DE2335334A1 - PROCESS FOR THE PRODUCTION OF HIGHLY PURIFIED PHOSPHATIDES FROM ANIMAL ORGANS - Google Patents
PROCESS FOR THE PRODUCTION OF HIGHLY PURIFIED PHOSPHATIDES FROM ANIMAL ORGANSInfo
- Publication number
- DE2335334A1 DE2335334A1 DE19732335334 DE2335334A DE2335334A1 DE 2335334 A1 DE2335334 A1 DE 2335334A1 DE 19732335334 DE19732335334 DE 19732335334 DE 2335334 A DE2335334 A DE 2335334A DE 2335334 A1 DE2335334 A1 DE 2335334A1
- Authority
- DE
- Germany
- Prior art keywords
- solvents
- chloroform
- polar
- phosphatides
- methanol
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Ceased
Links
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims description 26
- 210000001557 animal structure Anatomy 0.000 title claims description 9
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 title claims description 8
- RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N Diethyl ether Chemical compound CCOCC RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 32
- OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N Methanol Chemical compound OC OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 27
- 239000000203 mixture Substances 0.000 claims description 27
- HEDRZPFGACZZDS-UHFFFAOYSA-N Chloroform Chemical compound ClC(Cl)Cl HEDRZPFGACZZDS-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 26
- 239000002904 solvent Substances 0.000 claims description 24
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 22
- 239000000284 extract Substances 0.000 claims description 19
- UHOVQNZJYSORNB-UHFFFAOYSA-N Benzene Chemical compound C1=CC=CC=C1 UHOVQNZJYSORNB-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 15
- VLKZOEOYAKHREP-UHFFFAOYSA-N n-Hexane Chemical compound CCCCCC VLKZOEOYAKHREP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 15
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 claims description 13
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 claims description 12
- 239000003208 petroleum Substances 0.000 claims description 10
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 10
- XEKOWRVHYACXOJ-UHFFFAOYSA-N Ethyl acetate Chemical compound CCOC(C)=O XEKOWRVHYACXOJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 6
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 claims description 6
- VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N Silicium dioxide Chemical compound O=[Si]=O VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 5
- 238000000926 separation method Methods 0.000 claims description 5
- 239000000741 silica gel Substances 0.000 claims description 5
- 229910002027 silica gel Inorganic materials 0.000 claims description 5
- IMNFDUFMRHMDMM-UHFFFAOYSA-N N-Heptane Chemical compound CCCCCCC IMNFDUFMRHMDMM-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 4
- OFBQJSOFQDEBGM-UHFFFAOYSA-N Pentane Chemical compound CCCCC OFBQJSOFQDEBGM-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 4
- 230000007935 neutral effect Effects 0.000 claims description 4
- 239000012266 salt solution Substances 0.000 claims description 4
- 239000006185 dispersion Substances 0.000 claims description 3
- 239000002798 polar solvent Substances 0.000 claims description 3
- 159000000000 sodium salts Chemical class 0.000 claims description 3
- 239000011261 inert gas Substances 0.000 claims description 2
- 239000003960 organic solvent Substances 0.000 claims description 2
- 239000003495 polar organic solvent Substances 0.000 claims description 2
- 230000001476 alcoholic effect Effects 0.000 claims 1
- 239000012454 non-polar solvent Substances 0.000 claims 1
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 12
- 150000002632 lipids Chemical class 0.000 description 10
- 239000000047 product Substances 0.000 description 8
- 238000004140 cleaning Methods 0.000 description 7
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 description 6
- -1 sterol esters Chemical class 0.000 description 6
- 229930182558 Sterol Natural products 0.000 description 5
- 238000001704 evaporation Methods 0.000 description 5
- 230000008020 evaporation Effects 0.000 description 5
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 description 5
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 description 5
- 235000003702 sterols Nutrition 0.000 description 5
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 5
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 4
- 238000009835 boiling Methods 0.000 description 4
- 238000000605 extraction Methods 0.000 description 4
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 4
- OAICVXFJPJFONN-UHFFFAOYSA-N Phosphorus Chemical compound [P] OAICVXFJPJFONN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 235000014633 carbohydrates Nutrition 0.000 description 3
- 150000001720 carbohydrates Chemical class 0.000 description 3
- 235000021588 free fatty acids Nutrition 0.000 description 3
- 125000005456 glyceride group Chemical group 0.000 description 3
- 239000011574 phosphorus Substances 0.000 description 3
- 229910052698 phosphorus Inorganic materials 0.000 description 3
- 230000000717 retained effect Effects 0.000 description 3
- 150000003432 sterols Chemical class 0.000 description 3
- 235000000346 sugar Nutrition 0.000 description 3
- CSCPPACGZOOCGX-UHFFFAOYSA-N Acetone Chemical compound CC(C)=O CSCPPACGZOOCGX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 229910019142 PO4 Inorganic materials 0.000 description 2
- 235000001014 amino acid Nutrition 0.000 description 2
- YZXBAPSDXZZRGB-DOFZRALJSA-N arachidonic acid Chemical compound CCCCC\C=C/C\C=C/C\C=C/C\C=C/CCCC(O)=O YZXBAPSDXZZRGB-DOFZRALJSA-N 0.000 description 2
- HVYWMOMLDIMFJA-DPAQBDIFSA-N cholesterol Chemical compound C1C=C2C[C@@H](O)CC[C@]2(C)[C@@H]2[C@@H]1[C@@H]1CC[C@H]([C@H](C)CCCC(C)C)[C@@]1(C)CC2 HVYWMOMLDIMFJA-DPAQBDIFSA-N 0.000 description 2
- 239000003925 fat Substances 0.000 description 2
- 235000019197 fats Nutrition 0.000 description 2
- 210000002216 heart Anatomy 0.000 description 2
- 229930195733 hydrocarbon Natural products 0.000 description 2
- 150000002430 hydrocarbons Chemical class 0.000 description 2
- 239000012535 impurity Substances 0.000 description 2
- 239000000463 material Substances 0.000 description 2
- 210000000056 organ Anatomy 0.000 description 2
- NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-K phosphate Chemical compound [O-]P([O-])([O-])=O NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 2
- 239000010452 phosphate Substances 0.000 description 2
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 2
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 2
- 238000001179 sorption measurement Methods 0.000 description 2
- 150000008163 sugars Chemical class 0.000 description 2
- 150000003626 triacylglycerols Chemical class 0.000 description 2
- 238000005406 washing Methods 0.000 description 2
- OYPRJOBELJOOCE-UHFFFAOYSA-N Calcium Chemical compound [Ca] OYPRJOBELJOOCE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000004215 Carbon black (E152) Substances 0.000 description 1
- 101100072702 Drosophila melanogaster defl gene Proteins 0.000 description 1
- 102000002322 Egg Proteins Human genes 0.000 description 1
- 108010000912 Egg Proteins Proteins 0.000 description 1
- MHAJPDPJQMAIIY-UHFFFAOYSA-N Hydrogen peroxide Chemical compound OO MHAJPDPJQMAIIY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 102000004895 Lipoproteins Human genes 0.000 description 1
- 108090001030 Lipoproteins Proteins 0.000 description 1
- 208000007014 Retinitis pigmentosa Diseases 0.000 description 1
- DHKHKXVYLBGOIT-UHFFFAOYSA-N acetaldehyde Diethyl Acetal Natural products CCOC(C)OCC DHKHKXVYLBGOIT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 125000002777 acetyl group Chemical class [H]C([H])([H])C(*)=O 0.000 description 1
- 230000002411 adverse Effects 0.000 description 1
- 150000001298 alcohols Chemical class 0.000 description 1
- 229940114079 arachidonic acid Drugs 0.000 description 1
- 235000021342 arachidonic acid Nutrition 0.000 description 1
- 230000009286 beneficial effect Effects 0.000 description 1
- 210000005013 brain tissue Anatomy 0.000 description 1
- 239000011575 calcium Substances 0.000 description 1
- 229910001424 calcium ion Inorganic materials 0.000 description 1
- 244000309466 calf Species 0.000 description 1
- 210000003169 central nervous system Anatomy 0.000 description 1
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 description 1
- WORJEOGGNQDSOE-UHFFFAOYSA-N chloroform;methanol Chemical compound OC.ClC(Cl)Cl WORJEOGGNQDSOE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 235000012000 cholesterol Nutrition 0.000 description 1
- 238000004587 chromatography analysis Methods 0.000 description 1
- 238000003776 cleavage reaction Methods 0.000 description 1
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 1
- 238000001816 cooling Methods 0.000 description 1
- 235000014113 dietary fatty acids Nutrition 0.000 description 1
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 1
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 1
- 238000001035 drying Methods 0.000 description 1
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 1
- 210000002969 egg yolk Anatomy 0.000 description 1
- 235000013345 egg yolk Nutrition 0.000 description 1
- 150000002118 epoxides Chemical class 0.000 description 1
- 150000002148 esters Chemical class 0.000 description 1
- PSLIMVZEAPALCD-UHFFFAOYSA-N ethanol;ethoxyethane Chemical compound CCO.CCOCC PSLIMVZEAPALCD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000000194 fatty acid Substances 0.000 description 1
- 229930195729 fatty acid Natural products 0.000 description 1
- 150000004665 fatty acids Chemical class 0.000 description 1
- 238000001914 filtration Methods 0.000 description 1
- 125000002485 formyl group Chemical class [H]C(*)=O 0.000 description 1
- 230000003301 hydrolyzing effect Effects 0.000 description 1
- 150000002500 ions Chemical class 0.000 description 1
- 230000000366 juvenile effect Effects 0.000 description 1
- 210000004185 liver Anatomy 0.000 description 1
- 208000002780 macular degeneration Diseases 0.000 description 1
- 239000000693 micelle Substances 0.000 description 1
- 210000000944 nerve tissue Anatomy 0.000 description 1
- 230000003372 organotropic effect Effects 0.000 description 1
- 239000000825 pharmaceutical preparation Substances 0.000 description 1
- 229910001414 potassium ion Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000002244 precipitate Substances 0.000 description 1
- 239000012264 purified product Substances 0.000 description 1
- 238000011084 recovery Methods 0.000 description 1
- 210000001525 retina Anatomy 0.000 description 1
- 230000002207 retinal effect Effects 0.000 description 1
- 229920006395 saturated elastomer Polymers 0.000 description 1
- 230000007017 scission Effects 0.000 description 1
- 239000010414 supernatant solution Substances 0.000 description 1
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 1
- 210000001550 testis Anatomy 0.000 description 1
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 1
- 210000001835 viscera Anatomy 0.000 description 1
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07F—ACYCLIC, CARBOCYCLIC OR HETEROCYCLIC COMPOUNDS CONTAINING ELEMENTS OTHER THAN CARBON, HYDROGEN, HALOGEN, OXYGEN, NITROGEN, SULFUR, SELENIUM OR TELLURIUM
- C07F9/00—Compounds containing elements of Groups 5 or 15 of the Periodic Table
- C07F9/02—Phosphorus compounds
- C07F9/06—Phosphorus compounds without P—C bonds
- C07F9/08—Esters of oxyacids of phosphorus
- C07F9/09—Esters of phosphoric acids
- C07F9/10—Phosphatides, e.g. lecithin
- C07F9/103—Extraction or purification by physical or chemical treatment of natural phosphatides; Preparation of compositions containing phosphatides of unknown structure
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
Landscapes
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Public Health (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
- Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
- Steroid Compounds (AREA)
Description
Dr. F. Zumetein sen. - Dr. E. Aesmann Dr.R.Koenigsberger - Dipl.Fhye.R. HolzhauerDr. F. Zumetein Sr. - Dr. E. Aesmann Dr.R.Koenigsberger - Dipl.Fhye.R. Woodcutter
8 Mönchen 2, BröuhouMtroß« 4/III8 monks 2, BröuhouMtroß «4 / III
ETAPH A R M ehem. pharm. Laboratorium
Gesellschaft m.b.H. in Wien (Österreich)ETAPH ARM formerly pharm. laboratory
Gesellschaft mbH in Vienna (Austria)
Verfahren zur Herstellung von hochgereinigten
Phosphatiden aus tierischen OrganenProcess for the production of highly purified
Phosphatides from animal organs
Die Erfindung betrifft ein Verfahren zur Herstellung von
hochgereinigten Phosphatiden aus tierischen Organen. Phosphatide bzw. Phosphatxdgemische kommen in tierischen Organen
stets mit Begleitsubstanzen vergesellschaftet vor, die für
eine spätere Verwendung störend oder ungeeignet sind und
deshalb abgetrennt werden müssen. Als Beispiele für solche Begleitsubstanzen seien erwähnt: Peptide, Aminosäuren, Sterine,
Sterinester, Mono-, Di- und Triglyceride, freie Fettsäuren
und Zucker.The invention relates to a method for producing
highly purified phosphatides from animal organs. In animal organs, phosphatides or phosphate mixtures are always associated with accompanying substances that are disruptive or unsuitable for later use
therefore have to be separated. Examples of such accompanying substances are: peptides, amino acids, sterols, sterol esters, mono-, di- and triglycerides, free fatty acids and sugars.
Verfahren zur Hhosphatidgewinnung und ihrer Reinigung sind schon mehrfach beschrieben worden. So gibt die DL-PS 62 die Lehre, pflancenphosphatidhaltiges Material mit Alkohol und Chloroform zu extrahieren und nach Filtration vom Unlöslichen das Lösungsmittel im Vakuum abzuziehen. Ein solchesProcesses for the production of phosphatide and its purification are has already been described several times. For example, DL-PS 62 teaches the use of plant phosphatide-containing material with alcohol and to extract chloroform and after filtration from the insoluble matter, the solvent is removed in vacuo. One such
409807/1006409807/1006
Darstellungsverfahren führt zu Phosphatidgeniischen, deren Reinheitsgrad noch sehr zu wünschen übrig läßt. Würde beispielsweise ein phosphatidhaltiges Material aus tierischen Organen auf diese V/eise behandelt werden, wären die Phosphatide noch u.a. mit Zucker und Aminosäuren verunreinigt.Representation process leads to phosphatide genes, their degree of purity still leaves a lot to be desired. For example, a phosphatide-containing material from animal organs would be are treated in this way, the phosphatides would still be contaminated with sugar and amino acids, among other things.
Auch die Maßnahmen, die die DT-AS 1 241 559 sowie die GB-PS 896,903 zur Herstellung eines arachidonsäurereichen Phosphatides unter Anwendung von vier Verfahrensatufen vorschlagen, sind ungenügend, falls sehr reine Phosphatide gewünscht werden. Nach diesem bekannten Verfahren muß erst in zwei Verfahrensstufen durch aufeinanderfolgendes Entwässern eines tierischen Organes mit Alkohol und durch Extraktion sämtlicher Lipoide mit Petroläther ein Gesamtlipoidextrakt hergestellt werden, der dann mit aliphatischen Ketonen extrahiert, dabei aber nur unvollständig von Neutralfetten und Glyceriden befreit wird und schließlich durch Extraktion mit einen aliphatischen Ester oder einem Alkohol-Chlorkohlenwasserstoff-Gemisch und Abscheidung des Phosphatidgemisches aus dieser Extraktionslösung durch Kühlen aufgearbeitet wird. Diese beiden Behandlungsvorgänge des zuvor gewonnenen Gesamtlipoidextraktes reichen aber nicht aus, um Phosphatide zu erhalten, welche sowohl frei von wasserlöslichen, nicht phosphatidisehen Begleitstoffen sind, als auch für die Neutralfette und Glyceride enthalten. Dies trifft auch die mehrstufige Arbeitsweise gemäß der DT-P8 635 325 zur Gewinnung von Lipoiden aus Geweben des Zentralnervensystems zu, wobei in drei aufeinanderfolgenden Stufen mittels bestimmter Lösungsmittel zunächst die Gesantlipoide gewonnen werden, die dann von Cholesterin und wasserlöslichen Verunreinigungen im Wege einer speziellen Behandlung mit Aceton befreit werden müssen; die native Zusammensetzung bleibt dabei nicht erhalten und auch eine für ein Reinprodukt notwendige weitgehende Abtrennung der phosphorfreien Lipoide von den Phosphatiden findet nicht statt.Also the measures that the DT-AS 1 241 559 and the GB-PS 896,903 for the production of an arachidonic acid-rich phosphatide propose using four procedural steps insufficient if very pure phosphatides are desired. According to this known process, two stages of the process must be carried out by successively dehydrating an animal organ with alcohol and by extracting all lipoids with petroleum ether a total lipid extract can be produced, which is then extracted with aliphatic ketones, but only incompletely is freed from neutral fats and glycerides and finally by extraction with an aliphatic ester or a Alcohol-chlorohydrocarbon mixture and separation of the phosphatide mixture from this extraction solution by cooling is worked up. However, these two treatment processes of the previously obtained total lipid extract are not sufficient to achieve To obtain phosphatides, which are free of water-soluble, non-phosphatidic accompanying substances, as well as for the Contains neutral fats and glycerides. This also applies to the multi-stage working method according to DT-P8 635 325 for extraction of lipoids from tissues of the central nervous system too, taking in three successive stages by means of certain solvents First the Gesantlipoide are obtained, which is then removed from cholesterol and water-soluble impurities by way of a special treatment with acetone must be freed; the native composition is not retained and also there is no extensive separation of the phosphorus-free lipoids from the phosphatides which is necessary for a pure product instead of.
409807/1006409807/1006
Der Erfindung liegt die Aufgabe zugrunde, aus dem Gesamtlipoidextrakt tierischer Organe ein sehr reines Phosphatidgemisch zu gewinnen, um dara\is eine injizierbare, stabile wässerige Dispersion herstellen zu können. Darüber hinaus soll die native Zusammensetzung der Phosphatide weitestgehend erhalten bleiben.The invention is based on the object, from the total lipid extract A very pure phosphatide mixture can be obtained from animal organs in order to obtain an injectable, stable aqueous dispersion to be able to manufacture. In addition, the native composition of the phosphatides should be retained as far as possible.
Das erfindungsgemäße Verfahren beruht im Prinzip darauf, einen Gesamtlipoidextrakt durch eine bestimmte Lösungsmittelbehandlung von den Proteinen vollständig zu befreien und aus diesem vorgereinigten Gesamtlipoidextrakt entweder zuerst die wasserlöslichen Verunreinigungen durch einen speziellen Waschvorgang zu entfernen und dann zur Gewinnung des hochreinen Phosphatidgemisches die anderen, phosphorfreien Lipoide durch einen Adsorptionsvorgang abzutrennen, oder aber zuerst die Adsorption und dann den V/aschvorgang vorzunehmen.The inventive method is based in principle on a Total lipid extract to be completely freed from the proteins by a specific solvent treatment and pre-purified from this Total lipid extract either first removes the water-soluble impurities through a special washing process to remove and then to the recovery of the high-purity phosphatide mixture to separate the other, phosphorus-free lipoids by an adsorption process, or else adsorption first and then carry out the ash process.
Zur Erläuterung der angestrebten besonders hohen Reinheit sei angeführt, daß das zu gewinnende Phosphatidgemisch eiweißfrei und frei von Peptiden sein muß und darüber hinaus weitest- . gehend befreit von Aminosäuren, Sterinen, Sterinestern, Mono-, Di- und Triglyceriden, freien Fettsäuren und Zuckern sein soll. Bei der nativen Zusammensetzung der Phosphatide darf keine Änderung in der für die einzelnen Organe spezifischen Zusammensetzung der Einzelkomponenten eintreten. Das bedeutet beispielsweise, daß der Aldehydgehalt als Maß für den Gehalt an Plasmalogenen (Acetalphosphatide) erhalten bleiben muß und daß am Fettsäuremuster der.Phosphatide keine Veränderung wie Epoxidbildung oder Hydroperoxxdbildung auftreten darf. Ferner darf das Verfahren zur Reindarstellung von Phosphatiden nicht zu einer merklichen Erhöhung des Gehaltes an Lysoverbindungen führen, d.h., hydrolytische Spaltungen müssen vermieden werden. Daraus folgt ferner, daß der Phosphatid-Rohextrakt nur mit neutralen Salzlösungen schonend behandelt werden darf, wobei noch die Einschränkung 'gemacht v/erden muß, daß Calcium- und Kaliumionen bei den Reinigungsoperationen nicht zugegen sein dürfen, v/eil diese Ionen von den Phosphatiden salzartig bzw. auch adsorptiv gebunden werden und dann eine späte:ng> pharmazeutische Verwendung nachteilig beeinflussen können.To explain the particularly high purity sought, it should be mentioned that the phosphatide mixture to be obtained is protein-free and must be free of peptides and, moreover, as far as possible. going free of amino acids, sterols, sterol esters, mono-, Di- and triglycerides, free fatty acids and sugars should be. In the case of the native composition of the phosphatides, none must be used Changes in the composition of the individual components specific to the individual organs occur. This means, for example, that the aldehyde content as a measure of the content of plasmalogens (acetal phosphatides) must be retained and that on Fatty acid pattern of the phosphatides no change such as epoxide formation or hydroperoxide formation may occur. Furthermore, the process for the pure preparation of phosphatides must not be a noticeable increase in the content of lyso compounds lead, i.e. hydrolytic cleavage must be avoided. It also follows that the raw phosphatide extract only contains neutral salt solutions may be treated gently, although the restriction must be made that calcium and Potassium ions must not be present during the cleaning operations, because these ions are saline or salt-like from the phosphatides. also be bound adsorptively and then a late: ng> can adversely affect pharmaceutical use.
40 98 07/100640 98 07/1006
Gemäß der vorliegenden Erfindung wird das vorliegenden Problem dadurch gelöst, daß der aus tierischen Organen, beispielsweise aus Hirn- und Nervengewebe, Netzhaut, Herzen, Testes, Eigelb oder dgl., durch Extraktion mittels organischer Lösungsmittel, wie z.B. Methanol-Chloroform oder Äthanol-Diäthyläther, gewonnene Gesamtlipoidextrakt einem dreistufigen Reinigungsverfahren unterworfen wird, das im nachstehenden näher erläutert wird. Dabei ist es zur vollständigen Reinigung der Phosphatide wichtig, daß die Lipoproteide des Gesamtlipοidextraktes zunächst in Lipoide und Proteine aufgespalten und die Proteine daraus entfernt werden.According to the present invention, the present problem is solved in that the animal organs, for example from brain and nerve tissue, retina, heart, testes, egg yolk or the like, by extraction using organic solvents, such as methanol-chloroform or ethanol-diethyl ether, total lipid extract obtained in a three-stage purification process is subjected, which is explained in more detail below. It is used to completely clean the Phosphatides are important to the lipoproteins of the total lipid extract first split into lipoids and proteins and the proteins are removed from them.
Erfindungsgemäß wird daher in der ersten Reinigungsstufe a) der Gesamtlipoidextrakt mehrmals in alkoholhaltigen Lösungsmitteln aufgenommen, auf Temperaturen bis zu etwa 40°C erwärmt und das Lösungsmittel im Vakuum vorsichtig abgezogen. Als alkoholhaltige Lösungsmittel können Gemische aus niedermolekularen Alkoholen und unpolaren oder schwach polaren organischen Lösungsmitteln, deren Siedepunkte 100 C nicht überschreiten, gegebenenfalls mit einem geringen Wassergehalt, verwendet werden. Geeignete alkoholhaltige Lösungsmittel sind beispielsweise Gemische aus Methanol, Chloroform und gegebenenfalls Wasser oder aus Äthanol und Benzol.According to the invention, therefore, in the first cleaning stage a) the total lipid extract taken up several times in alcohol-containing solvents, heated to temperatures of up to about 40 ° C and the solvent is carefully removed in vacuo. Mixtures of low molecular weight solvents can be used as alcohol-containing solvents Alcohols and non-polar or weakly polar organic solvents with boiling points not exceeding 100 ° C, optionally with a low water content, can be used. Suitable alcohol-containing solvents are for example mixtures of methanol, chloroform and optionally water or of ethanol and benzene.
Vorzugsweise wird zunächst ein Gemisch aus Methanol, Chloroform und Wasser, dann ein Gemisch aus Äthanol und Benzol und schließlich ein Gemisch aus Methanol und Chloroform angewendet.Preferably a mixture of methanol, chloroform and water, then a mixture of ethanol and benzene and finally a mixture of methanol and chloroform was applied.
Das nach wiederholter Behandlung mit alkoholhaltigen Lösungsmitteln und unter schonenden Trocknungsbedingungen erhaltene Produkt, also der getrocknete Extrakt, wird dann mit Petroläther versetzt und unter dem Schutz eines inerten Gases bei Gefrierschranktemperaturen einige Zeit stehen gelassen, z.B. bei -20 C etwa einen Tag "lang oder bei tieferen Temperaturen in noch kürzerer Zeit. Die nach dieser Behandlung ausgefällten Proteine werden von der die Lipoide enthaltenden Petrolätherlösung durch Zentrifugieren abgetrennt.That after repeated treatment with alcohol-containing solvents and the product obtained under gentle drying conditions, i.e. the dried extract, is then mixed with petroleum ether and left to stand for some time under the protection of an inert gas at freezer temperatures, e.g. at -20 C for about a day or at lower temperatures in an even shorter time. The precipitated after this treatment Proteins are extracted from the petroleum ether solution containing the lipids separated by centrifugation.
409807/1006409807/1006
Vorzugsweise wird diese Abtrennungsbehandlung an dem vom Petroläther durch Eindampfen im Vakuum bei 40 C befreiten und getrockneten Rückstand wiederholt, jedoch in diesem Fall nicht mit Petroläther, sondern mit einem alkoholhaltigen Lösungsmittel, z.B. einem Gemisch aus Methanol und Chloroform, damit eine vollständige Entfernung der Proteine gewährleistet ist.This separation treatment is preferably freed from petroleum ether by evaporation in vacuo at 40.degree and dried residue repeatedly, but in this case not with petroleum ether, but with an alcohol-containing one Solvent, e.g. a mixture of methanol and chloroform, to ensure complete removal of the proteins is.
In. der zweiten Reinigungsstufe b) wird der von den Proteinen und danach durch Eindampfen im Vakuum von dem Lösungsmittel befreite Extrakt, der außer den Lipoiden noch die wasserlöslichen Begleitstoffe enthält, zur vollständigen Entfernung der wasserlöslichen Begleitstoff mit einem polaren bzw. schwach polaren, im Falle der Phosphatide die Bildung mizellarer Strukturen verhindernden Lösungsmittel, das auch mit Wasser nicht oder nur wenig mischbar sein darf, versetzt. Die so erhaltene Lösung wird mehrmals mit Natriumsalzlösungen und anschließend mit Wasser gewaschen. Als polare bzw. schwach polare Lösungsmittel können vorteilhaft Essigsäureäthylester, Diethylether und Chloroform bzw. diese enthaltende Gemische verwendet werden. Zum Waschen mit Natriumsalzlösungen werden verschieden konzentrierte, z.B. gesättigte wässerige Natriumchloridlösungen verwendet. Die so gereinigte Lösung wird vom Wasser befreit und im Vakuum bis zur Lösungsmittelfreiheit eingedampft.In. the second purification stage b) is that of the proteins and then the extract freed from the solvent by evaporation in vacuo, which apart from the lipoids also contains the water-soluble ones Contains accompanying substances, for complete removal of the water-soluble accompanying substance with a polar or weakly polar solvents that prevent the formation of micellar structures in the case of phosphatides, and that also with water must not be miscible or only slightly mixable. The solution obtained in this way is several times with sodium salt solutions and then washed with water. As polar or weakly polar solvents, ethyl acetate, Diethyl ether and chloroform or mixtures containing these can be used. Be used for washing with sodium salt solutions different concentrations, e.g. saturated aqueous sodium chloride solutions are used. The solution purified in this way is used by the Freed from water and evaporated in vacuo until there is no solvent.
In der dritten Reinigungsstufe c) wird der von Wasser und Lösungsmittel befreite Eindampfungsrückstand aus der zv/eiten Reinigungsstufe erneut mit organischen, jedoch unpolaren, im Falle der Phosphatide die Bildung von Mizellen ermöglichenden Lösungsmitteln, deren Siedepunkte unter 1G0°C liegen, versetzt. Bei dieser Lösungshersteilung können vorteilhaft Pentan, Eexan, Heptan sowie Gemische dieser Kohlenwasserstoffe, einschließlich Petroläther, Anwendung finden. Zur nun erfolgenden Abtrennung, von phosphorfreien Lipoiden, z.B. von Mono-, Di- und Txiglyceriden, wird die Kohlenwasserstofflösung über Kieselgel, vorteilhaft über eine mit Kieselgel gefüllte Säule filtriert.The third cleaning stage c) removes water and solvents freed evaporation residue from the second Purification stage again with organic, but non-polar, which in the case of phosphatides enables the formation of micelles Solvents with boiling points below 1G0 ° C are added. In this solution preparation it is advantageous to use pentane, Eexan, heptane and mixtures of these hydrocarbons, including Petroleum ether, find application. For the subsequent separation of phosphorus-free lipoids, e.g. from mono-, Di- and Txiglycerides, the hydrocarbon solution is about Silica gel, advantageously filtered through a column filled with silica gel.
409807/1006409807/1006
Bei defl! erfindungsgemäßen Px-inigungsverf ahreri kann die zweite Reinigungsstufe b) mit der dritten Reinigungsstufe c) in ihrer Reihenfolge vertauscht werden, ohne den Reinigungseffekt· zu beeinträchtigen.At defl! Px cleaning method according to the invention can use the second Cleaning stage b) with the third cleaning stage c) in their The sequence can be reversed without impairing the cleaning effect.
Das nach dem erfindungsgemäßen Verfahren erhaltene Phosphat!dgemisch zeichnet sich durch große Rein]ieit aus und ist daher zur Herstellung von wässerigen injizierbaren stabilen Dispersionen gut geeignet. V/eiterhin bleibt die luitive Zusammensetzung des Phosphatidgeaiisches weitgehend erhalten und seine Verwendung für pharmazeutische Präparate ist sehr vorteilhaft.The phosphate mixture obtained by the process according to the invention is characterized by great purity and is therefore well suited for the production of aqueous injectable stable dispersions. The logical composition still remains of the Phosphatidgeaiisches largely preserved and his Use for pharmaceutical preparations is very beneficial.
Die erfindungsgenäß erhaltenen hochgereinigten, organspezifischen Phosphatj.de eignen sich durch ihre organo trope Wirkung zur Behandlung von Erkrankungen innerer Organe. Beispielsweise können Hetzhautphosphatide mit Erfolg bei der Behandlung von Makulopathien, Lietamorphopsien und juvenilen Formen von Retinitis pigmentosa eingesetzt werden.The highly purified, organ-specific ones obtained according to the invention Phosphatj.de are suitable due to their organotropic effect for the treatment of diseases of internal organs. For example can be used with success in treating retinal phosphatides Maculopathies, lietamorphopsias, and juvenile forms of retinitis pigmentosa can be used.
Die Erfindung wird anhand der nachfolgenden Beispiele näher erläutert, ohne hierauf beschränkt zu sein:The invention is explained in more detail using the following examples, without being restricted to them:
Beispiel 1 :Example 1 :
a) 9,2 g Gesamt lipoi.dextrakt aus Kälberherzen wurden mit 500 ml einer Mischung von Chloroform, Methanol und 7/asser im Verhältnis 16 : 8 : 1 versetzt und die trübe Lösung im Vakuum bei 4-00C eingedampft. Dieser Vorgang wurde mit der gleichen Lösungsmittelmenge wiederholt. Nach abermaligem Eindampfen wurde der Rückstand in 50 ml Benzol gelöst und diese Lösung mit dem gleichen Volumen Äthanol versetzt und wieder im Vakuum bei 400C eingedampft. Auch dieser Schritt wurde mit den gleichen Lösungsmittelmengen wiederholt. Der Eindampfrückstand wurde dann 18 h im Vakuumexsikkator über Silikagel getrocknet. Danach wurde mit 500 ml Petroläther (Siedebereich 40 - 60°C) versetzt und die Luft im Kolben mit K2 verdrängt. Diese Lösung wurde nun 24 h in der {Tiefkühltruhe bei"-200C stehen gelassen. Anschliessend wurde noch kalt JO min bei 4000 Touren zentrifugiert. Die8: 1 was added and the cloudy solution was evaporated in vacuo at 4-0 0 C a) 9.2 g total lipoi.dextrakt calf hearts were treated with 500 ml of a mixture of chloroform, methanol, and 7 / ater relative sixteenth This process was repeated with the same amount of solvent. After repeated evaporation, the residue was dissolved in 50 ml of benzene, and the same volume of ethanol was added to this solution and the mixture was again evaporated at 40 ° C. in vacuo. This step was also repeated with the same amounts of solvent. The evaporation residue was then dried over silica gel in a vacuum desiccator for 18 hours. 500 ml of petroleum ether (boiling range 40-60 ° C.) were then added and the air in the flask was displaced with K 2. This solution was now 24 hours in the freezer at { "-20 0 C allowed to stand. Then was still cold JO min centrifuged at 4000 tours. The
409 807/1006409 807/1006
BAD ORIGINALBATH ORIGINAL
klare Lösung wurde abgegossen und im Vakuum bei 40 G zur Trockene eingedampft-. Der iiindajripf rückstand wurde in ^O ml Chloroform gelöst und mit dom gleichen VoIumcn Lethanol versetzt. Nach 15-stündigem. Stehen in der Tiefkühltruhe bei -20-C wurde der gebildete flockige Niederschlag durch 10 min Zentrifugieren bei 3000 Touren abgetrennt. Die klare überstehende Lösung wurde im Vakuum bei 400C eingedampft. Ausbeute: 8,8 g.clear solution was poured off and evaporated to dryness in vacuo at 40 g. The residue was dissolved in iiindajripf ^ O mL of chloroform and treated with dom same VoIumcn lEthanol. After 15 hours. Standing in the freezer at -20.degree. C., the flaky precipitate formed was separated off by centrifuging at 3000 rpm for 10 min. The clear supernatant solution was evaporated at 40 ° C. in vacuo. Yield: 8.8 g.
b) Der von Proteinen und alkoholhaltigem Lösungsmittel befreite Extrakt (8,8 g) wurde in 100 ml Äther gelöst und Jmal mit je 100 ml gesättigter Kochsalslösung ausgeschüttelt. Anschließend wurde die Ätherphase einmal mit 100 ml Wasoer ausgeschüttelt. Etwaige Smulsionsbildung wurde durch vorsichtige Zugabe von wenigen Tropfen Ethanol beseitigt.' Die iLtherphase wurde über NapSO^ getrocknet und bei 40 C im Vakuum eingedampft. Ausbeute: 6,1 g. Das Produkt war frei von Aminosäuren, Peptiden und Kohlehydraten.b) The extract freed from proteins and alcohol-containing solvent (8.8 g) was dissolved in 100 ml of ether and each time with 100 ml of saturated saline solution shaken out. Afterward the ether phase was shaken out once with 100 ml Wasoer. Any smulsion formation was prevented by careful addition of removes a few drops of ethanol. ' The iLtherphase was over NapSO ^ dried and evaporated at 40 C in a vacuum. Yield: 6.1 g. The product was free from amino acids, peptides and carbohydrates.
c) 6 g des vorgereinigten Extraktes wurden in 14 g Hexan gelöst und durch eine mit 12 g Kieselgel der Firma ^erck, Darmstadt, gefüllte*Chromatographiersäule filtriert. Nachdem die Lösung durch die Säule durchgelaufen war ^ wurde die Säule mit J6 ml Hexan nacheluiert. Das gesamte Hexan-Eluat wurde bei 40 C im Vakuum eingedampft. Ausbeute: 4,1 g. Das Produkt war frei von Glyceriden, Sterinen und deren Estern, freien Fettsäuren und sonstigen phosphorfreien Lipoiden. Der Phosphorgehalt betrug 3,87 %.c) 6 g of the pre-purified extract were dissolved in 14 g of hexane and filtered through a chromatography column filled with 12 g of silica gel from the company ^ erck, Darmstadt. After the solution had passed through the column ^ the column was filled with J6 ml Hexane re-eluted. The entire hexane eluate was at 40 C im Evaporated in vacuo. Yield: 4.1 g. The product was free from glycerides, sterols and their esters, free fatty acids and other phosphorus-free lipoids. The phosphorus content was 3.87%.
5 g eines .aus Schweinenetzhäuten gewonnenen G-esamtlipoidextraktes wurden, wie in Beispiel 1, nach der unter a) beschriebenen Verfahrensweise vorgereinigt. Das so · vorgereinigte Produkt wurde dann zuerst nach der unter c) und dann nach der unter b) beschriebenen Verfahrensweise weitergereinigt. Ausbeute: 2,8 g. Das Produkt war frei von Proteinen, Peptiden, Aminosäuren, Kohlehydraten und.phosphorfreien Lipoiden. Der Phosphorgehalt betrug 3,S7 %· 5 g of a total lipoid extract obtained from pig retins were prepurified, as in Example 1, according to the procedure described under a). The product pre-purified in this way was then further purified first according to the procedure described under c) and then according to the procedure described under b). Yield: 2.8 g. The product was free of proteins, peptides, amino acids, carbohydrates and phosphorus-free lipoids. The phosphorus content was 3, S7 %
409807/1006409807/1006
BAOORiGINALBAOORiGINAL
10 g eines aus Schweineleber gewonnenen Gesamtlipoidextraktes
wurden wie in Beispiel 1 nach der dort unter a) beschriebenen Verfahrensweise vorgereinigt. Danach wurde das vorgereinigte
Produkt wie unter b) beschrieben weiter^ereinigt, wobei statt
Äther eine Mischung aus Methanol und Chloroform verwendet wurde.10 g of a total lipid extract obtained from pig liver were prepurified as in Example 1 using the procedure described there under a). Then the pre-cleaned
Product further purified as described under b), a mixture of methanol and chloroform being used instead of ether.
Das so gereinigte Produkt wurde dann nach der unter c) beschriebenen Arbeitsweise von phosphorfreien Lipoiden befreit, wobei Petroläther (Siedebereich 4-0 bis 600O) anstelle von Hexan verwendet wurde. Die Ausbeute betrug 4,8 g. Das Produkt war frei von Proteinen, Peptiden, Aminosäuren, Kohlehydraten und phosphorfreien Lipoiden. Der Phosphorgehalt betrug 3,68 %.The thus purified product was then freed by the procedure described under c) operation of phosphorus-free lipoids, with petroleum ether (boiling range 4-0 to 60 0 O) was used instead of hexane. The yield was 4.8 g. The product was free of proteins, peptides, amino acids, carbohydrates and phosphorus-free lipoids. The phosphorus content was 3.68%.
409807/ 1006409807/1006
Claims (3)
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| AT658172A AT315359B (en) | 1972-07-31 | 1972-07-31 | Process for the production of highly purified phosphatides from animal organs |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| DE2335334A1 true DE2335334A1 (en) | 1974-02-14 |
| DE2335334B2 DE2335334B2 (en) | 1976-09-09 |
Family
ID=3587740
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| DE19732335334 Ceased DE2335334B2 (en) | 1972-07-31 | 1973-07-11 | PROCESS FOR THE RECOVERY OF HIGHLY PURIFIED PHOSPHATIDES FROM ANIMAL ORGANS |
Country Status (4)
| Country | Link |
|---|---|
| AT (1) | AT315359B (en) |
| DE (1) | DE2335334B2 (en) |
| FR (1) | FR2194413B1 (en) |
| GB (1) | GB1388094A (en) |
Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| DE2512639A1 (en) * | 1974-03-22 | 1975-10-16 | Unilever Nv | METHOD FOR PURIFYING PHOSPHATIDES |
| EP0145005A2 (en) * | 1983-12-08 | 1985-06-19 | VEB Arzneimittelwerk Dresden | Pulmonary surfactant, process for its preparation and its pharmaceutical use |
Families Citing this family (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CH658458A5 (en) * | 1981-12-17 | 1986-11-14 | Lucchini Lab Sa | PROCESS FOR OBTAINING LACTO-N-NORHEXAOSYL CERAMIDE. |
| ITPD20050164A1 (en) * | 2005-05-30 | 2006-11-30 | Fidia Farmaceutici | PROCESS FOR PREPARATION AND ISOLATION OF PHOSPHATIDES |
-
1972
- 1972-07-31 AT AT658172A patent/AT315359B/en not_active IP Right Cessation
-
1973
- 1973-07-11 DE DE19732335334 patent/DE2335334B2/en not_active Ceased
- 1973-07-13 GB GB3343473A patent/GB1388094A/en not_active Expired
- 1973-07-31 FR FR7327960A patent/FR2194413B1/fr not_active Expired
Cited By (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| DE2512639A1 (en) * | 1974-03-22 | 1975-10-16 | Unilever Nv | METHOD FOR PURIFYING PHOSPHATIDES |
| EP0145005A2 (en) * | 1983-12-08 | 1985-06-19 | VEB Arzneimittelwerk Dresden | Pulmonary surfactant, process for its preparation and its pharmaceutical use |
| EP0145005A3 (en) * | 1983-12-08 | 1987-09-09 | Veb Arzneimittelwerk Dresden | Pulmonary surfactant, process for its preparation and its pharmaceutical use |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| FR2194413A1 (en) | 1974-03-01 |
| AT315359B (en) | 1974-05-27 |
| DE2335334B2 (en) | 1976-09-09 |
| FR2194413B1 (en) | 1976-08-13 |
| GB1388094A (en) | 1975-03-19 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| DE3883035T2 (en) | Saponin complexes with phospholipids and pharmaceutical and cosmetic compositions containing them. | |
| DE1900959A1 (en) | Process for the production of plant phosphatides with universal emulsifying power | |
| CH637528A5 (en) | PROCESS FOR OBTAINING HIGH OELHALTIGEN CLEANED phosphatidylcholines. | |
| DE2946601A1 (en) | METHOD FOR EXTEMPORATELY PRODUCING LIPOSOMES | |
| EP0185235B1 (en) | Process for the isolation of phosphatidylcholine free from lysophosphatidylcholine from egg powder | |
| DE1617680C3 (en) | Process for the production of highly purified phosphatidylcholine | |
| EP0054768B1 (en) | A process for the separation of acylated phospholipids from phosphatidylcholin products containing them | |
| EP0220453B1 (en) | Use of extracts of plant pollen in the manufacture of pharmaceutical preparations which reduce the growth of tumour cells, and process for preparing the same | |
| DE2619715A1 (en) | TUMOR ANTIGEN AND METHOD FOR MANUFACTURING THE SAME | |
| DE2335334A1 (en) | PROCESS FOR THE PRODUCTION OF HIGHLY PURIFIED PHOSPHATIDES FROM ANIMAL ORGANS | |
| US5077202A (en) | Process for producing a glycolipid having a high eicosapentaenoic acid content | |
| US3869482A (en) | Method of producing highly purified phosphatides | |
| DE2556592A1 (en) | Oily oral solns. of unsaturated phospholipids - contg. phospholipid and bile acid salt addition cpds. in mixts. of vegetable oils and partial glycerides | |
| Ramesh et al. | Selective extraction of phospholipids from egg yolk | |
| DE3000246A1 (en) | METHOD FOR PRODUCING L- (ALPHA) -GLYCERILPHOSPHORYCHOLINE AND THE PRODUCT OBTAINED THEREOF | |
| DE2756866C2 (en) | N-oleoyl derivatives of phosphatidylethanolamines, processes for their preparation and pharmaceuticals containing these compounds | |
| EP0757055A2 (en) | Glycosides, sugar-free degradation products and derivatives of the same | |
| DE2943167A1 (en) | EXTRACTION METHOD FOR THE PRODUCTION OF APIGENINE AND MEDICINAL PRODUCTS PRODUCED FROM THE LATTER | |
| DE1812204C3 (en) | Process for the production of purified, non-acylatable phosphatide | |
| DE1293705B (en) | Process for obtaining an elastolytically effective pancreatic preparation | |
| DE1173778C2 (en) | PROCESS FOR PREPARING CLEAR, STABLE SOLUTIONS OF HIGH CONTENT CHOLINE PHOSPHORIC ACID DIGLYCERIDE STARS | |
| DE722109C (en) | Process for the production of durable lipoid emulsions from animal organs, secretions or excretions | |
| DE854800C (en) | Process for the extraction of mannitol, phosphatides and sterols from fatty mycelium-forming microorganisms | |
| DE560146C (en) | Process for the production of vitamin-rich, lecithin and sterol-containing extracts from vitamin, lecithin and sterol-containing oils, fats, etc. | |
| DE937247C (en) | Process for the production of anti-anaemic preparations from yeast |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| 8235 | Patent refused |