DE69103053T2

DE69103053T2 - Pharmazeutische Zubereitung für die Reifung von Prothymozythen.

Info

Publication number: DE69103053T2
Application number: DE69103053T
Authority: DE
Inventors: Patrice Prof Dr Debre; Mohammad Djavad Dr Mossalayi
Original assignee: Ciba Geigy AG
Current assignee: Novartis AG
Priority date: 1990-01-24
Filing date: 1991-01-15
Publication date: 1994-12-01
Anticipated expiration: 2011-01-16
Also published as: ES2057833T3; AU643245B2; US5236706A; CA2034737A1; IE910229A1; JPH05117163A; AU6934791A; PT96540A; EP0447353A1; DE69103053D1; EP0447353B1; GB9001625D0; ATE109005T1

Description

Die Erfindung betrifft ein pharmazeutisches Präparat, umfassend den 25K IgE-bindenden Faktor (25K IgE-BF) und Interleukin-1 (IL-1), und die Verwendung des pharmazeutischen Präparats zur Stimulierung der Prothymocytenreifung, z.B. zur Behandlung von T-Zell-Immundefekten und von Prothymocyten-Leukämien.
Während der Entwicklung der T-Zellen wandern lymphoide Stammzellen in den rudimentären Thymus, worin sie proliferieren, ihre Gene für den Antigenrezeptor neu anordnen, hinsichtlich ihrer MHC-Spezifitätsausstattung ausgewählt werden und zu funktionell reifen T-Zellen sich differenzieren (Literaturstellen 1-6). Prothymocyten mit dem Zelloberflächenmarker vom Phänotyp CD7&spplus;CD2&supmin;CD3&supmin; stellen die am frühesten identifizierbare Stufe in der T-Zelllinie (Literaturstellen 7-10) dar. Jüngste Entdeckungen in vitro (Literaturstellen 8-11) wiesen auf die Fähigkeit dieser Prothymocyten zum Erwerb von reifen T-Zellen-Oberflächenmarkern nach geeigneter Konditionierung hin. Die zellulären und durch einen Faktor vermittelten Wechselwirkungen für diesen Prozess sind noch wenig verstanden. Eine Rolle für Cytokine, wie IL-1 (Literaturstelle 12) und IL-2 (Literaturstelle 11) wurde vorgeschlagen. Die Fähigkeit von IL-1, als Hämopoietin-1 zur funktionieren und die Entwicklung multipotenter hämopoietischer Zellen bei Kombination mit Kolonie-stimulierenden Faktoren, wie GM-CSF, G- CSF, CSF-1, IL-3, Erythropoietin, zu induzieren, oder eine die Erythrocyten verstärkende Aktivität ist in der PCT-Anmeldung WO88/00969 offenbart.
B-Zellen sind an der Produktion verschiedener Lymphokine, die an der T-Zell-Differenzierung teilnehmen können, beteiligt (Literaturstellen 15, 16). Über die Fähigkeit der von PHA induzierten "B+Null"-Zellen (periphere Blutlymphocyten, die von anhaftenden und reifen T-Zellen befreit sind) abgeleiteten Überstände, in vitro die Erzeugung von reifen T-Zell-Clonen aus Prothymocyten unabhängig ihres anatomischen Ursprungs zu fördern, wurde berichtet (Literaturstellen 8, 13, 14). Diese Prothymocyten differenzierende Aktivität (PTDA) leitete sich von den B-Zellen ab (Literaturstelle 14). IL-1 allein hatte keine Wirkung in dieser Hinsicht. Jedoch enthielten von "B+Null"-Zellen abgeleitete Überstände mit PTDA immer niedrige Gehalte an IL-1, wohingegen weder IL-2, IL-3, IL-4, IL-5, IL-6, GM- CSF, TNF oder IFN-γ in diesen Überständen nachgewiesen wurden (Literaturstellen 8, 14). Die biologischen Aktivitäten der von "B+Null"-Zellen abgeleiteten Überstände sind beispielsweise die Fähigkeit, die Bildung von Zellen zu fördern, die eine T-Kolonie aus von reifen T-Zellen befreitem Knochenmark, Thymus und PBL erzeugen können, die Fähigkeit, von CD4&spplus;-Zellen abgeleitete Antworten zu verstärken, die Fähigkeit, die CFU-GM, CFU-GEMM und BFU-E- Zahlen in Dexter-Kulturen zu erhöhen, die Fähigkeit, die Bildung von Myeloidkolonien in Kulturen von Knochenmarkszellen aus Patienten mit einer refraktären Anämie zu erhöhen, und die Fähigkeit, reife T-Zell-Marker auf Zellen, die von einigen akuten Lymphoblasten-Leukämien mit den Besonderheiten der Prothymocyten abgeleitet sind, zu induzieren. Ein Beispiel für eine solche akute Lymphoblasten- Leukämie mit den Besonderheiten der Prothymocyten, in denen die Tumorzellen einen CD7&spplus;CD4&supmin;CD8&supmin;-Phänotyp besitzen, wurde von Kurtzberg et al. beschrieben (Literaturstelle 10).
Verbindungen mit PTDA können zur Behandlung solcher Leukämien nützlich sein, weil die reifen T-Zellen, die von den Leukämiezellen mit den Besonderheiten der Prothymocyten abgeleitet sind, ihre Fähigkeit zur Tumorerzeugung verloren haben könnten.
T-Zell-Immundefekte können durch die Unfähigkeit des Organismus, reife T-Zellen zu produzieren, oder durch den Verlust von reifen T-Zellen hervorgerufen werden. T-Zell-Immundefekte kommen beispielsweise bei Patienten mit Thymusdysfunktionen nach einer immunsuppressiven Therapie, bei älteren und bei AIDS-Patienten vor.
Verbindungen mit PTDA können zur Behandlung solcher T- Zell-Immundefekte nützlich sein.
Es ist eine Aufgabe der vorliegenden Erfindung, ein Präparat mit PTDA bereitzustellen. Überraschenderweise besitzt ein Präparat, umfassend den 25K IgE-Bindungsfaktor, (25K IgE-BF), auch als löslicher CD23 (sCD23) bezeichnet, und Interleukin-1 (IL-1) PTDA.
Weitere Aufgaben der Erfindung sind die Verwendung des Präparats zur Stimulierung der Prothymocytenreifung.
Die Erfindung betrifft ein pharmazeutisches Präparat, umfassend wirksame Mengen des 25K IgE-BFs mit der Aminosäuresequenz mit der Sequenzzuordnung (SEQ ID) Nr. 1, die in dem Sequenzprotokoll gezeigt ist, oder einer pharmakologisch wirksamen Variante, eines Fragments oder Derivats davon und an IL-1 oder einer pharmakologisch wirksamen Variante, eines Fragments oder Derivats davon als Gemisch zur gemeinsamen Verwendung oder zur Verwendung in getrennter Form für die aufeinanderfolgende Verwendung. Das pharmazeutische Präparat wird nachstehend auch als ein erfindungsgemäßes pharmazeutisches Präparat bezeichnet.
Der 25K IgE-BF oder eine pharmakologisch aktive Variante, ein Fragment oder Derivat davon und IL-1 oder eine pharmakologisch aktive Variante, ein Fragment oder Derivat davon sind bekannt oder können nach bekannten Verfahren hergestellt werden. Der 25K IgE-BF, Varianten, Fragmente und Derivate davon und Verfahren zu ihrer Herstellung sind beispielsweise in der EP-A-0254249 und der EP-A-0205405 offenbart. IL-1 und Verfahren zu dessen Herstellung sind beispielsweise in der EP-A-0161901 und der EP-A-0165654 offenbart.
Eine Variante des 25K IgE-BFs ist ein Protein mit einer veränderten Aminosäuresequenz, verglichen mit der Aminosäuresequenz mit der SEQ ID Nr. 1. Eine Variante umfaßt natürlich vorkommende Varianten, z.B. menschliche allelische Varianten oder Varianten, die aus nicht-menschlichen Säugerarten isoliert wurden, beispielsweise von einer Maus oder von einem Affen. Eine Variante umfaßt auch eine künstlich erzeugte Variante.
Der 25K IgE-BF oder eine Variante davon wird bevorzugt mit der rekombinanten DNA-Technologie hergestellt; beispielsweise wird er/sie durch Expression in einer heterologen Wirtszelle hergestellt. Eine oder mehrere Aminosäuren können an das N-terminale oder C-terminale Ende angefügt werden. An das N-terminale Ende kann beispielsweise Methionin, N-Formylmethionin oder N-Acetylmethionin angefügt werden, insbesondere wenn das Expressionsprodukt aus Escherichia coli erhalten wird. Eine künstlich erzeugte Variante des erfindungsgemäßen IgE-BFs oder einer natürlich vorkommenden Variante davon umfaßt Proteine, die durch den Austausch von einer oder mehreren, bis zu 10, Aminosäuren des erfindungsgemäßen 25K IgE-BFs oder einer natürlichen vorkommenden Variante davon gegen eine oder mehrere andere Aminosäuren gekennzeichnet sind.
Unter den Bereich eine Fragments des erfindungsgemäßen 25K IgE-BFs fallen auch Fragmente von Varianten des 25K IgE- BFs.
Ein Fragment des 25K IgE-BFs oder einer Variante davon ist eine Aminosäurekette mit mindestens 10 und bis zu 173 aufeinanderfolgenden Aminosäuren in einer Sequenz entsprechend der Erfindung oder der Sequenz einer Variante davon. Unterschiedliche oder identische Fragmente können kovalent durch Peptidbindungen verknüpft sein.
Fragmente des 25K IgE-BFs sind insbesondere diejenigen der Gruppe bestehend aus Polypeptiden, beginnend mit irgendeiner der Aminosäuren 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, oder 13 und endend mit irgendeiner der Aminosäuren 135 bis 174 der Aminosäuresequenz mit der SEQ 10 Nr. 1. Ein bevorzugtes Fragment ist dadurch gekennzeichnet, daß es aus den Aminosäuren 3 bis 174 besteht. Dieses Fragment kann zusätzlich zu dem erfindungsgemäßen 25K IgE-BF in Überständen von RPMI 8866-Zellen gefunden werden und stellt somit ein natürlich gefundenes Fragment dar.
Derivate des 25K IgE-BFs oder einer Variante davon sind solche, worin funktionelle Gruppen, wie Amino-, Hydroxyl-, Mercapto- oder Carboxylgruppen derivatisiert sind, beispielsweise glycosyliert, acyliert, amidiert bzw. verestert. In glycosylierten Derivaten ist ein Oligosaccharid üblicherweise an Asparagin, Serin, Threonin und/oder Lysin gebunden. Acylierte Derivate sind insbesondere durch eine natürlich vorkommende organische oder anorganische Säure, z.B. Essigsäure, Phosphorsäure oder Schwefelsäure acyliert. Üblicherweise sind die N-terminale Aminogruppe oder die Hydroxygruppen, insbesondere von Tyrosin oder Serin, acyliert. Ester sind diejenigen von natürlich vorkommenden Alkoholen, z.B. Methanol oder Ethanol.
Weitere Derivate sind Salze, insbesondere pharmazeutisch verträgliche Salze, beispielsweise Metallsalze, wie Alkalimetall- und Erdalkalimetallsalze, z.B. Natrium-, Kalium-, Magnesium-, Calcium- oder Zinksalze oder Ammoniumsalze, die mit Ammoniak oder einem geeigneten organischen Amin, wie einem niedrigen Alkylamin, z.B. Triethylamin, Hydroxy-niedriges Alkylamin, z.B. 2-Hydroxyethylamin und dergleichen, gebildet sind.
Der Ausdruck "erfindungsgemäßes Derivat" umfaßt auch Derivate einer Variante oder eines Fragments des erfindungsgemäßen 25K IgE-BFs.
Eine pharmakologisch aktive Variante, ein Fragment oder Derivat des 25K IgE-BFs besitzt einen meßbaren stimulierenden Einfluß auf die Reifungsgeschwindigkeit der Prothymocyten in Kombination mit IL-1 oder einer pharmakologisch aktiven Variante, einem Fragment oder Derivat davon.
Am meisten bevorzugt ist ein pharmazeutisches Präparat, umfassend den menschlichen 25K IgE-BF mit der Aminosäuresequenz gemäß SEQ ID Nr. 1.
Der Ausdruck IL-1 umfaßt IL-1, das aus dem Überstand von Säugerzellen, die natürlicherweise IL-1 produzieren, z.B. aus Monocyten, gegebenenfalls nach Stimulierung der IL-1 Produktion in solchen Zellen, gereinigt wurde. IL-1 kann von verschiedenen Arten, z.B. von Menschen, Affen oder Mäusen, bevorzugt von Menschen, abgeleitet sein. IL-1 umfaßt auch rekombinantes IL-1, z.B. rekombinantes IL-1α oder rekombinantes IL-1-β, erzeugt beispielsweise in E. coli- oder Säugerzellen.
Die Bedeutung eines Derivats von IL-1 entspricht der vorstehend angegebenen Bedeutung eines Derivats des 25K TgE- BFs. Unter den Umfang der vorliegenden Erfindung fallen auch Derivate von Varianten oder Fragmenten von IL-1.
Eine pharmakologisch aktive Variante, ein Fragment oder Derivat von IL-1 besitzt einen meßbaren stimulierenden Einfluß auf die Reifungsgeschwindigkeit der Prothymocyten in Kombination mit dem 25K IgE-BF oder einer pharmakologisch aktiven Variante, einem Fragment oder Derivat davon.
Ein erfindungsgemäßes pharmazeutisches Präparat besitzt einen stimulierenden Einfluß auf die Reifungsgeschwindigkeit von Prothymocyten. Es umfaßt wirksame Mengen des 25K IgE-BFs oder einer pharmakologisch aktiven Variante, eines Fragments oder Derivats davon und von IL-1 oder einer pharmakologisch aktiven Variante, eines Fragments oder Derivats davon, die geeignet sind, die Prothymocytenreifung zu stimulieren.
Effektive Mengen der Wirkstoffe eines erfindungsgemäßen pharmazeutischen Präparats umfassen ein Verhältnis von etwa 50 Einheiten IL-1 oder einer äquivalenten Menge einer pharmakologisch aktiven Variante, eines Fragments oder Derivats davon auf etwa 0,25 bis zu 125 ng, bevorzugt 25 bis zu 100 ng, 25K IgE-BF oder einer äquivalenten Menge einer pharmakologisch aktiven Variante, eines Fragments oder Derivats davon. Die Wirkstoffe können vermischt oder in getrennter Form vorliegen.
Die Erfindung betrifft auch die Verwendung eines erfindungsgemäßen pharmazeutischen Präparats zur Stimulierung der Prothymocytenreifung in vitro, z.B. in Zellkultur, oder in vivo, z.B. in einem Organismus.
Ein Prothymocyt ist eine hämatopoietische Stammzelle, die nach der Stimulierung mit geeigneten differenzierenden Faktoren zu einem reifen T-Lymphocyten reifen kann. Ein Prothymocyt kann beispielsweise ein Säuger-, z.B. Maus-, Affen- oder bevorzugt Menschenprothymocyt sein.
Ein Prothymocyt ist beispielsweise durch das Vorhandensein der CD7-Zelloberflächenmarker und das Fehlen beispielsweise der CD2-, CD3-, CD4- und CD8-Zelloberflächenmarker gekennzeichnet. Folglich ist ein erfindungsgemäßer Prothymocyt insbesondere eine CD7&spplus;CD2&supmin;CD3&supmin;CD4&supmin;CD8&supmin;-Zelle.
Die Prothymocytenreifung führt zu einer T-Zelle, die durch das Vorhandensein bestimmter Zelloberflächenmarker, die auf dem Prothymocyten nicht nachweisbar waren, gekennzeichnet ist. Solche Marker sind z.B. CD2, CD3, CD4, CD8 und TCR. Folglich führt die Reifung eines Prothymocyten zur Bildung einer CD7&spplus;CD2&spplus;CD3&spplus;TCR&spplus;CD4&spplus;- und/oder CD8&spplus;- Zelle.
Verfahren zur Bestimmung der Zelloberflächenmarker sind auf dem Fachgebiet gut bekannt, z.B. indirekte Immunfluoreszenztechniken.
Ein Prothymocyt ist auch eine Zelle mit Zelloberflächenmarkern, die für die Prothymocyten, die von einem Patienten mit akuter Lymphoblastenleukämie abgeleitet sind, typisch sind.
Ein Prothymocyt und die Reifung der Prothymocyten zu T- Zellen kann auch auf funktioneller Ebene überwacht werden. Die Proliferation einer T-Zelle aber nicht eines Prothymocyten kann mit einer Kombination eines Anti-CD2- oder Anti-CD3-Antikörpers und IL-2 stimuliert werden. Die Proliferation der Zellen kann mit herkömmlichen Verfahren bestimmt werden.
Eine bevorzugte Ausführungsform der Erfindung ist die Verwendung eines erfindungsgemäßen pharmazeutischen Präparats zur Stimulierung der Reifung von CD7&spplus;CD2&supmin;CD3&supmin;CD4&supmin;CD8&supmin;-Zellen zu CD2&spplus;CD3&spplus;TCR&spplus;CD4&spplus;- und/oder CD8&spplus;-Zellen in vitro, z.B. in Zellkultur oder in vivo, z.B. in einem Organismus.
Die Stimulierung der Reifung der Prothymocyten wird beispielsweise durch die Zugabe eines erfindungsgemäßen pharmazeutischen präparats zu einer Zellkultur, umfassend Prothymocyten in einer solchen Menge, daß eine Endkonzentration von etwa 0,25 ng/ml bis zu etwa 125 ng/ml, bevorzugt von etwa 25 ng/ml bis zu etwa 100 ng/ml, des 25K IgE-BFs oder einer äquivalenten Menge einer pharmakologisch aktiven Variante, eines Fragments oder Derivats davon erreicht wird, durchgeführt.
Eine Zellkultur, umfassend Prothymocyten, wird aus Gewebe, umfassend die Zellen, z.B. aus Knochenmark, Lymphknoten, embryonalem Gewebe, Blut, Thymus oder Mandeln, erhalten. Das Gewebe kann durch Biopsie erhalten werden, und die Zellkultur kann durch Homogenisieren des Gewebes, Isolieren der lymphatischen Zellen, z.B. durch Dichtegradientenzentrifugation oder durch Züchten der lymphatischen Zellen in einem geeigneten Kulturmedium, erhalten werden. Verfahren zur Isolierung und Züchtung lymphatischer Zellen sind auf dem Fachgebiet bekannt.
Prothymocyten können weiter aus den lymphatischen Zellen nach herkömmlichen Verfahren, beispielsweise durch Aussortieren der lymphatischen Zellen in einem Zellsorter oder auf einer Plastikoberfläche, an die sich die anhaftende Zellpopulation bindet, gereinigt werden. Die anhaftende Zellpopulation kann dann mit einer spezifisch cytotoxischen Kombination von Antikörpern, die nicht gegen die Prothymocyten, sondern gegen die Zelloberflächenmarker der anderen Zellen in der anhaftenden Population gerichtet sind, und mit Komplement behandelt werden.
Die Stimulierung der Prothymocytenreifung kann zur Vergrößerung eines T-Zell-Pools und/oder zur Verringerung eines Prothymocytenpools in einer Zellkultur oder einem Organismus führen. Nach der in vitro-Stimulierung der aus einem Organismus isolierten Prothymocyten können die Zellen in einen Organismus der gleichen oder einer eng verwandten Art oder bevorzugt in das Individuum, aus dem die Prothymocyten isoliert wurden, reinfundiert oder reimplantiert werden.
Folglich betrifft die vorliegende Erfindung auch die Verwendung eines erfindungsgemäßen pharmazeutischen Präparats zur Stimulierung der Reifung von Prothymocyten in vitro oder in vivo, beispielsweise zur Vergrößerung eines T- Zell-Pools in vitro, z.B. in Zellkultur, oder in vivo, z.B. in einem Organismus, zur Behandlung oder Prävention eines T-Zell-Immundefekts. Unter den Umfang eines T-Zell- Immundefekts fallen kongenitale und erworbene T-Zell-Immundefekte, z.B. AIDS, T-Zell-Immundefekte älterer Patienten, von Patienten nach therapeutischer Immunsuppression und von Patienten mit Autoimmunerkrankungen oder mit Thymusdysfunktionen. Bevorzugt ist die Verwendung zur Behandlung von ATDS.
Die Erfindung betrifft auch die Verwendung eines erfindungsgemäßen pharmazeutischen Präparats zur Stimulierung der Prothymocytenreifung, beispielsweise zur Verringerung eines Prothymocytenpools in vitro, z.B. in einer Zellkultur, oder in vivo, z.B. in einem Organismus, z.B. zur Behandlung oder Verhütung einer Lymphoblastenleukämie mit Prothymocyteneigenschaften, nachstehend auch als Prothymocytenleukämie bezeichnet.
Eine Prothymocytenleukämie ist eine akute Leukämie, die dadurch gekennzeichnet ist, daß die Tumorzelle ein Prothymocyt, z.B. mit einem CD7&spplus;CD4&supmin;CD8&supmin;-Phänotyp, ist.
Ein erfindungsgemäßes pharmazeutisches Präparat kann einem Organismus, bevorzugt einem Säugerorganismus, bevorzugter einem Menschen, parenteral, beispielsweise intermuskulär, subkutan, intravenös oder direkt in das Gewebe, in dem die Bildung der T-Lymphocyten stattfindet, z.B. in den Thymus oder das Knochenmark, üblicherweise in Dosiseinheitsformen, wie Ampullen oder Phiolen, verabreicht werden. Die Mengen der zu verabreichenden Polypeptide hängen von ihren spezifischen Aktivitäten, dem Alter, dem Gewicht und dem allgemeinen Zustand des Patienten, dem Typ und der Schwere der Erkrankung, der Art der Verabreichung ab, und müssen auf dem Urteil des praktischen Arztes beruhen. Im allgemeinen kann eine Dosis zwischen etwa 10 ug und etwa 5000 ug von jedem des erfindungsgemäßen 25K IgE-BF oder einer pharmakologisch aktiven Variante, Fragment oder Derivat davon und IL-1 oder einer pharmakologisch aktiven Variante, Fragment oder Derivat davon pro kg Körpergewicht und Tag verabreicht werden.
In einem erfindungsgemäßen pharmazeutischen Präparat liegen die Wirkstoffe in Form eines Gemisches oder in getrennter Form vor. Wenn die Wirkstoffe in dem pharmazeutischen Präparat in getrennter Form vorliegen, können sie auf getrennten Verabreichungswegen verabreicht werden.
Ein erfindungsgemäßes pharmazeutisches Präparat insbesondere zur Verwendung zur Behandlung oder Verhütung von T- Zell-Immundefekten oder Prothymocytenleukämien umfaßt herkömmlich pharmazeutisch verträgliche Träger, die für die parenterale, z.B. intramuskuläre, subkutane oder intraperitoneale Verabreichung geeignet sind und keine nachteilige Wechselwirkung mit den Wirkstoffen zeigen.
Es gibt geeignete Phiolen, die ein festes Pulver enthalten, oder Phiolen, Ampullen und dergleichen, die Infusionslösungen, bevorzugt wäßrige Lösungen oder Suspensionen, enthalten, wobei es möglich ist, diese vor Gebrauch, beispielsweise aus lyophilisierten Präparaten, die den Wirkstoff allein oder zusammen mit einem Träger, wie Mannit, Lactose, Glucose, Dextrose, Albumin und dergleichen enthalten, herzustellen. Das pharmazeutische Präparat kann sterilisiert werden und gegebenenfalls mit Hilfsstoffen, z .B. Konservierungsstoffen, Stabilisatoren, Emulgatoren, Lösungsvermittlern, Puffern und/oder Salzen in 0,9% Natriumchlorid zur Regulierung des osmotischen Drucks vermischt werden. Die Sterilisation kann durch Sterilfiltration über Filter mit kleiner Porengröße (Durchmesser 0,45 um oder kleiner) durchgeführt werden, wonach das Präparat gegebenenfalls lyophilisiert werden kann. Antibiotika können ebenfalls zugesetzt werden, um den Erhalt der Sterilität zu unterstützen.
Ein erfindungsgemäßes pharmazeutisches Präparat wird in Einheitsdosisformen, beispielsweise Ampullen, umfassend 1 bis 2000 mg eines pharmazeutisch verträglichen Trägers pro Einheitsdosis und etwa 0,001 bis 100 mg, bevorzugt etwa 0,1 bis 50 mg, jedes der Wirkstoffe pro Einheitsdosis abgegeben.
Die Erfindung betrifft auch ein Verfahren zur Herstellung eines erfindungsgemäßen pharmazeutischen Präparats.
Das Verfahren ist dadurch gekennzeichnet, daß der erfindungsgemäße 25K IgE-BF oder eine pharmakologisch aktive Variante, ein Fragment oder Derivat davon und IL-1 oder eine pharmakologisch aktive Variante, ein Fragment oder Derivat davon mit einem pharmazeutisch verträglichen Träger vermischt werden, oder, wenn die wirksamen Inhaltsstoffe in getrennter Form in dem pharmazeutischen Präparat vorliegen, getrennt mit einem pharmazeutisch verträglichen Träger vermischt werden.
Ein erfindungsgemäßes pharmazeutisches Präparat wird nach an sich bekannten Verfahren, beispielsweise durch herkömmliches Vermischen, Auflösen, Lyophilisieren, Gefriertrocknen und ähnliche Verfahren hergestellt und enthält 0,1 bis 100%, insbesondere etwa 1 bis 50%, der Wirkstoffe.
Die Erfindung betrifft ferner eine Packung, umfassend ein erfindungsgemäßes pharmazeutisches Präparat, gegebenenfalls zusammen mit Gebrauchsanweisungen.
Einem Organismus oder einer Zellkultur, die ausreichend IL-1 besitzt, muß nur der 25K IgE-BF oder eine pharmakologisch aktive Variante, ein Fragment oder Derivat davon oder ein pharmazeutisches Präparat, umfassend den 25K IgE- BF oder eine pharmakologisch aktive Variante, ein Fragment oder Derivat davon als einziger Wirkstoff verabreicht werden, um die Prothymocytenreifung zu stimulieren. Auf ähnliche Weise muß einem Organismus oder einer Zellkultur mit ausreichend 25K IgE-BF nur IL-1 oder eine pharmakologisch aktive Variante, ein Fragment oder Derivat davon oder ein pharmazeutisches Präparat, umfassend IL-1 oder eine pharmakologisch aktive Variante, ein Fragment oder Derivat davon als einziger Wirkstoff verabreicht werden, um die Prothymocytenreifung zu stimulieren.
Wie vorstehend erwähnt, kann die Stimulierung der Prothymocytenreifung zur Vergrößerung eines T-Zell-Pools und/oder Verringerung eines Prothymocytenpools in vitro, z.B. in einer Zellkultur, oder in vivo, z.B. in einem Organismus, führen.
Folglich betrifft die Erfindung auch die Verwendung des 25K IgE-BFs oder einer pharmakologisch aktiven Variante, eines Fragments oder Derivats davon, bevorzugt des 25K IgE-BFs, zur Stimulierung der Prothymocytenreifung in einer Zellkultur oder in einem Organismus, z.B. einer Maus, einem Affen oder bevorzugt einem Menschen mit ausreichend IL-1, z.B. zur Vergrößerung eines T-Zell-Pools, z.B. zur Behandlung oder Verhütung eines T-Zell-Immundefekts, bevorzugt von AIDS, oder zur Verringerung eines Prothymocytenpools, z.B. zur Behandlung oder Verhütung einer Prothymocytenleukämie.
Auf ähnliche Weise betrifft die Erfindung die Verwendung von IL-1 oder einer pharmakologisch aktiven Variante, eines Fragments oder Derivats davon zur Stimulierung der Prothymocytenreifung in einer Zellkultur oder in einem Organismus, z.B. einer Maus, einem Affen oder bevorzugt einem Menschen, umfassend ausreichend 25K IgE-BF, z.B. zur Vergrößerung eines T-Zell-Pools, z.B. zur Behandlung oder Verhütung eines T-Zell-Immundefekts, bevorzugt von AIDS, oder zur Verringerung eines Prothymocytenpools, z.B. zur Behandlung oder Verhütung einer Prothymocytenleukämie. Die Bedeutung von IL-1 und bevorzugter Formen davon ist wie vorstehend angegeben.
Ein weiterer Gegenstand der Erfindung ist die Verwendung des 25K IgE-BFs oder einer pharmakologisch aktiven Variante, eines Fragments oder Derivats davon zur Herstellung eines pharmazeutischen Präparats zur Stimulierung der Reifung der Prothymocyten in vitro, z.B. in einer Zellkultur oder in vivo, z.B. in einem Organismus, z.B. in einer Maus, einem Affen oder bevorzugt in einem Menschen, z.B. zur Vergrößerung eines T-Zell-Pools, z.B. zur Behandlung oder Verhütung eines T-Zell-Immundefekts wie der vorstehend erwähnten, bevorzugt von AIDS, oder zur Verringerung eines Prothymocytenpools, z.B. zur Behandlung oder Verhütung einer Prothymocytenleukämie. Das pharmazeutische Präparat enthält entweder nur den 25K IgE-BF oder eine pharmakologisch aktive Variante, ein Fragment oder Derivat davon oder gegebenenfalls auch IL-1 oder eine pharmakologisch aktive Variante, ein Fragment oder Derivat davon als Wirkstoff. Der zuerst genannte Typ des pharmazeutischen Präparats dient der Verwendung in einer Zellkultur oder einem Organismus mit ausreichend IL-1.
Ein Gegenstand der Erfindung ist auch die Verwendung von IL-1 oder einer pharmakologisch aktiven Variante, eines Fragments oder Derivats davon zur Herstellung eines pharmazeutischen Präparats zur Stimulierung der Prothymocytenreifung in vitro, z.B. in einer Zellkultur, oder in vivo, z.B. in einem Organismus, z.B. in einer Maus, einem Affen oder bevorzugt einem Menschen, z.B. zur Vergrößerung eines T-Zell-Pools, z.B. zur Behandlung oder Verhütung eines T-Zell-Immundefekts, bevorzugt von AIDS, oder zur Verringerung eines Prothymocytenpools, z.B. zur Behandlung oder Verhütung einer Prothymocytenleukämie. Das pharmazeutische Präparat enthält entweder nur IL-1 oder eine pharmakologisch aktive Variante, ein Fragment oder Derivat davon, oder gegebenenfalls auch den 25K IgE-BF oder eine pharmakologisch aktive Variante, ein Fragment oder Derivat davon als Wirkstoff. Der zuerst genannte Typ des pharmazeutischen Präparats dient der Verwendung in einer Zellkultur oder einem Organismus mit ausreichend 25K IgE-BF.

Abkürzungen

Die vorstehend und in den Beispielen verwendeten Abkürzungen besitzen die folgenden Bedeutungen:
AIDS Erworbenes Immundefektsyndrom
ALL Akute Lymphoblastenleukämie
BFU-E Aufplatzende Zellen-bildende Einheit- Erythrocyten (BFU-Erythrocyten)
CFU-GEMM Kolonie-bildende Einheit-Granulocyten, Erythrocyten, Monocyten, Megakaryocyten
CFU-GM Kolonie-bildende Einheit-Granulomonocyten
IL-1 Interleukin-1
rIL-1 Rekombinantes Interleukin-1
IL-2 Interleukin-2
rIL-2 Rekombinantes Interleukin-2
mAK-45-Affigel Mit dem monoclonalen Antikörper 45 beschichtetes Affinitätsgel
MHC Haupthistokompatibilitätskomplex
PBL Periphere Blutlymphocyten
PHA Phytohämaglutinin
PTDA Prothymocyten-differenzierende Aktivität
TcR T-Zell-Rezeptor

Versuchsteil

Die folgenden Beispiele sollen die vorliegende Erfindung naher erläutern, ohne sie jedoch zu beschränken.

Monoclonale Anitkörper (mAKs)

mAk Antigen Quelle, Referenz
OKT6 CD1 Ortho Pharmaceuticals
OKT11A CD2 Ortho Pharmaceuticals
OKT3 CD3 Ortho Pharmaceuticals
OKT4 CD4 Ortho Pharmaceuticals
OKT8 CD8 Ortho Pharmaceuticals
WT31 CD3/TCR-β-Komplex Becton Dickinson, Grenoble, Frankreich
RFT2 CD7 Literaturstelle 20
IOM2 CD14 Immunotech
IOB4 CD19 Immunotech, Marseille, Lumigny, Frankreich
IOB6 CD23, 25K IgE-BF Immunotech, Marseille, Lumigny, Frankreich
IOT14 CD25 Immunotech, Marseille, Lumigny, Frankreich
Anti-Tigamma A TCRγ Literaturstelle 21
δTCS-1 TCRδ T cell Sciences, Cambridge, MA

Züchtung der Lymphocyten

Alle Lymphocyten werden routinemäßig in einer Dichte von etwa 10&sup6; Zellen/ml in einem McCoy's 5A (Flow Laboratories) Medium, das wie in Robinson et al. beschrieben (Literaturstelle 18) modifiziert wurde, gezüchtet. Alle Medien werden mit menschlichem AB-Serum (HS), menschlichem AB- Plasma (HP) oder fötalem Kälberserum (FCS) supplementiert. AB-Serum und AB-Plasma wird aus Spendern mit AB&spplus;-Blutgruppen bezogen. Die Kulturen werden bei 37ºC in einer wassergesättigten Atmosphäre, die 6% CO&sub2; enthält, inkubiert.

Beispiel 1: Stimulierung der Reifung von gereinigten CD7+CD2&supmin;CD3&supmin;CD4&supmin;CD8&supmin;-Zellen

Thymocyten werden auf an sich bekannte Weise durch Zerlegen von Thymusfragmenten (Literaturstelle 17) erhalten. CD7+CD2&supmin;CD3&supmin;CD4&supmin;CD8&supmin;-Zellen werden aus den Thymocyten durch Adhäsion auf Plastikoberflächen und zwei anschließende Zyklen einer cytotoxischen Behandlung, wie von Mossalayi et al. (Literaturstelle 8) beschrieben, mit OKT11A, OKT3, OKT4 und OKT8 (Ortho pharmaceuticals, Raritan, NJ) und anschließend Inkubation mit Komplement isoliert. Das bei dieser Arbeit verwendete Komplement ist ein Serum aus 4 Wochen alten Kaninchen, das durch direkte Herzpunktur erhalten wurde. Das Komplement wird auf die Abwesenheit einer nicht-spezifischen Toxizität gegen menschliche T- Zell-Vorläufer getestet. CD7&spplus;-Zellen werden dann positiv durch Einbringen der CD7&spplus;CD2&supmin;CD3&supmin;CD4&supmin;CD8&supmin;-Zellen in mit monoclonalen RFT2A-Antikörpern (IgM, Anti-CD7) beschichtete Kolben, wie beschrieben (Literaturstelle 13), selektioniert. Die CD7&spplus;CD2&supmin;CD3&supmin;CD4&supmin;CD8&supmin;-Zellen werden gewonnen und bei 1250 g 25 Minuten lang auf einem Ficoll-Gradienten zentrifugiert, um die toten Zellen zu beseitigen. Die CD7&spplus;CD2&supmin;CD3&supmin;CD4&supmin;CD8&supmin;-Zellen werden aus dem Ficoll-Gradienten gewonnen und machen etwa 0,37% der Gesamtthymocyten aus.
Die Reifung der CD7&spplus;CD2&supmin;CD3&supmin;CD4&supmin;CD8&supmin;-Zellen wurde durch deren 48-stündige Inkubation bei 37ºC in einer wassergesättigten Atmosphäre, die 6% CO&sub2; enthält, in einer Dichte von 10&sup6; Zellen/ml in Mccoy's 5A-Medium, enthaltend 20% dekomplementiertes und gefiltertes AB-Serum, erhalten von gesunden Menschen, und einen oder eine Kombination der folgenden Faktoren, stimuliert:
rekombinanter 25K IgE-BF mit der Aminosäuresequenz mit der SEQ ID Nr. 1 in einer Konzentration von 25 ng/ml.
rIL-1β (50 E/ml; Glaxo, Genf).
rIL-2 (100 E/ml; Glaxo, Genf).
IOB6 (25 ug/ml; monoclonaler Antikörper, IgG1K)
IOT14 (10 ug/ml; monoclonaler Antikörper, IgG2a)
Die Zellen werden dann bei 450 g geerntet, und der Reifungszustand der Zellen wird durch Analyse der Oberflächenmarker der Zellen mit der indirekten Immunfluoreszenztechnik, wie in Literaturstelle (8) beschrieben, getestet. Tabelle 1: Oberflächenphänotyp von gereinigten CD7&spplus;-Thymocyten vor und nach 48stündigen Inkubation mit verschiedenen Faktoren % der Fluoreszens-positiven Zellen Oberflächenmarker Vor Inkubation Nach Inkubation mit: nichts rekombinantem 25K IgE-BF ND: nicht durchgeführt
Zellen, die vor der Inkubation mit Faktoren geerntet wurden, ebenso wie Zellen, die in einem Nährmedium ohne Faktoren inkubiert wurden, werden als Kontrolle verwendet. Die Zellen werden mit den folgenden monoclonalen Antikörpern markiert (erkanntes Antigen in Klammern): OKT6 (CD1), OKT11A (CD2), OKT3 (CD3), OKT4 (CD4), OKT8 (CD8), WT31 (erkennt den CD3/TCRαβ-Komplex), IOTI14 (CD25), IOB4 (CD19), RFT2A (CD7), Anti-TigammaA oder δTCS-1 (TCRδ). Fluoreszein-konjugierte Anti-Maus-F(ab')-Fragmente (Beckton Dickinson) werden als zweiter Antikörper verwendet (alle Antikörper und Fragmente werden in einer Endverdünnung von 1/50 verwendet). Die Ergebnisse sind in der Tabelle 1 gezeigt.

Beispiel 2: Mitogene Stimulierung der von den durch Reifung stimulierten CD7&spplus;CD2&supmin;CD3&supmin;CD4&supmin;CD8&supmin;-Zellen abgeleiteten Zellen

CD7&spplus;CD2&supmin;CD3&supmin;CD4&supmin;CD8&supmin;-Zellen werden 24 Stunden in Gegenwart von verschiedenen Faktoren, wie in Beispiel 1 beschrieben, inkubiert. Sie werden dann in ausgeglichener Hank's Salzlösung (HBSS, Institut Pasteur, Paris, Frankreich) gewaschen und anschließend in McCoy's 5A-Medium (10&sup6; Zellen/ml, 37ºC, 6% CO&sub2;) in der Gegenwart einer 1:400 verdünnten Ascitesflüssigkeit, enthaltend Anti-CD2I+III mAk (Literaturstelle 22), gezüchtet. Am Tag 5 wird 1 mCi ³H- Thymidin den 5.10&sup4; Zellen in einem Endvolumen von 0,1 ml 24 Stunden lang zugesetzt. Die Zellen werden in HBSS gewaschen, auf Skatron-Papieren (Nr. 11731; Suffolk, UK) filtriert, in Scintillationslösung (Pico-Fluor, Packard, Groningen, Niederlande) aufgelöst, und die radioaktiven Counts werden unter Verwendung eines β-Scintillationscounters (Beckman) bestimmt. Die durchschnittlichen Ergebnisse und die Standardabweichung der vier unabhängigen Versuchsreihen sind in der Tabelle 2 angegeben. Keine signifikante proliferative Antwort der Zellen wird erhalten, wenn die Lösungen von 25K IgE-BF mit IOB6 beschichteten Sepharosekugeln vorinkubiert werden (Daten nicht gezeigt). Tabelle 2: Proliferative Antworten (Aufnahme von ³H-Thymidin) der CD7&spplus;CD2&supmin;CD3&supmin;CD4&supmin;CD8&supmin;-Zellen nach in vitro-Konditionierung Zellen vorinkubiert mit: ZELLEN Nichts rekombinantem 25K IgE-BF * Mittelwert + Standardabweichung aus 4 Versuchen, jeder dreimal durchgeführt.
Beispiel 3: Dosis-abhängige mitogene Stimulierung und Reifung von CD7&spplus;CD2&supmin;CD3&supmin;CD4&supmin;CD8&supmin;-Zellen
CD7&spplus;CD2&supmin;CD3&supmin;CD4&supmin;CD8&supmin;-Zellen werden 48 Stunden lang in Mc-Coy's 5A-Medium (10&sup6; Zellen/ml, 37ºC, 6% CO&sub2;) in Gegenwart einer konstanten rIL1β-Konzentration (50 E/ml) und verschiedener Konzentrationen an rekombinantem 25 IgE-BF gezüchtet. Die Zellen werden dann geerntet und gewaschen. Der Prozentsatz der CD7&spplus;-Prothymocyten, die sowohl eine CD2- als auch eine CD3-Expression besitzen, wird dann durch eine indirekte Immunfluoreszenztechnik mit OKT11 (Anti-CD2) und OKT3 (Anti-CD3) und mit einem Kaninchen- anti-Maus-F(ab')&sub2; als zweitem Antikörper bestimmt (alle Antikörper und Fragmente werden in einer Endverdünnung von 1:50 verwendet). In einem parallelen Experiment wird die proliferative Antwort der Zellen gemäß Beispiel 2 bestimmt. Die Ergebnisse sind in der Tabelle 3 gezeigt. Tabelle 3: Proliferative Antwort (Aufnahme von 3H-Thymidin) und Expression der Zelloberflächenmarker CD2 und CD3 in CD7&spplus;CD2&supmin;CD3&supmin;CD4&supmin;CD8&supmin;-Zellen nach Inkubation in Gegenwart verschiedener Konzentrationen an rekombinantem 25K IgE-BF Rekombinanter 25K IgE-BF (ng/ml) CD2&spplus;CD3&spplus;-Zellen (%) * Wachstumsantworten (CPM x 10³) ** * Mittelwert aus 2 Versuchen, Standardabweichung < 10% ** Mittelwert aus 2 Versuchen, Standardabweichung < 25% ND nicht durchgeführt.

Beispiel 4: Synergistische Wirkung von 25K IgE-BF und rIL- 1β auf die Clonierungskapazität von Zellen, die von durch Reifung induzierten CD7&spplus;CD2&supmin;CD3&supmin;CD4&supmin;CD8&supmin;-Zellen abgeleitet sind

CD7&spplus;CD2&supmin;CD3&supmin;CD4&supmin;CD8&supmin;-Zellen werden in Mccoy's 5A-Medium (10&sup6; Zellen/ml, 37ºC, 6% CO&sub2;) 48 Stunden lang in Gegenwart von 25 ng/ml 25K IgE-BF, 25 ug/ml IOB6, 50 E/ml rIL-1β und/oder 1000 E/ml rIL-2 inkubiert. IOB4 wurde in einer Konzentration von 25 ug/ml als Isotyp-gepaarte Kontrolle für IOB6 verwendet und besaß keinen hemmenden Einfluß auf die Wirkung von 25K IgE-BF.
Die Zellen werden dann in HBSS gewaschen und in Grenzverdünnungen, wie von Mossalayi et al. (Literaturstelle 8) beschrieben, in Gegenwart von Anti-CD2I+III (1:400 Ascitesflüssigkeit, Literaturstelle 22) und 50 E/ml rIL-2 gezüchtet. 10&sup4; bestrahlte (2500 Rad) autologe CD2&supmin;-Zellen werden ebenfalls pro Kultur zugesetzt. Die Clonierungshäufigkeiten werden, wie von Porter und Berry (Literaturstelle 23) beschrieben, bewertet, indem positive gegen negative Kavitäten am Tag 10 nach der Züchtung ausgezählt werden. Die Ergebnisse sind in Tabelle 4 gezeigt. Tabelle 4: Synergistische Wirkung von rekombinantem 25K IgE-BF und rIL-1β auf die Clonierungskapazität von Zellen, die von durch Reifung induzierten CD7&spplus;CD2&supmin;CD3&supmin;CD4&supmin;CD8&supmin;- Zellen abgeleitet sind ZELLEN VORBEHANDELT MIT CLONIERUNGSHÄUFIGKEIT MITTELWERT * BEREICH* nichts Rekombinantem 25K IgE-BF *Mittelwert und Bereich der Clonierungshäufigkeiten (positive Kavitäten/negative Kavitäten) aus 4 unterschiedlichen Spendern.

Literaturstellen

1. Snodgrass, H.R., Kisielow, P., Kiefler, M., Steinmetz, M. & von Boehmer, H. Nature 313, 592-595 (1985)
2. Raulot, D.B., Garman, R.D., Saito, H & Tonegawa, S. Nature 314, 103-107 (1985)
3. Born, W., Yague, J, Palmer, E., Kappler, J. & Marrack, P. Proc. Nat. Acad. Sci. U.S.A. 82, 2925-2929 (1985).
4. Ceredig, R., Dialynas, D.P., Fitch, F.W. & MacDonald, H.R. J. Exp. Med. 158, 1654-1671 (1983).
5. Marrack, P. et al. Cell 53, 627-634 (1988).
6. Sia Teh, H. et al. Nature 335, 229-233 (1988).
7. Furley et al. Cell 46, 75-87 (1986).
8. Mossalayi, M.D. et al. Blood, 71, 1281-1287 (1988).
9. Haynes, B.F., Martin, M.E., Key, H. & Kurtzberg, J.J. Exp. Med. 168, 1061-1080 (1988).
10. Kurtzberg, J. et al. Blood 73, 381-390 (1989).
11. Toribio, M.L. et al. J. Exp. Med. 160, 2231-2249 (1988).
12. Rock, K.L. & Benacerraf, B.J. Immunol. 132, 1654-1662 (1984).
13. Mossalayi, M.D. et al. J. Immunol. 134, 2400-2404 (1985).
14. Lecron, J.C. et al. Exp. Hematol. 17, 785-790 (1989).
15. Jurgenson, C.H., Ambrus, J.L. & Fauci, A.S. J. Immunol. 136, 4542-4547 (1986).
16. Taira, S., Matsui, M., Hayakama, K., Yokoyama, T. & Nariuchi, H.J. Immunol. 139, 2957-2964 (1987).
17. Dallol, A.H. et al., Exp. Hematol. 17, 774-778 (1989)
18. Robinson, W.A. (1971) In vitro cell culture of hemopoietic cells. In: Dicke, K.A., and Beckum, V. (eds.). Rijkwijk.
19. Mossalayi et al., Tissue Antigen 33, 100 (1989).
20. Campana, D. et al., J. Immunol. 142, 57-66 (1989).
21 Faure, F. et al., J. Immunol. 141, 3357-60 (1988).
22. Huet, S. et al., Proc. Natl. Acad. Sci USA 84, 7222-26 (1987).
23. Porter, E.H. and Berry, R.J. Br. J. Cancer 17, 583-89 (1963).

Sequenzprotokoll

SEQ ID Nr. 1

SEQUENZTYP: Polypeptid
SEQUENZLÄNGE: 174 Aminosäuren
TOPOLOGIE: linear
URSPRÜNGLICHE HERKUNFT: menschliche B-Zelle
HERKUNFT IM VERSUCH: Überstand von CHO-Zellen, die mit pCALs-BF/ND transformiert wurden (EP-A-0 254 249)
EIGENSCHAFTEN: löslicher 25K IgE-BF, auch als löslicher CD23 bezeichnet.
Leu Arg Met Gln Leu Gln Val Ser Ser Gly Phe Val Cys Asn Thr
5 10 15
Cys Pro Glu Lys Trp Ile Asn Phe Gln Arg Lys Cys Tyr Tyr Phe
20 25 30
Gly Lys Gly Thr Lys Gln Trp Val His Ala Arg Tyr Ala Cys Asp
35 40 45
Asp Met Glu Gly Gln Leu Val Ser Ile His Ser Pro Glu Glu Gln
50 55 60
Asp Phe Leu Thr Lys His Ala Ser His Thr Gly Ser Trp Ile Gly
65 70 75
Leu Arg Asn Leu Asp Leu Lys Gly Glu Phe Ile Trp Val Asp Gly
80 85 90
Ser His Val Asp Tyr Ser Asn Trp Ala Pro Gly Glu Pro Thr Ser
95 100 105
Arg Ser Gln Gly Glu Asp Cys Val Met Met Arg Gly Ser Gly Arg
110 115 120
Trp Asn Asp Ala Phe Cys Asp Arg Lys Leu Gly Ala Trp Val Cys
125 130 135
Asp Arg Leu Ala Thr Cys Thr Pro Pro Ala Ser Glu Gly Ser Ala
140 145 150
Glu Ser Met Gly Pro Asp Ser Arg Pro Asp Pro Asp Gly Arg Leu
155 160 165
Pro Thr Pro Ser Ala Pro Leu His Ser
170

Claims

1. Pharmazeutisches Präparat, umfassend eine wirksame Menge des 25K IgE-BFs mit der Aminosäuresequenz gemäß der SEQ ID Nr. 1 oder einer pharmakologisch aktiven Variante, eines Fragments oder Derivats davon und des IL-1 oder einer pharmakologisch aktiven Variante, eines Fragments oder Derivats davon als ein Gemisch zur gemeinsamen Verwendung oder zur aufeinanderfolgenden Verwendung in getrennter Form.

2. Pharmazeutisches Präparat nach Anspruch 1, umfassend den menschlichen 25K IgE-BF mit der Aminosäuresequenz gemäß SEQ ID Nr. 1.

3. Pharmazeutisches Präparat nach Anspruch 1, umfassend IL-1.

4. Pharmazeutisches Präparat nach Anspruch 3, umfassend rekombinantes IL-1.

5. Pharmazeutisches Präparat nach Anspruch 4, umfassend rekombinantes IL-1β.

6. Pharmazeutisches Präparat nach Anspruch 3, umfassend menschliches IL-1.

7. Pharmazeutisches Präparat nach Anspruch 6, umfassend rekombinantes menschliches IL-1β.

8. Pharmazeutisches Präparat nach Anspruch 1, umfassend ein Verhältnis von etwa 50 Einheiten IL-1 oder einer äquivalenten Menge einer pharmakologisch aktiven Variante, eines Fragments oder Derivats davon, zu etwa 0,25 bis 125 ng 25K IgE-BF mit der Aminosäuresequenz gemäß SEQ ID Nr. 1 oder einer äquivalenten Menge einer pharmakologisch aktiven Variante, eines Fragments oder Derivats davon.

9. Pharmazeutisches Präparat nach Anspruch 8, umfassend ein Verhältnis von etwa 50 Einheiten IL-1 oder einer äquivalenten Menge einer pharmakologisch aktiven Variante, eines Fragments oder Derivats davon zu etwa 25 bis zu 100 ng 25K IgE-BF mit der Aminosäuresequenz gemäß SEQ ID Nr. 1 oder einer äquivalenten Menge einer pharmakologisch aktiven Variante, eines Fragments oder Derivats davon.

10. Pharmazeutisches Präparat nach Anspruch 1, worin die Wirkstoffe in Form eines Gemisches vorliegen.

11. Pharmazeutisches Präparat nach Anspruch 1, worin die Wirkstoffe in getrennter Form vorliegen.

12. Pharmazeutisches Präparat nach Anspruch 1 in Form einer Dosiseinheit.

13. Pharmazeutisches Präparat nach Anspruch 1 zur parenteralen Verabreichung.

14. Pharmazeutisches Präparat nach Anspruch 1 zur intravenösen Verabreichung.

15. Verwendung eines pharmazeutischen Präparats nach Anspruch 1 zur Stimulierung der Reifung der Prothymocyten in vitro.

16. Verwendung nach Anspruch 15 zur Stimulierung der Reifung von Säugerprothymocyten.

17. Verwendung nach Anspruch 16 zur Stimulierung der Reifung menschlicher Prothymocyten.

18. Verwendung nach Anspruch 15 zur Stimulierung der Reifung von CD7&spplus;CD2&supmin;CD3&supmin;CD4&supmin;CD8&supmin;-Zellen zu CD2&spplus;CD3&spplus;TCR&spplus;CD4&spplus;- und/oder CD8&spplus;-Zellen.

19. Verwendung nach Anspruch 15, dadurch gekennzeichnet, daß der 25K IgE-BF mit der Aminosäuresequenz gemäß SEQ ID Nr. 1 oder eine pharmakologisch aktive Variante, ein Fragment oder Derivat davon in einer Endkonzentration von etwa 0,25 ng/ml bis zu etwa 125 ng/ml angewendet wird, und IL-1 oder eine biologisch aktive Variante, ein Fragment oder Derivat davon in einer Endkonzentration von etwa 50 E/ml angewendet wird.

20. Verwendung nach Anspruch 21, dadurch gekennzeichnet, daß der 25K IgE-BF oder eine biologisch aktive Variante, ein Fragment oder Derivat davon in einer Endkonzentration von etwa 25 ng/ml bis zu etwa 100 ng/ml angewendet wird, und IL-1 oder eine pharmakologisch aktive Variante, ein Fragment oder Derivat davon in einer Endkonzentration von etwa 50 E/ml angewendet wird.

21. Verwendung nach Anspruch 15 zur Vergrößerung eines T-Zellen-Pools.

22. Verwendung nach Anspruch 15 zur Verringerung eines Prothymocytenpools.

23. Verfahren zur Herstellung eines pharmazeutischen Präparats nach Anspruch 1, worin die Komponenten nach herkömmlichen Verfahren verarbeitet werden.

24. Packung, umfassend ein pharmazeutisches Präparat nach Anspruch 1, gegebenenfalls zusammen mit Gebrauchsanweisungen.

25. Verwendung des 25K IgE-BFs mit der Aminosäuresequenz gemäß SEQ ID Nr. 1 oder einer pharmakologisch aktiven Variante, eines Fragments oder Derivats davon zur Herstellung eines pharmazeutischen Präparats zur Stimulierung der Prothymocytenreifung.

26. Verwendung nach Anspruch 25, worin das pharmazeutische Präparat der in vitro-Verwendung dient.

27. Verwendung nach Anspruch 25, worin das pharmazeutische Präparat der in vivo-Verwendung dient.

28. Verwendung nach Anspruch 25, worin das pharmazeutische Präparat der Stimulierung der Reifung menschlicher Prothymocyten dient.

29. Verwendung nach Anspruch 25, worin das pharmazeutische Präparat der Stimulierung der Reifung von CD7&spplus;CD2&supmin;CD3&supmin;CD4&supmin;CD8&supmin;-Zellen zu CD2&spplus;CD3&spplus;TCR&spplus;CD4&spplus;- und/oder CD8&spplus;-Zellen dient.

30. Verwendung nach Anspruch 25, worin das pharmazeutische Präparat der Vergrößerung eines T-Zellen-Pools dient.

31. Verwendung nach Anspruch 25, worin das pharmazeutische Präparat der Behandlung oder Verhütung eines T- Zell-Inmundefekts dient.

32. Verwendung nach Anspruch 25, worin das pharmazeutische Präparat der Behandlung oder Verhütung eines erworbenen T-Zell-Immundefekts dient.

33. Verwendung nach Anspruch 25, worin das pharmazeutische Präparat der Behandlung oder Verhütung von AIDS dient.

34. Verwendung nach Anspruch 25, worin das pharmazeutische Präparat der Verringerung eines Prothymocytenpools dient.

35. Verwendung nach Anspruch 25, worin das pharmazeutische Präparat der Behandlung oder Verhütung einer Prothymocytenleukämie dient.

36. Verwendung nach Anspruch 25, worin das pharmazeutische Präparat der Behandlung oder Verhütung einer Prothymocytenleukämie, worin die Tumorzellen einen CD7&spplus;CD4&supmin;CD8&supmin;-Phänotyp besitzen, dient.

37. Verwendung des 25K IgE-BFs mit der Aminosäuresequenz gemäß SEQ ID Nr. 1 oder einer pharmakologisch aktiven Variante, eines Fragments oder Derivats davon zur Herstellung eines pharmazeutischen Präparats, umfassend nur IGF-I als Wirkstoff zur Stimulierung der Prothymocytenreifung in einer Zellkultur oder einem Organismus, umfassend ausreichend IL-1.

38. Verwendung von IL-1 oder einer biologisch aktiven Variante, eines Fragments oder Derivats davon zur Herstellung eines pharmazeutischen Präparats zur Stimulierung der Prothymocytenreifung.

39. Verwendung nach Anspruch 38, worin das pharmazeutische Präparat der in vitro-Verwendung dient.

40. Verwendung nach Anspruch 38, worin das pharmazeutische Präparat der in vitro-Verwendung dient.

41. Verwendung nach Anspruch 38, worin das pharmazeutische Präparat der Stimulierung der Reifung menschlicher Prothymocyten dient.

42. Verwendung nach Anspruch 38, worin das pharmazeutische Präparat der Stimulierung der Reifung von CD7&spplus;CD2&supmin;CD3&supmin;CD4&supmin;CD8&supmin;-Zellen zur CD2&spplus;CD3&spplus;TCR&spplus;CD4&spplus;- und/oder CD8&spplus;-Zellen dient.

43. Verwendung nach Anspruch 38, worin das pharmazeutische Präparat der Vergrößerung eines T-Zellen-Pools dient.

44. Verwendung nach Anspruch 38, worin das pharmazeutische Präparat der Behandlung oder Verhütung eines T- Zellen-Immundefekts dient.

45. Verwendung nach Anspruch 38, worin das pharmazeutische Präparat der Behandlung oder Verhütung eines erworbenen T-Zellen-Immundefekts dient.

46. Verwendung nach Anspruch 38, worin das pharmazeutische Präparat der Behandlung oder Verhütung von AIDS dient.

47. Verwendung nach Anspruch 38, worin das pharmazeutische Präparat der Verringerung eines Prothymocytenpools dient.

48. Verwendung nach Anspruch 38, worin das pharmazeutische Präparat der Behandlung oder Verhütung einer Prothymocytenleukämie dient.

49. Verwendung nach Anspruch 38, worin das pharmazeutische Präparat der Behandlung oder Verhütung einer Prothymocytenleukämie, worin die Tumorzellen einen CD7&spplus;CD4&supmin;CD8&supmin;-Phänotyp besitzen, dient.

50. Verwendung von IL-1 oder einer biologisch aktiven Variante, eines Fragments oder Derivats davon zur Herstellung eines pharmazeutischen Präparats, umfasend nur IL-1 als Wirkstoff, zur Stimulierung der Prothymocytenreifung in einer Zellkultur oder einem Organismus, umfassend ausreichend 25K IgE-BF.