DE2930562A1 - Immuntest zur bestimmung von klassenspezifischen antikoerpern - Google Patents

Immuntest zur bestimmung von klassenspezifischen antikoerpern

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DE2930562A1
DE2930562A1 DE19792930562 DE2930562A DE2930562A1 DE 2930562 A1 DE2930562 A1 DE 2930562A1 DE 19792930562 DE19792930562 DE 19792930562 DE 2930562 A DE2930562 A DE 2930562A DE 2930562 A1 DE2930562 A1 DE 2930562A1
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hepatitis
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Ruben Chairez
Richard H Decker
Chung-Mei Ling
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Abbott Laboratories
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Description

DR.-ING. WALTER ABITZ DR. DIETER F. MORF DIPL.-PHYS. M. GRITSCHNEDER
Patentanwälte
München,
27. Juli 1979
PoBttr.Jchrlft / Po»t»l Addres» Postfach 86Ο1Ο9, 80OO München 86
Pienzenauerstrafie 2
Telefon 083222
Telegramme: Chemindu» München
Telex: (O)B23ΘΘ2
3531
ABBOTT LABORATORIES North Chicago, Illinois 60064
Immuntest zur Bestimmung von klassenspezifischen Antikörpern
909886/0901
R.-ING. WALTER ABITS R. DIETER F. MORF IPL.-PHYS. M. GRITSCHNEDER
ktentanwälte
München.
Poitjuuchrift / Portal Addr·*· Po«tf»efa eeOlOÖ, βΟΟΟ Munchm 8β
'2
Fl*nz«n»u*rstr»fi· I
Telefon 98 SS 99
T»l»er»mm·: Chemlndua MQntfaaa
Τ·1·χ: (O) 593098
3531
Die Erfindung betrifft ein Verfahren zur Bestimmung von für ein Antigen klassenspezifischen Antikörpern. Das erfindungsgemässe Verfahren eignet sich zur Differentialdiagnose, da die relative Menge an klassenspezifischen Antikörpern mit dem Infektionsverlauf variiert.
Das Immunglobulinmolekül besteht aus einem oder mehreren Sätzen von jeweils 4 Polypeptidketten, nämlich zwei H-Ketten (schwere Ketten) mit einem Molekulargewicht von etwa 53 OOO und zwei L-Ketten (leichte Ketten) mit einem Molekulargewicht von etwa 22 000, die durch Disulfidbindungen verknüpft sind.
5 Immunglobulinklassen lassen sich aufgrund der Anwesenheit von H-Ketten-Antigendeterminanten, die mit kleinen griechischen Buchstaben entsprechend den lateinischen Buchstaben der entsprechenden Immunglobuline bezeichnet werden, unterscheiden:
Immunalobulin Η-Ketten-, &nt iaendeterminanten
IgG r (Gamma)
IgA (Alpha)
IgM P (My)
IgD 6 (Delta)
IgE a (Epsilon)
- 1 -
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Ferner gibt es auch Unterklassen von IgG, IgA und IgM, die auf anderen antigenen Determinanten beruhen, die mit arabischen Ziffern, beispielsweise ifl,c<l und ^uI, bezeichnet werden. Man kennt 4 Unterklassen von IgG, 2 von IgA und 2 von IgM. Sämtliche Unterklassen finden sich in Seren von allen normalen Personen.
IgG ist das im Serum von normalen Personen am häufigsten vorkommende Immunglobulin. Es kommt auch in Gewebeflüssigkeiten vor und kann durch die Plazenta aus dem mütterlichen in den fötalen Kreislauf treten. Es hat in vivo und in vitro eine antibakterielle, antivirale und antitoxische Wirkung und ist ein spät reagierender Antikörper.
IgM ist durch 2 Η-Ketten mit einer Aminosäuresequenz, die die antigene Determinante ^u bestimmt, gekennzeichnet. Ein unterscheidendes Merkmal der IgM-Funktion ist seine starke zytolytische und komplementbindende Wirkung, die die entsprechende Wirkung von IgG weit übertrifft. IgM ist im allgemeinen der erste Antikörper, der in Tieren oder Menschen nach der Immunisierung auftritt. Er wird allmählich durch IgG ersetzt.
IgA ist das am zweithäufigsten vorkommende Immunglobulin im menschlichen Serum. Es ist das hauptsächliche Sekretionsimmunglobulin und erweist sich als wertvoll bei der Abwehr von Bakterien und Viren des Atmungstrakts.
IgE ist das am wenigsten häufig vorkommende Immunglobulin. Es weist hautsensibilisierende Eigenschaften auf und ist für eine Reihe von Reaktionen der Bronchien, des Magen-Darm-Trakts, der Haut und anderen allergischen Reaktionen verantwortlich.
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Über die Struktur und die biologische Funktion von IgD ist sehr wenig bekannt- IgD-Antikörper wurden in Patienten, die gegenüber Kuhmilch empfindlich sind, und in Patienten mit systemischem Lupus erythematodes festgestellt.
Verfahren zum Isolieren der vorgenannten Immunglobulinklassen sind bekannt. Ferner sind Verfahren zur Erzeugung von Antikörpern gegen Immunglobuline und zur Bindung von Immunglobulinen an feste Träger bekannt. Verfahren zum Isolieren von Antigenen und zum Markieren von Antigenen mit fluoreszierenden Molekülen, radioaktiven Molekülen oder Enzymen, die eine Messung von gebundenem Antigen erlauben, sind ebenfalls bekannt. Ebenso sind indirekte Verfahren zur Messung von gebundenem Antigen bekannt, beispielsweise durch Umsetzung von gebundenem Antigen mit einem markierten (radioaktiv, fluoreszierend oder enzymatisch) Antikörper für das Antigen.
In der US-PS 4 O2O 151 ist ein Immuntest zur Bestimmung der IgG-, IgA- und igM-Konzentrationen im Serum bekannt, bei dem zunächst ein fester Träger mit der Testprobe zur Adsorption von IgG, IgA und IgM umgesetzt, anschliessend eine Umsetzung mit einem markierten Antikörper für IgG, IgA oder IgM durchgeführt und schliesslich der gebundene Antikörper gemessen wird.
Bradley et al., Journal of Clinical Microbiology, (1977), S. 521 bis 53O, beschreiben eine radioimmunologische Bestimmung von mit Hepatitis Α-Virus in Zusammenhang stehendem IgG und IgM. Der Antikörper gegen den Hepatitis A-Virus in der Testprobe wird als. Überzug auf eine Polyvinylobe rf lache aufgebracht, indem man die Polyvinyloberflache mit dem Test-
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serum umsetzt. Gereinigtes Hepatitis Α-Antigen und mit J markiertes Immunglobulin G (IgG), d.h. anti-Hepatitis A-Antikörper werden anschliessend nacheinander mit der Polyvinyl-
— 3 —
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oberfläche umgesetzt. Durch Zählung von an das Loch (well)
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gebundenem J ergibt sich eine Möglichkeit zur Bestimmung des gesamten anti-Hepatitis A im Testserum. Immunglobulin M-anti-Hepatitis A lässt sich unterscheiden, je nachdem, ob die vorgenannte anti-Hepatitis Α-Reaktion durch Ziegen-anti-IgM gehemmt wird. Es ist wichtig, eine Möglichkeit zur Unterscheidung von Antikörpern für spezifische Immunglobuline zur Verfügung zu haben, da beispielsweise bei Infektion mit Hepatitis A im akuten Infekt ions stadium die IgM-Antikörper und in der Erholungsphase die IgG-Antikörper überwiegen. Ein grosser Teil der Bevölkerung ist der Hepatitis A ausgesetzt, so dass es erforderlich ist, zwischen der akuten Phase und der Genesungsphase zu unterscheiden, d.h. zwischen IgM- und IgG-Antikörpern.
Aufgabe der Erfindung ist es, ein Verfahren zur Bestimmung von klassenspezifischen Antikörpern bei bakteriellen und viralen Infektionen sowie bei allergischen Reaktionen zur Verfügung zu stellen.
In Fig. 1 ist für klassenspezifische Antikörper IgG, IgM und IgA mit anti-Hepatitis Α-Aktivität die Zeit in Tagen nach dem Eintritt der Erkrankung gegen Zahl der Ereignisse pro Minute (cpm) χ 10 aufgetragen.
In Fig. 2 ist die anti-Hepatitis B-Kern (core)-Aktivität in den klassenspezifischen Antikörpern IgG, IgM und IgA als Zeit in Monaten nach Eintritt der Erkrankung gegen die Zahl der Ereignisse pro Minute {cpm) χ IO~3aufgetragen.
Erfindungsgemäss wird ein Verfahren zur Bestimmung von für ein Antigen klassenspezifischem Antikörper zur Verfügung gestellt, das dadurch gekennzeichnet ist, dass man
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(a) einen Antikörper für eine spezifische Immunglobulinklasse an einen festen Träger bindet, wodurch man ein klassenspezifisches Antikörperreagens erhält,
(b) das klassenspezifische Antikörperreagens mit einer Testprobe umsetzt,
(c) den nicht-gebundenen Anteil der Testprobe entfernt, wodurch man ein Antigenreagens erhält und
(d) das Antigenreagens mit einem bekannten Antigen umsetzt und die Menge an gebundenem Antigen misst, wodurch die Menge an für das bekannte Antigen klassenspezifischem Antikörper bestimmt wird.
Unter spezifischen Immunglobulinklassen sind IgG, IgM, IgA, IgE und IgG zu verstehen. Unter "festen Trägern" sind unlösliche, polymere Materialien mit Sorptionswirkung für den Antikörper zu verstehen. Derartige Materialien sind an sich bekannt. Beispiele dafür sind Kohlenwasserstoffpolymerisate, wie Polystyrol, Polyäthylen, Polypropylen, Polybutylen, Butylkautschuk und andere synthetische Kautschukarten. Beispiele für weitere organische Polymerisate sind Siliconkautschuk, Polyester, Polyamide, Cellulose und Cellulosederivate, Acrylate, Methacrylate und Vinylpolymerisate, wie Polyvinylchlorid und Polyvinylfluorid. Es können auch Copolymerisate, beispielsweise Pfropfcopolymerisate von Polystyrol, verwendet werden. Neben den vorerwähnten Materialien können die Oberflächen der festen Träger Kieselgel, Siliconblättchen, Glas, unlösliche Proteine, Metalle und dergleichen enthalten. Der feste Träger kann in Form von Kügelchen, Rohren, Streifen, Scheiben und dergleichen vorliegen.
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Beispiele für "Antikörper für eine spezifische Immunglobulinklasse" sind Antikörper, die spezifisch für die ^i-Kette von Hüman-IgM, α-Kette von Human IgA, j^-Kette von Human-IgG, δ-Kette von Human-IgD und £-Kette von Human-IgE sind und in nicht-humanen Spezies, wie Kaninchen, Ziegen, Pferden, Schafen, Meerschweinchen und dergleichen, erzeugt worden sind.
Beispiele für klassenspezifische Antikorperreagentien sind feste Träger, die mit folgenden Antikörpern einer nichthumanen Spezies überzogen sind: Anti-^i-Kette von Human-IgM, Anti-c<-Kette von Human-IgA, Anti-/'-Kette von Human-IgG, Anti- S-Kette von Human-IgD und Anti- &-Kette von Human-IgE, wie Polystyrolkügelchen, die mit Anti-^-Ketten von Human IgM, Anti- Ψ-Ketten von Human-IgG oder Anti-cx -Ketten von Human-IgA von Ziegen überzogen sind.
Antiserum mit einem Gehalt an klassenspezifischen Antikörpern wird in Puffer verdünnt und mit den Kunststoffkügelchen inkubiert. Anschliessend werden die Kügelchen mit Wasser gewaschen und getrocknet. Das auf diese Weise erhaltene klassenspezifische Antikörperreagens wird mit einer verdünnten Lösung von menschlichem Testserum inkubiert und sodann mit Wasser gewaschen, um die nicht-gebundenen Immunglobuline in der Testprobe zu entfernen. Dabei bleiben klassenspezifische Immunglobuline, einschliesslich derer, die im Serum aufgrund einer Infektion vorhanden sind und die Antikörper gegen das infizierende Agens enthalten, an den Kügelchen haften, wodurch ein Antigenreagens zur Bindung des Antigens, das mit dem im Serum vorhandenen klassenspezifischen Antikörper reagieren kann, entsteht. Beispiele für Antigenreagentien sind: Feste Träger, die mit nicht-humanem Antikörper (anti-^u-Kette von Human-IgM) überzogen sind, mit daran gebundenem IgM aus der Testprobe,
feste Träger, die mit nicht-humanem Antikörper (anti- Oi -Kette
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von Human-IgA) überzogen sind, mit daran gebundenem IgA aus der Testprobe,
feste Träger, die mit nicht—humanem Antikörper (anti- IT -Kette von Human-IgG) überzogen sind, mit daran gebundenem IgG aus der Testprobe,
feste Träger, die mit nicht-humanem Antikörper (anti- δ -Kette von Human-IgD) überzogen sind, mit daran gebundenem IgD aus der Testprobe und
feste Träger, die mit nicht-humanem Antikörper (anti-£ -Kette von Human-IgE) überzogen sind, mit daran gebundenem IgE aus der Testprobe.
Das Antigenreagens- wird mit einem bekannten Antigen umgesetzt. Die Menge an Antigen ist ein Mass für die Menge an für dieses Antigen klassenspezifischem Antikörper. Das Antigen kann direkt mit herkömmlichen fluoreszierenden Farbstoffen, Enzymen oder radioaktiven Markern markiert werden, wodurch eine Bestimmung des gebundenen Anteils ermöglicht wird. Es besteht aber auch die Möglichkeit einer indirekten Markierung durch weitere Umsetzung, beispielsweise mit einem Antikörper für das Antigen, der mit fluoreszierenden Farbstoffen, Enzymen oder radioaktiven Markern nach herkömmlichen Verfahren markiert ist. Direkt markierte Antigene und Antikörper sind bekannt:
Antikörper- oder Antigen- 3J: Biochem. J., Bd. 89 (1963), S. 114;
Antikörper- oder Antigen-Meerettichperoxidase: J. Cytochem. Histochem., Bd. 22 (1974), S. 1084;
Antikörper- oder Antigen-Fluoreszenzerreger: Diagnostic Procedures for Viral and Rickettsial Infection, Kapitel 4, S. 179, 1969.
Im Fall eines bereits markierten Antigens wird das Antigenreagens mit markiertem Antigen umgesetzt und zur Entfernung von nicht-gebundenem, markiertem Antigen gewaschen. Die Menge
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an gebundenem Antigen wird nach herkömmlichen enzymatisehen, fluorimetrischen oder radiochemischen Verfahren bestimmt.
Im Fall eines nicht-markierten Antigens wird das nicht-markierte Antigen mit dem Antigenreagens umgesetzt und zur Entfernung von nicht-gebundenem Antigen gewaschen. Anschliessend wird mit einem markierten Antikörper für das Antigen umgesetzt. Die Markierung des Antikörpers wird bestimmt.
Die Beispiele erläutern die Erfindung.
Beispiel 1
1. Es werden Lösungen von Ziegen-Antiserum, spezifisch für a) ji-Ketten von Human-lgM, b) C* -Ketten von Human-IgA und c) f -Ketten von Human-IgG in einer Verdünnung von jeweils 1 : 1000 in O,Ol m Tris-Puffer vom pH-Wert 9,0 hergestellt. Mit diesen Lösungen werden 6 mm Polystyrolkügelchen über Nacht bei Raumtemperatur beschichtet. Die Kügelchen werden sodann gewaschen, an der Luft getrocknet und bis zur Verwendung bei 4°C gelagert.
2. Eine Reihe von Serumproben eines Patienten mit Hepatitis A und negative Kontrollproben werden in 50-prozentigem Kälberserum mit einem Gehalt an 0,2 Prozent Tween-20 (Sorbimacrogollaurat)'und 0,005 m EDTA in phosphatgepufferter Kochsalzlösung (PBS) 1000-fach verdünnt.
3. Zwei Zehntel der verdünnten Proben werden jeweils im Doppelversuch bei Raumtemperatur über Nacht mit anti-^i-, anti-rt und anti-/'-Kügelchen inkubiert. Die Kügelchen werden 2 mal mit je 5 ml Wasser gewaschen.
4. Die Kügelchen werden über Nacht bei Raumtemperatur mit 0,2 ml Hepatitis Α-Virus (HAV) von einem HAV-positiven Leberextrakt,
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in PBS, 1 : 40-fach verdünnt, inkubiert- Die Kügelchen werden sodann wieder 2 mal mit je 5 ml H3O gewaschen.
5. Die Kügelchen werden mit 0,2 ml anti-HAV- °J in 50-prozentigem Kälberserum mit einem Gehalt an 0,2 Prozent Tween-20 (Sorbimacrogollaurat), 0,005 m EDTA und 5 X normalem Humanserum inkubiert und sodann 2 mal mit je 5 ml Wasser gewaschen.
6. Die Kügelchen werden in Kunststoffröhrchen gebracht und in einem |^-Zähler ausgezählt. Die Zählergebnisse werden gegen die Anzahl der Tage, die bei der Probennahme seit Ausbruch der Hepatitis A vergangen sind, aufgetragen; vgl. Fig. 1.
Beispiel2
1. Gemäss Beispiel 1, Stufe 1 werden mit anti-^u, anti-oC und anti- r überzogene Kügelchen hergestellt.
2. Eine Reihe von Serumproben eines Patienten mit Hepatitis B und negative Kontrollproben werden mit normalem Ziegenserum jeweils im Verhältnis 1 : lOOO verdünnt.
3. Zwei Zehntel der verdünnten Proben werden jeweils im Doppelversuch bei Raumtemperatur über Nacht mit anti-^u-, anti-oc und anti- \Γ-Kügelchen inkubiert. Die Kügelchen werden 2 mal mit je 5 ml Wasser gewaschen.
4. Die Kügelchen werden über Nacht bei Raumtemperatur mit O,2 ml HBcAg (gereinigtes Hepatitis B-Kern (core)-Antigen oder HBcAg) 1 : 50 verdünnt in Kochsalzlösung mit einem Gehalt an 1 X Rinderserumalbumin (BSA), 1 X Tween-2O (Sorbimacrogollaurat), 1 X normalem Humanserum, 0,Ol m Tris und 0,005 m EDTA vom pH-Wert 7,2 inkubiert. Sodann
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werden die Kügelchen 2 mal mit je 5 ml Wasser gewaschen.
5,- Die Kügelchen werden über Nacht bei Raumtemperatur mit
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anti-HBcAg J in PBS mit einem Gehalt an 0,25 % Kälberserum, 12,5 % normalem Ziegenserum, 12,5 normalem Kaninchenserum und 0,5 % normalem Humanserum inkubiert und sodann 2 mal mit je 5 ml H3O gewaschen.
6. Die Kügelchen werden auf Kunststoffrohrchen übertragen und in einem /-Zähler ausgezählt. Die Zählergebnisse werden jeweils (anti-^a, anti-(λ und anti-/') gegen die Anzahl der Monate, die bei der Probennahme seit dem ungefähren Ausbruch von Hepatitis B vergangen sind, aufgetragen; vgl. Fig. 2.
Beispiel 3
Bei Verwendung von Hepatitis B-Oberflächenantigen, das gemäss
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Greenwood et al direkt mit J markiert worden ist, erhält man ähnliche Ergebnisse wie in Beispiel 2.
Beispiel 4
Bei Verwendung von Hepatitis Α-Antigen, das gemäss Journal of Cystochemistry und Histochemistry, Bd. 22 (1974), S. 1O84 mit Meerrettichperoxidase markiert worden ist,erhält man ähnliche Ergebnisse wie in Beispiel 1.
Ende der Beschreibung
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Claims (20)

Patentansprüche
1. Verfahren zur Bestimmung von für ein Antigen klassenspezifischem Antikörper, dadurch gekennzeichnet, dass man
(a) einen Antikörper für eine spezifische Immunglobulinklasse an einen festen Träger bindet, wodurch man ein klassenspezifisches Antikörperreagens erhält,
(b) das klassenspezifische Antikörperreagens mit einer Testprobe umsetzt,
(c) den nicht gebundenen Anteil der Testprobe entfernt, wodurch man ein Antigenreagens erhält,
(d) das Antigenreagens mit einem bekannten Antigen umsetzt und
(e) nicht gebundenes Antigen entfernt und die Menge an gebundenem Antigen misst, wodurch die Menge an für das bekannte Antigen klassenspezifischem Antikörper bestimmt wird.
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2. Verfahren nach Anspruch 1, dadurch gekennzeichnet, dass das bekannte Antigen markiert ist.
3. Verfahren nach Anspruch 2 zur Bestimmung von IgM-Antikörper für Hepatitis A-Virus-Antigen, dadurch gekennzeich net, dass man
(a) einen Antikörper einer nicht-humanen Spezies ^ Kette von IgM) an einen festen Träger bindet, wodurch man ein klassenspezifisches Antikörperreagens erhält,
(b) das klassenspezifische Antikörperreagens mit einer Testprobe umsetzt und sodann wäscht, wodurch man äen nicht-gebundenen Anteil der Testprobe entfernt und ein Antigenreagens erhält,
(c) das Antigenreagens mit markiertem Hepatitis A-Virus-Antigen umsetzt und sodann zur Entfernung von nichtgebundenem, markiertem Hepatitis A-Virus-Antigen wäscht und
(d) gebundenes, markiertes Hepatitis A-Virus-Antigen misst.
4. Verfahren nach Anspruch 2 zur Bestimmung von IgG-Antikörper für Hepatitis A-Virus-Antigen, dadurch gekennzeichnet, dass man
(a) einen Antikörper einer nicht-humanen Spezies ^ Kette von IgG) an einen festen Träger bindet, wodurch man ein klassenspezifisches Antikörperreagens erhält,
(b) das klassenspezifische Antikörperreagens mit einer Testprobe umsetzt und sodann wäscht, wodurch man den nicht-gebundenen Anteil der Testprobe entfernt und ein Antigenreagens erhält,
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(c) das Antigenreagens mit markiertem Hepatitis A-Virus-Antigen umsetzt und sodann zur Entfernung von nichtgebundenem, markiertem■Hepatitis A-Virus-Antigen wäscht und
(d) gebundenes, markiertes Hepatitis A-Virus-Antigen misst.
5. Verfahren nach Anspruch 2 zur Bestimmung von IgA-Antikörper für markiertes Hepatitis A-Aritigen, dadurch gekennzeichnet, dass man
(a) einen Antikörper einer nicht-humanen Spezies (anti-oc — Kette von IgA) an einen festen Träger bindet, wodurch man ein klassenspezifisches Antikörperreagens erhält,
(b) das klassenspezifische Antikörperreagens mit einer Testprobe umsetzt und sodann wäscht, wodurch man den nicht-gebundenen Anteil der Testprobe entfernt und ein Antigenreagens erhält.
(c) das Antigenreagens mit markiertem Hepatitis A-Antigen zur Entfernung von nicht-gebundenem, markiertem Hepatitis Α-Antigen wäscht und
(d) gebundenes, markiertes Hepatitis Α-Antigen misst.
6. Verfahren nach Anspruch 2 zur Bestimmung von IgG-Antikörper für Hepatitis B-Antigen, dadurch gekennzeichnet, dass man
(a) einen Antikörper einer nicht humanen Spezies (anti-f-Kette von IgG) an einen festen Träger bindet, wodurch man ein klassenspezifisches Antikörperreagens erhält.
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(b) das klassenspezifische Antikörperreagens mit einer Testprobe umsetzt und sodann wäscht, wodurch man den nicht-gebundenen Anteil der Testprobe entfernt und ein Antigenreagens erhält,
(c) das Antigenreagens mit markiertem Hepatitis B-Antigen umsetzt und sodann zur Entfernung von nicht-gebundenem, markiertem Hepatitis B-Antigen wäscht und
(d) gebundenes, markiertes Hepatitis B-Antigen misst.
7. Verfahren nach Anspruch 2 zur Bestimmung von IgM-Antikörper für Hepatitis B-Antigen, dadurch gekennzeichnet, dass man
(a) einen Antikörper einer nicht-humanen Spezies (anti-^u-Kette von IgM) an einen festen Träger bindet, wodurch man ein klassenspezifisches Antikörperreagens erhält,
(b) das klassenspezifische Antikörperreagens mit einer Testprobe umsetzt und sodann wäscht, wodurch man den nicht-gebundenen Anteil der Testprobe entfernt und ein Antigenreagens erhält,
(c) das Antigenreagens mit markiertem Hepatitis B-Antigen umsetzt und sodann zur Entfernung von nicht-gebundenem, markiertem Hepatitis B-Antigen wäscht und
(d) gebundenes, markiertes Hepatitis B-Antigen misst.
8. Verfahren nach Anspruch 2 zur Bestimmung von IgA-Antikörper für Hepatitis B-Antigen, dadurch gekennzeichnet, dass man
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(a) einen Antikörper einer nicht-humanen Spezies
Kette von IgA) an einen festen Träger bindet, wodurch man ein klassenspezifisches Antikörperreagens erhält,
(b) das klassenspezifische Antikörperreagens mit einer Testprobe umsetzt und sodann wäscht; wodurch man den nicht-gebundenen Anteil der Testprobe entfernt und ein Antigenreagens erhält,
(c) das Antigenreagens mit markiertem Hepatitis B-Antigen umsetzt und sodann zur Entfernung von nicht-gebundenem, markiertem Hepatitis B-Antigen wäscht und
(d) gebundenes, markiertes Hepatitis B-Antigen misst.
9. Verfahren nach Anspruch 1, dadurch gekennzeichnet, dass man das bekannte Antigen zunächst an das Antigenreagens bindet und sodann mit markiertem Antikörper für das bekannte Antigen umsetzt.
10. Verfahren nach Anspruch 9 zur Bestimmung von IgM-Antikörper für Hepatitis A-Virus-Antigen, dadurch gekennzeichnet, dass man
(a) einen Antikörper einer nicht-humanen Spezies (anti-ji-Kette von IgM) an einen festen Träger bindet, wodurch man ein klassenspezifisches Antikörperreagens erhält,
(b) das klassenspezifische Antikörperreagens mit einer Testprobe umsetzt,
(c) das mit der Testprobe umgesetzte klassenspezifische Antikörperreagens wäscht, wodurch man ein Antigenreagens erhält,
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(d) das Antigenreagens mit Hepatitis A-Virus-Antigen umsetzt und sodann zur Entfernung von nicht-gebundenera Hepatitis A-Virus-Antigen wäscht,
(e) das Produkt von (d) mit markiertem Antikörper für Hepatitis A-Virus-Antigen umsetzt und sodann zur Entfernung von nicht-gebundenem, markiertem Antikörper wäscht und
(f) die Menge an gebundenem, markiertem Antikörper misst.
11. Verfahren nach Anspruch 9 zur Bestimmung von IgA-Antikörper für Hepatitis A-Virus-Antigen, dadurch gekennzeichnet, dass man
(a) einen Antikörper einer nicht-humanen Spezies (anti-oC-Kette von IgA) an einen festen Träger bindet, wodurch man ein klassenspezifisches Antikörperreagens erhält,
(b) das klassenspezifische Antikörperreagens mit einer Testprobe umsetzt,
(c) das mit der Testprobe umgesetzte klassenspezifische Antikörperreagens wäscht, wodurch man ein Antigenreagens erhält,
(d) das Antigenreagens mit Hepatitis A-Virus-Antigen umsetzt und sodann zur Entfernung von nicht-gebundenem Hepatitis A-Virus-Antigen mit Wasser wäscht,
(e) das Produkt von (d) mit markiertem Antikörper für Hepatitis A-Virus-Antigen umsetzt und sodann zur Entfernung von nicht-gebundenem, markiertem Antikörper wäscht und
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(f) die Menge an gebundenem, markiertem Antikörper misst.
12. Verfahren nach Anspruch 9 zur Bestimmung IgG-Antikörper für Hepatitis A-Virus-Antigen, dadurch gekennzeichnet, dass man
(a) einen Antikörper einer nicht-humanen Spezies (anti- f-Kette von IgG) an einen festen Träger bindet, wodurch man ein klassenspezifisches Antikörperreagens erhält,
(b) das klassenspezifische Antikörperreagens mit einer Testprobe umsetzt,
(c) das mit der Testprobe umgesetzte klassenspezifische Antikörperreagens wäscht, wodurch man ein Antigen— reagens erhält,
(d) das Antigenreagens mit Hepatitis A-Virus-Antigen umsetzt und sodann zur Entfernung von nicht-gebundenem Hepatitis A-Virus-Antigen wäscht,
(e) das Produkt von (d) mit markiertem Antikörper für Hepatitis A-Virus umsetzt und zur Entfernung von nicht gebundenem, markiertem Antikörper wäscht und
(f) die Menge an gebundenem, markiertem Antikörper misst.
13. Verfahren nach Anspruch 9 zur Bestimmung von IgM-Antikörper für Hepatitis B-Virus-Antigen, dadurch gekennzeichnet, dass man
(a) einen Antikörper einer nicht-humanen Spezies (anti-^u-Kette von IgM) an einen festen Träger bindet, wodurch man ein klassenspezifisches Antikörperreagens erhält.
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(b) das klassenspezifische Antikörperreagens mit einer Testprobe umsetzt,
(c) das mit der Testprobe umgesetzte klassenspezifische Antikörperreagens wäscht, wodurch man ein Antigenreagens erhält,
(d) das Antigenreagens mit Hepatitis B-Virus-Antigen umsetzt und sodann zur Entfernung von nicht-gebundenem Hepatitis B-Virus-Antigen mit Wasser wäscht,
(e) das Produkt von (d) mit markiertem Antikörper für Hepatitis B-Virus-Antigen umsetzt und sodann zur Entfernung von nicht-gebundenem, markiertem Antikörper wäscht und
(f) die Menge an gebundenem, markiertem Antikörper misst.
14. Verfahren nach Anspruch 9 zur Bestimmung von IgA-Antikörper für Hepatitis B-Virus-Antigen, dadurch gekennzeichnet, dass man
(a) einen Antikörper einer nicht-humanen Spezies (anti - oc Kette von IgA) an einen festen Träger bindet, wodurch man ein klassenspezifisches Antikörperreagens erhält,
(b) das klassenspezifische Antikörperreagens mit einer Testprobe umsetzt,
(c) das mit der Testprobe umgesetzte klassenspezifische Antikörperreagens wäscht, wodurch man ein Antigenreagens erhält,
(d) das Antigenreagens mit Hepatitis B-Virus-Antigen umsetzt und sodann zur Entfernung von nicht-gebundenem
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Hepatitis B-Virus-Antigen wäscht,
(e) das Produkt von (d) mit markiertem Antikörper für Hepatitis B-Virus-Antigen umsetzt und sodann zur Entfernung von nicht-gebundenem, markiertem Antikörper wäscht und
(f) die Menge an gebundenem, markiertem Antikörper misst.
15. Verfahren nach Anspruch 9 zur Bestimmung von IgG-Antikörper für Hepatitis B-Virus-Antigen, dadurch gekennzeichnet, dass man
(a) einen Antikörper einer nicht-humanen Spezies (anti-/'-. Kette von IgG) an einen festen Träger bindet, wodurch man ein klassenspezifisches Antikörperreagens erhält,
(b) das klassenspezifische Antikörperreagens mit einer Testprobe umsetzt,
(c) das mit der Testprobe umgesetzte klassenspezifische Antikörperreagens wäscht, wodurch man ein Antigenreagens erhält,
(d) das Antigenreagens mit Hepatitis B-Virus-Antigen umsetzt und sodann zur Entfernung von nicht-gebundenem Hepatitis B-Virus-Antigen wäscht,
(e) das Produkt von (d) mit markiertem Antikörper für Hepatitis B-Virus-Antigen umsetzt und zur Entfernung von nicht-gebundenem, markiertem Antikörper wäscht und
(f) die Menge an gebundenem, markiertem Antikörper misst.
— 9 —
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ORIGINAL INSPECTED
16. Immuntest-Reagens, enthaltend einen festen Träger, der mit einem für die ^i-Kette von Human-IgM spezifischen Antikörper beschichtet ist.
17. Immuntest-Reagens, enthaltend einen festen Träger, der mit einem für die <x-Kette von Human-IgA spezifischen Antikörper beschichtet ist.
18. Immuntest-Reagens, enthaltend einen festen Träger, der mit einem für die V^-Kette von Human-IgG spezifischen Antikörper beschichtet ist.
19. Immuntest-Reagens, enthaltend einen festen Träger, der mit einem für die <5*-Kette von Human-IgD spezifischen Antikörper beschichtet ist.
20. Immuntest-Reagens, enthaltend einen festen Träger, der mit einem für die 5-Kette von Humen-IgE spezifischen Antikörper beschichtet ist.
- IO -
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