DE722109C

DE722109C - Process for the production of durable lipoid emulsions from animal organs, secretions or excretions

Info

Publication number: DE722109C
Application number: DEE54559D
Authority: DE
Inventors: Dr Emil Epstein; Dr Herbert Guenther Kreitner; Dr Karl Lorenz
Original assignee: EMIL EPSTEIN DR; HERBERT GUENTHER KREITNER DR; KARL LORENZ DR
Current assignee: EMIL EPSTEIN DR; HERBERT GUENTHER KREITNER DR; KARL LORENZ DR
Priority date: 1941-02-23
Filing date: 1941-02-23
Publication date: 1942-07-03

Description

Verfahren zur Herstellung von haltbaren Lipoidemulsionen aus tierischen Organen, Sekreten oder Exkreten Die vorliegende Erfindung setzt sich zum Ziel, Lipoidemulsionen, im besonderen wässerige Lipoidemulsionen, von tierischen Organen, Sekreten oder Exkreten ausgehend, herzustellen, die eine praktisch unbegrenzte Haltbarkeit aufweisen und sterilisiert werden können.Process for the production of long-lasting lipoid emulsions from animal Organs, secretions or excretions The present invention aims to produce lipoid emulsions, in particular aqueous lipoid emulsions, from animal organs, secretions or Starting from excrement to produce, which have a practically unlimited shelf life and can be sterilized.

Es ist bekannt, daß die Lipoide, insbesondere Lecithin, chemisch instabil sind und auch schon durch physikalische Einwirkungen, wie durch den Einfluß von Licht, Wärme u. dgl., leicht zersetzt werden. Nach einem früheren Verfahren gelingt es zwar, therapeutisch wirksame Lipoidemulsionen von verhältnismäßig guter Haltbarkeit dadurch zu gewinnen, daß man die zerkleinerten Organe oder eingeengten Sekrete zuerst erschöpfend mit Aceton extrahiert, diesen Extrakt im Vakuum abdunstet, den erhaltenen Trockenrückstand mit absolutem Aceton und hierauf mit absolutem Äther erschöpfend auszieht. Die von der ersten Acetonextraktion verbliebenen Organrückstände werden ebenfalls mit Äther und nach dem Abdampfen des Äthers nochmals mit absolutem Äther ausgezogen. Die einzelnen Fraktionen werden dann in geeigneten Verhältnissen gemischt. Auch ist vorgeschlagen worden, die Extraktmischungen in physiologischer Kochsalzlösung zu dispergieren und die Dispersion im Vakuum von flüchtigen Lösungsmitteln zu befreien. Wenngleich dieses Verfahren brauchbare Ergebnisse liefert, so sind doch die erhaltenen Emulsionen nicht genügend stabil, um mit aller Sicherheit für Injektionszwecke Anwendung finden zu können, da insbesondere bei dem Versuch, diese Emulsionen durch Kochen zu sterilisieren, Entmischung auftritt.It is known that lipoids, especially lecithin, are chemically unstable are and already through physical influences, such as through the influence of Light, heat and the like are easily decomposed. An earlier procedure succeeds It is true that therapeutically effective lipoid emulsions have a relatively good shelf life to be gained by getting the minced organs or constricted secretions first exhaustively extracted with acetone, this extract evaporates in vacuo, the obtained Dry residue with absolute acetone and then exhaustive with absolute ether moves out. The organ debris left from the first acetone extraction will be also with ether and after the evaporation of the ether again with absolute ether moved out. The individual fractions are then mixed in suitable proportions. It has also been suggested that the extract mixtures in physiological saline solution to disperse and to free the dispersion from volatile solvents in vacuo. While this procedure gives useful results, they are obtained Emulsions are not stable enough to be safely used for injections to be able to find, especially when trying to make these emulsions by boiling to sterilize, segregation occurs.

Die Erfindung beruht auf der neuen Erkenntnis, daß die physiologischen Gemenge von verschiedenartigen Lipoiden, wie sie in den lipoidhaltigen tierischen-Ausgangsstoffen von Natur- aus vorliegen, weit weniger empfindlich sind als die einzelnen, rein dargestellten Lipoide selbst. Aus dieser Erkenntnis ergab sich die näher bestimmte Aufgabe, aus den lipoidhaltigen tierischen Ausgangsstoffen sämtliche vorhandenen Lipoide zu gewinnen und von den Verunreinigungen und Ballaststoffen, insbesondere auch von den Fettstoffen, befreit in ihrem natürlichen Verhältnis zu therapeutisch anwendbaren Präparaten zu vereinigen.The invention is based on the new knowledge that the physiological mixture of different types of lipoids, such as those in the lipoid-containing ones Animal raw materials are naturally present, are far less sensitive than the individual, pure lipoids themselves. From this knowledge the more precisely defined task from the lipoid-containing animal raw materials to gain all existing lipoids and from the impurities and fiber, in particular also from the fatty substances, freed in their natural proportion too to combine therapeutically applicable preparations.

Zu diesem Zwecke werden die Ausgangsstoffe, wie zerkleinerte tierische Organe, Sekrete oder Exkrete, z. B. Herz, endokrine Drüsen, wie Epiphyse, Hypophyse, Thyreoidea, Thymus, Nebenniere, Epithelkörperchen, Ovar, Testis, Sputum usw., mit Aceton und weiteren organischen Lösungsmitteln, wie absolutem Alkohol, Methylalkohol, Chloroform oder Äther, extrahiert und gegebenenfalls die gewonnenen Lipoidlösungen in physielogi.scher Kochsalzlösung dispergiert. Das Verfahren besteht im Wesen darin, daß die Phosphatide aus dem Trockenrückstand des Acetonextraktes durch Behandeln mit Methylalkohol oder mit Äthylalkohol in der Kälte vom Fett getrennt und aus dem fetthaltigen Rückstand die restlichen Phosphatide unter Verseifung des Fettes gewonnen werden. Man kann den Trockenrückstand des Acetonextraktes auch zur Befreiung von Fett mit Essigäther ausziehen und in die fetthaltige Fraktion übergegangene Phosphatide nach Verseifung des Fettes extrahieren.For this purpose, the starting materials, such as crushed animal Organs, secretions or excreta, e.g. B. Heart, endocrine glands such as the epiphysis, pituitary gland, Thyroid, thymus, adrenal gland, epithelial cells, ovary, testis, sputum, etc., with Acetone and other organic solvents such as absolute alcohol, methyl alcohol, Chloroform or ether, extracted and, if necessary, the lipoid solutions obtained dispersed in physiological saline solution. The essence of the process is that the phosphatides from the dry residue of the acetone extract by treating with methyl alcohol or with ethyl alcohol separated from the fat in the cold and from the fatty residue obtained the remaining phosphatides with saponification of the fat will. You can use the dry residue of the acetone extract to get rid of Extract fat with vinegar and phosphatides which have passed into the fatty fraction extract after saponification of the fat.

Zur Durchführung des Verfahrens geht man beispielsweise wie folgt vor: A. Man extrahiert das Ausgangsmaterial zunächst mit wasserfreiem Aceton und wiederholt gegebenenfalls diese Extraktion des öfteren. Die Acetonextrakte werden hernach zur Trockne vorzugsweise im Vakuum eingedampft. In den erhaltenen Trockenrückständen befindet sich in überwiegender Menge Fett, ferner Cholesterin, Cholesterinester und ein kleiner Anteil von in Neutralfett sekundär gelösten Phosphatiden, welche an sich in Aceton unlöslich sind.To carry out the process, one proceeds, for example, as follows before: A. The starting material is extracted first with anhydrous acetone and if necessary repeats this extraction several times. The acetone extracts are then evaporated to dryness, preferably in vacuo. In the obtained dry residues the predominant amount is fat, as well as cholesterol and cholesterol esters and a small proportion of phosphatides secondaryly dissolved in neutral fat, which are inherently insoluble in acetone.

Aus dem Acetonauszug bzw. aus dem Trockenrückstand nach Verdampfung des Acetons kann man durch Ausziehen mit kaltem Methylalkohol, in der Regel genügt eine zweimalige Extraktion, die Phosphatide Herauslösen, da Fett in Methylalkohol bei normaler Temperatur kaum löslich ist, wogegen die Phosphati:de in Methylalkohol sehr leicht löslich sind (Auszug z). Aus dem verbleibenden Neutralfett sind noch Cholesterin und Cholesterinester zu gewinnen. Zu diesem Zwecke wird das Neutralfett in dem mit Methylalkohol ausgezogenen Rückstand mit etwa 2 o/oiger Natronlauge vollständig verseift, wodurch das ganze Fett aufgespalten wird, und hierauf mit Äther ausgeschüttelt. Durch nachfolgende gründliche Waschung des ätherischen Auszuges mit destilliertem Wasser im Scheidetrichter werden das Cholesterin und seine Ester unverändert gewonnen (Auszug 2). Auf diese Weise gelingt es also, Cholesterin, die Cholesterinester und den geringen, im Acetonextrakte befindlichen Anteil der Phosphatide vollständig rein und von allen Salzbeimengungen usw. befreit zu erhalten. Nach Abdampfen -der Lösungsmittel Methylalkohol im Auszug t und Äther im Auszug 2, zweckmäßig im Vakuum, erhält man eine Lipoidfraktion, die im folgenden zusammengefaßt .als Fraktion I bezeichnet wird.From the acetone extract or from the dry residue after evaporation The acetone can be obtained by taking it off with cold methyl alcohol, which is usually sufficient a two-fold extraction, the phosphatides dissolving out, as fat in methyl alcohol is hardly soluble at normal temperature, whereas the phosphate: de in methyl alcohol are very easily soluble (extract z). From the remaining neutral fat are still Gaining cholesterol and cholesterol esters. For this purpose, the neutral fat is used in the residue extracted with methyl alcohol with about 2% sodium hydroxide solution saponified, whereby all the fat is broken down, and then shaken out with ether. By subsequent thorough washing of the essential extract with distilled Water in the separating funnel, the cholesterol and its esters are obtained unchanged (Excerpt 2). So in this way it succeeds in cholesterol, the cholesterol esters and the small proportion of phosphatides found in the acetone extracts completely to be kept pure and free of all salt etc. After evaporation of the Solvent methyl alcohol in extract t and ether in extract 2, expediently in a vacuum, a lipoid fraction is obtained, which is summarized below .als fraction I. referred to as.

Die Abtrennung des Neutralfettes, welches mehr als 75'1, des Trockenrückstandes aus dem Acetonextrakt ausmacht und welchem keinerlei therapeutische Wirksamkeit zukommt, ist unbedingt notwendig, um in der wässerigen Emulsion die wirksame Lipoidkonzentration zu erreichen. Außerdem erhält dadurch die Emulsion erst ihre Stabilität, da das leicht ausflockende Neutralfett von vornherein ausgeschaltet ist.The separation of the neutral fat, which is more than 75'1, of the dry residue from the acetone extract and which does not have any therapeutic effectiveness is absolutely necessary in order to achieve the effective lipoid concentration in the aqueous emulsion to reach. In addition, this is what gives the emulsion its stability, because the easily flocculating neutral fat is switched off from the start.

An Stelle von Methylalkohol kann bei der beschriebenen Arbeitsweise auch ein anderer Alkohol zur Abtrennung,der Phosphatide aus dem Rückstand des Acetonextraktes verwendet werden, der zwar Phosphatide, aber nicht das Neutralfett löst. So kann, allerdings mit etwas schlechterem Ergebnis, Äthylalkohol zum Ausziehen der Phosphatide in der Kälte verwendet werden.Instead of methyl alcohol, in the procedure described Another alcohol for the separation, the phosphatides from the residue of the acetone extract which dissolves phosphatides but not the neutral fat. So can, but with a slightly worse result, ethyl alcohol to extract the phosphatides to be used in the cold.

Die Aufarbeitung des Acetonextraktes in seine Bestandteile kann ferner in der Weise erfolgen, daß man aus dem Trockenrückstand des Acetonextraktes Fett und Cholesterin mit Essigäther herauslöst, während die im Trockenrückstand der Acetonfraktion zurückbleibenden restlichen Phosphatide in Methylalkohol (Alkohol, Äther, Chloroform) aufgenommen werden. Das weitere Verfahren entspricht dann der bereits geschilderten Arbeitsweise, indem die Trennung des Fettes vom Cholesterin und seinen Estern durch Verseifen des Fettes mit Kalilauge und Ausschütteln mit Äther erfolgt.The work-up of the acetone extract into its constituents can also be carried out be carried out in such a way that fat is obtained from the dry residue of the acetone extract and dissolves cholesterol with vinegar, while that in the dry residue of the acetone fraction remaining residual phosphatides in methyl alcohol (alcohol, ether, chloroform) be included. The further procedure then corresponds to that already described How it works by separating fat from cholesterol and its esters The fat is saponified with potassium hydroxide and shaken out with ether.

B. Das mit Aceton extrahierte Ausgangsmaterial wird nun einer weiteren, gegebenenfalls mehrmaligen erschöpfenden Extraktion mit absolutem Alkohol (oder lllethylalkohol, Chloroform oder Äther) unterworfen. Bei dieser Extraktion werden aus dem Gewebe alle Lipoide (Lecithin, Kephalin und Cerebroside us.w.) vollständig gewonnen. Um ein Übergehen von Ballaststoffen, wie Salzen, Eiweiß und Eiweißabbauprodukten, zu verhindern, wird der Extrakt abermals zur Trockne eingedampft. Der Trockenrückstand bildet die Fraktion 11.B. The starting material extracted with acetone is now sent to another if necessary multiple exhaustive extraction with absolute alcohol (or Illethyl alcohol, chloroform or ether). In this extraction will be from the tissue all lipoids (lecithin, cephalin and cerebroside etc.) completely won. To avoid fiber, such as salts, protein and To prevent protein breakdown products, the extract is again evaporated to dryness. The dry residue forms fraction 11.

C. Die aus der Extraktion mit Aceton und der nachfolgenden Reinigung erhaltene Fraktion I und die in der zweiten Stufe durch weitere erschöpfende Extraktion des Ausgangsgutes erhaltene Fraktion II werden gemeinsam in einem Alkohol-Aceton-Äther-Gemisch z. B. zu gleichen Teilen aufgenommen, in welchem nunmehr der gesamte im Ausgangsmaterial vorhandene physiologische Lipoidkomplex, bestehend aus den Phosphatiden, Lecithin und Kephalin, den Cerebrosiden, Sphingomyelin, Cholesterin und Cholesterinesfiern, im natürlichen Mischungsverhältnis vereinigt, enthalten ist. Um den in dem Äther-Aceton-Alkohol-Gemisch gelösten Lipoidkomplex in ein für die intrakutane oder subkutane Injektion geeignetes Präparat überzuführen, läßt man die Lösung tropfenweise in redestilliertes Wasser eintropfen und bringt glenchzeitig das Lösungsmittel, zweckmäßig durch Arbeiten im Vakuum, allenfalls unter gelinder Erwärmung, zum Verdampfen, wobei die Bildung der wässerigen Emulsion durch Einführung von steriler Luft durch eine Kapillare und die dadurch erzielte Bewegung unterstützt werden kann. Die in dieser Weise gewonnenen Lipoidemulsionen, die die Gesamtlipoide des Ausgangsmaterials enthalten, sind vollständig homogen, zeigen einen hohen Dispersitätsgrad, sind frei von Resten des Lösungsmittels, außerordentlich bieständig und selbst durch. Kochen sterilisierbar.C. Those from extraction with acetone and subsequent purification fraction I obtained and that in the second stage by further exhaustive extraction Fraction II of the starting material obtained together in an alcohol-acetone-ether mixture z. B. added in equal parts, in which now the entire in the starting material existing physiological lipoid complex, consisting of the phosphatides, lecithin and cephalin, the cerebrosides, sphingomyelin, cholesterol and cholesterol-free animals, combined in the natural mixing ratio, is contained. To the one in the ether-acetone-alcohol mixture dissolved lipoid complex into a suitable for intracutaneous or subcutaneous injection To transfer the preparation, the solution is allowed to drop into redistilled water drop in and bring the solvent at the same time, expediently by working in a vacuum, possibly with gentle heating, for evaporation, with the formation the aqueous emulsion by introducing sterile air through a capillary and the movement achieved thereby can be supported. Those obtained in this way Lipoid emulsions, which contain the total lipids of the starting material, are complete homogeneous, show a high degree of dispersion, are free from solvent residues, extraordinarily beastly and self-indulgent. Cooking sterilizable.

Die Emulsion läßt sich ohne Gefahr einer Ausflockung oder unzuträglichen Vergröberung des Dispersitätsgrades in eine Emulsion der Lipoide in physiologischer Kochsalzlösung überführen, indem man zu :der Emulsion vorsichtig eine solche Menge einer sterilen, z. B. to%igen Natriumchloridlösimg zutropft, daß die Lösung eine Na.triumchloridkonzentration von etwa 0,7 bis o,9 7o aufweist. Nach vollständiger Durchmischung, bei welcher trotz des Kochsalzgehaltes der Emulsion keine Ausflockung der Lipoide eintritt, kann .die Emulsion unter sterilen Bedingungen in Ampullen abgefüllt werden.The emulsion can be converted into an emulsion of the lipoids in physiological saline solution without the risk of flocculation or unacceptable coarsening of the degree of dispersion by adding carefully to the emulsion such an amount of a sterile, e.g. B. to% sodium chloride solution is added dropwise so that the solution has a sodium chloride concentration of about 0.7 to 0.97o. After complete mixing, during which, despite the saline content of the emulsion, no flocculation of the lipoids occurs, the emulsion can be filled into ampoules under sterile conditions.

Die Standardisierung der Präparate ist bei diesem Verfahren sehr einfach. Sie besteht in einer Phosphorbestimmung der im Alkohol-Aceton-Äther gelösten Lipoide der jeweiligen Charge, aus welcher zu entnehmen ist, welche Mengen der Alkohol-Aceton-Äther-Lösung für die Bereitung von 11 Lipoidemulsion verwendet werden müssen.The standardization of the preparations is very easy with this method. It consists of a phosphorus determination of the lipoids dissolved in the alcohol-acetone-ether of the respective batch, from which it can be seen which amounts of the alcohol-acetone-ether solution have to be used for the preparation of 1 1 lipoid emulsion.

Neben den bereits beschriebenen technischen Wirkungen, die in der Gewinnung besonders haltbarer und selbst durch Kochen sterilisierbarer Lipoidemulsionen und insbesondere in der Herstellung von Emulsionen der Lipoide in physiologischer Kochsalzlösung, die keinerlei Ausflockungen bei praktisch unbegrenzter Haltbarkeit zeigen, bestehen, hat sich gezeigt, daß den erfindungsgemäß gewonnenen Lipoidpräparaten auch eine hervorragende Heilwirkung zukommt. Ausführungsbeispiel roog fein. zerkleinertes Kalbshirn werden mit etwa 300 cm3 wasserfreiem Aceton in einem Soxhletapparat, der die Durchführung der Extraktion im Vakuum gestattet, bei 36° und unter Anwendung eines Vakuums von etwa roo mm Hg 8 Stunden extrahiert.In addition to the technical effects already described, which consist in the production of particularly durable lipoid emulsions which can be sterilized even by boiling and in particular in the production of emulsions of the lipids in physiological saline solution, which show no flocculation at all with a practically unlimited shelf life, it has been shown that the invention The lipoid preparations obtained also have an excellent healing effect. Embodiment roog fine. Comminuted calf's brain is extracted with about 300 cm3 of anhydrous acetone in a Soxhlet apparatus, which allows the extraction to be carried out in vacuo, at 36 ° and using a vacuum of about roo mm Hg for 8 hours.

Der Extrakt wird im Vakuum zur Trockne eingedampft und hierauf mehrere Male mit kaltem Methylalkohol ausgezogen. Der mit Methylalkohol ausgezogene Rückstand wird sodann mit 3oobis 5oocm3 2o,öiger Kalilauge versetzt. Nach vollständiger Verseifung des Neutralfettes wird das Gemenge mehrmals mit Äther ausgeschüttelt, wodurch Cholesterin und seine Ester in ätherischeLösungübergehen. Die im Methylalkohol gelösten Phos= phatide und das in Äther gelöste Cholesterin sowie die Cholesterinester werden durch Eindampfen der methylalkoholischen bzw. der ätherischen Lösung bis zur Trockne gewonnen und als Fraktion I beiseitegestellt.The extract is evaporated to dryness in vacuo and then several Times stripped with cold methyl alcohol. The residue extracted with methyl alcohol 3oobis 5oocm3 2o, oiger potassium hydroxide solution is then added. After complete saponification of the neutral fat, the mixture is shaken out several times with ether, creating cholesterol and its esters pass into ethereal solution. The Phos = dissolved in methyl alcohol phatide and the cholesterol dissolved in ether as well as the cholesterol esters are through Evaporation of the methyl alcoholic or the ethereal solution to dryness obtained and set aside as Group I.

Hierauf wird das mit Aceton extrahierte Ausgangsmaterial erschöpfend mit absolutem Alkohol (etwa 300 cm3) in einer gleichen Soxhletapparatur bei 36° und etwa 8o mm Hg extrahiert. Auch dieser Extrakt wird zur Trockne eingedampft, wobei eine Fraktion II erhalten wird.The starting material extracted with acetone is then exhaustively extracted with absolute alcohol (about 300 cm3) in an identical Soxhlet apparatus at 36 ° and about 80 mm Hg. This extract is also evaporated to dryness, a fraction II being obtained.

Die Fraktionen I und II werden nun gemeinsam in etwa 500 cm3 eines Gemisches gleicher Teile von absolutem Alkohol, Aceton und Äther aufgenommen. Nun wird von z cm3 dieses Gemisches eine Phosphorbestimmung gemacht, welche z. -B. 0,36 mg Phosphor pro Kubikzentimeter ergibt. Wenn eine Ampulle nun z. B. o,o6 mg Phosphor enthalten soll (was einem Phosphatidgehalt von etwa r,5 mg entspricht), so muß das Alkohol-Aceton-Äther-Gemisch in der sechsfachen Menge Wasser, d. h. in 3000 cm' destilliertem Wasser, aufgenommen werden.Fractions I and II are now taken up together in about 500 cm3 of a mixture of equal parts of absolute alcohol, acetone and ether. Now a phosphorus determination is made of z cm3 of this mixture, which z. -B. Gives 0.36 mg of phosphorus per cubic centimeter. If an ampoule now z. B. o, o6 mg of phosphorus should contain (which corresponds to a phosphatide content of about r, 5 mg), the alcohol-acetone-ether mixture must be added in six times the amount of water, ie in 3000 cm 'of distilled water.

Dies geschieht folgendermaßen: In einen Vakuumkolben wird durch eine Düse das Alkohol-Äther-Aceton-Gemisch mit den darin gelösten Lipoiden in 3 ooo cm3 redestilliertes Wasser eingeleitet und durch einströmende sterile Luft in steter Bewegung gehalten. Im Vakuum wird nun unter geringer Erwärmung das Lösungsmittel abgedampft und das Lipoidgemisch im redestillierten Wasser verteilt. Durch nachfolgenden Zusatz einer etwa ioo!oigen Natriumchloridlösung in entsprechender Menge kann die Emulsion auf physiologische Konzentration eingestellt, d. h. einer 0,7 bis o,g%igen NaCl-Lösung isotonisch gemacht werden. Die erhaltene stabile Emulsion wird durch Kochen sterilisiert und in Ampullen abgefüllt.This is done as follows: the alcohol-ether-acetone mixture with the lipoids dissolved in it is introduced into 3,000 cm3 of redistilled water through a nozzle and kept in constant motion by inflowing sterile air. The solvent is then evaporated off in a vacuum with low heating and the lipoid mixture is distributed in the redistilled water. The emulsion can be adjusted to a physiological concentration, ie a 0.7 to 0.2% NaCl solution can be made isotonic by the subsequent addition of about 100% sodium chloride solution in the corresponding amount. The stable emulsion obtained is sterilized by boiling and filled into ampoules.

In gleicher Weise können stabile Lipoidemulsionen aus anderen tierischen Ausgangsstoffen hergestellt werden.In the same way, stable lipoid emulsions from other animal Starting materials are produced.

Claims

PATENT CLAIMS: i. Process for the preparation of long-lasting lipoid emulsions from animal organs, secretions or excretions by repeated extraction with Acetone and other organic solvents such as absolute alcohol, methyl alcohol, Chloroform or ether, and dispersing the lipoid solution expediently in physiological Saline solution, thereby geleri> eiclinet that the phosphatides from the troen'rückstand of the acetone extract by treating with methyl alcohol or ethyl alcohol in the cold separated from the fat and the remaining phosphatides from the fatty residue can be obtained with saponification of the fat.

2. The method according to claim i, characterized characterized in that the dry residue of the acetone extract to free the fat extracted with vinegar and phosphatides passed over into the fatty fraction extracted after saponification of the fat.