Verfahren zur Gewinnung von Nucleinsäure aus Hefe. Die Gewinnung der
Nucleinsäure aus Hefe durch Behandeln der Hefe mit Alkalien ist bekannt. Man erhält
hierbei nach dem Abfiltrieren der Hefe eine alkalische Flüssigkeit, die auf Zusatz
von Alkohol und Salzsäure die Nucleinsäure ausfallen läßt. Dieses Verfahren hat
offenbar zwei Nachteile: einmal wird durch diese Fällungsmittel nicht nur Nucleinsäure
ausgefällt, sondern auch noch andere Stoffe, die die Nucleinsäure verunreinigen;
dann aber wird hierbei ein bedeutendes Vo-Iumen Alkohol benötigt. Diesem Übel abzuhelfen,
wird die Nucleinsäure erst in die Eisenverbindung übergeführt, aus der dann mit
einem besonderen Lösungsmittel für Nucleinsäure, nämlich Natriumacetat, die Nucleinsäure
ausgelaugt wird.Process for the recovery of nucleic acid from yeast. The extraction of the
Nucleic acid from yeast by treating the yeast with alkalis is known. You get
here after filtering off the yeast an alkaline liquid, which on addition
from alcohol and hydrochloric acid causes the nucleic acid to precipitate. This procedure has
apparently two disadvantages: on the one hand, these precipitating agents not only produce nucleic acid
precipitated, but also other substances that contaminate the nucleic acid;
but then a significant volume of alcohol is required. To remedy this evil,
the nucleic acid is first converted into the iron compound, from which then with
a special solvent for nucleic acid, namely sodium acetate, the nucleic acid
is leached out.
Ferner ist die Herstellung von nucleinsaurem Eisen aus Hefe bekannt.
Bei der Erfindung dagegen handelt es sich um die Darstellung freier Nucleinsäure
aus dem Eisensalz. Das Neue des vorliegenden Verfahrens besteht einmal in der Auslaugung
des Eisensalzes mit Natriumacetatlösung und zweitens in der Fällung der freien Nucleinsäure
aus dieser Acetatlösung mit Hilfe von Salzsäure und Alkohol. Auf diese Weise gelingt
es, die Nucleinsäure in guter Ausbeute und in reinem Zustande zu gewinnen. Die Zersetzung
der Eisenverbindung mit Alkali ist sehr unvorteilhaft, da freies Alkali die Nucleinsä.ure
teilweise zerstört und so die Ausbeuten sehr herabsetzt. Außerdem erhält man auf
diese ZVeise eine durch Spaltprodukte verunreinigte Nucleinsäure.The production of nucleic acid iron from yeast is also known.
In contrast, the invention concerns the preparation of free nucleic acid
from the iron salt. The novelty of the present process consists on the one hand in the leaching
of the iron salt with sodium acetate solution and secondly in the precipitation of the free nucleic acid
from this acetate solution with the help of hydrochloric acid and alcohol. In this way it succeeds
it is necessary to obtain the nucleic acid in good yield and in a pure state. The decomposition
the iron compound with alkali is very unfavorable, since free alkali the nucleic acid
partially destroyed and so greatly reduces the yields. You also get on
this ZVeise a nucleic acid contaminated by cleavage products.
Durch die Überführung der -Nucleinsäure in das unlösliche Eisensalz
wird der große Ballast an Wasser aus dem Verfahren entfernt. Die darauffolgende
Aushub ng mit Natriumacetat erfordert nur ein kleines Volumen, weshalb dann -die
Fällung der freien Nucleinsäure mit wenig Salzsäure und wenig Alkohol vor sich gehen
kann.By converting the nucleic acid into the insoluble iron salt
the large ballast of water is removed from the process. The following
Excavation ng with sodium acetate requires only a small volume, which is why then -the
Precipitation of the free nucleic acid with a little hydrochloric acid and a little alcohol proceed
can.
Beispiel. 5oo g abgepreßte Hefe werden mit starker Natronlauge übergossen
und verrührt. Man kocht und säuert .alsdann mit Eisessig an. Da Nucleinsäure durch
starke Essigsäure gefällt wird, so gibt man nur so viel Säure hinzu, daß eine ganz
schwach saure Reaktion eintritt, also ein pH von etwa 5 bis 6. Die von der Hefe
abzentrifugierte Flüssigkeit wird mit der genügenden Menge einprozentiger Eisenchloridlösung
versetzt, worauf sich das nucleinsaure Eisen abscheidet. Man saugt dieses ab und
laugt es mit ioprozentiger Natriumacetatlösung aus. Der Umsatz erfolgt, da Natriumacetat
schwach alkalisch reagiert, wahrscheinlich nach folgendem Schema: (Nu)3Fe -;- 3
NaOH = Fe(OH)3 -E- 3 (Nu)Na (Nu = Nucleinsäurerest). Es entsteht das leichtlösliche
nucleinsaure Natrium, während sich Eisenhydroxyd abscheidet. Es wird wieder abgenutscht
und
des Eisenrückstand auf dem Filter mit wenig Wasser gewaschen.
Das klare Filtrat wird mit der gleichen Menge Alkohol und verdünnter Salzsäure versetzt.
Die Nucleinsäure setzt sich zu Boden und kann nun abgesaugt werden. Zur besseren
Trocknung wird der Niederschlag nochmals mit Alkohol nachbehandelt und nach Abtrennung
# des Alkohols getrocknet. . . .Example. 500 g of squeezed yeast are poured over with strong sodium hydroxide solution
and stirred. It is boiled and then acidified with glacial acetic acid. Because nucleic acid through
If strong acetic acid is precipitated, only enough acid is added to make one whole
weakly acidic reaction occurs, i.e. a pH of about 5 to 6. That of the yeast
centrifuged liquid is mixed with a sufficient amount of one percent ferric chloride solution
added, whereupon the nucleic acid iron is deposited. One sucks this off and
leaches it with 10 percent sodium acetate solution. The conversion takes place because sodium acetate
reacts weakly alkaline, probably according to the following scheme: (Nu) 3Fe -; - 3
NaOH = Fe (OH) 3 -E- 3 (Nu) Na (Nu = nucleic acid residue). The easily soluble one emerges
nucleic acid sodium, while iron hydroxide is deposited. It is sucked off again
and
Washed the iron residue on the filter with a little water.
The same amount of alcohol and dilute hydrochloric acid are added to the clear filtrate.
The nucleic acid settles on the ground and can now be suctioned off. For better
Drying, the precipitate is treated again with alcohol and after separation
# of the alcohol dried. . . .
Wenn oben betont wurde, ;daß bei-der.Abscheidung der Nucleinsäure
aus der Eisenverbindung keine Natronlauge verwendet werder, darf, da diese die NucIeinsäure
teilweise zerstört, so steht dies nicht in unlösbarem Widerspruch dazu, daß. die
Loslösung der Nucleinsäure aus dem Zellverbande mit Na-. tronlauge bewirkt werden
soll. Denn bei dieser Maßnahme ist man auf Lauge angewiesen und muß daher auch die
hierdurch bedingten Verluste und Verunreinigungen der Nucl.einsäure in Kauf nehmen.If it was emphasized above that during the deposition of the nucleic acid
No sodium hydroxide solution may be used from the iron compound, as this is the nucleic acid
partially destroyed, this is not in insoluble contradiction to the fact that. the
Detachment of the nucleic acid from the cell structure with Na-. tronlauge be effected
target. Because with this measure one is dependent on lye and must therefore also the
accept the losses and contamination of the nucleic acid caused by this.