DE1053731B

DE1053731B - Process for the production of active ingredients from spleens

Info

Publication number: DE1053731B
Application number: DEW18809A
Authority: DE
Inventors: Dr Med Norbert Gerlich
Original assignee: HANS JULIUS WOLF DR MED; NORBERT GERLICH DR MED
Current assignee: HANS JULIUS WOLF DR MED; NORBERT GERLICH DR MED
Priority date: 1956-04-07
Filing date: 1956-04-07
Publication date: 1959-03-26

Description

Verfahren zur Herstellung von Wirkstoffen aus Milzen Durch Tab.lettenmißbrauch oder auch durch toxische Nebenwirkungen an sich richtig indizierter Arzneimittel, vor allem aber bei den neuen cvtostatischen Stoffen, die klinisch zur Behandlung schrankenlosen Tumorwachsturns angewandt werden, kommt es häufig zu nicht unerheblichen Beeinträchtigungen in der Bildung weißer Blutkörperchen. Das Knochenmark erfährt eine Störung seiner Normalfunktion, und es ergeben sich leukopenische Zustände, die häufig ein erhebliches Ausmaß annehmen und zum Tode führen. Die bisherige Therapie besteht in Bluttransfusionen oder Anwendung von bestimmten Corticoiden, ohne daß es bisher gelang, durch eine physiologische Regulisierung die normale Funktion des Knochenmarks wiederherzustellen.Process for the production of active ingredients from spleens by tabular abuse or through toxic side effects of properly indicated drugs, But especially with the new cvtostatic substances that are used clinically for treatment Unlimited tumor growth are used, it often comes to not inconsiderable Impairments in the production of white blood cells. The bone marrow finds out a disturbance of its normal function, and leukopenic conditions result, which often take on considerable proportions and lead to death. The previous therapy consists of blood transfusions or the use of certain corticoids without this it has so far been possible to restore the normal function of the Restore bone marrow.

Gegenstand der Erfindung ist ein Verfahren zur Herstellung von die Bildung weißer Blutkörperchen im gesunden Knochenmark fördernden Wirkstoffen. Es beruht auf der im Wege klinischer und experimenteller Studien gewonnenen Erkenntnis, daß in der gesunden Milz der Warmblüter nicht nur solche Stoffe vorhanden sind, die eine Hemmung der Bildung weißer Blutkörperchen im Knochenmark verursachen, sondern ebenso andere Stoffe, die die Knochenmarkfunktion und speziell die Bildung der weißen Blutkörperchen stimulieren. Werden die letztgenannten Stoffe bei leukämischen Fällen injiziert, so kommt es zu ungeheuer starken Steigerungen der Menge der weißen Blutkörperchen. Injiziert tnan diesen Stoff bei leukopenischen Zuständen, so wird im Laufe von einer oder 2 Wochen die Bildung gesunder weißer Blutkörperchen stark mobilisiert, die Patienten erholen sich, und vor allem gehen auch das Fieber und die Infektabwehrschwäche bei der Agranulocytose zurück.The invention relates to a process for the production of the Active substances that promote the formation of white blood cells in healthy bone marrow. It is based on the knowledge gained through clinical and experimental studies, that in the healthy spleen of warm-blooded animals there are not only such substances which cause an inhibition of the production of white blood cells in the bone marrow, but likewise other substances that affect the bone marrow function and especially the formation of white Stimulate blood cells. The latter substances are used in leukemic cases injected, there will be tremendous increases in the number of white blood cells. If this substance is injected in leukopenic conditions, in the course of one or 2 weeks, the production of healthy white blood cells is strongly mobilized Patients recover, and above all the fever and the weakness in defense against infections go away back in agranulocytosis.

Nach der Hauptpatentanmeldung W 18273 IV a/3Qh wird ein das bösartige Wachstum weißer Blutkörperchen hemmender Wirkstoff gewonnen, indem man feinzerkleinerte, vom Fett befreite Milzen gesunder Tiere in Wasser bei stark saurer oder alkalischer Reaktion homogenisiert, unter Rühren langsam bis zu etwa 80° C erhitzt, die nicht in Lösung gegangenen Bestandteile abtrennt, das Eiweiß ausfällt, die Filtrate bis zu pH 4 bis 4,5 weiter ansäuert, die entstehenden Niederschläge abtrennt, die Mutterlauge aussalzt, die gesammelten Niederschläge in Eisessig löst und durch wiederholte fraktionierte Fällung mit Äther, Aceton und mit Petro.läther zerlegt und in der Petrolätherfraktion den stark angereicherten Wirkstoff isoliert.According to the main patent application W 18273 IV a / 3Qh, a becomes the malignant White blood cell growth inhibiting agent obtained by finely chopping, spleens of healthy animals freed from fat in water with strongly acidic or alkaline water Reaction homogenized, slowly heated with stirring up to about 80 ° C, which is not separates dissolved components, the protein precipitates, the filtrates up acidified further to pH 4 to 4.5, the resulting precipitates are separated off, the mother liquor salted out, the collected precipitates dissolve in glacial acetic acid and fractionated by repeated Precipitation with ether, acetone and petroleum ether broken down into the petroleum ether fraction isolates the highly enriched active ingredient.

Es wurde nun gefunden, daß bei diesem Verfahren gleichzeitig auch noch ein andersartiger Wirkstoff anfällt, der das Wachstum weißer Blutkörperchen im gesunden Knochenmark, die Leukopoese, fördert und der sich beim Verfahren der Hau.ptp.atentanmeldung in der Äther Aceton-Fällung anreichert, die bei dem auf die Gewinnung des Hemmstoffes gerichteten Verfahren der Hauptpatentanmeldung wegen ihres geringen Gehalts an diesem Stoff verworfen wurde. Nach der vorliegenden Erfindung wird das Verfahren der Hauptpatentanmeldung in dem Sinne weiter ausgebaut, daß auch die Äther-Aceton-Fraktionen aufgearbeitet werden, um aus ihnen den neuen, die Bildung weißer Blutkörperchen im gesunden Knochenmark fördernden Wirkstoff zu gewinnen, der für .die Therapie eine erhebliche Bedeutung besitzt. Mit ihm gelingt es insbesondere bei Personen, deren Knochenmarkfunktion durch zwecks Bekämpfung lebensgefährlicher Krankheitsvorgänge verabreichte Medikamente gelähmt war, die Knochen.markfunlztion und die Bildung weißer Blutkörperchen wieder anzuregen und in Gang zu bringen.It has now been found that this method also simultaneously Another active ingredient is produced, which is the growth of white blood cells in healthy bone marrow, which promotes leukopoiesis and which is involved in the procedure of Hau.ptp.atentanmeldung enriched in the ether acetone precipitation, which in the case of the Obtaining the inhibitor-directed process of the main patent application because of their low content of this substance was discarded. According to the present invention the procedure of the main patent application is further expanded in the sense that also the ether-acetone fractions are worked up in order to convert them to the new ones, the formation gain the active substance that promotes white blood cells in healthy bone marrow, which is of considerable importance for therapy. It works particularly well with him in people whose bone marrow function by means of fighting life-threatening The medication administered during the disease process paralyzed the bone marrow function and to stimulate and get the production of white blood cells going again.

Das Verfahren vollzieht sich mit .den gleichen Ausgangsstoffen und- in derselben Weisse wie nach der Hauptpatentanmeldung, nur daß am Schluß der Äther-Aceton-I\Tiederschlag durch mehrfach wiederholte fraktionierte Extraktion und Umfällung aufgearbeitet wird.The process is carried out with the same starting materials and in the same white as after the main patent application, only that the ether-acetone precipitate at the end worked up by repeated fractional extraction and reprecipitation will.

Weiter wurde gefunden, daß die hier interessierenden Wirkstoffe nicht nur in den Milzen, sondern auch den Lebern gesunder Tiere enthalten sind, so daß auch Lebern als Ausgangsmaterial verwendet werden können.It was also found that the active ingredients of interest here are not contained only in the spleens but also in the livers of healthy animals, so that livers can also be used as starting material.

Aus .der deutschen Patentschrift 714 707 ist es zwar bekannt, aus Lebern einen die Leukozytenbildung fördernden Wirkanteil gemeinsam mit einem die Erythrocytenbildung stimulierenden Faktor zu extrahieren. Die Trennung aus dem reinwäßrigen Extrakt erfolgt dabei durch Zugabe eines mit Wasser in jedem Verhältnis mischbaren organischen Lösungsmittels, wie Aceton, bis zu Konzentrationen von 60-%. Im Gegensatz hierzu wird nach der vorliegenden Erfindung jedoch sofort durch Säure oder Alkali eine Hydrolyse herbeigeführt, die die entscheidende Voraussetzung für eine Ablösung der gesuchten Wirkstoffe von den an sie gebundenen Begleitproteinen sichert. Die nach dem Stand der Technik ohne vorherige Hydrolyse vorgenommene Eiweißfällung muß den größten Teil der Wirkstoffe mit niederschlagen, ehe sie gewonnen werden können. Nach der vorliegenden Erfindung erfolgt die Verteilung der Wirkstoffe nicht aus wäßriger Lösung, sondern nur aus verschiedenen organischen Lösungsmitteln, so daß tatsächlich proteinfreie Produkte erhalten werden.From the German patent specification 714 707 it is known from Livers build leukocytes promoting active component together with a factor that stimulates erythrocyte formation. The separation from the purely aqueous extract is done by adding one with water in each Ratio of miscible organic solvents, such as acetone, up to concentrations of 60%. In contrast, however, according to the present invention, it is instantaneous hydrolysis brought about by acid or alkali, which is the decisive prerequisite for a detachment of the sought-after active ingredients from the accompanying proteins bound to them secures. The protein precipitation carried out according to the state of the art without prior hydrolysis must also precipitate most of the active ingredients before they are obtained can. According to the present invention, the active ingredients are not distributed from aqueous solution, but only from various organic solvents, see above that protein-free products are actually obtained.

Nach der USA.-Patentschrift 2 662 047 geht man von einem durch Benzol entfetteten Milz-Trockenpulver aus, extrahiert den Rückstand mit Äther und niniint nach Verdampfen des Äthers mit Wasser auf. Die Wirkstoffe, die nach der vorliegenden Erfindung gewonnen werden, sind in Benzol löslich. Sie werden also bei der Anwendung des Verfahrens der genannten Patentschrift bereits mit dem Entfetten entfernt. Tatsächlich will auch die genannte Patentschrift einen ganz anderen Wirkstoff, nämlich ein gegen Allergien wirksames Prinzip gewinnen, und die dabei anfallenden Stoffe sind in Toluol, Aceton und kaltem Äthylalkohol unlöslich, damit also grundsätzlich verschieden von den nach dem Verfahren der vorliegenden Erfindung gewonnenen Wirkstoffen.According to US Pat. No. 2,662,047, one goes through benzene defatted spleen dry powder, extracted the residue with ether and niniint after evaporation of the ether with water. The active ingredients according to the present Invention obtained are soluble in benzene. So you will in the application of the process of the patent mentioned already removed with the degreasing. Indeed The aforementioned patent also wants a completely different active ingredient, namely an against Allergies gain effective principle, and the resulting substances are in toluene, Acetone and cold ethyl alcohol are insoluble, so basically different from the active ingredients obtained by the process of the present invention.

Man arbeitet wie nach dem Beispiel der Hauptpatentanmeldung W 18273 IVa/30h bis zum Anfall des klar zentrifugierten Eisessigrohextraktes. Dann versetzt man 100 ccm klaren Eisessigextrakt mit 250, ccm eines Gemisches von gleichen Teilen Aceton-Äther, nutscht den groben Niederschlag ab und, trocknet. Das Filtrat wird mit 500 ml Petroläther versetzt und der entsprechende feine Niederschlag ebenfalls abgenutscht und getrocknet. Die Niederschläge werden für sich abermals in Eisessig gelöst und fraktioniert mit Aceton-Äther und Petroläther gefällt. Die auf .diese Weise erhaltenen Fällungen können zur Injektion benutzt werden.One works as according to the example of the main patent application W 18273 IVa / 30h until the clear, centrifuged glacial acetic acid crude extract is obtained. Then moved 100 cc of clear glacial acetic acid extract with 250 cc of a mixture of equal parts Acetone-ether, sucks off the coarse precipitate and dries. The filtrate will mixed with 500 ml of petroleum ether and the corresponding fine precipitate as well sucked off and dried. The precipitates turn into glacial acetic acid again dissolved and fractionated with acetone-ether and petroleum ether precipitated. The on .this Well-obtained precipitates can be used for injection.

Grundsätzlich lassen sich diese Wirkstoffe in der beschriebenen Weise aus allen retikulären Geweben, wie Milz und Leber, darstellen. Entscheidend ist, daß man bei der Darstellung im alkalischen Bereich bis zu einer einigermaßen klaren Lösung gelangt. Nur auf diesem Wege gelingt es, die bei der sauren Extraktion vorhandenen und entstehenden kolloidalen, suspensoiden und emulsoiden Stoffe in eine fast molekulardisperse Form überzuführen, aus .der man durch Ansäuern leichter die Begleitproteine absondern kann, ohne daß die Wirkstoffe damit ausgefällt werden.In principle, these active ingredients can be used in the manner described from all reticular tissues such as spleen and liver. It is crucial that in the case of the representation in the alkaline range up to a reasonably clear one Solution reached. Only in this way is it possible to use those present in the acidic extraction and the resulting colloidal, suspensoid and emulsoid substances become almost molecularly disperse Form from. Which one can more easily secrete the accompanying proteins by acidification can without the active ingredients being precipitated.

Claims

PATENT CLAIMS: 1. Process for the production of active ingredients from Spleens, according to patent application W 18273 IVa / 30h, characterized in that the yellowish-white precipitates obtained in the fractional precipitation with ether-acetone collects and, through repeated reprecipitation, the formation of white blood cells from them in healthy bone marrow-promoting active ingredient wins.

2. The method according to claim 1, characterized in that the starting slurry is quickly heated to 80 ° C. In Documents considered: German Patent No. 714 707; U.S. Patent 1 \ T r. 2,662,047.