DE1058218B

DE1058218B - Manufacture and extraction of the antibiotic flavensomycin

Info

Publication number: DE1058218B
Application number: DEM35354A
Authority: DE
Inventors: Renato Craveri; Giovanni Giolitti
Original assignee: Montedison SpA
Current assignee: Montedison SpA
Priority date: 1956-09-19
Filing date: 1957-09-16
Publication date: 1959-05-27

Description

Herstellung und Gewinnung des Antibiotikums Flavensomycin Die vorliegende Erfindung betrifft die Herstellung eines neuen Antibiotikums.Manufacture and Obtainment of the Antibiotic Flavensomycin The present Invention relates to the production of a new antibiotic.

Bekanntlich besitzen Antibiotika große Bedeutung; während sie früher im wesentlicher. für therapeutische Zwecke verwendet wurden, benutzt man sie heute mit großem Erfolg auch auf anderen Gebieten.As is well known, antibiotics are of great importance; while they used to essentially. were used for therapeutic purposes, they are used today with great success in other areas too.

Es wurde gefunden, daß ein Strahlenpilz (Aktinomyces), welcher in einem geeigneten Nährmedium gezüchtet wird, eine antibiotische Substanz zu liefern vermag, welche mittels geeigneter Methoden aus dem "Züchtungsmedium extrahiert werden kann.It has been found that a ray fungus (Actinomyces), which in grown in a suitable nutrient medium to provide an antibiotic substance capable of being extracted from the "culture medium" using suitable methods can.

Die neue aktive Substanz, welche beim Züchten des Strahlenpilzes gebildet wird, wurde »Flavensomycin« genannt. Die physikalischen und chemischen Eigenschaften von Flavensomycin sind von denjenigen der bereits bekannten Antibiotika verschieden. Das neue Antibiotikum wurde aus dem Fermentationsmedium eines Strahlenpilzes aus der Gattung Streptomyces gewonnen, welcher aus landwirtschaftlichem Boden in Cavour, Piemonte, isoliert wurde, und der zur Gruppe der chromogenen Arten gehört. Diese Streptomyces-Art wurde bezeichnet als Streptomyces Cavourensis, Stamm-Nr. 829.8.52, und im Institute of Microbio logy of the Rutgers University. New Brunswick, N.J., USA., unter der Nummer 3758 registriert.The new active substance that is formed when the ray fungus is grown was called "flavensomycin". The physical and chemical properties of flavensomycin are different from those of the already known antibiotics. The new antibiotic was made from the fermentation medium of a radiation fungus of the genus Streptomyces obtained from agricultural soil in Cavour, Piemonte, and which belongs to the group of chromogenic species. These Streptomyces species was named Streptomyces Cavourensis, strain no. 829.8.52, and at the Institute of Microbiology of the Rutgers University. New Brunswick, N.J., USA., Registered under number 3758.

Das vegetative Mycel wird durch lange, dünne, verzweigte oder gehäufte Hyphen gebildet; das Luftmvcel wird durch lange, gerade und wellenförmige Hvphen gebildet, welche sich nur langsam in lange Konidiophoren mit rundlichen. nicht buschartig angeordneten Konidien umwandeln. Sprialen wurden nicht beobachtet. In der folgenden Tabelle werden die Züchtungseigenschaften von Streptorriyces 829 gezeigt. Tabelle 1 Züchtungseigenschaften (bei 27° C) Medium Vegetatives Mycel @uftmycel Lösliches Pigment Biochemische Eigenschaften Czapeksches reichlich, gelblich reichlich, kreideweiß fehlt Agar Fleisch-Agar reichlich, orangekastanien- weißgelblich, wenig von hellkastanien- braun schmutzigweiß bis gelb- braun lichgrau Glucose-Agar reichlich, runzlig, kastanien- reichlich, gelblichweiß dunkelkastanien- braun braun Kartoffel-Agar reichlich, dunkelkastanien- reichlich, grau mit dunkel- braun braun gelben Flecken Asparagin- reichlich, runzlig, nußbraun schlecht entwickelt, weiß braun Glycerol-Agar Hafer-Agar reichlich, runzlig reichlich, runzlig, grau mit hellkastanien- kastanienbraunen Flecken braun Tabelle 1 (Fortsetzung) Medium Vegetatives Mycel Luftmycel Lösliches Pigment Biochemische Eigenschaften Stärke-Agar schlecht entwickelt, gelb bis schlecht entwickelt, kreide- bräunlich hochhy drolisiert bräunlich weiß bis gelblich Stärke Calciummaleat- schlecht entwickelt, gelblich- schlecht entwickelt, weiß ge- hellgelb bis hell- Agar bräunlich fleckt braun Gelatine schlecht entwickelt, runzlig, schlecht entwickelt, grau bräunlich verflüssigt Gela- braun tine nach 10 Tagen Rouxsche reichlich, runzlig, kastanien- reichlich, bräunlich hellkastanien- Kartoffel braun mit gelber Außen- braun fläche Milch schmutzigweiß fehlt gelborange Koagulation von Milch nach 4 Tagen Fleischbrühe reichlich, ringförmig, farblos schlecht entwickelt, weiß, hellkastanien- nach 10 Tagen, gelblich langsam entlang den Ge- braun nach 30Tagen,klare Brühe fäßwänden wachsend mit baumwollartigen Flocken Glucosebrühe wie bei Fleischbrühe fehlt fehlt oder sehr schlecht ent- wickelt Nitratbrühe schlecht entwickelt fehlt fehlt oder sehr Nitrate werden schlecht ent- zu Nitriten wickelt reduziert Diese Streptomyces-Art kann in üblicher Weise gezüchtet werden unter Benutzung von stationären Kulturen oder Tauchkulturen, wobei sich die letzteren am besten eignen. Das Kulturmedium muß Kohlehydrate, eine geeignete Stickstoffquelle und Mineralsalze enthalten. Die Züchtung und Fermentierung kann bei einer Temperatur zwischen 24 und 32° C erfolgen, je nach Belüftung, Rührung und Zusammensetzung des Nährmediums; maximale Ausbeuten erzielt man praktisch vom vierten bis zum siebenten Fermentierungstag.The vegetative mycelium is formed by long, thin, branched or clustered hyphae; The aerial cervix is formed by long, straight, undulating hips, which only slowly develop into long conidiophores with rounded ones. convert conidia that are not arranged in a bush-like manner. Sprials were not observed. The following table shows the cultivation characteristics of Streptorriyces 829. Table 1 Breeding properties (at 27 ° C) Medium Vegetative mycelium @uftmycelium Soluble pigment Biochemical properties Czapeksches copious, yellowish copious, chalk-white missing Agar Meat agar plentiful, orange-chestnut- white-yellowish, little of light chestnut- brown off-white to yellow-brown lich gray Glucose agar plentiful, wrinkled, chestnut plentiful, yellowish white dark chestnut brown brown Potato agar plentiful, dark chestnut plentiful, gray with dark brown brown yellow spots Asparagine- abundant, wrinkled, nut-brown poorly developed, white-brown Glycerol agar Oat agar copious, wrinkled copious, wrinkled, gray with light chestnut maroon spots brown Table 1 (continued) Medium Vegetative mycelium Aerial mycelium Soluble pigment Biochemical properties Starch agar poorly developed, yellow to poorly developed, chalk-brownish highly hydrolyzed brownish white to yellowish starch Calcium maleate - poorly developed, yellowish - poorly developed, white - light yellow to light - Agar brownish spots brown Gelatine poorly developed, wrinkled, poorly developed, gray-brownish liquefied gelatin brown tine after 10 days Rouxsche abundant, wrinkled, chestnut abundant, brownish light chestnut Potato brown with yellow outside brown area Milk dirty white lacks yellow-orange coagulation of Milk after 4 days Meat broth plentiful, ring-shaped, colorless poorly developed, white, light chestnut after 10 days, yellowish slowly along the brown after 30 days, clear broth growing in the vessel walls with cotton-like Flakes Glucose broth as with meat broth is missing or very little badly wraps Nitrate broth poorly developed will be lacking or very nitrates badly to nitrites wraps reduced This species of Streptomyces can be grown in a conventional manner using stationary or immersed cultures, the latter being the most suitable. The culture medium must contain carbohydrates, a suitable nitrogen source and mineral salts. The cultivation and fermentation can take place at a temperature between 24 and 32 ° C, depending on the aeration, agitation and composition of the nutrient medium; maximum yields are achieved practically from the fourth to the seventh day of fermentation.

Während der Fermentierung steigt der pH-Wert auf 7,8 bis 8, doch soll er diese Höhe zweckmäßig nicht überschreiten.During the fermentation, the pH rises to 7.8 to 8, but should it is expedient not to exceed this amount.

Nach der Züchtung der das Flav ensomy cin erzeugenden Streptomycespilze enthält das zurückbleibende Fermentationsmedium zahlreiche Substanzen, wie Reste der Nährstoffe, aufgelöstes Mvcel sowie die akti- e Substanz, welche. je nach der Art des Kulturmediums und nach den Fertnentierungsbedingungen, eine Konzentration von 1600 Einheiten/cm3 und mehr erreichen kann.After the cultivation of the Streptomyces mushrooms which produce the flavensomycin, the remaining fermentation medium contains numerous substances, such as residues of the nutrients, dissolved Mvcel and the active substance, which. Depending on the type of culture medium and the fertilization conditions, a concentration of 1600 units / cm3 and more can be achieved.

Das Flavensomvcin läßt sich aus der Fermentationsflüssigkeit mit verschiedenen mit Wasser nicht mischbaren Lösungsmitteln bei einem pH-Wert zwischen 7,5 und 8,5 extrahieren, beispielsweise mit Äther, Chloroform, Butanol, Äthvlacetat, Petroläther, Benzol usw. Der das rohe Antibiotikum enthaltende Auszug wird im Vakuum bei Temperaturen zwischen 20 und 30° C eingeengt. Die Reinigung des rohen Flavensomycins erfolgt zweckmäßig durch Chromotographieren des erhaltenen Rückstandes auf einer Al.,Q3-Säure, die mit einem der vorerwähnten Lösungsmittel, vorzugsweise mit Benzol, beschickt wird. Die Reinigung des in konzentrierter benzolischer Lösung vorliegenden Antibiotikums (Rohextrakt) kann auf zwei verschiedene Arten erfolgen: 1. durch Chromo,tographieren des Rohextraktes auf einer Aluminiumoxydsäule, wobei man in benzolischer Lösung eingeht, sorgfältig mit Benzol zur Entfernung von fettigen, gelbroten Fraktionen, welche inaktiv sind, und dann mit Äthylacetat zur Entfernung einer weiteren inaktiven gelben Fraktion wäscht und schließlich mit absolutem Methanol eluiert, wobei das Antibiotikum anfällt; 2. durch Ausfällen des Rohextraktes mit Petroläther, Auflösen des Niedersohlages in Aceton, Wiederausfällen mit Petroläther, Lösen in Benzol und Chromotographieren auf Aluminiumoxyd, wobei die Säule mit Benzol und Äthylacetat gewaschen und das Antibiotikum mit absolutem Methanol eluiert wird.The Flavensomvcin can be from the fermentation liquid with different Solvents immiscible with water at a pH value between 7.5 and 8.5 extract, for example with ether, chloroform, butanol, ethyl acetate, petroleum ether, Benzene, etc. The extract containing the raw antibiotic is vacuumed at temperatures concentrated between 20 and 30 ° C. The purification of the crude flavensomycin takes place expediently by chromatography of the residue obtained on an Al., Q3 acid, those loaded with one of the aforementioned solvents, preferably with benzene will. The purification of the antibiotic present in concentrated benzene solution (Raw extract) can be done in two different ways: 1. by chromo, tography of the crude extract on an aluminum oxide column, being in a benzene solution enters, carefully with benzene to remove greasy, yellow-red fractions, which are inactive, and then with ethyl acetate to remove another inactive yellow fraction and finally eluted with absolute methanol, the Antibiotic is required; 2. by precipitating the crude extract with petroleum ether, dissolving it of lower soling in acetone, reprecipitation with petroleum ether, dissolving in benzene and Chromotograph on alumina using the column with benzene and ethyl acetate washed and the antibiotic is eluted with absolute methanol.

Aus der alkoholischen Lösung erhält man Flavensomycin durch Abdampfen des Lösungsmittels. Flavensomycin ist ein kristallines, zitronengelbes Pulver. Beispiel Der Pilzstamm wird in einem Agar-Asparagin-Glycerol-Medium bei 27' C gezüchtet. In diesem Medium wird ein sehr gutes Sporenwachstum erzielt. Zur Beimpfung des Herstellungsmediums kann man entweder direkt von Sporen ausgehen oder aber von einer 24 Stunden alten, bei 27° C im gleichen Medium gezüchteten Streptomyces-Tauchkultur.Flavensomycin is obtained from the alcoholic solution by evaporating the solvent. Flavensomycin is a crystalline, lemon yellow powder. Example The fungal strain is grown in an agar-asparagine-glycerol medium at 27 ° C. Very good spore growth is achieved in this medium. For inoculation of the production medium, one can either start directly from spores or from a 24-hour old Streptomyces immersion culture grown at 27 ° C. in the same medium.

Mit Sporen oder einem solchen Inokulum beimpft man Fermentierungskolben, welche 20 g Maltose, 5 g Pepton, 2,5 g Getreideweichwasser und 1 1 Leitungswasser enthalten. Der pH-Wert wird mit Natriumhydroxyd auf 7 eingestellt. Nach beendeter Fermentierung wird der pII-Wert auf 7.5 bis 8,5 erhöht, wobei man bei einer Temperatur von 27 bis 28° C arbeitet.Fermentation flasks are inoculated with spores or such an inoculum, which 20 g maltose, 5 g peptone, 2.5 g grain softening water and 1 1 tap water contain. The pH is adjusted to 7 with sodium hydroxide. After finished Fermentation, the pII value is increased to 7.5 to 8.5, while at one temperature works from 27 to 28 ° C.

Nach Beendigung der Fermentierung entfernt man das Mycel und extrahiert das Antibiotikum aus der Flüssigkeit dreimal mit Benzol im Verhältnis 3 :1, wobei dafür gesorgt wird, daß der pg-Wert im Bereich von 7,5 bis 7,8 bleibt. Unter diesen Bedingungen löst sich Flavensomycin in Benzol. Das Volumen des Lösungsmittelauszuges wird durch Konzentrieren im Vakuum in einem Temperaturbereich von 20 bis 40° C vermindert; bei dieser Operation werden auch die letzten Spuren von Wasser entfernt.When the fermentation is complete, the mycelium is removed and extracted the antibiotic from the Liquid three times with benzene in the ratio 3: 1, taking care to keep the pg value in the range of 7.5 to 7.8. Under these conditions, flavensomycin dissolves in benzene. The volume of the solvent extract is reduced by concentrating in vacuo in a temperature range of 20 to 40 ° C; this operation also removes the last traces of water.

Die Reinigung erfolgt durch Chromotographieren des Rückstandes auf einer mit Benzol beschickten A1403-Säule in folgender Weise: 1. Das Antibiotikum wird zusammen mit einigen gelbroten Fraktionen adsorbiert, während die fettigen Fraktionen und rotvioletten Pigmente nicht adsorbiert werden. Die Säule wird mehrmals mit Benzol und dann mit Äthylacetat gewaschen, welches eine gelbe inaktive Fraktion eluiert, schließlich wird mit absolutem Methanol eluiert, wobei die aktive Fraktion (Flavensomycin) herauskommt. Einige rote, inaktive Fraktionen, welche mit Aceton und Wasser eluierbar sind, bleiben in der Säule.The purification is carried out by chromatography on the residue an A1403 column charged with benzene in the following way: 1. The antibiotic is adsorbed along with some yellow-red fractions, while the fatty ones Fractions and red-violet pigments are not adsorbed. The pillar is several times washed with benzene and then with ethyl acetate, which is a yellow inactive fraction eluted, finally it is eluted with absolute methanol, the active fraction (Flavensomycin) comes out. Some red, inactive fractions, which with acetone and water are elutable remain in the column.

2. Man fällt den benzolischen Auszug des Antibiotikums mit Petroläther aus, löst den Niederschlag (welcher den aktiven Teil darstellt) in Aceton und fällt wiederum mit Petroläther aus. Die fettigen, gelbrotpigmentierten Fraktionen, welche auf der Aluminiumoxydsäule nicht adsorbiert werden und deshalb ein längeres Waschen der Säule mit Benzol nötig machen, werden auf diese Weise fast vollständig entfernt. Der Niederschlag wird in Benzol gelöst und auf einer Aluminiumoxydsäule eh.romotographiert. Nach dem Waschen mit Benzol und Äthy lacetat eiuiert man die Säule mit absolutem Methanol, wobei die aktive Fraktion anfällt.2. The benzene extract of the antibiotic is dropped with petroleum ether from, dissolves the precipitate (which is the active part) in acetone and falls again with petroleum ether. The fatty, yellow-red pigmented fractions, which are not adsorbed on the aluminum oxide column and therefore longer washing make the column with benzene necessary, are almost completely removed in this way. The precipitate is dissolved in benzene and eh.romotographed on an aluminum oxide column. After washing with benzene and ethyl acetate, the column is eiuiert with absolute Methanol, whereby the active fraction is obtained.

Aus der alkoholischen Lösung gewinnt man das Flavensomycin durch Abdampfen des Lösungsmittels in Form eines zirtonengelben kristallinen Pulvers, welches hygroskopisch und geruchlos ist.The flavensomycin is obtained from the alcoholic solution by evaporation of the solvent in the form of a zirconium yellow crystalline powder, which is hygroscopic and is odorless.

Das erfindungsgemäß hergestellte neue Antibiotikum zeigt die folgenden chemischen und physikalischen Eigenschaften: Die hellzitronengelbe Farbe vom F lav ensomvcin verändert sich weder in alkalischem noch in saurem Medium. Das Produkt enthält 2,11% Stickstoff, es enthält keinen Schwefel und keine Halogene. Ein Ultraviolettabsorptionsspektrum zeigt nur bei 251 ,u ein Maximum.The novel antibiotic produced according to the present invention shows the following chemical and physical properties: The light lemon yellow color of the flav ensomvcin does not change in either alkaline or acidic medium. The product contains 2.11% nitrogen, it does not contain any sulfur or halogens. An ultraviolet absorption spectrum shows a maximum only at 251, u.

Das Infrarotabsorptionsspektrum zeigt Haupt-Infrarotabsorptionsmaxima bei 2,90, 3,26, 3,45, 5,86, 5,94, 6,17, 6,51, 6,92, 8,02, 9,05, 10,04, 10,32, 10.91, 13,02 und 13,13,u (s. Zeichnung). Die ersten sechs gezeigten Maxima entsprechen den folgenden funktionellen Gruppen: OH, CH, CO, konjugiertes CO, konjugierte Doppelbindung und Phenyl; die Anwesenheit der letztgenannten Gruppe und von konjugiertem C O ist nicht sicher. In der Zeichnung wird das Infrarotabsorptionsspektrum von Flavensomycin in Kaliumbromid mit einer Konzentration von 3% (untere Kurve B) dargestellt im Vergleich zu derjenigen einer Kaliumbromid-Scheibe (obere Kurve A), aufgenommen mit einem Beckmann-IR/2-Spektrophotometer.The infrared absorption spectrum shows major infrared absorption maxima at 2.90, 3.26, 3.45, 5.86, 5.94, 6.17, 6.51, 6.92, 8.02, 9.05, 10.04 , 10.32, 10.91, 13.02 and 13.13, u (see drawing). The first six maxima shown correspond to the following functional groups: OH, CH, CO, conjugated CO, conjugated double bond and phenyl; the presence of the latter group and conjugated CO is not certain. In the drawing, the infrared absorption spectrum of flavensomycin in potassium bromide with a concentration of 3% (lower curve B) is shown in comparison with that of a potassium bromide disk (upper curve A), recorded with a Beckmann IR / 2 spectrophotometer.

Das Antibiotikum löst sich sehr gut in einigen Lösungsmitteln, wie Methanol, Äthanol, Propylenglykol und Pyridin; gute Löslichkeit besteht in einigen Alkoholen, wie n-Propanol, n-Butanol und Amylalkohol ; ferner ist das Antibiotikum löslich in Eisessig und seinem Methyl-, Äthyl-, Propyl- und Butylester sowie in Aceton, Chloroform, Dioxan und Benzol. Auch in Wasser löst sich das Antibiotikum. Unlöslich ist das Antibiotikum in Glycerin, Tetraehlorkoh lenstoff, Schwefelkohlenstoff, Schwefeläther, Hexan, Petroläther und Paraffinöl. Eine wäßrige Lösung von Flavensomycin erhält man durch Zufügen von Wasser zu einer Lösung des Pulvers in einem Lösungsmittel, z. B. zu einer äthanolischen Lösung mit einer Konzentration von 0,2 g/cm3. Die Lösung schäumt.The antibiotic dissolves very well in some solvents, such as Methanol, ethanol, propylene glycol and pyridine; good solubility exists in some Alcohols such as n-propanol, n-butanol and amyl alcohol; further is the antibiotic soluble in glacial acetic acid and its methyl, ethyl, propyl and butyl esters as well as in Acetone, chloroform, dioxane and benzene. The antibiotic also dissolves in water. The antibiotic is insoluble in glycerine, carbon tetrachloride, carbon disulfide, Sulfur ether, hexane, petroleum ether and paraffin oil. An aqueous solution of flavensomycin is obtained by adding water to a solution of the powder in a solvent, z. B. to an ethanolic solution with a concentration of 0.2 g / cm3. The solution foams.

Flavensomycin gibt Farbreaktionen mit Milisch-, F ehling- und Ehrlich-Reagenz; keine Farbreaktiänen erfolgen mit Seliwanoff-, Tollens, Millon-, Liebermann- und Sakaguchi-Reagenz und mit Biuret. Mit Fe C13 ergibt sich ein Niederschlag ohne Farbreaktion.Flavensomycin gives color reactions with Milisch, F ehling and Ehrlich reagent; no color reactions occur with Seliwanoff, Tollens, Millon, Liebermann and Sakaguchi reagent and with biuret. With Fe C13 a precipitate results without a color reaction.

Flavensomycin ist ziemlich beständig, wenn man es im Vakuum als trockenes Pulver oder als Lösung in organischen Lösungsmitteln lagert. In wäßriger Lösung, insbesondere bei geringen Konzentrationen, neigt es dazu, seine Aktivität teilweise zu verlieren, und es wurde festgestellt, daß das Antibiotikum beim p$ Wert 8 bis 10 rascher inaktiviert wird als beim pnWert 6 bis 4. Eine wäßrigeLösttng von 100,u g/cm3 bei neutralem p$ W ert und 18' C verliert innerhalb von drei Tagen 40% ihrer Aktivität. Eine wäßrige Lösung mit einer Konzentration von 1 mg/cms mit neutralem pH-Wert, welche bei 4' C gelagert wird, ist nach sieben Tagen unverändert; die Aktivität der gleichen Lösung ist nach 6stündigem Erhitzen auf 70' C oder nach 30minutigemErhitzen auf 100° C hundertfach verkleinert. Das Licht scheint den Inaktivierungsvorgang kaum zu beeinflussen. Die beste Stabilität in wäßriger Lösung erzielt man beim pf Wert von 6,3 bis 7.Flavensomycin is quite stable when stored in a vacuum as a dry powder or as a solution in organic solvents. In aqueous solution, especially at low concentrations, it tends to lose some of its activity, and it has been found that the antibiotic is inactivated more rapidly at a p value of 8 to 10 than at a p value of 6 to 4. An aqueous solution of 100 µg / cm3 at neutral p $ value and 18 ° C loses 40% of its activity within three days. An aqueous solution with a concentration of 1 mg / cms with a neutral pH value, which is stored at 4 ° C., is unchanged after seven days; the activity of the same solution is decreased hundreds of times after heating at 70 ° C for 6 hours or after heating at 100 ° C for 30 minutes. The light hardly seems to influence the inactivation process. The best stability in aqueous solution is achieved with a pf value of 6.3 to 7.

Flavensomycin hat eine bedeutende antifungale Wirkung und ist besonders wirksam gegenüber Hefen (Saccharomyces) und gegenüber Fadenpilzen von der Art Penicillium. Gegenüber Spaltpilzen (Schizomyceten) ist es in Konzentrationen von weniger als 100 u g/cm3 unwirksam.Flavensomycin has significant antifungal effects and is special effective against yeasts (Saccharomyces) and against filamentous fungi of the Penicillium species. Compared to fissure fungi (schizomycetes) it is in concentrations of less than 100 u g / cm3 ineffective.

In der folgenden Tabelle wird das antibiotische Spektrum von Flavensomycin angegeben, welches bestimmt wird durch Verdünnen in Agar und Zugabe von wäßrigen Lösungen des Antibiotikums, welche aus 10%igen äthanolischen Lösungen hergestellt werden. Tabelle 2 Antibiotisches Spektrum von Flavensomycin. Züchtungsmedium: Agar-Malz, Wachstumstempera- tur 27' C. Ergebnisse nach 48 Stunden. Konzentrationen Untersuchte Mikroorganismen der vollständigen Hemmung (Llg/cm3) Saccharomyces cerevisiae . .. .. . . .. . 0,5 Saccharornyces ellipsoideus . .. .... . 0,5 Saccharomyces carlsbergensis ...... 0,1 Candida all)icans . .. .. .. . . .. .. .. . . . 20 Candida pelliculosa . . . . . . . . . . . . . . . . 20 Monilia candida . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 20 Kloeckera brevis W 203 ........... 20 Criptococcus neoformans . .. .. .. ... 20 Torula utilis . . . . . . . .. . . . . . . . . .. . . . 20 Torula neoformans ................ 20 Torulopsis glabrata ........ .... - . . 7,5 Tabelle 2 (Fortsetzung) Konzentrationen Untersuchte Mikroorganismen der vollständigen Hemmung (yg/cmg) Torulopsis histolytica ... .. ........ 20 Oidium ludwigi ................... 20 Penicillium Crysogenum Q 176. .. . . 0,05 Penicillium 350 Signa . . . . . . . .. . . . . 0,5 Penicillium sp. (aus Leder) . ...... . 1 Penicillium sp. (aus Holz) . .. . . .. . . 3 Aspergillus niger ................. 20 Aspergillus glaucus ............... 20 Alternaria tenuis . . . . . . . . . .. . . .. . . . 5 Fusarium licoperisici . .. .... .. .. .. . 50 Rhizophus triticini ................ 50 Cercosphora acetosella ............. 50 Tricophyton mentagrophytes ....... 50 Endothia parasitica . .. .. .. .. .. . . .. 5 Sporotrichium bourmanii .......... 50 Neben seiner starken pilzwachstumshemmenden Wirkung zeigt das erfindungsgemäß hergestellte Antibiotikum auch bemerkenswerte insekticide Wirkung. Die folgende Tabelle erläutert diese insekticide Wirkung, die untersucht wurde durch typische Anwendung auf der Hausfliege. Tabelle 3 Insekticide Wirkung von Flavensomycin. Produkt- % Sterblich- % Sterblich- menge/Fliege keit nach keit nach DL5o 20 Stunden 48 Stunden 0,4 98 99 0,2 83 89 nach 20 Stunden = 0,128 0,15 62 80 nach 40 Stunden = 0,094 0,1 29 55 Die Toxizität von Flavensomycin wurde an weißen Mäusen bestimmt; man fand bei intraperitonealer Injektion: LD 50= 1 mg/kg; LDo = 350,ug/kg. Bei subkutaner Injektion ergab sich: LDSO = 2 mg/kg; LD o = 1 mg/kg. Chronische Toxizität bei intraperitonealer Injektion: LDo = 250,u g/kg und Tag bei 10tägiger Anwendung. Orale Toxizität: LDSo = 25 mg/kg, akut (in Methanol-Wasser); LD5o = 19 ing/kg (in Propylenglykol-Wasser).The table below shows the antibiotic spectrum of flavensomycin, which is determined by diluting it in agar and adding aqueous solutions of the antibiotic, which are prepared from 10% ethanolic solutions. Table 2 Flavensomycin antibiotic spectrum. Growing medium: agar malt, growth temperature tur 27 ' C. Results after 48 hours. Concentrations Examined microorganisms of the full inhibition (Llg / cm3) Saccharomyces cerevisiae. .. ... . ... 0.5 Saccharornyces ellipsoideus. .. ..... 0.5 Saccharomyces carlsbergensis ...... 0.1 Candida all) icans. .. .. ... . .. .. ... . . 20th Candida pelliculosa. . . . . . . . . . . . . . . . 20th Monilia candida. . . . . . . . . . . . . . . . . . . 20th Kloeckera brevis W 203 ........... 20 Criptococcus neoformans. .. .. .. ... 20 Torula utilis. . . . . . . ... . . . . . . . ... . . 20th Torula neoformans ................ 20 Torulopsis glabrata ........ .... -. . 7.5 Table 2 (continued) Concentrations Examined microorganisms of the full inhibition (yg / cmg) Torulopsis histolytica ... .. ........ 20 Oidium ludwigi ................... 20 Penicillium Crysogenum Q 176 .... . 0.05 Penicillium 350 Signa. . . . . . . ... . . . 0.5 Penicillium sp. (of leather) . ....... 1 Penicillium sp. (wooden) . ... . ... . 3 Aspergillus niger ................. 20 Aspergillus glaucus ............... 20 Alternaria tenuis. . . . . . . . . ... . ... . . 5 Fusarium licoperisici. .. .... .. .. ... 50 Rhizophus triticini ................ 50 Cercosphora acetosella ............. 50 Tricophyton mentagrophytes ....... 50 Endothia parasitica. .. .. .. .. ... . .. 5 Sporotrichium bourmanii .......... 50 In addition to its strong fungus growth-inhibiting effect, the antibiotic produced according to the invention also shows a remarkable insecticidal effect. The following table explains this insecticidal effect, which was examined by typical use on the house fly. Table 3 Insecticidal effects of flavensomycin. Product% Mortal % Mortal quantity / flyness according to DL5o 20 hours 48 hours 0.4 98 99 0.2 83 89 after 20 hours = 0.128 0.15 62 80 after 40 hours = 0.094 0.1 29 55 The toxicity of flavensomycin was determined in white mice; the following was found for intraperitoneal injection: LD 50 = 1 mg / kg; LDo = 350 µg / kg. Subcutaneous injection gave: LDSO = 2 mg / kg; LD o = 1 mg / kg. Chronic toxicity with intraperitoneal injection: LDo = 250, µg / kg and day for 10 days of use. Oral toxicity: LDSo = 25 mg / kg, acute (in methanol-water); LD50 = 19 ing / kg (in propylene glycol water).

Claims

PATENT CLAIM: The use of Streptomyces Cavou.rensis No. 3758 (USA.) Or its mutants for the production of the antibiotic flavensomycin biological route, whereby the antibiotic is extracted from the nutrient solution using a water-immiscible organic solvent obtained, isolated and is appropriately purified in pure form by adsorption and elution.