DE3038016A1 - Medium fuer die isoelektrische fokussierung - Google Patents
Medium fuer die isoelektrische fokussierungInfo
- Publication number
- DE3038016A1 DE3038016A1 DE19803038016 DE3038016A DE3038016A1 DE 3038016 A1 DE3038016 A1 DE 3038016A1 DE 19803038016 DE19803038016 DE 19803038016 DE 3038016 A DE3038016 A DE 3038016A DE 3038016 A1 DE3038016 A1 DE 3038016A1
- Authority
- DE
- Germany
- Prior art keywords
- agarose
- medium
- substituents
- focusing
- group
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Withdrawn
Links
- 238000001155 isoelectric focusing Methods 0.000 title claims description 13
- 229920000936 Agarose Polymers 0.000 claims description 54
- 125000001424 substituent group Chemical group 0.000 claims description 24
- 239000000203 mixture Substances 0.000 claims description 18
- 125000003277 amino group Chemical group 0.000 claims description 12
- RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N Diethyl ether Chemical compound CCOCC RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 8
- 125000002887 hydroxy group Chemical group [H]O* 0.000 claims description 7
- 238000006467 substitution reaction Methods 0.000 claims description 7
- 125000004430 oxygen atom Chemical group O* 0.000 claims description 4
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 claims description 4
- 239000012847 fine chemical Substances 0.000 claims description 3
- MJQHZNBUODTQTK-UHFFFAOYSA-N 2-[[3-[2-[(3,4-dihydroxy-2,6-dioxabicyclo[3.2.1]octan-8-yl)oxy]-3,5-dihydroxy-6-(hydroxymethyl)oxan-4-yl]oxy-4-hydroxy-2,6-dioxabicyclo[3.2.1]octan-8-yl]oxy]-6-(hydroxymethyl)oxane-3,4,5-triol Chemical compound OC1C(O)C(O)C(CO)OC1OC1C2OCC1OC(OC1C(C(OC3C4OCC3OC(O)C4O)OC(CO)C1O)O)C2O MJQHZNBUODTQTK-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims 1
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 30
- 239000000499 gel Substances 0.000 description 25
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 17
- HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M Sodium hydroxide Chemical compound [OH-].[Na+] HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 15
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 15
- 125000004432 carbon atom Chemical group C* 0.000 description 8
- 229920002401 polyacrylamide Polymers 0.000 description 7
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 7
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 7
- QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N Acetic acid Chemical compound CC(O)=O QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 6
- 229910052757 nitrogen Inorganic materials 0.000 description 6
- 230000008901 benefit Effects 0.000 description 5
- 238000010438 heat treatment Methods 0.000 description 5
- 238000000034 method Methods 0.000 description 5
- IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N Atomic nitrogen Chemical compound N#N IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-M Chloride anion Chemical compound [Cl-] VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 4
- VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N Hydrochloric acid Chemical compound Cl VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 125000000217 alkyl group Chemical group 0.000 description 4
- 150000001412 amines Chemical class 0.000 description 4
- 150000002500 ions Chemical class 0.000 description 4
- 229910000033 sodium borohydride Inorganic materials 0.000 description 4
- 239000012279 sodium borohydride Substances 0.000 description 4
- ZMANZCXQSJIPKH-UHFFFAOYSA-N Triethylamine Chemical compound CCN(CC)CC ZMANZCXQSJIPKH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 229910052799 carbon Inorganic materials 0.000 description 3
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 3
- 238000005370 electroosmosis Methods 0.000 description 3
- -1 nitrate ions Chemical class 0.000 description 3
- 125000004433 nitrogen atom Chemical group N* 0.000 description 3
- 229920000642 polymer Polymers 0.000 description 3
- OCKGFTQIICXDQW-ZEQRLZLVSA-N 5-[(1r)-1-hydroxy-2-[4-[(2r)-2-hydroxy-2-(4-methyl-1-oxo-3h-2-benzofuran-5-yl)ethyl]piperazin-1-yl]ethyl]-4-methyl-3h-2-benzofuran-1-one Chemical compound C1=C2C(=O)OCC2=C(C)C([C@@H](O)CN2CCN(CC2)C[C@H](O)C2=CC=C3C(=O)OCC3=C2C)=C1 OCKGFTQIICXDQW-ZEQRLZLVSA-N 0.000 description 2
- OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N Carbon Chemical compound [C] OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- QIGBRXMKCJKVMJ-UHFFFAOYSA-N Hydroquinone Chemical compound OC1=CC=C(O)C=C1 QIGBRXMKCJKVMJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000011543 agarose gel Substances 0.000 description 2
- 125000002947 alkylene group Chemical group 0.000 description 2
- 125000003710 aryl alkyl group Chemical group 0.000 description 2
- 125000003118 aryl group Chemical group 0.000 description 2
- 125000004429 atom Chemical group 0.000 description 2
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 2
- 125000002915 carbonyl group Chemical group [*:2]C([*:1])=O 0.000 description 2
- 238000005266 casting Methods 0.000 description 2
- 239000010408 film Substances 0.000 description 2
- 239000011521 glass Substances 0.000 description 2
- 150000003944 halohydrins Chemical class 0.000 description 2
- 125000005842 heteroatom Chemical group 0.000 description 2
- 125000002768 hydroxyalkyl group Chemical group 0.000 description 2
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 2
- 239000011159 matrix material Substances 0.000 description 2
- 150000002924 oxiranes Chemical class 0.000 description 2
- 238000010186 staining Methods 0.000 description 2
- 238000003756 stirring Methods 0.000 description 2
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 description 2
- 239000003440 toxic substance Substances 0.000 description 2
- RAGSWDIQBBZLLL-UHFFFAOYSA-N 2-chloroethyl(diethyl)azanium;chloride Chemical compound Cl.CCN(CC)CCCl RAGSWDIQBBZLLL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- YCPXWRQRBFJBPZ-UHFFFAOYSA-N 5-sulfosalicylic acid Chemical compound OC(=O)C1=CC(S(O)(=O)=O)=CC=C1O YCPXWRQRBFJBPZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- SGHZXLIDFTYFHQ-UHFFFAOYSA-L Brilliant Blue Chemical compound [Na+].[Na+].C=1C=C(C(=C2C=CC(C=C2)=[N+](CC)CC=2C=C(C=CC=2)S([O-])(=O)=O)C=2C(=CC=CC=2)S([O-])(=O)=O)C=CC=1N(CC)CC1=CC=CC(S([O-])(=O)=O)=C1 SGHZXLIDFTYFHQ-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- CPELXLSAUQHCOX-UHFFFAOYSA-M Bromide Chemical compound [Br-] CPELXLSAUQHCOX-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- FBPFZTCFMRRESA-FSIIMWSLSA-N D-Glucitol Natural products OC[C@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)CO FBPFZTCFMRRESA-FSIIMWSLSA-N 0.000 description 1
- IAYPIBMASNFSPL-UHFFFAOYSA-N Ethylene oxide Chemical compound C1CO1 IAYPIBMASNFSPL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 102000001554 Hemoglobins Human genes 0.000 description 1
- 108010054147 Hemoglobins Proteins 0.000 description 1
- DGAQECJNVWCQMB-PUAWFVPOSA-M Ilexoside XXIX Chemical compound C[C@@H]1CC[C@@]2(CC[C@@]3(C(=CC[C@H]4[C@]3(CC[C@@H]5[C@@]4(CC[C@@H](C5(C)C)OS(=O)(=O)[O-])C)C)[C@@H]2[C@]1(C)O)C)C(=O)O[C@H]6[C@@H]([C@H]([C@@H]([C@H](O6)CO)O)O)O.[Na+] DGAQECJNVWCQMB-PUAWFVPOSA-M 0.000 description 1
- 102000008192 Lactoglobulins Human genes 0.000 description 1
- 108010060630 Lactoglobulins Proteins 0.000 description 1
- 102000036675 Myoglobin Human genes 0.000 description 1
- 108010062374 Myoglobin Proteins 0.000 description 1
- 229910002651 NO3 Inorganic materials 0.000 description 1
- 102000013566 Plasminogen Human genes 0.000 description 1
- 108010051456 Plasminogen Proteins 0.000 description 1
- GOOHAUXETOMSMM-UHFFFAOYSA-N Propylene oxide Chemical compound CC1CO1 GOOHAUXETOMSMM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- CDBYLPFSWZWCQE-UHFFFAOYSA-L Sodium Carbonate Chemical compound [Na+].[Na+].[O-]C([O-])=O CDBYLPFSWZWCQE-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-L Sulfate Chemical compound [O-]S([O-])(=O)=O QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 239000002253 acid Substances 0.000 description 1
- 239000000654 additive Substances 0.000 description 1
- 229910001413 alkali metal ion Inorganic materials 0.000 description 1
- 125000003545 alkoxy group Chemical group 0.000 description 1
- 150000001350 alkyl halides Chemical class 0.000 description 1
- BHELZAPQIKSEDF-UHFFFAOYSA-N allyl bromide Chemical compound BrCC=C BHELZAPQIKSEDF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 1
- 239000007864 aqueous solution Substances 0.000 description 1
- 239000013060 biological fluid Substances 0.000 description 1
- 238000009835 boiling Methods 0.000 description 1
- 229940006460 bromide ion Drugs 0.000 description 1
- BVKZGUZCCUSVTD-UHFFFAOYSA-N carbonic acid Chemical compound OC(O)=O BVKZGUZCCUSVTD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 125000003178 carboxy group Chemical group [H]OC(*)=O 0.000 description 1
- 150000001244 carboxylic acid anhydrides Chemical class 0.000 description 1
- 150000001732 carboxylic acid derivatives Chemical class 0.000 description 1
- 238000007385 chemical modification Methods 0.000 description 1
- 231100000481 chemical toxicant Toxicity 0.000 description 1
- 238000004140 cleaning Methods 0.000 description 1
- 239000000084 colloidal system Substances 0.000 description 1
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 1
- ATDGTVJJHBUTRL-UHFFFAOYSA-N cyanogen bromide Chemical compound BrC#N ATDGTVJJHBUTRL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000007423 decrease Effects 0.000 description 1
- 238000010586 diagram Methods 0.000 description 1
- 230000005684 electric field Effects 0.000 description 1
- 230000008030 elimination Effects 0.000 description 1
- 238000003379 elimination reaction Methods 0.000 description 1
- 125000001033 ether group Chemical group 0.000 description 1
- 238000004108 freeze drying Methods 0.000 description 1
- 150000004676 glycans Chemical class 0.000 description 1
- 150000002366 halogen compounds Chemical class 0.000 description 1
- 125000000623 heterocyclic group Chemical group 0.000 description 1
- 125000004435 hydrogen atom Chemical group [H]* 0.000 description 1
- JGJLWPGRMCADHB-UHFFFAOYSA-N hypobromite Inorganic materials Br[O-] JGJLWPGRMCADHB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- XMBWDFGMSWQBCA-UHFFFAOYSA-M iodide Chemical compound [I-] XMBWDFGMSWQBCA-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 229940006461 iodide ion Drugs 0.000 description 1
- INQOMBQAUSQDDS-UHFFFAOYSA-N iodomethane Chemical compound IC INQOMBQAUSQDDS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 125000003010 ionic group Chemical group 0.000 description 1
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 1
- 239000000463 material Substances 0.000 description 1
- IBIKHMZPHNKTHM-RDTXWAMCSA-N merck compound 25 Chemical compound C1C[C@@H](C(O)=O)[C@H](O)CN1C(C1=C(F)C=CC=C11)=NN1C(=O)C1=C(Cl)C=CC=C1C1CC1 IBIKHMZPHNKTHM-RDTXWAMCSA-N 0.000 description 1
- 230000005012 migration Effects 0.000 description 1
- 238000013508 migration Methods 0.000 description 1
- 238000002156 mixing Methods 0.000 description 1
- 238000002715 modification method Methods 0.000 description 1
- 150000007524 organic acids Chemical class 0.000 description 1
- 235000005985 organic acids Nutrition 0.000 description 1
- 125000001997 phenyl group Chemical group [H]C1=C([H])C([H])=C(*)C([H])=C1[H] 0.000 description 1
- 239000002985 plastic film Substances 0.000 description 1
- 229920006255 plastic film Polymers 0.000 description 1
- 238000006116 polymerization reaction Methods 0.000 description 1
- 229920001282 polysaccharide Polymers 0.000 description 1
- 239000005017 polysaccharide Substances 0.000 description 1
- 229910001414 potassium ion Inorganic materials 0.000 description 1
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 1
- 150000003856 quaternary ammonium compounds Chemical class 0.000 description 1
- 238000000926 separation method Methods 0.000 description 1
- 238000002791 soaking Methods 0.000 description 1
- 239000011734 sodium Substances 0.000 description 1
- 229910001415 sodium ion Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000000600 sorbitol Substances 0.000 description 1
- 230000006641 stabilisation Effects 0.000 description 1
- 238000011105 stabilization Methods 0.000 description 1
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 1
- 125000001302 tertiary amino group Chemical group 0.000 description 1
- 239000010409 thin film Substances 0.000 description 1
- YNJBWRMUSHSURL-UHFFFAOYSA-N trichloroacetic acid Chemical compound OC(=O)C(Cl)(Cl)Cl YNJBWRMUSHSURL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 231100000925 very toxic Toxicity 0.000 description 1
- 238000010792 warming Methods 0.000 description 1
- 238000005406 washing Methods 0.000 description 1
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C08—ORGANIC MACROMOLECULAR COMPOUNDS; THEIR PREPARATION OR CHEMICAL WORKING-UP; COMPOSITIONS BASED THEREON
- C08L—COMPOSITIONS OF MACROMOLECULAR COMPOUNDS
- C08L5/00—Compositions of polysaccharides or of their derivatives not provided for in groups C08L1/00 or C08L3/00
- C08L5/12—Agar or agar-agar, i.e. mixture of agarose and agaropectin; Derivatives thereof
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C08—ORGANIC MACROMOLECULAR COMPOUNDS; THEIR PREPARATION OR CHEMICAL WORKING-UP; COMPOSITIONS BASED THEREON
- C08B—POLYSACCHARIDES; DERIVATIVES THEREOF
- C08B37/00—Preparation of polysaccharides not provided for in groups C08B1/00 - C08B35/00; Derivatives thereof
- C08B37/0006—Homoglycans, i.e. polysaccharides having a main chain consisting of one single sugar, e.g. colominic acid
- C08B37/0036—Galactans; Derivatives thereof
- C08B37/0039—Agar; Agarose, i.e. D-galactose, 3,6-anhydro-D-galactose, methylated, sulfated, e.g. from the red algae Gelidium and Gracilaria; Agaropectin; Derivatives thereof, e.g. Sepharose, i.e. crosslinked agarose
Landscapes
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Polymers & Plastics (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Materials Engineering (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
Description
Die Erfindung betrifft ein Medium für die isoelektrische
Fokussierung, das auf Agarosegrundlage aufgebaut 1st.
Ein wichtiger Anwendungsbereich des erfindungsgemäßen Mediums ist für ein Antikonvektionsmedium oder Stabilisierungsmedium
bei einer analytischen isoelektrischen Fokussierung. Derzeit besteht das hauptsächlich für diesen Typ
der isoelektrischen Fokussierung verwendete Medium aus vernetztem Polyacrylamid (Polyacrylamidgel). Dieses Medium
liefert zwar stabile pH-Gradienten und eine ausgezeichnete Trennung der Proteine, hat aber einige schwerwiegende
Nachteile. Das Herstellungsverfahren des PoIyacrylamidgels ist nämlich sehr aufwendig und die Verwendung
von sehr toxischen Chemikalien ist erforderlich. Ein weiterer Nachteil besteht darin, daß das Polyacrylamidgel
aus einem so engen Netzwerk von Polymerketten besteht, daß die Wanderung der Proteine in dem elektrischen Feld verlangsamt
wird und daß in der Regel Proteine mit hohem Molekulargewicht von oberhalb 100 000 wegen der kleinen Maschengröße
nicht fokussiert werden können.
Agarose ist schon als Alternative für das Polyacrylamid vorgeschlagen worden. Agarose enthält jedoch negativ geladene
Gruppen, und zwar hauptsächlich Sulfatestergruppen und Carboxylgruppen (mit positiven Gegenionen, wie z.B.
Alkalimetallionen, beispielsweise Natrium- oder Kaliumionen, oder Ionen von organischen Aminen), die eine sogenannte
Elektroosmose, d.h. einen Fluß der Flüssigkeit durch das Gel, bewirken. Dies bewirkt, daß die Position
des pH-Gradienten sich kontinuierlich in dem Gel bewegt und daß unter Umständen der Gradient vollständig ver-
130017/0722
4 3038018
schwindet. Sehr oft kommt es auch vor, daß Teile des Gels
austrocknen und aufgrund der Elektroosmose zusammenfallen.
Es ist schon vorgeschlagen worden, für die isoelektrische Fokussierung geeignete Gele durch Reinigung oder chemische
Modifikation herzustellen, wobei verschiedene Methoden oder Polymeradditive verwendet werden sollten, um die Viskosität
zu erhöhen, damit der elektroosmotische Fluß· vermindert
wird (vgl. z.B. Johansson, BG und Hjerten, S.,"Annal.
Biochem." 59 (1974) 200, Weise, H-Ch und Grässlin D.,
"Acta Endocrinol. Suppl." 82 (1976) 75 und Grupp AV "Anal.
Biochem." 55 (1973) 582, und die entsprechende Vortragszusammenfassung
in "Proceedings of the Twenty-First Colloquium on Protides of the Biological Fluids", Brügge, 1973,
Seite 649 (Herausgeber H. Peters, Pergamin Press, 1974)). Die vorgeschlagenen Reinigungs- und Modifikationsmethoden
haben jedoch nicht zu einer vollständigen Ausschaltung des Elektroosmoseproblems geführt. Das Gleiche gilt für die
Zugabe von Polymeren, wodurch gleichfalls einige der Vorteile der Agarose vermindert werden.
Es wurde nun gefunden, daß die Nettoladung der Agarosematrix
modifiziert werden kann, indem man positiv geladene Gruppen eines Typs einführt, der die Agarose für die isoelektrische
Fokussierung sehr gut geeignet macht.
Das erfindungsgemäße Medium ist dadurch gekennzeichnet, daß es Agarose, in die positiv geladene Substituenten eingeführt
worden sind, um die in dem Medium vorhandenen negativ geladenen Gruppen zu neutralisieren, enthält oder
daraus besteht«■ Diese Substituenten enthalten als einzige
geladene Gruppe eine quaternäre Aminogruppe und die Ladung
130017/0722
der Substituenten ist vom pH-Wert mindestens im Bereich von
2 bis 12 unabhängig.
Gemäß einer bevorzugten Ausführungsform der Erfindung sind die Substituenten des Mediums an die Agarose über eine
Äther- oder Carbonsäureesterbindung durch das Sauerstoffatom einer Hydroxylgruppe der Agarose gebunden.
Vorzugsweise enthalten die Substituenten keine anderen Stickstoffatome als diejenigen der quaternären Aminogruppen.
Anorganische oder organische negative Ionen, z.B. Chloridionen, Nitrationen, Sulfationen oder negative Ionen von
organischen Säuren können als Gegenionen für die oben erwähnten quaternären Aminogruppen ausgewählt werden. Die
negativen ionischen Gruppen, die in der Agarose selbst vorhanden sind, können gleichfalls als Gegenionen wirken.
Gemäß einer besonders bevorzugten Ausführungsform der Erfindung haben die in die Agarosematrix eingeführten positiv
geladenen Substituenten die allgemeine Formel:
R1 ··
-O-A-B-N ® -R2
in der R , R und R-^ gleich oder verschieden sind und jeweils
für eine Alkylgruppe mit 1 bis 5 Kohlenstoffatomen, eine Hydroxyalkylgruppe mit 2 bis 5 Kohlenstoffatomen,
eine Aryl- oder eine Aralkylgruppe mit 1 bis 5 Kohlen-
130017/0722
stoffatomen im Alkylteil stehen oder wobei R zusammen mit
R oder R^ und dem quaternären Stickstoffatom einen heterocyclischen
Ring "bildet, wobei der Ring auch ein Sauerstoffatom in dem Ring haben kann, das von dem Stickstoffatom
durch zwei Kohlenstoffatome abgetrennt ist, A für eine Einfachbindung oder eine Carbonylgruppe -CO- steht
und B für eine Alkylenkette mit 2 bis 10 Kohlenstoffatomen im Falle, daß A eine Einfachbindung ist, und mit 1 bis 10
Kohlenstoffatomen im Falle, daß A eine Carbonylgruppe ist, steht, wobei die durch B angegebene Alkylenkette durch
eine oder mehrere Äthergruppen unterbrochen sein kann und durch eine oder mehrere Alkyl- und/oder Hydroxylgruppen
substituiert sein kann, wobei höchstens ein Heteroatom an ein und dasselbe Kohlenstoffatom in der Kette gebunden
sein kann und wobei das Sauerstoffatom (-0-) von einer Hydroxylgruppe in der Agaröse herrührt. (Die Bezeichnung
"Heteroatom" bedeutet andere Atome als Kohlenstoff- und Wasserstoffatome). Die Gegenionen der Substituenten dieser
allgemeinen Formel können die oben erwähnten Gegenionen sein.
Der Benzolring kann unsubstituiert oder im Falle, daß R ,
R und/oder Rr für eine Aryl- oder eine Aralkylgruppe stehen,
substituiert sein. Im letzteren Fall sind naturgemäß die Substituenten von einem Typ, der das Erfordernis der
pH-unabhängigen positiven Ladungen erfüllt. Beispiele für solche Gruppen sind Alkyl- und Alkoxygruppen mit 1 bis 6
Kohlenstoffatomen und Hydroxyalkylgruppen mit 1 bis 6
Kohlenstoffatomen.
Die folgenden Gruppen sind Beispiele für Substituenten der oben angegebenen allgemeinen Formel:
130017/0722
038016
OH
CH. I
-O- CH0 - CH - CH0 - Νθ - CH
CH-
- O - CH0 -
OH
CH - CH,
?2Η5 - C2H5
C2H5
f2H5
O - CH0 - CH0 - Ν® - CH.
O - CH0 - CH0 - Ν® - CH.
C2H5
CH.
-O- CH„ - CH„ - 0 - CH„ - CH„ -
CH.
?2Η5
O - CO - CH - IvT- COHC
I 2
C2H5
130017/0722
8 " 3038.018
CH-, CH-.
1 [J
- O - CO - CH - VT- CH-.
I 3
CH3
f2H5
- O - CH„ - CH^ . N0- CH0 - CH, - OH
- O - CH„ - CH^ . N0- CH0 - CH, - OH
C2H5
O - CH^ - C - CH
- O - CH2 - CH2 - BT- CH2 -
C2H5
Gemäß einem weiteren Gesichtspunkt der Erfindung kann das Medium aus einem Gemisch aus zwei oder mehreren Agarosezubereitungen
mit unterschiedlichem Substitutionsgrad hinsichtlich der pH-unabhängigen Substituenten bestehen. Auf
diese Weise kann ein gut funktionierendes Produkt erhalten werden, obgleich die Zubereitungen selbst nicht mit zufriedenstellenden
Ergebnissen verwendet werden können,
130017/0722
was auf einen zu niedrigen oder zu hohen Substitutionsgrad zurückzuführen ist. Es ist auch möglich, ein zufriedenstellendes
Produkt zu erhalten, indem man nicht-modifizierte Agarose mit einer oder mehreren substituierten Agarosezubereitungen
mit einem geeigneten Substitutionsgrad vermischt.
Bei der Herstellung von Gemischen dieses Typs werden die Verhältnismengen der verwendeten Komponenten so ausgewählt,
daß der durchschnittliche Substitutionsgrad erhalten wird, der dazu erforderlich ist, die negativ geladenen Gruppen, die
in der Agarose vorhanden sind, zu kompensieren.
Die substituierte Agarose kann nach Methoden synthetisiert werden, die zur Einführung von Substituenten in Polysaccharide,
beispielsweise auf dem Wege über Äther- oder Carbonsäurebindungen, verwendet v/erden„ Ätherbindungen werden bevorzugt,
da solche Bindungen sehr stabil sind. Eine Hydroxylgruppe der Agarose kann somit mit einer Verbindung,
die eine quaternäre Aminogruppe und eine Gruppe, die zu einer Umsetzung mit der Hydroxylgruppe imstande ist, enthält,
beispielsweise mit einem Epoxid, einem Halogenhydrin oder einer reaktiven Halogenverbindung, umgesetzt werden, um
eine Ätherbindung zwischen der Agarose und dem Substituenten zu erzeugen. Die Hydroxylgruppe kann auch mit einer
Carbonsäure, einem Carbonsäurehalogenid oder einem Carbonsäureanhydrid umgesetzt werden, um eine Esterbindung zwischen
der Agarose und dem Substituenten zu erzeugen. Die Reaktionen können bei Bedingungen durchgeführt werden, die
üblicherweise für den jeweiligen Reaktionstyp angewandt werden. Es ist auch möglich, als erste Stufe einen Substituenten,
der eine andere Aminogruppe als eine quaternäre Gruppe (vorzugsweise eine tertiäre Aminogruppe) trägt,
1 30017/0722
einzuführen, wobei die Aminogruppe dann in eine quaternäre
Aminogruppe durch bekannte Methoden, beispielsweise mittels eines Alkylhalogenids oder eines Epoxide (z.B. Äthylenoxid
oder Propylenoxid) oder des entsprechenden Halogenhydrine,
umgewandelt wird. Es ist auch möglich, einen Substituenten einzuführen, der keine Aminogruppe enthält, sondern eine
reaktive Gruppe trägt, die durch Umsetzung mit einem Amin nach an sich bekannten Methoden in eine quaternäre Aminogruppe
umwandelbar ist. Der durchschnittliche Substitutionsgrad wird so ausgewählt, daß die positiven Ladungen
der Substituenten die negativen Ladungen, die in der Agarose vorkommen, kompensieren.
Gele für die isoelektrische Fokussierung können aus der
substituierten Agarose in der gleichen Weise hergestellt werden, wie Agarosegele bei anderen elektrophoretischen
Techniken bereitet werden, beispielsweise durch Erwärmenlassen einer Lösung der modifizierten Agarose, um ein Gel
bei einer Temperatur unterhalb der Geliertemperatur sich absetzen zu lassen.
Die Zugabe des Ampholyten, der für die Verwendung bei der
isoelektrischen Fokussierung erforderlich ist, erfolgt vorzugsweise zu der warmen Lösung vor dem Gießen des Gels.
Es können Ampholyte verwendet werden, die derzeit für die
isoelektrische Fokussierung eingesetzt werden, beispielsweise mit Vorteil Ampholyte, wie sie in der DE-OS 2 814
beschrieben werden. Als Regel ist es von Interesse, pH-Gradienten im Bereich von 2,5 bis 10,5 zu verwenden, wie
sie beispielsweise mit Ampholyten gemäß der obengenannten DE-OS erhalten werden, beispielsweise für die pH-Intervalle
3 bis 10, 4 bis 6,5, 5 bis 8, 6,5 bis 9 und 8 bis 10,5.
130017/0722
Ein Vorteil der modifizierten Agarose gegenüber Polyacrylamid besteht darin, daß die Herstellung eines Gels für die
isoelektrische Fokussierung wegen des Wegfalls der Polymerisationsstufe und der Handhabung von toxischen Chemikalien
erleichtert wird. Es ist einfach, das Gießen des Gels unter Verwendung des gleichen Materials zu wiederholen, falls der
erste Versuch aus bestimmten Gründen weniger erfolgreich sein sollte. Hierdurch werden die Kosten für die Ampholytlösung
vermindert, welche die teuerste Komponente in einem Gel für die isoelektrische Fokussierung ist.
Ein weiterer Vorteil besteht darin, daß die Fokussierung wegen der höheren Porosität und der makroretikulären Struktur
rascher erfolgt. Diese Eigenschaften gestatten die Fokussierung von größeren Proteinen in Agarose als in Polyacrylamid.
Vor der Anfärbungsstufe wird die Agarose zu einem sehr dünnen Film getrocknet, wodurch eine sehr rasche
Anfärbung und Entfärbung gestattet wird.
Im Vergleich zu den in der Literatur beschriebenen, durch Substitution modifizierten Agarosen hat das erfindungsgemäße
Medium signifikante Vorteile, da die Substituenten keinerlei andere Ladungen als diejenigen der quaternären
Aminogruppen enthalten und weil die Ladungen der Substituenten mindestens im Bereich von 2 bis 12 vom pH-Wert unabhängig
sind. Im Ergebnis kann daher ein stabilerer pH-Gradient über einen weiten pH-Intervall aufrechterhalten
werden.
Das bekannte Medium nach Grubb (siehe oben) wird dadurch erhalten, daß die Agarose mit Bromcyan und 2-(Aminoäthyl)-trimethylammoniumbromidhydrobromid
umgesetzt wird, was zur Einführung von nicht nur quaternären Aminogruppen,
130017/0722
sondern auch von anderen geladenen Gruppen, deren Ladungen im Gesamtbereich von 2 bis 12 nicht vom pH-Wert unabhängig
sind, führt (vgl. Seite 591 dieser Druckschrift).
Die Erfindung wird in den Beispielen erläutert.
Synthese
Eine wäßrige Lösung (hinsichtlich des Volumens vgl. die folgende
Tabelle), enthaltend 62 g (3-Chlor-2-hydroxypropyl)-Ν,Ν,Ν-trimethylammoniumchlorld
pro 100 ml Lösung, wurde zu einem Gemisch aus Äthanol (160 ml), Wasser (20 ml), 2M-Natriumhydroxidlösung
(12 ml), Natriumborhydrid (0,2 g) und Agarose (40 g) unter Rühren bei 450C gegeben. Das Gemisch
wurde bei der gleichen Temperatur 20 h lang gerührt. Mit konzentrierter Salzsäure wurde der pH-Wert auf ca. 6,0
eingestellt. Das Produkt, d.h. Agarose, mit Substituenten der Formel:
OH CH-.
I I 3
- O - CHn - CH - CH0 - IT- CH.
2 2 j
CH3
und mit Chloridion als Gegenion wurde auf einem Glasfilter mit Wasser gewaschen und lyophilisiert.
In der folgenden Tabelle sind die Mengen des verwendeten
quaternären Amins und die erhaltenen Analysenergebnisse zusammengestellt.
130017/0722
Produkt- Volumen der Amin- Stickstoffgehalt code lösung (ml) des Produkts (ppm)
| 1A | 1,0 | 725 |
| 1B | 0,9 | 667 |
| 1C | 0,8 | 548 |
| Gießen des | Gels für die isoelektrische | Fokussierung |
Modifizierte Agarose (0,3 g) und Sorbit (1,5 g) wurden in
Wasser (30 ml) unter Erhitzen zum Sieden aufgelöst. Ein
Ampholyt (1,9 ml) für die isoelektrische Fokussierung im pH-Bereich von 5 bis 8, hergestellt gemäß der DE-OS
2 814 408 (Pharmalyte 5 bis 8 von Pharmacia Fine Chemicals AB, Uppsala, Schweden) wurde zugesetzt und die Lösung wurde
sodann sofort auf einen Kunststoffilm gegossen (GelBond, Marine Colloid Inc., Springfield, N.J., USA) (110 χ 225
mm). Die Lösung erhärtete sich auf dem Film zu einem Gel. Das Produkt wurde in einer Feuchtigkeitskammer über Nacht
vor dem Gebrauch gelagert.
Die Synthese und das Gießen des Gels erfolgten gemäß Beispiel
1 mit der Ausnahme, daß als quaternäre Ammoniumverbindung N-Glycidyl-NjN-N-trimethylammoniumchlorid (G-MAC)
verwendet. Es wurde eine Agarose erhalten, die Gruppen der im Beispiel 1 angegebenen Formel enthielt. In der folgenden
Tabelle sind die verwendete Menge von G-MAC und die Analysenergebnisse zusammengestellt.
Produkt- verwendete Menge Stickstoff im Procode von G-MAC (g) dukt (ppm)
2A 0,55 610
2B 0,50 535
130017/0722
Das im Beispiel 2Aerhaltene Produkt wurde mit unsubstituierter Agarose im Verhältnis von 28 : 2 vermischt, wonach
ein Gel gemäß Beispiel 1 gegossen wurde.
Agarose (24 g) wurde in Wasser (250 ml) unter Erhitzen aufgelöst. Zu dieser Lösung wurden 2M-Natriumhydroxidlösung
(40 ml), Natriumborhydrid (0,5 g) und 1-Chlor-2-diäthylaminoäthanhydrochlorid
(0,5 g) gegeben. Nach 16-stündigem Rühren der Lösung bei 500C wurde die Agarose mit
Äthanol (2 1) ausgefällt. Der pH-Wert wurde mit konzentrierter Salzsäure auf 6 eingestellt und das Produkt wurde
sodann mit Äthanol und schließlich mit Wasser gewaschen und gefriergetrocknet.
Ein Gemisch aus dem gefriergetrockneten Agarοsederivat
(5 g), Äthanol (30 ml), Wasser (10 ml), Dinatriumcarbonat (4g) und Methyljodid (5 ml) wurde 16 h lang bei Raumtemperatur
gerührt. Das resultierende Produkt, d.h. eine Agarose mit Gruppen der Formel:
- O - CH2 - CH2 - N-
und mit Jodidion als Gegenion, wurde sodann mit 75%igem
Äthanol und schließlich mit Wasser gewaschen.
1300 1 7/07,22
038016
Das Produkt wurde mit unsubstituierter Agarose im Verhältnis von 17 : 13 gemischt und ein Gel für die isoelektrische
Fokussierung wurde gemäß Beispiel 1 gegossen.
Agarose (20 g), Natriumhydroxidlösung (24 g) und Natriumborhydrid
(1 g) wurden in Wasser (600 ml) unter Erhitzen auf 600C aufgelöst. Hydrochinon (0,2 g) und 3-Brompropen
(3 ml) wurden zugesetzt. Das Gemisch wurde 4 h lang bei 600C gerührt. Das Agaroseprodukt wurde mit Äthanol (2 1)
ausgefällt, mit Äthanol und sodann mit Wasser vor der Lyophilisierung gewaschen.
Eine Lösung dieses Produkts (2,5 g) in Wasser (100 ml) wurde
unter Erhitzen hergestellt. Nach EinsteÄing des pH-Werts
auf 5 wurde Bromwasser bis zu einer schwach-gelben Färbung zugesetzt. Triäthylamin (10 ml) wurde zugefügt
und das Gemisch wurde 22 h lang bei 4O0C gerührt. Die Agarose
wurde mit Äthanol (500 ml) ausgefällt und danach wurde der pH-Wert auf 5 eingestellt. Das Produkt, d.h. Agarose
mit Gruppen der Formel:
OH C0H1-
I Θ/2 5
- O - CH0 - CH - CH_ - N- C_HC
C2H5
und mit Bromidion als Gegenion, wurde mit Äthanol und sodann mit Wasser gewaschen und hierauf gefriergetrocknet.
1300 17/0722
Das Produkt wurde mit unsubstituierter Agarose im Verhältnis
von 9 : 41 vermischt und aus diesem Gemisch wurde, wie im Beispiel 1 beschrieben, ein Gel für die isoelektrische
Fokussierung gegossen.
Agarose (10 g), Natriumhydroxid (10 g), Natriumborhydrid (1»O g) und N-Glycldyl-N, N, N-trimethylamTnoniumchlorid
(G-MAC; Gehalt siehe unten) wurden in Wasser (500 ml) unter Erhitzen aufgelöst. Die Lösung wurde sodann 16 h lang
bei 600C gerührt. Die Agarose wurde mit Äthanol (ca. 600
ml) ausgefällt. Das Produkt, d.h. Agarose mit Gruppen der Formel:
CH CH-,
- O - CH0 - CH - CHn -N- CH
CH
und mit Chloridion als Gegenion, wurde mit Äthanol und sodann mit Wasser gewaschen und hierauf im Vakuum getrocknet.
A) Menge von G-MAC: 0,1 g
B) Menge von G-MAC: 2,0 g
Gele wurden wie im Beispiel 1 gesondert aus den Produkten A und B und aus einem Gemisch aus A und B im Verhältnis
von 41 : 9 hergestellt.
1 30017/0722
Verwendungsbeispiele
Isoelektrische Fokussierung
Beispiel I
Es wurde eine isoelektrische Fokussierung unter Verwendung von Medien durchgeführt, welche nach den Beispielen
IA bis 1C synthetisiert worden waren. 1:1-Gemische (Gewicht/Gewicht)
der Medien gemäß den Beispielen 1B und 1C
wurden verwendet. Weiterhin wurde eine Flachbettvorrichtung FBE 3000 (Pharmacia Fine Chemicals AB, Uppsala, Schweden)
eingesetzt. Die in den Kathoden- und Anodenstreifen verwendeten Lösungen waren eine 1M-NaOH- bzw. eine 0,05M-HgSO^-Lösung.
Testproteine (z.B. Myoglobin, ß-Lactoglobulin, Kohlensäureanhydrase, Hämoglobin und Plasminogen)
wurden in üblicher Weise aufgebracht» Die Fokussierung erfolgte bei einer maximalen Stromstärke von 30 ¥ und
einer maximalen Spannung von 1000 V während 2 h. Eine
Oberflächenelektrode wurde zur Messung des pH-Werts in dem Gel nach 1 h und 2 h verwendet. Der pH-Gradient wurde
in einem Diagramm mit dem pH-Wert als Funktion des Abstands in cm von der Kathode aufgetragen. Aus dem erhaltenen
Ergebnis konnte die Schlußfolgerung gezogen werden, daß die in den Beispielen 1A und 1B erhaltenen Produkte
hinsichtlich der negativ geladenen Gruppen in der Agarose überkompensiert waren und daß das Produkt gemäß dem Beispiel
1C unterkompensiert war, während das Gemisch aus den Produkten der Beispiele 1B und 1C im Verhältnis von
1:1 einen stabilen pH-Gradienten ergab.
Nach der Fokussierung wurden die Proteine fixiert, indem das Gel in ein Bad aus Äthanol mit 10$ Trichloressig-
130017/0722
säure (Gewicht/Gewicht) und 5% 5-Sulfosalicylsäure (Gewicht/Gewicht)
30 min lang und sodann in Äthanol 5 min lang eingetaucht wurde. Das Gel wurde sodann mit 10 Schichten
eines Papierhandtuchs und einer Glasscheibe bedeckt. Auf letztere wurde ein Gewicht von 2 kg aufgebracht. Das
Papierhandtuch wurde nach 15 min weggenommen und das Gel wurde vollständig in einem Heißluftstrom getrocknet.
Das getrocknete Agarosegel wurde gefärbt, indem es 15 min lang in eine 0,2%ige Lösung von Comassie-Brillantblau
R250 (Colour Index Nr. 42660; E. Merck, Darmstadt, Deutschland) in einem Gemisch aus Äthanol, Essigsäure und Wasser
(7:1 : 2) eingetaucht wurde.
Überschüssiger Farbstoff wurde durch Waschen mit einem Gemisch aus Äthanol, Essigsäure und Wasser (7:1 : 2) entfernt.
Nach dem vollständigen Trocknen des Gels in einem Heißluftstrom erschienen die fokussierten Proteine als
ausgeprägt blaue Linien auf einem transparenten farblosen Film, der leicht in einer Akte abgelegt werden konnte.
Die Fokussierung wurde wie im Beispiel I durchgeführt, mit der Ausnahme, daß die Produkte gemäß den Beispielen 2A
und 2B und ein Gemisch dieser Produkte im Verhältnis von 3:2 verwendet wurden.
Die Ergebnisse zeigten, daß das Produkt des Beispiels 2A überkompensiert und daß das Produkt des Beispiels 2B
unterkompensiert war, während das Gemisch der Produkte einen vollständig stabilen Gradienten ergab.
130017/0722
Die Fokussierung erfolgte wie im Beispiel I, mit der Ausnahme, daß das Agarosemedium des Beispiels 3 verwendet
wurde.
Es wurde ein vollständig stabiler pH-Gradient erhalten. Beispiel IV
Die Fokussierung erfolgte wie im Beispiel I, mit der Ausnahme, daß ein Agarosemedium entsprechend Beispiel 4 verwendet
wurde.
Es wurde ein vollständig stabiler pH-Gradient erhalten. Beispiel V
Die Fokussierung erfolgte wie im Beispiel I, mit der Ausnahme, daß ein Medium entsprechend Beispiel 5 verwendet
wurde.
Es wurde ein vollständig stabiler pH-Gradient erhalten. Beispiel VI
Die Fokussierung erfolgte wie im Beispiel I, mit der Ausnahme, daß die Produkte gemäß den Beispielen 6A und 6B
und ein Gemisch dieser Produkte im Verhältnis von 41 : verwendet wurden.
130017/0722
Die Ergebnisse zeigten, daß das Prodiakt gemäß Beispiel 6A unterkompensiert und daß das Produkt gemäß Beispiel 6B
überkompensiert war, während das Gemisch einen stabilen pH-Gradienten ergab.
130017/0722
Claims (3)
1. Medium für die isoelektrische Fokussierung auf Aga-
rosebasis, dadurch gekennzeichnet , daß das Medium Agarose enthält oder daraus besteht, in die
positiv geladene Substituenten eingeführt worden sind, um in dem Medium vorhandene negativ geladene Gruppen zu
neutralisieren, wobei die Substituenten als die einzige geladene Gruppe eine quaternäre Aminogruppe enthalten und
wobei die Ladung der Substituenten mindestens in dem Bereich von 2 bis 12 vom pH-Wert unabhängig ist«,
130017/07
2. Medium nach Anspruch 1, dadurch gekennzeichnet, daß die Substituenten an die Agarose
durch eine Äther- oder Carbonsäureesterbindung über das
Sauerstoffatom einer Hydroxylgruppe der Agarose gebunden sind.
3. Medium nach Anspruch 1 oder 2, dadurch gekennzeichnet , daß das Medium aus einem Gemisch
aus mindestens zwei Agarosezubereitungen mit unterschiedlichem Substitutionsgrad bezüglich der eingeführten
Substituenten besteht.
k. Medium nach Anspruch 1 oder 2, dadurch g e -
kennzeichnet , daß das Medium auch nicht-modifizierte
Agarose enthält.
130017/0722
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| SE7908454A SE7908454L (sv) | 1979-10-11 | 1979-10-11 | Medium for isoelektrisk fokusering |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| DE3038016A1 true DE3038016A1 (de) | 1981-04-23 |
Family
ID=20339044
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| DE19803038016 Withdrawn DE3038016A1 (de) | 1979-10-11 | 1980-10-08 | Medium fuer die isoelektrische fokussierung |
Country Status (3)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US4312739A (de) |
| DE (1) | DE3038016A1 (de) |
| SE (1) | SE7908454L (de) |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| EP0050389A1 (de) * | 1980-10-20 | 1982-04-28 | FMC Corporation | Modifizierte Agarose und Verfahren zu deren Herstellung und Verwendung |
Families Citing this family (12)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US4321121A (en) * | 1981-01-19 | 1982-03-23 | Beckman Instruments, Inc. | Electrophoretic technique for separating lactate dehydrogenase isoenzymes and improved electrophoretic gel for use therein |
| US5665216A (en) * | 1986-10-21 | 1997-09-09 | Northeastern University | Capillary column for high performance electrophoretic separation and detection of SDS proteins and system and using the same |
| US4997537A (en) * | 1986-10-21 | 1991-03-05 | Northeastern University | High performance microcapillary gel electrophoresis |
| US5143646A (en) * | 1989-01-13 | 1992-09-01 | Fmc Corporation | Polysaccharide resolving gels and gel systems for stacking electrophoresis |
| US4925545A (en) * | 1989-01-31 | 1990-05-15 | Amest, Inc. | Method of generating pH functions in electrophoresis and isoelectric focusing |
| IL95429A (en) * | 1989-09-15 | 1997-09-30 | Organogenesis | Living tissue equivalents comprising hydrated collagen lattice and a collagen gel and their production |
| US5069766A (en) * | 1990-12-20 | 1991-12-03 | Bio-Rad Laboratories, Inc. | Suppression of electroendosmosis in capillary electrophoresis |
| US5336614A (en) * | 1991-08-14 | 1994-08-09 | Quality Biological, Inc. | Soft agar assay and kit |
| US5371208A (en) * | 1992-12-30 | 1994-12-06 | Guest Elchrom Scientific Ltd. | Preparation of cross-linked linear polysaccharide polymers as gels for electrophoresis |
| AU2001236726A1 (en) * | 2000-02-08 | 2001-08-20 | The Regents Of The University Of Michigan | Protein separation and display |
| US20080096284A1 (en) * | 2000-02-08 | 2008-04-24 | Regents Of The University Of Michigan | Protein separation and analysis |
| US20050249667A1 (en) * | 2004-03-24 | 2005-11-10 | Tuszynski Jack A | Process for treating a biological organism |
Family Cites Families (6)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US3527712A (en) * | 1967-03-07 | 1970-09-08 | Marine Colloids Inc | Dried agarose gel,method of preparation thereof,and production of aqueous agarose gel |
| US3959251A (en) * | 1970-06-25 | 1976-05-25 | Exploaterings Aktiebolaget T.B.F. | Stabilized agar product and method for its stabilization |
| GB1392181A (en) * | 1971-04-16 | 1975-04-30 | Rech Et Dapplications Soc Gen | Fixation of nitrogenous materials |
| US3956273A (en) * | 1971-06-07 | 1976-05-11 | Marine Colloids, Inc. | Modified agarose and agar and method of making same |
| GB1435508A (en) * | 1972-05-01 | 1976-05-12 | Rech Et Dapplications Scient S | Process for the preparation of crosslinked polysaccharide gels |
| US3873514A (en) * | 1974-05-17 | 1975-03-25 | Bio Rad Laboratories | Preparation of gel for affinity chromatography |
-
1979
- 1979-10-11 SE SE7908454A patent/SE7908454L/ not_active Application Discontinuation
-
1980
- 1980-09-30 US US06/192,295 patent/US4312739A/en not_active Expired - Lifetime
- 1980-10-08 DE DE19803038016 patent/DE3038016A1/de not_active Withdrawn
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| EP0050389A1 (de) * | 1980-10-20 | 1982-04-28 | FMC Corporation | Modifizierte Agarose und Verfahren zu deren Herstellung und Verwendung |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| US4312739A (en) | 1982-01-26 |
| SE7908454L (sv) | 1981-04-12 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| DE2439551C2 (de) | Verfahren zur Härtung photographischer Schichten | |
| DE1418604A1 (de) | Gelbildende hochmolekulare Substanzen und Verfahren zu ihrer Herstellung | |
| DE3020689C2 (de) | ||
| DE3038016A1 (de) | Medium fuer die isoelektrische fokussierung | |
| DE1593657C2 (de) | Quaternäre Stickstoff enthaltende Celluloseether und Verfahren zu deren Herstellung | |
| DE69225494T2 (de) | Hydrophile n-substitutierte polyacrylamid-gele und ihre verwendung in elektrokinetischen und chromatographischen methodologien | |
| DE69326422T2 (de) | Vernetzte, lineare Polysaccharide als Gele für Elektrophorese | |
| DE2655361A1 (de) | Dextranderivat-gel | |
| DE68912031T2 (de) | Stabile Polyacrylamid-Gele, die chaotropische Mittel enthalten. | |
| DE69011650T2 (de) | Anionaustauscher. | |
| EP0147369B1 (de) | Ionisch modifiziertes Cellulosematerial, dessen Herstellung und Verwendung | |
| DE69117266T2 (de) | Modifizierung von gelatine | |
| DE1294187B (de) | Photographische, hochempfindliche Gelatine-Silberhalogenidemulsion | |
| DE3879216T2 (de) | Halogenierte oberflaeche mit reduzierter protein-wechselwirkung. | |
| EP0167488B1 (de) | Ionisch modifizierte Polysaccharide, Verfahren zu deren Herstellung und deren Verwendung | |
| DE2210433A1 (de) | Kationaktive Polyelektrolyte, Verfahren zu ihrer Herstellung und deren Verwendung als Kfärungsmittel für wäßrige Trüben | |
| DE2137617B2 (de) | Verfahren zur Herstellung wäßriger Ampholytlösungen oder deren Gemischen | |
| DE2549436A1 (de) | Verfahren zur herstellung von loesungen von salzen niederer aliphatischer carbonsaeuren kationischer farbstoffe | |
| EP0005201A1 (de) | Leimungsmittel für Papier | |
| DE1547758A1 (de) | Verwendung von N-substituierten Aziridinen zum Stabilisieren von proteinartigen Kolloiden photographischer Schichten | |
| EP0519329B1 (de) | 1,3-Bis-carbamoylimidazoliumverbindungen und Verfahren zum Härten von Gelatine enthaltenden Schichten | |
| DE2408814C2 (de) | Verfahren zur Härtung gelatinehaltiger photographischer Schichten | |
| EP0643108A1 (de) | Imidazolylmethylierte Kupferphthalocyaninfarbstoffe | |
| DE2317677C2 (de) | Verfahren zur Härtung photographischer Schichten | |
| DE726175C (de) | Verfahren zur Verringerung der Loeslichkeit bzw. Quellbarkeit von Eiweissstoffen |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| 8141 | Disposal/no request for examination |