DE877362C

DE877362C - Process for the production of protein-cholesterol compounds or their solutions

Info

Publication number: DE877362C
Application number: DESCH2099D
Authority: DE
Inventors: Joseph Dr Schmidt-Thome
Original assignee: Schering AG
Current assignee: Bayer Pharma AG
Priority date: 1940-08-27
Filing date: 1940-08-27
Publication date: 1953-05-21

Description

Verfahren zur Herstellung von Eiweiß -Cholesterin -Verbindungen bzw. deren Lösungen In dem Patent 866 984 ist ein Verfahren zur Herstellung von Eiweiß-Cholesterin-Verbindungen bzw. deren Lösungen aus Organen beschrieben, das dadurch gekennzeichnet ist, daß man Organe, die Cholesterin-Eiweiß-Verbindungen enthalten, mit Lösungsmitteln, die das Eiweiß nicht zu denaturieren vermögen, beispielsweise mit Wasser oder zweckmäßig mit Pufferlösungen, bei einem pH von etwa 7 schonend extrahiert und aus dem Extrakt die Cholesterin-Eiweiß-Verbindung, gegebenenfalls nach weiterer Reinigung und Abtrennung von Verunreinigungen nach an sich üblichen Methoden extrahiert. An Stelle von Organextrakten können dabei auch Körperflüssigkeiten wie Serum benutzt werden.Process for the production of protein-cholesterol compounds or their solutions In the patent 866 984 is a process for the production of protein-cholesterol compounds or their solutions from organs described, which is characterized in that to get organs that contain cholesterol-protein compounds with solvents that unable to denature the protein, for example with water or expediently with buffer solutions, gently extracted at a pH of about 7 and from the extract the cholesterol-protein compound, optionally after further purification and separation extracted from impurities by conventional methods. Instead of organ extracts Body fluids such as serum can also be used.

Es wurde nun gefunden, daß man die Eiweißlösungen, wie sie aus Organen oder Körperflüssigkeiten erhalten werden können, mit Cholesterin beladen und auf diese Weise die Wirksamkeit derartiger Lösungen erheblich steigern. kann.It has now been found that protein solutions can be obtained from organs or body fluids can be obtained laden with cholesterol and on in this way, the effectiveness of such solutions can be increased considerably. can.

Zweckmäßig verwendet man als Ausgangslösungen solche, die bereits den Eiweiß-Cholesterin-Komplex enthalten, wie sie z. B. gemäß dem Verfahren des Hauptpatents erhalten «-erden. Das Cholesterin wird zweckmäßig in acetonischer Lösung in kleinen Anteilen der Eiweißlösung hinzugegeben und das Aceton dann aus der Lösung, z. B. im Vakuum, entfernt. Statt des Acetons können auch andere organische Lösungsmittel, die Cholesterin zu lösen imstande sind, verwendet werden, wie z. B. Äther, Benzol u. dgl. Verwendet man ein mit Wasser nicht mischbares -Lösungsmittel, so empfiehlt es sich, den Zusatz der Cholesterinlösung zu der Eiweißlösung und gegebenenfalls die - Entfernung des Lösungsmittels unter Rühren vorzunehmen, damit eine möglichst feine Verteilung erzielt wird.Expediently, the starting solutions used are those that already have contain the protein-cholesterol complex, as z. B. according to the procedure of Main patent received «-erden. The cholesterol is useful in acetone solution is added in small portions of the protein solution and the acetone then out of solution, e.g. B. in a vacuum, removed. Instead of acetone, you can also use others organic solvents capable of dissolving cholesterol are used, such as B. ether, benzene and the like. If you use a water-immiscible solvent, so it is advisable to add the cholesterol solution to the protein solution and if necessary - to remove the solvent with stirring, so that as much as possible fine distribution is achieved.

Die Menge der zugesetzten Cholesterinlösung wird so bemessen, daß sich das Cholesterin nicht in Flocken abscheidet. Die so erhaltenen Lösungen sind entsprechend ihrem Gehalt an Cholesterin wirksam, wobei sich ein Maximum der Wirksamkeit einstellt, das durch einen weiteren Cholesterinzusatz nicht erhöht wird.The amount of added cholesterol solution is such that the cholesterol does not separate in flakes. The solutions thus obtained are effective according to their cholesterol content, with a maximum of effectiveness that will not be increased by a further addition of cholesterol.

Die Cholesterinmenge, die zur Erzielung dieses Maximums benötigt wird, läßt sich leicht durch den Hämolysehemmungstest feststellen. Sie ist je nach der verwendeten Ausgangslösung verschieden und kann durch einen Vorversuch i'n der angegebenen Weise leicht festgestellt werden. Aus den so erhaltenen Lösungen kann die Eiweiß-Cholesterin-Verbindung mit Mitteln, die diese Verbindung aus den wäßrigen Lösungen reversibel verdrängt, z. B. mit Ammonsulfat gefällt, und aus dem Niederschlag die Cholesterin-Eiweiß-Verbindung, z. B. mit Pufferlösung, wieder in Lösung gebracht werden.The amount of cholesterol needed to reach this maximum can be easily determined by the hemolysis inhibition test. She is depending on the used starting solution different and can by a preliminary experiment i'n the specified Way to be easily ascertained. The protein-cholesterol compound can be obtained from the solutions obtained in this way with means that reversibly displaces this compound from the aqueous solutions, z. B. precipitated with ammonium sulfate, and from the precipitate the cholesterol-protein compound, z. B. with buffer solution, are brought back into solution.

Die so erhaltenen Cholesterin-Eiweiß-Komplex-Verbindungen sind im Hämolysetest sehr wirksam. Beispiel Zu 2o ccm einer Eiweißlösung aus Stierhoden wird eine Lösung von 2o mg Cholesterin in Aceton tropfenweise unter Umrühren , zugesetzt. Dabei reagiert das Cholesterin mit dem Eiweiß und geht in Lösung. Das Aceton wird im Vakuum bei Zimmertemperatur entfernt. Die so erhaltene angereicherte Cholesterin-EiweißLösung zeigt im Hämolysetest eine Hemmungswirkung, die der zugesetzten Menge Cholesterin quantitativ entspricht. Die Lösung läßt sich mit Ammonsulfat ausfällen und die ausgefallene Verbindung mit Puffer wieder ohne Wirksamkeitsverlust in Lösung bringen.The cholesterol-protein complex compounds obtained in this way are in Hemolysis test very effective. Example To 2o ccm of a protein solution from bull testicles a solution of 20 mg of cholesterol in acetone is added dropwise with stirring. The cholesterol reacts with the protein and goes into solution. The acetone will removed in vacuo at room temperature. The enriched cholesterol-protein solution thus obtained shows an inhibitory effect in the hemolysis test, that of the added amount of cholesterol corresponds quantitatively. The solution can be precipitated with ammonium sulfate and the precipitated Bring compound with buffer back into solution without loss of effectiveness.

An Stelle einer Eiweißlösung aus Stierhoden kann auch eine solche aus Schweineblut benutzt werden.Instead of a protein solution from bull testicles, one can also use one made from pig blood.

Auch Serum und Blut lassen sich auf die gleiche Weise mit Cholesterin anreichern.Even serum and blood can be treated in the same way with cholesterol enrich.

Claims

PATENT CLAIMS: i. Process for the production of protein-cholesterol compounds or their solutions according to patent 866 984, characterized in that protein solutions, especially those low or even absent cholesterol levels, such as those from Organs or body fluids obtained can be loaded with cholesterol and optionally one of the solutions containing the cholesterol-protein compounds be subjected to further purification by conventional methods.

2. Procedure according to claim i, characterized in that such protein solutions are used as starting solutions which already contain the cholesterol-protein complex.

3. Procedure according to claims i and 2, characterized in that the cholesterol is in protein solution in the form of a solution in an organic solvent, e.g. B. in acetone added is, whereupon the organic solvent is removed again in a manner known per se will.

4. The method according to claims i to 3, characterized in that for A fine distribution of the cholesterol solution in the protein solution is a concern will be carried.