DE1173613B

DE1173613B - Procedure for the extraction of placental tissue raw materials

Info

Publication number: DE1173613B
Application number: DEM42324A
Authority: DE
Original assignee: J G Mouson & Co Das Haus Der P
Current assignee: J G Mouson & Co Das Haus Der P
Priority date: 1959-07-31
Filing date: 1959-07-31
Publication date: 1964-07-09

Description

Verfahren zur Extraktion von placentaren Geweberohmaterialien Es ist an sich bekannt, daß die nach den bisherigen Verfahren erhaltenen placentaren Gewebeextrakte nicht für die weitere Verwendung im schwach alkalischen Milieu in Frage kommen. Die zahlreichen eiweißartigen Komponenten mit NH- und NH.- Gruppen verhindern bereits bei der Herstellung der Extrakte die Anwendung eines nur schwachsauren Milieus. Andererseits läßt es sich aus grundsätzlichen Erwägungen aber auch nicht verantworten, bei der Extraktion die stärker alkaliempfindlichen Bestandteile der placentaren Geweberohmaterialien einfach zu vernachlässigen und von vornherein ziemlich alkalische Extraktionskomponenten einzusetzen.Procedure for the extraction of placental tissue raw materials It is known per se that the placental tissue extracts obtained by the previous processes not suitable for further use in a weakly alkaline environment. The numerous protein-like components with NH and NH groups already prevent the use of a weakly acidic medium in the production of the extracts. On the other hand, for fundamental considerations, it cannot be justified during the extraction the more alkali-sensitive components of the placenta Fabric raw materials are simply negligible and quite alkaline from the start Use extraction components.

Diese Schwierigkeiten lassen sich nun überraschender Weise dadurch beseitigen, daß man die Extraktion von placentaren Geweberohmaterialien stufenweise bei p$ 7 beginnend und dann von schwach alkalischen zu stärker alkalischen PH-Werten fortschreitend durchführt, wobei der alkalische pH-Wert jeweils mit Alkylolaminen (mono bis tri) eingestellt wird. Gemäß dieser neuen Arbeitsweise werden Extrakte erhalten, welche sich sehr gut für die weitere Verwendung im schwach alkalischen Milieu eignen. Darüber hinaus wird durch die stufenweise Extraktion eine wesentlich höhere Ausbeute der placentaren Wirkstoffe erreicht, wobei die Phosphatasewerte vollkommen denen des Blutserums @ntsprec en und wobei insbesondere die Gruppe des Aminosäurekomplexes quantitativ stärker in den Vordergrund tritt. Ferner wird ein höherer Anteil an 17-Ketosteroiden in den so hergestellten Extrakten gefunden.°'-Es ist bereits bekannt, ein bestimmtes Antigen aus der dünnen, von der Mutter- und Trägerschicht abgelösten Fötusschicht der Placenta zu isolieren, indem man dieses Fötusschicht mittels einer stark alkalischen Lösung (p.-Wert etwa 13) extrahiert und den Extrakt anschließend mittels Salzsäure und einer Puffersubstanz bis zu einem pH-Wert von etwa 6,9 neutralisiert. Alkylempfindliche Wirkstoffe der Placenta können auf diese Weise aber nicht gewonnen werden.Surprisingly, these difficulties can now be eliminated by extracting raw placental tissue materials gradually starting at p $ 7 and then progressing from weakly alkaline to more alkaline pH values, the alkaline pH value being adjusted with alkylolamines (mono to tri ) is set. According to this new procedure, extracts are obtained which are very suitable for further use in a weakly alkaline medium. In addition, the step-by-step extraction achieves a significantly higher yield of the placental active ingredients, the phosphatase values completely countering those of the blood serum and in particular the group of the amino acid complex quantitatively coming to the fore. Furthermore, a higher proportion of 17-ketosteroids is found in the extracts produced in this way. It is already known to isolate a certain antigen from the thin fetal layer of the placenta, detached from the mother and carrier layers, by isolating this fetal layer extracted using a strongly alkaline solution (p. value approx. 13) and the extract then neutralized using hydrochloric acid and a buffer substance up to a pH value of approx. 6.9. However, alkyl-sensitive substances in the placenta cannot be obtained in this way.

Weiterhin ist die chromatographische Auftrennung von Placentaextrakten beschrieben worden, die vorzugsweise mittels organischer Lösungsmittel als Extraktionsflüssigkeit erhalten worden sind. Das Chromatogramm wird unter Anwendung von Eluierungsmitteln verschiedenen Hydrophyliegrades ausgewaschen, so daß stoffwechselhemmende und stoffwechselfördernde Stoffe getrennt als Eluat aufgefangen werden können.Furthermore, the chromatographic separation of placenta extracts has been described, preferably using organic solvents as the extraction liquid have been received. The chromatogram is performed using eluents different degrees of hydrophylicity washed out, so that metabolism-inhibiting and metabolism-promoting Substances can be collected separately as eluate.

Die erfindungsgemäße Arbeitsweise läßt sich noch verbessern, indem man oberfläelienaktive Extraktionskomponenten mitverwendet. Für diesen Zweck eignen sich insbesondere die organischen Phosphorsäureester, da diese keine eiweißfällenden Eigenschaften besitzen und im Hinblick auf die spätere Verwendung der Extrakte auch nicht abgetrennt zu werden brauchen. Vorzugsweise wird beispielsweise ein sekundärer Stearylphosphorsäureester mit je zwei Äthylenoxydgruppen im Molekül verwendet. Auch die natürlichen Phosphorlipide, wie Lecithin und Kephalin, eignen sich als Extraktionshilfsmittel, obwohl diese Verbindungen nicht so haltbar sind wie die synthetisch erzeugten organischen Phosphorsäureester.The procedure according to the invention can be further improved by surface-active extraction components are also used. Suitable for this purpose In particular, the organic phosphoric acid esters, as these do not precipitate protein Possess properties and also with regard to the later use of the extracts need not be severed. For example, a secondary Stearyl phosphoric acid esters with two ethylene oxide groups in the molecule are used. Even the natural phospholipids, such as lecithin and cephalin, are suitable as extraction aids, although these compounds are not as durable as the synthetically produced organic ones Phosphoric acid ester.

Zur Verbesserung der osmotischen Diffusion des Extraktionsgutes können zweckmäßig auch schon zu der ersten Extraktionsflüssigkeit (pg 7) 0,59/o oberflächenaktive Substanzen hinzugefügt werden.To improve the osmotic diffusion of the extraction material you can expediently already 0.59 / o surface-active to the first extraction liquid (pg 7) Substances are added.

Als Alkalisierungsmittel bei der stufenweisen Extraktion gemäß der Erfindung werden vor allem Alkylolamine, wie z. B. Mono- und Diäthanolamin, eingesetzt. Die Einengung der erfindungsgemäßen placentaren Extrakte geschieht in an sich bekannter Weise bei möglichst niedrigen Temperaturen.As an alkalizing agent in the step-by-step extraction according to the Invention are mainly alkylolamines such. B. mono- and diethanolamine used. The placental extracts according to the invention are narrowed in a manner known per se Way at the lowest possible temperatures.

Die Extraktionsbehandlung wird vorzugsweise im p11-Bereich von 7 bis 10 durchgeführt.The extraction treatment is preferably carried out in the p11 range from 7 to 10 carried out.

Die Erfindung wird durch das folgende Beispiel noch näher erläutert. Beispiel 1 Die Menge von 10 kg placentarer Rohsubstanz wird mit 5 kg bidestilliertem Wasser ausgezogen (pH 7,0) unter ständiger Bewegung der gesamten Extraktionsmasse. Nachfolgend werden 2,5 kg einer 0,5 o/oigen wäßrigen Lösung des im Handel erhältlichen Natriumsalzes des sekundären Stearylphosphorsäureesters mit je zwei Äthylenoxydgruppen im Molekül zugesetzt, die mit Monoaethanolamin auf pH 8,0 eingestellt ist. Im Anschluß hieran werden nochmals 2,5 kg der gleichen 0,5 o/oigen wäßrigen Lösung zugesetzt, diesmal jedoch nach Einstellung eines pH-Wertes von 9,0 mittels Diäthanolamin. Nachfolgend wird in üblicher Weise extrahiert und die Einengung des fertigen Extraktes bei + 30° C vorgenommen.The invention is explained in more detail by the following example. Example 1 The amount of 10 kg of placental crude substance is extracted with 5 kg of double-distilled water (pH 7.0) with constant movement of the entire extraction mass. Subsequently, 2.5 kg of a 0.5% aqueous solution of the commercially available sodium salt of the secondary stearyl phosphoric acid ester with two ethylene oxide groups in the molecule, which is adjusted to pH 8.0 with monoethanolamine, are added. A further 2.5 kg of the same 0.5% aqueous solution are then added, but this time after a pH value of 9.0 has been set by means of diethanolamine. It is then extracted in the usual way and the finished extract is concentrated at + 30 ° C.

Beispiel 2 10 kg placentare Rohsubstanz werden mit 5 kg reinstem Wasser unter sterilen Bedingungen- unter ständiger Bewegung des Extraktionsgutes ausgezogen. Nach Trennung von Rohsubstanz und 5 kg Extraktionsflüssigkeit werden 2,5 kg einer 0,5 o/oigen wässerigen Lösung eines tertiären Phosphorsäureoleylesters hinzugefügt, die mit Monoäthanolamin auf pH 8,0 eingestellt ist. Nach Isolierung dieses Extrakts werden nochmals 2,5 kg der gleichen 0,5 o/oigen wässerigen Lösung zugesetzt, diesmal jedoch nach Einstellung eines pH-Wertes von 9,0 mittels Diäthanolamin. Nachfolgend wird in üblicher Weise extrahiert und die Einengung des Gesamtextraktes bei +30° C vorgenommen. Beispiel 3 10 kg placentare Rohsubstanz wird mit 5 kg doppelt destilliertem Wasser (p11-Wert 7) ausgezogen und 5 kg Extraktionsflüssigkeit abgetrennt.Example 2 10 kg of placental crude substance are extracted with 5 kg of the purest water under sterile conditions - with constant movement of the extraction material. After separation of the crude substance and 5 kg of extraction liquid, 2.5 kg of a 0.5% aqueous solution of a tertiary phosphoric acid oleyl ester, which is adjusted to pH 8.0 with monoethanolamine, are added. After this extract has been isolated, a further 2.5 kg of the same 0.5% aqueous solution are added, but this time after a pH value of 9.0 has been set using diethanolamine. It is then extracted in the usual way and the total extract is concentrated at + 30 ° C. Example 3 10 kg of placental crude substance are extracted with 5 kg of double-distilled water (p11 value 7) and 5 kg of extraction liquid are separated off.

Diese wird zur Gewinnung des Gesamtextraktes zurückbehalten, während der Placentarohstoff mit 2,5 kg einer 1 o/oigen wässerigen Lösung des Äthers der Cocosfettalkohole mit zehn Äthylenoxydgruppen irft pH-Beteich 8 ausgezogen wird. Der PH-Wert wird mit Monoäthanolamin eingestellt.This is retained during the recovery of the total extract the placenta raw material with 2.5 kg of a 1 o / o aqueous solution of the ether Coconut fatty alcohols with ten ethylene oxide groups are extracted at pH 8. The pH value is adjusted with monoethanolamine.

Nach Abtrennung von 2,5 kg Extraktionsflüssigkeit wiederholt sich der Extraktionsvorgang mit weiteren 2;5 kg der gleichen Lösung, aber mit dem pH-Wert 9 (Einstellung mit Diäthanolamia). Nach Vereinigung der drei alkalischen Lösungen ist eine Konzentration bei niedriger Temperatur (30° C) notwendig.After 2.5 kg of extraction liquid has been separated off, the process is repeated the extraction process with another 2.5 kg of the same solution, but with the pH value 9 (discontinuation with diethanolamia). After combining the three alkaline solutions concentration at low temperature (30 ° C) is necessary.

Claims

Claims: 1. Method for the extraction of placental tissue raw materials, in that the extraction begins at pli 7 and then progressively carried out from weakly alkaline to more strongly alkaline p11 values is adjusted, the alkaline pH in each case with alkylolamines (mono to tri) is: 2. The method according to claim 1, characterized in that the individual fractions with the use of non-whitening wetting agents. 3. Procedure according to claim 2, characterized in that organic phosphoric acid esters are also used will. Documents considered: German Patent No. 963 466; U.S. Patent No. 2,151,697; British Patent No. 466 749.