DE320857C

DE320857C - Process for the preparation of nitrogenous compounds from corpus iuteum

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Publication number: DE320857C
Application number: DE1914320857D
Authority: DE
Original assignee: HERMANN WINTZ DR; LUDWIG SEITZ DR
Current assignee: HERMANN WINTZ DR; LUDWIG SEITZ DR
Priority date: 1914-07-19
Filing date: 1914-07-19
Publication date: 1920-04-29
Also published as: GB191510877A

Description

Verfahren zur Darstellung von stickstoffhaltigen Verbindungen aus Corpus luteum. Die zahlreichen bisher aus dem Eierstock oder aus dem Corpus luteum hergestellten Präparate enthielten entweder ausschließlich die getrocknete rohe Ovarialsubstanz oder sind durch Extraktion mit Wasser oder Olivenöl aus dem frischen Eierstock hergestellt. Alle diese Präparate weisen mehr oder minder schädliche Beimengungen auf und sind auch wegen ihrer vorwiegend oralen Verabreichungsmöglichkeit, sowie ungenauer Dosierbarkeit in ihrer Wirkung an sich unsicher.Process for the preparation of nitrogen-containing compounds Corpus luteum. The numerous hitherto from the ovary or from the corpus luteum Preparations produced either contained exclusively the dried raw one Ovarian substance or are obtained by extraction with water or olive oil from the fresh Ovary made. All of these preparations have more or less harmful admixtures on and are also due to their predominantly oral administration option, as well imprecise dosability in its effect insecure in itself.

Das Verfahren des Patents 297392, K1. i2p, zur Darstellung von stickstoffhaltigen Körpern aus Ovarium, Corpus luteum oder Placenta besteht darin, daß das Corpus-lnteum-Gewebe entwässert und darauf mit wasserlösenden Lösungsmitteln, wie Alkohol oder Aceton, extrahiert wird, worauf die Extrakte mit einem mit Wasser nicht mischbaren Lösungsmittel, wie Petroläther oder Äther, ausgeschüttelt und schließlich aus den in dieses Lösungsmittel übergegangenen Stoffen nach Einengung des Lösungsmittels mit Aceton gefällt werden.The method of patent 297392, K1. i2p, for the representation of nitrogenous Bodies made up of the ovary, corpus luteum, or placenta consists of the corpus lnteum tissue dehydrated and then with water-dissolving solvents such as alcohol or acetone, is extracted, whereupon the extracts with a water-immiscible solvent, like petroleum ether or ether, shaken out and finally out of the in this solvent transferred substances are precipitated with acetone after concentration of the solvent.

Durch Patent 309482, K1. z2°, ist dann ein weiteres Verfahren geschützt, - nach welchem unter anderem das Corpus luteum unmittelbar (ohne vorherige Trocknung) mit flüchtigen-Lösungsniitteln extrahiert wird.By patent 309482, K1. z2 °, another method is then protected - according to which, among other things, the corpus luteum is extracted immediately (without prior drying) with volatile solvents.

Die nach diesen Verfahren erhaltenen stickstoffhaltigen-Verbindungen wirken nach den Angaben der Patente im Sinne einer Beförderung des Wachstums der weiblichen Geschlechtsorgane.The nitrogen-containing compounds obtained by this process act according to the information of the patents in the sense of a promotion of the growth of the female genital organs.

Es wurde nun die überraschende Beobachtung gemacht, daß es bei Einhaltung ganz bestimmter Bedingungen gelingt, aus Corpus luteum an Stelle der nach den Verfahren der Patente 297392 und 309482 erhaltenen, in ihrer Wirkung nicht unterschiedenen, vielmehr sämtlich in derselben Richtung wirkenden Stoffe zwei Körper von ganz bestimmten chemischen und therapeutischen Eigenschaften zu gewinnen, die durch ihre antagonistische Wirkung gekennzeichnet sind und von denen der eine, chloroformlösliche, identisch ist mit dem Stoff, der im weiblichen Eierstock gebildet, die Menstruationsblutung in physiologischer Weise beendet, während der andere, wasserlösliche, eine menstruationsauslösende Wirkung besitzt.The surprising observation has now been made that, if very specific conditions are observed, it is possible to create two bodies of whole from corpus luteum instead of the substances obtained by the processes of patents 297392 and 309482, which are not differentiated in their effect, but rather all act in the same direction To gain certain chemical and therapeutic properties, which are characterized by their antagonistic effect and of which one, chloroform-soluble, is identical to the substance that is formed in the female ovary, terminates menstrual bleeding in a physiological way, while the other, water-soluble, one that triggers menstruation Has an effect.

Das vorliegende Verfahren beruht einerseits auf der Gewinnung zweier Extraktgruppen aus den frischen Corpora -lutea, einem Alkohol-Acetonextrakt und einem Chloroformextrakt, andererseits auf der geeigneten Vereinigung dieser Extraktgruppen mit dem Erfolg der Bildung zweier Schichten, einer wäßrigen, den menstruationsauslösenden Stoff enthaltenden, und einer chloroform-alkoholischen, den menstruationshemmenden Stoff enthaltenden, aus denen durch Eindampfen und gegebenenfalls geeignetes Auswaschen die entsprechenden reinen Verbindungen gewonnen werden können. Dem wasserlöslichen Stoff muß von vornherein jede entfernte Ähnlichkeit mit einem Phosphatid abgesprochen werden, -der chloroformlösliche ist ein dem Corpus luteum eigener Stoff, der ebenfalls kein Pentaminodiphosphatid ist.The present method is based on the one hand on obtaining two Extract groups from the fresh corpora lutea, an alcohol-acetone extract and a chloroform extract, on the other hand on the appropriate association of these extract groups with the success of the formation of two layers, one watery one, the one that induces menstruation Substance containing, and one chloroform-alcoholic, the menstrual inhibitor Containing substance, from which by evaporation and, if necessary, suitable washing the corresponding pure compounds can be obtained. The water soluble Substance must be denied any distant resemblance to a phosphatide from the outset - the chloroform-soluble is a substance peculiar to the corpus luteum, which is also is not a pentaminodiphosphatide.

Von dem Verfahren der Patente 297392 und 309482 unterscheidet sich demnach das vorliegende wesentlich, nicht nur hinsichtlich der erhaltenen Produkte, sondern auch hin-4chtlich der Arbeitsweise. Während die geschützten Verfahren wesentlich in einer Fällung eines Stoffes bestehen, kennzeichnet sich das vorliegende durch die Trennung zweier entgegengesetzt wirkender Körper, von denen keiner identisch ist mit den nach dem Verfahren des Patents 2973g2 darstellbaren Pentaminodiphosphatiden.From the process of patents 297392 and 309482 the present differs significantly, not only with regard to the products obtained, but also with regard to the method of operation. While the protected process essentially consists in the precipitation of a substance, the present one is characterized by the separation of two oppositely acting bodies, none of which is identical to the pentaminodiphosphatides which can be prepared using the process of patent 2973g2.

Das vorliegende Verfahren besteht in der Hauptsache darin, daß man die frisch herausgeschälten und zerkleinerten Corpora lutea der aufeinanderfolgenden Extrakte mit Alkohol und Aceton einerseits, Äther und Chloroform andererseits unterwirft, den eingedampften Acetonauszug mit den Alkoholauszügen, die erhaltene Mischung mit dem Chloroformauszug, gegebenenfalls unter Verwendung eines Überschusses von Chloroform, vereinigt, die sich bildenden Flüssigkeitsschichten voneinander trennt und zur Trockne eindampft. Beispiele. I. Herstellung des menstruationsauslösenden und des menstruationshemmenden Stoffes nebeneinander und deren Trennung.The present method consists mainly in that one the freshly peeled and crushed Corpora lutea of the successive Subjects extracts with alcohol and acetone on the one hand, ether and chloroform on the other, the evaporated acetone extract with the alcohol extracts, the mixture obtained with the chloroform extract, if necessary using an excess of chloroform, combined, separates the liquid layers that are forming and to dryness evaporates. Examples. I. Manufacture of the menstrual inducing and the menstrual inhibitor Material side by side and their separation.

Aus dem Eierstock des frisch geschlachteten Tieres wird das Corpus luteum sofort herausgeschält und in absolutem Alkohol in dunklen Flaschen aufbewahrt. Die gelben_ Körper werden mit einer Fleischhackmascine zerkleinert und 24 Stunden bei 6o° mit absolutem Alkohol extrahiert, hierauf filtriert, der Filterrückstand mit Aceton, mit kaltem und mit siedendem Äther so lange extrahiert, bis die Extraktionsflüssigkeit farblos geworden ist der nach der Filtration zurückbleibende Corpusluteum-Brei wird getrocknet, mit der Reibmaschine weiter zerkleinert und eine vollständige Zertrümmerung der Zelleiber durch Zerreibung mit Quarzsand in der Reibschale erreicht.The corpus is made from the ovary of the freshly slaughtered animal luteum immediately peeled off and stored in absolute alcohol in dark bottles. The yellow_ bodies are minced with a meat mincer and 24 hours extracted at 60 ° with absolute alcohol, then filtered, the filter residue extracted with acetone, with cold and with boiling ether until the extraction liquid The corpus luteum pulp remaining after filtration has become colorless dried, further crushed with the grater and a complete shattering the cell fiber is achieved by grinding with quartz sand in the mortar.

Die zerriebene Corpus-luteum-Masse wird nun noch mit Chloroform bei 6o° 24 Stunden extrahiert und schließlich nochmals mit- Alkohol ausgekocht.The crushed corpus luteum mass is now added with chloroform Extracted 60 ° for 24 hours and finally boiled again with alcohol.

Der Acetonauszug wird eingeengt und der Rückstand mit den alkoholischen Extrakten vereinigt, während die Ätherextrakte vorläufig zurückbehalten werden und schließlich die so erhaltenen zwei Extraktgruppen (Alkohol- und Chloroformextrakt) miteinander vereinigt, wobei vorteilhaft das Chloroform im Überschuß vorhanden ist. Es erfolgt Abscheidung einer wäßrigen Schicht, welche das Lipoproteid enthält.The acetone extract is concentrated and the residue with the alcoholic Extracts combined, while the ether extracts are temporarily retained and finally the two groups of extracts obtained in this way (alcohol and chloroform extract) combined with one another, the chloroform advantageously being present in excess. An aqueous layer containing the lipoprotein is deposited.

Man läßt das abgeschiedene Wasser absetzen, pipettiert ab, setzt, um alles Lipoproteid zu erhalten, erneut destilliertes Wasser zu dem Alkoholextrakt-Chloroformgernisch, schüttelt, fällt neuerdings mit reinem Chloroform und wiederholt diesen Vorgang so lange; bis sich in dem durch die Chloroformfällung gewonnenen Wasser keine Ninhydrinreaktion mehr zeigt. Diese so erhaltenen wäßrigen Lösungen enthalten den menstruationsauslösenden Stoff; man dampft die wäßrige Flüssigkeit bis zur Gewichtsbeständigkeit ein-und entfernt durch Waschen mit Äther die im Rückstand noch enthaltenen geringen Verunreinigungen des genannten Stoffes. Dieses nunmehr reine Präparat stellt ein Lecithalbumin dar. Der vollständig trockene Rückstand wird in physiologischer Kochsalzlösung gelöst, so daß i Ccm r o,ooi g des wirksamen Stoffes enthält. Die Lösung wird schließlich durch Uhlenhut-Berkhefeld-Filter sterilisiert und in Ampullen abgefüllt. Das wasserfreie Alkohol-Chloroform-Gemisch wird nunmehr bis zur Gewichtsbeständigkeit eingedampft. Der Rückstand bildet eine aus zwei Teilen bestehende fettige Masse, von denen der eine eine burgunderrotbräune Farbe besitzt und in Äther sehr leicht löslich, in Alkohol schwer und in Aceton unlöslich ist, während der andere eine weißlich glänzende wachsartige Masse darstellt und in Äther schwer löslich, in Alkohol unlöslich ist. Für die Weiterverarbeitung darf nur der erste Teil benutzt werden; zu diesem Zwecke wird der Rückstand mit Äther aufgenommen, wozu die früher erhaltenen Ätherextrakte verwendet werden. Hierauf wird möglichst rasch abgedampft. Die so erhaltene orangegelbe Masse wird wiederholt in Äther gelöst, filtriert und abgedampft, bis eine an Konsistenz und Zusammensetzung gleichmäßige Masse vorliegt, welche den menstruationshemmenden Stoff darstellt.The separated water is allowed to settle, pipetted off, set, in order to obtain all lipoprotein, again distilled water to the alcohol extract-chloroform mixture, shakes, falls lately with pure chloroform and repeats this process so long; until there is no ninhydrin reaction in the water obtained by the chloroform precipitation shows more. These aqueous solutions obtained in this way contain the menstrual trigger Material; the aqueous liquid is evaporated until it is stable in weight removes the minor impurities still contained in the residue by washing with ether of the mentioned substance. This now pure preparation is a Lecithalbumin. The completely dry residue is dissolved in physiological saline solution, so that i Ccm contains o, ooi g of the active substance. The solution will eventually sterilized by Uhlenhut-Berkhefeld filter and filled into ampoules. The anhydrous The alcohol-chloroform mixture is now evaporated until it is stable. The residue forms a fatty mass consisting of two parts, one of which is the one has a burgundy red-brown color and is very easily soluble in ether, in Alcohol is heavy and insoluble in acetone, while the other is a whitish shiny one represents waxy mass and is sparingly soluble in ether, insoluble in alcohol. Only the first part may be used for further processing; for this purpose the residue is taken up with ether, including the ether extracts obtained earlier be used. It is then evaporated as quickly as possible. The orange-yellow Mass is repeatedly dissolved in ether, filtered and evaporated until a consistency and composition uniform mass is present, which is the menstrual inhibitor Substance represents.

Dieser wird nun in kleinen Anteilen in der Reibschale mit Olivenöl angerieben und so in Lösung gebracht. Die Konzentration ist so gewählt, 'daß x ccm gleich 0,4 g der frischen Corpus-luteum-Substanz entspricht, was einer Konzentrationshöhe der wirksamen Lipoidgruppe von o,ooig g auf i ccm gleichkommt.This is now in small portions in the mortar with olive oil rubbed and so brought into solution. The concentration is chosen so that x ccm equal to 0.4 g of the fresh corpus luteum substance, which corresponds to a concentration level corresponds to the effective lipoid group of o, ooig g to i ccm.

Die Sterilisation des gelösten Präparates geschieht mittels Berkhefeld-Uhlenhut-Filter, die vorher auf ihre Undurchlässigkeit für die in Frage kommenden Keime geprüft sind.The dissolved preparation is sterilized using a Berkhefeld-Uhlenhut filter, which are previously checked for their impermeability to the germs in question.

Statt, wie vorstehend beschrieben, die beiden Stoffe nebeneinander herzustellen und zu trennen, kann auch der menstruationsauslösende Stoff als ausschließliches Endprodukt nach folgendem Verfahren dargestellt werden II. Herstellung des menstruationsauslösenden Stoffes für sich allein.Instead, as described above, the two substances next to each other Manufacture and separate can also be the menstrual trigger as exclusive Final product can be prepared according to the following procedure II. Manufacture of the menstrual stimulant Material on its own.

Zur Verwendung kommen zweckmäßig die sogenannten frischen Stadien der Corpora lutea, die darin kenntlich-sind, daß sie eine leicht rötliche Farbe aufweisen und sich weich anfühlen.The so-called fresh stages are expediently used the corpora lutea, which are recognizable in the fact that they are a easy reddish in color and soft to the touch.

Man legt sie, wie im Beispiel I beschrieben, zunächst in Alkohol, zerkleinert, extrahiert 24 Stunden mit 6o° heißem Alkohol, trocknet, zermahlt und zerstört die Zellen durch Verreiben mit Quarzsand. Nunmehr extrahiert man mit Chloroform bei 6o°, filtriert und kocht mit Alkohol aus. Die so erhaltenen Extraktionsflüssigkeiten, Kalt-Alkohol, Heiß-Alkohol, Chloroform und Koch-Alkohol, werden vereinigt und die aus den heißen Flüssigkeiten in der Kälte ausfallenden fettähnlichen Massen durch Filtrieren entfernt. Die darzustellende wirksame Verbindung geht nur in den Alkohol und in ganz geringen Spuren auch in Chloroform, nicht aber in Äther und Aceton über.As described in Example I, they are first placed in alcohol, crushed, extracted for 24 hours with 60 ° hot alcohol, dried, ground and destroys the cells by rubbing them with quartz sand. It is now extracted with chloroform at 60 °, filtered and boiled with alcohol. The extraction liquids thus obtained, Cold alcohol, hot alcohol, chloroform and cooking alcohol are combined and the fat-like masses precipitating out of the hot liquids in the cold Filter removed. The effective compound to be represented only goes into the alcohol and in very small traces also in chloroform, but not in ether and acetone.

Aus den vereinigten Extraktionsflüssigkeiten wird nunmehr durch Zusatz von Chloroform im Überschuß das Wasser abgeschieden, das das darzustellende Proteolipoid enthält. Durch erneuten Zusatz von Wasser zu dem Extraktalkohol-Chloroformgemisch und Fällung mittels überschüssigen Chloroforms wird sämtlicher im Extraktalkohol enthaltener menstruationsauslösender Stoff gewonnen und, wie im Beispiel I beschrieben, gereinigt und in Lösung gebracht.The combined extraction liquids now become through addition Excess chloroform separates the water that is the proteolipoid to be represented contains. By adding more water to the extract alcohol-chloroform mixture and precipitation with excess chloroform becomes all in the extract alcohol contained menstruation-inducing substance obtained and, as described in example I, cleaned and brought into solution.

Der nach vorstehenden Beispielen I und II darstellbare menstruationsauslösende Stoff gehört zu der Klasse der Lecithalbumine, besitzt dunkelbraune Farbe und ist von sehr fester, stearinartiger Beschaffenheit. Beginn des Weichwerdens zwischen 5o bis 6o°. Beim Trocknen in dünner Schicht scheiden sich unvollkommene Kristalle aus. Die Verbindung löst sich klar und leicht in Wasser, am leichtesten in 4o prozentigem Alkohol; in Äther ist sie unlöslich. Die Analyse ergab Kohlenstoff ....... 61,2o Prozent, Wasserstoff .. .. . . ._ 5,94 » Stickstoff . . . . . . . . . 5,24 ,> Sauerstoff . . . . . . . . . 942,24 » Schwefel.......... 2,75 » Phosphor . . . . . . . . . 2,3o » Die neue Verbindung findet- therapeutische Anwendung beim Fehlen der Menstruation und bei zu geringer Menstruation. Auch bei schlechter Entwicklung der weiblichen Geschlechtsorgane bewirkt sie bei genügend langer Anwendung eine Förderung im Wachstum und damit eine Verbesserung der biologischen Funktion der Genitalorgane.The menstruation-inducing substance which can be represented according to the above Examples I and II belongs to the class of the Lecithalbumine, has a dark brown color and is of a very firm, stearin-like texture. Beginning of softening between 5o to 6o °. When drying in a thin layer, imperfect crystals separate out. The compound dissolves clearly and easily in water, most easily in 40 percent alcohol; it is insoluble in ether. The analysis showed Carbon ....... 61.2o percent, Hydrogen .. ... . ._ 5.94 » Nitrogen. . . . . . . . . 5.24,> Oxygen. . . . . . . . . 942.24 » Sulfur .......... 2.75 » Phosphorus. . . . . . . . . 2,3o » The new compound finds therapeutic application in the absence of menstruation and when menstruation is too low. Even with poor development of the female genital organs, if used for a long enough period of time, it promotes growth and thus improves the biological function of the genital organs.

Der nach vorstehendem Beispiel I gleichfalls darstellbare menstruationshemmende Stoff gehört zur Klasse der Lipoide, besitzt tiefburgunderrotbraune Farbe, ist von zäher, weicher Beschaffenheit, in Äther leicht löslich, schwer in Alkohol, und beginnt bei 45° sehr flüssig zu werden. Die Analyse ergab Kohlenstoff ....... 61,2o Prozent, Wasserstoff ....... 12,5o » Stickstoff . . . . . . . . . 4,33 '% Schwefel -. . . . . . . . . 2,29 » Phosphor . . . . . . . . . 2,83 » Sauerstoff . . . . . . . . . 16,85 » Die therapeutische Anwendung der neuen Verbindung ist bei allen zu starken Menstruationsblutungen und bei allen auf nicht organischer Basis beruhenden Gebärmutterblutungen angezeigt. Ihre Einverleibung bewirkt das Aufhören derartiger Blutungen. Besonders schnell ist die blutstillende Wirkung bei den Blutungen in der Entwicklungszeit (Pubertätsblutungen) und bei allen denjenigen Menstruationsanormalien, bei denen eine Veränderung an den Geschlechtsorganen (funktionelle Störungen) nicht nachzuweisen ist. Die Verbingung hat auch einen tonisierenden Einfluß auf die Funktion des Eierstockes, indem sie unregelmäßige Menstruationsintervalle regelt; ebenso werden starke Schmerzen bei der Menstruation günstig beeinflußt. Die Ausfallserscheinungen nach Kastration, im Klimakterium werden durch das Präparat gemildert und beseitigt.The menstrual inhibitor, which can also be shown according to Example I above, belongs to the class of lipoids, has a deep burgundy red-brown color, is tough, soft in nature, easily soluble in ether, difficult in alcohol, and begins to become very liquid at 45 °. The analysis showed Carbon ....... 61.2o percent, Hydrogen ....... 12,5o » Nitrogen. . . . . . . . . 4.33 '% Sulfur -. . . . . . . . . 2.29 » Phosphorus. . . . . . . . . 2.83 » Oxygen. . . . . . . . . 16.85 » The therapeutic use of the new compound is indicated in all cases of excessive menstrual bleeding and in all non-organic-based uterine bleeding. Their incorporation causes such bleeding to stop. The hemostatic effect is particularly rapid for bleeding during development (puberty bleeding) and for all those menstrual abnormalities in which a change in the sexual organs (functional disorders) cannot be detected. The connection also has a toning effect on the function of the ovary by regulating irregular menstrual intervals; severe pain during menstruation is also favorably influenced. The symptoms of loss after castration and menopause are alleviated and eliminated by the preparation.

Die Anwendung der beiden neuen Verbindungen erfolgt durch subkutane Injektion. Der menstruationshemmende Stoff kann auch in Tablettenform per os eingenommen werden. Sie sind beide selbst bei fortgesetzter Injektion völlig reizlos, ungefährlich und ungiftig; insbesondere treten niemals anaphylaktische Erscheinungen auf.The application of the two new compounds is by subcutaneous Injection. The menstrual inhibitor can also be taken per os in tablet form will. Even if the injection continues, they are both completely free of irritation and harmless and non-toxic; in particular, anaphylactic phenomena never occur.

Claims

PATENT CLAIM Process for the representation of nitrogen-containing compounds from the corpus luteum, characterized in that the freshly peeled and crushed corpora lutea of successive extraction with alcohol and acetone on the one hand, ether and chloroform on the other hand, subjected to the evaporated '' Mixes the acetone extract with the alcohol extracts, the mixture obtained with the chloroform extract, optionally using an excess of chloroform, combined the forming liquids separates from each other and evaporates to dryness.