DE4204102A1

DE4204102A1 - Arzneimittel zur behandlung und/oder prophylaxe von aids und anderen verwandten erkrankungen

Info

Publication number: DE4204102A1
Application number: DE19924204102
Authority: DE
Inventors: Erfinder Wird Nachtraeglich Benannt Der
Original assignee: KRAGLER PETER
Current assignee: KRAGLER PETER
Priority date: 1992-02-12
Filing date: 1992-02-12
Publication date: 1993-08-19
Anticipated expiration: 2012-02-13
Also published as: DE4204102C2

Description

Die Erfindung betrifft ein Arzneimittel und die Verwendung bestimmter Verbindungen zur Behandlung und/oder Prophylaxe von Störungen des Folat-Stoffwechsels, insbesondere zur Be handlung und/oder Prophylaxe von AIDS oder Aids-Related- Complex (ARC), Chronic-Immuno-Deficiency-Syndrome (CIDS) bzw. Chronic-Fatigue-Syndrome (CFS), multipler Sklerose (MS), Neoplasien und gereatrischen Erkrankungen.

Die Folsäure und ihre Derivate sind in der Natur verbreitet und für den Menschen ein essentieller Nahrungsfaktor. Die Folsäure der folgenden Formel I selbst ist ein Vitamin, dessen Mangel bei Mensch und Tier Wachstumsschwäche und verschiedene Formen der Anämie hervorruft:

Die Bezeichnung Folsäure wird für alle Verbindungen verwen det, die als chemischen Bestandteil einen Pteridinrest, einen para-Aminobenzoesäurerest und einen oder mehrere Glu taminsäurereste enthalten. In höheren Organismen herrscht jedoch das Monoglutamat vor. Die Folsäure nimmt im Stoff wechsel der Ein-Kohlenstoffeinheiten eine zentrale Position ein. Sie ist Coenzym von Methyl-, Methenyl-, Methylen- und Formylgruppen übertragenden Enzymen und somit an zahlrei chen Biosyntheseprozessen, insbesondere des Protein- und Nucleotid-Stoffwechsels beteiligt.

Die biologisch wirksame Form der Folsäure sind die 5,6,7,8- Tetrahydroderivate (5,6,7,8-Tetrahydro-pteroyl-glutamat bzw. 5,6,7,8-Tetrahydro-pteroyl-poly-gamma-glutamat, Te trahydrofolsäure). Insbesondere ist die Folsäure an der Synthese biologischer Makromoleküle im Körper, wie von Pro teinen, DNA und RNA, beteiligt. Die beigefügte Fig. 1 zeigt eine Übersicht über den Teil des Folsäure-Stoffwech sels, der mit der Makromolekularsynthese assoziiert ist. Wie daraus hervorgeht, nehmen die Enzyme Homocystein-Me thioninmethyltransferase (EC 2.1.1.13) und Thymidylatsyn thetase (EC 2.1.1.45) eine zentrale Rolle ein.

Die Pyrimidinbasen werden im "salvage pathway" durch Phos phorylasen zu Nucleosiden und weiter durch Nucleosid- und Nucleotidkinasen zu den Nucleotidtriphosphaten phosphory liert. 5-Methylcytosin und 5-Methyldeoxycytidinmonophosphat werden zu Thymin bzw. Deoxythymidinmonophosphat (Thymidi lat) desaminiert und umgehen somit die Thymidylatsynthase.

Die Stoffe der Thyminreihe sind:
Die Base Thymin.
Die Nucleoside Ribothymidin, Deoxythymidin.
Die Nucleotide Ribothymidinmonophosphat, Ribothymidindi phosphat, Ribothymidintriphosphat, Deoxythymidinmonophos phat, Deoxythymidindiphosphat, Deoxythymidintriphosphat.

Die Stoffe der 5-Methylcytosinreihe sind:
Die Base 5-Methylcytosin.
Die Nucleoside 5-Methylcytidin, 5-Methyldeoxycytidin.
Die Nucleotide 5-Methylcytidinmonophosphat, 5-Methylcyti dindiphosphat, 5-Methylcytidintriphosphat, 5-Methyldeoxy cytidinmonophosphat, 5-Methyldeoxycytidindiphosphat, 5- Methyldeoxycytidintriphosphat.

Der tägliche Bedarf an dTTP liegt bei 1 mMol (= 0,5 g). To xische Nebenwirkungen wurden erst in Dosierungen über 160 mMol/m²/Tag in Form von Myelosuppression, gastrointestina len Symptomen, Leberfunktionsstörungen und zentralnervösen Störungen beobachtet. Sie sind zurückzuführen auf eine Blockierung der Ribonucleotidreduktase für CDP durch hohe dTTP Spiegel, weswegen in jedem Fall 1-4 mMol (0,25-1 g) Deoxycytidin dazuzugeben ist.

Die Thymidylatsynthetase führt dabei zu den Nucleotiden der Thymidinreihe. Diese Reaktionen werden als obligatorische DNA-Methylierung bezeichnet. Es handelt sich dabei um eine Methylierung von 2,4-Di-hydroxy-pyrimidin in Position 5 mit der Zielverbindung 5-Methyluracil = Thymin. Die Homocy stein-Methioninmethyltransferase führt zum Stoffwechselweg der sogenannten fakultativen DNA-Methylierung, d. h. der Me thylierung von 2-Hydroxy-4-amino-pyrimidin in Position 5 mit der Zielverbindung 5-Methylcytosin. Dabei dient Vitamin B₁₂ als Cofaktor der Homocystein-Methioninmethyltrans ferase.

Methionin ist dabei an Reaktionen beteiligt, die der Rege neration des Folat-Coenzyms (der 5-Methyl-tetrahydro-pte royl-glutaminsäure) dienen. Methionin gehört zu den für den Menschen essentiellen Aminosäuren; der tägliche Minimal bedarf des Menschen liegt bei 1,1 g/Tag.

Die Funktion einer Zelle ist sowohl von der obligatori schen als auch von der fakultativen Methylierung abhängig. Dadurch entsteht das spezielle DNA-Methylierungsmuster, wo durch die Transkription und die Translation, d. h. die Gen expression, reguliert werden.

Der tägliche Bedarf an Folsäure liegt beim Menschen bei 0,4 bis 0,8 mg pro Tag. Er kann durch Verabreichung verschiede ner Medikamente, wie Tuberculostatika oder Contraceptiva, erhöht werden.

Vitamin B₆ oder Pyridoxin, das im Körper in die Wirkform Pyridoxalphosphat (PLP) überführt wird, ist ein Coenzym des Aminosäure-Stoffwechsels. In dem in Fig. 1 betrachteten Fall wirkt Vitamin B₆ als Coenzym der Serinhydroxymethyl transferase. Der tägliche Bedarf an Vitamin B₆ liegt beim Menschen bei 2 bis 2,5 mg/Tag, der an Vitamin B₁₂ bei 5 bis 8 µg/Tag.

Penicillin G gehört zu der Gruppe der β-Lactam-Antibiotika. Sie sind bei allen Infektionskrankheiten, deren Erreger pe nicillinsensibel sind, indiziert. Die Dosierung richtet sich in der Regel nach der Schwere des Falles und dem ver wendeten Präparat. Mit toxischen Nebenwirkungen muß bei Pe nicillinen nicht gerechnet werden, nur bei extrem hohen Do sen (20 bis 30 mega I.E. i.v.) oder bei intralumbaler Ap plikation wurden neurologische Ausfallerscheinungen beob achtet. Dagegen können allergische Nebenerscheinungen von unterschiedlicher Häufigkeit und Schwere je nach Art der individuellen Disposition der Applikation oder des verwen deten Penicillins auftreten. Besonders häufig ist die Al lergisierung bei lokaler Anwendung.

Erkrankungen wie AIDS, ARC (Aids-Related-Complex), CIDS (Chronic-Immuno-Deficiency-Syndrome), CFS (Chronic-Fatigue- Syndrome) und multiple Sklerose treten in jüngerer Zeit verstärkt auf. Bis heute konnte für derartige Erkrankungen keine zufriedenstellende Therapie entwickelt werden.

So können AIDS, ARC und CIDS bisher nur symptomal und in unzureichendem Maß behandelt werden. Dies geschieht bei spielsweise durch die Verabreichung falscher Nucleotide, z. B. Azidothymidin. Derartige Behandlungsmethoden sind je doch zum Teil mit erheblichen psychischen und körperlichen Beeinträchtigungen des Allgemeinbefindens der Patienten verbunden. So kann es beispielsweise zu Schäden an ver schiedenen inneren Organen kommen. Ebenso wurde eine allge meine Schwächung des Organismus beobachtet, wodurch der Körper anfällig für opportunistische Folgeinfektionen wird. Derartige Therapien besitzen somit einen lebensverlängern den, nicht jedoch einen lebenserhaltenden Effekt. Eine Hei lung derartiger Erkrankungen ist bisher noch nicht beobach tet worden.

Bei dem Chronic-Fatigue-Syndrome (CFS), einem durch abnorme Müdigkeit und Lethargie gekennzeichneten Zustand, handelt es sich vermutlich um eine Erkrankung des Immunsystems, bei der im Blut der Patienten Genfragmente, die sich von dem HTLV-2-Virus ableiten, gefunden wurden (Newsweek, 12. No vember 1990, Seiten 62 bis 70).

Hinweise auf einen Zusammenhang zwischen dem Folat-Stoff wechsel und AIDS sind aus dem Stand der Technik nur unzu reichend zu entnehmen. So wird eine Verbesserung der Meta plasie (Gewebsneubildung) eines normalerweise mit Zylinder epithel ausgekleideten Lungenbronchus bei Rauchern durch Gabe von Folat und Vitamin B₁₂ im JAMA, 11. März 1988, Band 259, Nr. 10, Seiten 1525 bis 1530, beschrieben.

Auf einen Zusammenhang zwischen AIDS und Folatmangel wird in The Lancet, 29. August 1987, Seite 509, hingewiesen.

Der vorliegenden Erfindung liegt die Aufgabe zugrunde, ein Arzneimittel und die Verwendung bestimmter Verbindungen zur Behandlung und/oder Prophylaxe für die obengenannten Krank heiten zur Verfügung zu stellen.

Das erfindungsgemäße Arzneimittel bzw. die erfindungsgemäße Verwendung soll für den Patienten mit keinen psychischen und physischen Belastungen verbunden sein. Das Arzneimittel soll in einfacher Weise, beispielsweise in Form von Tablet ten, verabreicht werden. Soweit wie möglich soll bei dem erfindungsgemäßen Arzneimittel und bei der erfindungsgemä ßen Verwendung eine stationäre Behandlung vermieden werden. Nebenwirkungen, die bei den bisherigen Arzneimitteln auf treten, wie eine Schwächung der Immunabwehr, sollen bei dem erfindungsgemäßen Arzneimittel bzw. bei der erfindungsgemä ßen Verwendung vermieden werden.

In dem erfindungsgemäßen Arzneimittel bzw. bei der erfin dungsgemäßen Verwendung sollen Stoffe eingesetzt werden, die den Körper nicht belasten und vorzugsweise körpereigene Stoffe sind oder Stoffe sind, die schon seit langem als Arzneimittel für andere Indikationen, beispielsweise als Vitamine, verwendet werden.

Überraschenderweise wurde gefunden, daß Erkrankungen wie AIDS und Aids-Related-Complex (ARC), Chronic-Immuno-Defi ciency-Syndrome (CIDS) bzw. Chronic-Fatigue-Syndrome (CPS) und multipler Sklerose (MS) mit einer Störung des Folat- Stoffwechsels assoziiert sind und erfolgreich behandelt werden können, wenn Verbindungen eingesetzt werden, die in den Folat-Stoffwechsel eingreifen.

Gegenstand der Erfindung ist ein Arzneimittel, das dadurch gekennzeichnet ist, daß es mindestens eine Verbindung aus der Gruppe Methionin, Vitamin B₁₂, Vitamin B₆, Thymin, 5- Methylcytosin (m⁵ Cytosin) und pharmazeutisch annehmbaren Salzen davon zusammen mit Penicillin G und/oder pharmazeu tisch annehmbaren Salzen davon sowie übliche Träger und/ oder Verdünnungsmittel enthält.

Gegenstand der Erfindung ist weiterhin die Verwendung von mindestens einer Verbindung aus der Gruppe Methionin, Vita min B₁₂ und Vitamin B₆, Thymin, 5-Methylcytosin und eines pharmazeutisch annehmbaren Salzes davon zusammen mit Peni cillin G und/oder einem pharmazeutisch annehmbaren Salz da von zur Behandlung und/oder Prophylaxe von Störungen des Folat-Stoffwechsels, wobei die Verwendung von Verbindungen aus der Gruppe Methionin, Vitamin B₁₂, Vitamin B₆, Thymin, 5-Methylcytosin und eines pharmazeutisch annehmbaren Salzes davon gleichzeitig, getrennt oder zeitlich abgestuft mit der Verwendung von Penicillin G und/oder eines pharmazeu tisch annehmbaren Salzes davon erfolgen kann.

Mit den erfindungsgemäßen Arzneimitteln und gemäß der er findungsgemäßen Verwendung können Erkrankungen wie AIDS, ARC, CIDS oder CFS prophylaktisch oder therapeutisch behan delt werden. Bei den erfindungsgemäßen Arzneimitteln und bei der erfindungsgemäßen Verwendung handelt es sich über wiegend um körpereigene Stoffe oder um Stoffe, die schon seit langer Zeit bei der Behandlung von Menschen verwendet werden. Der Metabolismus dieser Stoffe ist somit gut be kannt und führt zu keinerlei Nebenwirkungen.

Im Gegensatz zu den bisherigen Behandlungsformen dieser Er krankungen sind die Verabreichung des erfindungsgemäßen Arzneimittels und die erfindungsgemäße Verwendung nicht mit den üblichen psychischen und physischen Belastungen für den Patienten verbunden. Das Arzneimittel kann in einfacher Weise, z. B. in Form einer Tablette, verabreicht werden; eine stationäre Behandlung ist in den meisten Fällen nicht erforderlich. Da es sich um körpereigene Stoffe handelt, ist die Einnahme des erfindungsgemäßen Arzneimittels nicht mit unangenehmen Nebenwirkungen verbunden.

Gemäß einer bevorzugten Ausführungsform betrifft die vor liegende Erfindung die Verwendung der Verbindungen Methio nin, Vitamin B₁₂, Vitamin B₆, Thymin, 5-Methylcytosin zu sammen mit Penicillin G und/oder einem pharmazeutisch an nehmbaren Salz davon zur Behandlung und/oder Prophylaxe von AIDS und Aids-Related-Complex (ARC), Chronic-Immuno-Defi ciency-Syndrome (CIDS) bzw. Chronic-Fatigue-Syndrome (CFS) und multipler Sklerose (MS).

Die Anmelder haben die Basaltransformation von Lymphozyten von AIDS-Patienten und deren Stimulierbarkeit durch Lektine an Hand der quantitativen Inkorporation von radioaktiv mar kiertem Thymidin in die DNA der Lymphozyten gemessen.

Dabei wurde überraschenderweise gefunden, daß unstimulierte Lymphozyten bis 300% mehr Thymidin inkorporierten als die gesunder Patienten. Dies legt einen Thymidinmangel nahe. Regt man dagegen derartige Lymphozyten mit Lektinen zur Proliferation an und gibt radioaktiv markiertes Thymidin zu, so wird nur eine schwache Stimulierbarkeit und kein Thymidineinbau beobachtet.

Wie bereits ausgeführt, kann die Ursache der Störung des Folat-Stoffwechsels entweder im Bereich der fakultativen oder im Bereich der obligatorischen DNA-Methylierung liegen (vgl. Fig. 1: die rechte Seite entspricht dem Bereich der fakultativen DNA-Methylierung, die linke Seite entspricht dem Bereich der obligatorischen DNA-Methylierung).

Folgende Laborparameter wurden vor und nach der Therapie an 23 HIV-positiven Patienten mit verschiedener klinischer Symptomatik bestimmt:

1. Rotes Blutbild und Megakaryozytenfunktion
2. Weißes Blutbild und Lymphozytensubpopulation
3. Lymphozytenstimulation
4. Proteine
- a) Gesamteiweiß
- b) Elektrophorese
- c) Immunelektrophorese
- d) Zirkulierende Immunkomplexe (CIC)
5. B₁₂-Gehalt
- a) Serum pg/ml
- b) Erythrozyten pg/ml Zellen
- c) mononukleäre Zellen pg/ml Zellen
6. Folat-Gehalt
- a) Serum ng/ml
- b) Erythrozyten ng/ml Zellen
- c) mononukleäre Zellen ng/ml Zellen
7. HIV (Elisa) in Titerstufen
8. HIV-Westernblot (P24-core, P55-gag, gP41-env, gP120-env, gP160-env) mit Bewertung der Banden von + bis ++++
9. β₂-Mikroglobulin korreliert
- a) mit der Aktivität der NK-Zellen (ADCC = antibody dependent cellmediated cytotoxicity)
- b) mit der Aktivität der CD₈-NK-Zellen
10. Neopterin Zwischenprodukt der Reaktion GPT (Guanosintriphosphat) → Tetrahydrobiopterin (Hydroxylierung von Phenylalanin, Tyrosin und Tryptophan)
Die Bedeutung von Neopterin ist zur Zeit noch Gegen stand wissenschaftlicher Untersuchungen.
11. Lysozym (Muramidase) Messung der Granulozytenaktivität
12. Serologie sexuell übertragbarer Krankheiten (STD)

Zu den Laborparametern ist im einzelnen folgendes auszufüh ren:

Zu 1: Die Produktion von Erythrozyten (2 Millionen/sek) im Knochenmark ist die größte Zellneubildung des menschlichen Organismus. Bei den meisten der thera pierten Patienten fand sich eine leichte makro zytäre, hyperchrome Anämie bedingt durch nucleo-cy toplasmäre Asynchronität (DNA-Synthese↓, Protein synthese ↔). Dies führt zu einer Vergrößerung des mittleren Erythrozytenvolumens (MCV↑) und einer Er höhung des Hämoglobingehaltes des Einzelerythrozyten (HB_e↑).

Bei mit einem chain-terminator (z. B. AZT) vorbehan delten Patienten waren diese Befunde noch ausgepräg ter.

Kaschiert wurde diese Anämie häufig durch Eisenman gel, Störungen der Eisenspeicherung (Ferritin) und des Eisentransports (Transferrin).

Bei allen Patienten war nach Therapie das rote Blut bild gebessert bzw. normalisiert. Die polyploiden Megakaryozyten sind die einzigen blutbildenden Zel len, die das Knochenmark nicht verlassen.

Die bei einigen Patienten zu beobachtenden Störungen der Thrombozytensequestration → PDW (Platelet dia meter width = Streuung der Thrombozytengröße↑), so wie der Thrombozytopoese (Thombo. < 14 000 µl) war das größte therapeutische Problem.

Besserungen traten immer ein, vollständige Normali sierungen waren selten.

Ursache: Störungen bei der endomitotischen Bildung des diplo- bzw. tetraploiden Chromosomensatzes im Megarkaryoblasten.

Die Analyse dieses Laborparameters läßt eine Störung im Bereich der obligatorischen DNA-Methylierung ver muten.

Zu 2: Die gravierendsten Störungen im weißen Blutbild fanden sich in der Lymphozytensubpopulation, spezi ell bei den CD₄-Zellen (sog. Helferzellen). Abgese hen davon, daß ihre absolute Zahl im unteren oder unterhalb des Normbereichs lag, war auch ihre Funk tionsfähigkeit beeinträchtigt.

Die Aufgabe der CD₄-Zellen liegt in der Informa tionsübertragung bei der Spezifizierung sowohl der humoralen als auch der zellvermittelten Immunant wort.

Auf den CD₄-Zellen finden sich verschiedene Rezepto ren, z. B. für IgM, für die Histokompatibilitätsanti gene, für die B-Zellen oder für die CD₈-Natural-Kil ler-Zellen (= CD₈-cytotoxische Zellen).

Nach dem derzeitigen Wissenstand sind die polymorph kernigen neutrophilen Granulozyten die ersten Zellen mit Antigenkontakt, die Makrophagen die Zellen, die für das Processing des Antigens verantwortlich sind.

Bei allen Patienten lag vor der Therapie die Anzahl der funktionstüchtigen CD₄-Zellen (= B-inducer-Re zeptor⁺, CD₈-inducer-Rezeptor⁺) weit unter 50%, nach Therapie weit über 50%, meist bei 100%.

Ein derartiger Befund läßt eine Störung im Bereich der obligatorischen DNA-Methylierung erkennen.

Die CD₈-Suppressorzellen besitzen Rezeptoren für die Fc-Stücke von Immunglobulienen der Klasse G. Durch diese werden sie aktiviert, d. h. die CD₈-Suppressor zellen exprimieren den Haupt-Histokompatibilitätsan tigenkomplex II. Wie die immunsuppressive Wirkung zustande kommt, ist zur Zeit noch nicht sicher be kannt. Die hohe Anzahl aktivierter CD₈-Suppressor zellen korrelierte mit der polyklonalen Gammopathie der Patienten. Ein Absinken dieser überhöhten Frak tion der Lymphozytensubpopulation und damit auch eine Verbesserung der sogenannten T-Helfer/Suppres sor-Ratio nach Therapie erfolgte sehr langsam, über Monate. Einige Normalisierungen (CD₈-Zellen absolut < 1360/µl) nach der Therapie fanden sich erst nach einem Jahr.

Diese Befunde lassen auf eine Störung sowohl der fa kultativen als auch der obligatorischen DNA- Methylierung schließen.

Zu 3: Wie bereits beschrieben, wird die Basaltransforma tion von Lymphozyten und deren Stimulierbarkeit durch Lektine an Hand der quantitativen Inkorpora tion von radioaktiv markiertem Thymidin (H³-Thymi din) in die DNA der Lymphozyten gemessen. Die Naß einheit sind Counts per Minute (cpm).

Die Stimulation
mit PHA (Phytohämagglutinin) korreliert mit der Stimulation von T-Zellen (vorwiegend CD₄)
mit Con A (Concanavalin A) von T-Zellen (vorwiegend CD₈)
mit PWM (pokeweed mitogen) von B-Zellen (T-ab hängig).

Grundsätzlich geben diese Messungen Aufschluß über Störungen des de novo pathway bei der DNA-Synthese.

Basaltransformation

Außer bei den wenigen Patienten mit ausgeprägter Lymphozytose war die Inkorporation von H³-Thymidin vor der Therapie auf das 2- bis 3fache der Norm er höht.

Lektinstimulation

Vor Therapie bei allen Patienten desolat: Mit eini gen Ausnahmen von PHA war die Stimulierbarkeit der Lymphozyten meist unterhalb 10% der Norm.

Diese Befunde sprechen für eine Störung im Bereich der obligatorischen DNA-Methylierung.

Die Normalisierung von Basaltransformation und Lym phozytenstimulation nach Therapie erfolgt (wie bei dem allmählichen Zurückgehen der CD₈-S-Zellen) oft erst nach Monaten bzw. nach einem Jahr.

Zu 4: Bei allen behandelten Patienten fand sich eine Erhö hung des Gesamteiweißes im Serum.

Die Analyse der Dysproteinämie in der Elektrophorese (prozentuale Verteilung der Serumproteine) zeigt, daß die Erhöhung des Gesamteiweißes durch die Über proportionierung der Gamma-Globulin-Fraktion bedingt war.

Die Analyse der Immunelektrophorese zeigte, daß IgA, IgM, im wesentlichen aber IgG weit über die Norm er höht waren.

Nach Information durch CD₄-B-inducer-Zellen klonie ren B-Zellen zunächst (DNA-Synthese), dann werden sie zu Antikörper produzierenden Plasmazellen (Proteinsynthese).

Die zur Vereinfachung der Schematik ausgeklammerten, zur Spezifizierung der Immunantwort aber notwendigen Monozyten/Makrophagen sind Zellen, die zunächst Pro teine synthetisieren, u. a. z. B. Interleukin 1, in aktiviertem Zustand aber auch DNA.

Störungen bei der Produktion spezifischer Antikörper lassen sich dafür, wie folgt, charakterisieren:

1. Proteinsynthese Makrophage↓
z. B. kein Interleukin 1.
2. DNA-Synthese Makrophage↓
kein Antigenprocessing.
3. Zell zu Zellkontakt Makrophage-CD₄-B-inducer- Zelle:
- a) Antigenspezifizierung↓
- b) Rezeptorausbildung CD₄-Zelle↓
4. Zell zu Zellkontakt CD₄-B-inducer-Zelle - B-Zelle:
- a) Antigenspezifierung↓
- b) Rezeptoren↓
5. Klonierung der B-Zelle↓ → Inkorporation von dUTP statt dTTP → Kettenabriß
6. Produktion von unspezifischen Antikörpern

Zirkulierende Immunkomplexe (CIC) weisen auf eine Dysproportion zwischen Antigen und spezifischen An tikörpern hin. Die Zirkulation dieser AG-AK-Komplexe ist bedingt durch eine reduzierte Präsenz der Fc- Stücke, die den Anreiz zur Phagozytose dieser Kom plexe bilden.

Nach Therapie stiegen die CIC′s meist an, fielen dann aber nach Monaten ab, bei manchen Patienten bis in den Normbereich.

Bei späterem Wiederansteigen der zirkulierenden Im munkomplexe enthüllte die verfeinerte Fremdanamnese kein medizinisches, sondern ein gesellschaftliches Phänomen: Jeder der therapierten Patienten hatte früher oder später seine promiskuitive Lebensweise wieder aufgenommen.

Diese Befunde lassen eine Störung sowohl im Bereich der fakultativen als auch der obligatorischen DNA- Methylierung erkennen.

Zu 5 und 6: Ende 1986 fielen bei der Analyse der Labordaten pre finaler Aidspatienten (n=38) folgende Besonderheiten auf:

1. Der B₁₂-Gehalt der Serums war bei den Patienten weit unterhalb der Norm (um 100 pg/ml).
2. Der Folat-Gehalt des Serums lag bei allen Patien ten weit oberhalb der Norm (über 20 ng/ml), ob wohl zuvor keine Folsäure appliziert worden war.
3. Obwohl Antikörper gegen Hepatitis B-, Herpes simplex-, Epstein-Barr- und Cytomegalieviren vorhanden waren, verlief der Antikörpertest gegen das Virus, das diesen prefinalen Zustand angeb lich verursacht hatte, bei allen Aidspatienten negativ.

Die Zusammenhänge zwischen diesen zunächst unver ständlichen Befunden konnten bis Anfang 1988 aufge klärt werden. Der dahinterstehende Pathomechanismus ist die Cell-folate-depletion.

Seit 1988 werden bei HIV-positiven Patienten routi nemäßig folgende Laborparameter gemessen:
Folat in Serum, Erythrozyten und mononukleäre Zellen (Lymphozyten und Monozyten)
B₁₂ in Serum, Erythrozyten und mononukleäre Zellen.

Dabei zeigten sich vor der Therapie folgende Be funde:

a) Folat
im Serum meist im Normbereich
im Erythrozyten im unteren, meist weit unter halb des Normbereichs
in mononukleären Zellen (außer bei Patienten mit absoluter Lymphozytose) zwischen 30 bis 50% gesunder Vergleichspersonen,
b) B₁₂
im Serum im unteren, meist unterhalb des Norm bereichs
im Erythrozyten immer unterhalb des Serumwer tes
in mononukleären Zellen zwischen 20 bis 30% gesunder Vergleichspersonen.

Nach der Therapie war der intrazelluläre Folat- und B₁₂-Gehalt in Erythrozyten und mononukleären Zellen bei allen Patienten im Normbereich.

Diese Befunde sprechen für eine Störung im Bereich der fakultativen DNA-Methylierung.

Zu 7: Der "Aids-Test" (HIV-Elisa) ist ein qualitativer Test. Bei dem Versuch der Quantifizierung (Titrierung) zeigte sich bei zwei Therapien 1987:

HIV-AB-Titer:
vor Therapie 1:\|1 : 2 621 440
nach 3 Monaten:	1 : 10 240
vor Therapie 2:	1 : 327 680
nach 3 Monaten:	1 : 5 120

Da bei diesen beiden Therapien mit einer klinisch sichtbaren (vor allem cerebralen) Verbesserung der Patienten einhergingen, war der Schluß zulässig, daß dem Antikörperabfall (Lebenszeit von Plasmazellen ca. 1 1/2 Monate) eine Reduzierung des Antigens vor anging.

Diese Befunde sprechen für eine mögliche Störung im Bereich der fakultativen DNA-Methylierung, besonders aber für eine Störung im Bereich der obligatorischen DNA-Methylierung.

Zu 8: HIV-Westernblot:
Verwendet wurde der DuPont-Test-Kit: gP 160; gP 120; gp41; P 55; P 24.

Grundsätzlich werden hierbei Virusproteine elektro phoretisch getrennt und auf Nitrozellulosestreifen fixiert. Gemessen wird dann die Anwesenheit von An tikörpern gegen diese spezifischen Virusproteine.

Da sich bei HIV nicht um ein Virus im üblichen Sinne handelt, sondern um ein RNA-Intermediat, entstanden durch behinderte Genamplifikationen bei Differenzie rungsvorgängen, ist die Beurteilung eines HIV-We sternblots eingeschränkt durch zwei Kriterien:

1. Welche Proteine kommen bei einem beeinträchtigten Differenzierungsvorgang in das Serum?
2. Wie groß ist die Fähigkeit eines Patienten zur Bildung spezifischer Antikörper?

Einen entsprechenden Westernblot sowie eine Über sicht über den HIV-1-Antikörpernachweis im Immunblot zeigen die beigefügten Fig. 2 und 3.

Nach allen Therapien war eine Zunahme der Antikör perspezifität zu verzeichnen.

Diese Befunde sprechen für eine Störung sowohl im Bereich der fakultativen als auch der obligatori schen DNA-Methylierung.

Zu 9, 10 und 11: β-2-Mikroglobulin, Neopterin und Lysozym wurde bei keinem Patienten durch die Therapie signifikant ge ändert.

Zu 12: Serologische Untersuchungen sind vor allem bei Er krankungen, die das Immunsystem kompromittieren, nicht zuverlässig.

So entwickelten z. B. fünf Patienten nach Therapie einen positiven Cardiolipin-Test, eine Patientin einen positiven FTA-IgG-Test. Bei einer Patientin konnte mittels PCR (polymerase chain reaction) dreimal Antigen von Treponema pallidum und Borrelia Burgdorferi nachgewiesen werden; die serologischen Reaktionen blieben aber immer negativ.

Ganz allgemein sollte daher dem direkten Antigen nachweis (z. B. PCR) der Vorzug gegeben werden.

Erfindungsgemäß können die Arzneimittel selbst oder eines ihrer pharmazeutisch annehmbaren Salze mit pharmazeutisch annehmbaren Säuren, wie beispielsweise Milchsäure, Zitro nensäure, Äpfelsäure, Fumarsäure oder Weinsäure, oder mit pharmazeutisch annehmbaren Basen, wie Alkali- oder Erdalka lihydroxiden, -carbonaten, organischen Aminen oder Ammo niak, verwendet werden.

Die erfindungsgemäßen Arzneimittel oder ihre pharmazeutisch annehmbaren Salze können bei der Human- oder Veterinärmedi zin verwendet werden.

Die Dosis, mit der die erfindungsgemäßen Arzneimittel ver abreicht werden, wird von dem Verabreichungsweg, dem Kör pergewicht des Patienten und dem zu behandelnden Zustand sowie seiner Stärke abhängen.

Vitamin B₁₂ wird bevorzugt in einer Dosierung von 0,1 bis 20 mg pro Tag, mehr bevorzugt 0,5 bis 5 mg pro Tag und be sonders bevorzugt 1 bis 2 mg pro Tag verabreicht. Dabei sollte Hydroxy-, Aquo- oder Methylcobalamin verwendet wer den. Vitamin B₆ wird bevorzugt in einer Dosierung von 10 mg bis 1200 mg pro Tag, mehr bevorzugt 50 bis 600 mg pro Tag, besonders bevorzugt 100 mg pro Tag verabreicht. Methionin wird bevorzugt in einer Dosierung von 0,5 bis 4 g pro Tag, mehr bevorzugt 1 bis 2 g pro Tag und besonders bevorzugt 1,5 g pro Tag verabreicht. Thymin und seine Derivate sowie 5-Methylcytosin und seine Derivate werden bevorzugt in einer Dosierung von 0,1 bis 160 mMol/Tag, mehr bevorzugt in einer Dosierung von 1 bis 32 mMol/Tag und besonders bevor zugt in einer Dosierung von 4 bis 16 mMol/Tag verabreicht. Penicillin G wird bevorzugt in einer Dosierung von 5 bis 80 Millionen Einheiten pro Tag, mehr bevorzugt 20 bis 40 Mil lionen Einheiten pro Tag und besonders bevorzugt 30 Millio nen Einheiten pro Tag verabreicht. Penicillin G wird bevor zugt parenteral verabreicht, aber auch andere Verabrei chungsformen sind denkbar.

Die Verbindungen Vitamin B₆, Vitamin B₁₂, Methionin, Thymin und seine Derivate, 5-Methylcytosin und seine Derivate und Penicillin G sowie die pharmazeutisch annehmbaren Salze da von können gleichzeitig oder getrennt mit dem Penicillin G und/oder einem pharmazeutisch annehmbaren Salz davon verab reicht werden. Die getrennte Verabreichung ist bevorzugt. Es ist daher bevorzugt, daß die Verbindungen Vitamin B₆, Vitamin B₁₂ und Methionin, Thymin und seine Derivate, 5-Me thylcytosin und seine Derivate sowie pharmazeutisch annehm bare Salze davon in getrennten Dosiseinheiten vorliegen. In diesem Falle können das Penicillin G und/oder ein pharma zeutisch annehmbares Salz davon in Monopräparaten enthalten sein.

Es ist bevorzugt, einen Patienten zuerst mit den Verbindun gen der Gruppe Vitamin B₆, Vitamin B₁₂, Methionin, Thymin, 5-Methylcytosin und deren pharmazeutisch annehmbaren Salzen bis zum Nachweis von Homocystein im Urin zu behandeln. Üb licherweise dauert diese Therapie etwa vier Wochen. Sie kann aber auch nur zwei Wochen oder sechs Wochen dauern und hängt von der Schwere des zu behandelnden Zustands ab. Wäh rend der Therapie mit Vitamin B₆, Vitamin B₁₂, Methionin, Thymin und seinen Derivaten, 5-Methylcytosin und seinen De rivaten und/oder einem pharmazeutisch annehmbaren Salz da von können gleichzeitig Penicillin G und/oder pharma zeutisch annehmbare Salze davon mit verabreicht werden. Je nach Art der Erkrankung ist es zweckmäßig, gleichzeitig zu den Verbindungen Vitamin B₆, Vitamin B₁₂ und Methionin, Thymin und seinen Derivaten, 5-Methylcytosin und seinen De rivaten und/oder pharmazeutisch annehmbaren Salzen davon Penicillin G zu verabreichen.

Die erfindungsgemäßen Arzneimittel bzw. die erfindungsgemäß verwendeten Arzneimittel können in an sich bekannter Weise unter Verwendung von einem oder mehreren physiologisch an nehmbaren Trägern oder Arzneimittelverdünnungsmitteln for muliert werden. Präparate für die Verabreichung auf oralem Weg sind bevorzugt. Beispielsweise können Tabletten wie oben ausgeführt die Verbindungen Vitamin B₆, Vitamin B₁₂ und Methionin, Thymin, Ribothymidin, Desoxythymidin, 5-Me thylcytosin, 5-Methyldesoxycytidin und pharmazeutisch an nehmbare Salze davon und Penicillin G und pharmazeutisch annehmbare Salze davon getrennt enthalten oder sie können beliebige Kombinationen aus den obigen Verbindungen ent halten. Bevorzugt liegt das Arzneimittel in Einheitsdosis form vor.

Präparate für die orale Verwendung, wie Tabletten und Kap seln, können nach an sich bekannten Verfahren mit pharma zeutisch annehmbaren Verdünnungsmitteln, wie Bindemitteln (beispielsweise vorgelatinisierte Maisstärke, Polyvinylpyr rolidon oder Hydroxypropylmethylcellulose); Füllstoffen (beispielsweise Lactose, mikrokristalline Cellulose oder Calciumhydrogenphosphat); Schmiermitteln (beispielsweise Magnesiumstearat, Talk oder Siliciumdioxid); Desintegra tionsmitteln (beispielsweise Kartoffelstärke oder Natrium stärkeglykolat) oder Benetzungsmitteln (beispielsweise Na triumlaurylsulfat), hergestellt werden. Tabletten können nach an sich gut bekannten Verfahren beschichtet werden.

Flüssige Präparationen für die orale Verabreichung können in Form von beispielsweise Lösungen, Sirupen oder Suspen sionen vorliegen, oder sie können als Trockenprodukt für die Rekonstitution mit Wasser oder einem geeigneten anderen Träger vor der Verwendung vorliegen. Solche flüssigen Prä parationen können nach an sich bekannten Verfahren mit pharmazeutisch annehmbaren Zusatzstoffen, wie Suspensions mitteln (Sorbitsirup, Cellulosederivate oder hydrierte ge nießbare Fette); Emulgiermitteln (beispielsweise Lecithin oder Acacia); nichtwäßrigen Trägern (beispielsweise Man delöl, ölige Ester, Ethylalkohol oder fraktionierte Pflan zenöle) und Konservierungsstoffen (beispielsweise Methyl- oder Propyl-p-hydroxy-benzoaten oder Sorbinsäure), herge stellt werden. Die Präparationen können ebenfalls Puffer salze, Geschmacksmittel, Farbstoffe und Süßmittel, je nach Bedarf, enthalten.

Zubereitungen für die orale Verabreichung können geeigne terweise so formuliert sein, daß eine kontrollierte Frei gabe der aktiven Bestandteile erfolgt.

Für die parenterale Verabreichung können die Zubereitungen in Form einer für die Bolus-Injektion oder kontinuierliche Infusion geeigneten Form vorliegen. Die Zubereitungen für die Injektion können in Dosiseinheitsform, beispielsweise in Ampullen, oder in Behältern mit mehreren Dosiseinheiten mit einem zugegebenen Konservierungsstoff vorliegen. Die Präparate können in Form von Suspensionen, Lösungen oder Emulsionen in öligen oder wäßrigen Trägern vorliegen, und sie können Formulierungshilfsstoffe, wie Suspensions-, Sta bilisierungs- und/oder Dispersionsmittel, enthalten. Alter nativ können die aktiven Bestandteile in Pulverform für die Rekonstitution mit einem geeigneten Träger, beispielsweise sterilem pyrogenfreien Wasser, vor der Verwendung vorlie gen.

Die Nucleotide der Thymin- und der m⁵-Cytosinreihe müssen in einer zellmembrangängigen Form verabreicht werden, z. B. in Lecithinliposomen verpackt.

Für die rektale Verabreichung können die Zubereitungen als Suppositorien oder als Retentions-Klistiere vorliegen, bei spielsweise als solche, welche an sich bekannte Supposito rien-Grundstoffe, wie Kakaobutter oder andere Glyceride, enthalten.

Die erfindungsgemäßen bzw. erfindungsgemäß verwendeten pharmazeutischen Arzneimittel können nach an sich bekannten Verfahren, die in der pharmazeutischen Industrie gut be kannt sind, hergestellt werden.

Beispielsweise können die erfindungsgemäßen bzw. erfin dungsgemäß verwendeten Arzneimittel oder eines ihrer Salze gegebenenfalls mit geeigneten Verdünnungsmitteln vermischt werden. Die Tabletten können beispielsweise durch direkte Verpressung eines solchen Gemisches hergestellt werden. Kapseln können hergestellt werden, indem das Gemisch zusam men mit geeigneten Verdünnungsmitteln in Gelatinekapseln unter Verwendung einer geeigneten Füllmaschine eingefüllt wird. Formulierungen mit kontrollierter Freigabe für die orale oder rektale Verabreichung können in an sich bekann ter Weise zubereitet werden, wie es für Formen mit kontrol lierter Freigabe bzw. verzögerter Freigabe bekannt ist.

Die erfindungsgemäßen bzw. erfindungsgemäß verwendeten Arz neimittel können gegebenenfalls in einer Mehrfachpackung oder einer Abgabevorrichtung vorliegen, welche eine oder mehrere Dosiseinheitsformen, die die aktiven Bestandteile enthalten, enthält. Die Packungen können beispielsweise Me tall- oder Kunststoffolie enthalten, wie eine Blister packung bzw. Durchsteckpackung. Die Packung oder die Ab gabevorrichtung kann Bedienungsanleitungen bzw. Anleitungen für die Verabreichung enthalten. Wenn die Verbindungen Vi tamin B₆, Vitamin B₁₂, Methionin, Thymin und seine Deri vate, 5-Methylcytosin und seine Derivate und Penicillin G oder jeweils eines ihrer pharmazeutisch annehmbaren Salze als getrennten Präparate verabreicht werden, können diese beispielsweise in Form einer Mehrfachpackung bzw. Doppel packung vorliegen.

Claims

1. Arzneimittel, dadurch gekennzeich net, daß es mindestens eine Verbindung aus der Gruppe Methionin, Vitamin B₁₂, Vitamin B₆, Thymin, 5-Methylcytosin und pharmazeutisch annehmbare Salze davon zusammen mit Pe nicillin G und/oder einem pharmazeutisch annehmbaren Salz davon sowie übliche Träger und/oder Verdünnungsmittel ent hält.

2. Arzneimittel nach Anspruch 1, dadurch ge kennzeichnet, daß es in Dosiseinheitsform vorliegt, die pro Dosiseinheit 0,5 bis 4 g Methionin, 0,1 bis 20 mg Vitamin B₁₂ und 10 mg bis 1200 mg Vitamin B₆, Thymin und seine Derivate 0,1 bis 160 mMol, 5-Methylcytosin und seine Derivate 0,1 bis 160 mMol oder ein pharmazeutisch annehmbares Salz davon enthält.

3. Arzneimittel nach mindestens einem der Ansprüche 1 oder 2, dadurch gekennzeichnet, daß es in Dosiseinheitsform vorliegt, die pro Dosiseinheit 5 bis 80 Millionen Einheiten Penicillin G und/oder ein pharmazeu tisch annehmbares Salz davon enthält.

4. Arzneimittel nach mindestens einem der Ansprüche 1 bis 3, dadurch gekennzeichnet, daß es in einer für die orale Verabreichung geeigneten Form vor liegt.

5. Arzneimittel nach mindestens einem der Ansprüche 1 bis 3, dadurch gekennzeichnet, daß es in einer für die parenterale Verabreichung geeigneten Form vorliegt.

6. Verwendung von mindestens einer Verbindung aus der Gruppe Methionin, Vitamin B₁₂ und Vitamin B₆, Thymin, 5-Methylcytosin und eines pharmazeutisch annehmbaren Salzes davon zusammen mit Penicillin G und/oder einem pharmazeu tisch annehmbaren Salz davon zur Behandlung und/oder Pro phylaxe von Störungen des Folat-Stoffwechsels, wobei die Verwendung von Verbindungen aus der Gruppe Methionin, Vita min B₁₂, Vitamin B₆, Thymin, 5-Methylcytosin und eines pharmazeutisch annehmbaren Salzes davon gleichzeitig, ge trennt oder zeitlich abgestuft mit der Verwendung von Peni cillin G und/oder eines pharmazeutisch annehmbaren Salzes davon erfolgen kann.

7. Verwendung nach Anspruch 6 zur Behandlung und/ oder Prophylaxe von AIDS und Aids-Related-Complex (ARC), Syphilis, Chronic-Immuno-Deficiency-Syndrome (CIDS) bzw. Chronic-Fatigue-Syndrome (CFS) und multipler Sklerose (MS).

8. Verwendung nach Anspruch 6 oder 7, dadurch gekennzeichnet, daß das Arzneimittel in Do siseinheitsform vorliegt, die 10 mg bis 1200 mg Vitamin B₆, 0,1 bis 20 mg Vitamin B₁₂, 0,5 bis 4 g Methionin, Thymin und seine Derivate 0,1 bis 160 mMol, 5-Methylcytosin und seine Derivate 0,1 bis 160 mMol und 5 bis 80 Millionen Ein heiten Penicillin G pro Dosiseinheit oder jeweils ein phar mazeutisch annehmbares Salz davon enthält.

9. Verwendung nach mindestens einem der Ansprüche 6 bis 8, dadurch gekennzeichnet, daß die Verbindungen der Gruppe Methionin, Vitamin B₁₂ und Vitamin B₆, Thymin, 5-Methylcytosin und deren Nucleoside und phar mazeutisch annehmbare Salze davon in oral verabreichbarer Form und Penicillin G, Thymin- und 5-Methylcytosinnucleoti de und/oder ein pharmazeutisch annehmbares Salz davon in parenteral verabreichbarer Form vorliegen.

10. Mehrfachpackung, dadurch gekennzeichnet, daß sie getrennte Dosiseinheitenn aus mindestens einer Verbindung der Gruppe Methionin, Vitamin B₁₂, Vitamin B₆, Thymin und seine Derivate, 5-Methylcytosin und seine Derivate und pharmazeutisch annehmbare Salze da von zusammen mit Penicillin G und/oder einem pharmazeutisch annehmbaren Salz davon jeweils zusammen mit üblichen Trä gern und/oder Verdünnungsmitteln enthält.