DE2146165A1 - Mikrobielle Pestizide und Verfahren zu deren Herstellung - Google Patents

Mikrobielle Pestizide und Verfahren zu deren Herstellung

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DE2146165A1
DE2146165A1 DE19712146165 DE2146165A DE2146165A1 DE 2146165 A1 DE2146165 A1 DE 2146165A1 DE 19712146165 DE19712146165 DE 19712146165 DE 2146165 A DE2146165 A DE 2146165A DE 2146165 A1 DE2146165 A1 DE 2146165A1
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Susumu Otsu; Kanazawa Toshio Kyoto Utsumi (Japan). P
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Description

Die Erfindung bezieht sich auf ein Verfahren zur Herstellung von Insektiziden, bei dem Mikroorganismen speziellen Behandlungen unterworfen werden.
N>
CD
CO
OO
Insbesondere betrifft die Erfindung ein Verfahren zur Herstellung mikrobieller Insektizide, bei dem Mikroorganismen, die zum Bazillus thuringiensis gehören, und deren Homologen,die Fortpflanzungsfähigkeit bzw. Wucherung von Sporen entzogen wird, während die biologische Aktivität der kristallinen,proteinischen Toxine, genannt O-Toxine, welche in den Zellen dieser Mikroorganismen erzeugt werden, erhalten bleibt, wodurch die mikrobiellen, proteinischen Toxine zur Tötung schädlicher Insekten genutzt werden. D.h., die Erfindung betrifft ein Verfahren zur IlersteJ-luna mikxobieller Insektizide, dadurch
gekennzeichnet, daß nur die Fortpflanzungsfähigkeit von Sporen dieser Organismen deaktiviert wird, und deren mikrobielle Toxine, welche insektizide Aktivitäten aufweisen, als aktive Ingredientien, genutzt werden.
In letzter Zeit sind direkte und indirekte schädigende Wirkungen von landwirtschaftlichen Chemikalien auf Mensch und Vieh, wie die Verunreinigung von !iilch mit BIIC oder DDT ein ernsthaftes soziales Problem geworden. Im Hinblick auf diese aktuelle Situation hat die Kontrolle schädlicher Insekten durch Ausnutzung von Mikroorganismen, die in der Lage sind, derartige Insekten zu töten, wachsendes Interesse gewonnen wegen ihrer Ungefährlichkeit gegenüber Säugetieren, Fischen und Vögeln.
Mikroorganismen, die zum Bazillus thuringiensis gehören und deren Homologe besitzen folgende Vorteile.
1) Sie wirken selektiv auf schädliche Insekten, haben keine schädlichen Wirkungen auf Säugetiere und Pflanzen, bewirken keine Umweltverschmutzung, ergeben keine unnötige Störung der Flora und Fauna und sind daher ziemlich sicher.
2) Sie ergeben viel geringere Möglichkeit zur Entwicklung von Insektenresistenz.
3) Sie können in Vermischung mit Sprühmitteln und
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landwirtschaftlichen Chemikalien verwendet werden, ohne daß ihre Aktivität und diejenige der landwirtschaftlichen Chemikalien beeinträchtigt v/erden.
In verschiedenen Ländern sind mikrobielle Präparate, enthaltend Mikroorganismen, welche zum Bazillus thuringiensis gehören und deren Homologen in Form von Flüssigkeiten, netzbaren Pulvern oder Stauben bereits zur Kontrolle von schädlichen Insekten hergestellt und verkauft worden. Diese Präparate v/erden zur Kontrolle von schädlichen Insekten gegenüber Gartenpflanzen, Weideflächen, Fruchtbäumen, Gemüsen, Tabakpflanzen und Baumwollpflanzen und forstwirtschaftlich schädlichen Insekten etc. verwendet. Hierbei wird die Tatsache ausgenutzt, daß proteinische Kristalle, die in den Zellen dieser Mikroorganismei erzeugt werden, hohe Toxizität gegenüber den Larven vieler Insekten entfalten, die zur Gruppe der Lepidoptera gehören. In Seidenraupen-anbauenden Ländern, einschließlich Japan, ist es jedoch erwünscht, die mikrobiellen Insektizide ohne jede Gefahr für die Seidenkultur zu verwenden. Im Handel erhältliche Bazilluspräparate besitzen Wirkungen zur Tötung von Seidenraupen, welche nicht schädlich sind und wurden daher nur in Gegenden "verwendet, v/o keinerlei Seidenkultur betrieben wird. In Hinblick auf die soziale Forderung, daß die Umgebung vor einer Verunreinigung geschützt v/erden sollte, ist jedoch in Verbindung mit der Gesamtbekämpfung schädlicher Insekten ein Verfahren zur Anwendung mikrobieller Präparate erwünscht, welche keinerlei schädlichen Einfluß auf Seidenraupen haben.
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Durch die Erfindung wird dieses Problem gelöst als Folge einer Serie von Untersuchungen, welche zur Regelung der Relation zwischen den vorstehend genannten beiden Problemen ausgeführt wurden.
Im Zeitpunkt der Sporenbildung erzeugen die vorstehend genannten Mikroorganismen und deren Homologen in den Zellen Sporen und kristalline Toxine, welche rhombisch oder in einigen Folien schraubenförmig oder quadratisch sind. Die durch diese Mikroorganismen erzeugten Toxine sind <?-Endotoxine (durch Hitze leicht denaturierte kristalline Toxine)', ß-Exotoxine (hitzeresistente Toxine außerhalb der Zellen) und c6-Exotoxine (Phospholipase C). Die »-Toxine sind kristalline Toxine und haben derartige Wirkungen, daß sie bei Aufnahme durch Insekten der Art Lepidoptera akute toxische Symptome erzeugen, wodurch die Insekten zunächst in ihrer Freßlust gebremst v/erden und dann inaktiv werden unter Erzeugung genereller Paralyse und intestinaler Verstimmung und so getötet v/erden. Ferner haben die Toxine ähnliche Wirkungen wie beschrieben ebenfalls auf Seidenraupen und bewirken die Schwächung von Seidenraupen, so daß sie stark patogene Keimlinge für die Seidenkulturindustrie 1 sind.
Präparate, enthaltend derartige Mikroorganismen als aktive Ingredientien haben derartige Charakteristika, daß sie nicht nur die beschriebenen Wirkungen im Zeitpunkt ihres Auf~ sprüheno bewirken.; sondern die Mikroorganismen pflanzen sich
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nach ihrer Aufbringung in den Körpern der Insekten fort, welche unmittelbar durch die Wirkung der Toxine getötet wurden, und deren Aktivitäten dehnen sich weiter aus gegen andere Individuen. Da die Präparate derartige sekundäre, tertiäre u.a. Wirkungen steigender Größenordnung haben, kann unterstellt werden, daß selbst wenn die Präparate auf Flächen aufgebracht werden, Vielehe weit von einer Maulbeerfarn entfernt sind, wo Nahrungsmittel für Seidenraupen kultiviert v/erden, sie leicht auf die Umgebung übertragen werden, in denen Seidenraupen angebaut werden infolge von Wind und Regen, der Bewegung von Insekten und Tieren und infolge des Einbringens von Gartenernten in das Haus. Daher ist vorauszusetzen, daß v/enn lebende Mikroorganismen, denen die Fortpflanzungsfähigkeit nicht . entzogen wurde, wenn sie einmal verwendet wurden, nicht wiedergutzumachende Schwierigkeiten verursachen.
Es ist bekannt, daß, wenn Mikroorganismen, einschließlich Bazillus thuringiensis einer physikalischen Behandlung, wie Erhitzung oder Anwendung von Ultraschallwellen oder einer chemischen Behandlung unter Verwendung von Phenol, Mercurychlorld, Formalin, Äthanol, Äthylenoxyd oder H2°2 unterworfen werden, die vegetativen ZeHenund Sporen ihrer Fortpflanzungsfähigkeit beraubt werden. Es konnte jedoch nicht die Erkenntnis gewonnen werden, ob die 0-Endotoxine ihre Aktivitäten selbst nach solchen Behandlungen noch beibehalten oder nicht. Es scheint, daß eine Behandlung mit einer großen Menge solcher Chemikalien deren Aktivitäten inaktiviert. Um mikrobielle Insektizide herzustellen,
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sollten die verwendeten Mikroorganismen die beiden Bedingungen erfüllen/ daß die Sporen ihrer Keimungsfähigkeit beraubt v/er- . den und die "-Endotoxine ihre Aktivitäten behalten.
Die nach der Erfindung hergestellten mikrobiellen Insektizide sind mikrobielle, proteinische Toxinpräparate, welche die Nachteile üblicher Insektizide dieser Art vermeiden und derartige Vorteile haben, daß sie leicht in großen Mengen erzeugt werden und gefahrlos gegenüber Säugetieren, Fischen und Vögeln sind. Solche mikrobiellen Insektizide werden praktisch in Vermischung mit einem oberflächenaktiven Mittel verwendet. Da die nach der Erfindung verwendeten Mikroorganismen ihrer Fortpflanzungsfähigkeit beraubt sind, ergeben die Präparate keine sekundäre Infektion und haben keine schädlichen Effekte auf Seidenraupen, wenn sie nicht in der Nähe einer Maulbeerfarm verwendet werden, in denen die Nahrung für Seidenraupen kultiviert wird, und sie entfalten erfolgreich ihre Wirkungen, wenn sie hauptsächlich zur Kontrolle schädlicher Insekten der Art Lepidoptera angewendet werden, welche gegenüber den genannten Toxinen anfällig sind. Beispiele für anfällige schädliche Insekten der Art Lepidoptera sind Alfalfa Spannerraupen (Alfalfa 'loopers), gemeine Agrotiswürmer (common cutworms), gemeine Kohlkäfer (common cabbage-worms>,Heerwürmer (Army worms), Rübenheerwürmer (Beet armyworms), kalifornische Eichenwürmer (California oakworms) , Kohlschaben (Diamond back moths) , europäische Maisraupen (European corn borers), Spinnen (Fall webworms), Kornwürmer (Granulate cutworms), Traubenblattschädlinge (Grape leaf
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skeletonizers), Cypsymotten (Cypsymmoths), Eichenmotten (Oak moths), Beizenwürmer (Pickleworms), Silberraupenrasenmotten (Silver-borred lawns moths), Tabakknospenwürmer (Tobacco budworms) , Buntwürmer (Variegated cutworms), gelbe Bärenraupen (Yellow wooly bears), Tabakagrotiswürmer (Tobacco cutworms), Teetortriciden (Tea tortrixes), etc.
Um die Bedingungen zu untersuchen, unter denen Bazillus thuringiensis und dessen Homologen in einen solchen Zustand gebracht werden, daß dessen insektizide Aktivität aufrechterhalten bleibt, wurden gemäß der Erfindung diese Mikroorganismen kultiviert und dann die vegetativen Zellen und Sporen ihrer Fortpflanzungsfähigkeit durch physikalische und chemische Behandlungen vollkommen beraubt.
Als Ergebnis wurde folgende Erkenntnis gewonnen:
Die Konzentration der zum Medium gegebenen Chemikalie, die Zeit der physikalischen Behandlung, die auf die Zelle angewendet wird und die Kontaktzeit der Chemikalie mit der Zelle stehen in Beziehung zu der Entziehung der Fortpflanzungsfähig-' keit und der Inaktivierung von Toxinen. Praktisch werden die Toxine auch in Fällen der Behandlung mit Chemikalien hoher Konzentration und langzeitiger physikalischer Behandlung inaktiviert, so daß es eine erforderliche und ausreichende Bedingung
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für die Herstellung eines nicht-infektiösen mikrobiellen Insektizids ist, einen Punkt zu finden, bei dem die Konzentration der Chemikalie, die zur Entziehung der Fortpflanzungseigenschaffe erforderlich ist, diejenige Konzentration der Chemikalie überlappt, die erforderlich ist, um den Mikroorganismus in einen solchen Zustand zu bringen, daß die Toxizität aufrechterhalten bleibt. D.h., wenn Bazillus thuringiensis unter bestimmten Bedingungen kultiviert wird, die vegetativen Zellen sich im Laufe der Zeit fortpflanzen. Wenn eine bestimmte Zeitspanne verstrichen ist, erreicht jedoch das Wachstum seinen Höhepunkt, um die Bildung von Sporen und die Produktion von Toxinen einzuleiten. Anschließend werden die Sporen und Toxine aus den Zellen in das Medium infolge von Autolyse der Zellen freigegeben. Wenn die Kultivierung eine längere Zeitspanne bewirkt wird, wird jedoch die Zersetzung der Toxine durch die Wirkung von Protease eingeleitet. Demgemäß wird die Kultur abgebrochen» wenn die Toxinproduktion ein Maximum erreicht hat, und. die Kulturflüssigkeit wird einer Wasserstoffperoxydbeliandlung unterworfen. Die Keimungskraft von Sporen verringert sich mit steigender Konzentration von Wasserstoffperoxyd, wenn jedoch die Konzentration von Wasserstoffperoxyd weiter erhöht wird, beginnen die proteini-'sehen Toxine inaktiviert zu werden. In diesem Stadium sind, wie gefunden wurde, die ύ-Endotoxine aktiv, selbst wenn die Sporen ihrer Fortpflanzungsfähigkeit beraubt sind. Gemäß der Erfindung wurde weiterhin die Mindestkonzentration der Chemikalie
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festgestellt, welche zur Herstellung eines Präparates erforderlich ist, das ausreichend brauchbar als mikrobielles Insektizid ist und die Maximalkonzentration an Wasserstoffperoxyd, welche die d-Endotoxine nicht inaktiviert. Basierend auf dieser Feststellung wurden nun ein mikrobielles Insektizid erfolgreich hergestellt, das keinen schädlichen Effekt auf Seidenraupen hat. Gemäß der Erfindung wird die Aktivität von Ö-Endotoxinen aufrechterhalten, wenn die Menge an Wasserstoffperoxyd nicht höher als etwa 5 Gew.% ist, bezogen auf das Gewicht der Kultursuspension, und die Fortpflanzungsfähigkeit der Sporen wird durch Wasserstoff peroxyd in einer Menge von nicht weniger als etwa 0,5 Gew.% entzogen.
Zur Herstellung mikrobieller Insektizide in großem Maßstab ist die Minimalbehandlungskonzentration und Behandlungszeit, mit denen die genannten Mikroorganismen unabhängig von deren Art und Zustand in einen solchen Zustand versetzt werden können, daß deren Fortpflanzungsfähigkeit vollständig entzogen ist und nur deren Toxine aktiv sind, nicht nur weniger wirksam zur Inaktivierung der Toxine, sondern auch wirtschaftlich. Demgemäß sind derartige minimale Behandlungskonzentration und •Behandlungszeit die optimalen Behandlungsbedingungen. Gemäß der Erfindung wurden auch die anderen Optimalbedingungen festgestellt, z.B. im Falle von ß-Propiolacton mindestens 0,25 Gew.%, bezogen auf das Gewicht der Kultur suspension und im Falle von Ultraschallwellen mindestens 20 Minuten bei 20 KC.
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Die Erfindung wird durch ein Beispiel näher erläutert, wobei dieses Beispiel lediglich eine Ausführungsform für die Behandlungsprozedur ist, mit der Mikroorganismen in einen solchen Zustand versetzt v/erden, daß deren Fortnflanzungsfähigkeit entzogen worden ist und nur deren Toxine aktiv bleiben, während der Rahmen der Erfindung durch dieses Beispiel nicht eingeschränkt wird.
Beispiel
Mikroorganismen, gehörend zum Bazillus thuringiensis, wurden von toten Insektenkörpern, die in Freiland gesammelt wurden, isoliert und dann kultiviert. Diese Mikroorganismen und in Vorrat gehaltenen Mikroorganismen wurden einzeln Toxizitätstests in folgender Weise unterworfen:
In ein Testrohr wurden 10 ml eines Mediums gegeben, welches aus 1 1 destilliertem Wasser, 10 g. Pepton, 10 g Fleischextrakt und 3 g Natriumchlorid zusammengesetzt war und welches auf pH 7,2 eingestellt worden war. Nach Sterilisierung des Mediums wurden Mycelia der erwähnten Stämme in
das Medium eingeimpft und dann einem Schütteln der Kultur während 72 Stunden unterworfen. Anschließend warten die Sporen und o-Toxine durch Zentrifugieren gesammelt (5°C, 70OO U.p.M., 10 Minuten) und mit destilliertem Wasser gewaschen. Die gewaschenen Sporen und wurden durch Zentrifugieren gesammelt (5°C, 7000 U.p.M., 10 Mi-
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nuten) und dann vakuumgetrocknet, wobei deren Fortpflanzungsfähigkeit blieb wie sie war, um trockene Materialien zu erhalten. Diese Materialien wurden mit destilliertem Wasser auf eine Konzentration von 2 Gew.% verdünnt, und die resultierende Verdünnung wurde ausreichend gerührt und dann gleichmäßig auf Maulbeerblätter gesprüht. Die Maulbeerblätter wurden 20 Seidenraunen als Futter zugeführt,v/elche am zweiten Tage der zweiten zoologischen Erscheinungsform waren, um die Giftigkeit des Stammes zu prüfen. Die erhaltenen Ergebnisse sind in Tabelle I zusammengestellt. Wie aus Tabelle I ersichtlich ist, waren die Stämme unterschiedlich hinsichtlich des Faktors der Giftwirkung.
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Tabelle I
Relation zwischen der Art des Stammes und dessen Giftwirkung auf Seidenraupen.
Anzahl Anzahl getöteter Insekten
Il Art von Test nach nach nach nach
ti (A) insekten 2 Std. 9 Std. 24 Std. 72 Std.
Il (B) 20 O O 5 15
Stamm Il (C) 20 20 - - -
B. thuringiensis, ta CD) 20 O 1 7 12
(I (E) 20 O O 2 7
1« (F) 20 O O O O
tv» ie (G) 20 20 - - -
CD (H) 20 20 - - -
CO 20 O O 6 13
■P- 20 O 12 8 O
a
ro
Anschließend wurden 500 ml eines flüssigen Mediums, zusammengesetzt aus 5 g/l K2HPO4, 5 g/l KH3PO4, 0,0002 g/l Thiaminhydrochlorid, 0,05 g/l MgSO4, 0,3 g/l MnSO4, 0,Ol g/l FeSO4, 0,05 g/l CaCl2, 1,5 g/l Na-NH4PO4, 3 g/l Na-citrat und 10 g/l Casaminosäure in einen Schüttelkolben mit einem Volumen von 3 Litern gegeben. Nach Sterilisierung des Mediums wurden die Stämme (A), (E) und (F), welche die stärkste Giftwirkung unter den in Tabelle I gezeigten hatten, einzeln einer Schüttelkultur in dem Medium bei 27 C während 96 Stunden unterworfen. Mach Bestätigung der Tatsache, daß kristalline Toxine ausreichend gebildet worden waren mit Hilfe eines Phasenkontrastmikroskops wurde die Kultur unterbrochen, und die Materialien wurden einer Behandlung zur Entziehung der Fortpflanzungsfähigkeit der Sporen unterworfen. Als Behandlungsmittel wurde Wasserstoffperoxyd in Mengen hinzugegeben, entsprechend 0,065%, 0,125%, 0,25%, 0,50%, 0,75%, 1%, 2%, 3% und 5% (als Gewicht), bezogen auf das Gewicht der KuItürmischung. . Nach Stehenlassen der KuItürmischung . während 24 Stunden wurde 1 ml der Kulturmischvrg aufgenommen und in 10 ml eines sterilisierten Testmediums eingeimpft. 24 Stunden später wurde die Anwesenheit und Abwesenheit überlebender Zellen in dem Medium untersucht. Die erhaltenen Ergebnisse sind in Tabelle II zusammengestellt. Aus den Resultaten wurde ermittelt daß, wenn 0,5 Gew.% Wasserstoff neroxyd zu dem Medium hinzugegeben wurde, keine überlebenden Zellen nach 24 Stunden beobachtet wurden.
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Tabelle II
Ergebnisse der Fortpflanzungsfähigkeit—Ausrottungsteste unter Verwendung von Wasserstoffperoxyd
Konzentration
an Wasserstoff
peroxyd		 Stamm
(A)		 Stamm
(E)		 Stamm
(F)		 Stabilisierungsgrad
der
*-Toxine
5 _ _ _ +
3 - - - ++
2 - - - ++
1 - - - ++
0,75 - - - ++
0,50 - - - ++
0,25 - - + ++
0,125 + + + ++
0,065 + + + ++
0 + + + ++
Fußnote: In den Spalten "Stamm (A)", "Stamm (E)" und "Stamm (F)" bedeutet das Zeichen "-" Ausgerottet" und das Zeichen "+" bedeutet "überlebt". In der Spalte ••Stabilisierungsgrad der ü-Toxine" bedeutet das Zeichen "+", daß die Wirksamkeit der ü-Toxine im Vergleich mit derjenigen bei Nichtbehandlung leicht reduziert ist und das Zeichen "++" bedeutet, daß die Wirksamkeit von 0-Toxinen im wesentlichen gleich derjenigen bei Nichtbehandlung ist.
Da überhaupt keine überlebenden Sporen beobachtet wurden, wenn 0,5% oder mehr Wasserstoffperoxyd zugegeben wurde,
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wurde jeder Stamm einer Fortpflanzungsfähigkeits-Auslöschungsbehandlung bei Verwendung von 0,5% Vlasserstoffperoxyd unterworfen, und die Sporen wurden mit Hilfe einer Zentrifuge (5 C, 7000 U.p.M., 30 .Minuten) gesammelt, einige Male mit destilliertem Wasser gewaschen und dann unter reduziertem Druck getrocknet, um trockene Materialien zu erhalten. Die so erhaltenen trockenen Materialien, welche ihrer Fortpflanzungsfähigkeit beraubt worden waren, wurden mit destilliertem Wasser auf eine Konzentration von 2% verdünnt, und die resultierende Zubereitung wurde gleichmäßig auf Maulbeerblätter versprüht, welche dann 4 Instar-Seidenwürmern (Instar= zoologische Erscheinungsform) verfüttert wurden. Als Ergebnis wurde festgestellt, daß die Zubereitung die Seidenwürmer vollständig innerhalb 2 bis 3 Stunden tötlich vergiften konnte und die Toxine in der Zelle in einem aktiven Zustand waren. Die gleichen Ergebnisse wurden in denjenigen Fällen erhalten, in denen die Behandlung unter Vervrendung von 0,5 bis 0,75% Wasserstoffperoxyd, 0,25% ß-Propiolacton, 0,1% Mercurichlorid oder Ultraschallwellenoszillation (20 Minuten bei 20 KC) durchgeführt wurden.
Andererseits wurde Stamm (A) gemäß Tabelle I einer Schüttelkultur bei 27°C während 96 Stunden in 500 ml eines flüssigen Mediums unterworfen, das aus 5 g/l K3IIPO4, 5 g/l KH2PO4, 0,0002 g/l Thiaminhydrochlorid, 0,05 g/l MgSO4, 0,03 g/l MnSO4, 0,01 g/l FeSO4, 0,05 g/l CaCl3, 1,5 g/l NaNH4PO4,
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3 g/l Na-citrat und 10 g/l Casaminosäure (pH 7,2) zusammengesetzt war, anschließend einer Fortpflanzungsfähigkeits-Auslöschungsbehandlung unter Verwendung von 0,5% Wasserstoffperoxyd unterworfen , 24 Stunden lang stehengelassen und dann auf die gleiche Weise wie vorstehend beschrieben behandelt, um ein trockenes ££oren-Toxin-Gemisch in einer Ausbeute von 2,7 g je 2,5 1 der Kulturflüssigkeit zu erhalten. Dieses Gemisch wurde mit destilliertem Wasser auf eine 2%ige Konzentration verdünnt und gleichmäßig zur Fütterung von Kiefernraupen (Larven), gemeinen Kohlkäfern (Larven) und Reispflanzendickkopffaltern (Larven) gesprüht, um die insektizide Aktivität des Gemisches auf den schädlichen Insekten zu erforschen. Die erhaltenen Ergebnisse sind in Tabelle III zusammengestellt.
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Tabelle III
Insektizide Effekte einer 2%igen Mikroorganisrauszubereitung nach Behandlung mit 0,5% Wasserstoffperoxyd
Verhältnis getö-
flame des Insekts Kohlkäfer (Larven) Anzahl der
Test-Insek		 Anzahl getöteter
der		 Insekten
Zeit		 im Verlaufe teter In
sekten
Reißpflanzendickkopffalter
(Larven) 		ten 2 h 6 h 24 h 30 h 50 h (%)
Kiefernraupe (Larven) 25 0 0 4 9 12 100
gemeiner 30 4 9 17 0 0 100
20 0 6 14 0 0 100
Aus Tabelle III ist zu entnehmen, daß ein mikrobielles Insektizid, hergestellt durch Entzug der Fortpflanzungsfähigkeit eines Mikroorganismus insektide Wirkungen auf schädliche Insekten hat. Darüber hinaus ist das mikrobielle Insektizid frei von sekundärer Infektion und somit ein wertvolles Insektizid das keinen schädlichen Effekt auf Seidenraupen hat.
Die vorstehend genannte trockene Zelle wurde oral an Mäuse in einer Dosis von 3 g/kg verabreicht, jedoch wurde keinerlei vergiftende oder physiologische Störung der Mäuse beobachtet.
Zusammenfassend kann festgestellt werden, daß die Erfindung die Herstellung mikrobieller Insektizide durch spezifische Behandlung eines Mikroorganismus ermöglicht, gehörend zum Bazillus thuringiensis oder einem Homologen davon unter Entzug der Fortpflanzungsfähigkeit der Sporen des Mikroorganismus, während die biologische Viirkung von kristallinen, proteinischen Toxinen, die in der Zelle des Mikroorganismus erzeugt werden, aufrechterhalten bleibt. Das raikrobielle Insektizid kann selektiv schädliche Insekten der Art Lepidoptera unter Kontrolle halten •'ohne irgendeine schädliche Viirkung auf Säugetiere, Fische, Vögel und insbesondere Seidenraupen auszuüben.
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Claims (9)

Patentansprüche
1. Insektizid, dadurch gekennzeichnet, daß es als aktiven Bestandteil insektizide Toxine eines Mikroorganismus enthält, der in der Lage ist, Toxine für Insekte zu erzeugen und Sporen, die ihrer Fortpflanzungsfähigkeit beraubt sind zur Eliminierung der Gefahr einer sekundären Infektion von Seidenraupen hiermit.
2. Insektizid nach Anspruch 1, dadurch gekennzeichnet, daß das mikrobielle Insektizid in Vermischung mit einen oberflächenaktiven Mittel vorliegt,
3. Verfahren zur Herstellung eines mikrobiellen Insektizids nach Ansprüchen 1 oder 2, dadurch gekennzeichnet, daß das Insektizid unter Verwendung eines Mikroorganismus hergestellt wird, das zur Erzeugung von Toxinen für Insekten in der Lage ist und daß man das Mikroorganismus der Fortpflanzungsfähigkeit der Sporen unter Aufrechterhaltung deren insektizider Aktivität beraubt.
4. Verfahren nach Anspruch 3, dadurch gekennzeichnet," daß die Fortpflanzungsfähigkeit der Sporen durch eine Behandlung mit V7asserstoff peroxyd, ß-Propiolacton, Mercurichlorid oder Ultraschallwellen unter Aufrechterhaltung von deren insek-
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- 2O -
tizider Aktivität entzogen wird«
5. Verfahren nach Anspruch 4, dadurch gekennzeichnet, daß zur Entziehung der Fortpflanzungsfähigkeit der Sporen Wasserstoffperoxyd in einer Konzentration von nicht weniger als
etwa 0,5 Gew.% und zur Aufrechterhaltung der Aktivität von
ο-Endotoxinen in einer Konzentration von nicht höher als etwa 5 Gew.%, jeweils bezogen auf das Gewicht der Kultursuspension verwendet wird.
6. Verfahren nach einem der vorhergehenden Ansprüche, dadurch gekennzeichnet, daß als Toxine erzeugender Mikroorganismus Bazillus thuringiensis verwendet wird.
7. Verfahren nach einem der vorhergehenden Ansprüche, dadurch gekennzeichnet, daß man ß-Propiolacton in einer Konzentration von mindestens 0,25 Gew.%, bezogen auf das Gewicht der Kultursuspension anwendet.
8. Verfahren nach einem der vorhergehenden Ansprüche, dadurch gekennzeichnet, daß man eine Behandlung mit Ultraschallwellen mindestens 20 Minuten lang bei 2O EC vornimmt.
9. Verfahren nach einem der vorhergehenden Ansprüche ^ dadurch gekennzeichnet, daß man als mikrobielles Insektizid ein solches einsetzt, das als aktiven Bestandteil »-Endotosine enthält«
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DE19712146165 1970-09-21 1971-09-15 Mikrobielle Pestizide und Verfahren zu deren Herstellung Pending DE2146165A1 (de)

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