DE3743136A1 - Zell- und gewebekultursubstrate zur in vitro kultivierung von eukaryontischen zellen - Google Patents
Zell- und gewebekultursubstrate zur in vitro kultivierung von eukaryontischen zellenInfo
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Description
Die Erfindung betrifft Zell- und Gewebekultursubstrate zur
in vitro Kultivierung von eukaryontischen Zellen gemäß dem
Oberbegriff des Patentanspruchs 1.
Die in vitro Kultivierung von pflanzlichen und tierischen
eukaryontischen Zellen in Form von Zell- und Gewebekulturen
ist bekannt. Siehe hierzu beispielsweise: W. B. Jacoby and
I. H. Pastan (eds.): Cell Culture, Methods in Enzymology
(S. P. Colowick and N. D. Kaplan (eds.) Vol. LVIII, Academic
Press, New York, 1979 sowie: Barnes, D. W., Sirbasku, D. A.
and Sato, G. H.: Cell Culture Methods for Molecular and Cell
Biology, Vol. 1-4, Liss, New York, 1984 sowie: Pflanzliche
Zellkulturen und ihre Bedeutung für Forschung und Anwendung,
herausgegeben vom Bundesministerium für Forschung und Technologie,
Bonn, o. J. - einschließlich der jeweils zitierten
Literaturstellen.
Der größte Teil der in vitro kultivierbaren eukaryontischen
Zellen, die sogenannten verankerungspflichtigen Zellen, benötigen
sogenannte Zell- und Gewebekultursubstrate als Anhaftungs-
und Wachstumsunterlage, siehe hierzu die oben
genannte Literatur bzw. auch: Lindl, T. und Bauer, J.: Zell-
und Gewebekultur, Fischer, Stuttgart (1987).
Derartige Zell- und Gewebekultursubstrate sind bekannt und
als Roux bottles, Petrischalen, roller bottles, Microtiterplatten
(Klonierungsplatten) und sogenannte "microcarrier
beads" ausgebildet. Siehe hierzu beispielsweise die aktuellen
Kataloge der Fa. Flow Laboratories GmbH., Meckenheim,
Fa. Greiner, Nürtingen oder Fa. Nunc, Wiesbaden.
Die Oberflächeneigenschaften, wie Oberflächenladung (sdichte),
Hydratisierung und das Vorhandensein von funktionellen Gruppen,
sind bei den als Zell- und Gewebekultursubstrate eingesetzten
Materialien von besonderer Bedeutung und Gegenstand
wissenschaftlicher Diskussion und Forschung, siehe hierzu
beispielsweise: Rauvala, H., Trends in Biochemistry Science,
7, 323-325 (1983) und Barngrover, Debra: "Substrata for
Anchorage-dependent Cells" in Thilly, W. G. (ed.): Mammalian
Cell Technology, Butterworths, Boston, London (1986), pp. 131-149
und die hierin zitierten Referenzen.
So muß das üblicherweise für Zell- und Gewebekultursubstrate
eingesetzte Material Polystyrol beispielsweise durch Plasmabehandlung
(Radiofrequenz-Zerstäubung) oder durch ionisierende
Bestrahlung aktiviert werden, um in sogenannter TC-
Qualität ("tissue culture" - Qualität) als Zell- und Gewebekultursubstrate
eingesetzt werden zu können, siehe hierzu:
Lee, H. B. et al.: Surface Characteristics of Tissue Culture
Dishes and Corona Treated Polystyrene in: Tranactions of the
Society For Biomaterials, 13th Annual Meeting, p. 160 (1987).
Andere bekannte Verfahren, die Zelladhärenz und das Zellwachstum
auf Oberflächen von Materialien, die als Zell- und Gewebekultursubstrate
eingesetzt werden, zu fördern, ist die Beschichtung
dieser Oberflächen mit Kollagen, Laminin, Lysin,
Heparin und extrazellulärer Matrix (ECM), siehe hierzu ebenfalls:
Barngrover Debra: "Substrata for Anchorage-dependent
Cells" in Thilly, W. G. (ed.): Mammalian Cell Technology,
Butterworths, Boston, London (1986), pp. 131-149 und die
hierin zitierten Referenzen.
Aufgrund der Vielfalt der verschiedenen Zellarten und Zelltypen
in vivo ist es auch ohne weiteres verständlich, daß
sich bisher noch kein als Zell- und Gewebekultursubstrat
eingesetztes Material bzw. eine Methode zur Behandlung dieser
Materialoberfläche als überlegen erwiesen hat.
Die kommerziell reichlich erhältlichen plasmabehandelten
Zell- und Gewebekultursubstrate eignen sich in der Regel nur
zur Langzeitkultivierung sogenannter etablierter Zellinien.
Siehe hierzu beispielsweise: Neumeier, R.: "Zell-Substrat-
Adhäsion und Wachstumskontrolle in vitro" in Maurer, H. R.:
Zellkultur - Methoden, Arbeitshandbuch des vom 7. bis 9. Oktober
1987 abgehaltenen Zellkulturkurses, Institut für Pharmazie
der FU Berlin (1987), pp. 38 und 39.
Bei der Beschichtung von Substratoberflächen mit Fibronectin,
Laminin, Heparin, ECM etc. ist von Nachteil, daß diese Substanzen
aufgrund ihrer Molekülgröße bzw. ihrer Zusammensetzung
(ECM) physikalisch-chemisch nicht eindeutig charakterisiert
sind, eine starke Chargenvariabilität aufweisen und dadurch
die Bedingungen der Zellkultivierung häufig nicht reproduzierbar
sind.
Aufgabe der Erfindung ist es, an und für sich bekannte, aber
für Zellkulturzwecke in dieser Form ungeeignete synthetische
Materialien, bevorzugt solche, die aus mindestens einem aromatischen
Momomeren synthetisiert worden sind oder arylderivatisierte
makromolekulare Verbindungen, insbesondere wenn
diese Materialien bzw. Verbindungen in Form von Folien, Kügelchen,
Fasern, Roux bottles, Klonierungsplatten, roller
bottles, Röhrchen oder anderen für Zell- und Gewebekulturzwecke
geeigneten Ausbildungen vorliegen, als Zell- und Gewebekultursubstrate
mit physikalisch-chemisch definierten
Substratoberflächen in bekannter Art und Weise einsetzen zu
können. Dies bedeutet wiederum, daß Ladungsträger und/oder
zelladhärenzspezifische Kohlenhydrate unter Zellkulturbedingungen
auf den Oberflächen dieser synthetischen Materialien
bzw. makromolekularen Verbindungen fest verankert sein
müssen.
Die Aufgabe wird, wie aus Anspruch 1 ersichtlich, dadurch
gelöst, daß man als erfindungsgemäße Zell- und Gewebekultursubstrate
synthetische Materialien oder arylderivatisierte
makromolekulare Verbindungen einsetzt, an deren Oberflächen
Verbindungen der allgemeinen Formel
wobei Z: P, N, S, O, Si oder C ist
wobei A: Schwefel, Sauerstoff, Disulfid (-S-S-), Methylen (-CH-) oder -NH- sein kann;
wobei:m und n gleich oder unterschiedlich sind und 0 bis 10, vorzugsweise 1 bis 5 sind;
wobei: Phe ein gegebenenfalls aryl-, alkyl-, alkenyl-, alkinyl-, carboxy-, carbamin-, halogen-, nitro-, hydroxi-, amino-, oxo-, acyl- oder cycloalkylsubstituierter aromatischer Rest;
wobei: R ein gegebenenfalls aryl-, carboxy-, carbamin-, halogen-, nitro-, hydroxi-, amino-, oxo-, acyl- oder cycloalkylsubstituierter Alkyl-, Alkenyl-, Alkinylrest mit 1 bis 4 Kohlenstoffatomen, Phe oder Wasserstoff ist;
wobei R′: Sauerstoff, Schwefel, R oder unterschiedlich R ist;
wobei X: Wasserstoff, eine Sulfon-, Sulfat-, Phosphatgruppe, quaternäre Ammoniumgruppe, amid- oder glykosidisch gebundene Zuckergruppe, sulfat- oder phosphatester-gebundene aminierte, phosphorilierte oder acetylierte Zuckergruppe ist, adsorbiert ist bzw. sind.
wobei A: Schwefel, Sauerstoff, Disulfid (-S-S-), Methylen (-CH-) oder -NH- sein kann;
wobei:m und n gleich oder unterschiedlich sind und 0 bis 10, vorzugsweise 1 bis 5 sind;
wobei: Phe ein gegebenenfalls aryl-, alkyl-, alkenyl-, alkinyl-, carboxy-, carbamin-, halogen-, nitro-, hydroxi-, amino-, oxo-, acyl- oder cycloalkylsubstituierter aromatischer Rest;
wobei: R ein gegebenenfalls aryl-, carboxy-, carbamin-, halogen-, nitro-, hydroxi-, amino-, oxo-, acyl- oder cycloalkylsubstituierter Alkyl-, Alkenyl-, Alkinylrest mit 1 bis 4 Kohlenstoffatomen, Phe oder Wasserstoff ist;
wobei R′: Sauerstoff, Schwefel, R oder unterschiedlich R ist;
wobei X: Wasserstoff, eine Sulfon-, Sulfat-, Phosphatgruppe, quaternäre Ammoniumgruppe, amid- oder glykosidisch gebundene Zuckergruppe, sulfat- oder phosphatester-gebundene aminierte, phosphorilierte oder acetylierte Zuckergruppe ist, adsorbiert ist bzw. sind.
Diese Zell- und Gewebekultursubstrate sind dadurch herstellbar,
daß man synthetische Materialien, insbesondere wenn sie
aus mindestens einem aromatischen Monomeren synthetisiert
worden sind, oder arylderivatisierten makromolekularen Verbindungen,
insbesondere wenn sie diese Materialien bzw. Verbindungen
in Form von Folien, Kügelchen, Fasern, Roux bottles,
Klonierungsplatten, roller bottles, Röhrchen oder anderen
für Zell- und Gewebekulturzwecke geeigneten Ausbildungen
vorliegen, mit einer Lösung, in der eine oder mehrere der
mit der vorstehenden allgemeinen Formel beschriebenen aromatischen
Verbindung bzw. Verbindungen gelöst ist bzw. sind,
in innigen Kontakt bringt und anschließend das Lösungsmittel
wieder vollständig entfernt.
Synthetische Materialien, die aus mindestens einem aromatischen
Monomeren synthetisiert worden sind, und die in für
Zell- und Gewebekultur geeigneten Ausbildungen vorliegen,
sind beispielsweise als Polystyrol oder die Copolymerisate
des Styrols, Polycarbonate, Polyalkylenterephthalate, Polyvinylcarbazol,
Polyphenylenoxid, Polysulfon, Polyethersulfon,
Polyarylimid, Polybenzimidazol, Polybenzoxacindion, Polyphenylen,
Polyphenylensulfid, Poly-p-Xylylen, poly(p-Phenylen-)-
Terephthalamid etc. bekannt.
Arylderivatisierte makromolekulare Verbindungen, die aufgrund
ihrer Ausbildung als Zell- und Gewebekultursubstrate
einsetztbar sind, sind bekannt: beispielsweise tritylierte
Agarosekügelchen ("beads") aus der US-PS 43 79 843 und dem
Fachmann geläufig.
Im folgenden werden die Begriffe "makromolekulare Verbindungen"
bzw. "arylderivatisierte makromolekulare Verbindungen"
näher erläutert, da sie Grundlage der vielfältigen Ausgestaltungsmöglichkeiten
dieser Erfindung sind.
Der Begriff makromolekulare Verbindung ist in : Elias, H.-G.:
Mega Molecules, Springer, Berlin, Heidelberg, London (1987)
eingehend dargestellt. Bevorzugt, aber ohne daß daraus eine
Limitierung abzuleiten wäre, werden als makromolekulare Verbindungen
eingesetzt: Verbindungen aus der Stoffklasse der
Polysaccharide, wie Stärke, Amylopectin, Agar-Agar, Agarose,
Dextran oder Cellulose (Sägestaub oder Baumwoll-Linters)
oder aus der Stoffklasse der wasserlöslichen Kunststoffe,
wie Polyvinylalkohol, Polyvinylether, Polyvinylester oder
Acrylpolymerisate oder aus der Stoffklasse der Siliziumverbindungen,
wie Glas, Quarzglas, Bentonit, Kieselgur, Blähton
oder Siloxane.
All diese Verbindungen zeichnen sich zum einen dadurch aus,
daß sie problemlos in einer Vielzahl von für Zell- und Gewebekulturzwecke
geeigneten Ausbildungsformen - z. B. für Ionen
und Proteine, permeable Folien oder Kügelchen mit einer um
1 g/cm³ liegenden Dichte - leicht und preiswert erhältlich
sind, zum anderen dadurch, daß sie durch Hydroxi-(Silanol-)-
Gruppen repräsentierte funktionelle reaktive Gruppen aufweisen,
die ihrerseits Voraussetzungen dafür sind, daß man diese
Verbindungen in eine arylderivatisierte Form überführen kann,
um sie als Ausgangsmaterial für die Herstellung der erfindungsgemäßen
Zell- und Gewebekultursubstrate einsetzen zu können.
Diese Gruppen können in bekannter Art und Weise, siehe beispielsweise
Greene, T. W.: Protecting Groups in Organis Chemistry,
Wiley-Interscience, New York (1981) sowie die dort
aufgeführten Zitate, mit reaktiven Arylverbindungen derart
umgesetzt werden, daß das Umsetzungsprodukt aromatischen
Charakter bekommt. Als nicht einschränkende Beispiele für
reaktive Arylverbindungen, mit denen die funktionellen reaktiven
Gruppen der makromolekularen Verbindungen umgesetzt
sein können, seien genannt: Benzoesäureanhydrid, Benzoylchlorid,
3-Benzoyl-propionsäure, Benzylbromid, Benzylchlorid,
Benzyl-chlorformiat, Bromtriphenylmethan, tert.-Butyldiphenylchlorsilan,
4-Chlorbenzylalkohol, 9-Chlor-9-phenylxanthen,
Chlortriphenylmethan, 4,4′-Dimethoxytritylchlorid, 1,3-Dimethyl-
1,1,3,3-tetra-phenyldisilazan, Dimethyltritylbromsilan,
2,4-Dinitro-benzolsulfenylchlorid, Diphenylmethylchlorsilan,
1,3-Diphenyl-1,1,3,3-tetramethyldisilazan, 4-Methoxy-benzylalkohol,
4-Methoxytrityl-chlorid, 1-Naphthylisocyanat,
2-Naphthylmercaptan, Neokupferron, 4-Nitro-benzoylchlorid,
4-Nitrophenyl-chlorformiat, Phenyl-chlorformiat, 2,2,2-Trichlorethyl-
chlorformiat, 2-Triphenylhosphinoethyl-chlorformiatchlorid,
Phenyldimethylchlorsilan, Phenylisocyanat,
Toluol-3,4-dithiol, Tosylchlorid, Toluol-4-sulfonamid,
Tosylhydrazid, Trimethylsilyl-benzolsulfonat, Triphenylsilyl-
benzolsulfonat, 2-Trimethylsilylethyl-p-nitrophenylcarbonat,
Triphenylbrommethan, Triphenylchlormethan,
Triphenylchlorsilan, Tripyridinium-tetrafluoroborat, Phenylisothiocyanat,
Triphenylbromsilan, Benzylhalogenide,
Phenylhalogenide und andere reaktive aromatische Verbindungen.
Bei der erfindungsgemäßen Herstellung der Zell- und Gewebekultursubstrate
werden als arylderivatisierte makromolekulare
Verbindungen bevorzugt phenylen-, phenyl-, benzal-,
benzyl-, phenylsilyl-, benzalsilyl-, benzylsilyl-, triphenylmethyl-,
triphenylsilyl-, diphenylmethyl- oder diphenylsilyl-
derivatisierte Polysaccharide, wasserlösliche Kunststoffe
oder Siliziumverbindungen eingesetzt.
Im folgenden werden nicht einschränkende Beispiele von bevorzugt
für die Herstellung der Zell- und Gewebekultursubstrate
einsetzbaren arylderivatisierten makromolekularen
Verbindungen genannt: triphenyl-derivatisierte Cellulose
(z. B. aus Triphenylbrommethan und Sägemehl) oder phenylderivatisierte
Agarose (z. B. aus Phenylhydrazin und/oder
Benzylchlorid und Agarosekügelchen ("Agarose-Beads") oder
diphenylderivatisierter Polyvinylalkohol (z. B. aus Diphenylmethylchlorsilan
und Polyvinylalkohol) oder triphenylderivatisiertes
Aluminiumhydroxid (z. B. aus Triphenylchlorsilan
und Aluminiumhydroxid-Pulver) oder phenyldimethyl(silyl)-
derivatisiertes Glas (beispielsweise als Umsetzungsprodukt
von Phenyldimethylchlorsilan und/oder Diphenyldichlorsilan
mit Glaskügelchen), phenyl(silyl)-derivatisierter
Blähton (z. B. aus Phenyltrichlorsilan und gemahlenem
Blähton) oder eine Folie aus poly(Dimethyl-Diphenyl)-
Siloxan (erhalten durch Copolymerisation von polymerisierbarem
Dimethylsiloxan und Diphenylsiloxan) sowie ähnliche
durch Arylderivatisierung aromatisierbare makromolekulare
Verbindungen in Zell- und Gewebekultursubstrat geeigneter
Ausbildung.
Als Faustregel gilt, daß die Arylderivatisierung der makromolekularen
Verbindungen so sein muß, daß die arylderivatisierten
Verbindungen hydrophober, also mit Wasser schlechter
benetzbar sein müssen, als die nicht arylderivatisierten
Polysaccharide, wasserlöslichen Kunststoffe oder Siliziumverbindungen,
wenn diese arylderivatisierten makromolekularen
Verbindungen zur erfindungsgemäßen Herstellung der
Zell- und Gewebekultursubstrate eingesetzt werden sollen.
Zur erfindungsgemäßen Herstellung der Zell- und Gewebekultursubstrate
werden die oben näher beschriebenen synthetischen
Materialien oder die arylderivatisierten makromolekularen
Verbindungen mit einer Lösung, in der eine oder
mehrere aromatische Verbindungen der allgemeinen Formel
wobei Z: P, N, S, O, Si oder C ist;
wobei A: Schwefel, Sauerstoff, Disulfid (-S-S-), Methylen (-CH-) oder -NH- sein kann;
wobei: m und n gleich oder unterschiedlich sind und 0 bis 10, vorzugsweise 1 bis 5 sind;
wobei: Phe ein gegebenenfalls aryl-, alkyl-, alkenyl-, alkinyl-, carboxy-, carbamin-, halogen-, nitro-, hydroxi-, amino-, -oxo-, acyl- oder cycloalkylsubstituierter aromatischer Rest;
wobei: R ein gegebenenfalls aryl-, carboxy-, carbamin, halogen-, nitro-, hydroxi-, amino-, oxo-, acyl- oder cycloalkylsubstituierter Alkyl-, Alkenyl-, Alkinylrest mit 1 bis 4 Kohlenstoffatomen, Phe oder Wasserstoff ist;
wobei R′: Sauerstoff, Schwefel, R oder unterschiedlich R ist,
wobei X: Wasserstoff, eine Sulfon-, Sulfat-, Phosphatgruppe, quaternäre Ammoniumgruppe, amid- oder glykosidisch gebundene Zuckergruppe, sulfat- oder phosphatester-gebundene aminierte, phoshorilierte oder acetylierte Zuckergruppe ist,
gelöst sind, in innigen Kontakt gebracht und anschließend das Lösungsmittel wieder vollständig entfernt.
wobei A: Schwefel, Sauerstoff, Disulfid (-S-S-), Methylen (-CH-) oder -NH- sein kann;
wobei: m und n gleich oder unterschiedlich sind und 0 bis 10, vorzugsweise 1 bis 5 sind;
wobei: Phe ein gegebenenfalls aryl-, alkyl-, alkenyl-, alkinyl-, carboxy-, carbamin-, halogen-, nitro-, hydroxi-, amino-, -oxo-, acyl- oder cycloalkylsubstituierter aromatischer Rest;
wobei: R ein gegebenenfalls aryl-, carboxy-, carbamin, halogen-, nitro-, hydroxi-, amino-, oxo-, acyl- oder cycloalkylsubstituierter Alkyl-, Alkenyl-, Alkinylrest mit 1 bis 4 Kohlenstoffatomen, Phe oder Wasserstoff ist;
wobei R′: Sauerstoff, Schwefel, R oder unterschiedlich R ist,
wobei X: Wasserstoff, eine Sulfon-, Sulfat-, Phosphatgruppe, quaternäre Ammoniumgruppe, amid- oder glykosidisch gebundene Zuckergruppe, sulfat- oder phosphatester-gebundene aminierte, phoshorilierte oder acetylierte Zuckergruppe ist,
gelöst sind, in innigen Kontakt gebracht und anschließend das Lösungsmittel wieder vollständig entfernt.
Bevorzugt werden Phenyl-, Phenoxy-, Thiophenyl-, (Phenthio-),
Benzal-, Benzyl-, Phenylsilyl-, Benzalsilyl-, Benzylsilyl-,
Diphenylmethyl-, Diphenylsilyl-, Triphenyl-, Triphenylmethyl-
oder Triphenylsilylverbindungen gemäß obenstehender
allgemeiner Formel in Lösung gebracht.
Die Auswahl der Verbindungen richtet sich danach, welche
Art Ausgangsmaterial verwendet wird: bei der Verwendung
von o. g. synthetischen Materialien bzw. bei diphenyl-, diphenylsilyl-,
triphenylmethyl- oder triphenylsilylderivatisierten
makromolekularen Verbindungen werden Phenyl-, Phenoxy-,
Benzal-, Benzyl-, Phenylsilyl-, Benzalsilyl-, Benzylsilyl-,
Diphenylmethyl-, Diphenylsilyl-, Triphenyl-, Triphenylmethyl-
oder Triphenylsilylverbindungen gemäß o. g.
Formel in einem geeigneten Lösungsmittel bzw. Lösungsmittelgemisch
gelöst eingesetzt. Wenn man hingegen phenyl-,
benzal-, benzyl-, phenylsilyl-, benzalsilyl- oder benzylsilylderivatisierte
makromolekulare Verbindungen als Ausgangsmaterialien
verwendet, werden Lösungen eingesetzt, in
denen Phenyl-, Phenoxy-, Benzal-, Benzyl-, Phenylsilyl-,
Benzalsilyl-, Benzylsilylverbindungen gelöst sind.
Im folgenden sind nicht limitierende Beispiele für Phenyl-,
Phenoxy-, Thiophenyl-, Benzal-, Benzyl-, Phenylsilyl-,
Benzalsilyl- oder Benzylsilylverbindungen angeführt, die
Bestandteil der Lösungen sind, mit denen die synthetischen
Materialien bzw. arylderivatisierten makromolekularen Verbindungen
in innigen Kontakt gebracht werden: Phenol, Anilin,
2-Phenyl-ethylalkohol, 1-Phenyl-ethylamin, 2-Phenylethylamin,
Phenylethylenglykol, 1-Phenyl-ethanol, 2-Anilino-
ethanol, 2-Phenylethanthiol, Phenylalanin; Tryptophan,
Phenylbernsteinsäure, Benzoesäure, Biphenyl-4-methanol,
Phenylborsäure, Phenyl-brenztraubensäure, 4-Phenyl-buttersäure,
N-Phenylharnstoff, 4-Phenyl-2-butylamin, 4-Aminophenylessigsäure,
Aminophenol, N-Phenyl-diethanolamin, Phenylendiamin,
Benzodimethanol, Phenyl-β-D-galactopyranosid,
Phenyl-β-D-glucopyranosid, N-Phenylglycin, Phenylglycinol,
Phenylglyoxylsäure, Phenylhydrazin(hydrochlorid), Phenylharnstoff,
O-Phenyl-hydroxylamin-hydrochlorid, Phenylmalonsäure,
Thiophenol, Phenylmercaptoessigsäure, Amino-diphenylether,
3-Amino-2,3-dihydro-benzoesäure-hydrochlorid,
4-Phenyl-cyclohexanon, N-Phenyl-diethanolamin, Phenyl-dichlorphosphat,
Phenyl-dichlorphosphin. Phenyl-dimethylchlorsilan,
Phenylessigsäure, Phenylessigsäurechlorid,
Phenyl-formamid, Phenyl-methansulfonylchlorid, Phenylmilchsäure,
Phenylphosphinsäure, Phenylphosphonsäure, Phenyldichlorphosphat,
1-2-Phenoxy-glycin, 2-Phenoxy-alanin,
2-Phenoxy-essigsäure, 2-Phenoxy-essigsäureamid, Phenylpiperazin,
4-Benzylpiperidin, Phenylpropanolamin, Phenylpropiolsäure,
2-Phenyl-propionaldehyd, Phenyl-propylalkohol,
Phenyl-propylamin, Phenyl-propylbromid, Phenidon, Phenylsalicylat,
1-Phenyl-semicarbazid, Phenyl-dimethylsilanol,
Phenyl-dimethylsilylamin, Schwefelsäure-phenylester, Phosphorsäure-
phenylester, Kresole, Nitrophenole, Aminophenole,
Phenyltrimethylammoniumchlorid, Brenzcatechin, Resorcin,
Pyrimidine, 2-Phenoxy-ethanol, 4-Amino-diphenylether, 3-
Phenoxy-benzaldehyd, 4-Phenoxy-buttersäure, 4-Phenoxy-phenol,
3-Phenoxytoluol, Phenylacetaldehyd, 2,2-Dimethoxyethylenbenzol,
Hydrochinon, Pyrogallol, Phloroglucin, Eugenol,
Isoeugenol, Anethol, Vanillin, Thymol, Safrol, Saccharin,
aromatische Sulfonsäuren, Benzosulfonsäure, Phthalimid
oder ähnliche Verbindungen, sowie die Umsetzungsprodukte
von Benzoesäureanhydrid, Benzoylchlorid, 3-Benzoylpropionsäure,
Benzylbromid, Benzylchlorid, Benzyl-chlorformiat,
4-Chlor-benzylalkohol, 9-Chlor-9-phenylxanthen,
1,3-Dimethyl-1,1,3,3-tetra-phenyldisilazan, 2,4-Dinitrobenzolsulfenylchlorid,
Diphenylmethylchlorsilan, 1,3-Diphenyl-
1,1,3,3-tetramethyldisilazan, 4-Methoxy-benzylalkohol,
1-Naphthylisocyanat, 2-Naphthylmercaptan, Nokupferron,
4-Nitro-benzoylchlorid, 4-Nitrophenyl-chlorformiat, Phenylchlorformiat,
2,2,2-Trichlorethyl-chlorformiat, Phenyldimethylchlorsilan,
Phenylisocyanat, Toluol-3,4-dithiol,
Tosylchlorid, Toluol-4-sulfonamid, Tosylhydrazid, Trimethylsilyl-
benzolsulfonat, 2-Trimethylsilylethyl-p-nitrophenylcarbonat,
Phenylisothiocyanat, Triphenylbromsilan, Benzylhalogenide,
Phenylhalogenide und anderen reaktiven aromatischen
Verbindungen mit aminierten, phosphorilierten
und/oder acetylierten Zuckern oder Peptiden oder Proteinen.
Im folgenden sind nicht limitierende Beispiele für Diphenylmethyl-
oder Diphenylsilylverbindungen angeführt, die Bestandteil
der Lösungen sind, mit denen die synthetischen
Materialien bzw. arylderivatisierten makromolekularen Verbindungen
in innigen Kontakt gebracht werden: Schwefelsäure-
diphenylsilanester, Phosphorsäure-diphenylsilanester,
Diphenyldiaminsilan, Diphenyldialkoxysilan, Diphenyldihydroxisilan,
O-(Diphenylsilyl)dihydroxylamin, Diphenylsilyldimethoxysulfat,
Diphenylsilyl-diethanol, Diphenylsilyldipropylamin
oder ähnliche Verbindungen, sowie die Umsetzungsprodukte
von tert.-Butyldiphenylchlorsilan, Diphenylmethylchlorsilan,
1,3-Diphenyl-1,1,3,3-tetramethyldisilazan,
1-Naphthylisocyanat, 2-Naphthylmercaptan und anderen
reaktiven aromatischen Verbindungen mit aminierten, phosphorilierten
und/oder acetylierten Zuckern, oder Peptiden oder
Proteinen.
Im folgenden sind nicht limitierende Beispiele für Triphenyl-,
Triphenylmethyl- oder Triphenylsilylverbindungen angeführt,
die Bestandteil der Lösungen sind, mit denen die synthetischen
Materialien bzw. arylderivatisierten makromolekularen
Verbindungen in innigen Kontakt gebracht werden:
Triphenylamin, Triphenylphosphat, Triphenylphosphinoxid,
Triphenylphosphinsulfid, Triphenylphenylphosphin-dibromid,
Triphenylzinnchlorid, O-Tritylhydroxylamin, Triphenylmethan,
Triphenylmethanol, Triphenylmethanthiol, Triphenylsilan,
Triphenylsilanol, Triphenylsilylamin, O-Triphenylsilylhydroxylamin,
Triphenylsilylphosphat, N-Triphenylsilyl-glucosamin,
O-(Triphenylsilyl)-ethoxylamin, O-(Triphenylsilyl)-
propyl-l-β-galactopyranosid, O-Triphenylsilyl-glucosamin,
O-Triphenylsilyl-neuraminsäure, Triphenylsilyl-b-D,L-galactopyranosid,
Triphenylsilyl-β-D,L-glucopyranosid, Triphenyl-
β-D,L-mannopyranosid, Triphenylsilylsulfat, (Na-, K-
oder Li-Salz), Ester zwischen aminierten, phosphorilierten
und/oder acetylierten Zuckern mit Triphenylsilylsulfat oder
-phosphat, Etherverbindungen aus Triphenylchlorsilan oder
Triphenylbromsilan und phosphorilierten, aminierten und/oder
acetylierten Zuckern, Triphenylsilylethylamin, Triphenylsilyl-
essigsäure, Triphenylsilyl-buttersäureamid, Triphenylsilyl-
glycerin, Triphenylsilyl-ethylenglykol, Triphenylsilylpolypropylenglykol,
Triphenyl-silylsilanol, Triphenylsilylpropylsulfat
(Na-, K- oder Li-Salz) oder ähnliche Triphenylsilylverbindungen,
sowie die Umsetzungsprodukte von Bromtriphenylmethan,
Chlortriphenylmethan, 4,4′-Dimethoxytritylchlorid,
Dimethyltritylbromsilan, 4-Methoxytrityl-chlorid,
Neokupferron, 2-Triphenylhosphinoethyl-chlorformiatchlorid,
Triphenylsilyl-benzolsulfonat, Triphenylbrommethan, Triphenylchlormethan,
Triphenylchlorsilan, Tripyridiniumtetrafluoroborat,
Triphenylbromsilan und anderen reaktiven aromatischen
Verbindungen mit aminierten, phosphorilierten und/oder acetylierten
Zuckern oder Peptiden oder Proteinen.
Das Lösen derartiger Verbindungen, die alle der allgemeinen
Formel gemäß Anspruch 1 gehorchen, speziell der bevorzugten
Phenyl-, Phenoxy-, Thiophenyl-, (Phenthio-,) Benzal-, Benzyl-,
Phenylsilyl-, Benzalsilyl-, Benzylsilyl-, Diphenylmethyl-,
Diphenylsilyl-, Triphenyl-, Triphenylmethyl- oder
Triphenylsilylverbindungen in einem Lösungsmittel bzw. Lösungsmittelgemisch
stellt kein Problem dar und ist bekannt.
Für Triphenyl-, Triphenylmethyl-, Triphenylsilyl- oder evtl.
auch Diphenyl(silyl-)verbindungen kommen unpolare Lösungsmittel
wie Chloroform, Hexan, Methylenchlorid und Petrolether
in Frage. Diphenyl- oder Phenylverbindungen werden in hydorphilen
organischen Lösungsmitteln wie Methanol, Butanol,
Isopropanol und Aceton gelöst, ebenso wie in Mischungen
aus diesen Flüssigkeiten. Erforderlich können auch
wässerige Lösungsmittel verwendet werden, bzw. Bestandteil
eines zur Lösung der eingesetzten aromatischen Verbindungen
benötigten Lösungsmittelgemisches sein. Insgesamt unterliegt
die Auswahl der Lösungsmittel dabei drei Gesichtspunkten:
erstens dürfen sie das eingesetzte Ausgangsmaterial
nicht zersetzen, wie es beispielsweise der Fall wäre,
wenn man Materialien aus Polystyrol mit einer Triphenylsilylphosphatlösung
in Aceton in innigen Kontakt brächte,
zweitens müssen sie für die eingesetzten Verbindungen gemäß
der allgemeinen Formel gute Lösungsmittel sein und drittens
sollten die Lösungsmittel mit geringem Energieaufwand
leicht wieder zu entfernen sein, d. h. ihr Siedepunkt muß
niedrig, vorzugsweise unter 120°C liegen. Die Kriterien
sind aber durch gezieltes experimentelles Ausprobieren
leicht zu erfüllen.
Das in-innigen-Kontakt-Bringen der synthetischen Materialien
bzw. der arylderivatisierten makromolekularen Verbindungen
mit der Lösung, in der die aromatischen Verbindungen
gemäß der allgemeinen Formel von Anspruch 1 gelöst sind,
stellt, ebenso wie das vollständige Entfernen des Lösungsmittel(gemisches)
kein Problem dar: so suspendiert man partikelförmige
Ausgangsmaterialien, z. B. (Polystyrol-)-Kügelchen
("beads"), in der die eingesetzten Verbindungen enthaltenden
Lösung und entfernt das Lösungsmittel(gemisch)
mit Hilfe eines Rotationsverdampfers wieder vollständig.
Flächige Ausgangsmaterialien, z. B. Folien oder Petrischalen
werden mit der die eingesetzen aromatischen Verbindungen
enthaltenden Lösung besprüht, wobei man das Lösungsmittel(gemisch)
dann verdunsten läßt. Weiterhin können flächige
Ausgangsmaterialien durch einfaches Eintauchen in die Lösung
und anschließendes Herausziehen hergestellt werden. Ebenfalls
ist es möglich, die Ausgangsmaterialien in den jeweiligen
eingesetzten Lösungen bis zu ihrer Verwendung aufzubewahren.
Von Vorteil kann es sein, nach der makroskopischen
Entfernung des Lösungsmittels die nunmehr oberflächenmodifizierten
Materialien für ca. 10 Minuten auf Temperaturen
zwischen 60 und 100°C, je nach verwendetem Ausgangsmaterial
zu bringen.
Gegebenenfalls werden die Materialien, die mit den eingesetzten
Lösungen in innigen Kontakt gebracht worden sind,
kurz vor ihrem unmittelbaren Einsatz als Zell- und Gewebekultursubstrat
mit wässeriger Lösung gewaschen, um sie von
überschüssigem Adsorbat, das ist (sind) die Verbindung(en),
die in der eingesetzten Lösung gelöst ist (sind), zu befreien.
Die Wahl der Methode des in-innigen-Kontakt-Bringens
der Ausgangsmaterialien mit der eingesetzten Lösung ist
ebenso wie die vollständige Entfernung des Lösungsmittels
bzw. Lösungsmittelgemisches problemlos experimentell optimierbar.
Beim Entfernen des Lösungsmittel(gemisches) kommt es, zumindest
initial, - aufgrund hydrophober und van der Waal′scher
Kräfte - zu einer stabilen Adsorption der in dem Lösungsmittel(gemisch)
befindlichen, aromatischen Verbindungen gemäß
der allgemeinen Formel von Anspruch 1, an die synthetischen,
aus mindestens einem aromatischen Monomeren synthetisierten
Materialien oder die arylderivatisierten makromolekularen
Verbindungen. (Theoretisch besteht die Möglichkeit,
daß sich diese initial adsorptive, hydrophobe Bindung
im weiteren Verlauf zu einer echten kovalenten Bindung entwickelt,
was vor allem unter Bedingungen, wo das Mittel eingesetzt
wird, der Fall sein kann. Aus dieser Möglichkeit
soll aber auf keinen Fall eine Einschränkung der Erfindung
konstruiert werden können, wenn von anderer Seite gezeigt
werden kann, daß es sich um keine reinadsorptive Bindung
o. g. aromatischer Verbindungen an die synthetischen Materialien
oder an die arylderivatisierten makromolekularen Verbindungen
handelt, da die gestellte Aufgabe auf jeden Fall
gelöst wurde).
Es versteht sich, daß die mengenmäßige Zusammensetzung der
einzelnen eingesetzten, in einem Lösungsmittel(gemisch) gelösten
aromatischen Verbindungen gemäß Anspruch 1, für jede
zu kultivierende Zellinie jeweils experimentell ermittelt
werden muß, was dem Fachmann bei der Vielfalt der potentiell
kultivierbaren eu- und auch prokaryontischen Zellen verständlich
ist. Da die eingesetzten aromatischen Verbindungen bekannt
und physikalisch-chemisch gut charakterisiert sind,
ist auch dies nicht schwierig.
Die Kosten dieser Zell- und Gewebekultursubstrate sind gering.
Eine große Anzahl an unterschiedlichen Materialtypen,
Kunststoffe mit Benzolringen in der Molekülkette oder durch
einfache chemische Modifikation aromatisierte Naturstoffe,
stehen zur Verfügung. Die eingesetzten aromatischen Verbindungen,
die an diese Materialien adsorbiert werden, sind
hinsichtlich Ladung und Molekülstruktur bekannt. Durch Auswählen
der Ausgangsmaterialien und der aromatischen Verbindungen,
auf Basis von "trial and error", kann für nahezu
jeden Zelltyp, jede Zellinie die Oberfläche der Zell-
und Gewebekultursubstrate leicht "maßgeschneidert" werden.
1. Als Ausgangsmaterial wird eine aus Polystyrol bestehende
"Makroplatte für die Bakteriologie" mit sechs 35 mm im Durchmesser
messenden Vertiefungen (Fa. Greiner, Nürtingen) verwendet.
In diese Vertiefungen werden je 3 ml folgender Lösungen
eingefüllt:
- a) 2-Propanol (Fa. Fluka, Ulm) = Kontrolle
- b) 0,001% Phenylalanin in Wasser/2-Propanol (1 : 1, v/v)
- c) 0,001% Triphenylsilylsulfat in 2-Propanol
- d) 0,001% Triphenylmethanthiol in 2-Propanol
- e) 0,0001% Phenyl-β-D-galactopyranosid in Wasser
- f) eine Mischung in gleichen Teilen der Lösungen b) bis e).
Die jeweiligen Lösungsmittel werden durch Verdunstenlassen
bei Raumtemperatur bzw. gegebenenfalls mit Hilfe eines Föns
vollständig aus den Näpfen entfernt. Nach UV-Sterilisation
kann dann diese bakteriologische Makroplatte in üblicher
Weise als Zell- und Gewebekulturplatte eingesetzt werden.
2. Als synthetisches Ausgangsmaterial werden Divinyl-benzolvernetzte
Polystyrolkügelchen (XAD-4 bzw. XAD-2 der Firma
Fluka, Ulm, bzw. Biobeads SX-2 der Fa. BioRad, München) verwendet.
Jeweils 3 g dieser Kügelchen werden in 30 ml der
folgenden Lösungen, in einem Rotationsverdampfer-Rundkolben,
suspendiert:
- a) gesättigte Phenylalaninlösung in Wasser/Aceton (100 : 1 v/v)
- b) gesättigte Triphenylsilylsulfatlösung in Aceton
- c) gesättigte Triphenylmethanollösung in 2-Propanol
- d) gesättigte 2-Phenoxy-glycinlösung in Wasser/Aceton (75 : 25 v/v)
- e) 0,01% Phenyl-β-Glucopyranosidlösung in Wasser/Aceton (100 : 1 v/v)
- f) Mischung aus gleichen Volumina von a), b) und e).
Die Lösungsmittel(gemische) werden in einem Rotationsverdampfer
bei 70°C und ca. 350 mbar Unterdruck bis zur völligen
Trockenheit der Kügelchen entfernt. Die Kügelchen werden
anschließend durch Waschen in Ringerlösung von überschüssigem
Adsorbat befreit, im feuchten Zustand UV-sterilisiert
und als "microcarrier" in bekannter Art und Weise eingesetzt.
3. Verwendung von poly(p-Phenylen-)Terephthalamid (Kevlar (R))
als synthetisches Ausgangsmaterial.
Kevlar(R)-Fasern (Fa. DuPont, Düsseldorf) werden in folgenden Lösungen bis zum bestimmungsgemäßen Einsatz gelagert (Lagerungszeit Stunden bis Wochen):
Kevlar(R)-Fasern (Fa. DuPont, Düsseldorf) werden in folgenden Lösungen bis zum bestimmungsgemäßen Einsatz gelagert (Lagerungszeit Stunden bis Wochen):
- a) gesättigte 2-Phenoxy-alaninlösung in Wasser/Aceton (90 : 10 v/v)
- b) gesättigte Phenyldimethylsilylsulfatlösung in Aceton
- c) gesättigte Phenylalaninlösung in Wasser
- d) gesättigte Thiophenollösung in 5%iger wässerige Galactoselösung
- e) gesättigte Benzaldehydlösung in Wasser
- f) Mischung aus gleichen Volumina von a), c), d) und e).
Zur Verwendung als Zell- und Gewebekultursubstrat wird das
Material aus den jeweiligen Lösungen genommen, um überschüssiges
Adsorbat zu entfernen, kurz in Wasser getaucht, anschließend
UV-sterilisiert und in bekannter Art und Weise
eingesetzt.
4. Verwendung von Polyethylenterephthalat (Mylar(R)) als
synthetisches Ausgangsmaterial:
Mylar (R)-Folien (Fa. DuPont, Düsseldorf werden mit folgenden Lösungen besprüht.
Mylar (R)-Folien (Fa. DuPont, Düsseldorf werden mit folgenden Lösungen besprüht.
- a) gesättigte Phenylalaninlösung in Wasser
- b) gesättigte p-Toluylaldehydlösung in Wasser/Aceton (90 : 10 v/v)
- c) gesättigte 2-Phenylethylaminlösung in Wasser
- d) gesättigte 2-Amino-benzoesäurelösung in Wasser.
Nach vollständigem Trocknen werden die Folien bestimmungsgemäß
eingesetzt.
5. Verwendung von Polycarbonat (Makrofol (R)):
Makrofol (R)-Folie (Fa. Bayer, Leverkusen) wird mit den Lösungen 3a), 3c), 3e), 3d), 4b) und 4d) besprüht und nach dem Trocknen, d. h. Verdunsten der Lösungsmittel eingesetzt.
Makrofol (R)-Folie (Fa. Bayer, Leverkusen) wird mit den Lösungen 3a), 3c), 3e), 3d), 4b) und 4d) besprüht und nach dem Trocknen, d. h. Verdunsten der Lösungsmittel eingesetzt.
6. Verwendung eines Copolymerisats aus Diphenyl- und Dimethylsiloxan
(in Form einer sogenannten weichen Kontaktlinse)
als synthetisches Ausgangsmaterial:
Die Kontaktlinse (Fa. Bausch & Lomb, Rochester, USA) wird in folgenden Lösungen bis zu ihrer Verwendung als Zell- und Gewebekultursubstrat aufbewahrt (mehrere Stunden bis Tage):
Die Kontaktlinse (Fa. Bausch & Lomb, Rochester, USA) wird in folgenden Lösungen bis zu ihrer Verwendung als Zell- und Gewebekultursubstrat aufbewahrt (mehrere Stunden bis Tage):
- a) gesättigte Lösung von di-Natriumphenylphosphat in Wasser
- b) gesättigte Lösung von Phenyl-β-glucopyranosid in Wasser
- c) Mischung aus gleichen Volumina von a) und b).
Überschüssiges Adsorbat wird kurz vor Einsatz durch Eintauchen
in Wasser entfernt, das Material im feuchten Zustand
UV-sterilisiert.
7. Verwendung von diphenylsilylierten Glaskügelchen als Ausgangsmaterial:
Verwendet werden Glaskügelchen der Fa. Serva, Heidelberg, durchschnittlicher Durchmesser 125 bis 180 µm. Die Diphenylsilylierung der Glasoberfläche erfolgt mit Diphenyldichlorsilan in Tetrachlorkohlenstoff (je 1 Gramm Kügelchen mit jeweils 10 ml einer 5%igen Diphenyldichlorsilanlösung in Tetrachlorkohlenstoff, Reaktion unter ständigem Rühren bei 37°C über 24 Stunden, Abfiltration der Glaskügelchen, Waschen in Hexan, anschließend in Aceton und danach in Wasser).
Verwendet werden Glaskügelchen der Fa. Serva, Heidelberg, durchschnittlicher Durchmesser 125 bis 180 µm. Die Diphenylsilylierung der Glasoberfläche erfolgt mit Diphenyldichlorsilan in Tetrachlorkohlenstoff (je 1 Gramm Kügelchen mit jeweils 10 ml einer 5%igen Diphenyldichlorsilanlösung in Tetrachlorkohlenstoff, Reaktion unter ständigem Rühren bei 37°C über 24 Stunden, Abfiltration der Glaskügelchen, Waschen in Hexan, anschließend in Aceton und danach in Wasser).
3 g der arylderivatisierten Glaskügelchen werden in 30 ml
der folgenden Lösungen, in einem Rotationsverdampfer-Rundkolben,
gegeben:
- a) gesättigte Phenylalaninlösung in Wasser
- b) gesättigte Triphenylsilylaminlösung in 2-Propanol
- c) gesättigte Triphenylsilylsulfatlösung in Aceton
- d) gesättigte di-Natriumphenylphosphatlösung in Wasser
- e) gesättigte Benzoesäurelösung in 8%iger wässeriger Glucoselösung
- f) gesättigte di-Natriumphenylphosphatlösung in 8%iger wässeriger Sorbitlösung
- g) gesättigte Phenylmilchsäurelösung in Wasser
- h) Mischung aus gleichen Volumina von a), b), d) bis g).
Entfernung der Lösungsmittel und weiteres Procedere wie unter
2. beschrieben.
8. Verwendung von tritylierter Baumwolle:
Baumwolle (Baumwoll-Linters, Fa. Fluke, Ulm) wird gemäß der US-PS 43 79 843 mit der Modifikation trityliert, daß die Tritylierungsreaktion über 72 Stunden erfolgt und das Produkt mit Chloroform, danach Aceton gewaschen wird und im feuchten Zustand (jeweils 1 g) in folgenden Lösungen suspendiert wird:
Baumwolle (Baumwoll-Linters, Fa. Fluke, Ulm) wird gemäß der US-PS 43 79 843 mit der Modifikation trityliert, daß die Tritylierungsreaktion über 72 Stunden erfolgt und das Produkt mit Chloroform, danach Aceton gewaschen wird und im feuchten Zustand (jeweils 1 g) in folgenden Lösungen suspendiert wird:
- a) gesättigte Phenylalaninlösung in Wasser
- b) gesättigte di-Natriumphenylphosphatlösung in Wasser
- c) gesättigte Triphenylsilylaminlösung in 2-Propanol
- e) gesättigte Benzosulfonsäurelösung in Wasser
- f) gesättigte Benzyltrimethylammoniumchloridlösung in Wasser
- g) Mischung aus gleichen Volumina von e) und f).
Verwendung wie unter 2. beschrieben.
9. Verwendung einer phenylsilylderivatisierten Dialysiermembran
aus Cellulose:
Eine Dialysiermembran aus Cellulose (Fa. Medicell International, London) wird mit Phenyltrichlorsilan phenylsilylderivatisiert (ca. 3 m Dialysemembran in 250 ml einer 2%igen Phenyltrichlorsilanlösung in Tetrachlorkohlenstoff, Reaktionsdauer ca. 2 Stunden, weiteres Procedere wie unter 7. beschrieben. (Anstelle von Phenyltrichlorsilan läßt sich auch Phenyldimethylchlorsilan problemlos einsetzen).
Eine Dialysiermembran aus Cellulose (Fa. Medicell International, London) wird mit Phenyltrichlorsilan phenylsilylderivatisiert (ca. 3 m Dialysemembran in 250 ml einer 2%igen Phenyltrichlorsilanlösung in Tetrachlorkohlenstoff, Reaktionsdauer ca. 2 Stunden, weiteres Procedere wie unter 7. beschrieben. (Anstelle von Phenyltrichlorsilan läßt sich auch Phenyldimethylchlorsilan problemlos einsetzen).
Kurz vor dem Einsatz als Zell- und Gewebekultursubstrat wird
die arylderivatisierte Dialysemembran für mehrere Minuten
in folgenden Lösungen getaucht und danach gleich bestimmungsgemäß
eingesetzt:
- a) gesättigte Phenylalaninlösung in Wasser
- b) gesättigte Benzolsulfonsäurelösung in Wasser
- c) gesättigte Phenyl-β-galactopyranosidlösung in Wasser
- d) 2%ige Benzoesäurelösung in wässeriger 2% Glucose-6-Phosphat enthaltender Lösung (Alter dieser Lösung: mehrere Tage)
- e) gesättigte Thiophenollösung in Wasser.
Diese Membran eignet sich besonders für die Kultivierung von
polaren, zum transzellulären Stoffwechseltransport befähigten
Zellen.
10. Verwendung von Polyvinylalkohol 49 000 (Fa. Fluka, Ulm):
10 ml einer 10%igen wässerigen Polyvinylalkohollösung werden mit einer 10 ml Spritze, die ihrerseits mit einer 2er Nadel versehen ist, in 30 ml einer 2%igen Lösung von Phenyldimethylchlorsilan in Tetrachlorkohlenstoff gespritzt, Reaktionszeit ca. 120 Minuten, ständiges Rühren, Raumtemperatur, die ausgefallenen sphärischen Partikel werden abfiltriert und, wie unter 2. beschrieben, weiter verarbeitet. Jeweils eine Aliquot dieser phenyldimethylsilylderivatisierten, nun nicht mehr wasserlöslichen "beads" wird in die gemäß 2. bis 9. angeführten Phenyl-, Phenoxy-, Benzol-, Thiolphenylverbindungen enthaltenden Lösungen gegeben.
10 ml einer 10%igen wässerigen Polyvinylalkohollösung werden mit einer 10 ml Spritze, die ihrerseits mit einer 2er Nadel versehen ist, in 30 ml einer 2%igen Lösung von Phenyldimethylchlorsilan in Tetrachlorkohlenstoff gespritzt, Reaktionszeit ca. 120 Minuten, ständiges Rühren, Raumtemperatur, die ausgefallenen sphärischen Partikel werden abfiltriert und, wie unter 2. beschrieben, weiter verarbeitet. Jeweils eine Aliquot dieser phenyldimethylsilylderivatisierten, nun nicht mehr wasserlöslichen "beads" wird in die gemäß 2. bis 9. angeführten Phenyl-, Phenoxy-, Benzol-, Thiolphenylverbindungen enthaltenden Lösungen gegeben.
Claims (26)
1. Zell- und Gewebekultursubstrate zur in vitro Kultivierung
von eukaryontischen Zellen, bestehend aus synthetischen Materialien,
insbesondere solchen, die aus mindestens einem aromatischen
Monomeren synthetisiert worden sind, wie Polystyrol,
Copolymerisate von Polystyrol, Polycarbonate, Polyalkylenterephthalate,
Polyvinylcarbazol, Polyphenylenoxid, Polysulfon,
Polyethersulfon, Polyarylimid, Polybenzimidazol, Polybenzoxacindion,
Polyphenylen, Polyphenylensulfid, Poly-p-
Xylilyen, Poly(p-Phenylen-)-Terephthalamid oder aryl-, insbesondere
phenyl-, phenylen-, benzal-, benzyl-, phenylsilyl-,
benzalsilyl-, benzylsilyl-, diphenylmethyl-, diphenylsilyl-,
triphenyl-, triphenylmethyl- oder triphenylsilylderivatisierten
makromolekularen Verbindungen, bevorzugt aus der Stoffklasse
der Polysaccharide, wie Stärke, Amylopectin, Agar-
Agar, Agarose, Dextran, Cellulose (Sägestaub, Baumwoll-Linters)
oder aus der Stoffklasse der wasserlöslichen Kunststoffe, wie
Polyvinylalkohol, Polyvinylether, Polyvinylester, Acrylpolymerisate
oder aus der Stoffklasse der Siliziumverbindungen,
wie Silicone, Glas, Quarzglas, Bentonit, Kieselgur oder Blähton,
insbesondere wenn die synthetischen Materialien oder die
arylderivatisierten makromolekularen Verbindungen in Form von
Folien, Kügelchen, Fasern, Roux bottles, Klonierungsplatten,
roller bottles, Röhrchen oder anderer für Zell- und Gewebekulturzwecke
geeigneten Ausbildungen vorliegen und so in bekannten
Art und Weise eingesetzt werden, dadurch gekennzeichnet,
daß eine oder mehrere Verbindungen
der allgemeinen Formel
wobei Z: P, N, S, O, Si oder C ist;
wobei A: Schwefel, Sauerstoff, Disulfid (-S-S-), Methylen (-CH-) oder -NH- sein kann;
wobei: m und n gleich oder unterschiedlich sind und 0 bis 10 vorzugsweise 1 bis 5 sind;
wobei: Phe ein gegebenenfalls aryl-, alkyl-, alkenyl-, alkinyl-, carboxy-, carbamin-, halogen-, nitro-, hydroxi-, amino-, oxo-, acyl- oder cycloalkylsubstituierter aromatischer Rest;
wobei: R ein gegebenenfalls aryl-, carboxy-, carbamin-, halogen-, nitro-, hydroxi-, amino-, oxo-, acyl- oder cycloalkylsubstituierter Alkyl-, Alkenyl-, Alkinylrest mit 1 bis 4 Kohlenstoffatomen, Phe oder Wasserstoff ist;
wobei R′: Sauerstoff, Schwefel, R oder unterschiedlich R ist;
wobei X: Wasserstoff, eine Sulfon-, Sulfat-, Phosphatgruppe, quaternäre Ammoniumgruppe, amid- oder glykosidisch gebundene Zuckergruppe, sulfat- oder phosphatester-gebundene aminierte, phosphorilierte oder acetylierte Zuckergruppe ist;
an die Oberflächen der synthetischen Materialien oder an die arylderivatisierten makromolekularen Verbindungen adsorbiert ist bzw. sind.
wobei A: Schwefel, Sauerstoff, Disulfid (-S-S-), Methylen (-CH-) oder -NH- sein kann;
wobei: m und n gleich oder unterschiedlich sind und 0 bis 10 vorzugsweise 1 bis 5 sind;
wobei: Phe ein gegebenenfalls aryl-, alkyl-, alkenyl-, alkinyl-, carboxy-, carbamin-, halogen-, nitro-, hydroxi-, amino-, oxo-, acyl- oder cycloalkylsubstituierter aromatischer Rest;
wobei: R ein gegebenenfalls aryl-, carboxy-, carbamin-, halogen-, nitro-, hydroxi-, amino-, oxo-, acyl- oder cycloalkylsubstituierter Alkyl-, Alkenyl-, Alkinylrest mit 1 bis 4 Kohlenstoffatomen, Phe oder Wasserstoff ist;
wobei R′: Sauerstoff, Schwefel, R oder unterschiedlich R ist;
wobei X: Wasserstoff, eine Sulfon-, Sulfat-, Phosphatgruppe, quaternäre Ammoniumgruppe, amid- oder glykosidisch gebundene Zuckergruppe, sulfat- oder phosphatester-gebundene aminierte, phosphorilierte oder acetylierte Zuckergruppe ist;
an die Oberflächen der synthetischen Materialien oder an die arylderivatisierten makromolekularen Verbindungen adsorbiert ist bzw. sind.
2. Verfahren zur Herstellung von Zell- und Gewebekultursubstraten
zur in vitro Kultivierung von eukaryontischen Zellen
auf Oberflächen, dadurch gekennzeichnet,
daß man synthetische Materialien oder arylderivatisierte
makromolekulare Verbindungen mit einer Lösung in innigen
Kontakt bringt, in der eine oder mehrere Verbindungen der
allgemeinen Formel
wobei Z: P, N, S, O, Si oder C ist;
wobei A: Schwefel, Sauerstoff, Disulfid (-S-S-), Methylen (-CH-) oder -NH- sein kann;
wobei: m und n gleich oder unterschiedlich sind und 0 bis 10 vorzugsweise 1 bis 5 sind;
wobei: Phe ein gegebenenfalls aryl-, alkyl-, alkenyl-, alkinyl-, carboxy-, carbamin-, halogen-, nitro-, hydroxi-, amino-, oxo-, acyl- oder cycloalkylsubstituierter aromatischer Rest;
wobei: R ein gegebenenfalls aryl-, carboxy-, carbamin-, halogen-, nitro-, hydroxi-, amino-, oxo-, acyl- oder cycloalkylsubstituierter Alkyl-, Alkenyl-, Alkinylrest mit 1 bis 4 Kohlenstoffatomen, Phe oder Wasserstoff ist;
wobei R′: Sauerstoff, Schwefel, R oder unterschiedlich R ist;
wobei X: Wasserstoff, eine Sulfon-, Sulfat-, Phosphatgruppe, quaternäre Ammoniumgruppe, amid- oder glykosidisch gebundene Zuckergruppe, sulfat- oder phosphatester-gebundene aminierte, phosphorilierte oder acetylierte Zuckergruppe ist;
gelöst sind und anschließend das Lösungsmittel bzw. Lösungsmittelgemisch wieder vollständig entfernt.
wobei A: Schwefel, Sauerstoff, Disulfid (-S-S-), Methylen (-CH-) oder -NH- sein kann;
wobei: m und n gleich oder unterschiedlich sind und 0 bis 10 vorzugsweise 1 bis 5 sind;
wobei: Phe ein gegebenenfalls aryl-, alkyl-, alkenyl-, alkinyl-, carboxy-, carbamin-, halogen-, nitro-, hydroxi-, amino-, oxo-, acyl- oder cycloalkylsubstituierter aromatischer Rest;
wobei: R ein gegebenenfalls aryl-, carboxy-, carbamin-, halogen-, nitro-, hydroxi-, amino-, oxo-, acyl- oder cycloalkylsubstituierter Alkyl-, Alkenyl-, Alkinylrest mit 1 bis 4 Kohlenstoffatomen, Phe oder Wasserstoff ist;
wobei R′: Sauerstoff, Schwefel, R oder unterschiedlich R ist;
wobei X: Wasserstoff, eine Sulfon-, Sulfat-, Phosphatgruppe, quaternäre Ammoniumgruppe, amid- oder glykosidisch gebundene Zuckergruppe, sulfat- oder phosphatester-gebundene aminierte, phosphorilierte oder acetylierte Zuckergruppe ist;
gelöst sind und anschließend das Lösungsmittel bzw. Lösungsmittelgemisch wieder vollständig entfernt.
3. Verfahren nach Anspruch 2, dadurch gekennzeichnet,
daß man als synthetische Materialien oder arylderivatisierte
makromolekulare Verbindungen solche einsetzt, die
in Form von Folien, Kügelchen, Fasern, Roux bottles, Klonierungsplatten,
roller bottles, Röhrchen oder anderer für Zell-
und Gewebekulturzwecke geeigneten Ausbildungen vorliegen.
4. Verfahren nach Anspruch 2 oder 3, dadurch gekennzeichnet,
daß man als synthetische Materialien, Materialien
einsetzt, die aus mindestens einem aromatischen
Monomeren synthetisiert worden sind.
5. Verfahren nach Anspruch 2 oder 4, dadurch gekennzeichnet,
daß man als Materialien, die aus mindestens
einem aromatischen Monomeren synthetisiert worden sind,
Polystyrol, Copolymerisate des Polystyrol, Polycarbonate,
Polyalkylenterephthalate, Polyvinylcarbazol, Polyphenylenoxid,
Polysulfon, Polyethersulfon, Polyarylimid, Polybenzimidazol,
Polybenzoxacindion, Polyphenylen, Polyphenylensulfid,
Poly-p-Xylylen, poly(p-Phenylen-)-Terephthalamid
oder ähnliche Materialien einsetzt.
6. Verfahren nach Anspruch 5, dadurch gekennzeichnet,
daß man als Polyalkylenterephthalat Polyethylenterephthalat
(PET) (Mylar (R)) einsetzt.
7.Verfahren nach Anspruch 5, dadurch gekennzeichnet,
daß man als Copolymerisate des Polystyrols
Divinylbenzol-vernetztes Polystyrol (DVB crosslinked
polystyrene) einsetzt.
8. Verfahren nach Anspruch 7, dadurch gekennzeichnet,
daß man als Divinylbenzol-vernetztes
Polystyrol XAD-4(R), XAD-2(R), Biobeads (R) SX-2, Amberchrom
(R) AD-161 oder ähnliches einsetzt.
9. Verfahren nach Anspruch 5, dadurch gekennzeichnet,
daß man als ein Polycarbonat Makrofol (R)
einsetzt.
10. Verfahren nach Anspruch 5, dadurch gekennzeichnet,
daß man als poly(p-Phenylen-)-Terephthalamid
Kevlar (R) einsetzt.
11. Verfahren nach Anspruch 2 oder 3, dadurch gekennzeichnet,
daß man als arylderivatisierte makromolekulare
Verbindungen phenyl-, phenylen-, benzal-, benzyl-,
phenylsilyl-, benzalsilyl-, benzylsilyl-, triphenylmethyl-,
triphenylsilyl-, diphenylmethyl-, oder diphenylsilyl-derivatisierte
Polysaccharide bzw. wasserlösliche Kunststoffe bzw.
Siliziumverbindungen einsetzt.
12. Verfahren nach Anspruch 11, dadurch gekennzeichnet,
daß die phenyl-, phenylen-, benzal-,
benzyl-, phenylsilyl-, benzalsilyl-, benzylsilyl-, triphenylmethyl-,
triphenylsilyl-, diphenylmethyl- oder diphenylsilylderivatisierten
Polysaccharide bzw. wasserlöslichen
Kunststoffe bzw. Siliziumverbindungen mit Wasser deutlich
schlechter benetzbar bzw. in Wasser schlechter suspendierbar
sind als die underivatisierten Ausgangsverbindungen.
13. Verfahren nach Anspruch 12, dadurch gekennzeichnet,
daß, wenn man stöchiometrische Umsetzungsbedingungen
zugrundelegt, die Polysaccharide bzw. wasserlöslichen
Kunststoffe bzw. Siliziumverbindungen zu mindestens
10%, höchstens zu 100% phenyl-, phenylen-, benzal-,
benzyl-, phenylsilyl-, benzalsilyl-, benzylsilyl-, triphenylmethyl-,
triphenylsilyl-, diphenylmethyl- oder diphenylsilyl-
derivatisiert sind.
14. Verfahren nach Anspruch 2, 12 und 13, dadurch gekennzeichnet,
daß die Polysaccharide und wasserlöslichen
Polymere zwischen 40 und 90% arylderivatisiert sind.
15. Verfahren nach einem der Ansprüche 11 bis 13, dadurch
gekennzeichnet, daß man als diphenylsilylderivatisierte
Siliziumverbindung mit Diphenyldichlorsilan
umgesetzte Glaskügelchen einsetzt.
16. Verfahren nach einem der Ansprüche 11 bis 13, dadurch
gekennzeichnet, daß man als phenylderivatisierte
Siliziumverbindung eine Folie aus poly(Dimethyl-Diphenyl-)-
Siloxan einsetzt.
17. Verfahren nach einem der Ansprüche 11 bis 13, dadurch
gekennzeichnet, daß man als benzylderivatisiertes
Polysaccharid mit Benzylchlorid umgesetzte Agarose,
speziell Agarosekügelchen ("beads") einsetzt.
18. Verfahren nach einem der Ansprüche 11 bis 13, dadurch
gekennzeichnet, daß man als triphenylsilylderivatisiertes
Polysaccharid mit Phenyltrichlorsilan umgesetztes
Cellophan (R) - Folie oder Dialysemembran aus Cellulose
einsetzt.
19. Verfahren nach Anspruch 11, dadurch gekennzeichnet,
daß man als phenylderivatisierten wasserlöslichen
Kunststoff mit Phenylchlorformiat umgesetzten
Polyvinylalkohol 49 000 einsetzt.
20. Verfahren nach Anspruch 2, dadurch gekennzeichnet,
daß man als Verbindungen der allgemeinen
Formel
Phenyl-, Phenoxy-, Thiophenyl-, Benzal-, Benzyl-, Phenylsilyl-,
Benzalsilyl-, Benzylsilyl-, Diphenylmethyl-, Diphenylsilyl-,
Triphenyl-, Triphenylmethyl- oder Triphenylsilylverbindungen
einsetzt.
21. Verfahren nach Anspruch 2 oder 3, dadurch gekennzeichnet,
daß, wenn man synthetische Materialien
bzw. diphenylmethyl-, triphenylmethyl-, diphenylsilyl- oder
triphenylsilylderivatisierte makromolekulare Verbindungen
verwendet, man eine Lösung einsetzt, in der Phenyl-, Phenoxy-,
Thiophenyl-, Benzal-, Benzyl-, Diphenyl- oder Triphenylverbindungen
gemäß der allgemeinen Formel gelöst sind.
22. Verfahren nach Anspruch 21, dadurch gekennzeichnet,
daß, wenn man diphenylsilyl- oder triphenylsilylderivatisierte
Siliziumverbindungen verwendet,
man eine Lösung einsetzt, in der Diphenylsilyl-, Triphenylsilyl-,
Phenyl-, Phenoxy-, Thiophenol-, Benzal-, Benzyl-,
Phenylsilyl-, Benzalsilyl-, Benzylsilylverbindungen gemäß
der allgemeinen Formel gelöst sind.
23. Verfahren nach Anspruch 20, dadurch gekennzeichnet,
daß, wenn man phenyl-, phenylen-, benzal-,
benzyl-, phenylsilyl-, benzalsilyl- oder benzylsilylderivatisierte
makromolekulare Verbindungen verwendet, man eine
Lösung einsetzt, in der Phenyl-, Phenoxy-, Thiophenyl-,
Benzal-, Benzyl-, Phenylsilyl-, Benzalsilyl-, Benzylsilylverbindungen
gemäß der allgemeinen Formel gelöst sind.
24. Verfahren nach Anspruch 2 oder 20, dadurch gekennzeichnet,
daß man als Phenyl-, Phenoxy-, Thiophenyl-,
Benzal-, Benzyl-, Phenylsilyl-, Benzalsilyl- oder Benzylsilylverbindung
Phenol, Anilin, 2-Phenyl-ethylalkohol, 1-Phenyl
ethylamin, 2-Phenylethylamin, Phenylethylenglykol, 1-Phenyl
ethanol, 2-Anilinoethanol, 2-Phenylethanthiol, Phenylalanin,
Tryptophan, Phenylbernsteinsäure, Benzoesäure, Biphenyl-4-
methanol, Phenylborsäure, Phenyl-brenztraubensäure, 4-Phenyl-
buttersäure, N-Phenylharnstoff, 4-Phenyl-2-butylamin,
4-Amino-phenylessigsäure, Aminophenol, N-Phenyl-diethanolamin,
Phenylendiamin, Benzodimethanol, Phenyl-β-D-galactopyranosid,
Phenyl-β-D-glucopyranosid, N-Phenylglycin, Phenylglycinol,
Phenylglyoxylsäure, Phenylhydrazin(hydrochlorid),
Phenylharnstoff, O-Phenyl-hydroxylamin-hydrochlorid,
Phenylmalonsäure, Thiophenol, Phenylmercaptoessigsäure, Aminodiphenylether,
3-Amino-2,3-dihydro-benzoesäure-hydrochlorid,
4-Phenyl-cyclohexanon, N-Phenyldiethanolamin, Phenyldichlorphosphat,
Phenyl-dichlorphosphin, Phenyl-dimethylchlorsilan,
Phenylessigsäure, Phenylessigsäurechlorid,
Phenyl-formamid, Phenylmethansulfonylchlorid, Phenyl-milchsäure,
Phenylphosphinsäure, Phenylphosphonsäure, Phenyl-dichlorphosphat,
1-2-Phenoxy-glycin, 2-Phenoxy-alanin, 2-Phenoxy-
essigsäure, 2-Phenoxy-essigsäureamid, Phenyl-piperazin,
4-Benzyl-piperidin, Phenylpropanolamin, Phenylpropiolsäure,
2-Phenyl-propionaldehyd, Phenyl-propylalkohol, Phenyl-propylamin,
Phenyl-propylbromid, Phenidon, Phenyl-salicylat,
1-Phenyl-semicarbazid, Phenyl-dimethylsilanol, Phenyl-dimethylsilylamin,
Schwefelsäure-phenylester, Phosphorsäurephenylester,
Kresole, Nitrophenole, Aminophenole, Phenyltrimethylammoniumchlorid,
Brenzcatechin, Resorcin, Pyrimidine,
2-Phenoxy-ethanol, 4-Amino-diphenylether, 3-Phenoxy-benzaldehyd,
4-Phenoxy-buttersäure, 4-Phenoxy-phenol, 3-Phenoxytoluol,
Phenylacetaldehyd, 2,2-Dimethoxyethylbenzol, Hydrochinon,
Pyrogallol, Phloroglucin, Eugenol, Isoeugenol,
Anethol, Vanillin, Thymol, Safrol, Saccharin, aromatische
Sulfonsäuren, Benzosulfonsäure, Phthalimid oder ähnliche
Verbindungen, sowie die Umsetzungsprodukte von Benzoesäureanhydrid,
Benzoylchlorid, 3-Benzoyl-propionsäure, Benzylbromid,
Benzylchlorid, Benzyl-chlorformiat, 4-Chlor-benzylalkohol,
9-Chlor-9-phenyl-xanthen, 1,3-Dimethyl-1,1,3,3,-
tetra-phenyldisilazan, 2,4-Dinitro-benzolsulfenylchlorid,
Diphenylmethylchlorsilan, 1,3-Diphenyl-1,1,3,3-tetramethyl-
disilazan, 4-Methoxybenzylalkohol, 1-Naphthylisocyanat, 2-
Naphthylmercaptan, Neokupferron, 4-Nitro-benzoylchlorid,
4-Nitrophenyl-chlorformiat, Phenylchlorformiat, 2,2,2-Trichlorethyl-
chlorformiat, Phenyldimethyl-chlorsilan, Phenylisocyanat,
Toluol-3,4-dithiol, Tosylchlorid, Toluol-4-sulfonamid,
Tosylhydrazid, Trimethylsilyl-benzolsulfonat, 2-
Trimethylsilylethyl-p-nitrophenylcarbonat, Phenylisothiocyanat,
Triphenylbromsilan, Benzylhalogenide, Phenylhalogenide
und anderen reaktiven, aromatischen Verbindungen mit
aminierten, phosphorilierten und/oder acetylierten Zuckern
oder Peptiden oder Proteinen.
25. Verfahren nach Anspruch 2 oder 20, dadurch gekennzeichnet,
daß man als Diphenylmethyl- oder
Diphenylsilylverbindungen Schwefelsäure-diphenylsilanester,
Phosphorsäure-diphenylsilanester, Diphenyldiaminsilan, Diphenyldialkoxysilan,
Diphenyldihydroxisilan, O-(Diphenylsilyl)
dihydroxylamin, Diphenylsilyl-dimethoxysulfat, Diphenylsilyl-
diethanol, Diphenylsilyl-dipropylamin oder ähnliche
Verbindungen, sowie die Umsetzungsprodukte von tert.-
Butyldiphenylchlorsilan, Diphenylmethylchlorsilan, 1,3-Diphenyl-
1,1,3,3-tetramethyldisilazan, 1-Naphthylisocyanat,
2-Naphthylmercaptan und anderen reaktiven aromatischen
Verbindungen mit aminierten, phosphorilierten und/oder acetylierten
Zuckern oder Peptiden oder Proteinen.
26. Verfahren nach Anspruch 2 oder 20, dadurch gekennzeichnet,
daß man als Triphenyl-, Triphenylmethyl-
oder Triphenylsilylverbindungen Triphenylamin,
Triphenylphosphat, Triphenylphosphinoxid, Triphenylphosphinsulfid
Triphenylphenylphosphin-dibromid, Triphenylzinnchlorid,
O-Trityl-hydroxylamin, Triphenylmethan, Triphenylmethanol,
Triphenylmethanthiol, Triphenylsilan, Triphenylsilanol,
Triphenylsilylamin, O-Triphenylsilyl-hydroxylamin,
Triphenylsilylphosphat, N-Triphenylsilyl-glucosamin, O-(Triphenylsilyl)-
ethoxylamin, O-(Triphenylsilyl)-propyl-1-β-
galactopyranosid, O-Triphenylsilylglucosamin, O-Triphenylsilyl-
neuraminsäure, Triphenylsilyl-β-D,L-galactopyranosid,
Triphenylsilyl-β-D,L-glucopyranosid, Triphenyl-β-D,L-mannopyranosid,
Triphenyl-silylsulfat (Na-, K- oder Li-Salz),
Ester zwischen aminierten, phoshorilierten und/oder acetylierten
Zuckern mit Triphenylsilylsulfat oder -phosphat,
Etherverbindungen aus Triphenylchlorsilan oder Triphenylbromsilan
und phosphorilierten, aminierten und/oder acetylierten
Zuckern, Triphenylsilylethylamin, Triphenylsilylessigsäure,
Triphenylsilyl-buttersäureamid, Triphenylsilylglycerin,
Triphenylsilyl-ethylenglykol, Triphenylsilylpolypropylenglykol,
Triphenyl-silylsilanol, Triphenylsilylpropylsulfat
(Na, K- oder Li-Salz) oder ähnliche Triphenylsilylverbindungen,
sowie die Umsetzungsprodukte von Bromtriphenylmethan,
Chlortriphenylmethan, 4,4′-Dimethoxytritylchlorid,
Dimethyltritylbromsilan, 4-Methoxytrityl-chlorid,
Neokupferron, 2-Triphenylhosphinoethyl-chlorformiatchlorid,
Triphenylsilyl-benzolsulfonat, Triphenylbrommethan, Triphenylchlormethan,
Triphenylchlorsilan, Tripyridinium-tetrafluoroborat,
Triphenylbromsilan und anderen reaktiven aromatischen
Verbindungen mit aminierten, phosphorilierten und/oder
acetylierten Zuckern oder Peptiden oder Proteinen.
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Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
EP0246518A2 (de) * | 1986-05-23 | 1987-11-25 | Rolf Dr. Siegel | Unterlage für Zellkulturen |
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DE19637112A1 (de) * | 1996-09-12 | 1998-03-19 | Matthias Kleespies | Verfahren zur Herstellung fester Körper und Verwendung derartiger Körper |
US6350798B1 (en) | 1997-06-20 | 2002-02-26 | Bayer Aktiengesellschaft | Use of saccharin for stabilizing thermoplastic, aromatic polycarbonates |
FR2862979A1 (fr) * | 2003-11-28 | 2005-06-03 | Centre Nat Rech Scient | Boites bioactives pour cultures cellulaires |
CN115595288A (zh) * | 2022-11-28 | 2023-01-13 | 深圳市脉唐生物科技有限公司(Cn) | 一种用于细胞培养的微载体及其制备方法 |
-
1987
- 1987-12-18 DE DE19873743136 patent/DE3743136A1/de not_active Withdrawn
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WO2005054424A3 (fr) * | 2003-11-28 | 2005-08-18 | Centre Nat Rech Scient | Boites bioactives pour cultures cellulaires |
CN115595288A (zh) * | 2022-11-28 | 2023-01-13 | 深圳市脉唐生物科技有限公司(Cn) | 一种用于细胞培养的微载体及其制备方法 |
CN115595288B (zh) * | 2022-11-28 | 2023-03-31 | 深圳市脉唐生物科技有限公司 | 一种用于细胞培养的微载体及其制备方法 |
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