aus Gefäß Nr. 2 abgezogen und in Gefäß Nr. 3 eingefüllt, das eine frische Wassermenge W3 enthält. Die Lösungsmittelmischungsschicht L2 in Gefäß Nr. I wird abgezogen und in Gefäß Nr. 2 mit der Wasserschicht W2 übergeführt. Zu Gefäß Nr. I mit der Wasserschicht WI wird eine frische Menge Lösungsmittelmischung L 3 zugegeben. Die drei Gefäße, die sich nunmehr im System befinden und die die Wasser- und Lösungsmittelmischungsschichten W31LI; W2/L2 und W1/L3 enthalten, werden erneut geschüttelt und dann zur Entmischung stehengelassen. Subsequently, the solvent mixture layer L I is made from the vessel No. 2 withdrawn and poured into vessel No. 3, which contains a fresh amount of water W3. The solvent mixture layer L2 in Vessel # I is peeled off and placed in Vessel No. 2 transferred with the water layer W2. To vessel no. I with the layer of water A fresh amount of solvent mixture L 3 is added to WI. The three vessels which are now in the system and which are the water and solvent mixture layers W31LI; W2 / L2 and W1 / L3 contained are shaken again and then to separate ditched.

Dann wird die Lösungsmittelmischungsschicht LI aus Gefäß Nr. 3 in Gefäß Nr. A mit einer frischen Wassermenge W4 übergeführt, die Lösungsmittelmischungsschicht L2 aus Gefäß Nr. 2 in Gefäß Nr. 3, das die Wasserfraktion W3 enthält, die Lösungsmittelmischungsschicht L 3 aus Gefäß Nr I in Gefäß Nr. 2 mit der Wasserfraktion W2 übergeführt und in Gefäß Nr. I milt der Wasserfraktion WI eine frische Menge Lösungsmittelmischung L 4 gegeben. Then the solvent mixture layer LI from Vessel No. 3 in Transfer vessel No. A with a fresh amount of water W4, the solvent mixture layer L2 from vessel # 2 into vessel # 3 containing the water fraction W3, the solvent mixture layer Transfer L 3 from vessel no. I into vessel no. 2 with the water fraction W2 and into vessel No. I is given a fresh amount of solvent mixture L 4 to the water fraction WI.

Wenn auf diese Weise acht Portionen frisches Wasser und frische Lösungsmittelmischung in das System eingeführt sind, enthalten die acht Gefäße folgende Wasser- und Lösungsmittelmischungsschichten: W8/L1; W7/L2; W6/L3; W5/L4 usw. When doing this eight servings of fresh water and fresh solvent mixture are inserted into the system, the eight vessels contain the following water and solvent mixture layers: W8 / L1; W7 / L2; W6 / L3; W5 / L4 etc.

(vgl. die Gefäße, die in der Zeichnung an der diagonalen Linie liegen).(see the vessels that are on the diagonal line in the drawing).

Das modifizierte Verfahren, auf das sich die punktierte Linie in der Zeichnung bezieht, wird in gleicher Weise durchgeführt, nur mit dem Unterschied, daß nur in zwei Gefäßen gearbeitet wird und nur zwei Portionen frischen Wassers in das System eingeführt werden. The modified procedure to which the dotted line in referring to the drawing, is carried out in the same way, only with the difference, that you only work in two vessels and only two servings of fresh water be introduced into the system.

Die Lösungsmittelmischung L I wffd demgemäß in Gefäß Nr. I mit der Portion frischen Wassers WI geschüttelt und nach der Entmischung der bei den Schichten abgezogen und in Gefäß Nr. 2 mit einer frischen Wassermenge W2 übergeführt, während die Wasserfraktion WI in Gefäß Nr. I mit einer frischen Menge Lösungsmittelmischung L 2 durchgeschüttelt wird. Nach dem Entmischen wird die Lösungsmittelmischungsschicht LI aus Gefäß Nr. 2 abgezogen und zwecks Vereinigung mit später anfallenden Lösungsmittelmischungsfraktionen gesammelt. Die zweite Lösungsmittelmischungsfraktion L 2 wird dagegen aus Gefäß Nr. I in Gefäß Nr. 2 mit der Wasserfraktion W2 übergeführt, während Gefäß Nr. I mit der Wasserfraktion W1 eine frische Lösungsmittelmi.schungsmenge L3 zugeführt wird. The solvent mixture L I wffd accordingly in vessel no. I with the Portion of fresh water WI shaken and after unmixing the at the layers withdrawn and transferred to vessel no. 2 with a fresh amount of water W2 while the water fraction WI in vessel no. I with a fresh amount of solvent mixture L 2 is shaken. After segregation becomes the solvent mix layer LI withdrawn from vessel no. 2 and for the purpose of combining with later resulting solvent mixture fractions collected. The second solvent mixture fraction L 2, on the other hand, is taken out of the vessel No. I transferred to vessel no. 2 with the water fraction W2, while vessel no. I with the water fraction W1, a fresh solvent mixture L3 is added will.

Dieser Vorgang wird wiederholt, bis sieben Portionen Lösungsmittelmischung L1 bis L7 mit den beiden Wasserfraktionen WI und W2 durchgeschüttelt sind. Die Lösungsmittelmischungsfraktionen L 1 bis L7, die die Hauptmenge an Vitamin B12 enthalten, werden vereinigt und auf kristallines Vitamin Bl2 weiter aufgearbeitet. This process is repeated until seven servings of solvent mixture L1 to L7 are shaken with the two water fractions WI and W2. The mixed solvent fractions L 1 to L7, which contain the main amount of vitamin B12, are combined and on crystalline vitamin Bl2 worked up further.

Auch die Wasserfraktionen WI und W2, die noch etwas Vitamin B1.2 enthalten, werden vereinigt und können erneut in das Verfahren gegeben werden.Also the water fractions WI and W2, the one more thing Vitamin B1.2 containing, are combined and can be put back into the process will.

Wenn mehrfache Extraktionen, wie in der Zeichnung dargestellt ist, durchgeführt werden, ist dieses Gegenstromverteilungsverfahren in bezug auf die Vitamin-B12-Gewinnung so wirksam, daß es in einem Analysenverfahren zur Bestimmung der Vitamin-BI2-Men,ge in den Fermentationsflüssigkeiten sowie verschiedenen festen Zwischen produkten und sonstigen vitamfnhaltigen Lösungen benutzt werden kann. If multiple extractions, as shown in the drawing, are carried out, this countercurrent distribution method is with respect to the Vitamin B12 extraction so effective that it can be used in an analytical process for determination the amount of vitamin BI2 in the fermentation liquids as well as various solids Can be used between products and other vitamin-containing solutions.

Es wurde gefunden, daß bei Verwendung dieser Lösungsmittelmischung als partielles Lösungsinfttel die Vitamin-B12-ähnlichen Substanzen, die den größten Prozentsatz der Verunreinigungen ausmachen, in einem Verhältnis von etwa 8.: I zwischen \Vasser und der Lösungsmittelmischungsphase verteilt werden. während andererseits das Vitamin B12 in einem Verhältnis von etwa 1,2:1 zwischen Wasser und der Lösungsmittelmischungsphase verteilt wird. Die Lösungsmittelmischungsendphase eines solchen zweiphasigen Flüssigkeitssystems enthält somit den größten Teil des Vitamins B12, das im wesentlichen frei von Begleitstoffen ist, da lediglich etwa ein Neuntel der unerwünschten Vitamin-B12-ähnlichen Begleitstoffe in die Lösungsmittelmischungsphase geht, während die restlichen acht Neuntel in der wäßrigen Phase bleiben. It has been found that using this solvent mixture as a partial solution, the vitamin B12-like substances, which are the largest Percentage of impurities make up, in a ratio of about 8th: I between \ Water and the solvent mixture phase are distributed. while on the other hand the vitamin B12 in a ratio of about 1.2: 1 between water and the solvent mix phase is distributed. The final solvent mix phase of such a two phase liquid system thus contains most of the vitamin B12, which is essentially free of accompanying substances is because only about a ninth of the undesirable vitamin B12-like accompanying substances goes into the solvent mix phase while the remaining eight ninths go into remain in the aqueous phase.

In einigen Fällen ist noch eine weitere Klasse von Verunreinigungen beobachtet worden, die allerdings weniger häufig vorkommen. Sie scheinen ein Verteilungsverhältnis von etwa o,4: I zwischen Wasser und der Lösungsmittelmischung zu haben und damit in der Lösungsmittelmischungsphase stärker als Vitamin B12 löslich zu sein. In some cases there is yet another class of impurities have been observed, but these are less common. They seem to have an apportionment of about 0.4: I between water and the solvent mixture and thus being more soluble than vitamin B12 in the solvent mix phase.

Bei Anwendung des modifizierten oder verkürzten Gegenstromvertei lungsverfahrens sind in der Lösungsmittelmischungsphase nach Beendigung des Verfahrens etwa 9+ °/o des in dem Ausgangsmaterial enthaltenen Vitamins B12 und nur etwa 20% der Vitamin-B12-ähnlichen Substanzen bei einem Verteilungsverhältnis der letzteren (Cw: CL) von etwa 8 : 1 enthalten. Die Verunreinigungen mit einem Verteilungsverhältnis (Cw : CL) von etwa o,4: I gehen, wenn sie überhaupt vorhanden sind, in die Lösungsmittelschicht. Aus dieser Lösungsmittellösung, in der das Vitamin B12 in wesentlich reinerer Form vorlegt, kann das Vitamin Bl*, in verschiedener Weise ausgefällt werden. Es wird hierbei ein oftmals 95-bis Ioo°/oiges Vitamin B12 in kristalliner Form erhalten. When using the modified or shortened countercurrent distribution Treatment processes are in the solvent mix phase after the process is complete about 9+% of the vitamin B12 contained in the starting material and only about 20% of the vitamin B12-like substances with a distribution ratio of the latter (Cw: CL) of about 8: 1 included. The impurities with a distribution ratio (Cw: CL) of about 0.4: I, if any, go into the solvent layer. From this solvent solution in which the vitamin B12 is in a much purer form presented, the vitamin B1 * can be precipitated in various ways. It will often 95 to 100% vitamin B12 is obtained in crystalline form.

Bei dem Gegenstroinverteilungsverfahren mit der gegenüber dem modifizierten Verfahren erhöhten Anzahl an Extraktionsgefäßen mit Lösungsmittelmischungen wird eine vollständigere Abtrennung der Verunreinigungen von dem Vitamin P) erhalten. Mit dieser Methode werden insbesondere bei selhr unreiner Vitamin-B12-haltigem Ausgangsmaterial sehr gute Ergebnisse erzielt. In the case of the reverse flow distribution method with the opposite to the modified one Method increased number of extraction vessels with mixed solvents a more complete separation of the impurities from the vitamin P) obtained. This method is used, especially in the case of impure vitamin B12-containing starting material achieved very good results.

Wenn die Verunreinigungen, die durch ein Verteilungsverhältnis (Cw: CL) von o,4: I gekennzeichnet sind, in unerwünscht hohem Prozentsatz vorliegen, geht man so vor, daß man zunächst eine vollständige Gegenstromverteilung, wie sie in der Zeichnung dargestellt ist, durchführt. Dann läßt man das Vitamin B12 aus der Lösungsmittelmischung der Extraktionsgefäße einzeln auskristallisieren und isoliert die Kristalle, die einen bestimmten Reinheitsgrad haben. Das reinste Vitamin B12. wird aus den mittleren Gefäßen gewonnen, während die Verunreinigungen, die durch ein Verteilungsverhältnis K = (Cw: CL) = 8,0 und .0,4 charakterisiert sind, sich hauptsächlich in den ersten bzw. letzten Gefäßen ansammeln. Auf diese Weise wird im wesentlichen reines Viltamin B,2, das einen Reinheitsgrad von nahezu 100% aufweist, von den beiden Hauptarten von Verunreinigungen abgetrennt. If the impurities caused by a distribution ratio (Cw: CL) are marked by o, 4: I, are present in an undesirably high percentage, one proceeds in such a way that one first has a complete countercurrent distribution like her is shown in the drawing. Then you leave out the vitamin B12 the solvent mixture of the extraction vessels individually crystallize and isolate the crystals that have a certain degree of purity. The purest vitamin B12. is obtained from the middle vessels, while the impurities that pass through a distribution ratio K = (Cw: CL) = 8.0 and .0.4 are characterized mainly accumulate in the first and last vessels. That way will essentially pure Viltamin B, 2, which has a degree of purity of almost 100%, separated from the two main types of impurities.

Die vorstehenden Ausführungen gelten unter der Voraussetzung, daß gleiche Mengen Lösungsmittelmischung und Wasser verwendet werden. Man kann aber auch das Mengenverhältnis von Wasser zu Lösungsmittelmischung in dem Gegenstromverteilungsverfahren innerhalb weiter Grenzen variieren, ohne dadurch die erzielbaren guten Ergebnisse zu beeinträchtigen. The above statements apply on the assumption that equal amounts of solvent mixture and water are used. But you can also the quantitative ratio of water to solvent mixture in the countercurrent distribution process vary within wide limits without thereby achieving the good results that can be achieved to affect.

Da dadurch jedoch das Verteilungsverhältnis von Vitamin B12 und den begleitenden Verunreinigungen in den einzelnen Extraktionsgefäßen variiert werden kann, kann das eine Änderung in der Anzahl der Extraktionsgefäße und infolgedessen eine veränderte Anzahl von Wasser- und Lösungsmittelmischungsportionen in dem Gegenstromverteilungsverfahren erfordern. However, since this reduces the distribution ratio of vitamin B12 and the accompanying impurities can be varied in the individual extraction vessels can, this can be a change in the number of extraction vessels and as a result a changed number of water and solvent mixture portions in the countercurrent distribution process require.

Dieses Verfahren ist zur Behandlung von Ausgangsmaterialien mit einem verhältnismäßig hohen Vitamin-B1.2-Gehalt von beispielsweise 10 bis go °/o besonders geeignet, ohne jedoch auf die Vitamin-B12-reichen Ausgangsmaterialien beschränkt zu sein. Im Gegenteil, es kann zur Behandlung von Ausgangsmaterial mit .sehr verschiedenem Vitamin-Bz2-Gehalt verwendet werden. Es kann außerdem dazu benutzt werden, um in Zwischenstufen bei Vitamin-B12- Konzentrationen, die auf im wesentlichen reines Vitamin B12 in kristalliner Form aufgearbeitet werden sollen, andere Verunreinigungen zu entfernen. So können z. B. nach diesem verbesserten Verfahren Fermentierungsflüssigkeiten, die bei der Fermentierung von verschiedenen Mikroorganismen. insbesondere Streptomyces griseus, erhalten werden, direkt und ohne vorhergehende Reinigung behandelt werden. In den meisten Fällen unterwirft man jedoch die Fermentierungsflüssigkeit zunächst einer Reihe von anderen Reinigungsverfahren, um die Hauptmenge an Verunreinigungen zu entfernen und dabei ein verhältnismäßig Vitamin-B12-reiches Material zu erhalten, aus dem anschließend mit Hilfe des Gegenstromverteilungsverfahrens das Vitamin B12 in im wesentlichen reiner und kristalliner Form erhalten werden kann. This method is for treating starting materials with a relatively high vitamin B1.2 content of, for example, 10 to 10% in particular suitable, but without being limited to the starting materials rich in vitamin B12 to be. On the contrary, it can be used to treat starting material with very different Vitamin Bz2 content can be used. It can also be used to convert into Intermediate levels in vitamin B12 concentrations that are essentially pure Vitamin B12 should be worked up in crystalline form, other impurities to remove. So z. B. according to this improved process fermentation liquids, those involved in the fermentation of various microorganisms. especially Streptomyces griseus, can be treated directly and without prior purification. In most cases, however, one submits the fermentation liquor first a number of other cleaning methods to remove the bulk of contaminants to remove and thereby obtain a material that is relatively rich in vitamin B12, from which then with the help of the countercurrent distribution process the vitamin B12 can be obtained in substantially pure and crystalline form.

Claims

PATENT CLAIM: Process for the production of vitamin B1.2. through this characterized that a vitamin B12 and also impurities solution containing a countercurrent distribution process using a two-phase Solvent systems, consisting of water and cresol-toluene or water and cresol-carbon tetrachloride, subjected, separated the solvent fraction enriched in vitamin B12 and if necessary, it is further worked up on vitamin B12.

Considered publications: German Patent Specifications No. 719 202, 745 383, 696 390.