DE102004025869A1 - Bioprotektivum - Google Patents
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Abstract
Die Erfindung betrifft ein Verfahren zur Gesundheitsförderung, insbesondere zur Kontrolle, Bekämpfung und/oder Prävention von Erkrankungen aquatischer Organismen, unter Verwendung einer Zusammensetzung, die mindestens ein Bakterium der Art Brevibacillus parabrevis enthält.The invention relates to a method for health promotion, in particular for the control, control and / or prevention of diseases of aquatic organisms, using a composition containing at least one bacterium of the species Brevibacillus parabrevis.
Description
Die Erfindung betrifft ein Verfahren zur Gesundheitsförderung, insbesondere zur Bekämpfung und/oder Prävention von Erkrankungen aquatischer Organismen unter Verwendung einer Zusammensetzung, die mindestens ein Bakterium der Art Brevibacillus parabrevis enthält. Weiter beschrieben sind Additive, enthaltend mindestens ein Bakterium der Art Brevibacillus parabrevis sowie deren bevorzugte Verwendung.The Invention relates to a method for health promotion, in particular for controlling and / or prevention of diseases of aquatic organisms using a composition comprising contains at least one bacterium of the species Brevibacillus parabrevis. Further are described additives containing at least one bacterium Species Brevibacillus parabrevis and their preferred use.
Die kommerzielle Produktion von Wasserlebewesen in räumlich und zeitlich begrenzten Systemen wird als Aquakultur bezeichnet. Sie stellt heute einen wesentlichen Wirtschaftsfaktor dar. So betrug der Anteil der Aquakultur an der Weltproduktion von Fischen, Schalentiere und Muscheln im Jahre 2000 bereits 27,3% (Quelle: FAO). Jährliche Wachstumsraten in der Produktion von >10% sind vor allem in asiatischen Ländern zu beobachten.The commercial production of aquatic organisms in spatially and temporally limited Systems is called aquaculture. She is hiring one today significant economic factor. That was the share of aquaculture in the world production of fish, shellfish and shells in the Already 27.3% in 2000 (Source: FAO). Annual growth rates in the Production of> 10% are especially in Asian countries too observe.
Es ist allgemein anerkannt, dass Aquakultur dazu beiträgt, den Druck auf wildlebende Spezies zu reduzieren. Ebenso wird jedoch diskutiert, dass Aquakultur z.B. durch den Einsatz von Pharmazeutika und den übermäßigen Eintrag von Nährstoffen in Gewässer negative Einflüsse auf die Umwelt hat.It it is generally accepted that aquaculture contributes to To reduce pressure on wildlife species. Likewise, however, will discuss that aquaculture, e.g. through the use of pharmaceuticals and the excessive entry of nutrients in waters negative influences on the environment.
Zur Erhöhung der Raum-Zeitausbeute in Kultursystemen wird neben dem Energiegehalt von Futtermitteln auch die Kulturdichte, d.h. die Anzahl der produzierten Lebewesen pro Flächeneinheit maximiert. Steigende Kulturdichten gehen aber sowohl im Wasser als auch an Land mit einer steigenden Belastung durch – häufig pathogene – Mikroorganismen einher. Außerdem werden durch die Verwendung von frischen und/oder lebenden Futtermitteln, wie z.B. Tintenfische, Polychaeten, Artemia nauplia oder Mikroalgen, besonders in den frühen Kulturphasen der Produktion von Wasserorganismen, zusätzlich pathogene Mikroorganismen, die an den Futtermitteln haften, in die Kulturumgebungen eingeführt. Zusätzlich ist die ständige Anwesenheit von nährstoffreichem Futter in den Kulturbecken ideal für das Wachstum von Bakterien.to increase The space-time yield in cultural systems is in addition to the energy content of feed also the culture density, i. the number of produced Living beings per unit area maximized. Rising cultural densities, however, go both in the water and also on land with an increasing burden of - often pathogenic - microorganisms associated. Furthermore through the use of fresh and / or live animal feed, such as. Cuttlefish, polychaetes, Artemia nauplia or microalgae, especially in the early days Culture phases of the production of aquatic organisms, in addition pathogenic Micro-organisms that adhere to the feed, in the culture environments introduced. additionally is the permanent one Presence of nutrient-rich Food in the culture pool ideal for the growth of bacteria.
Um die Belastung der Kulturumgebungen durch Mikroorganismen soweit wie möglich zu minimieren, werden therapeutisch und prophylaktisch Antibiotika in beträchtlichen Mengen eingesetzt. In der Diskussion um negative Effekte der Aquakultur hat der Einsatz von Antibiotika einen hohen Stellenwert. Besonders zwei Aspekte werden diskutiert: zum einen die Einführung der Antibiotika in die Nahrungskette und zum anderen die Ausbildung von Antibiotika-resistenten Mikroorganismen mit den all ihren Implikationen, besonders hinsichtlich der Erhöhung ihres Pathogenitätspotentials.Around the strain of culture environments by microorganisms so far as possible to minimize, are therapeutically and prophylactically antibiotics in considerable Quantities used. In the discussion about negative effects of aquaculture the use of antibiotics has a high priority. Especially Two aspects are discussed: first, the introduction of the Antibiotics in the food chain and on the other training of antibiotic-resistant microorganisms with all their implications, especially in terms of increase their pathogenicity potential.
Die in der Aquakultur eingesetzten Antibiotika können nach ihrer Wirkungsweise in vier Gruppen unterteilt werden. Dieses ist zum einen eine Gruppe von Substanzen, die die Zellwandsynthese inhibieren (Penicilline und Cephalosporine). Zu dieser Gruppe gehören z.B. Penicillin, Ampicillin, Cefuroxim, Cefaclor, Vancomycin oder Bacitracin. Die zweite Gruppe umfasst solche Substanzen, die die Proteinsynthese inhibieren. Zu ihr gehören Substanzen wie z.B. Gentamycin, Kanamycin, Streptomycin, Tetracycline, Chloramphenicol oder Erythromycin. Inhibitoren der Nukleinsäuresynthese wie z.B. Sulphametizol, Trimethoprim oder Nalidixinsäure stellen die dritte Gruppe dar. Zur vierten Gruppe gehören Substanzen, denen eine antimikrobielle Wirkung zugeschrieben wird, deren Wirkungsmechanismus jedoch nicht genau verstanden ist. Hierzu gehört z.B. inhibitorisch wirkende Furanone (siehe z.B. WO 02/47681 für eine umfassende Beschreibung des Einsatzes dieser Substanzen zur Kontrolle pathogener Organismen).The Antibiotics used in aquaculture may vary according to their mode of action be divided into four groups. This is for a group of substances that inhibit cell wall synthesis (penicillins and cephalosporins). This group includes e.g. Penicillin, ampicillin, Cefuroxime, cefaclor, vancomycin or bacitracin. The second group includes such substances that inhibit protein synthesis. To you belong Substances such as e.g. Gentamycin, kanamycin, streptomycin, tetracyclines, Chloramphenicol or erythromycin. Inhibitors of nucleic acid synthesis such as. Sulphametizole, trimethoprim or nalidixic acid the third group. The fourth group includes substances to which a antimicrobial action is attributed to its mechanism of action however not exactly understood. This includes e.g. inhibitory effect Furanone (see, for example, WO 02/47681 for a full description the use of these substances to control pathogenic organisms).
Wie oben schon beschrieben, werden diese und andere Antibiotika eingesetzt, um pathogene Mikroorganismen in der Aquakultur und damit wirtschaftlichen Schaden durch Erkrankungen zu minimieren. Vor dem Hintergrund der beschriebenen negativen Effekte des direkten Antibiotika-Eintrages in Aquakultur-Systeme wurden in der Vergangenheit auch alternative Ansätze zur Reduktion pathogener Mikroorganismen verfolgt. So wurde z.B. der indirekte Eintrag von Antibiotika oder Impfstoffen durch mit entsprechenden Substanzen gefütterten Artemia sp. (Dixon et al. (1995) Journal of Aquatic Animal Health 7, 42-45) oder Bakterien (Gomez-Gil et al. (1998) Applied and Environmental Microbiology 64, 2318-2322; Oggioni et al. (2003) Vaccine 21, 96-101) beschrieben. Auch die WO 03/103692 beschreibt die Herstellung und Verwendung von Zooplankton, der mit Pro- und Prebiotika angereichert ist. Die Aufnahme und Verdauung der Trägerorganismen vermittelt eine direkte Freisetzung der Wirkstoffe im Zielorganismus. Es ist festzuhalten, diese Methode sehr aufwendig und auch mit einem Übergang der Antibiotika in die Nahrungskette verbunden ist.As already described above, these and other antibiotics are used to pathogenic microorganisms in aquaculture and thus economic Minimize harm from illness. Against the background of described negative effects of direct antibiotic entry In aquaculture systems, alternative ones have been used in the past approaches followed to reduce pathogenic microorganisms. For example, the indirect entry of antibiotics or vaccines through fed corresponding substances Artemia sp. (Dixon et al., (1995) Journal of Aquatic Animal Health 7, 42-45) or bacteria (Gomez-Gil et al. (1998) Applied and Environmental Microbiology 64, 2318-2322; Oggioni et al. (2003) Vaccine 21, 96-101) described. WO 03/103692 also describes the preparation and Use of zooplankton, enriched with pro- and prebiotics is. The uptake and digestion of the carrier organisms mediates a direct release of the active substances in the target organism. It should be noted This method is very elaborate and also with a transition of antibiotics in the food chain is connected.
Aus
der wissenschaftlichen Literatur ist außerdem die Verwendung von Ozon
zur Reduktion der mikrobiellen Belastung von Aquakulturen bekannt
(Colberg & Lingg
(1978) Fish. Res. Board Can. 35, 1290-1296; Wedemeyer et al. (1979)
J. Fish. Res. Board Can. 36, 605-614; Liltved et al. (1995) Aquac.
Eng. 14, 107-114; Meunpol et al. (2003) Aquaculture 220, 437-448).
Ferner ist bekannt, dass bestimmte Mikroorganismen durch kurzwelliges
Licht, wie z.B. UV-Licht vernichtet werden können. Eine Kombinationen von
Ozon- und UV-Lichtanwendung wird z.B. in der
Ein weiterer Weg, der zur Kontrolle von pathogenen Mikroorganismen in der Tierproduktion und im Menschen eingeschlagen wurde, ist der Einsatz von sogenannten Probiotika. Letztere sind definiert als lebende Mikroorganismen, die bei Aufnahme durch ein Tier oder durch den Menschen vorteilhafte Auswirkungen auf den betreffenden Zielorganismus haben. Die positive Wirkung der Probiotika wird z.B. durch immunostimmulatorische Effekte oder antimikrobielle Eigenschaften vermittelt. Weiterhin wird angenommen, dass Probiotika durch kompetetive Exklusion, z.B. durch Wettbewerb um Nahrungsquellen oder Ansiedlungsraum, in der Lage sind, pathogene Mikroorganismen zu verdrängen. Eine weitere Diskriminierung der Probiotika in endo-Probiotika und exo-Probiotika kann vorgenommen werden: erstere habe positive Auswirkungen nach Aufnahme durch den Zielorganismus, z.B. durch Ansiedlung und Wirkung im Gastrointestinaltrakt des Zielorganismus oder Stimulation von spe zifischen oder nicht-spezifischen Immunantworten, während letztere diese Auswirkungen durch Ansiedlung in der Umgebung des Zielorganismus hervorrufen.One Another way to control pathogenic microorganisms in of animal production and was taken in man, is the Use of so-called probiotics. The latter are defined as living microorganisms when ingested by an animal or by beneficial effects on the target organism to have. The beneficial effect of the probiotics is e.g. by immunostimulatory Effects or antimicrobial properties. Farther It is believed that probiotics can be treated by competitive exclusion, e.g. through competition for food sources or settlement space, in the Are able to displace pathogenic microorganisms. Another discrimination The probiotics in endo-probiotics and exo-probiotics can be made The former have positive effects after being taken up by the Target organism, e.g. by settlement and action in the gastrointestinal tract of the target organism or stimulation of specific or non-specific Immune responses while the latter these effects by settlement in the environment of the Cause target organism.
Auch im Bereich der Aquakultur wurden in den letzten Jahren zahlreiche Untersuchungen und Entwicklungen gemacht, die im Zusammenhang mit der Verwendung von probiotischen Systemen stehen. So wurde z.B. der Einfluss von Pseudomonas sp. auf Vibrio sp. untersucht (Gram et al. (1999) Appl. Environ. Microbiol. 65, 969-973). Als Zielorganismus, d.h. der Organismus, auf den die Probiotika einen positiven Einfluss haben sollen, wurde in dieser Studie Oncorynchus mykiss (Regenbogenforelle) gewählt. Weitere Studien mit fluoreszierenden Pseudomonaten zur Kontrolle der Fischpathogene Saprolegnia sp. (Bly et al. (1997) J. Fish Dis. 20, 35-40) oder Aeromonas salmonicida (Smith et al (1993) J. Fish Dis. 16, 521-524) sind bekannt. Die der Kontrolle der Pathogene zugrunde liegenden Wirkungsmechanismen werden dabei auf die endogene Produktion von Antibiotika, Blausäure oder Siderophoren durch die Pseudomonaden zurückgeführt.Also In the aquaculture sector, many have been identified in recent years Investigations and developments made in connection with the use of probiotic systems. For example, the influence of Pseudomonas sp. on Vibrio sp. examined (Gram et al. (1999) Appl. Environ. Microbiol. 65, 969-973). As a target organism, i.e. the organism on which the probiotics have a positive influence In this study, Oncorynchus mykiss (rainbow trout) was selected. Further studies with fluorescent pseudomonas for control the fish pathogen Saprolegnia sp. (Bly et al., (1997) J. Fish Dis. 20, 35-40) or Aeromonas salmonicida (Smith et al. (1993) J. Fish Dis. 16, 521-524) are known. The control of the pathogens The underlying mechanisms of action are the endogenous ones Production of antibiotics, hydrocyanic acid or siderophores the pseudomonads returned.
Der Einfluss verschiedener kommerzieller endo-Probiotika-Mischungen auf das ökologische Gleichgewicht in der Produktion von Cyprinus carpio (Karpfen) wurde ebenfalls untersucht (Niiro et al. (2001) Suisanzoshoku 49, 91-96). Die eingesetzten Probiotika-Mischungen enthielten Bacillus spp. Lactobacillus spp., Streptococcus spp. Saccharomyces spp., Candida utilis, Clostridium spp. und Bifidobacterium spp.Of the Influence of different commercial endo probiotics mixtures on the ecological Balance in the production of Cyprinus carpio (carp) was also studied (Niiro et al. (2001) Suisanzoshoku 49, 91-96). The probiotics used contained Bacillus spp. Lactobacillus spp., Streptococcus spp. Saccharomyces spp., Candida utilis, Clostridium spp. and Bifidobacterium spp.
Einer Lactococcus sp., gewonnen aus dem Gastrointestinaltrakt der Flunder, konnte eine inhibitorische Wirkung auf eine pathogene Streptococcus sp. zugeordnet werden (Jeong et al. (2003) J. Fish. Sci. Tech. 6, 27-33).one Lactococcus sp., Obtained from the gastrointestinal tract of flounder, could have an inhibitory effect on a pathogenic Streptococcus sp. (Jeong et al., (2003) J. Fish, Sci., Tech. 27-33).
Besonderer Schwerpunkt bei der Untersuchung und Entwicklung probiotischer Systeme liegt auf Penaeus spp. (Shrimps) als Zielorganismen. In der wissenschaftlichen Literatur werden in diesem Kontext hauptsächlich Bacillus spp. und Lactobacillus spp. als Probiotika untersucht. So beschreiben beispielsweise Dalmin et al. die Anwendung von Bacillus spp. in der Produktion von Penaeus monodon, die im besonderen Maße zur Reduktion pathogener Vibrio spp. beitragen und außerdem einen positiven Einfluss auf die Wasserqualität haben (Dalmin et al. (2001) Indian J. Exp. Biol. 39, 939-942). Vaseeharan et al. verwenden in einer ähnlichen Studie zellfreien Extrakt bzw. Kulturen von Bacillus subtilis BT23 und stellen eine kontrollierende Wirkung auf pathogene Vibrio spp. in vitro und in vivo fest (Vaseeharan et al. (2003) Lett. Appl. Microbiol. 36, 83-87). Der Einfluss von Bacillus S11 auf mit Vibrio harveyi infizierte Penaei wurde außerdem von Meunpol et al. untersucht (Meunpol et al. (2003) Aquaculture 220, 437-448). Eine weitere Studie der Gruppe von Renpipat beschreibt den positiven Effekt einer Mischung von Lactobacillus spp. im vorbeschriebenen Pathogen/Zielorganismus-System (Phianphak et al. (1999) J. Sci. Res. Chula. Univ. 24, 41-51).special Focus on the investigation and development of probiotic systems lies on Penaeus spp. (Shrimps) as target organisms. In the scientific Literature in this context is mainly Bacillus spp. and lactobacillus spp. tested as probiotics. For example, Dalmin et al. the use of Bacillus spp. in the production of Penaeus monodon, in particular for the reduction of pathogenic Vibrio spp. contribute and also one have a positive influence on water quality (Dalmin et al. (2001) Indian J. Exp. Biol. 39, 939-942). Vaseeharan et al. use in a similar study cell-free extract or cultures of Bacillus subtilis BT23 and have a controlling effect on pathogenic Vibrio spp. in in vitro and in vivo (Vaseeharan et al. (2003) Lett. Appl. Microbiol. 36, 83-87). The influence of Bacillus S11 on with Vibrio harveyi infected Penaei was also infected by Meunpol et al. (Meunpol et al. (2003) Aquaculture 220, 437-448). Another study of the group of Renpipat describes the positive effect of a mixture of Lactobacillus spp. in the above Pathogen / target organism system (Phianphak et al. (1999) J. Sci. Res. Chula. Univ. 24, 41-51).
Die WO 97/06811 beschreibt die Verwendung eines bakteriostatischen bzw. eines bakterioziden Carnobacterium-Stammes zur Behandlung von Säugetieren einschließlich Mensch, von Fischen, von Schalentieren und Muscheln.The WO 97/06811 describes the use of a bacteriostatic or of a bacteriocidal Carnobacterium strain for the treatment of mammals including Human, of fish, of shellfish and shells.
Die WO 02/00035 hingegen beschreibt eine Methode zur Kontrolle bzw. Prävention von Erkrankung in aquatischen Organismen durch Fütterung der Organismen mit einer erfindungsgemäßen Zusammensetzung, die wenigsten eine Art probiotischer Bakterien und wenigstens eine inhibitorische oder regulatorische Komponente, insbesondere Furanone enthält.By contrast, WO 02/00035 describes a method for controlling or preventing disease in aquatic organisms by feeding the organisms with a composition according to the invention, at least one type of probiotic bacteria and at least one inhibitory or regulatory component component, in particular furanone.
Schließlich beschreibt
die
Es besteht daher ein wachsender Bedarf an Verfahren bzw. Zusammensetzungen, durch die Erkrankungen aquatischer Organismen besonders effektiv bekämpft werden können, insbesondere ohne die vorstehenden unerwünschten Seiteneffekte.It There is therefore a growing need for methods or compositions, particularly effective by the diseases of aquatic organisms fought can be especially without the above undesirable side effects.
Aufgabe der vorliegenden Erfindung war daher die Bereitstellung eines Verfahrens sowie einer Zusammensetzung, die eine effiziente Kontrolle wichtiger Pathogene von aquatischen Organismen bzw. die Verbesserung der Gesundheit dieser Organismen ermöglicht und die Nachteile des Standes der Technik vermeidet.task The present invention was therefore the provision of a method as well as a composition that makes efficient control more important Pathogens of aquatic organisms or the improvement of health allows these organisms and avoids the disadvantages of the prior art.
Diese Aufgabe wird durch das Verfahren gemäß Anspruch 1 gelöst. So wurde überraschend gefunden, dass durch die Verwendung mindestens eines Bakteriums der Art Brevibacillus parabrevis eine besonders positive gesundheitsfördernde Wirkung bei aquatischen Organismen und eine effiziente Bekämpfung von wichtigen Pathogenen aquatischer Organismen möglich ist. Es hat sich unerwartet gezeigt, dass Brevibacillus parabrevis dabei eine deutlich stärkere Reduktion z.B. des Leitpathogens Vibrio harveyi ermöglicht, als dies mit bekannten probiotischen Mikroorganismen der Fall ist.These The object is achieved by the method according to claim 1. So it became surprising found that by using at least one bacterium the species Brevibacillus parabrevis a particularly beneficial health-promoting Effect on aquatic organisms and efficient control of important Pathogenic aquatic organisms is possible. It was unexpected demonstrated that Brevibacillus parabrevis thereby a much greater reduction e.g. of the guide pathogen Vibrio harveyi, as this with well-known probiotic microorganisms is the case.
Das erfindungsgemäße Verfahren kann zunächst zur (therapeutischen) Bekämpfung bzw. Kontrolle einer Erkrankung aquatischer Organismen, insbesondere durch einen Befall mit pathogenen Mikroorganismen, eingesetzt werden. Genauso ist jedoch ein präventiver Einsatz umfasst, d.h. die Brevibacillus parabrevis enthaltende Zusammensetzung kann auch bei "gesunden" aquatischen Organismen erfolgen, d.h. vor einer Erkrankung oder einem Befall mit Pathogenen bzw. bevor Erkrankungssymptome sichtbar werden. In vielen Fällen kann ein solcher prophylaktischer oder vorbeugender Einsatz des erfindungsgemäßen Verfahrens sinnvoll sein, um eine Ausbreitung von pathogenen Organismen bereits von vorne herein auszuschließen oder zu minimieren.The inventive method can first for (therapeutic) control or control of a disease of aquatic organisms, in particular by an infestation with pathogenic microorganisms. But the same is a preventive one Use, i. composition containing Brevibacillus parabrevis can also be found in "healthy" aquatic organisms take place, i. from a disease or infestation with pathogens or before disease symptoms become visible. In many cases such a prophylactic or preventive use of the method according to the invention be useful to a spread of pathogenic organisms already to exclude from the outset or minimize.
Bei den zu behandelnden Erkrankungen handelt es sich insbesondere um Erkrankungen, die zumindest teilweise durch Mikroorganismen, insbesondere Bakterien oder Viren, verursacht werden. Umfasst sind dabei auch solche Erkrankungen, bei denen zumindest ein oder mehrere Krankheitssymptome direkt oder indirekt auf die Anwesenheit solcher Mikroorganismen oder deren Stoffwechselprodukte zurückzuführen sind.at the diseases to be treated are in particular Diseases that are at least partially due to microorganisms, in particular Bacteria or viruses are caused. Included are also such disorders in which at least one or more disease symptoms directly or indirectly to the presence of such microorganisms or their metabolites are due.
Typische krankheitsverursachende Mikroorganismen sind bei aquatischen Organismen wie Crustaceen oder Penaeus spec. (Shrimps) gramnegative Bakterien, insbesondere Vibrio spec.. Neben dem weitest verbreiteten Leitpathogen Vibrio harveyi sind noch beispielhaft V. parahaemolyticus, V. splendidus, V. mimicus, V. cholerae, V. alginolyticus, V. anguillarum zu nennen. Weiterhin sind auch Arten der Bakteriengattung Aeromonas als Pathogene von aquatischen Organismen bekannt.typical Disease causing microorganisms are in aquatic organisms like Crustacea or Penaeus spec. (Shrimp) gram-negative bacteria, especially Vibrio spec .. In addition to the most widespread Leitpathogen Vibrio harveyi are another example V. parahaemolyticus, V. splendidus, V. mimicus, V. cholerae, V. alginolyticus, V. anguillarum. Furthermore, species of the bacterial genus Aeromonas are also pathogens known by aquatic organisms.
Auch unter den sog. grampositiven Bakterien sind zahlreiche krankheitsverursachende Mikroorganismen bekannt, insbesondere aus den Bakteriengattungen Streptococcus, Carnobakterium, Mikrococcus. Solche Pathogene sind dem Fachmann geläufig und müssen daher hier nicht näher charakterisiert werden.Also Among the so-called gram-positive bacteria are numerous disease-causing Microorganisms known, in particular from the bacterial genera Streptococcus, Carnobacterium, Micrococcus. Such pathogens are the person skilled in the art and must therefore not closer be characterized.
Das erfindungsgemäße Verfahren wird vorzugsweise bei aquatischen Organismen angewendet, jedoch ist auch eine Anwendung bei Landlebewesen nicht ausgeschlossen. In der Praxis werden häufig kommerzielle Aquakulturen, insbesondere in Becken, Behältern, Wannen, Käfigen, Aquarien, Tanks, Teichen oder dergleichen im Vordergrund stehen. Natürlich ist das erfindungsgemäße Verfahren auch bei der privaten Haltung oder Züchtung aquatischer Organismen nützlich.The inventive method is preferably used in aquatic organisms, however is also an application with land animals not excluded. In practice, they become common commercial aquaculture, in particular in basins, containers, pans, cages, Aquariums, tanks, ponds or the like are in the foreground. Naturally is the inventive method also in the private husbandry or breeding of aquatic organisms useful.
Bevorzugte aquatische Organismen, bei denen das erfindungsgemäße Verfahren durchgeführt werden kann, umfassen, ohne Beschränkung hierauf, Crustaceen, Fische, Wasserpflanzen, Mollusken sowie insbesondere Penaeus spec. (Shrimps).preferred aquatic organisms in which the inventive method carried out may include, but are not limited to, crustaceans, Fish, aquatic plants, mollusks and in particular Penaeus spec. (Shrimp).
Die im Rahmen des erfindungsgemäßen Verfahrens eingesetzte Zusammensetzung enthält mindestens ein Bakterium der Art Brevibacillus parabrevis. Es wird angenommen, ohne dass die Erfindung auf die Annahme dieses theoretischen Wirkungsmechanismus beschränkt wäre, dass Brevibacillus parabrevis als besonders effizientes probiotisches Agens wirkt. Dabei könnte die gesundheitsfördernde Wirkung auf die aquatischen Organismen auf mindestens einem der nachstehenden Mechanismen beruhen, insbesondere auf der Zusammenwirkung mehrerer der nachstehenden Mechanismen:
- a) Kontrolle pathogener Organismen durch kompetitive Exklusion wie z.B. Kompetition um Futter und Lebensraum;
- b) direkte Inhibierung durch Produktion bakterizider oder bakteriostatischer Verbindungen gegen pathogene Mikroorganismen;
- c) Inhibierung der Expression von Virulenzgenen oder schädlichen Stoffwechselprodukten in bzw. durch die pathogenen Mikroorganismen;
- d) Abbau von schädlichen Stoffwechselprodukten der pathogenen Mikroorganismen, z.B. durch Aufnahme oder Degradierung solcher schädlichen Stoffwechselprodukte durch sezernierte oder zelluläre Enzyme;
- e) positive Beeinflussung der Wasserqualität, insbesondere durch Stabilisierung der Schlammbildung und Verringerung der Stickstofffracht des Kulturmediums.
- f) Positive Beeinflussung der Abwehrkräfte und des Immunsystems der aquatischen Organismen, insbesondere nach Aufnahme in den Verdauungstrakt.
- a) control of pathogenic organisms by competitive exclusion such as competition for food and habitat;
- b) direct inhibition by production of bactericidal or bacteriostatic compounds against pathogenic microorganisms;
- c) inhibiting the expression of virulence genes or harmful metabolites in or by the pathogenic microorganisms;
- d) degradation of harmful metabolites of the pathogenic microorganisms, eg by uptake or degradation of such harmful metabolites by secreted or cellular enzymes;
- e) positively influencing the water quality, in particular by stabilizing the sludge formation and reducing the nitrogen load of the culture medium.
- f) Positive influence on the immune system and the immune system of aquatic organisms, especially after ingestion into the digestive tract.
Nach einer bevorzugten Ausführungsform der Erfindung kann Brevibacillus parabrevis zusammen mit anderen probiotisch wirkenden Mikroorganismen eingesetzt werden, wie z.B. Spezies der Gattung Bacillus oder Lactobacillus, Vibrio, Cellulomonas, Pseudomonas oder Bifidobacterium spp.. Probiotische Bakterien können z.B. ausgewählt sein aus Stämmen von: Bacillus subtilis, Bacillus laterosporus, Bacillus amyloliquefaciens, Bacillus licheniformis, Bacillus azotoformans, Bacillus circulans, Bacillus pumilus, Bacillus firmus, Paenibacillus polymyxa, Paenibacillus macarans oder Alteramonas spp., Lactobacillus acidophilus, Lactobacillus bulgaricus, Lactobacillus casei, Lactobacillus casei subsp. tolerans, Lactobacillus jensenii, Bifidobacterium bifidum, Vibrio alginolyticus, Pseudomonas stutzeri.To a preferred embodiment The invention can Brevibacillus parabrevis together with others probiotic microorganisms are used, such. Species of the genus Bacillus or Lactobacillus, Vibrio, Cellulomonas, Pseudomonas or Bifidobacterium spp. Probiotic bacteria may e.g. selected be from tribes of: Bacillus subtilis, Bacillus laterosporus, Bacillus amyloliquefaciens, Bacillus licheniformis, Bacillus azotoformans, Bacillus circulans, Bacillus pumilus, Bacillus firmus, Paenibacillus polymyxa, Paenibacillus macarans or Alteramonas spp., Lactobacillus acidophilus, Lactobacillus bulgaricus, Lactobacillus casei, Lactobacillus casei subsp. tolerans, Lactobacillus jensenii, Bifidobacterium bifidum, Vibrio alginolyticus, Pseudomonas stutzeri.
Im Rahmen der vorliegenden Erfindung wurde auch unerwartet gefunden, dass Zusammensetzungen besonders gute Ergebnisse zeigen, die neben mindestens einem Vertreter von Brevibacillus parabrevis noch folgende zusätzliche Mikroorganismen enthalten: Pseudomonas spp., Cellulomonas biazotea, Bacillus spp., Rhodopseudomonas pallustris, Nitrosomonas europaea, Nitrobacter winogradskyi.in the The scope of the present invention has also been unexpectedly found that compositions show particularly good results, in addition to at least one representative of Brevibacillus parabrevis following additional Microorganisms contain: Pseudomonas spp., Cellulomonas biazotea, Bacillus spp., Rhodopseudomonas pallustris, Nitrosomonas europaea, Nitrobacter winogradskyi.
Es hat sich gezeigt, dass sich durch die erfindungsgemäßen Zusammensetzungen, wie in der vorliegenden Beschreibung definiert, nicht nur Pathogene aquatischer Organismen besonders wirkungsvoll hemmen bzw. bekämpfen lassen, sondern auch eine Verbesserung der Wasserqualität und eine Stabilisierung der kritischen Schlamm- und Stickstoffkreisläufe im Wasser bzw. Kulturmedium erzielt werden kann. Auch konnte dabei ein synergistisches Zusammenwirken mit nitrifizierenden Organismen wie Nitrosomonas spec. und/oder Nitrobacter spec. festgestellt werden. Es ist bekannt, dass pathogene Organismen, z.B. Vibrio harveyi als das am meisten verbreitet pathogene Bakterium bei Krabben, im Schlammsediment von Aquakulturen einen idealen Nährboden vorfinden. Hier bewirkt die erfindungsgemäße Zusammensetzung eine Verringerung der Pathogene im Schlammsediment sowie eine Verringerung des schädlichen Schlammsediments und der Stickstofffracht selbst, insbesondere im Zusammenspiel mit den vorstehenden Nitrifikanten. Durch die Verdrängung von häufig mit Pathogenen assoziierten fädigen und freischwebenden Algen, die Beseitigung von Futterresten und die Reduzierung organischer Schlammablagerungen wird zudem die Wasserqualität gesteigert. Hier hat sich nach einer besonders bevorzugten Ausführungsform der Erfindung folgende Zusammensetzung als besonders wirksam erwiesen: mindestens ein Vertreter von Nitrosomonas und Nitrobacter, mindestens ein Vertreter der Psedomonaden, mindestens ein Bacillus spec., mindestens ein Zellulose abbauendes Bakterium, z.B. Cellulomonas spec., sowie mindestens ein Vertreter der phototrophen Bakterien, wie z.B. Rhodopseudomonas pallustris.It It has been found that by the compositions according to the invention, as defined in the present specification, not just pathogens inhibit or combat aquatic organisms particularly effectively, but also an improvement in water quality and a stabilization of the critical Mud and nitrogen cycles can be achieved in the water or culture medium. Also could a synergistic interaction with nitrifying organisms like Nitrosomonas spec. and / or Nitrobacter spec. be determined. It is known that pathogenic organisms, e.g. Vibrio harveyi as the most common pathogenic bacterium in crabs, in the mud sediment of aquacultures an ideal breeding ground find. Here, the composition of the invention causes a reduction the pathogens in the sludge sediment as well as a reduction of the harmful Sludge sediment and the nitrogen load itself, especially in the Interaction with the above nitrifying agents. By crowding out frequently with Pathogenic associated fibroids and free-floating algae, the elimination of food residues and the Reduction of organic sludge deposits also increases water quality. Here, according to a particularly preferred embodiment the invention, the following composition proved to be particularly effective: at least one member of Nitrosomonas and Nitrobacter, at least a representative of the Psedomonades, at least one Bacillus spec., at least a cellulose degrading bacterium, e.g. Cellulomonas spec., As well at least one member of the phototrophic bacteria, e.g. Rhodopseudomonas pallustris.
Es wurde auch gefunden, dass durch den Einsatz der erfindungsgemäßen Zusammensetzung insbesondere bei Aquakulturen bei einer Erhöhung der Besatzdichte die Wachstumsrate, Überlebensrate und Futterumsatzrate der aquatischen Organismen nicht beeinträchtig wird und der Ertrag deutlich besser ge steigert werden kann, als ohne Einsatz der erfindungsgemäßen Zusammensetzung.It It has also been found that by the use of the composition according to the invention especially in aquacultures with an increase in stocking density, the growth rate, survival rate and feed conversion rate of the aquatic organisms is not affected and the yield can be increased significantly better than without Use of the composition according to the invention.
Weiterhin können beliebige andere zusätzliche Komponenten in der erfindungsgemäßen Zusammensetzung enthalten sein, wie z.B., Futtermittelbestandteile, andere veterinärmedizinische Komponenten wie Antibiotika, Fungizide oder dergleichen, Vitamine, Nährstoffe, Färbemittel, oder ähnliches. Solche Zusätze sind dem Fachmann auf diesem Gebiet geläufig und können leicht in Abhängigkeit von dem jeweils interessierenden aquatischen Organismus, der Form der Aquakultur oder der gewünschten Dosiereinheit der erfindungsgemäßen Zusammensetzung gewählt werden und auch positive Wirkungen zusätzlich zu Brevibacillus parabrevis erzielen.Further, any other additional components may be included in the composition of the invention, such as, feed ingredients, other veterinary components such as antibiotics, fungicides or the like, vitamins, nutrients, coloring agents, or the like. Such additives are well known to those skilled in the art and may easily be of interest depending on each the aquatic organism, the form of aquaculture or the desired dosage unit of the composition according to the invention and also achieve positive effects in addition to Brevibacillus parabrevis.
Allgemeinen kann die erfindungsgemäß eingesetzte Zusammensetzung eine flüssige oder feste Zusammensetzung darstellen. Die Form und (Dosier-)Größe der Zusammensetzung kann dabei je nach der gewünschten Anwendung beliebig gewählt werden. Im Rahmen des erfindungsgemäßen Verfahrens kann dabei eine direkte Behandlung der aquatischen Organismen selbst, z.B. durch direktes Aufsprühen oder Aufbringen der Zusammensetzung, enthaltend Brevibacillus parabrevis, erfolgen, oder eine Zugabe in das Wasser bzw. Kulturmedium. Genauso ist eine Behandlung der einzelnen Bestandteile der Aquakultur bzw. der eingesetzten Behältnisse, Rohre, Pumpen, Wannen, Becken, Käfigen, Aquarien, Tanks, Teichen oder dergleichen möglich. Auch hier kann die Zusammensetzung in flüssiger oder fester Form eingesetzt oder beispielsweise aufgesprüht werden. wie vorstehend erwähnt ist bekannt, dass viele pathogene Organismen in Aquakulturen in den Behältniswänden bzw. in vorhandenen Sedimenten oder Schlammanteilen vorzugsweise vorhanden sind. Somit wird nach einer bevorzugten erfindungsgemäßen Ausführungsform die Behandlung mit der erfindungsgemäßen Zusammensetzung an diesen Stellen der Aquakultur durchgeführt.general can the inventively used Composition a liquid or solid composition. The shape and (dosage) size of the composition may vary depending on the desired Application chosen arbitrarily become. In the context of the method according to the invention can be a direct treatment of the aquatic organisms themselves, e.g. by direct spraying or applying the composition containing Brevibacillus parabrevis, carried out, or an addition to the water or culture medium. Just like that is a treatment of the individual components of aquaculture or the containers used, Pipes, pumps, tubs, basins, cages, Aquariums, tanks, ponds or the like possible. Again, the composition may be in liquid or solid form used or sprayed, for example. as mentioned above It is known that many pathogenic organisms in aquaculture in the container walls or preferably present in existing sediments or sludge proportions are. Thus, according to a preferred embodiment of the invention the treatment with the composition according to the invention on these Aquaculture sites performed.
Das mindestens eine Bakterium der Art Brevibacillus parabrevis kann in jeder beliebigen Form eingesetzt werden, vorzugsweise in Form einer Bakterienkultur, eines Bakterienkonzentrats, einer Impfkultur, oder in Form von Sporen oder Lyophilisaten von Brevibacillus parabrevis. Vorzugsweise sind in der Zusammensetzung lebensfähige bzw. vermehrungsfähige Zellen oder Sporen von Brevibacillus parabrevis, auch in lyophilisierter Form, enthalten. Soweit Sporen verwendet werden, kann eine Induktion der Germination, insbesondere durch Hitzebehandlung der Zusammensetzung, vor dem Einbringen in die Aquakultur sinnvoll sein. Es können auch Teile, z.B. Zellfragmente oder Zellextrakte von Brevibacillus parabrevis eingesetzt werden.The At least one bacterium of the species Brevibacillus parabrevis can be used in any form, preferably in shape a bacterial culture, a bacterial concentrate, a seed culture, or in the form of spores or lyophilizates of Brevibacillus parabrevis. Preferably, the composition is viable or replicable cells or spores of Brevibacillus parabrevis, also in lyophilized Form, included. As far as spores are used, induction may be the germination, in particular by heat treatment of the composition, be useful before introduction to aquaculture. It can too Parts, e.g. Cell fragments or cell extracts of Brevibacillus parabrevis be used.
Brevibacillus parabrevis als solches ist dem Fachmann geläufig und kommerziell erhältlich. Ein besonders geeignetes Isolat von Brevibacillus parabrevis wurde am 17.05.2004 bei der Deutschen Sammlung von Mikroorganismen und Zellkulturen GmbH (DSMZ) und der Hinterlegungsnummer DSM 16410 hinterlegt.Brevibacillus Parabrevis as such is known to those skilled in the art and is commercially available. A particularly suitable isolate of Brevibacillus parabrevis was on 17.05.2004 at the German Collection of Microorganisms and Zellkulturen GmbH (DSMZ) and the deposit number DSM 16410.
Nach einem bevorzugten Aspekt der vorliegenden Erfindung umfasst das erfindungsgemäße Verfahren die folgenden Schritte:
- (a) Bereitstellung einer Zusammensetzung, enthaltend mindestens ein Bakterium der Art Brevibacillus parabrevis,
- (b) in-Kontakt-Bringen der Zusammensetzung aus (a) mit einem aquatischen Organismus, insbesondere in einer Aquakultur.
- (a) providing a composition containing at least one Brevibacillus parabrevis bacterium,
- (b) contacting the composition of (a) with an aquatic organism, especially in an aquaculture.
Nach einer besonders bevorzugten Ausführungsform wird die Zusammensetzung dem Wasser bzw. dem Aquakultur-Medium direkt zudosiert, gegebenenfalls über einen vorhandenen Wasseraustauschkreislauf oder ein Pumpensystem.To a particularly preferred embodiment The composition is the water or aquaculture medium directly dosed, optionally over an existing water exchange circuit or a pump system.
Wie vorstehend erwähnt, kann nach einer weiteren bevorzugten erfindungsgemäßen Ausführungsform die Zusammensetzung mit Futtermitteln für die aquatischen Organismen gemischt oder in diese eingearbeitet werden. Futtermittel und deren Bestandteile sind dem Fachmann als solche bekannt. Hier kann beispielsweise auf die WO 02/00035 oder WO 02/071867 verwiesen werden, deren diesbezüglicher Offenbarungsgehalt ausdrücklich durch Bezugnahme in die vorliegende Beschreibung aufgenommen wird. Dadurch kann eine gezielte Aufnahme durch die zu behandelnden aquatischen Organismen erzielt werden. Zudem ist eine Wirkung als sogenanntes endo-Probiotikum nach Aufnahme durch die aquatischen Organismen möglich, wobei auch die Stärkung des Immunsystems der Organismen eine Rolle zu spielen scheint.As mentioned above, may according to another preferred embodiment of the invention the composition with feed for the aquatic organisms mixed or incorporated into these. Feed and their Ingredients are known in the art as such. Here, for example reference may be made to WO 02/00035 or WO 02/071867, the details thereof Disclosure content expressly is incorporated by reference into the present specification. This can be a targeted intake by the treated aquatic Organisms are achieved. In addition, an effect as so-called endo probiotic after ingestion by the aquatic organisms possible, where also the strengthening of the immune system of the organisms seems to play a role.
Grundsätzlich kann die erfindungsgemäße Zusammensetzung vor, während oder nach der Kultivierung der aquatischen Organismen eingebracht werden. So wird bei Aquakulturen in der Regel nach der Ernte der aquatischen Organismen eine Reinigung der Anlagen durchgeführt. In vielen Fällen kann es sinnvoll sein, daher vor dem Einsetzen einer neuen Generation aquatischer Organismen in die Aquakultur das erfindungsgemäße Verfahren durchzuführen.Basically the composition of the invention before, while or after culturing the aquatic organisms become. Thus, in aquacultures usually after the harvest of the aquatic organisms carried out a purification of the plants. In many cases It may be useful, therefore, before the onset of a new generation Aquatic organisms in aquaculture, the inventive method perform.
Ein weiterer Aspekt der vorliegenden Erfindung betrifft eine Aquakultur-System zur Züchtung oder Kultivierung aquatischer Organismen, enthaltend mindestens ein Bakterium der Art Brevibacillus parabrevis, vorzugsweise in einer Konzentration von mehr als 102 Keimen/ml, insbesondere mehr als 103/ml des Aquakultur-Mediums (z.B. Wasser).A further aspect of the present invention relates to an aquaculture system for cultivating or cultivating aquatic organisms, comprising at least one bacterium of the species Brevibacillus parabrevis, preferably in a concentration of more than 10 2 germs / ml, in particular more than 10 3 / ml of the aquaculture Medium (eg water).
Noch ein weiterer Aspekt der vorliegenden Erfindung betrifft eine Zusammensetzung, insbesondere ein Additiv für Aquakulturen, enthaltend mindestens ein Bakterium der Art Brevibacillus parabrevis. Für das erfindungsgemäße Additiv gilt das vorstehend für die im erfindungsgemäßen Verfahren eingesetzte Zusammensetzung Gesagte entsprechend.Yet another aspect of the present invention relates to a composition in particular an additive for Aquaculture containing at least one bacterium of the species Brevibacillus para brevis. For the additive according to the invention the above applies to in the method according to the invention used composition accordingly.
Bei dem Additiv kann es sich auch um eine veterinärmedizinische Zusammensetzung oder ein Bioprotektivum, d.h. eine die Gesundheit der zu behandelnden Organismen bzw. Lebewesen fördernde Zusammensetzung handeln.at The additive may also be a veterinary composition or a bioprotective agent, i. a health to be treated Organisms or organisms promoting Act composition.
Die Erfindung wird nun anhand der nachstehenden nicht beschränkenden Beispiele näher erläutert:The The invention will now be apparent from the following non-limiting Examples closer explains:
1. Laborversuche zum Nachweis der Inhibierung des Leitkeimes Vibrio harveyi1. Laboratory tests for detection the inhibition of the leader Vibrio harveyi
Die Versuche wurden in Schüttelkolben durchgeführt. V. harveyi wurde grundsätzlich in einer Konzentration von 103 Keimen (K)/ml im Nährmedium SMW 3 vorgelegt und jeweils mit verschiedenen Konzentrationen der jeweiligen Bakterienarten bzw. -kombinationen bei 30°C inkubiert.The experiments were carried out in shake flasks. V. harveyi was initially introduced in a concentration of 10 3 germs (K) / ml in the nutrient medium SMW 3 and each incubated with various concentrations of the respective bacterial species or combinations at 30 ° C.
Alle eingesetzten Bakterien wurde vor der Zugabe zu SMW 3 auf SMW 1-Agar frisch ausgestrichen und davon ausgehend in SMW 1-Flüssigmedium vorkultiviert. Die eingesetzten Nährmedien: All bacteria used were freshly streaked on SMW 1 agar before addition to SMW 3 and precultivated in SMW 1 liquid medium. The nutrient media used:
2. Versuchsergebnisse2. Test results
Die Ergebnisse sind in der nachfolgenden Tabelle 1 zusammengefasst.The Results are summarized in Table 1 below.
Die Ergebnisse zeigen deutlich die Reduktion des Wachstums von Vibrio harveyi bei Zugabe von Brevibacillus parabrevis in unterschiedlichen Keimzahlen. Es ist auch ersichtlich, dass eine Kombination von Brevibacillus parabrevis mit anderen probiotischen Bakterien positive Wirkungen zeigt. In beiden Fällen wurde das Wachstum von Vibrio harveyi bei einer Zugabe von 103K/ml um einen Faktor von mehr als 1.000 im Vergleich zur Kontrolle reduziert. Demgegenüber zeigen die aus dem Stand der Technik bekannten probiotischen Bakterien Bacillus subtilis, Pseudomonas putida sowie Pseudomonas stutzeri allein nahezu keinen wachstumsinhibierenden Effekt auf Vibrio harveyi.The results clearly show the reduction of the growth of Vibrio harveyi with the addition of Brevibacillus parabrevis in different numbers of bacteria. It can also be seen that a combination of Brevibacillus parabrevis with other probiotic bacteria has positive effects. In both cases, growth of Vibrio harveyi was reduced by a factor of more than 1,000 when added at 10 3 K / ml compared to the control. In contrast, the known from the prior art probiotic bacteria Bacillus subtilis, Pseudomonas putida and Pseudomonas stutzeri alone almost no growth-inhibiting effect on Vibrio harveyi.
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