Verfahren zur Anreicherung von Zellvermehrung bewirkenden Wachstumsstoffen
Durch das Hauptpatent 661929 und das Zusatzpatent 670 742 werden Verfahren
zur Anreicherung von Zellvermehrung bewirkenden Wachstumsstoffen beschrieben. Nach
dem im Hauptpatent beschriebenen Verfahren gelingt eine Anreicherung des wirksamen
Stoffgemisches, das in der Literatur gewöhnlich als »Biosc< bezeichnet wird,
z. B. auf das oofache, nach dem Zusatzpatent z. B. auf das 2o ooofache.Process for the enrichment of growth substances causing cell reproduction. The main patent 661929 and the additional patent 670 742 describe methods for enriching growth substances which cause cell reproduction. According to the process described in the main patent, an enrichment of the active substance mixture, which is usually referred to as "Biosc" in the literature, is achieved, e.g. B. on the oofache, after the additional patent z. B. to 2o oof times.
Es wurde nun gefunden, daß man eine weitere erhebliche Anreicherung
des zellvermehrenden Wachstumsprinzips erreicht, wenn man an dem Wachstumsprinzip
angereicherte Fraktionen, wie sie nach dem Haupt- und Zusatzpatent erhältlich sind,
mit alkoholischen Mineralsäurelösungen in der Wärme behandelt, die Lösung mit Chloroform
ausschüttelt und dem Chloroform die Wirkstoffe mit Mineralsäuren entzieht. Gegenüber
einem Ausgangsmaterial mit einer Wirkung von - / 5 Millionen Saccharomyceseinheiten
je Gramm (S. E./g) beträgt die erzielte Anreicherung z. B. etwa das ,fache. Kombiniert
man die genannte Behandlung mit Adsorptions-, Fällun,gs- und Elutionsverfahren,
insbesondere solchen, wie sie im Haupt- und Zusatzpatent beschrieben sind, etwa
mit einer Adsorption an Tierkohle, Elution des Adsorbates mit organischen Lösemitteln
unter Zusatz- von Alkali, Fällung mit Phosphorwolframsäure und Brompikrolonsäure,
wobei zweckmäßig gelegentlich die wirksamen Fraktionen wieder der Behandlung mit-
einer alkoholischen Mineralsäurelösung wie oben unterworfen werden, kann man zu
außerordentlich wirksamen Produkten gelangen. Höchstwirksame Produkte konnten im
Hochvakuum destilliert werden und lieferten Kristalle, die eine-Wirksamkeit von
25 Milliarden S. E./g zeigen.It has now been found that there is a further significant enrichment
of the cell-multiplying growth principle, if one adheres to the growth principle
enriched fractions, as they are available under the main and additional patent,
treated with alcoholic mineral acid solutions in heat, the solution with chloroform
shakes out and removes the active ingredients with mineral acids from the chloroform. Opposite to
a starting material with an effect of - / 5 million Saccharomyces units
per gram (S. E./g) the enrichment achieved is z. B. about that, times. Combined
the said treatment with adsorption, precipitation, and elution processes,
in particular those as described in the main and additional patent, for example
with adsorption on animal charcoal, elution of the adsorbate with organic solvents
with the addition of alkali, precipitation with phosphotungstic acid and bromopicrolonic acid,
where occasionally the effective fractions are expediently returned to the treatment with
an alcoholic mineral acid solution as above can be subjected to
exceptionally effective products arrive. Highly effective products could be im
High vacuum distilled and yielded crystals that have a potency of
Show 25 billion S.E./g.
,Beispiel 2, i g eines nach den Verfahren der Patente 661929 und 6/0
/42 vofgereinigten Produktes mit etwa /5 Millionen S. E./g werden mit i 5o ccm einer
3 %igen methylalkoholischen Chlörl#iasserstofflösung-. i Stunde gekocht. Nach dem
Abdampfen des Methanols ' wird der Rückstand in Chloroform aufgenommen und die Lösung
so lange mit Wasser extrahiert, bis dieses nicht mehr gefärbt wird. Die Chlor oformlösung
wird dann z omal mit 2n-Salzsäure ausgeschüttelt. Die Säurefraktion enthält 33o
Millionen S. E. je Gramm Trockensubstanz, während die -übrigen Fraktionen weniger
wirksam als das Ausgangsprodukt@sind., Example 2, i g one according to the procedures of patents 661929 and 6/0
/ 42 pre-purified product with about / 5 million S.U./g become one with 150 ccm
3% methyl alcoholic chlorine / hydrogen solution. cooked i hour. After this
Evaporation of the methanol, the residue is taken up in chloroform and the solution
extracted with water until it is no longer colored. The chlorine solution
is then extracted z omally with 2N hydrochloric acid. The acid fraction contains 33o
Millions of S. E. per gram of dry matter, while the remaining fractions are less
are effective than the starting product @.
Nachdem man nun entsprechend der ersten Phase des Beispiels des Patents
670 74,-, nochmals an Kohle adsorbiert, eluiert und das
Eluat
mit Phosphorwolframsäure gefällt und danach nochmals, wie oben angegeben, mit 3'?
oiger methylalkoholischer Chlorwasserstofflösung gekocht hat, wird der- saure Extrakt
in 15 ccm Alkohol gelöst und mit 3 ccm einergesättigten alkoholischen Brompikrolonsäiire-.:
Lösung versetzt. Die braunschwarze Fällung', wird nach einiger Zeit abfiltriert
und der Niederschlag durch Behandlung mit Salzsäure-Äther vom Fällungsmittel befreit.
Er entspricht einer Wirksamkeit von 1,2 Milliarden S. E./g.Now that, according to the first phase of the example of patent 670 74, -, again adsorbed on charcoal, eluted and the eluate precipitated with phosphotungstic acid and then again, as stated above, with 3 '? If the above methyl alcoholic hydrogen chloride solution has been boiled, the acidic extract is dissolved in 15 cc of alcohol and 3 cc of a saturated alcoholic bromopicrolonic acid solution is added. The brown-black precipitate is filtered off after a while and the precipitate is freed from the precipitant by treatment with hydrochloric acid ether. It corresponds to an effectiveness of 1.2 billion SE / g.
Das bei der Brompikrolonsäurefällung gewonnene Produkt wird wiederum
mit 150 ccm einer 30,'oigen Chiorwasserstoffsäure-Methylalkohollösung gekocht.
Nach Entfernen des Alkohols wird das Reaktionsprodukt in 5 ccm Wasser gelöst und
mit wenig Natriumcarbonat versetzt. Die Lösung wird dann fünfmal mit der gleichen
Menge Chloroform ausgeschüttelt, wobei der Wirkstoff in die Chloroformlösung übergeht.
Diese wird über Natriumsulfat getrocknet und dann eingedampft. Der Rückstand enthält
etwa 2 Milliarden S. E./g. Das Chioroformlösliche wird nun bei o,oo i mm destilliert.
Nach einem etwa i/3 der Gesamtmenge betragenden umwirksamen Vorlauf (i3o bis 185°)
wird etwa ein weiteres Drittel bei 185 bis 250° mit einer Wirksamkeit von etwa 6
Milliarden S. E./g erhalten. Die wirksame Fraktion wird in Chloroform gelöst und
die Lösung mit Petroläther vom Siedepunkt ¢o bis 6o° versetzt. Beim Stehen in der
Kälte scheiden sich farblose Kristall-`:i?ädelchen aus. Sie zeigen nach dem Ab-X,Itrieren
und einmaligem Umkristallisieren aüs Chloroform/Petroläther eine Wirksamkeit von
25 Milliarden S. E./g.The product obtained in the bromopicrolonic acid precipitation is again boiled with 150 cc of a 30% hydrochloric acid / methyl alcohol solution. After the alcohol has been removed, the reaction product is dissolved in 5 cc of water and a little sodium carbonate is added. The solution is then extracted five times with the same amount of chloroform, the active ingredient being converted into the chloroform solution. This is dried over sodium sulfate and then evaporated. The residue contains about 2 billion SE / g. The chloroform soluble is now distilled at o, oo i mm. After an effective first run amounting to about 1/3 of the total amount (130 to 185 °), about a further third is obtained at 185 to 250 ° with an effectiveness of about 6 billion SE / g. The active fraction is dissolved in chloroform and petroleum ether with a boiling point of ¢ o to 60 ° is added to the solution. When standing in the cold, colorless crystal `: i? Ädelchen separate out. After Ab-X, iteration and one-time recrystallization from chloroform / petroleum ether, they show an activity of 25 billion SE / g.