DE963466C

DE963466C - Process for obtaining metabolically active substances from placentas

Info

Publication number: DE963466C
Application number: DEM12447A
Authority: DE
Original assignee: Dr Madaus GmbH and Co
Current assignee: Madaus Holding GmbH
Priority date: 1952-01-03
Filing date: 1952-01-03
Publication date: 1957-05-09

Description

Die Erfindung betrifft ein Verfahren zur Gewinnung sowohl von den Stoffwechsel hemmenden wie den Stoffwechsel fördernden Wirkstoffen aus Placenten. Es ist erkannt worden, daß durch chromatographische Adsorption und nachträgliche Eluierung von Perkoläten, Mazeraten, Extrakten u. dgl. aus Auszügen von Placenten von Warmblütern sich derartige Wirkstoffe isolieren lassen, wenn die Eluierung stufenweise mit Eluierungsmitteln steigender Hydrophilie durchgeführt wird. Aus den bei der Eluierung mit Flüssigkeiten mittlerer Hydrophilie, wie Chloroform, gewonnenen Lösungen werden die stoffwechselhemmenden und aus den bei der Eluierung mit Flüssigkeiten starker Hydrophilie, wie Wasser, gewonnenen Lösungen die stoffwechselfördernden Stoffe abgeschieden.The invention relates to a method for the production of both the metabolism inhibitory and the metabolism-promoting agents from placenta. It has been recognized that by chromatographic Adsorption and subsequent elution of percolates, macerates, extracts and the like Such active ingredients can be isolated from placenta extracts from warm-blooded animals if the Elution is carried out in stages with eluents of increasing hydrophilicity. From the at solutions obtained by eluting with liquids of medium hydrophilicity such as chloroform the metabolism-inhibiting and hydrophilic properties which are strong when eluting with liquids, Like water, the solutions obtained separate the metabolism-promoting substances.

Als Ausgangsstoffe können verwandt werden frische oder vorbehandelte Placenten, wie unterkühlte, autolysierte, hydrolysierte oder getrocknete Placenten. Die Perkolation, Mazeration usw. kann fraktioniert durchgeführt werden mit den üblichen Lösungsmitteln. Man wird bei einem derartigen Arbeiten die einzelnen Mazerate gegebenenfalls nach einer Zwischentrocknung mit einem gesonderten Dispersions- bzw. Lösungsmittel vor der Chromatographierung behandeln. Als Adsorptionsmittel für die Chromatographie eignen sich grundsätzlich alle gebräuchlichen, hierzu verwandten Mittel, wie Aluminiumoxyd, Stärke usw. Ebenso können als Eluierungsmittel grundsätzlich die dazu üblichen Flüssigkeiten Anwendung finden. Wesentlich ist die Reihenfolge der Eluierung, die in an sich bekannter Weise stufenweise mit Stoffen steigender Hydrophilie durchgeführt wird, wobei auch die Temperatur gegebenenfalls während der Eluierung erhöht werden kann. Eine solcheFresh or pretreated placentas, such as supercooled, autolyzed, hydrolyzed, or dried placenta. Percolation, maceration, etc. can can be carried out fractionally with the usual solvents. One becomes such a If necessary, work the individual macerates after intermediate drying with a separate one Treat dispersants or solvents before chromatography. As an adsorbent in principle, all of the customary ones related to this are suitable for chromatography Agents such as aluminum oxide, starch, etc. Can also be used as eluents in principle the usual liquids are used. The sequence of elution is essential, which is carried out in a known manner in stages with substances of increasing hydrophilicity, where appropriate, the temperature can also be increased during the elution. Such

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Stufeneluierung besteht ζ. B. in der aufeinanderfolgenden Eluierung mit Eluierungsmitteln, wie Kohlenwasserstoffen, halogenierten Kohlenwasserstoffen, sauerstoffenthaltenden Verbindungen, wie Äther, Ketone, Alkohole, Säuren bis schließlich zum Wasser.Step elution exists ζ. B. in the consecutive Elution with eluents such as hydrocarbons, halogenated hydrocarbons, oxygen-containing compounds such as ethers, ketones, alcohols, acids and finally to the water.

Durch diese stufenweise Eluierung mit Flüssigkeiten steigender Hydrophilie unterscheidet sich die neue Arbeitsweise von der bisher üblichen Isolierung der Wirkstoffe aus Organen und Organteilen von Warmblütern durch fraktionierte Fällung, fraktionierte Kristallisation, fraktionierte Destillation usw.This step-by-step elution with liquids of increasing hydrophilicity differs the new way of working from the previous isolation the active ingredients from organs and organ parts of warm-blooded animals through fractional precipitation, fractional crystallization, fractional distillation, etc.

Es ist bekannt, Placenten mit verschiedenen Extraktionsmitteln nacheinander zu behandeln, da durch eine einfache Extraktion nicht die gesamte Hormonmenge im allgemeinen herausgeholt werden kann. Auch ist es bekannt, hormonhaltige Adsorbate nacheinander mit verschiedenen Lösungsmitteln bzw. Gemischen auszuziehen. Neu dagegen ist, bei der bekannten fraktionierten Eluierung wie im vorhergehenden angegangene Flüssigkeit steigender Hydrophilie zu verwenden.It is known to treat placentas with different extractants one after the other since a simple extraction does not generally extract the entire amount of the hormone can. It is also known to successively use hormone-containing adsorbates with different solvents or mixtures. What is new, however, is the known fractionated elution as in the previous one to use approached liquid of increasing hydrophilicity.

Zur Isolierung von Xanthophyllen, Xanthophyllestern und Carotinen haben Kuhn und Brockmann bereits Placentaextrakte einer chromatographischen Adsorption unterzogen. Die Trennung der einzelnen Stoffe wurde dabei in der damals (1932) üblichen schichtweisen Aufarbeitung vorgenommen (vgl. Zechmeister und Cholnoky, »Die Chromatographische Adsorption«, S. 118). Die Elution einer chromatographischen Adsorptionssäule mit Lösungsmitteln steigender Hydrophilie ist schon bei der Trennung biologischer Fettstoffe angewandt worden (vgl. Trappe, »Biochemische Zeitschrift«, Bd. 305, S. 150 ff.). Ein ähnliches Verfahren hat man auch bereits zur Trennung von Azofarbstoffen angewandt (Brockmann, »Angewandte Chemie«, 1947, S. 199 bis 203). Aus diesen Veröffentlichungen war für den Sachverständigen nicht ohne weiteres zu entnehmen, daß man bei der chromatographischen Aufarbeitung von Adsorbaten von Placentaextrakten durch Elution mit Lösungsmitteln steigender Hydrophilie zu den obenerwähnten stoffwechselwirksamen Stoffen gelangen kann.For the isolation of xanthophylls, xanthophyll esters and carotenes, Kuhn and Brockmann have already subjected placenta extracts to chromatographic adsorption. The separation the individual substances were worked up in layers as was customary at that time (1932) (cf. Zechmeister and Cholnoky, "Die Chromatographische Adsorption", p. 118). the Elution of a chromatographic adsorption column with solvents of increasing hydrophilicity has already been used in the separation of biological fatty substances (cf. Trappe, »Biochemical Zeitschrift ", vol. 305, p. 150 ff.). A similar process is already in place for separating Azo dyes applied (Brockmann, "Angewandte Chemie", 1947, pp. 199 to 203). From these publications it was not immediately apparent to the expert that one in the chromatographic work-up of adsorbates of placenta extracts by elution reach the above-mentioned metabolically active substances with solvents of increasing hydrophilicity can.

Erwähnt sei, daß nach der neuen Arbeitsweise sowohl Placenten von Normalgeburten wie solche kürzerer Reifezeiten oder auch Placenten nach männlichen und weiblichen Föten getrennt verarbeitet werden können.It should be mentioned that, according to the new method of working, both placentas of normal births and those of normal births shorter ripening times or also placentas processed separately for male and female fetuses can be.

AusführungsbeispielEmbodiment

Frische Humanplacenten werden in bekannter Weise durch Tiefkühlung konserviert, nach Auftauung bei Zimmertemperatur zerkleinert und im Hochvakuum getrocknet. Nach erneuter Pulverisierung werden 100 g entnommen und nacheinander erschöpfend mit niedrigsiedendem, hochsiedendem Petroläther, Benzol, Äther, Chloroform, Methylalkohol, Isopropylalkohol und n-Butylalkohol perkoliert und die Perkolate erneut im Hochvakuum zur Trockne eingedampft. Es resultieren 12,5 g Trockensubstanz. Diese werden mit 250 g Chloroform versetzt und auf eine Aluminiumoxydsäule gegeben. Erfindungsgemäß wird nun stufenweise eluiert mit Petroläther, Chloroform, n-Butylalkohol, Isopropylalkohol, Methylalkohol, Wasser von Zimmertemperatur, Wasser von 50⁰.Fresh human plaques are preserved in a known manner by deep-freezing, after thawing they are comminuted at room temperature and dried in a high vacuum. After renewed pulverization, 100 g are removed and exhaustively percolated with low-boiling, high-boiling petroleum ether, benzene, ether, chloroform, methyl alcohol, isopropyl alcohol and n-butyl alcohol and the percolates are again evaporated to dryness in a high vacuum. 12.5 g of dry substance result. These are mixed with 250 g of chloroform and placed on an aluminum oxide column. According to the invention will now stepwise eluted with petroleum ether, chloroform, n-butyl alcohol, isopropyl alcohol, methyl alcohol, water at room temperature, water of 50 ^0th

In den Fraktionen mittlerer Hydrophilie, wie insbesondere in der Chloroformfraktion, konnten Stoffe mit stoffwechselhemmender, in den Fraktionen starker Hydrophilie, wie insbesondere Wasser, Stoffe mit stoffwechselfördernder Wirkung festgestellt werden. Es konnte beobachtet werden, daß die Warmwasserfraktion das Wachstum von Hefezellen in kurzer Zeit stark fördert.In the fractions of medium hydrophilicity, such as in particular in the chloroform fraction, could Substances with metabolism-inhibiting, in the fractions strong hydrophilicity, such as in particular Water, substances with a metabolism-enhancing effect can be determined. It could be observed that the hot water fraction strongly promotes the growth of yeast cells in a short time.

Claims

PATENT CLAIM:

Process for the extraction of metabolism-inhibiting and metabolism-promoting substances from percolates, macerates, extracts and the like of placentes, characterized in that after they have been chromatographed with known adsorbents Liquids of increasing hydrophilicity eluted and that one from the elution with Liquids of moderate hydrophilicity, such as chloroform, are the metabolism-inhibiting solutions obtained and from the elution with liquids of strong hydrophilicity, such as water, The solutions obtained separates the substances that promote the metabolism.

Documents considered: Austrian Patent No. 135 834; "Angewandte Chemie", 1947, pp. 199 to 203; Bomskov, "Methodology of Hormone Research", Volume II, 1939, p. 153;

Biochemische Zeitschrift, Vol. 305, pp. 150 to 161; Zechmeister and Cholnoky, "The chromatoraphic adsorption methods", 1937, p. 118.