DE202013103204U1 - Preparation containing a probiotic culture - Google Patents
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Abstract
Präparat zur Anwendung in der Lebensmittelindustrie, pharmazeutischen Industrie, humanen oder veterinären Medizin oder Kosmetik, dadurch gekennzeichnet, dass es eine in der Form eines einzel- oder mehrartigen Probiotikums vorliegende probiotische Kultur in der Menge von 1 × 103 bis 1 × 1014 CFU pro 1 g des Präparats, sowie einen Träger in der Menge von 0,001 bis 99 Gew. % enthält, wobei die probiotische Kultur zumindest teilweise in der Form eines an dem Träger anhaftenden Biofilms vorliegt.A preparation for use in the food industry, pharmaceutical industry, human or veterinary medicine or cosmetics, characterized in that it comprises a probiotic culture in the form of a single or multiple probiotic in the amount of 1 x 10 3 to 1 x 10 14 CFU per 1 g of the preparation, and a carrier in the amount of 0.001 to 99 wt.%, wherein the probiotic culture is at least partially in the form of a biofilm adhered to the carrier.
Description
Technischer Bereich Technical part
Die vorliegende Erfindung betrifft ein Präparat, welches eine in der Form eines einzel- oder mehrartigen Probiotikums vorliegende probiotische Kultur sowie einen Träger enthält, wobei die probiotische Kultur zumindest teilweise in der Form eines an dem Träger anhaftenden Biofilms vorliegt. Ferner wird ein Verfahren zur Herstellung des Präparats sowie die Anwendung desselben in den zum menschlichen sowie veterinären Gebrauch bestimmten Nahrungsergänzungsmitteln, Sonderernährungsmitteln, Lebensmitteln, Getränken, Heilmitteln, gesundheitlichen Produkten, kosmetischen und hygienischen Produkten, Tierfutterprodukten und Probiotika enthaltenden Ergänzungsmitteln beschrieben. The present invention relates to a preparation containing a probiotic culture in the form of a single or multiple probiotic and a carrier, the probiotic culture being at least partially in the form of a biofilm adhered to the carrier. Also described is a process for preparing the preparation and the use thereof in food supplements, special foods, foods, beverages, medicines, health products, cosmetic and hygienic products, animal feed products and probiotics containing supplements intended for human and veterinary use.
Stand der Technik State of the art
Die grundlegende Fähigkeit von Mikroorganismen, an einer festen Oberfläche anhaftende Gemeinschaften zu bilden, ist bei den im Meer vorkommenden Mikroorganismen bereits am Anfang des zwanzigsten Jahrhunderts beschrieben worden (
Dank dem Zusammenwirken und der gemeinsamen Kommunikation unter den einzelnen Zellen entwickelt sich der Biofilm als eine relativ verwickelte Struktur, welche gewisse Andeutungen eines Zirkulationssystems aufweist und welche die Ernährung sowie Ableitung von Metaboliten in einer gesamten Schicht ermöglicht. In der natürlichen Umwelt findet man meistens Biofilme, die vorwiegend von gemischten bakteriellen Gemeinschaften gebildet sind, während ein von einem einzigen bakteriellen Stamm gebildeter Biofilm relativ häufig eher im Zusammenhang mit der klinischen Praxis beschrieben wird. Eine bakterielle Gemeinschaft weist jedoch eine erhebliche Heterogenität auf, und zwar sogar in dem Fall, dass es sich um einen Einzelstamm-Biofilm handelt. Thanks to the interaction and communication among the individual cells, the biofilm develops as a relatively complex structure, which has some hints of a circulatory system and which allows for the nutrition and derivation of metabolites in an entire stratum. In the natural environment, one finds mostly biofilms formed predominantly of mixed bacterial communities, while a biofilm formed by a single bacterial strain is relatively often described more in the context of clinical practice. However, a bacterial community has considerable heterogeneity, even in the case of a single-stem biofilm.
Die Voraussetzung für die Entstehung eines Biofilms besteht in der Fähigkeit bakterieller Zellen, an Oberflächen unterschiedlichster Art, wie beispielsweise Oberflächen von lebendigen Geweben, verschiedenen in die Organismen eingeführten ärztlichen Hilfsmitteln und Implantaten, Wasserleitungen, zweckmäßig ausgewählten Trägern bei biotechnologischen Kultivierungsvorgängen o. dgl. In der ersten Phase der Bildung des Biofilms, während welche die Adhäsion entsteht, spielen somit die wichtigste Rolle jene Faktoren, die sie Adhäsion ermöglichen oder zumindest erleichtern. Neben den physikalisch-chemischen Eigenschaften der adhäsiven Oberfläche, einschließlich des Vorhandenseins der anhaftenden, die Adhäsion erleichternden Makromoleküle (meistens Proteine, wie Fibrin und Fibronektin), handelt es sich dabei auch um das Vorhandensein der Faktoren, welche die Adhäsivität des betreffenden Mikroorganismus bestimmen, insbesondere um die Schicht einer polymerischen extrazellulären Matrix (Donlan, 2001), um die Fimbrien sowie um die auf den Oberflächen der Mikroorganismen vorhandenen Rezeptoren. The prerequisite for the formation of a biofilm is the ability of bacterial cells, on surfaces of various kinds, such as surfaces of living tissues, various introduced into the organisms medical aids and implants, water pipes, appropriately selected carriers in biotechnological cultivation processes o. The like. In the In the first phase of biofilm formation, during which the adhesion develops, the most important factors play the most important role in facilitating or at least facilitating adhesion. In addition to the physico-chemical properties of the adhesive surface, including the presence of adherent, adhesion-facilitating macromolecules (mostly proteins such as fibrin and fibronectin), this is also the presence of the factors which determine the adhesiveness of the microorganism in question, in particular around the layer of a polymeric extracellular matrix (Donlan, 2001), around the fimbriae as well as the receptors present on the surfaces of the microorganisms.
Nach dem Anhaften der Mikroorganismen zu der Oberfläche des Trägers folgt die Phase der Akkumulation und der als Maturation bezeichneten Reifung des Biofilms. Dabei wird die Expression der Gene stimuliert, die sich an der Bildung der komplexen Struktur des Biofilms, insbesondere an der Bildung der polymerischen extrazellulären Matrix, beteiligen, und die Physiologie der bakteriellen Zellen verändert. Die Bakterien aggregieren, vermehren sich und bilden somit die sgn. Mikrokolonien (
Während dieser Phase wird von den Bakterien eine relativ große Menge einer extrazellulären Substanz, eines sgn. Schleims, mit verschiedenster chemischer Zusammensetzung produziert. Diese Substanz setzt sich zum größeren Teil aus sowohl substituierten als auch nicht substituierten Polysacchariden zusammen, die auch als extrazelluläre polymere Substanzen (EPS) bezeichnet werden. Ferner kann sie Proteine, Nukleinsäuren oder Phospholipide enthalten. Die EPS stellt, zusammen mit den aus bakteriellen Zellen bestehenden Mikrokolonien, die grundlegende Strukturkomponente des Biofilms, dessen Eigenschaften sie deutlich beeinflusst. Ihre Häufung in der Umgebung der Mikrokolonien bewirkt die allmähliche Bildung einer ausgereiften Schicht des Biofilms. Die Erreichung der kritischen Menge der Zellen sowie der Biofilmmasse führt schließlich zum Übergang in die nächste Phase, nämlich in die Dispergierungsphase, während welcher sich sowohl die einzelnen, von der EPS umhüllten Zellen als auch deren Anhäufungen von dem Biofilm ablösen, um sich weiter fortzupflanzen (Donlan, 2001). Zu den bedeutendsten Faktoren, welche sich an dieser Phase beteiligen, gehören, neben den mechanischen Einwirkungen der Umgebung (Kraft des Wasserstroms) und der Verfügbarkeit der Nährstoffe und des Sauerstoffs, die Konzentration der Metabolite und die Regulierungssysteme, vor allem das als Quorum Sensing bezeichnete System. Die in der Form eines Biofilms wachsenden Mikroorganismen unterscheiden sich von ihren planktonischen Formen durch die Transkription unterschiedlicher Gene und somit auch durch ihre physiologischen Eigenschaften, so dass ein gewisser Biofilm-Phänotyp“ entsteht (
Die Struktur sowie die Form des Biofilms sind sehr veränderlich und werden sowohl von den eigentlichen, den Biofilm bildenden mikrobiellen Stämmen als auch von den Bedingungen der Umwelt, insbesondere von der Verfügbarkeit der Nährstoffe und des Sauerstoffs, von dem pH-Wert, von dem osmotischen Druck oder von den hydrodynamischen Verhältnissen, beeinflusst (Davey et O’Toole, 2000). In einem Milieu mit hohem Nährstoffgehalt bildet sich der Biofilm in einer starken relativ homogenen Schicht, oftmals ohne die Bildung von Kanälen. Im Gegenteil dazu, in einem Milieu, welches arm an Nährstoffe ist, wird der Biofilm entweder von einer niedrigen Mosaikstruktur oder von schwammartigen Gebilden geformt, wobei die letzteren gut entwickelte Kanäle und Poren aufweisen, mit welchen die tiefer liegenden Schichten des Biofilms mit Nährstoffen und Sauerstoff versorgt und von Metaboliten befreit werden können (
Das Wachstum in der Form eines Biofilms ist für die Mikroorganismen vorteilhaft. Im Unterschied zu den in planktonischer Form wachsenden Bakterien bietet das Wachstum in der Form eines Biofilms den bakteriellen Zellen den erforderlichen Schutz und stellt die Aufrechterhaltung einer gewissen Stufe der Homeostasis sicher. Die derart entstandene Biofilmschicht sowie die extrazellulären polymeren Substanzen, welche die Zellen umhüllen, stellt eine Barriere dar, welche die Bakterien von dem umgebenden Milieu isoliert. Die im Biofilm eingenisteten Zellen weisen somit zum Beispiel eine höhere Widerstandsfähigkeit gegen toxische Substanzen, UV-Strahlung, mechanische Beschädigungen, Bakteriophagen oder Prädatoren. In einem menschlichen oder tierischen Körper widerstehen sie besser den Einwirkungen des Immunitätssystems oder der Antibiotika. Growth in the form of a biofilm is beneficial to the microorganisms. Unlike bacteria growing in planktonic form, growth in the form of a biofilm provides the necessary protection to the bacterial cells and ensures the maintenance of a certain level of homeostasis. The resulting biofilm layer, as well as the extracellular polymeric substances that envelop the cells, provide a barrier that isolates the bacteria from the surrounding environment. The cells embedded in the biofilm thus have, for example, a higher resistance to toxic substances, UV radiation, mechanical damage, bacteriophages or predators. In a human or animal body, they better resist the effects of the immune system or antibiotics.
Die im Biofilm eingenisteten Zellen arbeiten metabolisch zusammen und weisen eine höher Stufe des genetischen Wechsels auf (
Heutzutage gibt es moderne kombinierte Systeme, in welchen die Kombination des Wachstums der Bakterien in suspendierter Form und des Anwachsens der Kulturen auf den in einer Aktivierungslösung (mit welcher ein biologischer Filter eingefüllt werden kann) eingetauchten oder auf den in einem Fluidbett (welches aus Polyurethanschaum besteht, der in der Form von Kugeln vorliegen kann) untergebrachten festen Trägern zur Anwendung kommt. Derartige Systeme werden beispielsweise in Wasserkläranlagen verwendet. Ein großer Vorteil derartiger Systeme besteht in der Akkumulation einer suspendierten Kultur sowie einer Biofilmkultur in einem Reaktor. Diese Tatsache ermöglicht eine erhebliche Erhöhung des Vorrats der Biomasse in dem System, was auch eine Erhöhung der Kapazität der betrefflichen Wasserkläranlage zur Folge haben kann. Die Verschiedenheit der in derartigen Reaktoren wachsenden biologischen Kulturen kann zudem die Vorgänge der biologischen Nitrifikation und Denitrifikation erheblich effektiver machen, die Funktionsfähigkeit des Systems stabilisieren und in vielen Fällen auch das mit der fasrigen Anschwellung des aktiviertem Schlammes zusammenhängende Problem lösen. Im Zusammenhang mit den Lebensmittelbiotechnologien werden derartige Träger vornehmlich bei der Herstellung von Essig verwendet. Bakterien, die in Essigbildnern verwendet werden, müssen eine gute Adhäsion zum betreffenden Material aufweisen. Mit dieser Eigenschaft hängt die Bildung von Schleim (Häutchen) zusammen, dessen chemische Grundlage vornehmlich von Polysacchariden gebildet ist. Bekannt sind auch Träger in der Form von Füllern (wie Kork, Bimsstein) und in der letzten Zeit beginnen auch Träger aus Silikatwerkstoffen Anwendung zu finden. Die grundlegende Voraussetzung für das gute Funktionieren eines Essigbildners ist die Erreichung des größtmöglichen Kontaktes zwischen Sauerstoff und des die Bakterien enthaltenden Substrates. Today, there are modern combined systems in which the combination of the growth of the bacteria in suspended form and the growth of the cultures on the immersed in an activating solution (with which a biological filter can be filled) or on that in a fluidized bed (which consists of polyurethane foam , which may be in the form of spheres), is applied to housed solid supports. Such systems are used for example in water treatment plants. A great advantage of such systems is the accumulation of a suspended culture as well as a biofilm culture in a reactor. This fact allows a significant increase in the supply of biomass in the system, which can also result in an increase in the capacity of the relevant water treatment plant. The diversity of biological cultures growing in such reactors can also make the processes of biological nitrification and denitrification considerably more effective, stabilize the functioning of the system, and in many cases also solve the problem associated with the fibrous swelling of the activated sludge. In the context of food biotechnologies, such carriers are used primarily in the production of vinegar. Bacteria used in vinegar builders must have good adhesion to the material in question. With this property, the formation of mucus (cuticle) is dependent, whose chemical basis is formed mainly by polysaccharides. Carriers in the form of fillers (such as cork, pumice) are also known and lately silicate-based supports have also begun to find application. The basic prerequisite for the proper functioning of a vinegar maker is the achievement of the greatest possible contact between Oxygen and the substrate containing the bacteria.
In dem Bereich der funktionellen Lebensmittel, Nahrungsergänzungsmittel und Heilmittel, in welchen probiotische Kulturen enthalten sind, ist das oben beschriebene Verfahren bisher nicht angewendet worden. Die Erfindung macht es möglich, die probiotischen Präparate der neuen Generation aus einem innovierten Blickwinkel zu sehen. Bis jetzt wurde die Aufmerksamkeit nur auf die Adhäsionsfähigkeiten der probiotischen Bakterien in der Beziehung zum Darmepitel und auf die Bildung eines Biofilm unter den physiologischen Bedingungen gerichtet. Die Problematik der Vorbereitung probiotischer Kulturen in einer Biofilmstruktur bereits während des eigentlichen Vorgangs der Herstellung einer Wirksubstanz für Nahrungsergänzungsmittel, Heilmittel, kosmetische Produkte, gesundheitliche Produkte, Lebensmittel usw. wurde jedoch bisher nicht intensiv behandelt. In the field of functional foods, dietary supplements and remedies containing probiotic cultures, the method described above has not been used heretofore. The invention makes it possible to see the probiotic preparations of the new generation from an innovative point of view. So far, attention has been focused only on the adhesion capabilities of the probiotic bacteria in relation to the gut epithelium and on the formation of a biofilm under the physiological conditions. The problem of preparing probiotic cultures in a biofilm structure already during the actual process of producing an active substance for dietary supplements, remedies, cosmetic products, health products, food, etc., has not been treated intensively.
Gegenstand der Erfindung Subject of the invention
Für die Zwecke der vorliegenden Erfindung werden in dem Text bestimmte Ausdrücke verwendet, die wie folgt definiert sind: For the purposes of the present invention, certain terms are used in the text, which are defined as follows:
Unter dem Begriff Biofilm versteht man eine aus ein- oder mehrschichtigen Gruppierungen von bakteriellen Zellen zumindest eines bakteriellen Stamms bestehende Struktur, wobei die Bakterien in einem amorphen, extrazellulären Material eingenistet sind, welches aus Exopolysacchchariden (EPS), insbesondere aus Exopolysacchchariden bakterieller Herkunft, zusammengesetzt ist, die eine feste Haftung zwischen den Zellen und der Oberfläche des Trägers sowie zwischen den einander benachbarten Zellen bewirkt. The term biofilm is understood to mean a structure consisting of single or multi-layered groups of bacterial cells of at least one bacterial strain, the bacteria being enshrined in an amorphous extracellular material composed of exopolysaccharides (EPS), in particular of exopolysaccharides of bacterial origin which causes a firm adhesion between the cells and the surface of the carrier as well as between the adjacent cells.
Die in dem Biofilm eingenisteten Bakterien zeichnen sich dabei durch eine erhöhte Widerstandsfähigkeit gegen die Einflüsse der äußeren Umwelt aus im Vergleich zu den in einer Suspension befindlichen Bakterien, was in der Praxis die Stabilität des Produkts sowie dessen biologische Wirkung positiv beeinflusst. Dies ist dadurch gegeben, dass die in lebendigen Systemen vorkommenden Bakterien standardmäßig eine Biofilmstruktur bilden. The bacterial bacteria in the biofilm are characterized by an increased resistance to the effects of the external environment compared to the suspended bacteria, which in practice positively influences the stability of the product and its biological activity. This is due to the fact that the bacteria occurring in living systems form a biofilm structure by default.
Unter dem Begriff Träger versteht man hier eine Substanz organischer oder anorganischer Art, die als Substrat für die Kultivierung von Bakterien verwendet wird. The term carrier is understood here to mean a substance of organic or inorganic type which is used as a substrate for the cultivation of bacteria.
Der vorliegenden Erfindung liegt somit die Aufgabe zugrunde, ein verbessertes Präparat, welches eine probiotische Kultur oder mehrere probiotischen Kulturen enthält, bereitzustellen. Das erfindungsgemäße Präparat soll dabei günstigere Eigenschaften im Vergleich zu bestehenden Präparaten, insbesondere in Bezug auf seine Wirksamkeit und seine Widerstandsfähigkeit gegen äußere Einflüsse, aufweisen. It is therefore an object of the present invention to provide an improved preparation containing a probiotic culture or several probiotic cultures. The preparation according to the invention is said to have more favorable properties in comparison to existing preparations, in particular with regard to its effectiveness and its resistance to external influences.
Die Erfindung betrifft ein Präparat zur Anwendung in der Lebensmittelindustrie, pharmazeutischen Industrie, humanen oder veterinären Medizin oder Kosmetik, welches eine in der Form eines einzel- oder mehrartigen Probiotikums vorliegende probiotische Kultur in der Menge von 1 × 103 bis 1 × 1014 CFU pro 1 g sowie einen Träger in der Menge von 0,001 bis 99 Gew. % enthält, wobei die probiotische Kultur zumindest teilweise in der Form eines an dem Träger anhaftenden Biofilms vorliegt. Die probiotische Kultur kann aus der Gruppe ausgewählt sein, welche die Gattungen Lactobacillus, Bifidobacterium, Streptococcus, Sacharomyces oder andere auf die Gesundheit von Menschen oder Tieren günstig wirkenden, oder einen natürlichen Bestandteil der menschlichen oder tierischen Mikroflora bildenden Bakterien oder Hefepilze, gegebenenfalls deren Gemisch umfasst. Der Träger kann aus der Gruppe ausgewählt sein, die Oligosaccharide und Polysaccharide, wie mikrokristallische Zellulose (MCC), Pektin, Inulin, Dextrin, Maltodextrin oder Glykogen, Mais- oder Kartoffelstärke und andere Stärken, Proteine mikrobieller, pflanzlicher oder tierischer Herkunft, Kristalle verschiedener Mineralsubstanzen, HMC, Nanotextilien, FOS, GOS und andere physiologisch akzeptierbare Träger oder deren Gemische umfasst, wobei er in dem Präparat in der Mindestmenge von 1 Gew. % enthalten sein kann. Vorteilhafterweise enthält das Präparat die probiotische Kultur in der Menge von 1 × 107 CFU/g, wobei 0,1 bis 100 Gew. % der probiotischen Kultur in der Form eines Biofilms vorliegen. Die probiotische Kultur sollte nicht kontaminiert sein. The invention relates to a preparation for use in the food industry, pharmaceutical industry, human or veterinary medicine or cosmetics, which comprises a probiotic culture in the form of a single or multiple probiotic in the amount of 1 × 10 3 to 1 × 10 14 CFU per 1 g and a carrier in the amount of 0.001 to 99 wt.%, Wherein the probiotic culture is at least partially in the form of a biofilm adhered to the carrier. The probiotic culture may be selected from the group comprising the genera Lactobacillus, Bifidobacterium, Streptococcus, Sacharomyces, or other human or animal beneficial or natural constituent of human or animal microflora forming bacteria or yeasts, or mixtures thereof , The carrier may be selected from the group consisting of oligosaccharides and polysaccharides such as microcrystalline cellulose (MCC), pectin, inulin, dextrin, maltodextrin or glycogen, corn or potato starch and other starches, proteins of microbial, plant or animal origin, crystals of various mineral substances , HMC, nanotextiles, FOS, GOS and other physiologically acceptable carriers or mixtures thereof, which may be included in the preparation in the minimum amount of 1% by weight. Advantageously, the preparation contains the probiotic culture in the amount of 1 × 10 7 CFU / g, wherein 0.1 to 100% by weight of the probiotic culture is in the form of a biofilm. The probiotic culture should not be contaminated.
Das Präparat kann ferner Vitamine, Minerale, pflanzliche Extrakte sowie andere physiologisch vorteilhaften Substanzen in der Höchstmenge von 99 Gew. % enthalten. The preparation may further contain vitamins, minerals, vegetable extracts and other physiologically beneficial substances in the maximum amount of 99% by weight.
Das erfindungsgemäße Präparat kann beispielsweise in der Form einer Tablette, einer Kapsel, eines Pulvers oder eines Granulats vorliegen. The preparation according to the invention can be present for example in the form of a tablet, a capsule, a powder or a granulate.
Es wird ein Verfahren zur Herstellung des erfindungsgemäßen Präparats vorgestellt, bei welchem ein Kultivierungsmedium mit einem Träger und einer die probiotische Kultur enthaltenden Inokulierungslösung bei einer Temperatur von 20 bis 40 °C kultiviert wird, bis zumindest 5% des Trägers, vorteilhafterweise 10% des Trägers, noch besser 20% des Trägers und am besten 100 % des Trägers mit der probiotischen Kultur bedeckt sind, und anschließend das derart entstandene Gemisch eingedickt und ausgetrocknet wird. Die genannten prozentuellen Werte der Bedeckung des Trägers sollen jedoch den Umfang der Erfindung keineswegs einschränken und der Kultivierungsvorgang kann somit auch dann beendet werden, wenn 30 %, 40 % oder 50 % bis 100 % des Trägers mit der probiotischen Kultur bedeckt sind. Die prozentuelle Bedeckung bedeutet dabei, dass wenigstens 5% der gesamten Oberfläche des Trägers mit dem Biofilm bedeckt sind (liegt beispielsweise der Träger in der Form von Kugeln vor, dann sollen wenigstens 5% von dem gesamten Anzahl der Kugeln mit dem Biofilm bedeckt sein). In einer vorteilhaften Ausführung des Verfahrens wird zuerst das Kultivierungsmedium zusammen mit dem Träger sterilisiert, dann wird dem Medium die Inokulierungslösung zugesetzt und anschließend wird das derart entstandene Gemisch 8 bis 48 Stunden lang bei einer Temperatur von 30 bis 40°C kultiviert. Schließlich wird das Gemisch eingedickt und ausgetrocknet. A process for the production of the preparation according to the invention is presented in which a culture medium is cultivated with a carrier and an inoculation solution containing the probiotic culture at a temperature of 20 to 40 ° C. until at least 5% of the carrier, advantageously 10% of the carrier, more preferably 20% of the carrier, and more preferably 100% of the carrier is covered with the probiotic culture, and then the resulting mixture is thickened and dried. The stated percentage values of the coverage of the carrier, however, should by no means limit the scope of the invention and the Cultivation process can thus be stopped even when 30%, 40% or 50% to 100% of the carrier are covered with the probiotic culture. The percentage coverage means that at least 5% of the entire surface of the support is covered with the biofilm (for example, if the support is in the form of spheres then at least 5% of the total number of spheres should be covered with the biofilm). In an advantageous embodiment of the method, the culture medium is first sterilized together with the carrier, then the inoculation solution is added to the medium, and then the resulting mixture is cultured at a temperature of 30 to 40 ° C. for 8 to 48 hours. Finally, the mixture is thickened and dried.
Das Kultivierungsmedium, die sich in dem Verfahren verwenden lässt, kann aus der Gruppe ausgewählt sein, die beispielsweise sterile Milch oder Molke oder synthetische, kommerziell hergestellte Media, die Kasein, Kaseinhydrolysate oder Pepton enthalten, wie z. B. Man-Rogosa-Sharpe, AOAC, Trypticase Soy Broth, Bacto Proteose Pepton, Reinforced Clostridial Broth, Trypton, Pepton oder deren Gemische, umfasst. In dem Verfahren kann die Kultivierung der probiotischen Kultur in einem Kultivierungsmedium oder in einem Gemisch der Kultivierungsmedien oder schrittweise in mindestens zwei unterschiedlichen Kultivierungsmedien oder deren Gemischen durchgeführt werden. Die Kultivierung kann statisch oder unter ständigem Rühren oder in kombinierter Weise, d.h. zeitweise statisch und zeitweise unter Rühren, verlaufen. The culture medium which can be used in the process may be selected from the group consisting of, for example, sterile milk or whey or synthetic, commercially prepared media containing casein, casein hydrolysates or peptone, such as e.g. Man-Rogosa-Sharpe, AOAC, Trypticase Soy Broth, Bacto Proteose Peptone, Reinforced Clostridial Broth, Tryptone, Peptone or mixtures thereof. In the method, the cultivation of the probiotic culture may be carried out in a culture medium or in a mixture of the culture media or stepwise in at least two different culture media or mixtures thereof. Cultivation may be static or with continuous stirring or in a combined manner, i. Static at times and temporarily with stirring.
Die zur Erhöhung der Konzentration führende Eindickung kann beispielsweise als Schleudern oder Ultrafiltration verlaufen und zur Austrocknung kann beispielsweise ein Fluid- oder Gefriertrockner verwendet werden. The thickening leading to the increase in concentration can be carried out, for example, as centrifugation or ultrafiltration and, for example, a fluid or freeze drier can be used for dehydration.
In einer vorteilhaften Ausführung des Verfahrens wird das eingedickte Präparat unter Zugabe eines weiteren Trägers getrocknet, wobei der letztere aus der Gruppe ausgewählt sein kann, die Maltodextrin, Inulin oder deren Gemische umfasst, wodurch die Austrocknung erleichtert, die Ausbeute erhöht und die anschließende Verarbeitung des Materials vereinfacht werden kann. In an advantageous embodiment of the method, the thickened preparation is dried with the addition of another carrier, the latter being selected from the group comprising maltodextrin, inulin or mixtures thereof, thereby facilitating dehydration, increasing the yield and subsequently processing the material can be simplified.
Nach der Austrocknung können aus dem Präparat Tabletten gepresst werden. Das in der Form eines Pulvers oder Granulats vorliegende Präparat kann auch in Kapseln, Beutel oder Gefäße mit Getränken gefüllt werden. After dehydration tablets can be pressed from the preparation. The preparation in the form of a powder or granules can also be filled into capsules, bags or containers with drinks.
Das erfindungsgemäße Präparat kann beispielsweise als ein zum menschlichen sowie veterinären Gebrauch bestimmtes Nahrungsergänzungsmittel, Sonderernährungsmittel, Lebensmittel, Getränk, Heilmittel, gesundheitliches Produkt, kosmetisches und hygienisches Produkt, Tierfutterprodukt oder ein Probiotika enthaltendes Ergänzungsmittel Anwendung finden. The preparation according to the invention can be used, for example, as a dietary supplement, special nutrient, foodstuff, drink, remedy, health product, cosmetic and hygienic product, animal feed product or a probiotics-containing supplement for human and veterinary use.
Beispielhafte Ausführungen der Erfindung Exemplary embodiments of the invention
Beispiel 1 example 1
Die probiotische Kultur Lactobacillus acidophillus wird auf einem festen MRS-Medium 24 Stunden lang bei 37 °C fortgepflanzt. Anschließend wird mit einer mikrobiologischen Schleife wenigstens eine Kolonie entnommen, die dann in einen Erlenmayer-Kolben mit dem Gesamtvolumen von 300 ml übergetragen wird, wobei der Kolben 100 ml des vorsterilisierten MRS-Mediums enthält. Die Kultivierung verläuft entweder stationär oder unter leichtem Schütteln 16 bis 24 Stunden lang bei 37 °C. Es folgt die Übertragung des Inhalts des Erlenmayer-Kolbens in einen Fermenter, der 2 Liter eines vorsterilisierten Kultivierungmediums enthält, wie sterile Milch oder Molke oder synthetische, kommerziell hergestellte Media, die Kasein oder Kaseinhydrolysate enthalten, wie z. B. Man-Rogosa-Sharpe, AOAC, Trypticase Soy Broth, Bacto Proteose Pepton, Reinforced Clostridial Broth, Trypton, Pepton o. dgl. Das Medium wird zusammen mit dem aus Maisstärke bestehenden Träger (20 Gew. %) vorsterilisiert. Die Kultivierung verläuft 20 Stunden lang bei 37 °C und 90 U/min. Dann folgt die 6 bis 8 Stunden dauernde statische Kultivierung ohne Schütteln bei 37 °C. Während des Vorgangs wird durchlaufend die Bildung der bakteriellen Bedeckung der Träger überprüft. Sobald wenigstens 5% der Träger mit Bakterien bedeckt sind, kann die Kultivierung beendet werden. Nach der Beendigung der Kultivierung wird die Kultur in einer Durchflusszentrifuge geschleudert oder in einer Ultrafiltrationsanlage verarbeitet und anschliessend wird sie unter Zugabe von Maltodextrin in der Menge von 40 Gew. % lyophilisiert. The probiotic culture Lactobacillus acidophillus is propagated on a solid MRS medium for 24 hours at 37 ° C. Subsequently, at least one colony is removed with a microbiological loop, which is then transferred to an Erlenmayer flask of the total volume of 300 ml, the flask containing 100 ml of the pre-sterilized MRS medium. The cultivation proceeds either stationary or with gentle shaking for 16 to 24 hours at 37 ° C. This is followed by transferring the contents of the Erlenmayer flask to a fermenter containing 2 liters of a pre-sterilized culture medium, such as sterile milk or whey, or synthetic, commercially prepared media containing casein or casein hydrolyzates, e.g. Man-Rogosa-Sharpe, AOAC, Trypticase Soy Broth, Bacto Proteose Peptone, Reinforced Clostridial Broth, Tryptone, Peptone or the like. The medium is pre-sterilized along with the corn starch carrier (20% by weight). The cultivation proceeds for 20 hours at 37 ° C and 90 rpm. This is followed by 6 to 8 hours of static culture without shaking at 37 ° C. During the process, the formation of the bacterial coverage of the carriers is continuously checked. Once at least 5% of the carriers are covered with bacteria, the cultivation can be stopped. After completion of the culture, the culture is spun in a flow-through centrifuge or processed in an ultrafiltration unit and then it is lyophilized with the addition of maltodextrin in the amount of 40 wt.%.
Beispiel 2 Example 2
Die probiotische Kultur Bifidobacterium wird auf einem festen. Kaseinhydrolysat enthaltenden Agar-Medium 24 bis 48 Stunden lang bei 37 °C fortgepflanzt. Anschließend wird mit einer mikrobiologischen Schleife wenigstens eine Kolonie entnommen, die dann in einen Erlenmayer-Kolben mit dem Gesamtvolumen von 300 ml übergetragen wird, wobei der Kolben 50 bis 100 ml des vorsterilisierten MRS-Mediums (Man-Rogosa-Sharpe) enthält. Die Kultivierung verläuft entweder stationär oder unter leichtem Schütteln 8 bis 16 Stunden lang bei 37 °C. Es folgt die Übertragung des Inhalts des Erlenmayer-Kolbens in eine 10-Liter-Kultivierungsflasche, die 6 Liter des vorsterilisierten MRS-Kultivierungsmediums enthält. Die probiotische Kultur wird durch die statische Kultivierung gewonnen, die 8 bis 16 Stunden lang verläuft. Dann folgt die Vorbereitung des Mediums in der Menge von 170 l (15 kg Trockenmolke werden in purifiziertem Wasser in der Menge von 170 l aufgelöst und anschließend wird die Lösung unter Zugabe von 15 kg des aus mikrokristallischer Zellulose bestehenden Trägers sterilisiert). In das derart vorbereitete Medium wird der Inhalt der 10-Liter-Kultivierungsflasche überführt. Die Kultivierung verläuft 20 Stunden lang bei 37 °C und bei der Geschwindigkeit des Rührwerks von 90 U/min. Dann verläuft 20 Stunden lang die statische Kultivierung bei 37 °C und bei minimaler Luftzufuhr (10 Liter atmosphärischer Luft pro Stunde). Während des Vorgangs wird durchlaufend die Bildung der bakteriellen Bedeckung der Träger überprüft. Sobald wenigstens 5% der Träger mit Bakterien bedeckt sind, kann die Kultivierung beendet werden. Nach der Beendigung der Kultivierung wird die Kultur in einer Durchflusszentrifuge geschleudert und anschließend wird sie in einem Fluidtrockner unter Zugabe von Maltodextrin oder Inulin im Verhältnis von 2:8 getrocknet. The probiotic culture Bifidobacterium is fixed on a. Casein hydrolyzate containing agar medium for 24 to 48 hours at 37 ° C propagated. Subsequently, at least one colony is removed with a microbiological loop, which is then transferred to an Erlenmayer flask of 300 ml total volume, the flask containing 50 to 100 ml of pre-sterilized MRS medium (Man-Rogosa-Sharpe). The cultivation proceeds either stationary or with gentle shaking for 8 to 16 hours at 37 ° C. Following is the transfer of the contents of the Erlenmayer flask to a 10 liter culture flask containing 6 liters of pre-sterilized MRS culture medium. The probiotic culture is obtained by static culture for 8 to 16 hours runs. Then the preparation of the medium in the amount of 170 l follows (15 kg dry whey are dissolved in purified water in the amount of 170 l and then the solution is sterilized with the addition of 15 kg of microcrystalline cellulose carrier). In the thus prepared medium, the content of the 10-liter culture bottle is transferred. The cultivation proceeds for 20 hours at 37 ° C and at the speed of the agitator of 90 rpm. Static culture then proceeds at 37 ° C for 20 hours with minimal air supply (10 liters of atmospheric air per hour). During the process, the formation of the bacterial coverage of the carriers is continuously checked. Once at least 5% of the carriers are covered with bacteria, the cultivation can be stopped. After completion of the culture, the culture is spun in a flow-through centrifuge and then dried in a fluid dryer with the addition of maltodextrin or inulin in the ratio of 2: 8.
Beispiel 3 Example 3
Die probiotische Kultur Lactobacillus rhamnosus wird auf einem festen MRS-Medium 24 bis 48 Stunden lang bei 37 °C fortgepflanzt. Anschließend wird mit einer mikrobiologischen Schleife wenigstens eine Kolonie entnommen, die dann in einen Erlenmayer-Kolben mit dem Gesamtvolumen von 300 ml übergetragen wird, wobei der Kolben 50 bis 100 ml des vorsterilisierten Trypticase Soy Broth Mediums enthält, welches auf einen pH-Wert von 6 eingestellt ist. Die Kultivierung verläuft entweder stationär oder unter leichtem Schütteln 12 bis 16 Stunden lang bei 37 °C. Es folgt die Übertragung des Inhalts des Erlenmayer-Kolbens in eine 10-Liter-Kultivierungsflasche, die 6 Liter des vorstelisierten Kultivierungmediums enthält. Die probiotische Kultur wird durch die statische Kultivierung gewonnen, die 8 bis 16 Stunden lang verläuft. Dann folgt die Vorbereitung des Kultivierungsmediums (7 kg des Mediums Reinforced Clostridial Broth werden in purifiziertem Wasser in der Menge von 190 l aufgelöst und anschließend wird die Lösung unter Zugabe von 15 kg des aus dem im Verhältnis von 1:1 vorbereiteten Gemisch der mikrokristallischen Zellulose und der Maisstärke bestehenden Trägers sterilisiert). In das derart aufbereitete Medium wird der Inhalt der 10-Liter-Kultivierungsflasche überführt. Die Kultivierung verläuft 20 Stunden lang bei 37 °C und bei der Geschwindigkeit des Rührwerks von 120 U/min. Dann verläuft 4 bis 16 Stunden lang die statische Kultivierung bei 37 °C und bei minimaler Luftzufuhr (10 Liter atmosphärischer Luft pro Stunde). Während des Vorgangs wird durchlaufend die Bildung der bakteriellen Bedeckung der Träger überprüft. Sobald wenigstens 5% der Träger mit Bakterien bedeckt sind, kann die Kultivierung beendet werden. Nach der Beendigung der Kultivierung wird die Kultur in einer Durchflusszentrifuge geschleudert und anschließend wird sie in einem Fluidtrockner unter Zugabe von Maltodextrin oder Inulin im Verhältnis von 2:10 getrocknet. The probiotic culture Lactobacillus rhamnosus is propagated on a solid MRS medium for 24 to 48 hours at 37 ° C. Subsequently, a microbiological loop is used to remove at least one colony, which is then transferred to an Erlenmayer flask of a total volume of 300 ml, the flask containing 50 to 100 ml of the pre-sterilized trypticase soy broth medium, which has a pH of 6 is set. The cultivation proceeds either stationary or with gentle shaking for 12 to 16 hours at 37 ° C. Following is the transfer of the contents of the Erlenmayer flask to a 10 liter culture flask containing 6 liters of pre-sterilized culture medium. The probiotic culture is obtained by static culture, which lasts 8 to 16 hours. Then follows the preparation of the culture medium (7 kg of the medium Reinforced Clostridial Broth are dissolved in purified water in the amount of 190 l and then the solution with the addition of 15 kg of the prepared in the ratio of 1: 1 mixture of microcrystalline cellulose and the corn starch existing carrier sterilized). In the thus prepared medium, the content of the 10-liter culture bottle is transferred. The cultivation proceeds for 20 hours at 37 ° C and at the speed of the agitator of 120 rpm. Static culture then proceeds at 37 ° C for 4 to 16 hours with minimal air supply (10 liters of atmospheric air per hour). During the process, the formation of the bacterial coverage of the carriers is continuously checked. Once at least 5% of the carriers are covered with bacteria, the cultivation can be stopped. After completion of the culture, the culture is spun in a flow-through centrifuge, and then it is dried in a fluid dryer with 2:10 maltodextrin or inulin added.
Beispiel 4 Example 4
Die probiotische Kultur Streptococcus thermophilus wird auf einem festen MRS-Medium 24 bis 48 Stunden lang bei 39 °C fortgepflanzt. Anschließend wird mit einer mikrobiologischen Schleife wenigstens eine Kolonie entnommen, die dann in einen Erlenmayer-Kolben mit dem Gesamtvolumen von 300 ml übergetragen wird, wobei der Kolben 50 bis 100 ml des vorsterilisierten Mediums Bacto Proteose Pepton enthält. Die Kultivierung verläuft entweder stationär oder unter leichtem Schütteln 12 bis 16 Stunden lang bei 39 °C. Es folgt die Inokulation, die darin besteht, dass der Inhalt des Erlenmayer-Kolbens in eine 10-Liter-Kultivierungsflasche übergetragen wird, die 6 Liter des vorsterilisierten Kultivierungmediums enthält. Die probiotische Kultur wird durch die statische Kultivierung gewonnen, die 8 bis 16 Stunden lang verläuft. Dann folgt die Vorbereitung des Kultivierungsmediums (7 kg des pulverförmigen Mediums Bacto Proteose Pepton werden in purifiziertem Wasser in der Menge von 190 l aufgelöst und anschließend wird die Lösung unter Zugabe von 25 kg des aus dem im Verhältnis von 1:1 vorbereiteten Gemisch der mikrokristallischen Zellulose und der Maisstärke bestehenden Trägers sterilisiert). In das derart aufbereitete Medium wird der Inhalt der 10-Liter-Kultivierungsflasche überführt. Die Kultivierung verläuft 12 bis 16 Stunden lang bei 39 °C und bei der Geschwindigkeit des Rührwerks von 120 U/min. Dann verläuft 4 bis 16 Stunden lang die statische Kultivierung bei 37 °C und bei minimaler Luftzufuhr (20 Liter atmosphärischer Luft pro Stunde). Während des Vorgangs wird durchlaufend die Bildung der bakteriellen Bedeckung der Träger überprüft. Sobald wenigstens 5% der Träger mit Bakterien bedeckt sind, kann die Kultivierung beendet werden. Nach der Beendigung der Kultivierung wird die Kultur in einer Durchflusszentrifuge geschleudert und anschließend wird sie in einem Fluidtrockner unter Zugabe von Maltodextrin oder Inulin im Verhältnis von 2:10 getrocknet. The probiotic culture Streptococcus thermophilus is propagated on a solid MRS medium for 24 to 48 hours at 39 ° C. Subsequently, a microbiological loop is used to remove at least one colony, which is then transferred to an Erlenmayer flask of a total volume of 300 ml, the flask containing 50 to 100 ml of the presterilized Bacto Proteose Peptone medium. The cultivation proceeds either stationary or with gentle shaking for 12 to 16 hours at 39 ° C. Following is the inoculation, which consists in placing the contents of the Erlenmayer flask in a 10 liter culture flask containing 6 liters of pre-sterilized culture medium. The probiotic culture is obtained by static culture, which lasts 8 to 16 hours. Then follows the preparation of the culture medium (7 kg of the powdered medium Bacto Proteose peptone are dissolved in purified water in the amount of 190 l and then the solution with the addition of 25 kg of the prepared in the ratio of 1: 1 mixture of microcrystalline cellulose and the corn starch existing carrier is sterilized). In the thus prepared medium, the content of the 10-liter culture bottle is transferred. The cultivation proceeds for 12 to 16 hours at 39 ° C and at the speed of the agitator of 120 rpm. Static culture then proceeds at 37 ° C for 4 to 16 hours with minimal air supply (20 liters of atmospheric air per hour). During the process, the formation of the bacterial coverage of the carriers is continuously checked. Once at least 5% of the carriers are covered with bacteria, the cultivation can be stopped. After completion of the culture, the culture is spun in a flow-through centrifuge, and then it is dried in a fluid dryer with 2:10 maltodextrin or inulin added.
Beispiel 5 Example 5
Ein Gemisch der probiotischen Kulturen Lactobacillus rhamnosus, Bifidobacterium breve, Lactobacillus casei, Lactobacillus acidophilus und Bifidobacterium longum wird durch die als Fermentation verlaufenden Kultivierung auf einem flüssigen Medium gewonnen, welches aus der im demineralisierten Wasser aufgelösten Trockenmolke vorbereitet worden ist. Die die Lyophilisate der einzelnen Kulturen enthaltenden Ampullen werden mit 1 ml physiologischer Kochsalzlösung rehydratiert und der derart aufgelöste Inhalt wird in einen Erlenmayer-Kolben mit dem Gesamtvolumen von 300 ml übergetragen, der 200 ml eines vorsterilisierten Mediums enthält, welches durch die Auflösung von 18 g Trockenmolke im demineralisierten Wasser (200 ml) vorbereitet worden ist. Die Kultivierung verläuft entweder stationär oder unter leichtem Schütteln 12 bis 16 Stunden lang bei 37 °C. Es folgt die Übertragung des Inhalts des Erlenmayer-Kolbens in eine 10-Liter-Kultivierungsflasche, die 6 Liter des vorsterilisierten Kultivierungsmediums enthält, welches durch die Auflösung von 540 g Trockenmolke im demineralisierten Wasser (6 Liter) vorbereitet worden ist. Die probiotische Kultur wird durch die statische Kultivierung gewonnen, die 8 bis 16 Stunden lang verläuft. Dann folgt die Vorbereitung des Kultivierungsmediums (9 kg Trockenmolke werden im demineralisierten Wasser in der Menge von 100 Liter aufgelöst und anschließend unter Zugabe von einem Träger in der Menge von 25 kg sterilisiert, wobei als der Träger mikrokristallische Zellulose oder Stärke oder Inulin oder Glykogen oder Dextran verwendet werden kann, und zwar in separater Form oder in einem Gemisch). Nach dem Umpumpen des Inokulums in der Menge von 6 Liter in das in der Menge von 100 Liter vorliegende Medium verläuft die Kultivierung, und zwar 12 bis 16 Stunden lang bei 37 °C und bei der Geschwindigkeit des Rührwerks von 120 U/min. Anschließend verläuft 4 bis 16 Stunden lang die statische Kultivierung bei 34 °C. Während des Vorgangs wird durchlaufend die Bildung der bakteriellen Bedeckung der Träger überprüft. Sobald wenigstens 5% der Träger mit Bakterien bedeckt sind, kann die Kultivierung beendet werden. Nach der Beendigung der Kultivierung wird die Kultur in einer Durchflusszentrifuge geschleudert oder in einer Ultrafiltrationsanlage eingedickt und anschließend wird sie in einem Fluidtrockner unter Zusatz von Maltodextrin oder Inulin im Verhältnis von 2:3 getrocknet. A mixture of the probiotic cultures Lactobacillus rhamnosus, Bifidobacterium breve, Lactobacillus casei, Lactobacillus acidophilus and Bifidobacterium longum is obtained by the fermentation-proceeding culture on a liquid medium prepared from the dry whey dissolved in the demineralized water. The ampoules containing the lyophilisates of the individual cultures are rehydrated with 1 ml of physiological saline and the contents thus dissolved are transferred to an Erlenmayer flask of a total volume of 300 ml, the Contains 200 ml of a pre-sterilized medium prepared by dissolving 18 g of dry whey in demineralised water (200 ml). The cultivation proceeds either stationary or with gentle shaking for 12 to 16 hours at 37 ° C. Following is the transfer of the contents of the Erlenmayer flask to a 10 liter culture flask containing 6 liters of pre-sterilized culture medium prepared by dissolving 540 grams of dry whey in demineralized water (6 liters). The probiotic culture is obtained by static culture, which lasts 8 to 16 hours. Then follows the preparation of the culture medium (9 kg dry whey dissolved in demineralized water in the amount of 100 liters and then sterilized with the addition of a carrier in the amount of 25 kg, using as the carrier microcrystalline cellulose or starch or inulin or glycogen or dextran can be used, in separate form or in a mixture). After circulating the inoculum in the amount of 6 liters in the medium in the amount of 100 liters, the cultivation proceeds for 12 to 16 hours at 37 ° C and at the speed of the agitator of 120 rpm. Subsequently, the static cultivation proceeds at 34 ° C for 4 to 16 hours. During the process, the formation of the bacterial coverage of the carriers is continuously checked. Once at least 5% of the carriers are covered with bacteria, the cultivation can be stopped. After completion of the culture, the culture is spun in a flow-through centrifuge or thickened in an ultrafiltration unit and then it is dried in a fluid dryer with the addition of maltodextrin or inulin in a ratio of 2: 3.
Beispiel 6 Example 6
Die probiotische Kultur Lactobacillus acidophillus wird auf einem festen MRS-Medium 24 bis 48 Stunden lang bei 37 °C fortgepflanzt. Anschließend wird mit einer mikrobiologischen Schleife wenigstens eine Kolonie entnommen, die dann in einen Erlenmayer-Kolben mit dem Gesamtvolumen von 300 ml übergetragen wird, wobei der Kolben 50 bis 100 ml des vorsterilisierten MRS-Mediums enthält, welches auf einen pH-Wert von 6 eingestellt ist. Die Kultivierung verläuft entweder stationär oder unter leichtem Schütteln 12 bis 16 Stunden lang bei 37 °C. Es folgt die Übertragung des Inhalts des Erlenmayer-Kolbens in eine 10-Liter-Kultivierungsflasche, die 6 Liter des vorsterilisierten MRS-Kultivierungmediums enthält. Die probiotische Kultur wird durch die statische Kultivierung gewonnen, die 8 bis 16 Stunden lang verläuft. Dann folgt die Vorbereitung von 170 Litern des MRS-Kultivierungsmediums, die mit der Zugabe des Trägers in der Menge von 15 kg vorsterilisiert wurde. Der Träger liegt hierbei in der Form eines aus dem im Verhältnis von 1:1 vorbereiteten Gemischs der mikrokristallischen Zellulose und der Maisstärke vor. Das Medium wird in einem Fermenter aufbereitet. In das vorsterilisierte Medium wird dann der Inhalt der 10-Liter-Kultivierungsflasche übergetragen. Die Kultivierung verläuft 12 bis 16 Stunden lang bei 37 °C und bei der Geschwindigkeit des Rührwerks von 120 U/min. Anschließend verläuft 2 bis 16 Stunden lang die statische Kultivierung bei 37 °C und bei minimaler Luftzufuhr (10 Liter atmosphärischer Luft pro Stunde). Während des Vorgangs wird durchlaufend die Bildung der bakteriellen Bedeckung der Träger überprüft. Sobald wenigstens 5% der Träger mit Bakterien bedeckt sind, kann die Kultivierung beendet werden. Nach der Beendigung der Kultivierung wird die Kultur in einer Durchflusszentrifuge geschleudert und anschließend wird sie in einem Fluidtrockner unter Zusatz von Maltodextrin oder Inulin im Verhältnis von 2:10 getrocknet. The probiotic culture Lactobacillus acidophillus is propagated on a solid MRS medium for 24 to 48 hours at 37 ° C. Subsequently, at least one colony is removed with a microbiological loop, which is then transferred to an Erlenmayer flask of a total volume of 300 ml, the flask containing 50 to 100 ml of the presterilized MRS medium, which is adjusted to a pH of 6 is. The cultivation proceeds either stationary or with gentle shaking for 12 to 16 hours at 37 ° C. Following is the transfer of the contents of the Erlenmayer flask to a 10 liter culture flask containing 6 liters of the pre-sterilized MRS culture medium. The probiotic culture is obtained by static culture, which lasts 8 to 16 hours. This is followed by the preparation of 170 liters of the MRS culture medium, which was presterilized with the addition of the carrier in the amount of 15 kg. The support is in the form of a mixture of microcrystalline cellulose and corn starch prepared in the ratio of 1: 1. The medium is processed in a fermenter. The content of the 10 liter culture bottle is then transferred to the pre-sterilized medium. The cultivation proceeds for 12 to 16 hours at 37 ° C and at the speed of the agitator of 120 rpm. Static culture then proceeds at 37 ° C for 2 to 16 hours with minimal air flow (10 liters of atmospheric air per hour). During the process, the formation of the bacterial coverage of the carriers is continuously checked. Once at least 5% of the carriers are covered with bacteria, the cultivation can be stopped. After completion of the culture, the culture is spun in a flow-through centrifuge, and then it is dried in a fluid dryer with the addition of maltodextrin or inulin in a ratio of 2:10.
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