DE60013114T2

DE60013114T2 - 3,3-substituerte indolinderivate

Info

Publication number: DE60013114T2
Application number: DE60013114T
Authority: DE
Inventors: W. John ULLRICH; Andrew Fensome; Lin Zhi; K. Todd JONES; E. Jay WROBEL; M. Christopher TEGLEY; P. James EDWARDS
Original assignee: Wyeth LLC; Ligand Pharmaceuticals Inc
Current assignee: Wyeth LLC; Ligand Pharmaceuticals Inc
Priority date: 1999-05-04
Filing date: 2000-05-01
Publication date: 2005-08-18
Anticipated expiration: 2020-05-02
Also published as: MXPA01011299A; CA2371629A1; DE60013114D1; EP1175397B1; AU4806200A; PT1175397E; CN1349500A; ES2226838T3; EP1175397A1; JP2002543181A; ATE273951T1; HK1043986A1; HK1043986B

Description

Gebiet der Erfindung
Diese Erfindung betrifft Verbindungen, die Antagonisten des Progesteronrezeptors sind, ihre Herstellung und Verwendung.
Hintergrund der Erfindung
Intrazelluläre Rezeptoren (IR) bilden eine Klasse strukturell verwandter Genregulatoren, die als "ligandenabhängige Transkriptionsfaktoren" bekannt sind (R.M. Evans, Science, 240, 889, 1988). Die Steroid-Rezeptorfamilie ist eine Teilmenge der IR-Familie, zu der die folgenden Rezeptoren gehören: Progesteronrezeptor (PR), Östrogenrezeptor (ER), Androgenrezeptor (AR), Glucocorticoidrezeptor (GR) und Mineralocorticoidrezeptor (MR).
Das natürliche Hormon oder der natürliche Ligand für den PR ist das Steroid Progesteron, aber es wurden synthetische Verbindungen, wie Medroxyprogesteronacetat oder Levonorgestrel, hergestellt, die ebenfalls als Liganden dienen. Sobald ein Ligand in der Flüssigkeit, die eine Zelle umgibt, zugegen ist, gelangt er über passive Diffusion durch die Membran und bindet an den IR und erzeugt einen Rezeptor-Liganden-Komplex. Dieser Komplex bindet an spezifische Genpromotoren, die sich in der DNA der Zelle befinden. Sobald der Komplex an die DNA gebunden ist, moduliert er die Produktion von mRNA und Protein, die von diesem Gen codiert werden.
Eine Verbindung, die an den IR bindet und die Wirkung des natürlichen Hormons vortäuscht, wird als Agonist bezeichnet, wohingegen eine Verbindung, die die Wirkung des Hormons hemmt, ein Antagonist ist.
PR-Antagonisten können bei der Empfängnisverhütung verwendet werden. In diesem Zusammenhang können sie allein (Ulmann et al., Ann. N.Y. Acad. Sci., 261, 248, 1995), in Kombination mit einem PR-Agonisten (Kekkonen et al., Fertility and Sterility, 60, 610, 1993) oder in Kombination mit einem partiellen. ER-Agonisten, wie Tamoxifen (WO 96/19997, veröffentlicht am 4. Juli 1996) verabreicht werden.
PR-Antagonisten können sich auch zur Behandlung von hormonabhängigen Brustkrebserkrankungen (Horwitz et al., Horm. Cancer, 283, Veröff.: Birkhäuser, Boston, Mass., Hrsg. Vedeckis) sowie Uterus- und Ovarkrebserkrankungen eignen. PR-Antagonisten können ebenfalls zur Behandlung von nicht-malignen chronischen Zuständen, wie Fibromen (Murphy et al., J. Clin. Endo. Metab., 76, 513, 1993) und Endometriose (Kettet, et al., Fertility and Sterility, 56, 402, 1991) geeignet sein. PR-Antagonisten können weiterhin zur Hormonersatztherapie für Postmenopause-Patientinnen in Kombination mit einem partiellen ER-Antagonisten, wie Tamoxifen, geeignet sein (US-Patent Nr. 5 719 136). PR-Antagonisten, wie Mifepriston und Onapriston, haben sich ebenfalls in einem Modell von hormonabhängigem Prostatakrebs als wirksam erwiesen, was ihren Nutzen bei der Behandlung dieses Zustands bei Männern anzeigt (Michna et al., Ann. N.Y. Acad. Sci., 761, 224, 1995).
Jones et al. (US-Patent Nr. 5 688 810) beschrieben den PR-Antagonisten Dihydrochinolin A.
Jones et al. beschrieben den Enolether B (US-Patent Nr. 5 693 646) als PR-Liganden.
Jones et al. beschrieben die Verbindung C (US-Patent Nr. 5 696 127) als PR-Liganden.
Zhi et al. beschrieben die Lactone D, E und F als PR-Antagonisten (J. Med. Chem., 41, 291, 1998).
Zhi et al. beschrieben den Ether G als PR-Antagonisten (J. Med. Chem., 41, 291, 1989).
Combs et al. offenbarten das Amid H als Liganden für PR (J. Med. Chem., 38, 4880, 1995).
Perlman et al. beschrieben das Vitamin D-Analogon I als PR-Liganden (Tet. Letters, 35, 2295, 1994).
Hamann et al. beschrieben den PR-Antagonisten J (Ann. N.Y. Acad. Sci., 761, 383, 1995).
Chen et al. beschrieben den PR-Antagonisten K (Chen et al., POI-37, 16. Int. Cong. Het. Chem., Montana, 1997).
Kurihari et al. beschrieben den PR-Liganden L (J. Antibiotics, 50, 360, 1997).
Elliot (Smith Kline Beecham) beanspruchte das generische Indolin M als potentiellen Endothelin-Rezeptor-Antagonisten (WO 94/14434). Das Patent beansprucht keine Indoline und es hat nicht die geeignete 5-Aryl-Substitution, d.h. CN und NO₂.
wobei R₄ für H, Ar, R₁₁, OH, C₁-C₅-Alkoxy (ggf. -S(O)_gR₁₁, substituiert durch OH, OMe oder Halogen), -S(O)_qR₁₁ N(R₆)₂, XR₁₁, Halogen oder NHCOR₆ steht; X für (CH₂)_n, O, NR₆ oder S(O)_q steht; n für 0–6 steht; q für 0–2 steht; R₆ für H oder C₁-C₄-Alkyl steht; R₁₁ für C₁-C₈-Alkyl, C₂-C₈-Alkenyl oder C₂-C₈-Alkinyl (alle gegebenenfalls substituiert) steht; Ar für (i) ggf. substituiertes Phenyl oder die benzo-kondensierte Gruppe von (a) oder (b); oder (ii) Naphthyl, Indoyl, Pyridyl, Thienyl, Oxazolindyl, Oxazolyl, Thiazolyl, Isothiazolyl, Pyrazolyl, Triazolyl, Tetrazolyl, Imidazolyl, Imidazolidinyl, Thiazolidinyl, Isoxazolyl, Oxadiazolyl, Thiadiazolyl, Morpholinyl, Piperidinyl, Pyrrolyl oder Pyrimidyl steht, die jeweils gegebenenfalls durch eine oder mehrere Gruppen R₁ oder R₂ substituiert sind.
WO 98/27059 offenbart Indolen-Derivate mit einer inhibitorischen Wirkung auf die Bindung von Progesteron an seinen Rezeptor.
Beschreibung der Erfindung
Es wurde- gezeigt, daß die erfindungsgemäßen Verbindungen als kompetitive Hemmstoffe der Progesteronbindung an den PR wirken und als Antagonisten in funktionellen Modellen wirken, und zwar entweder/oder in-vitro und in-vivo. Diese Verbindungen können zur Empfängnisverhütung verwendet werden, bei der Behandlung und/oder Prävention von Fibromen, einschließlich Uterus-Fibromen, Endometriose, Brust-, Uterus-, Eierstock- und Prostata-Krebs, und zur Hormonersatztherapie in der Postmenopause. Diese Erfindung betrifft ebenfalls insbesondere Verfahren zur Verwendung dieser Verbindungen bei der Induktion der Empfängnisverhütung und bei der Behandlung und/oder Prävention einer gutartigen und bösartigen neoplastischen Erkrankung. Solche Krankheiten können ohne Einschränkung gutartige Prostatavergrößerung, Karzinome und Adenokarzinome des Endometriums, der Eierstöcke, der Brust, des Kolons, der Prostata und der Hypophyse, Meningioma und andere hormonabhängige Tumore umfassen.
Die erfindungsgemäßen Verbindungen umfassen Verbindungen der Formel I:
in welcher:
R₁ und R₂ unabhängig voneinander aus der aus H, Alkyl, substituiertem Alkyl; OH; O(Alkyl); O (substituiertem Alkyl); OAc; Aryl; gegebenenfalls substituiertem Aryl; Heteroaryl; gegebenenfalls substituiertem Heteroaryl; Alkylaryl; Alkylheteroaryl; 1-Propinyl; und 3-Propinyl bestehenden Gruppe ausgewählt sind;
oder R₁ und R₂ miteinander verbunden sind und einen Ring bilden, der ein Mitglied der folgenden Verbindungen enthält:
-CH₂(CH₂)_nCH₂-; -CH₂CH₂CMe₂CH₂CH₂-; -O(CH₂)_mCH₂-; O(CH₂)_pO-; -CH₂CH₂OCH₂CH₂-; -CH₂CH₂N (H oder Alkyl) CH₂CH₂-;
n für eine ganze Zahl von 0 bis 5 steht;
m für eine ganze Zahl von 1 bis 4 steht;
p für eine ganze Zahl von 1 bis 4 steht;
oder R₁ und R₂ zusammen für eine Doppelbindung an =C(CH₃)₂; =C(C₃-C₆-Cycloalkyl), =O oder =C(Cycloether) stehen, wobei der Cycloether aus der aus Tetrahydrofuranyl und Hexahydropyranyl bestehenden Gruppe ausgewählt ist;
R₃ für H, OH, NH₂, C₁-C₆-Alkyl, substituiertes C₁-C₆-Alkyl, C₃-C₆-Alkenyl, Alkinyl oder substituiertes Alkinyl, oder COR^A steht;
R^A für H, C₁-C₃-Alkyl, substituiertes C₁-C₃-Alkyl, C₁-C₃-Alkoxy, substituiertes C₁-C₃-Alkoxy, C₁-C₃-Aminoalkyl, oder substituiertes C₁-C₃-Aminoalkyl steht;
R₄ für H, Halogen, CN, NH₂, C₁-C₆-Alkyl, substituiertes C₁-C₆-Alkyl, C₁-C₆-Alkoxy, substituiertes C₁-C₆-Alkoxy, C₁-C₆-Aminoalkyl oder substituiertes C₁-C₆-Aminoalkyl steht;
R₅ aus der aus a), b) und c) bestehenden Gruppe ausgewählt ist:
a) R₅ ist ein trisubstituierter Benzolring, der die Substituenten X, Y and Z wie nachstehend gezeigt, enthält:
X ist aus der aus Halogen, OH, CN, C₁-C₃-Alkyl, substituiertem C₁-C₃-Alkyl, C₁-C₃-Alkoxy, substituiertem C₁-C₃-Alkoxy, C₁-C₃-Thioalkyl, substituiertem C₁-C₃-Thioalkyl, S(O)Alkyl, S(O)₂Alkyl, C₁-C₃-Aminoalkyl, substituiertem C₁-C₃-Aminoalkyl, NO₂, C₁-C₃-Perfluoralkyl, einem 5- oder 6gliedrigen heterocyclischen Ring mit 1 bis 3 Heteroatomen, COR^B, OCOR^B und NR^CCOR^B bestehenden Gruppe ausgewählt;
R^B steht für H, C₁-C₃-Alkyl, substituiertes C₁-C₃-Alkyl, Aryl, substituiertes Aryl, C₁-C₃-Alkoxy, substituiertes C₁-C₃-Alkoxy, C₁-C₃-Aminoalkyl oder substituiertes C₁-C₃-Aminoalkyl;
R^C steht für H, C₁-C₃-Alkyl oder substituiertes C₁-C₃-Alkyl:
Y und Z sind unabhängige Substituenten, die aus der aus H, Halogen, CN, NO₂, C₁-C₃-Alkoxy, C₁-C₃-Alkyl oder C₁-C₃-Thioalkyl bestehenden Gruppe ausgewählt sind; oder
b) R₅ ist ein 5- oder 6gliedriger Ring mit 1, 2 oder 3 aus der aus O, S, SO, SO₂ oder NR₈ bestehenden Gruppe ausgewählten Heteroatomen und mit einem oder zwei voneinander unabhängigen Substituenten, ausgewählt aus der aus H, Halogen, CN, NO₂ and C₁-C₃-Alkyl, C₁-C₃-Alkoxy, C₁-C₃-Aminoalkyl, COR^D oder NR^ECOR^D bestehenden Gruppe;
R^D steht für H, C₁-C₃-Alkyl, substituiertes C₁-C₃-Alkyl, Aryl, substituiertes Aryl, C₁-C₃-Alkoxy, substituiertes C₁-C₃-Alkoxy, C₁-C₃-Aminoalkyl oder substituiertes C₁-C₃-Aminoalkyl;
R^E steht für H, C₁-C₃-Alkyl oder substituiertes C₁-C₃-Alkyl;
R₈ steht für H oder C₁-C₃-Alkyl ; oder
c) R₅ ist eine Indo1-4-yl-, Indol-7-yl- oder Benzo-2-thiopheneinheit, wobei die Einheit gegebenenfalls durch 1 bis 3 Substituenten, ausgewählt aus der aus Halogen, Niederalkyl, CN, NO₂, Niederalkoxy oder CF₃ bestehenden Gruppe, substituiert ist; wobei R₆ und R₇ unabhängig voneinander aus der aus H, Methyl, Ethyl, Propyl, Butyl, Isopropyl, Isobutyl, Cyclohexyl, Aryl, substituiertem Aryl, Heteroaryl oder substituiertem Heteroaryl bestehenden Gruppe ausgewählt sind;
oder deren pharmazeutisch unbedenkliche Salze.
Eine bevorzugte Gruppe erfindungsgemäßer Verbindungen ist durch Struktur II dargestellt:
in welcher:
R₅ ein disubstituierter Benzolring mit den Substituenten X und Y wie nachstehend gezeigt ist:
X ist aus der aus Halogen, CN, C₁-C₃-Alkoxy, C₁-C₃-Alkyl, NO₂, C₁-C₃-Perfluoralkyl, einem 5gliedrigen heterocyclischen Ring mit Z bis 3 Heteroatomen oder C₁-C₃-Thioalkoxy bestehenden Gruppe ausgewählt;
Y ist ein Substituent in der 4'- oder 5'-Stellung und ist aus der aus H, Halogen, CN, NO₂, C₁-C₃-Alkoxy, C₁-C₄-Alkyl oder C₁-C₃-Thioalkyl bestehenden Gruppe ausgewählt; oder
R₅ ist a fünfgliedriger Ring der Struktur:
in welcher:
U für O, S oder NR_6' steht;
R_6' für H oder C₁-C₃-Alkyl oder C₁-C₉-CO₂-Alkyl steht;
X' aus der aus Halogen, CN, NO₂, C₁-C₃-Alkyl oder C₁-C₃-Alkoxy bestehenden Gruppe ausgewählt ist;
Y' aus der aus H, F, CN, NO₂ und C₁-C₄-Alkyl bestehenden Gruppe ausgewählt ist; oder
R₅ ist ein sechsgliedriger Ring mit der Struktur:
in welcher:
X¹ für N oder CX² steht;
X² für Halogen, CN oder NO₂ steht;
oder deren pharmazeutisch unbedenkliche Salze.
Die erfindungsgemäßen Verbindungen können ein asymmetrisches Kohlenstoffatom enthalten, und einige erfindungsgemäßen Verbindungen können ein oder mehrere asymmetrische Zentren enthalten und können somit optische Isomere und Diastereomere ergeben. Die vorliegende Erfindung ist zwar nicht in Bezug auf die Stereochemie in den Formeln I und II veranschaulicht, jedoch umfasst sie solche optischen Isomere und Diastereomere, sowie die racemischen und aufgelösten enantiomer reinen R- und S-Stereoisomere; sowie andere Gemische von R- und S-Stereoisomeren und deren pharmazeutisch unbedenkliche Salze.
Der hier verwendete Begriff "Alkyl" bedeutet gerad- und verzweigtkettige gesättigte aliphatische Kohlenwasserstoffgruppen mit 1 bis 8 Kohlenstoffatomen, vorzugsweise 1 bis 6 Kohlenstoffatomen; "Alkenyl" soll gerad- und verzweigtkettige Alkylgruppen mit 1 oder 2 Kohlenstoff-Kohlenstoff-Doppelbindungen und mit 2 bis 8 Kohlenstoffatomen, vorzugsweise 2 bis 6 Kohlenstoffatomen umfassen; "Alkinyl"-Gruppe steht für gerad- und verzweigtkettige Alkylgruppen mit mindestens 1 oder 2 Kohlenstoff-Kohlenstoff-Dreifachbindungen und mit 2 bis 8 Kohlenstoffatomen, vorzugsweise 2 bis 6 Kohlenstoffatomen.
Die Begriffe "substituiertes Alkyl", "substituiertes Alkenyl" und "substituiertes Alkinyl" stehen für Alkyl, Alkenyl und Alkinyl, wie vorstehend beschrieben, mit einem oder mehreren Substituenten aus der aus Halogen, CN, OH, NO₂, Amino, Aryl, Heterocyclyl, substituiertem Aryl, substituiertem Heterocyclyl, Alkoxy, Aryloxy, substituiertem Alkyloxy, Alkylcarbonyl, Alkylcarboxy, Alkylamino, Arylthio bestehenden Gruppe. Diese Substituenten können an ein beliebiges Kohlenstoffatom der Alkyl-, Alkenyl- oder Alkinyl-Gruppe gebunden sein, vorausgesetzt, dass die Bindung eine stabile chemische Einheit bildet.
Der hier verwendete Begriff "Aryl" bedeutet ein aromatisches System, das ein einzelner Ring oder mehrere aromatische Ringe sein kann, die derart miteinander kondensiert oder verbunden sind, dass mindestens ein Teil der kondensierten oder verbundenen Ringe das konjugierte aromatische System bildet. Die Arylgruppen umfassen, sind aber nicht eingeschränkt auf Phenyl, Naphthyl, Biphenyl, Anthryl, Tetrahydronaphthyl, Phenanthryl.
Der Begriff "substituiertes Aryl" betrifft ein Aryl, wie es gerade definiert wurde mit 1 bis 4 Substituenten aus der aus Halogen, CN, OH, NO₂, Amino, Alkyl, Cycloalkyl, Alkenyl, Alkinyl, Alkoxy, Aryloxy, substituiertem Alkyloxy, Alkylcarbonyl, Alkylcarboxy, Alkylamino und Arylthio bestehenden Gruppe.
Der hier verwendete Begriff "Heterocylyl" umschreibt einen stabilen 4- bis 7gliedrigen monocyclischen oder einen stabilen multicyclischen heterocyclischen Ring, der gesättigt, partiell ungesättigt oder ungesättigt ist, und der aus Kohlenstoffatomen und ein bis vier Heteroatomen besteht, ausgewählt aus der aus N-, O- und S-Atomen bestehenden Gruppe. Die N- und S-Atome können oxidiert sein. Der heterocyclische Ring umfasst auch einen beliebigen multicyclischen Ring, in dem ein beliebiger der vorstehend definierten heterocyclischen Ringe zu einem Arylring kondensiert ist. Der heterocyclische Ring kann an ein beliebiges Heteroatom oder Kohlenstoffatom gebunden sein, vorausgesetzt dass die resultierende Struktur chemisch stabil ist. Diese heterocyclischen Gruppen beinhalten beispielsweise Tetrahydrofuran-, Piperidinyl, Piperazinyl, 2-Oxopiperidinyl, Azepinyl, Pyrrolidinyl, Imidazolyl, Pyridyl, Pyrazinyl, Pyrimidinyl, Pyridazinyl, Oxazolyl, Isoxazolyl, Morpholinyl, Indolyl, Chinolinyl, Thienyl, Furyl, Benzofuranyl, Benzothieryl, Thiamorpholinyl, Thiamorpholinylsulfoxid und Isochinolinyl.
Der hier verwendete Begriff "substituiertes Heterocyclyl" umschreibt das gerade definierte Heterocyclyl mit 1 bis 4 Substituenten, ausgewählt aus der aus Halogen, CN, OH, NO₂, Amino, Alkyl, substituiertem Alkyl, Cycloalkyl, Alkenyl, substituiertem Alkenyl, Alkinyl, Alkoxy, Aryloxy, substituiertem Alkyloxy, Alkylcarbonyl, Alkylcarboxy, Alkylamino und Arylthio bestehenden Gruppe. Der hier verwendete Begriff "Thioalkyl" bedeutet die SR-Gruppe, wobei R Alkyl oder substituiertes Alkyl mit 1 bis 8 Kohlenstoffatomen ist.
Der Begriff "Alkoxy" betrifft die OR-Gruppe, wobei R Alkyl oder substituiertes Alkyl mit 1 bis 8 Kohlenstoffatomen ist. Der Begriff "Aryloxy" betrifft die OR-Gruppe, wobei R Aryl oder substituiertes Aryl ist, wie vorstehend definiert. Der Begriff "Alkylcarbonyl" betrifft die RCO-Gruppe, wobei R Alkyl oder substituiertes Alkyl mit 1 bis 8 Kohlenstoffatomen, vorzugsweise 1 bis 6 Kohlenstoffatomen, ist. Der Begriff "Alkylcarboxy" steht für die COOR-Gruppe, wobei R Alkyl oder substituiertes Alkyl mit 1 bis 8 Kohlenstoffatomen, vorzugsweise 1 bis 6 Kohlenstoffatomen, ist. Der Begriff "Aminoalkyl" betrifft sekundäre und tertiäre Amine, wobei die Alkyl- oder substituierten Alkylgruppen 1 bis 8 Kohlenstoffatome haben, die entweder gleich oder verschieden sein können, und der Bindungspunkt am Stickstoffatom ist. Der Begriff "Halogen" steht für Cl, Br, F oder I.
Die erfindungsgemäßen Verbindungen können in der Form der Salze verwendet werden, die von pharmazeutisch oder physiologisch unbedenklichen Säuren oder Basen hergeleitet sind. Diese Salze umfassen, sind aber nicht eingeschränkt auf die folgenden Salze mit anorganischen Säuren, wie Salzsäure, Schwefelsäure, Salpetersäure, Phosphorsäure und wenn es zutrifft, solche organischen Säuren, wie Essigsäure, Oxalsäure, Bernsteinsäure und Maleinsäure. Andere Salze beinhalten Salze mit Alkalimetallen oder Erdalkalimetallen, wie Natrium, Kalium, Calcium oder Magnesium in der Form von Estern, Carbamaten, und anderen herkömmlichen "Prodrug"-Formen, die, wenn sie in solchen Formen verabreicht werden, in vivo zur aktiven Einheit umgewandelt werden.
Die Erfindung beinhaltet pharmazeutische Zusammensetzungen, die eine oder mehrere erfindungsgemäße Verbindungen und einen pharmazeutisch unbedenklichen Träger oder Hilfsstoff umfassen. Die Erfindung betrifft auch Behandlungsverfahren, umfassend das Verabreichen einer pharmazeutisch wirksamen Menge von einer oder mehreren Verbindungen, wie vorstehend beschrieben, als Progesteronrezeptor-Antagonisten an ein Säugetier.
Die erfindungsgemäßen Progesteronrezeptor-Antagonisten, die allein oder in Kombination verwendet werden, können bei Verfahren der Empfängnisverhütung und zur Behandlung und/oder Prävention einer gutartigen und bösartigen neoplastischen Erkrankung verwendet werden. Spezifische Verwendungen der erfindungsgemäßen Verbindungen und pharmazeutischen Zusammensetzungen umfassen die Behandlung und/oder Prävention von Fibromen des Uterusmyometriums, Endometriose, gutartiger Prostatavergrößerung; Karzinomen und Adenokarzinomen des Endometriums, der Eierstöcke, der Brust, des Kolons, der Prostata und der Hypophyse, Meningioma und anderen hormonabhängigen Tumoren, insbesondere progesteronverwandten Tumoren. Zusätzliche Verwendungen der erfindungsgemäßen Progesteronrezeptor-Antagonisten umfassen die Synchronisation der Brunst bei Nutzvieh.
Wenn die Verbindungen für die vorstehenden Verwendungszwecke eingesetzt werden, können sie mit einem oder mehreren pharmazeutisch unbedenklichen Trägern oder Hilfsstoffen, beispielsweise Lösungsmitteln, Verdünnungsmitteln und dergleichen, kombiniert werden, und sie können in solchen Foren wie Tabletten, Kapseln, dispergierbaren Pulvern, Granulat oder Suspensionen mit beispielsweise etwa 0,05 bis 5% Suspendierungsmittel, Sirupen mit beispielsweise etwa 10 bis 50% Zucker und Elixieren mit beispielsweise etwa 20 bis 50% Ethanol und dergleichen oral verabreicht werden, oder parenteral in der Form von sterilen injizierbaren Lösungen oder Suspensionen mit etwa 0,05 bis 5% Suspendierungsmittel in einem isotonischen Medium. Solche pharmazeutischen Präparate können beispielsweise etwa 25 bis etwa 90 Gew.-% Wirkstoff in Kombination mit dem Träger, häufiger zwischen etwa 5 und 60 Gew.%, enthalten.
Die tatsächliche Dosierung des eingesetzten Wirkstoffs kann entsprechend der jeweils eingesetzten Verbindung, dem Verabreichungsweg und der Schwere des behandelten Zustands variieren. Im Allgemeinen werden jedoch zufriedenstellende Ergebnisse erhalten, wenn die erfindungsgemäßen Verbindungen in einer täglichen Dosierung von etwa 0,5 bis etwa 500 mg/kg Körpergewicht des Tieres verabreicht, vorzugsweise in geteilten Dosen zwei- bis viermal täglich, oder in einer Form zur verzögerten Freisetzung verabreicht werden. Für die meisten großen Säugetiere beträgt die tägliche Gesamtdosis etwa 1 bis 100 mg, vorzugsweise etwa 2 bis 80 mg. Die Dosierungsformen, die sich für die innere Verwendung eignen, umfassen etwa 0,5 bis 500 mg Wirkstoff in innigem Gemisch mit einem festen oder flüssigen pharmazeutisch unbedenklichen Träger. Dieses Dosierungsschema kann so eingestellt werden, dass die optimale therapeutische Reaktion bereitgestellt wird. Es können beispielsweise mehrere geteilte Dosen täglich verabreicht werden, oder die Dosis kann je nach den Anforderungen der therapeutischen Situation proportional reduziert werden.
Diese aktiven Verbindungen können oral verabreicht werden sowie über intravenöse, intramuskuläre oder subkutane Wege. Feste Träger beinhalten Stärke, Lactose, Dicalciumphosphat, mikrokristalline Cellulose, Saccharose und Kaolin, wohingegen flüssige Träger steriles Wasser, Polyethylenglycole, nicht-ionische Tenside und Speiseöle, wie Mais-, Erdnuss- und Sesam-Öle, wie es für die Natur des Wirkstoffs und die jeweils gewünschte Verabreichungsform geeignet ist, umfassen. Die bei der Herstellung der pharmazeutischen Zusammensetzungen herkömmlich eingesetzten Adjuvantien können vorteilhafterweise enthalten sein, wie Geschmacksstoffe, Farbstoffe, Konservierungsmittel, und Antioxidantien, beispielsweise Vitamin E, Ascorbinsäure, BHT und BHA.
Die vom Standpunkt der Leichtigkeit der Herstellung und Verabreichung bevorzugten pharmazeutischen Zusammensetzungen sind feste Zusammensetzungen, insbesondere Tabletten und hartgefüllte oder flüssigkeitsgefüllte Kapseln. Die orale Verabreichung der Verbindungen ist bevorzugt.
Diese Wirkstoffe können ebenfalls parenteral oder intraperitoneal verabreicht werden. Lösungen oder Suspensionen dieser Wirkstoffe als freie Base oder pharmakologisch unbedenkliches Salz können in Wasser hergestellt werden, geeigneterweise gemischt mit einem Tensid, wie Hydroxypropylcellulose. Dispersionen können ebenfalls in Glycerin, flüssigen Polyethylenglycolen und deren Gemischen in Öl hergestellt werden. Unter gewöhnlichen Lagerungs- und Verwendungsbedingungen enthalten diese Präparate ein Konservierungsmittel zur Verhinderung des Wachstums von Mikroorganismen.
Die pharmazeutischen Formen, die sich zur injizierbaren Verwendung eignen, beinhalten sterile wässrige Lösungen oder Dispersionen und sterile Pulver zur ad-hoc-Herstellung steriler injizierbarer Lösungen oder Dispersionen. In sämtlichen Fällen muss die Form in dem Maße steril und flüssig sein, dass eine leichte Spritzbarkeit vorliegt. Sie muss unter den Herstellungs- und Lagerungsbedingungen stabil sein und sie muss vor der kontaminierenden Wirkung von Mikroorganismen, wie Bakterien und Pilzen, bewahrt werden. Der Träger kann ein Lösungsmittel oder Dispersionsmedium sein, das beispielsweise Wasser, Ethanol (beispielsweise Glycerin, Propylenglycol und und flüssiges Polyethylenglycol), geeignete Gemische davon, und Pflanzenöl enthält.
Die erfindungsgemäßen Verbindungen können durch die in den nachstehend veranschaulichten Schemata erläuterten Verfahren hergestellt werden.
Die erfindungsgemäßen Verbindungen werden wie in Schema I gezeigt gewöhnlich auf konvergente Weise durch eine geeignete Kupplungsreaktion hergestellt. Beispielsweise liefert eine palladiumvermittelte Kupplung eines Arylhalogenids mit einer Arylboronsäure das gewünschte biarylsubstituierte Ziel. Die Auswahl der Arylhalogenid-Arylboronsäure-Kombination erfolgt experimentell.
Schema 1
Wie in Schema 2 veranschaulicht kann die "rechte Seite" der erfindungsgemäßen Verbindungen nach dem in Letcher, R.M. et al., J. Chem. Soc. Perkin Trans., 1: 939–944, 1993, beschriebenen Verfahren hergestellt werden.
Schema 2
Als Beispiel wird die rechtsseitige Matrize 2 durch Kondensieren eines geeignet substituierten Phenylhydrazins und eines geeigneten Ketons hergestellt, so dass das entsprechende Hydrazon erhalten wird. Dieses Material wird in rückfließender Essigsäure unter Rückfluss zu einem Imin cyclisiert und dann zu der gewünschten Indolin-Matrize 2 reduziert. Die Beispiele 1-7 und 10-20 wurden auf diesem Weg mit dem geeigneten Keton hergestellt.
Alternativ kann die rechtsseitige Matrize wie in Schema 3 gezeigt hergestellt werden. Das kommerziell erhältliche Oxindol wird am C-3 durch Verwendung einer geeigneten Base und des entsprechenden Alkylhalogenids dialkyliert, so dass das 3,3-Dialkyloxindol 8 oder das spirocyclische Oxindol 9 erhalten wird. Diese Oxindole werden dann unter Standardbedingungen bromiert, und die Carbonylgruppe wird mittels hydridvermittelter Reduktion zum gewünschten Methylen reduziert. Das Timing der Arylkupplung und die Reduktion des Carbonyls an der Stellung 2 werden experimentell entwickelt.
Schema 3
Die rechtsseitigen Matrizen werden mit einer geeigneten Arylboronsäure mit einem geeigneten Palladium(0)-Katalysator, Schema 4, gekuppelt. Die Verbindung 10 wird beispielsweise unter Standard-Suzuki-Bedingungen mit einer geeignet substituierten Arylboronsäure gekuppelt, so dass Verbindung 11 erhalten wird.
Schema 4
Die erfindungsgemäßen Verbindungen sind stabile fließfähige Feststoffe und werden geeignet durch Behandlung mit Säure in ihre entsprechenden Salze umgewandelt. Beispiel 1, Verbindung 11 (R₁ = R₂ = R₃ = Me), wenn mit HCl in Dioxan behandelt, liefert das HCl-Salz (Beispiel 2) als weißen Feststoff. Die racemischen Indoline können durch chirale HPLC in ihre Enantiomere getrennt werden, so dass die einzelnen Enantiomere in >98% EE erhalten werden.
Diese Erfindung lässt sich anhand der folgenden nicht-einschränkenden Beispiele weiter verstehen.
BEISPIEL 1
2,3,3-Trimethyl-5-(3-nitrophenyl)-2,3-dihydro-1H-indol
5-Brom-2,3,3-trimethyl-2,3-dihydro-1H-indol
Diese Verbindung wurde nach dem Verfahren von Letcher, R. M. et. al., J. Chem. Soc. Perkin Trans., 1: 939–944, 1993 hergestellt.
Zu einer Lösung von 4-Bromphenylhydrazin-Hydrochlorid (2,59 g, 11,6 mmol) und 3-Methyl-2-butanon (1,0 g, 11,6 mmol) in 20 ml Benzol wurde Essigsäure (katalytische Menge) gegeben, und die resultierende Lösung wurde unter azeotroper Entfernung von H₂O für 14 h unter Rückfluss belassen. Das Reaktionsgemisch wurde auf Raumtemperatur gekühlt und eingeengt. Der resultierende fließfähige Feststoff wurde in Essigsäure extrahiert und für 12 h unter Rückfluss belassen. Das Reaktionsgemisch wurde auf Raumtemperatur gekühlt und eingeengt. Der halbfeste Rückstand wurde in Ether extrahiert und mit K₂CO₃ neutralisiert. Die Etherschicht wurde getrocknet und eingeengt. Das resultierende feste Imin wurde in THF-MeOH (6:1) gelöst, auf 0°C gekühlt, und Natriumborhydrid (0,5 g, 13,2 mmol) wurde dazu gegeben. Die Lösung wurde auf Raumtemperatur erwärmen gelassen und 0,5 h gerührt. Das Reaktionsgemisch wurde in 15% wässrige HCl gegossen und dann mit K₂CO₃ alkalisch gemacht. Die organische Schicht wurde getrennt, mit Salzlösung gewaschen, getrocknet (Na₂SO₄) und eingeengt. Das Rohprodukt wurde durch Säulenchromatographie (SiO₂, Hexan-Essigsäureethylester 9:1) gereinigt. Das Produkt wurde als orange Flüssigkeit (2,1 g, 75%) isoliert: ¹H-NMR (CDCl₃) δ 1,03 (s, 3H), 1,15 (d, J = 6,6 Hz, 3H), 1,25 (s, 3H), 3,50 (q, J = 6,6 Hz, 1H), 3,70 (br s, 1H), 6,45 (d, J = 8,7 Hz, 1H), 7,09 (m, 2H); ¹³C-NMR (CDCl₃) δ 15,10, 22,25, 26,11 (q), 43,72 (s), 65,47 (d), 110,32 (s), 110,70, 125,47, 129,75 (d), 141,48, 148,33 (s); MS (EI) m/z 240, 242 (M+H)⁺.
Eine Lösung von 5-Brom-2,3,3-trimethyl-2,3-dihydro-1H-indol (0,5 g, 2,1 mmol) und Tetrakis(triphenylphosphin)palladium (0,14 g, 0,12 mmol) in Dimethoxyethan (10 ml) wurde unter N₂-Vakuum (4x) rundgeführt und dann für 0,5 h unter N₂ gerührt. Zu diesem Gemisch wurde dann 3-Nitrophenylboronsäure ( 0 , 42 g, 2 , 5 mmol) , gefolgt von einer Lösung von Na₂CO₃ (0,36 g, 3,4 mmol) in 5 ml Wasser, gegeben und unter N₂-Vakuum (3x) rundgeführt. Die Lösung wurde für 6 h unter Rückfluss erhitzt und dann auf Raumtemperatur gekühlt, in Wasser gegossen und mit EtOAc extrahiert. Die vereinigten organischen Extrakte wurden mit Wasser, Salzlösung gewaschen, getrocknet (Na₂SO₄) und eingedampft. Der Rückstand wurde durch Säulenchromatographie (SiO₂, Methylenchlorid:Hexan 1:3) gereinigt, so dass die Titelverbindung (0,48 g, 82%) als oranger fließfähiger Feststoff erhalten wurde: ¹H-NMR (CDCl₃) δ 1,12 (s, 3H), 1,21 (d, J = 6,6 Hz, 3H), 1,35 (s, 3H), 3,60 (q, J = 6,6 Hz, 1H), 3,9 (br s, 1H), 6,69 (d, J = 7,9 Hz, 1H) , 7,28–7,29 (m, 2H) , 7, 32 (d, J = 1,9 Hz, 1H), 7,53 (dd, J = 7,9, 7,9 Hz, 1H), 7,85 (ddd, J = 7,9, 2,0, 2,0 Hz, 1H), 8,07 (ddd, J = 7,9, 2,0, 2,0 Hz, 1H) , 8,08 (d, J = 7,9 Hz, 1H) , 8,39 (dd, J = 2,0, 2,0 Hz, 1H); ¹³C-NMR (CDCl₃) δ 15,27, 22,54, 26,39 (q), 43,53 (s), 65,57 (d), 109,48, 120,67, 121,04, 121,10, 126,58 (d), 129,15 (s), 129,53, 132,35 (d), 140,18, 143,64, 148,78, 150,11 (s); MS (EI) m/z 283 (M+H)⁺.
BEISPIEL 2
2,3,3-Trimethyl-5-(3-nitrophenyl)-2,3-dihydro-1H-indol-Hydrochlorid
Eine Lösung von 2,3,3-Trimethyl-5-(3-nitrophenyl)-2,3-dihydro-1H-indol (0,8 g, 2,79 mmol) in 20 ml 1:1 Ether:Dioxan wurde bei Raumtemperatur mit 1,5 ml einer 4M HCl/Dioxan-Lösung behandelt. Der resultierende Feststoff wurde durch Filtration isoliert und mit Hexan gewaschen, so dass die Titelverbindung (0,81 g, 90%) als gelbbrauner Feststoff erhalten wurde. Fp. 240–241 °C;
¹H-NMR (CDC13) δ 1,37 (s, 3H), 1,51 (s, 3H), 4,01 (d, J = 6,5 Hz, 1H) , 7, 51 (s, 1H) , 7,59 (d, J = 7, 3 Hz, 1H), 7,7 (dd, J = 7,9, 7,9 Hz, 1H), 7,8 (d, J = 7,9 Hz, 1H), 7,89 (d, J = 7,7 Hz, 1H), 8,3 (dd, J = 7,9, 1,8 Hz, 1H) , 8,42 (s, 1H) , 11,9 (br s, 2H) ; ¹³C-NMR (CDCl₃) δ; MS (EI) m/z 283 (M+H)⁺.
BEISPIEL 3
(2-R oder S)-2,3,3-Trimethyl-5-(3-nitrophenyl)-2,3-dihydro-1H-indol und
BEISPIEL 4
(2-S oder R)-2,3,3-Trimethyl-5-(3-nitrophenyl)-2,3-dihydro-1H-indol
Eine Probe von racemischem 2,3,3-Trimethyl-5-(3-nitrophenyl)-2,3-dihydro-1H-indol (25 mg), wie in Beispiel 2 hergestellt, wurde durch chirale präparative HPLC [Säule: Chiralcel OD, 4,6 × 250 mm, isokratisch, 5:95 IPA:Hexan, Fließgeschwindigkeit = 1 ml/min; Injektionsvolumen = 5 μl; Retentionszeiten: 3, 9,2 min und 4, 10,39 min] getrennt, so dass die Enantiomere 3 und 4 als orange fließfähige Feststoffe erhalten wurden. Durch chirale analytische HPLC wurde bestimmt, dass die Enantiomere >99% EE hatten. Die Beispiele 3 und 4 haben Spektraldaten, die zum racemischen Material, Beispiel 1, identisch sind: ¹H-NMR (CDCl₃) δ 1,12 (s, 3H), 1,21 (d, J = 6,6 Hz, 3H), 1,35 (s, 3H), 3,60 (q, J = 6,6 Hz, 1H) , 3,9 (br s, 1H) , 6,69 (d, J = 7,9 Hz, 1H), 7,28–7,29 (m, 2H), 7,32 (d, J = 1,9 Hz, 1H), 7,53 (dd, J = 7,9, 7,9 Hz, 1H), 7,85 (ddd, J = 7,9, 2,0, 2,0 Hz, 1H), 8,07 (ddd, J = 7,9, 2,0, 2,0 Hz, 1H), 8,08 (d, J = 7,9 Hz, 1H), 8,39 (dd, J = 2,0, 2,0 Hz, 1H); MS (EI) m/z 283 (M+H)⁺.
BEISPIEL 5
2,3,3-Diethyl-2-methyl-5-(3-nitrophenyl)-2,3-dihydro-1H-indol
5-Brom-3,3-diethyl-2-methyl-2,3-dihydro-1H-indol
Diese Verbindung wurde gemäß dem Verfahren von Beispiel 1 mit 4-Bromphenylhydrazin-hydrochlorid (5,9 g, 26,3 mmol) und 3-Ethyl-2-pentanon (3,0 g, 26,3 mmol) hergestellt. Die Untertitelverbindung (4,5 g) wurde in 65%iger Ausbeute als gelbliches Öl erhalten: ¹H-NMR (CDCl₃) δ 0,81 (t, J = 7,4 Hz, 3H), 0,83 (t, J = 7,4 Hz, 3H) , 1,18 (d, J = 6,5 Hz, 3H) , 1,42 (dq, J = 14,0, 7,4 Hz, 1H) , 1,66 (dq, J = 14,0, 7,4 Hz, 3H) , 3,73 (q, J = 6,5 Hz, 1H), 6,47 (d, J = 8,2 Hz, 1H), 7,02 (d, J = 2 Hz, 1H), 7,09 (dd, J = 8,2, 2,0 Hz, 1H); ¹³C-NMR (CDCl₃) δ 10,46, 10,66, 17,70 (q), 26,5, 29,67 (t), 52,25 (s), 64,80 (d), 111,64 (s), 112,41, 129,07, 131,58 (d), 139,57, 151,04 (s); MS (EI) m/z 268, 270 (M+H)⁺.
Mit Hilfe der in Beispiel 1 aufgeführten Standard-Kupplungsbedingungen wurde die Titelverbindung aus 5-Brom-3,3-diethyl-2-methyl-2,3-dihydro-1H-indol (0,13 g, 0,45 mmol), Tetrakis-(triphenylphosphin)palladium (0,05 g, 0,04 mmol) in Dimethoxyethan (4 ml) mit 3-Nitrophenylboronsäure (0,09 g, 0,54 mmol) und Natriumcarbonat (0,15 g, 4,95 mmol) in 2 ml Wasser hergestellt. Die Titelverbindung (0,09 g, 65%) wurde als rotbraunes Glas erhalten. ¹H-NMR (CDCl₃) δ 0,86 (dt, J = 4,0, 4,0 Hz, 3H), 0,88 (dt, J = 4,0, 4,0 Hz, 3H), 1,24 (d, J = 6,6 Hz, 3H), 1,5 (dq, J = 14,1, 7,3 Hz, 1H), 1,66–1,84 (m, 3H) , 3,81 (q, J = 6,6 Hz, 1H) , 6,69 (d, J = 8,0 Hz, 1H), 7,20 (d, J = 1,9 Hz, 1H), 7,32 (dd, J = 8,0, 1,9 Hz, 1H), 7,53 (dd, J = 8,0, 8,0 Hz, 1H), 7,85 (dd, J = 7,9, 1,1 Hz, 1H), 8,09 (dd, J = 7,9, 1,1 Hz, 1H), 8,4 (dd, J = 1,9 Hz, 1H);¹³C-NMR (CDCl₃) δ 8,99, 9,14, 16,24 (q), 24,87, 28,14 (t), 50,30 (s), 63,31 (d), 109,56, 120,80, 121,22, 123,19, 126,76 (d), 128,64 (s), 129,67, 132,55 (d), 136,5, 143,92, 148,95, 151,07 (s); MS (EI) m/z 310 (M)⁺.
BEISPIEL 6
4a-Methyl-6-(3-nitrophenyl)-2,3,4,4a,9,9a-hexahydro-1H-carbazol
6-Brom-4a-methyl-2,3,4,4a,9,9a-hexahydro-1H-carbazol
Diese Verbindung wurde durch das Verfahren von Beispiel 1 mit 4-Bromphenylhydrazin-Hydrochlorid (2,0 g, 8,95 mmol) und 2-Methylcyclohexanon (1,0 g, 8,95 mmol) hergestellt. Die Untertitelverbindung (1,5 g, 65%) wurde als gelbes Öl erhalten. ¹H-NMR (CDCl₃) δ 1,26 (s, 3H), 1,38–1,46 (m, 4H), 1,56–1,68 (m, 4H), 3,4 (t, J = 4,4 Hz, 1H), 3,6 (br s, 1H), 6,53 (d, J = 8 Hz, 1H), 7,08 (d, J = 2,0 Hz, 1H), 7,09 (dd, J = 8,0, 2,0 Hz, 1H); ¹³C-NMR (CDCl₃) δ 21,45, 21,87 (t), 23, 96 (q) , 27,92, 35,32 (t), 43,56 (s), 66,65 (d), 110,73 (s), 111,88, 125,25, 129,99 (d), 142,17, 149,03 (s); MS (EI) m/z 268, 270 (M+H)⁺.
Mit Hilfe der in Beispiel 1 aufgeführten Standard-Kupplungsbedingungen wurde die Titelverbindung mit 6-Brom-4a-methyl-2,3,4,4a,9,9a-hexahydro-1H-carbazol (1,6 g, 6,0 mmol), Tetrakis-(triphenylphosphin)palladium (0,4 g, 0,35 mmol) in Dimethoxyethan (30 ml) mit 3-Nitrophenylboronsäure (1,2 g, 7,2 mmol) und Natriumcarbonat (1,9 g, 18 mmol) in 10 ml Wasser hergestellt. Das reine Produkt (1,2 g, 70%) wurde als oranger Schaum erhalten: ¹H-NMR (CDCl₃) δ 1,36 (s, 3H), 1,44–1,74 (m, 8H), 3,49 (t, J = 4,4 Hz, 1H), 3,83 (br s, 1H) , 6,75 (d, J = 8, 0 Hz, 1H) , 7,26 (d, J = 1,9 Hz, 1H), 7, 32 (dd, J = 8,0, 1,9 Hz, 1H), 7,53 (dd, J = 8,0, 8,0 Hz, 1H), 7,86 (d, J = 7,8 Hz, 1H), 8,08 (dd, J = 8,0, 2,0 Hz, 1H), 8,39 (dd, J = 2,0, 2,0 Hz, 1H); ¹³C-NMR (CDCl₃) δ 21,27, 21,71 (t), 23,87 (q), 27,76, 35,29 (t), 43,06 (s), 66,46 (d), 110,41, 120,57, 120,83, 121,24, 126,55 (d), 129,26 (s), 129,68, 132,55 (d), 140,66, 143,86, 148,95, 150,51 (s); MS (EI) m/z 309 (M+H)⁺.
BEISPIEL 7
1,2-Dihydro-2-methyl-5-(3-nitrophenyl)spiro[cyclohexan-1,3-[3H]indol]
5-Brom-1,2-dihydro-2-methylspiro[cyclohexan-1,3-[3H]indol]
Mit den in Beispiel 1 angegebenen Bedingungen wurde die Untertitelverbindung aus 4-Bromphenylhydrazin-HCl (3,5 g, 15,7 mmol) und Cyclohexylmethylketon (2,0 g, 15,7 mmol) hergestellt. Das reine Material (3,0 g, 68%) wurde als Öl erhalten: ¹H-NMR (CDCl₃) δ 1,09 (d, J = 6,5 Hz, 3H), 1,25–1,73 (m, 10H), 3,45 (br s, 1H), 3,71 (q, J = 6,5 Hz, 1H), 6,47 (d, J = 8,2 Hz, 1H), 7,09 (dd, J = 8,2, 2,0 Hz, 1H), 7,19 (d, J = 2,0 Hz, 1H);¹³C-NMR (CDCl₃) δ 17,22 (q), 23,19, 23,44, 26,16, 30,17, 36,70 (t), 47,99 (s), 62,34 (d), 110,08 (s), 111,07, 126,83, 130,08 (d), 139,98, 148,49 (s); MS (EI) m/z 280, 282 (M+H)⁺.
Mit Hilfe der in Beispiel 1 aufgeführten Standard-Kupplungsbedingungen wurde die Titelverbindung aus 5-Brom-1,2-dihydro-2-methylspiro[cyclohexan-1,3-[3H]indol] (0,5 g, 1,65 mmol), Tetrakis(triphenylphosphin)palladium (0,08 g, 0,07 mmol) in Dimethoxyethan (5 ml) mit 3-Nitrophenylboronsäure (0,33 g, 1,98 mmol) und Natriumcarbonat (0,53 g, 4,95 mmol) in 5 ml Wasser hergestellt. Das reine Material (0,35 g, 55%) wurde als orangebrauner fließfähiger Feststoff erhalten: ¹H-NMR (CDCl₃) δ 1,16 (d, J = 6,4 Hz, 3H), 1,38–1,83 (m, 10H), 3,7 (br s, 1H), 3,8 (q, J = 6,4 Hz, 1H), 6,69 (d, J = 8,0 Hz, 1H), 7,31 (dd, J = 8,0, 1,8 Hz, 1H), 7,53 (dd, J = 8,0, 8,0 Hz, 1H) , 7,86 (d, J = 7,3 Hz, 1H), 8,09 (d, J = 8,0 Hz, 1H), 8,39 (dd, J = 1,9, 1,9 Hz, 1H) ¹³C-NMR (CDCl₃) δ 17,45 (q), 23,32, 23,70, 26,21, 30,31, 37,07 (t), 47,77 (s), 62,11 (d), 109,81, 120,78, 121,23, 122,40, 126,92 (d), 128,96 (s), 129,66, 132,51 (d), 138,63, 143,92, 148,94, 150,1 (s); MS (EI) m/z 322 (M)⁺.
BEISPIEL 8
3,3-Dimethyl-5-(3-nitrophenyl)-2,3-dihydro-1H-indol (WAY-160655)
3,3-Dimethyl-1,3-dihydro-2H-indol-2-on
Diese Verbindung wurde mit dem von A. Kende, Synth. Commun., 1: 12 (1982) beschriebenen allgemeinen Verfahren hergestellt. Das Rohmaterial wurde durch Säulenchromatographie (SiO₂, Methylenchlorid:Hexan 1:3) gereinigt, so dass die Untertitelverbindung erhalten wurde, die den beschriebenen Spektraldaten entsprach.
Das vorstehende Oxindol (0,65 g, 4,03 mmol) und Natriumacetat (0,334 g, 4,07 mmol) wurden in Essigsäure (5,0 ml) gerührt. Brom (0,66 g, 0,00413 mol) in Essigsäure (5,0 ml) wurde tropfenweise zum Reaktionsgemisch gegeben. Die Reaktion wurde für 50 min gerührt und dann in Wasser (10 ml) gegossen. Das Gemisch wurde mit Natriumcarbonat alkalisch gemacht, mit Ethylacetat extrahiert, getrocknet (MgSO₄), filtriert, und eingedampft, so dass 5-Brom-1,3-dihydro-3,3-dimethyl-2H-indol-2-on (0,89 g, 92%) erhalten wurde : ¹H-NMR (DMSO-d₆) 1,21 (s, 6H), 6 ,76 (d, J = 8,22 Hz, 1H), 7,29 (dd, J = 2,1, 8,2 Hz, 1H), 7,49 (d, J = 2,0 Hz, 1H), 10,4 (s, 1H).
Zu einer Lösung von 5-Brom-1,3-dihydro-3,3-dimethyl-2H-indol-2-on (0,9 g, 3,7 mmol) in 20 ml THF wurde bei 0°C ein Boranmethylsulfid-Komplex (2M in THF, 38 ml, 75 mmol) gegeben. Das Reaktionsgemisch wurde auf Raumtemperatur erwärmt, dann für 4 h unter Rückfluss erhitzt. Das Gemisch wurde auf Raumtemperatur gekühlt und in H₂O/CH₂Cl₂ gegossen und mit 5% NaHCO₃ gewaschen. Die organische Schicht wurde mit Salzlösung gewaschen, getrocknet (Na₂SO₄) und eingeengt. Das Rohprodukt wurde in MeOH extrahiert, Trimethylamin-N-oxid (2,0 g, 26,6 mmol) wurde dazu gegeben, und die Lösung wurde für 2 h auf Rückfluss gebracht. Das Reaktionsgemisch wurde gekühlt, eingeengt, und der rohe Rückstand wurde durch Säulenchromatographie (SiO₂, Methylenchlorid) gereinigt, so dass 5-Brom-3,3-dimethyl-2,3-dihydro-1H- indol (0,074 g, 87%) als gelbes Öl erhalten wurde: ¹H-NMR (CDCl₃) δ 1,29 (s, 6H), 3,30 (s, 2H), 3,5 (br s, 1H), 6,49 (d, J = 8,8 Hz, 1H), 7,08–7,12 (m, 2H) ¹³C-NMR (CDCl₃) δ 27,69 (q), 42,21 (s), 62,01 (d), 110,38 (s), 111,09, 125,46, 130,09 (d), 141,03, 149,52 (s); MS (EI) m/z 225, 227 (M)⁺.
Mit Hilfe der in Beispiel 1 aufgeführten Standard-Kupplungsbedingungen wurde die Titelverbindung aus 5-Brom-3,3-dimethyl-2,3-dihydro-1H-indol (0,25 g, 1,1 mmol), Tetrakis-(triphenylphosphin)palladium (0,08 g, 0,07 mmol) in Dimethoxyethan (5 ml) mit 3-Nitrophenylboronsäure (0,22 g, 1,3 mmol) und Natriumcarbonat (0,35 g, 3,3 mmol) in 5 ml Wasser hergestellt. Die Titelverbindung (0,17 g, 60%) wurde als brauner fließfähiger Feststoff erhalten: ¹H-NMR (CDCl₃) δ 1,38 (s, 3H), 3,40 (s, 2H), 6,72 (d, J = 8,0 Hz, 1H), 7,29–7,34 (m, 2H), 7,54 (dd, J = 8,0, 8,0 Hz, 1H), 7,86 (d, J = 7,8 Hz, 1H), 8,09 (dd, J = 8,0, 1,5 Hz, 1H) , 8, 40 (dd, J = 2, 0, 2, 0 Hz, 1H) ; ¹³C-NMR (CDCl₃) δ 27,89 (q), 41,93 (s), 62,05 (d), 109,78, 120,87, 121,02, 121,23, 126,87 (d), 129,19 (s), 129,69, 132,52 (d), 139,64, 143,75, 148,94, 151,17 (s); MS (EI) m/z 268 (M)⁺.
BEISPIEL 9
5'-(3-Chlorphenyl)-1',2'-dihydrospiro[cyclohexan-1,3'-[3H]indol]
Spiro[cyclohexan-1,3'-[3H]indol]-2'-(1'H)on
Eine Lösung des Oxindols (25 g, 190 mmol) in 800 ml wasserfreiem THF wurde auf –20°C gekühlt, n-Butyllithium (2,5 M in Hexanen, 152 ml, 0,38 mol) wurde langsam zugegeben, gefolgt von der Zugabe von N,N,N',N'-Tetramethylendiamin (51 ml, 0,38 mol). Nach 15 min wurde 1,5-Diiodpentan (174 g, 0,54 mol) langsam zugegeben und das Gemisch wurde auf Raumtemperatur erwärmen gelassen. Nach dem Rühren für 16 h wurde eine gesättigte wässrige Ammoniumchlorid-Lösung (1 l) und Ethylacetat (1 l) dazu gegeben. Nach 15 min wurden die Schichten getrennt, und die wässrige Phase wurde mit Ethylacetat extrahiert. Die vereinigten organischen Schichten wurden mit Salzsäure (1N, 500 ml) extrahiert, dann mit Salzlösung gewaschen, getrocknet (MgSO₄) und eingeengt, so dass ein Öl erhalten wurde. Das Öl wurde mit Hexan (200 ml) und Benzol (20 ml) verrieben. Der Niederschlag wurde gesammelt und im Vakuum getrocknet, so dass Spiro[cyclohexan-1,3'-[3H]indol]-2'-(1'H)on (26,3 g, 69,6%) als farblose Kristalle erhalten wurden. Schmp. 110–114 C°; ¹H-NMR (DMSO-d₆) δ 1,67 (m, 10H), 6,84 (d, 1H, J = 8 Hz), 6,94 (t, 1H, J = 8 Hz), 7,17 (t, 1H, J = 8 Hz), 7,44 (d, 1H, J = 8 Hz), 10,3 (s, 1H).
Zu einer Lösung des vorstehenden Oxindols (17,6 g, 90,0 mmol) in Essigsäure (300 ml) wurde Natriumacetat (8,0 g, 100,0 mmol) und Brom (14, 6 g, 91, 0 mmol) unter Rühren gegeben. Nach 30 min bei Raumtemperatur wurde das Reaktionsgemisch zwischen Wasser und Ethylacetat verteilt. Die wässrige Phase wurde mit Ethylacetat extrahiert. Die vereinigten organischen Schichten wurden mit Wasser gewaschen, getrocknet (MgSO₄) und eingedampft. Der Rückstand wurde mit Hexan verrieben. Der Niederschlag wurde gesammelt und im Vakuum getrocknet, so dass 5-Bromspiro[cyclohexan-1,3¹-[3H]indol]-2'(1'H)-on (16,5 g, 67%) als schmutzigweiße Kristalle erhalten wurde: Schmp. 196–199 C°; ¹H-NMR (DMSO-d₆) δ 1,62 (m, 10H), 6,8 (d, 1H, J = 6,8 Hz), 7,36 (d, 1H, J = 8,2, 1,8 Hz), 7,58 (dd, 1H, J = 8,2, 1,8 Hz), 10,44 (s, 1H).
Mit Hilfe der in Beispiel 1 aufgeführten Standard-Kupplungsbedingungen wurde die Titelverbindung aus dem vorstehenden Bromoxindol (0,32 g, 1,14 mmol), Tetrakis(triphenylphosphin)palladium (0,08 g, 0,07 mmol) und 3-Chlorphenylboronsäure (0,21 g, 1,37 mmol) und Natriumcarbonat (0,36 g, 3,4 mmol) in Wasser (3 ml) hergestellt. 5-(3-Chlorphenyl)-spiro[cyclohexan-1,3-[3H]indol]-2(1H)-on (0,28 g, 80%) wurde als gelber Feststoff erhalten: Schmp. 164–165 C°; ¹H-NMR (CDCl₃) δ 1,60–1,78 (m, 6H), 1,81–1,99 (m, 4H), 7,04 (d, J = 8,1 Hz, 1H) , 7,22–7,47 (m, 4H), 7,53 (s, 1H), 7,61 (s, 1H), 9,28 (br s, 1H); ¹³C-NMR (CDCl₃) δ20,17, 24,12, 31,92 (t), 47,22 (s), 109,21, 121,94, 124,06, 125,50, 125,79, 125,97, 126,38, 128,96 (d), 132,88, 133,59, 135,60, 139,14, 142,17, 182,89 (s); MS (EI) m/z 310, 312 (M-H)⁺.
Zu einer Lösung von 5-(3-Chlorphenyl)spiro[cyclohexan-1,3-[3H]indol]-2(1H)-on (0,42 g, 1,4 mmol) in 20 ml THF bei 0°C wird ein Borandimethylsulfid-Komplex (2M in THF, 14 ml, 28 mmol) gegeben. Das Reaktionsgemisch wurde auf Raumtemperatur erwärmt und dann für 4 h auf Rückfluss gebracht. Das Gemisch wurde auf Raumtemperatur gekühlt, und dann in H₂O mit CH₂Cl₂ gegossen, und mit 5% NaHCO₃ gewaschen. Die organische Schicht wurde mit Salzlösung gewaschen, über Na₂SO₄ getrocknet und eingeengt. Das Rohprodukt wurde in MeOH extrahiert, und Trimethylamin-N-oxid (1,0 g, 9,0 mmol) wurde dazu gegeben. Die Lösung wurde für 2 h auf Rückfluss gebracht, das Gemisch wurde gekühlt, eingeengt, und der rohe Rückstand durch Säulenchromatographie (SiO₂, Methylenchlorid) gereinigt, so dass die Titelverbindung (0,25 g, 63%) als gelbes Öl erhalten wurde: ¹H-NMR (CDCl₃) δ 1,3–1,55 (m, 3H), 1,6–1,85 (m, 7H), 3,1 (br s, 1H), 3,5 (s, 2H), 6,6 (d, J = 8,0 Hz, 1H), 7,18–7,32 (m, 4H), 7,4 (dd, J = 7,7, 1,5 Hz, 1H), 7,5 (s, 1H);¹³C-NMR (CDCl₃) δ 23,65, 26,24, 37,00 (t), 46,58 (s), 57,49 (t), 109,95, 121,82, 125,07, 126,36, 126,98, 127,08, 130,29 (d), 130,64, 134,91, 139,65, 144,29, 151,09 (s) ; MS (EI) m/z 298, 300 (M+H)⁺.
BEISPIFL 10
3-(2',3',3'-Trimethyl-2',3-dihydro-1H-indol-5'-yl)benzonitril
Zu einer Lösung von 5-Brom-2,3,3-trimethyl-2,3-dihydro-1H-indol (2,03 g, 8,45 mmol) in Dimethoxyethan (50 ml) wurde unter Stickstoff Tetrakis (triphenylphosphin) palladium (0,47 g, 0,4 mmol) gegeben. Nach 20 min bei Raumtemperatur wurden 3- Formylphenylboronsäure (2,36 g, 16,4 mmol) und Kaliumcarbonat (6,80 g, 55 mmol) in Wasser (25 ml) dazu gegeben, und das Gemisch wurde unter Rückfluss erhitzt. Nach 2 h wurde das Gemisch gekühlt, in Salzlösung gegossen und zweimal mit EtOAc extrahiert. Die vereinigten organischen Extrakte wurden mit Salzlösung gewaschen, getrocknet (MgSO₄) und eingedampft. Der Rückstand wurde dann einer Säulenchromatographie (SiO₂, EtOAc:Hexan, 1:8) unterworfen, so dass 3-(2',3,3'-Trimethyl-2',3-dihydro-1H-indol-5'-yl)benzaldehyd (0,96 g, 3,62 mmol, 43%) als leicht unreiner Feststoff erhalten wurde, der ohne weitere Reinigung verwendet wurde: ¹H-NMR (CDCl₃) δ 1,11 (s, 3H), 1,22 (d, 3H, J = 6,5 Hz), 1,35 (s, 3H), 3,59 (dd, 1H, J = 13,7 Hz), 6,69 (d, 1H, J = 1 Hz), 7,25 (s, 1H) , 7,32 (s, 1H), 7,55 (t, 1H, J = 7,6 Hz), 7,80 (d, 1H, J = 1 Hz), 7,82 (d, 1H, J = 1 Hz), 8,05 (s, 1H), 10,07 (s, 1H).
Zu einer Lösung der vorstehenden Verbindung (0,96 g, 3,62 mmol) in MeCN/H₂O (20 ml, 95:5) wurde Hydroxylamin-hydrochlorid (0,82 g, 7,25 mmol) gegeben. Nach 1 h wurde das Gemisch in eine gesättigte Natriumhydrogencarbonatlösung gegossen und zweimal mit EtOAc extrahiert. Die vereinigten organischen Extrakte wurden mit Wasser gewaschen, getrocknet (MgSO₄) und eingedampft. Der Rückstand wurde dann in Dichlormethan (20 ml) gelöst und mit Thionylchlorid (0,53 ml, 7,25 mmol) behandelt. Nach 16 h wurde das Gemisch mit gesättigter Natriumhydrogencarbonat-Lösung gequencht und eingeengt, zwischen Wasser und EtOAc verteilt und erneut mit EtOAc extrahiert. Die vereinigten organischen Extrakte wurden mit Salzlösung gewaschen, getrocknet (MgSO₄) und eingedampft. Die Reinigung durch Säulenchromatographie (EtOAc:Hexan, 1:8) ergab ein gelbes Öl (0,31 g), das in Methanol (5 ml) gelöst wurde und mit etherischem Chlorwasserstoff (1M, 1,3 ml, 1,3 mmol) behandelt und eingedampft wurde. Die Umkristallisation aus MeOH/Et₂O ergab dann die Titelverbindung (0,20 g, 0,60 mmol, 18%): Fp. >235°C (Zers.), ¹H-NMR (CDCl₃) δ 1,57 (s, 3H), 1,36 (d, 3H, J = 6,7 Hz), 1,40 (s, 3H), 3,72–3,76 (m, 1H), 7,30 (d, 1H, J = 8 Hz), 7,67 (t, 2H, J = 7 Hz), 7,79–7,84 (m, 2H), 8,03 (d, 1H, J = 8 Hz), (8,2, s, 1H); MS (EI) m/z 262 (M)⁺.
BEISPIEL 11 - Pharmakologie
Die biologische Aktivität für die erfindungsgemäßen Verbindungen wurde mit den nachstehend beschriebenen In-vitro- und In-vivo-Tests bestimmt. Die In-vitro-Leistungen liegen im Bereich von 0,01 nM bis 10000 nM, und die In-vivo-Leistungen liegen im Bereich von 1 μg/kg bis 100 mg/kg.
A. In-vitro-Biologie
Die In-vitro-Biologie wird bestimmt durch (1) kompetitive Radioliganden-Bindung mit der A-Form des menschlichen Progesteronrezeptors, wobei Progesteron als Radioligand fungiert; (2) den Cotransfektionstest, der die funktionelle Aktivität, ausgedrückt als EC₅₀-Werte für den Agonisten und IC₅₀- Werte für den Antagonisten liefert; und (3) eine T47D-Zellproliferation, wobei es sich um einen weiteren funktionellen Test handelt, der ebenfalls Agonisten- und Antagonisten-Daten liefert.
1. hPR-Bindungstest
Dieser Test wird gemäß Pathirana, C.; Stein, R. B.; Berger, T. S.; Fenical, W.; Ianiro, T.; Mais, D. E.; Torres, A.; Glodman, M. E., Nonsteroidal human progesterone receptor modulators from the marine alga cymoplia barbata, J. Steroid Biochem. Mol. Biol., 1992,41,733–738 durchgeführt.
2. PRE-Luciferase-Test in CV-1-Zellen
Die Aufgabe dieses Tests ist die Bestimmung der menstruellen bzw. antimenstruellen Leistung einer Verbindung auf der Basis ihrer Wirkung auf die PRE-Luciferase-Reporteraktivität in CV-1-Zellen, die mit menschlichen PR- und PTE-Luciferase-Plasmiden cotransfiziert sind. Die in dem Test verwendeten Materialien und Verfahren sind wie folgt:
a. Medium:
Das Wachstumsmedium war wie folgt: DMEM (BioWhittaker) mit 10% (v/v) fötalem Rinderserum (hitzeinaktiviert), 0,1 mM MEM nicht-essentielle Aminosäuren, 100 U/ml Penicillin, 100 mg/ml Streptomycin und 2 mM GlutaMax (GIBCO, BRL). Das experimentelle Medium war wie folgt: DMEM (BioWhittaker), Phenol, ohne Erythrozyten, mit 10% (v/v) holzkohlegestripptem fötalem Rinderserum (hitzeinaktiviert), 0,1 mM MEM nicht-essentielle Aminosäuren, 100 U/ml Penicillin, 100 mg/ml Streptomycin und 2 mM GlutaMax (GIBCO, BRL).
b. Zellkultur, Transfektion, Behandlung und Luciferasetest
Ausgangs-CV-1-Zellen werden in Wachstumsmedium gehalten. Die Cotransfektion erfolgt mit 1,2 × 10⁷ Zellen, 5 mg pLEM-Plasmid mit hPR-B, das an den SphI- und BamH1-Stellen eingefügt ist, 10 mg pGL3-Plasmid mit zwei PREs stromaufwärts der Luciferase-Sequenz und 50 mg ultraschallbehandelter Kalbsthymus-DNA als Träger-DNA in 250 ml. Die Elektroporation erfolgt bei 260 V und 1000 mF in einem BioRad Gene Pulser II. Nach der Elektroporation werden die Zellen in Wachstumsmedium resuspendiert und in einer Platte mit 96 Vertiefungen mit 40000 Zellen/Vertiefung in 200 μl plattiert. Nach der Inkubation über Nacht wird zu experimentellem Medium gewechselt. Die Zellen werden dann mit den Bezugs- oder Testverbindungen in experimentellem Medium behandelt. Die Verbindungen werden in Gegenwart von 3 nM Progesteron auf antimenstruelle Aktivität getestet. 24 h nach der Behandlung wird das Medium verworfen, die Zellen werden dreimal mit D-PBS (GIBCO, BRL) gewaschen. 50 μl Zelllyse-Puffer (Promega, Madison, WI) werden in jede Vertiefung gegeben, und die Platten werden 15 min in einem Titer Plate Shaker (Lab Line Instrument, Inc.) geschüttelt. Die Luciferaseaktivität wird mit den Luciferase-Reagenzien von Promega gemessen.
c. Analyse der Ergebnisse:
Jede Behandlung besteht aus mindestens 4 Replikaten. Log-transformierte Daten werden zur Analyse der Varianz und der nichtlinearen Dosisreaktionskurvenanpassung für die Agonisten- und Antagonisten-Modi verwendet. Die Huber-Gewichtung wird zum Unterdrücken der Wirkungen von Ausreißern verwendet. Die EC₅₀- bzw. IC₅₀-Werte werden aus den retransformierten Werten berechnet. JMP-Software (SAS-Institute, Inc.) wird für Einwege-Analyse der Varianz und für nicht-lineare Reaktions-Analysen verwendet.
d. Bezugsverbindungen:
Progesteron und Trimegeston sind Bezugs-Progestine und RU486 ist das Bezugs-Antiprogestin. Sämtliche Bezugsverbindungen werden in Volldosis-Reaktionskurven getestet, und die EC₅₀- bzw. IC₅₀-Werte werden berechnet.
Tabelle 1. Geschätzte EC₅₀-Werte, Standardfehler (SE) und 95%-Konfidenzintervalle (CI) für die Bezugs-Progestine aus drei einzelnen Untersuchungen
Tabelle 2. Geschätzte IC₅₀-Werte, Standärdfehler (SE) und 95%-Konfidenzintervalle (CI) für das Antiprogestin, RU486, aus drei einzelnen Untersuchungen
Menstruelle Aktivität: Die Verbindungen, die die PRE-Luciferase-Aktivität verglichen mit der Vehikel-Kontrolle signifikant (p<0,05) steigern, werden als aktiv angesehen.
Antimenstruelle Aktivität: Verbindungen, die die 3-nM-Progesteron-induzierte PRE-Luciferaseaktivität signifikant (p<0,05) senken.
EC₅₀: Konzentration einer Verbindung, die einen halbmaximalen Anstieg der PRE-Luciferase-Aktivität (Standardwert, nM) mit SE ergibt.
IC₅₀: Konzentration einer Verbindung, die eine halbmaximale Abnahme der 3-nM-Progesteron-induzierten PRE-Luciferase-Aktivität (Standardwert nM) mit SE ergibt.
3. T47D-Zellproliferationstest
Die Aufgabe dieses Tests ist die Bestimmung der menstruellen und antimenstruellen Leistung durch Verwendung eines Zellproliferationstests in T47D-Zellen. Die Wirkung einer Verbindung auf die DNA-Synthese in T47D-Zellen wird gemessen. Die in diesem Test verwendeten Materialien und Methoden sind wie folgt.
a. Wachstumsmedium:
DMEM:F12 (1:1) (GIBCO, BRL), angereichert mit 10% (v/v) fötalem Rinderserum (nicht hitzeinaktiviert), 100 U/ml Penicillin, 100 mg/ml Streptomycin und 2 mM GlutaMax (GIBCO, BRL).
b. Behandlungsmedium:
Minimales essentielles Medium (MEM) (#51200-038GIBCO, BRL) phenolrotfrei, angereichert mit 0,5% holzkohlegestripptem fötalem Rinderserum, 100 U/ml Penicillin, 200 mg/ml Streptomycin und 2 mM GlutaMax (GIBCO, BRL).
c. Zellkultur:
Ausgangs-T47D-Zellen werden in Wachstumsmedium gehalten. Für den BrdU-Einbau-Test werden die Zellen in Platten mit 96 Vertiefungen (Falcon, Becton Dickinson Labware) mit 10000 Zellen/Vertiefung in Wachstumsmedium plattiert. Nach der Inkubation über Nacht wird zu Behandlungsmedium gewechselt, und das Zellenwachstum wird für weitere 24 h vor der Behandlung fortgesetzt. Die Ausgangsverbindungen werden in geeignetem Vehikel gelöst (100% Ethanol oder 50% Ethanol/50% DMSO), anschließend in Behandlungsmedium verdünnt und zu den Zellen gegeben. Progestin- und Antiprogestin-Bezugsverbindungen werden in Volldosis-Reaktionskurven getestet. Die Endkonzentration des Vehikels ist 0,1%. In Kontroll-Vertiefungen erhalten die Zellen nur Vehikel. Antiprogestine werden in der Gegenwart von 0,03 nM Trimegeston, dem Bezugsprogestinagonisten, getestet. 24 h nach der Behandlung wird das Medium verworfen, und die Zellen werden mit 10 mM BrdU (Amersham Life Science, Arlington Heights, IL) für 4 h in Behandlungsmedium markiert.
d. Zellproliferationstest:
Am Ende der BrdU-Markierung wird das Medium entfernt, und der BrdU-Einbau wird mit einem Zellproliferations-ELISA-Kit (#RPN 250, Amersham Life Science) gemäß den Angaben des Herstellers gemessen. Zusammengefasst werden Zellen in einem ethanolhaltigen Fixierungsmittel für 30 min fixiert, gefolgt von Inkubation in einem Blockierungspuffer für 30 min zur Reduktion des Hintergrundes. Peroxidase-markierter Anti-BrdU-Antikörper wird in die Vertiefungen gegeben und 60 min inkubiert. Die Zellen werden dreimal mit PBS gespült und mit 3,3',5,5'-Tetramethylbenzidin (TMB)-Substrat für 10 bis 20 min je nach der Leistung der untersuchten Verbindungen inkubiert. Dann werden 25 μl 1 M Schwefelsäure in jede Vertiefung gegeben, um die Farbreaktion zu stoppen, und die optische Dichte wird in einem Plattenlesegerät bei 450 nm innerhalb von 5 min gelesen.
e. Analyse der Ergebnisse:
Quadratwurzel-transformierte Daten werden zur Analyse der Varianz und nicht-linearen Dosis-Reaktionskurvenanpassung für die Agonisten- und Antagonisten-Modi verwendet. Die Huber-Gewichtung wird zum Unterdrücken der Wirkungen von Ausreißern verwendet. Die EC₅₀- oder IC₅₀-Werte werden aus den retransformierten Werten berechnet. JMP-Software (SAS-Institute, Inc.) wird für Einwege-Analyse der Varianz und für nicht-lineare Dosisreaktions-Analysen bei Einzeldosis- und Dosis-Reaktions-Untersuchungen verwendet.
f. Bezugsverbindungen
Trimegeston und Medroxyprogesteronacetat (MPA) sind Bezugs-Progestine, und RU486 ist das Bezugs-Antiprogestin. Sämtliche Bezugsverbindungen werden in Volldosis-Reaktionskurven getestet und die EC₅₀- bzw. IC₅₀-Werte werden berechnet.
Tabelle 3. Geschätzte EC₅₀-Werte, Standardfehler (SE) und 95%-Vertrauensintervalle (CI) für einzelne Untersuchungen
Tabelle 4. Geschätzte IC₅₀-Werte, Standardfehler (SE) und 95%-Vertrauensintervalle (CI) für das Antiprogestin RU486
EC₅₀: Konzentration einer Verbindung, die einen halbmaximalen Anstieg des BrdU-Einbaus mit SE ergibt.
IC₅₀: Konzentration einer Verbindung, die eine halbmaximale Abnahme des 0,1 Trimegeston-induzierten BrdU-Einbaus mit SE ergibt.

Claims

Verbindungen der Formel
in welcher: R₁ und R₂ unabhängig voneinander aus der aus H, C₁-C₈-Alkyl, substituiertem C₁-C₈-Alkyl, OH, O- (C₁-C_8- Alkyl), O-(substituiertes C₁-C₈-Alkyl), O-(Acetyl), Aryl, substituiertem Aryl, Heteroaryl, substituiertem Heteroaryl, C₁-C₈-Alkylary, C₁-C₈-Alkylheteroaryl 1-Propinyl und 3-Propinyl bestehenden Gruppe ausgewählt sind; oder R₁ und R₂ miteinander verbunden sind und einen Ring bilden, der -CH₂(CH₂)_nCH₂-, -CH₂CH₂C(CH₃)₂CH₂CH₂, -O(CH₂) mCH₂- , -O(CH₂)_pO-, -CH₂CH₂OCH₂CH₂- , -CH₂CH₂N(C₁-C₈-Alkyl)CH₂CH₂-, oder -CH₂CH₂NHCH₂CH₂-, enthält; n für eine ganze Zahl von 0 bis 5 steht; m für eine ganze Zahl von 1 bis 4 steht; p für eine ganze Zahl von 1 bis 4 steht; oder R₁ und R₂ zusammen für eine Doppelbindung an C(CH₃)₂, C(C₃-C₆-Cycloalkyl), O oder C-(Cycloether) stehen; wobei der Cycloether aus der aus Tetrahydrofuranyl und Hexahydropyranyl bestehenden Gruppe ausgewählt ist; R₃ für H, OH, NH₂, C₁-C₆-Alkyl, substituiertes C₁-C₆-Alkyl, C₃-C₆-Alkenyl, C₂-C₈-Alkinyl, substituiertes C₂-C₈-Alkinyl oder COR^A steht; R^A für H, C₁-C₃-Alkyl, substituiertes C₁-C₃-Alkyl, C₁-C₃-Alkyloxy, substituiertes C₁-C₃-Alkyloxy, Amino-C₁-C₃-Alkyl oder Amino- (substituiertes C₁-C₃-Alkyl) steht; R₄ für H, Halogen, CN, NH₂, C₁-C₆-Alkyl, substituiertes C₁-C₆-Alkyl, C₁-C₆-Alkyloxy, substituiertes C₁-C₆-Alkyloxy, Amino-C₁-C₆-Alkyl oder Amino-(substituiertes C₁-C₆-Alkyl) steht; R₅ aus der aus a), b) und c) bestehenden Gruppe ausgewählt ist: a) ein substituierter Benzolring der Formel:
X ist aus der aus Halogen, OH, CN, C₁-C₃-Alkyl, substituiertem C₁-C₃-Alkyl, C₁-C₃-Alkyloxy, substituiertem C₁-C3-Alkyloxy, Thio-C₁-C₃-Alkyl, Thio- (substituiertes C₁-C₃-Alkyl) , S(O)-C₁-C₈-Alkyl, S(O)₂-C₁-C₈-Alkyl, Amino-C₁-C₃-Alkyl, Amino- (substituiertes C₁-C₃-Alkyl) , NO₂, C₁-C₃-Perfluoralkyl, einem 5- oder 6gliedrigen heterocyclischen Ring mit 1 bis 3 Heteroatomen im Gerüst, COR^B, OCOR^B und NR^CCOR^B bestehenden Gruppe ausgewählt; R^B steht für H, C₁-C₃-Alkyl, substituiertes C₁-C₃-Alkyl, Ary, substituiertes Aryl, C₁-C₃-Alkyloxy, substituiertes C₁-C₃-Alkyloxy, Amino-C₁-C₃-Alkyl oder Amino- (substituiertes C₁-C₃-Alkyl); R^C steht für H, C₁-C₃-Alkyl oder substituiertes C₁-C₃-Alkyl ; Y und Z sind unabhängig voneinander aus der aus H, Halogen, CN, NO₂, C₁-C₃-Alkyloxy, C₁-C₃-Alkyl und Thio-C₁-C₃-Alkyl bestehenden Gruppe ausgewählt; b) ein 5- oder 6gliedriger Ring mit 1, 2 oder 3 aus der aus O, S, SO, SO₂ und NR₈ bestehenden Gruppe ausgewählten Heteroatomen im Gerüst und einem oder zwei voneinander unabhängigen Substituenten, ausgewählt aus der aus H, Halogen, CN, NO₂, C₁-C₃-Alkyl, C₁-C₃-Alkyloxy, Amino-C₁-C₃-alkyl, COR^D und NR^ECOR^D bestehenden Gruppe; R^D steht für H, C₁-C₃-Alkyl, substituiertes C₁-C₃-Alkyl, Aryl, substituiertes Aryl, C₁-C₃-Alkyloxy, substituiertes C₁-C₃-Alkyloxy, Amino-C₁-C₃-alkyl oder Amino-(substituiertes C₁-C₃-Alkyl); R^E steht für H, C₁-C₃-Alkyl oder substituiertes C₁-C₃-Alkyl; R₈ steht für H oder C₁-C₃-Alkyl ; und c) eine Indol-4-yl, Indol-7-yl oder Benzo-2-thiopheneinheit, wobei die Einheit gegebenenfalls durch 1 bis 3 Substituenten ausgewählt aus der aus Halogen, C₁-C₆-Alkyl, CN, NO₂, C₁-C₆-Alkyloxy und CF₃ bestehenden Gruppe substituiert ist; R₆ und R₇ unabhängig voneinander aus der aus H, Methyl, Ethyl, Propyl, Butyl, Isopropyl, Isobutyl, Cyclohexyl, Aryl, substituiertem Aryl, Heteroaryl und substituiertem Heteroaryl bestehenden Gruppe ausgewählt sind; und deren pharmazeutisch unbedenkliche Salze; wobei in den Verbindungen mit dem Begriff "substituiert" in dem Ausdruck "substituiertes Alkyl" das Vorhandensein eines oder mehrerer Substituenten ausgewählt aus der aus Halogen, CN, OH, NO₂, Amino, Aryl, Heterocyclyl, substituiertem Aryl, substituiertem Heterocyclyl, C₁-C₈-Alkyloxy, Aryloxy, substituiertem C₁-C₈-Alkyloxy, C₁-C₈-Alkylcarbonyl, C₁-C₈-Alkylcarboxyl, C₁-C₈-Alkylamino und Arylthio bestehenden Gruppe bezeichnet wird; mit dem Begriff "substituiert" in dem Ausdruck "substituiertes Aryl" das Vorhandensein von 1 bis 4 Substituenten ausgewählt aus der aus Halogen, CN, OH, NO₂, Amino, C₁-C₈-Alkyl, Cycloalkyl, C₂-C₈-Alkenyl, C₂-C₈-Alkinyl, C₁-C₈-Alkoxy, Aryloxy, substituiertem C₁-C₈-Alkyloxy, C₁-C₈-Alkylcarbonyl, C₁-C₈-Alkylcarboxyl, C₁-C₈-Alkylamino und Arylthio bestehenden Gruppe bezeichnet wird; mit dem Begriff "Heteroaryl" Aryl, das einen 4- bis 7gliedrigen monocyclischen heterocyclischen Ring oder einen multicyclischen Ring, der aus Kohlenstoffatomen und 1 bis 4 aus der aus N-, O- und S-Atomen bestehenden Gruppe ausgewählten Heteroatomen besteht, oder ein multicyclischen Ringsystem, in dem einer der oben erwähnten heterocyclischen Ringe mit einem Arylring kondensiert ist, umfaßt, bezeichnet wird; mit dem Begriff "substituiert" in dem Ausdruck "substituiertes Heteroaryl" das Vorhandensein von 1 bis 4 Substituenten ausgewählt aus der aus Halogen, CN, OH, NO₂, Amino, C₁-C₈-Alkyl, substituiertem C₁-C₈-Alkyl, Cycloalkyl, C₂-C₈-Alkenyl, substituiertem C₂-C₈-Alkenyl, C₂-C₈-Alkinyl, substituiertem C₂-C₈-Alkinyl, C₁-C₈-Alkyloxy, Aryloxy, substituiertem C₁-C₈-Alkyloxy, C₁-C₈-Alkylcarbonyl, C₁-C₈-Alkylcarboxyl, C₁-C₈-Alkylamino und Arylthio bestehenden Gruppe bezeichnet wird; der Begriff "substituiert" in den Ausdrücken "substituiertes Alkinyl" und "substituiertes Alkenyl" die gleichen Bedeutungen wie in dem Ausdruck "substituiertes Alkyl" hat; mit dem Ausdruck "Heterocyclyl" ein 4- bis 7gliedriger monocyclischer heterocyclischer Ring oder ein multicyclischer Ring, der aus Kohlenstoffatomen und 1 bis 4 aus der aus N-, O- und S-Atomen bestehenden Gruppe ausgewählten Heteroatomen besteht oder ein multicyclisches Ringsystem, in dem einer der oben erwähnten heterocyclischen Ringe mit einem Arylring kondensiert ist, bezeichnet; und der Begriff "substituiert" in dem Ausdruck "substituiertes Heterocyclyl" die gleichen Bedeutungen wie in dem Ausdruck "substituiertes Heteroaryl" hat.
Verbindungen der Formel:
in welcher: R₅ für (i) oder (ii) steht: (i) ein substituierter Benzolring der Formel:
X ist aus der aus Halogen, CN, C₁-C₃-Alkyloxy, C₁-C₃-Alkyl, NO₂, C₁-C₃-Perfluoralkyl, einem 5gliedrigen heterocyclischen Ring, der 1 bis 3 Heteroatome in seinem Gerüst enthält, und Thio-C₁-C₃-alkoxy bestehenden Gruppe ausgewählt; Y befindet sich in der 4'- oder 5'-Stellung und ist aus der aus H, Halogen, CN, NO₂, C₁-C₃-Alkyloxy, C₁-C₉-Alkyl und Thio-C₁-C₃-alkyl bestehenden Gruppe ausgewählt; (ii) ein 5gliedriger heterocyclischer Ring der Formel:
in welcher: U für O, S oder NR₈ steht; R₈ für H, C₁-C₃-Alkyl oder C₁-C₄-CO₂-Alkyl steht; X' aus der aus Halogen, CN, NO₂, C₁-C₃-Alkyl und C₁-C₃-Alkyloxy bestehenden Gruppe ausgewählt ist; Y' aus der aus H, Halogen, CN, NO₂ und C₁-C₄-Alkyl bestehenden Gruppe ausgewählt ist; wobei Halogen für F steht; und deren pharmazeutisch unbedenkliche Salze.
Verbindungen, bei denen es sich um 4a-Methyl-6-(3-nitrophenyl)-2,3,4,4a,9,9a-hexahydro-1H-carbazol und deren pharmazeutisch unbedenkliche Salze handelt.
Verbindungen nach Anspruch 2, mit der Formel:
wobei Y' für H oder C₁-C₄-Alkyl steht.
Verbindungen nach Anspruch 1 oder 2, mit der Formel:
wobei: X aus der aus Halogen, CN, C₁-C₃-Alkyloxy, C₁-C₃-Alkyl, NO₂, C₁-C₃-Perfluoralkyl, einem 5gliedrigen heterocyclischen Ring, der 1 bis 3 Heteroatome in seinem Gerüst enthält, und Thio-C₁-C₃-alkyloxy bestehenden Gruppe ausgewählt ist; Y sich in der 4'- oder 5'-Stellung befindet und aus der aus H, Halogen, CN, NO₂, C₁-C₃-Alkyloxy, C₁-C₃-Alkyl und Thio-C₁-C₃-alkyl bestehenden Gruppe ausgewählt ist.
Verbindungen nach Anspruch 2, wobei x für CN oder NO₂ steht und Y für 5'-Fluor steht.
Verbindungen nach Anspruch 1 oder 2, mit der Formel:
wobei: U für O, S oder NR₈ steht; R₈ für H oder C₁-C₃-Alkyl steht; X' aus der aus Halogen, CN, NO₂, C₁-C₃-Alkyl und C₁-C₃-Alkyloxy bestehenden Gruppe ausgewählt ist; Y' aus der aus H, Halogen, CN, NO₂ und C₁-C₃-Alkyl bestehenden Gruppe ausgewählt ist; wobei Halogen für F steht.
Verbindungen nach einem der Ansprüche 1, 2, 4 oder 7, mit der Formel:
wobei Y' für H oder C₁-C₃-Alkyl steht.
Verbindung nach einem der Ansprüche 1, 2 oder 7, mit der Formel:
Verbindungen nach Anspruch 1, mit der Formel:
wobei: X¹ für N oder CX² steht; X² für Halogen, CN oder NO₂ steht.
Verbindungen nach Anspruch 1, bei denen es sich um 2,3,3-Trimethyl-5-(3-nitrophenyl)-2,3-dihydro-1H-indol, 2,3,3-Trimethyl-5-(3-nitrophenyl)-2,3-dihydro-1H-indol-hydrochlorid, (2-R)-2,3,3-Trimethyl-5-(3-nitrophenyl)-2,3-dihydro-1H-indol, (2-S)-2,3,3-Trimethyl-5-(3-nitrophenyl)-2,3-dihydro-1H-indol, 2,3,3-Diethyl-2-methyl-5-(3-nitrophenyl)-2,3-dihydro-1H-indol, 1,2-Dihydro-2-methyl-5-(3-nitrophenyl)spiro[cyclohexan-1,3-[3H]indol], 3,3-Dimethyl-5-(3-nitrophenyl)-2,3-dihydro-1H-indol, 5'-(3-Chlorphenyl)-1',2'-dihydrospiro[cyclohexan-1,3'-[3H]indol] und 3-(2',3',3'-Trimethyl-2',3-dihydro-1H-indol-5'-yl)benzonitril und deren pharmazeutisch unbedenkliche Salze handelt.
Pharmazeutische Zusammensetzung, enthaltend eine pharmazeutisch wirksame Menge einer Verbindung nach einem der Ansprüche 1 bis 11 und einen pharmazeutisch unbedenklichen Träger oder Hilfsstoff.
Verwendung einer Verbindung nach einem der Ansprüche 1 bis 11 oder eines unbedenklichen Salzes davon zur Herstellung eines Medikaments.
Verwendung einer Verbindung nach einem der Ansprüche 1 bis 11 oder eines unbedenklichen Salzes davon zur Herstellung eines Medikaments, das einem Säugetier als Empfängnisverhütungsmittel verabreicht werden kann.
Verwendung einer Verbindung nach einem der Ansprüche 1 bis 11 oder eines pharmazeutisch unbedenklichen Salzes davon zur Herstellung eines Medikaments, das einem Säugetier zur Behandlung oder Prävention einer gutartigen oder bösartigen neoplastischen Erkrankung verabreicht werden kann.
Verwendung nach Anspruch 15, wobei die gutartige oder bösartige neoplastische Erkrankung aus der aus Fibromen des Uterusmyometriums, Endometriose, gutartiger Prostatavergrößerung, Karzinomen und Adenokarzinomen des Endometriums, der Eierstöcke, der Brust, des Kolons, der Prostata und der Hypophyse, Meningioma und anderen hormonabhängigen Tumoren bestehenden Gruppe ausgewählt ist.
Verwendung einer Verbindung nach einem der Ansprüche 1 bis 11 oder eines unbedenklichen Salzes davon zur Herstellung eines Medikaments, das man einem Säugetier zur Hormonersatztherapie verabreichen kann.