DE19543232A1 - Herstellung einer Matrix-gebundenen miniaturisierten kombinatorischen Poly- und Oligomerbibliothek - Google Patents
Herstellung einer Matrix-gebundenen miniaturisierten kombinatorischen Poly- und OligomerbibliothekInfo
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Description
Molekulare Wechselwirkungen zwischen Polymeren und Liganden spielen eine wichtige
Funktion bei biologischen Vorgängen. Geringe Änderungen in den physikalisch
chemischen Eigenschaften von Polymeren und/oder Liganden können wesentliche
Änderungen in der Wechselwirkung zwischen Polymer und Ligand verursachen. Zur
Untersuchung der Bindungseigenschaften eines Liganden sollten idealerweise alle
Sequenzvariationen des Polymers zur Verfügung stehen (Bibliothek). Die Wechselwirkung
mit den Liganden sollte parallel untersucht werden können. Dies legt nahe, alle
Polymervariationen auf einer Fläche unterzubringen, um diese in einem Schritt mit
Liganden interagieren zu lassen. Damit wären identische Inkubationsbedingungen für alle
Moleküle gegeben und ein direkter Vergleich möglich. Sind spezifische Wechselwirkungen
bekannt, kann in weiteren Untersuchungen der Einfluß anderer Moleküle (wie Wirkstoffe)
auf spezifische Wechselwirkungen durch gemeinsame Inkubation ermittelt werden. Diese
Untersuchungen setzen das Vorhandensein einer Technologie voraus, die gestattet, kleine
Mengen an Polymeren gezielt an definierten Stellen eines festen Trägers anzubringen. Da
bei gegebener Monomerzahl M die Länge des Polymers L als Potenz eingeht, gilt für die
Gesamtzahl G aller Variationen eines Polymers: G = ML. Damit wird klar, das eine
Miniaturisierung einer solchen Matrix ebenfalls notwendig wird. Dies ist auch in
Anbetracht der Preise für die Reagenzien erstrebenswert.
Es existieren vielfältige Bemühungen Polymerbibliotheken anzulegen. Eine erfolgreiche
Realisation dieses Vorhabens gelang Mitarbeitern der Firmen Affymax und Affymetrix
(Combinatorial Chemistry - applications of light directed chemical synthesis; Jacobs, Jeffrey
W.; Fodor, Stephen P.A.; Trends in Biotechnology, 1994, 12(1), 19-26). Hierbei wird eine
neuartige Synthesechemie mit lichtsensitiven Schutzgruppen genutzt. Mittels geeigneter
Masken, wie sie in der Photolithographie üblich sind, werden Moleküle auf definierten
Bereichen einer Oberfläche aktiviert und so nach und nach Polymere mit definierten
Positionen aufgebaut. So ist es bereits gelungen, alle Variationen eines
Oligonucleotidoctamers aufzubauen, was bedeutet, daß 65536 molekulare Spezies
synthetisiert wurden (Light generated oligonucleotide arrays for rapid DNA sequence
analysis; Pease, Ann Cviani; Solas, Dennis; Sullivan, Edvard J.; Cronin, Maureen, T.;
Holm Christopher P.; Fodor, Stephen P.A.; Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. (1994), 91(11),
5022-6). Ebenfalls ist es mittels desselben Verfahrens und lichtaktivierbarer Aminogruppen
gelungen, Peptidbibliotheken anzulegen (Light directed combinatorial peptide synthesis,
Gruber, S.M.; Yu-Pang, P.; Fodor, Stephen P.A.; Proc. Am. Pep. Symp., 12th (1992),
Meeting Date 1991, 489-91).
Ein alternatives Verfahren zur Herstellung von Oligonucleotidbibliotheken wurde von
Southern und Maskos beschrieben (Parallel synthesis and analysis of large numbers of
related chemical compounds: applications to oligonucleotides; Southern, Edwin M.;
Maskos, Uwe; J. Biotechnology (1994), 35(2-3), 217-27) und erfolgreich angewandt.
Hierbei wurde die herkömmliche, aus der Festphasensynthese bekannte Chemie
angewandt. Kapillaren wurden auf einem Träger geformt und diese mit Reagenzien gefüllt.
Je nach Beladung der Kapillaren konnte so ein Nucleotid lokal spezifisch addiert werden.
Beide Verfahren haben entscheidende Nachteile. Das Verfahren von Affymax erfordert
eine spezielle Schutzgruppenchemie, die nicht allgemein gebräuchlich und folglich
kostenaufwendig und unausgereift ist. Dies führt zu Limitationen bei der Länge der zu
synthetisierenden Polymere. Weiterhin werden photolithographische Synthesetechniken
genutzt, die heute Standard in der Mikrostrukturtechnik sind. Dies macht ein Arbeiten im
Reinstraum erforderlich, will man hohe räumliche Auflösungen erreichen. Nichtsdestotrotz
sind physikalische Grenzen gegeben; selbst unter idealen Bedingungen sind Auflösungen
von < 200 nm nicht zu erwarten (λ/2). Durch die Nutzung einer photolithographischen
Apparatur bei jedem Syntheseschritt ist der Syntheseaufwand erhöht. Somit können mit
diesem Verfahren keine langen Polymere synthetisiert werden; die Ränder sind nur im
Rahmen der photolithographischen Technik scharf.
Das Verfahren von Southern und Maskos bietet zwar die Möglichkeit der Nutzung
herkömmlicher Synthesereagenzien, ist aber hierbei unökonomisch, die Kapillaren müssen
auf voller Länge mit dem Reagenz gefüllt werden. Auch ist bei Nutzung des beschriebenen
Synthesealgorhythmus die Synthese aller Variationen einer Polymerlänge unmöglich. Das
Verfahren ist im selben Maße, wie das zuvor beschriebene, miniaturisierbar. Allerdings ist
die Mikrostrukturierung des Trägers selbst erforderlich.
Somit besteht ein Bedarf nach einem alternativen Verfahren zur Herstellung einer
miniaturisierten Polymer- und Oligomerbank, bei dem die Nachteile der bekannten
Verfahren vermieden werden. Die Aufgabe besteht somit in der Bereitstellung eines
entsprechenden alternativen Verfahrens.
Die Erfindung betrifft ein Verfahren zur Herstellung einer Matrix-gebundenen
miniaturisierten kombinatorischen Polymer- und Oligomerbibliothek von Nukleinsäuren,
Peptiden, Zuckern und anderen chemischen Verbindungen, die durch Mehrschrittsynthese
hergestellt werden, und Kombinationen daraus, unter Verwendung eines chemisch inerten
Stempels, dessen aktive Oberfläche eine durch den gewählten Synthesealgorithmus
vorbestimmte Mikrostrukturierung aufweist, wodurch ein selektives Ansprechen
definierter Loci auf einem Substrat ermöglicht wird, und eines Substrats, bei dem es sich
um einen festen inerten Träger handelt, auf dessen Oberfläche eine Monoschicht aus einem
Linker mit einer terminalen geschützten funktionellen Gruppe kovalent gebunden ist,
dadurch gekennzeichnet, daß
- a. besagter Stempel in eine Lösung enthaltend ein für die Freisetzung der terminalen geschützten funktionellen Gruppen geeignetes Entschützungsreagenz getaucht wird,
- b. der mit dem Entschützungsreagenz benetzte Stempel mit dem besagtem Substrat in Kontakt gebracht wird, wodurch an den Kontaktflächen die terminalen funktionellen Gruppen freigesetzt werden,
- c. nach Waschen mit einem inerten Lösungsmittel das Substrat mit einem ersten aktivierten chemischen Baustein überschichtet wird, wodurch an den freigesetzten terminalen funktionellen Gruppen eine Kettenverlängerung durch den besagten chemischen Baustein erfolgt,
- d. die Synthesefolge der Schritte a-c beliebig oft wiederholt wird, bis die gemäß Synthesealgorithmus gewünschte Kettenlange hergestellt ist, wobei bei jedem Syntheseschritt definierte Loci auf besagtem Substrat durch Verwendung von Stempeln mit vorbestimmten Mustern angesprochen werden.
Die kombinatorische Polymerbibliothek befindet sich auf einem festen; gegenüber den bei
den Syntheseschritten verwendeten Reagenzien inerten Träger (Matrix), der selbst nicht
mikrostrukturiert sein muß. Es können sowohl ebene Flächen (Abb. 1, Schritt 1.1) als auch
mikrostrukturierte genutzt werden. Diese Bedingungen werden von jedem der in der
Mikrostrukturierung gebräuchlichen Wafer, z. B. Silizium/Siliziumoxid, aber auch von
entsprechend poliertem Quarzglas, z. B. Suprasil, erfüllt. Die Oberfläche des festen Trägers
ist über einen Linker und gegebenenfalls zusätzlich mit dem ersten chemischen Baustein
verbunden (Abb. 1, Schritte 1.2 und 1.3). Im folgenden wird ein derartig präparierter fester
Träger als Substrat bezeichnet.
Ein Linker ist eine geeignete chemische Verbindung zwischen der Trägeroberfläche und
dem ersten chemischen Baustein. Das Linkermolekül ist frei wählbar und richtet sich nach
der prospektiven Anwendung. Der Linker ist ein polyfunktionelles, insbesondere
bifunktionelles Molekül, das mit separaten funktionellen Gruppen eine kovalente Bindung
mit dem Träger und mit dem ersten chemischen Baustein bildet. Das Substrat enthält den
Linker mit einer terminalen geschützten funktionellen Gruppe. Bei der Auswahl des
geeigneten Linkers zur Herstellung einer Oligomer- oder Polymerbibliothek ist zu
beachten, daß die Linker unter den gewählten Synthesebedingungen stabil sind. Solche
Linker werden im Falle der Oligonucleotidsynthese z. B. aus 3-Glycidoxypropyl
trimethoxysilan oder 3-Aminopropyl-triethoxysilan hergestellt (Chemically Bonded
Stationary Phases for Aqueous High Performance Exclusion Chromatography; Engelhardt,
H. and Mathes, D.; Journal of Chromatography, 142 (1977) 311-320).
Der Linker kann auch bereits den ersten chemischen Baustein beinhalten oder wird in
einem ersten Syntheseschritt mit dem ersten chemischen Baustein verknüpft. Ein
chemischer Baustein ist grundsätzlich ein an seinen funktionellen Gruppen geschütztes,
zum Aufbau von Oligomeren und Polymeren geeignetes Monomer (z. B. CE-Nucleotid-
Phosphoramidite, FMoc-Aminosäuren, etc.). Dieser Baustein wird durch Entschützung
(Freisetzung) der für die Kettenverlängerung vorgesehenen funktionellen Gruppe aktiviert
und kann so mit geeigneten Gruppen (z. B. eines zweiten chemischen Bausteins) in
Wechselwirkung treten. Ein weiter Polymerisations-(Kettenverlängerungs-)Schritt wird
somit eröffnet, wenn die hierfür notwendige funktionelle Gruppe des ersten Bausteins
entschützt wird und so mit einer zuvor aktivierten funktionellen Gruppe eines zweiten
chemischen Baustein reagieren kann. Dies erfolgt im erfindungsgemäßen Verfahren mit
Hilfe eines topologisch definierten (mikrostrukturierten), gegenüber den bei den
Syntheseschritten verwendeten Reagenzien inerten Stempels, so daß positionstreu nur auf
den definierten (vorbestimmten) Bereichen des Substrats die Entschützung erfolgt (Abb. 1,
Schritt 1.4). Derartige Stempeltechniken sind an sich bekannt (Patterning self assembled
monolayers: Applications in Materials Science; Amit Kumar, Hans A. Biebuyck, George
M. Whitesides; Langmuir, 1994(10), 1498-1511). Nach erfolgter Entschützung liegt ein
entschützter Bereich auf der Oberfläche des Substrats vor (Abb. 1, Schritt 1.5), der mit
einem aktivierten chemischen Baustein reagiert (Abb. 1, Schritt 1.6).
Nach diesem Verfahren ist prinzipiell die Synthese aller Polymere und Oligomere möglich,
solange diese unter den gewählten Bedingungen stabil sind (z. B. Nukleinsäuren, Peptide,
Polysacharide und andere chemische Verbindungen; die durch Mehrschrittsynthese
hergestellt werden, z. B. Polyterpene, usw.). Für die Synthese werden dabei zur
Herstellung von Oligonucleotiden, Polynucleotiden, Peptiden, Polysacchariden, etc.
geeignete Monomere als chemische Bausteine eingesetzt. Weiterhin ist auch die Synthese
von Mischpolymeren aus solchen chemischen Bausteinen durchführbar; so können z. B. mit
einem Nukleinsäuretag versehene Glycopeptide aufgebaut werden. Die maximale Länge
der synthetisierten Ketten ist abhängig von der Schritteffizienz (Ausbeute) der gewählten
Synthesechemie.
Die Anordnung der Polymere auf der Trägeroberfläche resultiert aus dem gewählten
Synthesealgorhythmus, und dieser ist im Grunde frei wählbar. Die Polymere haben eine
durch den Stempelalgorhythmus bestimmte Länge und sind auf der Oberfläche eindeutig
lokalisierbar. Die Methoden zur Synthese der erwähnten Polymere sind Stand der Technik.
Das Verfahren zur Herstellung der Polymerbibliothek gestaltet sich im Detail wie folgt:
Die Oberfläche des Trägers wird gereinigt und vollständig mit einem geeigneten Linker versehen. Dieser Linker trägt an der terminalen funktionellen Gruppe eine abspaltbare Schutzgruppe, oder es wird in einem zusätzlichen Schritt die gesamte Oberfläche mit einem ersten chemischen Baustein mit einer terminalen geschützten funktionellen Gruppe besetzt; in beiden Fällen ist die Oberfläche geschützt und kann selektiv lokal aktiviert werden. Die Stempel bestehen aus einem chemisch inerten Material, das organische Lösungsmittel adsorbiert, z. B. Poly-di-methyl-siloxan (PDMS), wodurch eine ausreichende Menge an Reagenzien zur Entschützung spezifischer endständiger funktioneller Gruppen positionstreu auf das Substrat aufgebracht werden und so die Kopplungsreaktionen an diesen Positionen auf dem Substrat erfolgen.
Die Oberfläche des Trägers wird gereinigt und vollständig mit einem geeigneten Linker versehen. Dieser Linker trägt an der terminalen funktionellen Gruppe eine abspaltbare Schutzgruppe, oder es wird in einem zusätzlichen Schritt die gesamte Oberfläche mit einem ersten chemischen Baustein mit einer terminalen geschützten funktionellen Gruppe besetzt; in beiden Fällen ist die Oberfläche geschützt und kann selektiv lokal aktiviert werden. Die Stempel bestehen aus einem chemisch inerten Material, das organische Lösungsmittel adsorbiert, z. B. Poly-di-methyl-siloxan (PDMS), wodurch eine ausreichende Menge an Reagenzien zur Entschützung spezifischer endständiger funktioneller Gruppen positionstreu auf das Substrat aufgebracht werden und so die Kopplungsreaktionen an diesen Positionen auf dem Substrat erfolgen.
Stempel, deren aktive Oberfläche ein durch den gewählten Synthesealgorithmus
vorbestimmtes Muster aufweist, werden wie folgt hergestellt. Ein Negativ der Stempel
wird auf zuvor festgelegte Weise in der Photolackschicht beschichteter Wafer
mikrostrukturiert und gereinigt (Abb. 2, Schritt 2.1). Die Mikrostrukturierung ermöglicht
die Realisation des gewünschten Synthesealgorhythmus. Damit wird auch die selektive
Ansprache von definierten Bereichen auf einer Oberfläche möglich. Di-methyl-siloxan
vermischt mit einem geeigneten Härter wird auf das Negativ gegeben und zur besseren
Handhabung und zum Schutz vor Kontaminierungen mit einer Glasplatte abgedeckt. Das
ausgehärtete PDMS ist kovalent an das Deckglas gebunden (Abb. 2, Schritt 2.2), läßt sich
aber problemlos vom Silizium und dem verbliebenen Photolack auf dem Stempelnegativ
abziehen (Abb. 2, Schritt 2.3). Dieser Vorgang wird entsprechend wiederholt, bis alle für
die Synthese notwendigen Stempelmuster hergestellt sind. Die Anzahl der für die
Herstellung einer bestimmten Polymerbibliothek notwendigen mikrostrukturierten Stempel
resultiert aus dem gewählten Synthesealgorhythmus.
Um einen bestimmten Bereich auf dem Substrat zu aktivieren; wird der hierfür
vorgesehene, spezifisch mikrostrukturierte Stempel mit dem Entschützungsreagenz
beschichtet (Abb. 2, Schritt 2.4) und mit dem Substrat in Kontakt gebracht, d. h. auf das
Substrat gedrückt. Die dem Stempel exponierten Stellen (Kontaktstellen) auf dem Substrat
(Träger mit Linker und terminaler geschützter funktioneller Gruppe oder entsprechend
geschütztem erstem chemischen Baustein, der damit zu einem Teil des Linkers wird)
werden dadurch entschützt (Abb. 2, Schritte 2.5 und 1.5). Nach Abnahme des Stempels
und gründlichem Waschen wird die Oberfläche des Substrats dem ersten chemischen
Baustein; dessen zur Reaktion vorgesehene funktionelle Gruppe zuvor aktiviert wurde,
ausgesetzt. Damit wird das Substrat an den aktivierten Stellen um ein Monomer
verlängert. Danach ist die Oberfläche wieder vollständig geschützt (Abb. 1, Schritt 1.6).
Allen Syntheseschritten ist ein Waschschritt mit einem inerten Lösungsmittel
zwischengeschaltet. Die genannten Schritte werden in der gleichen Reihenfolge solange
wiederholt, bis die gewünschte Kettenlänge erreicht ist.
Die Zahl der Orte auf der Oberfläche ("Loci"), die separat angesprochen werden müssen,
ist gleich der Zahl der gewünschten Variationen einer Polymerkette. Sollen alle
Variationen eines Polymers der Länge L hergestellt werden und die Anzahl M an
chemischen Bausteinen verwendet werden so ergibt sich für die Zahl der separaten Loci Z:
Z = ML. Die Zahl der hierzu notwendigen Stempel S beträgt allerdings nur: S = M × L (Abb. 3). Die Maße der so hergestellten Polymerbibliothek können ausgesprochen klein gehalten werden, da selbst elektronenlithographisch hergestellte Negative genau kopiert werden können. Damit ist die Grenze für die Miniaturisierung der Polymerbibliothek mit der Grenze der Mikrosystemtechnik identisch (Microcontact Printing of Self-Assembled Monolayers: A flexible New Technique for Microfabrication; James L. Wilbur, Amit Kumar, Enoch Kirn; George M. Whitesides; Journal of the American Chemical Society, 1992(114), 9188-89). Die maximale Länge der Polymere ist lediglich abhängig von der gewählten Synthesechemie; es kann die gemäß Literaturangaben oder eigenen Erfahrungen am meisten erfolgversprechende genutzt werden. Das Verfahren ist ökonomisch, da die Oberfläche bei großer Varianz der Polymere klein gehalten werden kann.
Z = ML. Die Zahl der hierzu notwendigen Stempel S beträgt allerdings nur: S = M × L (Abb. 3). Die Maße der so hergestellten Polymerbibliothek können ausgesprochen klein gehalten werden, da selbst elektronenlithographisch hergestellte Negative genau kopiert werden können. Damit ist die Grenze für die Miniaturisierung der Polymerbibliothek mit der Grenze der Mikrosystemtechnik identisch (Microcontact Printing of Self-Assembled Monolayers: A flexible New Technique for Microfabrication; James L. Wilbur, Amit Kumar, Enoch Kirn; George M. Whitesides; Journal of the American Chemical Society, 1992(114), 9188-89). Die maximale Länge der Polymere ist lediglich abhängig von der gewählten Synthesechemie; es kann die gemäß Literaturangaben oder eigenen Erfahrungen am meisten erfolgversprechende genutzt werden. Das Verfahren ist ökonomisch, da die Oberfläche bei großer Varianz der Polymere klein gehalten werden kann.
Es ist möglich, die abgespaltenen Schutzgruppen beim Entschützen aufzufangen. Ihre
Quantifizierung ist ein direktes Maß für die Schritteffizienz. Denkbar ist auch, die
terminale Schutzgruppe an der Kette zu belassen und damit einen Marker zur
Mengenbestimmung zur Verfügung zu haben. Eine weitere Möglichkeit besteht in der
terminalen Markierung der Syntheseprodukte mit einer fluoreszierenden Gruppe.
Die Anwendungsgebiete solcher erfindungsgemäß herstellbaren Bibliotheken sind
ausgesprochen vielfältig. Beispiele solcher Anwendungsgebiete sind ein molekulares
Screening auf Wechselwirkungen zwischen verschiedenen Molekülspezies (s. o.) sowie die
Sequenzierung von Nucleinsäuren durch Hybridisierung.
Die Gesamtzahl der zu synthetisierenden Oligonucleotide beträgt 64. Jedes der 64
Oligonucleotide ist drei Basen lang.
Der Linker wird wie folgt hergestellt: ein Quarzglas wird im Ultraschallbad gereinigt und
in eine 25%ige Lösung von 3-Glycidoxypropyl-trimethoxysilan in Xylol enthaltend eine
katalytische Menge an N-Ethyldiisopropylamin getaucht; das Gefäß wird dicht
abgeschlossen und 8 h bei 80°C gehalten. Danach wird in Xylol und Ethylenglycol
gewaschen. Das Glas wird in Ethylenglycol gestellt und der pH-Wert der Lösung durch
Zugabe von Schwefelsäure auf 5 eingestellt; die Reaktion dauert 8 h bei 80°C. Nach
Abschluß der Reaktion wird das Glas gründlich mit Methanol und Diethylether gewaschen
und im Trockenofen getrocknet (Chemically Bonded Stationary Phases for Aqueous High
Performance Exclusion Chromatography, Engelhardt, H. and Mathes, D., Journal of
Chromatography, 142 (1977) 311-320). Damit befindet sich auf dem Glas eine
Monoschicht aus Hydroxyethyloxyethyloxypropyl-siloxan, die bereitwillig mit Tetrazolyl
Nucleotidphosphoramiditen (aktivierter chemischer Baustein) reagiert. Alle folgenden
Herstellungsschritte werden bei Raumtemperatur und unter trockenem Schutzgas
durchgeführt, da die genutzten Reagenzien feuchtigkeitsempfindlich sind (z. B. in einem
Laborzelt (Atmosbag), das mit Argon befüllt wird). Ein beliebiges FOD (fast
oligonucleotide deprotection)-Nucleotid-Phosphoramidit (z. B. FOD-dG-CE-
Phosphoramidit), dessen 5′OH-Gruppe mit Dimethoxytrityl(DMT) geschützt ist, wird zu
gleichen Teilen in Acetonitril und Tetrazol gelöst, so daß eine 0.1 M Lösung eines
aktivierten Nucleotidphosphoramidits vorliegt. Diese Lösung wird auf das zuvor mit
Acetonitril gewaschene Glas für 30 Minuten gegeben. Nach Waschen mit Acetonitril wird
mittels einer 0.02 M Jod-Lösung (in Tetrahydrofuran; Pyridin und Wasser) das Phosphit
zum Phosphat oxidiert und danach gründlich mit Acetonitril gewaschen. Damit liegt eine
Di-methoxy-trityl-geschützte Oberfläche auf dem Glas vor.
Die Stempel werden nach dem in den Abb. 2 und 3 dargestellten Algorhythmus
hergestellt und angewandt. Jeder Synthesezyklus beinhaltet einen Stempelschritt und
besteht aus einem einheitlichen Procedere: 1.) Waschen mit Dichlormethan (0.5 min), 2.)
Entschützen der 5′-Hydroxylgruppe (Detritylierung, 5 min) mit 2% Trichloressigsäure
(TCA) in Dichlormethan; erfolgt mit dem Stempel, 3.) mehrmaliges Waschen mit
Acetonitril (jeweils 2.5 min), 4.) Kondensation (Zugabe von Tetrazolyl-Nucleotid-
Phosphoramidit, 5 min), Kopplung erfolgt nur an zuvor entschützten Stellen; 5.) Waschen
mit Acetonitril (2.5 min), 6.) Oxidation mit 0.02 M Jod in Tetrahydrofuran,Pyridin und
Wasser (5 min), 7.) Waschen mit Acetonitril (2 min). Damit ist ein Synthesezyklus
abgeschlossen.
Die verwendeten Lösungen und Reagenzien sind Standard in der FOD-Phosphoramidit-
Nucleotidsynthese (Models 392-394 DNA/RNA Synthesizers, Users Manual, ABI, 1992).
Die Waschlösungen werden über die Oberfläche kontinuierlich gespült, die Reagenzien
verbleiben auf der Oberfläche für die angegebene Zeit.
Nach den ersten vier Stempelschritten sind vier Oligonucleotide mit der Länge 1
synthetisiert. Nach vier weiteren Stempelschritten sind 16 Oligonucleotide der Länge 2
synthetisiert, und nach weiteren vier Stempelschritten sind 64 Oligonucleotide der Länge 3
synthetisiert. Die terminalen Schutzgruppen werden mit 2%iger TCA abgespalten,
vorhandene Schutzgruppen der exocyclischen Aminogruppen der Basen
(Dimethylformamid-Gruppe bei Adenosin und Guanosin und Isobutyryl-Gruppe bei
Cytidin, Thymidin besitzt keine exocyclische Aminogruppe) und am Phosphat
(β-Cyanoethyl-Gruppe) werden mit konzentrierter Ammoniak-Lösung abgespalten (1 h bei
55°C oder 8 h bei Raumtemperatur). Der verwendete Linker ist bei allen Schritten stabil,
so daß nach vollständiger Entschützung die Oligonucleotide am Träger verbleiben. Damit
ist die Oligonuclotid-Trimer-Bibliothek hergestellt. Die Ausbeute wird durch
Absorptionsmessungen der abgespaltenen DMT-Gruppen bestimmt und ist nahezu
quantitativ.
Claims (3)
1. Verfahren zur Herstellung einer Matrix-gebundenen miniaturisierten kombinatorischen
Polymer- und Oligomerbibliothek von Nukleinsäuren, Peptiden, Zuckern und anderen
chemischen Verbindungen, die durch Mehrschrittsynthese hergestellt werden; und
Kombinationen daraus, unter Verwendung eines chemisch inerten Stempels, dessen aktive
Oberfläche eine durch den gewählten Synthesealgorithmus vorbestimmte
Mikrostrukturierung aufweist, wodurch ein selektives Ansprechen definierter Loci auf
einem Substrat ermöglicht wird, und eines Substrats, bei dem es sich um einen festen
inerten Träger handelt, auf dessen Oberfläche eine Monoschicht aus einem Linker mit einer
terminalen geschützten funktionellen Gruppe kovalent gebunden ist, dadurch
gekennzeichnet, daß
- a. besagter Stempel in eine Lösung enthaltend ein für die Freisetzung der terminalen geschützten funktionellen Gruppen geeignetes Entschützungsreagenz getaucht wird,
- b. der mit dem Entschützungsreagenz benetzte Stempel mit dem besagtem Substrat in Kontakt gebracht wird, wodurch an den Kontaktflächen die terminalen funktionellen Gruppen freigesetzt werden,
- c. nach Waschen mit einem inerten Lösungsmittel das Substrat mit einem ersten aktivierten chemischen Baustein überschichtet wird, wodurch an den freigesetzten terminalen funktionellen Gruppen eine Kettenverlängerung durch den besagten chemischen Baustein erfolgt,
- d. die Synthesefolge der Schritte a-c beliebig oft wiederholt wird, bis die gemäß Synthesealgorithmus gewünschte Kettenlänge hergestellt ist, wobei bei jedem Syntheseschritt definierte Loci auf besagtem Substrat durch Verwendung von Stempeln mit vorbestimmten Mustern angesprochen werden.
2. Verfahren gemäß Anspruch 1, dadurch gekennzeichnet, daß der chemische Baustein ein
an seinen funktionellen Gruppen geschütztes, zum Aufbau von Oligomeren und Polymeren
geeignetes Monomer ist.
3. Verfahren gemäß Anspruch 1, dadurch gekennzeichnet, daß als chemischer Baustein ein
zur Herstellung von Oligonucleotiden, Polynucleotiden, Peptiden, Polysacchariden oder
entsprechenden Mischpolymeren geeignetes Monomer eingesetzt wird.
Priority Applications (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
DE1995143232 DE19543232A1 (de) | 1995-11-07 | 1995-11-07 | Herstellung einer Matrix-gebundenen miniaturisierten kombinatorischen Poly- und Oligomerbibliothek |
Applications Claiming Priority (1)
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DE1995143232 DE19543232A1 (de) | 1995-11-07 | 1995-11-07 | Herstellung einer Matrix-gebundenen miniaturisierten kombinatorischen Poly- und Oligomerbibliothek |
Publications (1)
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ID=7777931
Family Applications (1)
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Country Status (1)
Country | Link |
---|---|
DE (1) | DE19543232A1 (de) |
Cited By (15)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
DE19741084A1 (de) * | 1997-09-18 | 1999-03-25 | Knoell Hans Forschung Ev | Hochaffine Nukleinsäuremoleküle mit funktionellen Gruppen zur spezifischen Erkennung von Zielmolekülen, ihre Herstellung und Verwendung |
WO2000053310A1 (fr) * | 1999-03-08 | 2000-09-14 | Commissariat A L'energie Atomique | Procede de realisation d'une matrice de sequences de molecules chimiques ou biologiques pour dispositif d'analyse chimique ou biologique |
WO2000056921A2 (de) * | 1999-03-22 | 2000-09-28 | Paul Cullen | Nukleinsäurekombination |
DE10004659A1 (de) * | 2000-02-03 | 2001-08-16 | Deutsches Krebsforsch | Verfahren und Vorrichtung zur Synthese und Analyse von trägergebundenen Arrays von Oligomeren, insbesondere von Primerpaaren für die PCR, sowie Träger mit Oligomeren |
DE10030588A1 (de) * | 2000-06-21 | 2002-01-03 | Deutsches Krebsforsch | Verfahren und Vorrichtung zur Synthese und Analyse von trägergebundenen Arrays von Oligomeren, insbesondere von Primerpaaren für die PCR, sowie Träger mit Oligomeren |
US6365418B1 (en) | 1998-07-14 | 2002-04-02 | Zyomyx, Incorporated | Arrays of protein-capture agents and methods of use thereof |
WO2002074433A2 (de) * | 2001-03-16 | 2002-09-26 | Lifebits Ag | Verfahren und vorrichtungen zum aufbringen von reagenzien auf punktförmige stellen |
WO2002087769A2 (de) * | 2001-04-26 | 2002-11-07 | Lifebits Ag | Verfahren zur parallelen synthese und übertragung von molekülen auf ein substrat |
US6576478B1 (en) | 1998-07-14 | 2003-06-10 | Zyomyx, Inc. | Microdevices for high-throughput screening of biomolecules |
WO2003056337A1 (en) * | 2001-12-21 | 2003-07-10 | Biacore Ab | Immobilization of binding agents |
US6682942B1 (en) | 1998-07-14 | 2004-01-27 | Zyomyx, Inc. | Microdevices for screening biomolecules |
US6897073B2 (en) | 1998-07-14 | 2005-05-24 | Zyomyx, Inc. | Non-specific binding resistant protein arrays and methods for making the same |
WO2006056948A1 (en) * | 2004-11-25 | 2006-06-01 | Koninklijke Philips Electronics N.V. | Method for chemically activating molecules or protecting active molecules |
US7794946B1 (en) | 1998-02-04 | 2010-09-14 | Life Technologies Corporation | Microarray and uses therefor |
EP2260936A2 (de) | 2004-11-25 | 2010-12-15 | CLONDIAG GmbH | Verfahren zur ortsspezifischen Synthese von Biopolymeren auf festen Trägern |
-
1995
- 1995-11-07 DE DE1995143232 patent/DE19543232A1/de not_active Withdrawn
Cited By (22)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
DE19741084A1 (de) * | 1997-09-18 | 1999-03-25 | Knoell Hans Forschung Ev | Hochaffine Nukleinsäuremoleküle mit funktionellen Gruppen zur spezifischen Erkennung von Zielmolekülen, ihre Herstellung und Verwendung |
US8637264B2 (en) | 1998-02-04 | 2014-01-28 | Life Technologies Corporation | Microarrays and uses therefor |
US8012703B2 (en) | 1998-02-04 | 2011-09-06 | Life Technologies Corporation | Microarrays and uses therefor |
US7794946B1 (en) | 1998-02-04 | 2010-09-14 | Life Technologies Corporation | Microarray and uses therefor |
US6576478B1 (en) | 1998-07-14 | 2003-06-10 | Zyomyx, Inc. | Microdevices for high-throughput screening of biomolecules |
US6682942B1 (en) | 1998-07-14 | 2004-01-27 | Zyomyx, Inc. | Microdevices for screening biomolecules |
US6630358B1 (en) | 1998-07-14 | 2003-10-07 | Zyomyx, Incorporated | Arrays of proteins and methods of use thereof |
US6897073B2 (en) | 1998-07-14 | 2005-05-24 | Zyomyx, Inc. | Non-specific binding resistant protein arrays and methods for making the same |
US6365418B1 (en) | 1998-07-14 | 2002-04-02 | Zyomyx, Incorporated | Arrays of protein-capture agents and methods of use thereof |
WO2000053310A1 (fr) * | 1999-03-08 | 2000-09-14 | Commissariat A L'energie Atomique | Procede de realisation d'une matrice de sequences de molecules chimiques ou biologiques pour dispositif d'analyse chimique ou biologique |
FR2790766A1 (fr) * | 1999-03-08 | 2000-09-15 | Commissariat Energie Atomique | Procede de realisation d'une matrice de sequences de molecules chimiques ou biologiques pour dispositif d'analyse chimique ou biologique |
WO2000056921A2 (de) * | 1999-03-22 | 2000-09-28 | Paul Cullen | Nukleinsäurekombination |
WO2000056921A3 (de) * | 1999-03-22 | 2002-03-14 | Paul Cullen | Nukleinsäurekombination |
DE10004659A1 (de) * | 2000-02-03 | 2001-08-16 | Deutsches Krebsforsch | Verfahren und Vorrichtung zur Synthese und Analyse von trägergebundenen Arrays von Oligomeren, insbesondere von Primerpaaren für die PCR, sowie Träger mit Oligomeren |
DE10030588A1 (de) * | 2000-06-21 | 2002-01-03 | Deutsches Krebsforsch | Verfahren und Vorrichtung zur Synthese und Analyse von trägergebundenen Arrays von Oligomeren, insbesondere von Primerpaaren für die PCR, sowie Träger mit Oligomeren |
WO2002074433A3 (de) * | 2001-03-16 | 2003-02-20 | Lifebits Ag | Verfahren und vorrichtungen zum aufbringen von reagenzien auf punktförmige stellen |
WO2002074433A2 (de) * | 2001-03-16 | 2002-09-26 | Lifebits Ag | Verfahren und vorrichtungen zum aufbringen von reagenzien auf punktförmige stellen |
WO2002087769A3 (de) * | 2001-04-26 | 2003-12-31 | Lifebits Ag | Verfahren zur parallelen synthese und übertragung von molekülen auf ein substrat |
WO2002087769A2 (de) * | 2001-04-26 | 2002-11-07 | Lifebits Ag | Verfahren zur parallelen synthese und übertragung von molekülen auf ein substrat |
WO2003056337A1 (en) * | 2001-12-21 | 2003-07-10 | Biacore Ab | Immobilization of binding agents |
WO2006056948A1 (en) * | 2004-11-25 | 2006-06-01 | Koninklijke Philips Electronics N.V. | Method for chemically activating molecules or protecting active molecules |
EP2260936A2 (de) | 2004-11-25 | 2010-12-15 | CLONDIAG GmbH | Verfahren zur ortsspezifischen Synthese von Biopolymeren auf festen Trägern |
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