DE854800C

DE854800C - Process for the extraction of mannitol, phosphatides and sterols from fatty mycelium-forming microorganisms

Info

Publication number: DE854800C
Application number: DEH2841D
Authority: DE
Inventors: Arthur Dr Zimmermann
Original assignee: Henkel AG and Co KGaA
Current assignee: Henkel AG and Co KGaA
Priority date: 1940-09-01
Filing date: 1940-09-01
Publication date: 1952-11-06

Description

Verfahren zur Gewinnung von Mannit, Phosphatiden und Sterinen aus verfetteten mycelbildenden Mikroorganismen Es wurde gefunden, daß man in guter Ausbeute Mannit, Phosphatide und Sterine aus verfetteten mycelbildenden Mikroorganismen erhalten kann, wenn man durch Abpressen oder Zentrifugieren teilweise entwässerte Mycelien drei aufeinanderfolgenden, bis zu 24 Stunden dauernden Extraktionen mit der 2- bis 3fachen Menge an niedermolekularen aliphatischen Alkoholen, insbesondere Methanol, unterwirft, wobei der Wassergehalt der Mycelien in den aufeinanderfolgenden Extraktionsstufen herabgesetzt wird, und zwar so, daß er in der dritten Stufe I bis 40/0 beträgt, wobei man aus dem Extrakt der ersten Stufe das Extraktionsmittel vorzugsweise im Vakuum abdestilliert, die zurückbleibende wässerige Lösung filtriert und aus dem beim Eindampfen anfallenden Rückstand durch Umkristallisieren Mannit gewinnt, aus demExtrakt der zweiten Stufe das Extraktionsmittel und das Wasser vorzugsweise im Vakuum abdestilliert, aus dem Rückstand durch Reinigung mit Wasser und Aceton sowie durch Umfällung die Phosphatide erhält und schließlich aus dem Extrakt der dritten Stufe die Hauptmenge des Extraktionsmittels abdestilliert und aus dem dabei erhaltenen Rückstand durch Behandlung mit verseifenden Mitteln und Extrahieren des Seifengemisches mit Lösungsmitteln die Sterine gewinnt.Process for obtaining mannitol, phosphatides and sterols from fatty mycelium-forming microorganisms It has been found that mannitol, phosphatides and sterols can be obtained in good yield from fatty mycelium-forming microorganisms if partially dehydrated mycelia are pressed or centrifuged for three consecutive hours, up to 24 hours subjected to continuous extractions with 2 to 3 times the amount of low molecular weight aliphatic alcohols, in particular methanol, the water content of the mycelia being reduced in the successive extraction stages so that in the third stage it is from I to 40/0, whereby one the extractant is preferably distilled off in vacuo from the extract of the first stage, the remaining aqueous solution is filtered and mannitol is obtained from the residue obtained during evaporation by recrystallization, and the extractant and water are preferably removed from the extract of the second stage in vacuo estilled, the phosphatides are obtained from the residue by purification with water and acetone and by reprecipitation and finally most of the extractant is distilled off from the extract of the third stage and the sterols are obtained from the residue obtained by treatment with saponifying agents and extraction of the soap mixture with solvents .

Ausgangsstoffe des Verfahrens sind allgemein verfettete mycelbildende Mikroorganismen, d. h. mycelbildende Mikroorganismen, die unter solchen Bedingungen gezüchtet worden sind, daß eine erhöhte Fettbildung stattgefunden hat. Sie 'können dabei nach beliebigen Verfahren, z. B. auf Oberflächen, in Schalen oder submers gezüchtet sein.The starting materials for the process are generally fatty mycelium-forming microorganisms, i. H. mycelial microorganisms which have been grown under such conditions that increased fat formation has taken place. You can use any method, e.g. B. be grown on surfaces, in bowls or submerged.

Verwendbare Mikroorganismen sind z. B. Askomyceten und Phykomyceten, wie Rhizopus oligosporus, Mucor racemosus, Mortierella pusilla, ferner Penicillium- und Aspergillusarten, Endomvces vernalis und Oidium lactis, ferner Fusarie#, Fungi imperfecti u. dgl. m.Usable microorganisms are e.g. B. ascomycetes and phycomycetes, like Rhizopus oligosporus, Mucor racemosus, Mortierella pusilla, also Penicillium- and Aspergillus species, Endomvces vernalis and Oidium lactis, also Fusarie #, Fungi imperfecti and the like m.

Für die Extraktion der Zellinhaltsstoffe werden niedrigmolekulare aliphatischeAlkohole, wieÄthyl-, Isopropyl-, n- oder iso-Butylalkohol u. dgl., verwendet. Ganz besonders hat sich die Behandlung mit Methanol bewährt. Die Lösungsmittel können für sich oder miteinander oder auch im Gemisch mit anderen Lösungsmitteln zur Anwendung gelangen.For the extraction of the cell constituents are low molecular weight aliphatic alcohols such as ethyl, isopropyl, n- or iso-butyl alcohol and the like are used. Treatment with methanol has proven particularly useful. The solvents can on their own or with one another or in a mixture with other solvents for use reach.

Die stufenweise Einwirkung der Alkohole erfolgt zweckmäßig, um eine* spätere Fettextraktion durch schädliche Veränderung der Ausgangsstoffe nicht zu stören, bei Temperaturen unterhalb 40', zweckmäßig bei Zimmertemperatur. Zur Behandlung gelangen frisch abgepreßte oder zentrifugierte Mycelien, die auf einen Wassergehalt von 2o bis 35 gebracht worden sind. Nach beendeter stufenweiser Extraktion empfiehlt es sich, das Eindampfen der Extrakte unter Anwendung besonderer Vorsichtsmaßnahmen, insbesondere unter vermindertem Druck oder unterFüllung derApparatur mit inerten Gasen, vorzunehmen.The gradual action of the alcohols is expedient in order not to interfere with a later fat extraction by harmful changes in the starting materials, at temperatures below 40 ', expediently at room temperature. Freshly squeezed or centrifuged mycelia, which have been brought to a water content of 20 to 35 , are used for treatment. After completion of the step-by-step extraction, it is advisable to evaporate the extracts using special precautionary measures, in particular under reduced pressure or by filling the equipment with inert gases.

Der erste Alkoholextrakt, welcher nach mindestens 8stündiger Vorbehandlung des zentrifugierten und zermahlenen Mycels mit der 2- bis Yachen Alkoholmenge je nach Wassergehalt des Ausgangsmaterials zwischen 20 und 350/0 Wasser in der mycelfreien Lösung enthalten soll, wird im Stickstoffstrom vorsichtig abdestilliert, und zwar bis zur beginnenden Trübung. Man läßt erkalten, wobei sich auf der Oberfläche Fetttropfen abscheiden. Diese werden durch Filtration oder mittels Fettlösungsmittel, wie Äther, Benzin oder chlorierte Kohlenwasserstoffe, entfernt. Hierbei handelt es sich um ein Gemisch aus Fett und freien, hochmolekularen Fettsäuren, deren Verwendung für die Seifenherstellung besonders naheliegt. Nach Entfernung der Fettsäuren wird im Vakuum das Wasser weitgehend, d.h. bis zur beginnenden Kristallisation des Rückstandes, verdampft. Der erkaltete Rückstand'ist gelbbraun gefärbt. Zwecks Entfernung der alköhollöslichen Zucker wird in hochprozentigem Äthylalkohol gelöst und kalt filtriert. Dann löst man den Rückstand in 8o%igem Alkohol in der Wärme, filtriert und läßt 24 Stunden kristallisieren. Die nadelförmigen Kristalle werden abgesaugt, in möglichst wenig Wasser gelöst, durch kurzes Aufkochen mit Tierkohle entfärbt und durch Zusatz von Alkohol erneut kristallisiert. Man erhält Mannit. The first alcohol extract, which should contain between 20 and 350/0 water in the mycelium-free solution after at least 8 hours of pretreatment of the centrifuged and ground mycelium with the 2- to Yachen amount of alcohol, depending on the water content of the starting material, is carefully distilled off in a nitrogen stream, up to incipient cloudiness. It is allowed to cool, and fat droplets are deposited on the surface. These are removed by filtration or using fat solvents such as ether, gasoline or chlorinated hydrocarbons. This is a mixture of fat and free, high molecular weight fatty acids, the use of which is particularly obvious for soap production. After the fatty acids have been removed, the water is largely evaporated in vacuo, ie until the residue begins to crystallize. The cooled residue is yellow-brown in color. To remove the alcohol-soluble sugar, it is dissolved in high-percentage ethyl alcohol and filtered cold. The residue is then dissolved in 80% alcohol in the heat, filtered and left to crystallize for 24 hours. The needle-shaped crystals are sucked off, dissolved in as little water as possible, decolorized by briefly boiling with animal charcoal and recrystallized by adding alcohol. Mannitol is obtained.

In der zweiten Stufe werden die Schimmelpilzphosphatide isoliert. Der aus der Mannitgewinnung anfallende Mycelrückstand wird zu diesem Zweck abermals mit der doppelten bis 3fachen Menge des Ausgangsgewichtes an hochprozentigem Alkohol verrührt und mehrere Stunden sich selbst überlassen. Das Arbeiten geschieht wie in der ersten Stufe in Behältern unter Luft- und Lichtausschluß; man füllt, sofern größere Gasräume verbleiben, dieselben mit Stickstoff.In the second stage, the mold phosphatides are isolated. The mycelium residue resulting from mannitol production is used again for this purpose with twice to 3 times the amount of high percentage alcohol of the initial weight stirred and left to fend for several hours. The work happens like in the first stage in containers with exclusion of air and light; one fills, provided larger gas spaces remain, the same with nitrogen.

Nach 8 bis 24 Stunden preßt man den Rückstand scharf ab. Die goldgelb gefärbte Methanollösung enthält noch 4 bis io% Wasser. Sie wird in eine mit Stickstoff gefüllte Vakuumdestillationsapparatur gegeben. Zuerst wird, immer unter 35' bleibend, der Alkohol, dann bei etwa 10 bis 20 MM Vakuum das Wasser abdestilliert. Es bleibt ein öliger, goldbrauner Rückstand, der viskos erstarrt. Er besteht hauptsächlich aus einem Gemisch von Glyceriden und Phosphatiden. Um Reste wasserlöslicher Bestandteile, wie Kohlenhydrate, zu entfernen, wird der Rückstand mit kochsalzhaltigem Wasser bei 35' behandelt, hierbei scheidet sich eine butterartige Masse mit angenehmem Nußgeruch ab, welche aus der Hydratform des Phosphatidgemisches besteht und durch Filtration über Leinen gut abgetrennt werden kann. Diese wird dann mit Aceton ausgeknetet, um möglichst hierbei den Hauptteil Wasser sowie Fett und Sterine zu entfernen. Schließlich nimmt man in wasser- und peroxydfreiem Äther auf und fällt durch Eintropfen in gekühltes Aceton um. Dabei entstehen schwachgell)-graue Fällungen, die nach der Trocknung im Hochvakuum über Phosphorpentoxyd wasserfreie, honiggelbe Phosphatide liefern. Durch weitere Reinigungsmethoden lassen sich analysenreine Gemische aus Lecithin und Kephalin hieraus gewinnen.After 8 to 24 hours, the residue is pressed off sharply. The golden yellow colored methanol solution still contains 4 to 10% water. It is placed in a vacuum distillation apparatus filled with nitrogen. First the alcohol is distilled off, always below 35 ' , then the water is distilled off at a vacuum of about 10 to 20 MM. An oily, golden-brown residue remains, which solidifies in a viscous manner. It mainly consists of a mixture of glycerides and phosphatides. In order to remove residues of water-soluble components such as carbohydrates, the residue is treated with saline water at 35 ' , a butter-like mass with a pleasant nut odor separates out, which consists of the hydrate form of the phosphatide mixture and can be easily separated by filtration over linen. This is then kneaded with acetone in order to remove most of the water as well as fat and sterols. Finally, it is taken up in anhydrous and peroxide-free ether and it is dropped into cooled acetone. This gives rise to pale-yellow-gray precipitates which, after drying in a high vacuum over phosphorus pentoxide, yield anhydrous, honey-yellow phosphatides. Analytically pure mixtures of lecithin and cephalin can be obtained from this by further cleaning methods.

Eine weitere Gruppe von Stoffen, deren Isolierungen aus anderen Pilzarten an sich bekannt sind, konnte durch eine weitere Behandlung des Restmycels mit der 2- bis 3fachen Menge an hochprozentigem Methanol erhalten werden.Another group of substances whose isolations are from other types of fungus are known per se, could by a further treatment of the residual mycelium with the 2 to 3 times the amount of high percentage methanol can be obtained.

Man saugt, nachdem das Restmycel bereits eine erhöhte Quellfähigkeit in absolutem Alkohol erreicht hat, unter Abpressen ab und wäscht auf der Nutsche mit Alkohol i- bis 2mal nach. Das Filtrat ist rötlichgelb gefärbt und enthält neben Fett (Triglyceriden) in der Hauptsache ein Steringemisch.One sucks after the residual mycelium already has an increased swelling capacity reached in absolute alcohol, while squeezing off and washes on the suction filter with alcohol 1 to 2 times. The filtrate is reddish yellow in color and contains besides Fat (triglycerides) mainly a mixture of stars.

Man gewinnt dieses Gemisch durch teilweises Abdestillieren des Alkohols. Der Rückstand ist ein Gemisch aus etwa 12 bis 30010 Sterinen und Fett. Man trennt die Sterine ab durch Verseifen des Gesamtrückstandes mit alkoholischer Kalilauge und extrahiert die Seifenlösung oder die trockenen Seifen mit Benzol, Chloroform, Benzin oder Äther. Man gewinnt einen kristallisierten, unverseifbaren Rückstand, der ein Gemisch von Mycosterinen und dessen Hauptbestandteil Ergosterin darstellt. Auf dieseWeise und durch weitereReinigung, z. B. Kristallisation aus Alkohol, durch Fällung der Digitonide, Kristallisation der Acetvl- oder Benzoylderivate sowie mittels Adsorptionsmittel gelingt die Gewinnung des bisher hauptsächlich aus Hefe hergestellten Provitamins D, des Ergosterins. Hiermit ist eine neue Quelle für das antirachitisch wirksame Provitamin erschlossen. Beispiel i 3o kg verfettetes Fusariummycel, dessen Wassergelialt mit 630/0 und dessen Fettgehalt nach Schmid-Bondzynski mit 17,0% bestimmt wurde, wird nach Zermahlen des Naßmycels in einem Fleischwolf direkt in 7o kg 98- bis 991/oiges Methanol eingerührt. Nachdem gute Zerteilung erreicht ist, wird das abgedeckte Material 24 Stunden sich selbst überlassen, schließlich abermals i bis 2 Stunden gerührt und auf der Nutsche abgepreßt. Das Filtrat, welches vollkommen klar und tiefgelb gefärbt ist, wird in eine Vakuumapparatur gegeben und eingeengt bis zur beginnenden Trübung. Dann läßt man erkalten und filtriert das ausgeschiedene Gemisch aus Fett und Fettsäuren oder löst dieselben mittels Fettlösungsmittel. Anschließend destilliert man bei gutem Vakuum bis zur beginnenden Kristallisation des gelbbraunen Rückstandes. Den Rückstand behandelt man mit 98%igem Äthylalkohol, filtriert kalt und nimmt den kristallinen Anteil in möglichst wenig 8o%igem heißem Alkohol auf und kühlt auf o bis io' ab. Nach etwa 24 Stunden scheiden sich gelbgefärbte nadelförmige Kristalle ab. Diese werden abgesaugt und in wenig Wasser gelöst, mit Aktivkohle entfärbt und direkt durch Einengen aus Wasser oder durch Zugabe von Alkohol umkristallisiert. Man erhält auf letztere Weise von Kristallisationszentren aus wachsende, feinste, weiße Kristalle, welche unter dem Mikroskop wie Ilaarbüschel aussehen. Es handelt sich um Maimit (F. der Hexaacetylverbindung = 120').This mixture is obtained by partially distilling off the alcohol. The residue is a mixture of about 12 to 30,010 sterols and fat. The sterols are separated off by saponifying the total residue with alcoholic potassium hydroxide solution and the soap solution or the dry soaps are extracted with benzene, chloroform, gasoline or ether. A crystallized, unsaponifiable residue is obtained which is a mixture of mycosterols and the main component of which is ergosterol. In this way and by further cleaning, e.g. B. Crystallization from alcohol, by precipitation of digitonides, crystallization of acetyl or benzoyl derivatives and by means of adsorbents, provitamin D, ergosterol, which has so far mainly been produced from yeast, is obtained. This opens up a new source of the anti-rachitic provitamin. Example i 30 kg of fatty Fusarium mycelium, the water gel of which was determined to be 630/0 and the Schmid-Bondzynski fat content of 17.0%, is stirred directly into 70 kg of 98 to 991% methanol in a meat grinder after the wet mycelium has been ground up. After good division has been achieved, the covered material is left to its own devices for 24 hours, finally stirred again for 1 to 2 hours and pressed on the suction filter. The filtrate, which is completely clear and deep yellow in color, is placed in a vacuum apparatus and concentrated until it starts to become cloudy. It is then allowed to cool and the precipitated mixture of fat and fatty acids is filtered or the same is dissolved using a fat solvent. The mixture is then distilled under a good vacuum until the yellow-brown residue begins to crystallize. The residue is treated with 98% ethyl alcohol, filtered cold and the crystalline portion is taken up in as little 80% hot alcohol as possible and cooled to 0 to 10%. After about 24 hours, yellow-colored needle-shaped crystals separate out. These are suctioned off and dissolved in a little water, decolorized with activated charcoal and recrystallized directly by concentration from water or by adding alcohol. In the latter way, growing, fine, white crystals are obtained from crystallization centers, which look like tufts of Ilaar under the microscope. It is Maimit (F. of the hexaacetyl compound = 120 ').

Die Ausbeute betriigt nach beschriebenem Verfahren 99,8 g = o,9 1/o, bezogen auf Trockenmycel. Beispiel 2 Die Aufarbeitung des Alkoliolextraktes nach den Angaben von F i n k und J u s t (Biochern. Ztschr., Bd. 216, S. 311 ff.) ergab folgendes Resultat: Der Methanolextrakt aus 2,6i5kg Naßmycel (verfettetes Fusarium) mit 549 g Trockenmasse wurde aufgearbeitet, wie im Beispieli beschrieben, bis zur ersten Kristallisation des Rückstandes. Dieser wurde in Wasser gelöst über Aktivkohle filtriert, mit Schwefelsäure angesi . tuert und mit Quecksilbersulfat gef;illt. Die Fällutig wird abgesaugt, abgepreßt, das Filtrat mittels Schwefelwasserstoff von Ouecksilber befreit, die schwefelwasserstofffreie Lösung mittels Bariumhydroxyd neutralisiert, das Bariumsulfat abfiltriert, die Lösung eingeengt und direkt kristallisiert. Ausbeute 6,6 g = 1,2 0/0 Mannit, F.= io4#'. Beispiel 3 2217 g Nat.ii-n#,cel (verf ettetes Fusarium) = 750 -Trockenmycel geben 6200CM' Methanolwässer; deren Zusammensetzung ist 34.00/0 Wasser, 8,20/0 Gesaintfeststil)stanz, -57,#S'/o Methanol. Nach dein Abdestillieren des Methanols wurden isoliert 4,52 g = o,6% Fett-Fettsäure-Gemisch. Die Kennzahlen desselben sind Sz. Vz. EZ. Jz. 112,0 204,2 92,6 122,3 Nach F i n k und J u s t aufgearbeitet wurden erhalten 27,6 g Rohprodukt = 3,71/o Rohmannit. Dieser ist jedoch nicht rein, er enthält noch gegen Fehlingsche Lösung reduzierende Substanzen sowie 0,17 0/0 N.According to the process described, the yield is 99.8 g = 0.9 l / o, based on dry mycelium. Example 2 The work-up of the alcohol extract according to the instructions of F in k and Just (Biochern. Ztschr., Vol. 216, p. 311 ff.) Gave the following result: The methanol extract from 2.65 kg of wet mycelium (fatty Fusarium) with 549 g Dry matter was worked up as described in Example i until the residue crystallized for the first time. This was dissolved in water, filtered through activated charcoal and made up with sulfuric acid . and filled with mercury sulphate. The precipitate is filtered off with suction, pressed off, the filtrate is freed from mercury using hydrogen sulfide, the hydrogen sulfide-free solution is neutralized using barium hydroxide, the barium sulfate is filtered off, the solution is concentrated and directly crystallized. Yield 6.6 g = 1.2 % mannitol, F. = io4 # '. Example 3 2217 g of Nat.ii-n #, cel (fatty Fusarium) = 750 dry mycelium give 6200CM 'of methanol water; their composition is 34.00 / 0 water, 8.20 / 0 total festival style) punch, -57, # S '/ 0 methanol. After the methanol had been distilled off, 4.52 g = 0.6% fatty acid mixture were isolated. The key figures of the same are Sz. Vz. EZ. Jz. 112.0 204.2 92.6 122.3 After working up in K and Just, 27.6 g of crude product = 3.71 / o of raw mannitol were obtained. However, this is not pure, it also contains substances reducing against Fehling's solution as well as 0.17 0/0 N.

Nach dem Verfahren des Beispiels i wurden 2,7010 Rohmannit erhalten. Beispiel 4 Der Mycelrückstand aus Beispiel i wird abermals mit 7o kg Methanol 98- bis 99%ig versetzt und mehrere Stunden kalt gerührt. Dann wird abgesaugt und der Alkoholextrakt schnellstens in eine Vakuumdestillationsapparatur gebracht, welche mit Stickstoff gefüllt ist und mittels Wasserdampfmantel erwärmt wird. Die Destillation wird stets unter 35' gehalten, das Vakuum langsam gesteigert. Schließlich erhält man einen öligen, goldbraunen Rückstand, der in der Kälte erstarrt. Nach Behandeln mit kaltem, kochsalzhaltigem Wasser erhält man butterartige, angenehm nußartig riechende Massen, die durch Dekantation oder Absaugen auf Leinenfilter gewonnen werden. Die weitere Reinigung (Befreiung von Fetten und Sterinen) vollzieht sich, wie es bei Pflanzenphosphatiden bekannt ist. Die Ausbeute an Rohphosphatiden ist stark schwankend, man erhält je nach Ausgangsmaterial 0,4 bis 2,oO/o, bezogen auf Trockensubstanz.Following the procedure of Example i, 2.7010 raw mannitol was obtained. Example 4 The mycelium residue from Example i is again mixed with 70 kg of 98 to 99% methanol and stirred for several hours while cold. It is then suctioned off and the alcohol extract is quickly placed in a vacuum distillation apparatus which is filled with nitrogen and heated by means of a steam jacket. The distillation is always kept below 35 ' and the vacuum is slowly increased. Finally, an oily, golden-brown residue is obtained which solidifies in the cold. After treatment with cold, saline water, butter-like, pleasantly nutty-smelling masses are obtained, which are obtained by decantation or suction on a linen filter. The further purification (liberation of fats and sterols) takes place as is known with plant phosphatides. The yield of rock phosphatides fluctuates greatly, depending on the starting material, 0.4 to 2.0 / o, based on dry matter, is obtained.

Die Untersuchung der Reinphosphatide ergab, daß das Gemisch keine Phosphatidsäuren oder Diaminophosphatide enthält. Es besteht beispielsweise aus etwa io% Lecithin und go% Kephalin. Die Fettsäuren sind fast ausschließlich ungesättigter Natur. Sie unterliegen außerordentlich leicht der Autoxydation durch Einfluß von Luft und Licht, was eine erhöhte Empfindlichkeit zur Folge hat. Die auf diese Weise gewonnenen Phosphatide sind vielfach technisch verwertbar. Beispiel 5 Der nach Beispie14 gewonnene Mycelrückstand ist in seinem Wassergehalt bereits so weit heruntergesetzt, daß er mühelos in der 2- bis 3fachen Menge Methanol (98- bis 99%ig) verteilt werden kann. Er besitzt bereits eine auffallend hohe Saugfähigkeit für Alkohol und andere wasserfreie, organische Lösungsmittel. Dies begünstigt die weitere Behandlungsweise. Nach etwa 8 bis 24 Stunden wird abermals abgesaugt. Der Rückstand ist jetzt so weit entwässert, daß er höchstens noch i bis 40/0 Wasser im Rückstand enthält und für die eigentliche Fettextraktion geeignet ist. Der hochprozentige Alkohol wird zum größten Teil abdestilliert und der stark eingeengte Rückstand nach Bestimmung seiner Verseifungszahl direkt mit alkoholischer Kalilauge oder anderen geeigneten Verseifungsmitteln verseift.The investigation of the pure phosphatides showed that the mixture does not contain any phosphatidic acids or diaminophosphatides. It consists, for example, of about 10% lecithin and 100% cephalin. The fatty acids are almost exclusively of an unsaturated nature. They are extremely susceptible to auto-oxidation under the influence of air and light, which results in increased sensitivity. The phosphatides obtained in this way can often be used industrially. EXAMPLE 5 The water content of the mycelium residue obtained according to Example 14 has already been reduced to such an extent that it can be easily distributed in 2 to 3 times the amount of methanol (98 to 99%). It already has a remarkably high absorbency for alcohol and other anhydrous, organic solvents. This favors the further treatment. After about 8 to 24 hours, suction is again carried out. The residue has now been dehydrated to such an extent that it still contains a maximum of 1 to 40/0 water in the residue and is suitable for the actual fat extraction. Most of the high percentage alcohol is distilled off and the highly concentrated residue, after determining its saponification number, is saponified directly with alcoholic potassium hydroxide solution or other suitable saponifying agents.

Z, Die Abtrennung des Unverseifbaren wird wie üblich vorgenommen, am günstigsten durch Ausschütteln des wässerig-alkoholischen Verseifungsproduktes oder durch Extraktion der trockenen Seifen mittels Äther, Benzin, Benzol, Essigester oder ähnlicher Lösungsmittel. Z, The unsaponifiable material is separated off as usual, preferably by shaking out the aqueous-alcoholic saponification product or by extracting the dry soaps with ether, gasoline, benzene, ethyl acetate or similar solvents.

Man erhält nach Trocknen und Verdunsten derselben schwachgelb gefärbte kristalline Rohmycosterine in Ausbeuten von oj bis ö,8%, bezogen auf Trockensubstanz. Man kristallisiert um aus Alkohol, Benzolalkohol oder Essigesteralkohol und erhält fast weiße Blättchen oder Nadeln.After drying and evaporation, they are obtained pale yellow in color Crystalline raw mycosterols in yields of 0.1 to 0.8%, based on dry matter. It is recrystallized from alcohol, benzene alcohol or ethyl acetate alcohol and obtained almost white leaflets or needles.

Bei der Untersuchung der Sterine zeigt sich, daß alle für Pilzsterine verlangten Reaktionen eintreten, so die Liebermann-Burchardsche Probe und die umgekehrte Salkowskische Reaktion. An speziellen Reaktionen auf Ergosterin sind positiv die Reaktionen nach Tortelli-Jaff#, nach Rosenheim sowie nach Räussler und Brauchli sowie Heilbron und Spring.Examination of the sterols shows that all of them are in favor of fungal sterols the required reactions occur, so the Liebermann-Burchard test and the reverse Salkovskian reaction. The positive reactions to ergosterol are those Reactions to Tortelli-Jaff #, to Rosenheim and to Räussler and Brauchli as well as Heilbron and Spring.

Claims

PATENT CLAIM: A process for the production of mannitol, phosphatides and sterols from fatty degeneration mycelbildenden microorganisms, characterized in that partially dewatered by squeezing or centrifuging mycelia three consecutive up to lasting 24 hours extractions with 2 to 3 times the amount of low molecular weight aliphatic alcohols, in particular Methanol, subjected, the water content of the mycelia being reduced in the successive extraction stages, in such a way that in the third stage it is from i to .4%, the extractant being distilled off from the extract of the first stage, preferably in vacuo, the remaining aqueous solution filtered and from the residue obtained by evaporation by recrystallization of mannitol, the extractant and water are preferably distilled off in vacuo from the extract of the second stage, the phosphate is removed from the residue by purification with water and acetone and by reprecipitation hatide and finally the main amount of the extraction agent is distilled off from the extract of the third stage and the sterols are obtained from the residue obtained by treatment with saponifying agents and extraction of the soap mixture with solvents. Attached publications: Dissertation H iesta d, Contributions to the knowledge of plant phosphatides, p. 196; Der Forschungsdienst 5 (1938), p. 116.