DE4230089A1 - Laborroboter zur automatischen Aufarbeitung von synthetischen Peptiden - Google Patents
Laborroboter zur automatischen Aufarbeitung von synthetischen PeptidenInfo
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Description
Synthetische Peptide werden heute in der Mehrzahl nach dem von Merrifield entwickelten
Festphasenprinzip hergestellt. Die Synthese erfolgt in Automaten, die eines oder eine Vielzahl
von Zielpeptiden gleichzeitig auf einem unlöslichen Träger aufbauen. Nach der Synthese
werden die Peptide mit Säure von diesem Träger abgespalten und in der Regel durch Fällung
mit Ether gewonnen. Besonders seit der Einführung multipler Syntheseautomaten wurde die
manuelle Aufarbeitung sehr zeitaufwendig, und es besteht der dringende Bedarf nach einem
geeigneten Automaten.
Eine erste Entwicklung in diese Richtung wurde vor kurzem publiziert
(R. Zuckermann, S. C. Banville: Peptide Research 5 (1992) 169-174). Der in dieser
Veröffentlichung beschriebene Automat ist mechanisch aufwendig und langsam. Es kann nur
ein Peptid nach dem anderen aufgearbeitet werden, d. h. eine parallele Bearbeitung
zeitintensiver Schritte der Prozedur ist nicht möglich.
Unserer Erfindung liegt damit die
Aufgabe zugrunde, die Abspaltung und Isolierung von synthetischen Peptiden auf möglichst
einfache Weise vollautomatisch und simultan für mehrere Produkte zu bewerkstelligen.
Die Erfindung betrifft eine Vorrichtung zur automatischen Durchführung der Abspaltung von
synthetischen Peptiden vom Träger und der Isolierung und Vorreinigung der Produkte. Zur
Lösung der Aufgabe wird ein Laborroboter, z. B. der M222/401 der Firma Gilson, eingesetzt.
Dieser Roboter kann Lösungen aus Vorratsgefäßen in Probengefäße pipettieren und Filtrationen
durchführen. Zur Filtration werden die Lösungen in Filtrationssäulen übertragen und durch das
Filter gedrückt. Da die Filtration der meist kolloidalen Niederschläge der Peptide ein großes
Problem darstellt, wird erfindungsgemäß der Einsatz eines Filtrationshilfsmittels
vorgeschlagen. Ein solches Hilfsmittel ist z. B. geglühtes und gewaschenes Kieselgur. Der
Einsatz eines solchen Hilfsmittels in der Aufarbeitung von Peptiden ist bisher in der Literatur
nicht beschrieben worden und damit neu. Der Ablauf der Filtration wird damit aber erheblich
erleichtert. Nach der Filtration muß das Produkt aus dem Filterhilfsmittel herausgelöst werden.
Der Halter für eine Reihe von Filtern kann dazu von dem Roboter über Sammelgefäße bewegt
werden. Anschließend wird der Niederschlag gelöst und in Sammelgefäßen aufgefangen.
Die Prozedur ist in den beiliegenden Zeichnungen im einzelnen dargestellt.
Zeichnung 1: Schema der automatischen Peptidabspaltung (Arbeitsablauf),
Zeichnung 2: Arbeitsfläche des Aufarbeitungsroboters,
Zeichnung 3: Aufbau der Filtersäule.
Der Ablauf der Peptidabspaltung und Vorreinigung umfaßt typischerweise die folgenden
Schritte:
0. Synthese auf unlöslichem Träger, z. B. im Syntheseautomaten
1. Vorlegen der beladenen Träger in Probengefäßen
2. Zugabe von Säure (TFA)
3. Wartezeit für die Abspaltreaktion
4. Transfer der abgelösten Peptide in neue Gefäße
5. Zugabe von Ether zur Fällung der Produkte
6. Transfer in Filtrationsgefäße
7. Isolierung der Produkte durch Filtration
8. Waschen der Peptide mit Ether
9. Auflösen der Peptide
10. Transfer der Lösungen in Sammelgefäße
11. Gefriertrocknung.
0. Synthese auf unlöslichem Träger, z. B. im Syntheseautomaten
1. Vorlegen der beladenen Träger in Probengefäßen
2. Zugabe von Säure (TFA)
3. Wartezeit für die Abspaltreaktion
4. Transfer der abgelösten Peptide in neue Gefäße
5. Zugabe von Ether zur Fällung der Produkte
6. Transfer in Filtrationsgefäße
7. Isolierung der Produkte durch Filtration
8. Waschen der Peptide mit Ether
9. Auflösen der Peptide
10. Transfer der Lösungen in Sammelgefäße
11. Gefriertrocknung.
Die aufgeführten Prozeduren sind mit einem Laborroboter durchführbar, der aber an die
speziellen Bedingungen der Peptidchemie angepaßt werden muß. In dem hier beschriebenen
Verfahren werden nur die Schritte 1-10 automatisiert. Der schwierigste Abschnitt ist die
Filtration und das Waschen der in Ether ausgefällten Produkte. Das Peptid fällt je nach
Zusammensetzung flockig, klebrig oder kolloidal an. Solche Niederschläge neigen dazu,
konventionelle Filter entweder zu passieren oder zu verstopfen. Eine Filtration ist daher
zuverlässig nur mit einem Filterhilfsmittel durchzuführen. Als Filterhilfsmittel kommt z. B. in
Frage: Glaswolle, Quarzmehl, Kieselgur, Silica, Polymere mit großen Poren, Asbest oder
andere Mineralfasern. Wichtig ist, daß das Filterhilfsmittel gegen die benutzten Lösungen inert
ist und eine große Oberfläche aufweist. Bei der Filtration lagert sich das Peptid auf der
Oberfläche des Filterhilfsmittels ab, ohne das Filterbett zu verstopfen. Insbesondere Kieselgur
hat sich als ausgezeichnet geeignet erwiesen. Damit ist eine zuverlässige Filtration in der
Routine durchführbar und das auf der Oberfläche des Trägers adsorbierte Peptid läßt sich leicht
waschen. Versuche mit einer Reihe von Peptiden unterschiedlicher Zusammensetzung und
Polarität ergaben Gesamtausbeuten zwischen 50-100%. Die Reinheit ist zu der aus der manuell
ausgeführten Abspaltung identisch.
Claims (3)
1. Vorrichtung zur automatischen Aufarbeitung synthetischer Peptide unter Verwendung eines
Laborroboters, dadurch gekennzeichnet,
daß auf der Arbeitsfläche des Roboters Probengefäße für die Abspaltung, Reagenzien,
Filtrationselemente und Sammelgefäße bereitgestellt werden und der Roboter durch eine
geeignete Software in die Lage versetzt wird, die in der Patentbeschreibung aufgeführten
Reaktionen durchzuführen.
2. Vorrichtung nach Anspruch 1, dadurch gekennzeichnet, daß Filtrationselemente mit einem
Filterhilfsmittel verwendet werden, wobei als Filterhilfsmittel Kieselgur, Silica, Glasstaub,
gesintertes Kieselgur, großporiges Polymer, Asbest oder ein anderes feinfaseriges Mineral,
oder eine Mischung aus diesen Komponenten eingesetzt wird.
3. Filtrationselemente für die automatische oder manuelle Aufarbeitung synthetischer Peptide
analog der Darstellung in Abbildung 3, dadurch gekennzeichnet, daß die Filtrationselemente
ein Filterhilfsmittel enthalten, wobei als Filterhilfsmittel Kieselgur, Silica, Glasstaub,
gesintertes Kieselgur, großporiges Polymer, Asbest oder ein anderes feinfaseriges Mineral,
oder eine Mischung aus diesen Komponenten eingesetzt wird.
Priority Applications (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
DE19924230089 DE4230089A1 (de) | 1992-09-09 | 1992-09-09 | Laborroboter zur automatischen Aufarbeitung von synthetischen Peptiden |
Applications Claiming Priority (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
DE19924230089 DE4230089A1 (de) | 1992-09-09 | 1992-09-09 | Laborroboter zur automatischen Aufarbeitung von synthetischen Peptiden |
Publications (1)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
DE4230089A1 true DE4230089A1 (de) | 1994-03-10 |
Family
ID=6467559
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
DE19924230089 Withdrawn DE4230089A1 (de) | 1992-09-09 | 1992-09-09 | Laborroboter zur automatischen Aufarbeitung von synthetischen Peptiden |
Country Status (1)
Country | Link |
---|---|
DE (1) | DE4230089A1 (de) |
Cited By (2)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
WO1998036829A1 (en) * | 1997-02-24 | 1998-08-27 | Oxford Asymmetry International Plc | Reaction apparatus for solid phase synthesis and method of using the same |
US6864100B1 (en) | 1999-08-06 | 2005-03-08 | Qiagen Gmbh | Automated protein purification the multiwell format by vacuum filtration |
-
1992
- 1992-09-09 DE DE19924230089 patent/DE4230089A1/de not_active Withdrawn
Cited By (2)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
WO1998036829A1 (en) * | 1997-02-24 | 1998-08-27 | Oxford Asymmetry International Plc | Reaction apparatus for solid phase synthesis and method of using the same |
US6864100B1 (en) | 1999-08-06 | 2005-03-08 | Qiagen Gmbh | Automated protein purification the multiwell format by vacuum filtration |
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Legal Events
Date | Code | Title | Description |
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