CZ89697A3 - Processes, apparatus and a testing set for monitoring ovulation cycle - Google Patents

Description

Oblast techniky

I

Předkládaný vynález se týká způsobů, zařízeni ' a testovacích kitů pro použití při monitorování ovulačního cyklu u samic savců zejména u žen.

' ' I

Dosavadní stav techniky .

Předkládaný vynález se ' zabývá zejména, ačkoliv ne výhradně, jednoduchými praktickými postupy, které mohou být snadno aplikovány nezkušenými osobami, například doma, pro zajištění spolehlivé ' informace stavu plodností ženy v .-rámci antikoncepce. Důležitým cílem předkládaného, vynálezu . je zajištění této informace bez nutnosti, častého, například denního, provádění testování, v průběhu každého ovulačního cyklu.- Právě tato nezbytnost pravidelného, například denního, testování v průběhu cyklu je charakteristická -pro mnoho jíž dříve navržených způsobů monitorování ovulačního cyklu.

Předkládaný vynález může být rovněž, použit . osobami, které si přejí zvýšit pravděpodobnost početí prostřednictvím zjištění doby v průběhu ovulačního cyklu, ve které, je největší pravděpodobnost početí'.'

Pro zajištění spolehlivé informace o stavu plodnosti musí být uživatelka pomocí určitého způsobu monitorování informována o začátku plodné fáze. cyklu. Obecně, doposud navržené techniky spočívají ve sledování jednoho nebo více parametrů, které se mění v průběhu- -ovulačního cyklu. Typickými příklady těchto parametrů, které již byly použity, mohou být koncentrace analyzátů v tělní tekutině, jako je estradiol nebo jeho metabolity, například estron-3glukoronid (E3G). Jinými používanými parametry jsou měření bazální tělesné' teploty (která může zajistit pouze předpovědní informaci pro použití v následujících cyklech) a sledování různých fyziologických změn, jako jsou například vlastnosti vaginálního hlenu.

Mnoho vynikajících akademických studií bylo provedeno s využitím těchto parametrů. Z těchto studií vyplynulo, jak používané parametry mohou být uváděny do vztahu se stavem plodnosti u průměrného člena velkého populačního vzorku. Příkladem'je studie provedená Colinsem a kol. (1981), Proč. Xth International Congress on Fertility and Sterility, Pub1 MTP Ltd, strany 19 - 33. Původním cílem mnoha těchto studií je dosáhnout početí u- žen, které byly. dříve označeny za neplodné.

Avšak při pokusu vypracovat skutečně praktický způsob monitorování cyklu vhodný pro jednotlivce vychází najevo skutečnost, že mnoho individuálních subjektů se od průměru liší délkou cyklu a nebo trváním a načasováním plodné fáze. Rozsah rozdílů mezi jednotlivci, a dokonce rozdíly mezi jednotlivými cykly u téhož jedince, vedou k tomu, že průměrná data z populace jsou nespolehlivá pro konzistentní praktické použití.

Pochopitelně, protože nevhodným důsledkem nedokonalé informace týkající se stavu plodnosti může být nechtěné početí, byla tendence dosahovat extrémní opatrnosti a vyžadovat, testování relevantního parametru, nebo parametrů v průběhu cyklu a zejména hned od začátku cyklu (začátek měsíčků). Z hlediska jednotlivého uživatele by bylo výhodné, kdyby mohla být vypuštěna tato nezbytnost konstantního testování a namísto toho, kdyby testování mohlo být prováděno ve srovnatelně krátké části každého cyklu. Nejenže to může být výhodné pro uživatele, ale náklady na postup mohou být rovněž sníženy, jestliže postup používá testovací zařízení na jedno použití a pouze několik těchto jednorázových testovacích zařízení je nutno použít každý měsíc.

Příklad systému pro zjišťování začátku ovulace, využívající vodou bobtnající polymerové tablety pro měřeni obsahu vody ve vaginálním hlenu, který se zřetelně zvětšuje v době ovulace,, je popsán v US patentovém spisu č. 4151833 (Plishuk). V tomto spisu je .uvedeno, že špičková změna ve velikosti tablet,· v 'důsledku absorpce'· vody z cervikálního hlenu, je v' blízkém vztahu ' s nárůstem· LH a změnou bazální tělesné.· teploty. Z experimentálních údajů zajištěných v US patentovém spisu č. 4151833 (obr. 8) je zřejmé, še průměr tablet je ve velmi blízkém vztahu s časováním vlny LH, tudíž, následně takto navržený systém v praxí nemůže zajistit spolehlivé upozornění ha začátek ovulace dříve, než je toho možné dosáhnout ze znalosti koncentrace-LH.

V patentovém spisu EP-A-385621· (Coley a kol/Unilever) jsou popsány, defekty monitorovacích systémů ovulačního cyklu,' které se primárně týkají změny v BBT pro odhad-doby ovulace, přičemž v tomto spisu je navržen systém, který používá pravidelné měření BBT v kombinaci .se znalostí dalších parametrů, zejména s měřením množství některých hormonů v moči. Důležitým návrhem je to,· že BBT je měřeno denně v průběhu každého cyklu a toto měření je použito pro odhad časování změn stavu plodnosti v následujícím cyklu. V průběhu tohoto následujícího (předpovídaného) cyklu jsou kontrolovány úrovně hormonů v moči v určitých obdobích pro ujištění, že postup cyklu, jak byl předpovězen z předcházející znalosti BBT, je konzistentní. Vybranými hormony jsou zejména E3G, P3G a LH, Je navrženo, aby úroveň E3G v moči byla měřena v alespoň jednom dnu v průběhu intervalu od 5 dne do 7 dne předpovídaného cyklu, a opět v alespoň jednom dnu v průběhu intervalu od 10 dne do .15 dne předpovídaného cyklu. Podle příkladu v patentovém spisu EP 385621 je pro úroveň hormonu dostatečné, aby byla buď vysoká nebo nízká vzhledem k prahové hodnotě. Důraz v celém patentovém spisu EP 385621 je kladen na to, že občasná měření úrovně hormonu jsou použita jako doplněk monitorovacího systému, který se zabývá měřením BBT. V tomto spisu není žádný návrh, aby měření úrovní hormonů samostatně mohla zajistit základ pro spolehlivý monitorovací systém plodnosti určený pro jednotlivou osobu.

Cíle předkládaného vynálezu

Cílem předkládaného vynálezu je navrhnout systém pro monitorování stavu plodností jednotlivce, který zajistí dostatečné upozornění na začátek plodné fáze pro umožnění poskytnutí antikoncepčního doporučení, a který může být osobně upraven pro daného jednotlivce, přičemž je založen pouze na měřeních analyzátů v tělních tekutinách. Značná nespolehlivost, nebo omezená použitelnost, ostatních měřících systému (jako je na bázi BBT) může být tímto odstraněna.' Dalším cílem je vyhnout se použiti průměrných údajů získaných z populačních studií, se kterým je spojeno značné riziko, že u jednotlivce se může testovaný parametr značně odchylovat od průměru populace.

Dalším cílem předkládaného vynálezu je navrhnout monitorovací systém, který nemůže selhat ve smyslu upozornění uživatele na začátek plodné fáze, aniž by uživatel byl připraven' o výhody jednoduché celkové procedury a omezeného testovacího režimu.

Ještě dalším cílem předkládaného vynálezu je zajistit možnost založení účinného monitorovacího systému pouze, nebo alespoň primárně, na měření jednoho analyzátu tělní tekutiny, jako je estradiol nebo jeho metabolit. Další výhody předkládaného vynálezu budou zřejmé z následujícího popisu.

Dalším cílem, předkládaného vynálezu je zajistit testovací režim, který má dobré vyvážení> mezi požadavkem na minimalizaci testovacích nároků kladených na uživatele a potřebou poskytnout hodnotnou informaci o stavu plodnosti.

Dalším cílem předkládaného . vynálezu je navrhnout způsob ' a zařízení· pro stanovení ' přítomnosti a/nebo koncentrace dvou nebo více analyzátů v jenom vzorku tekutiny, když alespoň jeden z analyzátů je mnohoznačný analyzát, který se snadno stanoví prostřednictvím' dvou '.různých specifických vazebních činidel v celku sendvičového formátu, zatímco další z analyzátů je jednoznačný analyzát, jako je hapten, který není přístupný stanovení prostřednictvím- sendvičové reakce.

Ještě· dalším cílem předkládaného vynálezu je vytvoření takového duálního vzorkovacího způsobu/zařízehí analyzátu, ve kterém je použito přímé značky pro vyhodnocení .výsledku obou vzorků.

Použití částicových přímých značek je již známé v jednodušších vzorkovacích systémech. _t Někdy toto . použití •W •Π'ι- · “ '*·*· ‘ I částicových přímých značek umožňuje, aby vzorkovací výsledek byl vyhodnocen jednoduše pouhým okem. To může být také případ při vzorkování podle předkládaného vynálezu, ačkoliv se předpokládá, Že obecně budou výsledky vzorků mnohem výhodněji a účinněji vyhodnocovány strojně.

Ještě dalším cílem předkládaného vynálezu je vytvořit vzorkovací způsob/zařízení, ve kterém více analyzátů v jenom vzorku tekutiny může být stanoveno přesně ve vzorkovacím zařízení formátu pásku, které je interpretováno strojně s použitím elektromagnetického záření (například světlo) procházejícího skrz tloušťku vzorkovacího pásku. Míra vázání částicových značek v detekční zóně v pásku může zajistit kvantitativní vzorkovací výsledek, protože částice mohou blokovat světlo nebo jiné záření a tudíž mohou snížit přenos záření skrz pásek.

Dalším cílem předkládaného vynálezu je vytvořit zlepšené kombinace zařízení pro čtení vzorkovacích výsledků a přidružených vzorkovacích testovacích zařízení, které mohou zajistit přesnou kvantitativní vzorkovací informaci jednoduchým, rychlým a levným způsobem.

Podstata vynálezu

Pouze pro účely ilustrace bude předkládaný vynález popsán ve spojení s měřením analyzátů v oči, zejména E3G (estron-3-glukoronid), a LH'^r (luteinizační hormon) .

Vedle již zmíněného estron-3-glukuronidu může být pro účely tohoto vynálezu testován také estradiol-3-glukuronid, estradiol-17-glukuronid, estriol-3-glukuronid, estriol--16glukuronid a (principiálně u subjektů nehumánního původu) estron-3-sulfát. Jak vyplývá z dalšího popisu, tento vynález může být snadno aplikován na data odvozená z měření koncentrací jiných látek analyzovaných v tělní tekutině v souvislosti se stavem ovulačního cyklu. Obecně nejvhodnějšími

Ί /

fe ϊ	látkami k analyzování jsou hormony a jejich metabolity, například folikuly stimulující hormon. (FSH). Příkladem relativně dostupných alternativních tělních tekutin mohou být sliny, cervikální hlen, pot, kožní maz, slzy nebo poševní
5 '	hlen. Samozřejmě je možné použít také vnitřní tělní tekutiny, například krev, jejichž nevýhodou ale je, že jsou odebírány invazívnímí metodami . ' Zkušený čtenář ocení výhodu tohoto způsobu
fe 10	monitorováni, že měřeni koncentrace vybrané látky nebo látek v tělní tekutině nemusí být absolutní. Obecně stačí testovat analyzovanou 'látku takovým způsobem,· aby byl. získán určitý signál, který má vztah k aktuální koncentrací a který lze převést na číselnou hodnotu, takže tyto údaje' mohou být porovnány s' podobnými údaji získanými v různých stádiích
15	cyklu, ' čímž lze určit, zda došlo k signifikantní změně aktuální koncentrace ' nebo ne. Termín koncentrace analyzované látky užívaný v této patentové přihlášce· a v nárocích má tedy přenesený význam á měl.by být interpretován
2θ’	v širším smyslu. Podle - jednoho aspektu .navrhuje·, předkládaný vynález testovací kit .pro použití při monitorováníovulačního cyklu samičky savce, zejména ženy, zahrnující množství. jednorázových testovacích zařízení pro vzorkování a testování
25 '	tělní tekutiny, jako je moč, a zajištění .čitelných signálů indikujících koncentrace alespoň dvou analyzátů v tělní tekutině, přičemž tyto analyzáty mají, podstatný vztah ke stavu plodnosti v ovúlačním cyklu, společně s elektronickým čtecím zařízením/monítorem pro čtení' a interpretaci uvedených
30	čitelných signálů pro poskytnutí uživateli indikaci o stavu plodnosti, přičemž:

a) uvedené čitelné signály jsou čteny, zatímco jedno z testovacích zařízení je umístěno uvnitř přijímacích prostředků uvedeného čtecího zařízení/monitoru;

b) uvedené čitelné- signály jsou vytvářeny 5 prostřednictvím koncentrování prvního detekovatelného materiálu, výhodně značkovaného reakčního činidla, v první detekční zóně porézního nosiče, jako je testovací pásek, uvnitř testovacího zařízení a prostřednictvím koncentrování druhého detekovatelného materiálu,. výhodně značkovaného reakčního činidla, v druhé detekční zóně uvedeného porézního nosiče, zatímco vzorkovaná tělní tekutina proudí, například prostřednictvím vzlínání, skrz tento porézní nosič, uvedená druhá detekční zóna je výhodně umístěna směrem za první detekční zónou vzhledem k ' příjímací části testovacího 15 zařízení, které je v kontaktu s .tělní tekutinou, aby iniciovalo test;

c) signál v první detekční zóně je indikací koncentrace v tělní tekutině prvního analyzátu, výhodně luteinizačního hormonu (LH) , který vykazuje zřetelnou změnu koncentrace těsně.spojenou s časem vlastní ovulace; a

d) signál v druhé detekční zóně je indikací koncentrace v tělní tekutině druhého analyzátu, výhodně estradiolu nebo jeho metaholítu, jako je estron-3-glukoronid (E3G), který vykazuje zřetelnou změnu koncentrace spojenou se začátkem plodné fáze·daného ovulačního cyklu.

Výhodně jsou uvedené čitelné signály čteny prostřednictvím optického přenosu skrz - testovací zařízení.

Aby to bylo možné v ideálním případě čtecí zařízení/monitor zahrnuje:

w,

Λ.

15'

a) zdroj rozptýleného světla o vlnové délce, která je. silně pohlcována uvedenými detekovatelnými materiály;

b) snímací prostředky pro snímání dopadajícího světla z uvedeného zdroje; .

c) prostředky pro přijetí a držení testovacího zařízení s každou z detekčních zón ve světelné cestě mezi zdrojem a snímacími prostředky; a.

d) elektronické prostředky spojené še .snímacími prostředky, přičemž tyto elektronické prostředky jsou naprogramovány, aby odvodily ze snímaného- dopadajícího světla míru rozsahu,. do kterého . byl · detekovatelný materiál koncentrován v-každé z detekčních zón.

Výhodně jsou uvedené čitelné signály tvořeny prostřednictvím koncentrování částicových značkovaných reakčních činidel v odpovídajících detekčních zónách.

'Výhodně testovací kit obsahuje dostatečné- množství jednorázových testovacích- zařízení pro umožnění uživateli provádět testování na bázi jednou za den po dobu maximálně 16 dnů v jakémkoliv^řjednom ovulačním cyklu. Důležitým-provedením předkládaného vynálezu je náhradní- balení obsahující množství, výhodně ne více než 12a v optimálním případě 7 až 10, jednorázových testovacích- zařízení pro 'doplnění testovacího kitu, výhodně s instrukcí pro uživatele, -aby použil všechny z těchto testovacích zařízení v průběhu trvání jednoho ovulačního cyklu.,

Předkládaný vynález rovněž /navrhuje způs.ob monitorovánílidského ovulačního cyklu s použitím- testovacího kitu popsaného výše, přičemž testování se provádí ' alespoňjednou v průběhu intervalu dnů 1 až 7 včetně, vypočítaného od začátku měsíčků, pro stanovení hodnoty nebo signálu referenční koncentrace pro druhý analyzát v současném cyklu, uvedené testování se dočasně pozastaví, a potom se testování provádí alespoň jednou (výhodnědenně) v průběhu periody dnů, která začíná pořadovým dnem 5, výhodně pořadovým dnem 6, před průměrným pořadovým dnem, ve kterém nastala vlastní ovulace v jednom .nebo více předcházejících ovulačních cyklech u stejného individuálního subjektu, druhé hodnoty nebo signály koncentrace analyzátu, získané v průběhu uvedené periody dnů, se porovnají s referenční hodnotou nebo signálem koncentrace pro stanovení, zda vzhledem k předcházejícímu testu probíhá .nebo proběhla změna koncentrace indikující bezprostřední ovulaci. Jako výhodný znak pro' zajištění ochrany proti selhání je začátek plodné fáze deklarován, pokud.očekávaná zřetelná změna v druhé koncentrací analyzátu nebyla zjištěna před alespoň 2, výhodně alespoň 3, dny před pořadovým dnem v současném cyklu, na který je předpovídána vlastní ovulace na základě znalosti odvozené z měření první koncentrace analyzátu, .získaných z jednoho nebo .více předcházejících cyklů.

Obecněji předkládaný vynález navrhuje' způsob monitorování stavu plodnosti jednotlivého samičího savčího subjektu, který zahrnuje testování koncentrace analyzátu v tělní tekutině, zejména estradiolu nebo jeho metabolitu,

5 přičemž podle tohoto způsobu se testování provádí alespoň jednou v průběhu intervalu dnů 1 až 7 včetně v současném cyklu pro stanovení referenční hodnoty nebo signálu koncentrace pro současný cyklus, a toto testování se rovněž provádí později v tomto současném cyklu, po dočasném pozastavení, a hodnota nebo signál koncentrace potom získaná se porovnává s referenční hodnotou nebo signálem.

Jedním důležitým aspektem předkládaného vynálezu je způsob monitorování současného stavu plodnosti jednotlivé ženy, který zahrnuje·, testování koncentrace estradiolu . nebo jeho metabolitů v tělní tekutině a porovnání testovacího výsledku s referenční hodnotou nebo signálem, pro zjištění, zda je přítomna zvýšená koncentrace indikující bezprostřední ovulaci, přičemžreferenční. hodnota nebo signál pro současný ovulační cyklus se stanoví, testováním koncentrace v tělní tekutině u stejné jednotlivé ženy .alespoň jednou v průběhu intervalu dnů 1 až 7 včetně v současném-, cyklu. ,

V jednom výhodném provedení předkládaný vynález navrhuje způsob monitorování současného stavu plodnosti jednotlivé ' samice savce, který zahrnuje detekci změny parametru indikujícího' .bezprostřední vstup do plodné fáze, přičemž začátek plodné fáze je deklarován,'· pokud parametr očekávané změny nebyl zjištěn před alespoň- 2, výhodně'alespoň 3, dny před pořadovým' dnem v současném cyklu, na .který je předpovídána vlastní ovulace na základě znalosti získané v předcháze jících cyklech u stejné jednotlivé samice savce.. Pro účely předpovídání dne ovulace může být použitá procedura průměrného dne ovulace, jak je popsáno níže. . Toto proti selhání - zajištěné deklarování plodné fáze může být kombinováno s výhodou s jakýmikolív technikami pro monitorováni cyklu, popsanými níže.

Předkládaný vynález .'navrhuje zejména způsob monitorování 'současného stavu plodnosti jednotlivé ženy, který zahrnuje testování koncentrace estradiolu nebo jeho metabolitů v tělní tekutině a porovnání testovacího· výsledku s referenční hodnotou nebo signálem pro zjištění, zda je přítomna zvýšená koncentrace indikující. bezprostřední ovulaci, přičemž referenční hodnota'nebo signál pro současný cyklus se stanoví prostřednictvím testování koncentrace v tělní tekutině u stejné jednotlivé ženy alespoň jednou v průběhu intervalu dnů 4 až 7 včetně, výhodně ve dnech 5 a/nebo 6, v současném cyklu, testování sé opětovně začne provádět v dnu 9 v současném cyklu a pokračuje potom alespoň denně alespoň dokud není zjištěna podstatně.' zvýšená koncentrace, přičemž stav současňého cyklu je deklarován jako plodný pro interval začínající dnem zjištění podstatně zvýšené koncentrace a pokračující po alespoň .bezprostředně následujících 12 dnů nebo do jednoznačného ukončení cyklu (například’ .začátek měsíčků), podle toho co proběhne dříve.

Jako případné zjemnění tohoto- postupu, pokud podstatně zvýšená koncentrace není zjištěna' v nebo před- dnem 15, je cyklus deklarován jako plodný pro' interval trvající alespoň 14, výhodně 15,- dnů bezprostředně následujících po dnu 15, nebo do jednoznačného ukončení cyklu, pokud toto nastane dříve.

Jedním dalším, důležitým aspektem předkládaného vynálezu je způsob antikoncepce u lidí, který zahrnuje:

a) testování estradiolu nebo jeho metabolitu v moči u ženy alespoň jednou v průběhu intervalu dnů 4 až 7 včetně, výhodně ve dnech 5 a/nebo 6, v .současném cyklu pro stanovení referenční hodnoty nebo signálu pro současný cyklus;

.... _ b) testování koncentrace v moči opět na alespoň denním základě, které začíná ve dnu 9 současného cyklu a pokračuje do dne 15 (výhodně dne 14) současného cyklu;-a

c) zabrání nechráněnému styku v průběhu intervalu trvajícího alespoň 12.dnů bezprostředně následujících- po dnu, ve -kterém je zjištěna podstatně zvýšená koncentrace v moči nebo, pokud podstatně zvýšená koncentrace v- moči není zjištěna ve dnu 15 (výhodně dnu 14), zabránění nechráněnému styku v průběhu intervalu- trvajícího alespoň 14, výhodně 15, i

dnů bezprostředně následujících po dnu 15 (výhodně 'dnu 14), přičemž v každém případě je. tento interval případně ukončen

I . ’ · · .

dříve, pokud došlo k jednoznačnému ukončení cyklu (například 10 začátek měsíčků).

V prvním provedení navrhuje předkládaný vynález způsob monitorování stavu plodnosti jednotlivého samičího 'savčího subjektu, který zahrnuje testování v ·‘tělní- tekutině koncentrace alespoň jednoho analyzátu s významným vztahem ke ’ · .

stavu ovulačního cyklu v průběhu preovulacní fáze, přičemž testování tohoto analyzátu se provádí alespoň jednou v průběhu intervalu dnů 1 až 7 včetně v současném cyklu počítáno od začátku měsíčků (den' 1 je den, ve kterém je poprvé sledována menstruace), pro stanovení referenční hodnoty nebo signálu koncentrace uvedeného< analyzátu v současném,cyklu, a'potom se testování provádí alespoň jednou (obecně .opakovaně, například denně) ' před dnem, ve kterém pravděpodobně nastane ovulace v průběhu tohoto cyklu, přičemž hodnoty nebo signály koncentrace uvedeného-analyzátu,. získané 25 v prubehu uvedeneho pozdějšího nebo opakovaného testování se porovnávávají s' referenční hodnotou nebo signálem pro stanovení, zda vzhledem k předcházejícímu testu nastává nebo již. 'nastala změna koncentrace, indikující bezprostřední .ovulaci.. ,

V jednom výhodném provedení ' předkládaný vynález navrhuje způsob monitorování stavu plodnosti jednotlivého ženského subjektu, který zahrnuje testování v tělní tekutině koncentrace alespoň jednoho analyzátu s.významným vztahem ke stavu ovulačního cyklu v průběhu preovulační fáze, přičemž testování tohoto analyzátu se provádí alespoň jednou v průběhu intervalu dnů 1 až 7 včetně v současném cyklu počítáno od začátku měsíčků (den 1, je den, ve kterém je poprvé sledována menstruace),' pro stanovení referenční hodnoty nebo signálu koncentrace uvedeného analyzátu v současném cyklu, a potom se testování provádí alespoň jednou (obecně opakovaně, například denně) v průběhu periody dnů, která začíná alespoň 5, a výhodněji alespoň 6, pořadovým dnem před průměrným pořadovým dnem, ve kterém vlastní ovulace nastala v jednom nebo ve více předcházejících ovulačních cyklech u stejného jednotlivého subjektu, hodnoty nebo signály koncentrace analyzátu, získané v průběhu uvedené periody dnů se porovnají s referenční hodnotou nebo signálem koncentrace pro stanovení, zda vzhledem k předcházejícímu testu nastává nebo již nastala změna koncentrace indikující bezprostřední ovulací. Obecně nemusí být opakované testování započato dříve než přibližně 9 dnů před průměrným dnem ovulace.

Výhodně se referenční hodnota koncentrace stanoví z testu (testů) provedených v průběhu intervalu dnů 4 až 7 včetně, zvláště výhodně z testu (testů) provedených ve dnu 5 a/nebo dnu 6, a zvláště výhodně z jednoho testu provedeného ve dnu 6.

Podstatná změna, koncentrace analyzátu, indikující bezprostřední ovulaci, zejména vhodná pokud analyzátem je estradiol nebo jeho metabolit, bude obecně zaznamenána, když poměr referenční koncentrace [r] ku testovací koncentraci [i] splňuje následující kritéria:

1,5 < ti] / fr] <2,5

Přesněji, zejména . pokud analyzátem je ' E3G a referenční hodnota je stanovena ve dnu 6:

[i]/[r] > 2 ^:

Pokud vybraný vzorkovací formát, prostřednictvím kterého je získáván údaj o- koncentraci,.-poskytuje signál, který je nepřímo úměrný k vlastní koncentraci, jako tomu může být v případě konkurenčního vzorkování, měla by osoba v oboru znalá snadno nahlédnout, že vztah mezí signály [i] a [rj bude obrácený než je uvedeno výše.

Obecně se předpokládá, že bude mezera alespoň jednoho dne, a obvykle spíše několika dnů,-mezi stanovením referenční hodnoty koncentrace a započetím opakovaného testování, přičemž ' v průběhu této mezery nemusí být prováděno· žádné testování. Tak tedy v ideální situaci uživatelka provede jeden test v počáteční fázi cyklu, - například ve dnu 6,'. a o několik dnů později začne relativně- krátký program opakovaného; například denního, testování., které je ukončeno po obdržení dostatečné informace pro identifikaci plodné fáze, výhodně včetně indikace, konce plodné fáze v tomto cyklu. Typicky připadne toto ukončení testování na den vlny (nárůstu) LH, nebo v intervalu několika dnů potom, takže zbytek cyklu probíhá bez testů.

Výhodně může být tělní tekutinou moč. Velmi vhodným analyzátem je tedy estradiol nebo jeho metabolit, jako je estron-3-glukoronid.

Výhodně, v jednom provedení předkládaného vynálezu, je průměrný den ovulace odvozen od údaje zjištěného v průběhu alespoň 3, a zvláště výhodně alespoň 5, po sobě jdoucích předcházejících cyklů.

V ideálním případe je průměrný den ovulace, použitý pro vypočítání časového intervalu¹ pro účely současného cyklu odvozen z údaje získaného v průběhu alespoň bezprostředně předcházejícího cyklu.

Zvláště výhodný způsob podle vynálezu zahrnuje stanovení průměrného dne ovulace z údaje získaného z klouzavé (rollíng) referenční báze sestávající z pevného počtu po sobě jdoucích cyklů .bezprostředně předcházejících současnému cyklu. Výhodně tato klouzavá referenční báze sestává z bezprostředně předcházejících 3 až 12 cyklů, 15 . .

zvláště výhodně z bezprostředně předcházejících 5 nebo 6 cyklů. Prostřednictvím použití'této, klouzavé referenční báze může být jakýkoliv progresivní posun ve výskytu ovulace u dotyčného subjektu zachycen a započítán pro zjištění příštího

2Q počátečního dne opakovaného testování.

Předkládaný vynález zahrnuje testovací kit zahrnující jedno nebo více testovacích zařízení pro stanovení koncentrace (v relativním nebo absolutním smyslu) uvedeného alespoň jednoho analyzátu v tělní tekutině, společně s instrukcemi doporučujícími uživatelce začít s testováním v průběhu uvedeného časového intervalu, 'a prostředky umožňujícími uživatelce odvodit uvedený časový interval a/nebo přesný den započetí testování ze· znalosti pořadového dne, ve kterém vlastní ovulace nastala v průběhu alespoň

3Q jednoho předcházejícího cyklu uživatelky.

Další nezávislý aspekt předkládaného vynálezu, který )

může být nicméně kombinován výhodně s jakýmkoliv způsobem uvedeným výše, zahrnuje:

a) vybavení uživatelky ' množstvím jednorázových testovacích zařízení tělní tekutiny, přičemž uvedené množství, je alespoň 7, ale výhodně ne více než 12; a \

b) vedení uživatelky, aby použila všechna z/uvedených dodaných testovacích zařízení v průběhu., jednoho ovulačního cyklu v souladu s předem stanoveným testovacím programem'bez ohledu na to, zda indikace bezprostřední ovulace již byla zjištěna před použitím všech z uvedených dodaných 'testovacích zařízení. ' '

Výhodně je uživatelka vedena, aby provedla jeden test ve dnu 6, a aby použila všechna zbývající testovací zařízení na denním základě v průběhu periody opakovaného testování.

Předkládaný vynález rovněž zajišťuje kít pro použití v jakémkoliv ze způsobů - popsaných' výše, který·· zahrnuje množství jednorázových testovacích. zařízení tělní tekutiny, společně s prostředky pro čtení a interpretaci výsledků testů provedených s použitím uvedených testovacích zařízení.

Předkládaný vynález rovněž zahrnuje náhradní baleníjednorázových testovacích zařízení tělní tekutiny pro použití v jakémkoliv ze způsobů popsaných výše, s instrukcemi pro uživatelku, aby použila všechna uvedená Obsažená jednorázová testovací zařízení v průběhu trvání jednoho ovulačního.cyklu. Výhodně toto balení obsahuje ne více . než 12 testovacích zařízení, zvláště výhodně alespoň 7, ale ne více než 10 zařízení.

Požadavkem na uživatelku, aby použila všechna z početně malé jedné dávky nebo sady jednorázových testovacích zařízení na cyklus, je zajištěna výhoda jak pro uživatelku tak í pro výrobce zařízení. Uživatelka má výhodu v tom, že měsíční testovací program je zjednodušen - není zde nutnost rozhodování kdy zastavit opakované testování nebo zda použít v průběhu následujících cyklů testovací zařízení zbylá z dřívějších cyklů. Pro výrobce je, zde jistota, že údaje pro každý cyklus jsou odvozena z jedné dávky testovacích zařízení, jsou tedy eliminovány problémy se standardizací, které by mohly jinak vznikat, a zároveň se snižuje složitost jakéhokoliv monitoru požadovaného pro interpretací testovacích údajů. Na uživatelku není·kladen žádný požadavek, aby zajistila kalibraci vzorků. Jednorázová· testovací zařízení mohou být dodávána ve standardních měsíčních náhradních baleních, což zjednodušuje operaci balení. Vzhledem, k tomu, že je eliminován problém zbývajících testovacích zařízení, je rovněž odstraněna jedna možná příčina nejistoty uživatelek.

Výhodou způsobů podle předkládaného vynálezu je to, že může' být dosaženo účinného monitorování ovulačního cyklupoužitím údaje odvozeného pouze z měření- koncentrace, (koncentrací) analyzátu v tělní tekutině. Není . nutné kombinovat tento údaj s jinými parametry. Zejména zde není, nutnost doplnit tento údaj s procedurou měření bazální tělesné teploty.

. Prostřednictvím použití referenční hodnoty koncentrace z údaje v počáteční části současného cyklu se způsoby podle vynálezu vyhýbají potřebě kalibrovat a zajišťují, že základní reference· je osobní pro testovaný subjekt. To vede ke- zřejmější indikaci preovulační podstatné změny koncentrace ve srovnání s dříve navrženými způsoby založenými na měřeních den po dnu.

Analyzát vybraný přo zajištění upozornění _v .

bezprostřední ovulace není pro předkládaný'vynález kritrcký, pokud je zajištěno, že tento analyzát vykazuje detekovatelnou změnu koncentrace v časovém intervalu mezi začátkem testování (jak bylo. zde stanoveno) a bezpečnou dobou -před vlastní ovulací v současném cyklu.

.

Vynález může být obecně . aplikován v jakémkoliv způsobu monitorování šťávu současného ovulačního cyklu individuálního, lidského ženského subjektu, který- zahrnuje měření analyzátů v tělní tekutině š podstatným vztahem ke ' stavu ovulačního cyklu a který vykazuje zaznamenatelnou změnu v průběhu preovulační fáze tohoto cyklu, přičemž' tato změna ' nastává nejméně, 2 a s' výhodou nejméně' 3-dny .před dnem vlastní ovulace.

Následující popis je proveden pouze prostřednictvím 20 příkladu ve vztahu·, k hormonům v moči._ E.3G, . luteinizačnímu hormonu (LH) a .pregnanediol-3-glukuronidu (P3G), avšak je možné snadno .nahlédnout, že principy tohoto .způsobu lze použít í na· testování dalších biochemických znaků v jiných tělních tekutinách, například na testováníhormonů estrogenu a progesteronu v ' krvi nebo ve slinách.' Způsob podle' předkládaného vynálezu je možné použít v kombinaci s pozorováním jiných fyziologických známek stavu plodnosti * ženy, které žena může sledovat,, .a nebo^jej lze na- tato pozorování' přímo aplikovat, příkladem je sledování znaků v jiných tělních tekutinách. ' .

Den ovulace může být stanoven prostřednictvím jakéhokoliv ze známých chemických nebo fyziologických parametrů, ačkoliv výhodným způsobem je měření koncentrace LH. Jakmile byla detekována vlna LH, lze říci, že ovulace je možno bezprostředně očekávat. Také den v cyklu, ve který ovulace již nastala může být zaznamenán pro budoucí referenci. Pokud je zjištěna vlna LH a tudíž je přesně stanoven den ovulace, může být uživatelce s velkým stupněm jistoty sděleno, že nebude plodná déle než čtyři následující dny (3 dny po ovulaci). ; pro praktické účely může být koncentrace LH 20 mlU/ml v moči označena jako univerzální prahová hodnota indikující vlnu LH za v podstatě všech okolností.

Výraz vlna LH je v tomto popisu . používá pro označení dramatického nárůstu koncentrace LH, který předchází ovulaci. V oboru je používán rovněž výraz LH max., to jest špičková koncentrace LH. U většiny individuálních subjektů je ze všech praktických hledisek výhodné, pokud je cyklus monitorován na denním základě. U malého množství individuálních subjektů, možná u 20 % populace, ale vlastní špičková koncentrace LH není zjištěna do dne následujícího po hlavním nárůstu koncentrace, pro účely předkládaného vynálezu je výhodné používat siedovatelný nárůst, jako kritický parametr.

Alternativně, nebo navíc, může být deklarován konec plodné fáze na základě znalosti koncentrace estradiolu (nebo jeho metabolitu) v současném cyklu. Výhodně tento konec může deklarován na předem stanovený den následující po hodnotě špičkové koncentrace. Protože, například,. špičková 30 koncentrace E3G v moči se jeví být méně snadno detekovatelnou událostí než je vlna LH, může být špička . E3G definována prostřednictvím odkazu na prahovou hodnotu stanovenou, například vztahem:

[i]/[r] >2,5, výhodně > 3 _w pak se uvažuje, že špička nastala v den, kdy tento vztah je poprvé splněn v průběhu testovacího' režimu použitého v současném cyklu. Obrácený vztah bude použit, pokud signál o E3G je nepřímo úměrný vlastní koncentrací. V některých případech může podstatný nárůst E3G nastat ve stejné den jako byla detekována bezprostředníovulace, Pokud špička E3G již byla detekována, lze předpokládat, že. plodná fáze skončí ' o šest, nebo bezpečněji o sedm nebo o, osm, dnů později. U . tohoto provedení předkládaný vynález navrhuje možnost způsobu monitorování plodnosti v současném cyklu pouze na základě údaje odvozeného z testování estradiolu nebo jeho. metabolitu. Pro účely zcela bezpečné nebo ' neselhávající'.procedury, na základě znalosti dne' ovulace v předcházejících cyklech, může

--být—použita—š.p.ička_E.3„G_t.ak,_jak , typicky nastává přibližně 1 ¹ den před vlastní ovulací.

²⁰' ' ' . Dalším způsobem předpovídání , konce plodné periody (ačkoli ne tak přesným jako je předpovídání dne ovulace) .je měření koncentrací hormonu P3G v moči. Hladina P3G v moči je poměrně nízká až do začátku luteální fáze, přičemž v tomto okamžiku jeho koncentrace poměrně' prudce stoupá.. Jakmile je tedy detekována zvýšená hladina P3G, může být uživatelce indikováno, že v cyklu nastala luteální. fáze, t j . . poslední neplodné období. Zvýšená hladina P3G v moči lze stanovit na .základě údaje .zjištěného v průběhu současného cyklu a/nebo v jednom nebo více cyklech předchozích..· Hladina' P3G je například zvýšená· jak v případě, kdy je vyšší než součet čtyř předchozích hladin P3G v témže cyklu, tak v případě, kdy je vyšší než 3500 ng/ml, přičemž hladina P3G je zvýšená, dosáhne-li jedné z těchto dvou prahových hodnot, i když je hodnota tohoto dosaženého prahu nižší než hodnota toho druhého. Nález zvýšené hladiny P3G znamená, že subjektu může být sděleno, Že je již do konce tohoto cyklu v neplodném období.

Pokud je to žádoucí, může být detekce buď LH nebo P3G použita jako spoušť, pro indikaci toho, že subjekt již dále ⁰ není plodný do konce cyklu, přičemž jeden hormon působí jako pojistka pro ten druhý. Je ovšem výhodně, aby detekce LH byla použita jako primární indikátor toho, zda ovulace již nastává nebo bezprostředně nastane, protože detekce LH sama o sobe vede na mnohem přesnější stanovení přesného dne ovulace než použití P3G.

Způsoby zjišťování analyzátů v tělní tekutině, jako jsou metabolity hormonů v moči, vhodné pro účely tohoto

--způsobu—Í.S.Q.U—ve.lmi dobře známé osobám v daném oboru znalým.

Ve výhodném provedení je analyzát detekován vzorkovacími nebo testovacími způsoby a zařízeními, které jsou popsány v UK patentu GB 2204398 a v evropské patentové přihlášce ΞΡ-Α-383619.

Pokud způsob podle předkládaného' vynálezu odkazuje na měření komponentu v moči, musí být toto měření provedeno na vzorku moči. Je dosažitelné množství imunologických technik, které umožňují měření komponentů v moči. V literatuře již bylo popsáno velké množství testovacích zařízení na pevné

Yl· bázi, jako jsou ponorné tyčinky a chromatografické pásky, která mohou být snadno upravena pro použití při stanovení analyzátů v moči. Zařízení by mělo být schopno alespoň indikovat relativní koncentrace analyzátu, například E3G, v pásmech prahových' hodnot. Příklady jednoduché testovací technologie, která může být snadno upravena pro domácí použiti, jsou popsány, například, v EP-A-225054, EP-A-183442,

EP-A-186799 a EP-A-291194. Mohou být použity jednorázové vzorkovací pásky, jako jsou popsané v patentovém spisu EP-A-291194, které je nutno jednoduše pouze uvést do kontaktu s močí a které zajišťují ' vzorkovací výsledek v polo kvalitativní formě, například prostřednictvím řad testovacích zón na pásku, které jsou progresivně, pozitivní při vyšších koncentrácích analyzátu. v moči. Více pásků, které odpovídají při různých prahových hodnotách analyzátu, může být použito spíše než jeden pásek. Alternativně může být okem čitelný kvantitativní test založen na progresi viditelné, například zabarvené, oblasti nebo čele na povrchu (například radiální difúzí), s použitím například vzorku.značeného enzymem.

V mnohem složitějších provedeních vynálezu je upraveno záznamové zařízení, které, obsahuje· prostředky pro čtení výsledku vzorku moči, například měřením absorbce nebo ¹ „ fluorescence testovacího pásku·.' To muže umožnit mnohem přesnější číselnou indikaci o koncentraci analyzátu, přičemž tak lze dále zlepšit přesnost celého způsobu.

V jednom provedení předkládaného vynálezu, ve kterém je dva nebo více analyzátu měřeno současně, může být toto měření prováděno, pokud 'je to žádoucí, s použitím jednoho testovacího zařízení tělní tekutiny, například prostřednictvím zařízení obsahujícího více testovacích pásků, nebo jeden pásek schopný nezávislé , detekce koncentrace různých analyzátů. · ' .-24

Obecný popis výhodného formátu testování

V' jednom provedení se tento aspekt předkládaného vynálezu týká zejména testů ve formátu pásku pro stanovení monovalentních analyzátů, jako jsou hapteny.

V jiném provedení se předkládaný vynález týká zejména zlepšených testů, ve' kterých dva nebo více analyzátů je stanoveno současně v jednom vzorku.

Pokud je test určen pro detekci přítomnosti a/nebo IQ množství právě- jednoho analyzátů v tekutém, vzorku, je relativně snadné uspořádat podmínky testu pro dosažení tohoto výsledku a pro eliminaci účinku dalších komponentů, které . mohou být přítomny ve vzorku. Pokud je ale žádoucí použít ' .jedno testovací zařízení pro , stanovení více než jednoho dalšího analyzátů ve stejném tekutém vzorku, je úloha vyvážit podmínky pro zajištění,, aby .samostatné testovací reakce proběhly účinně, mnohem .obtížnější, zejména u testu ve formátu pásků.

V dalším provedení předkládaný vynález navrhuje test 20 ve formátu pásků pro. monovalentní analyzát (hapten), využívající částicovou přímou značku pro vyhodnocení výsledku testu, přičemž vzorek částicové přímé značky nese protilátku specifickou pro monovalentní analyzát a detekční zóna pásku obsahuje nehybný analyzát nebo jeho analog.. Každá částicová značka nese množství stejných- molekul protilátky. Jako reakční Činidlo. mohou být částice nesoucí protilátku standardizovány v průběhu výroby ' (to jest. v průběhu aplikace protilátek na částice) pro·.' zajištění, .že v. dané' dávce množství aktivní protilátky konstantní. Koncentrace analyzátů nebo analogu analyzátů v detekční zóně by měla překračovat účinnou koncentraci (molární koncentrací} protilátky na částicích. Není podstatné, aby na každé částici bylo konstantní množství protilátky, protože počet částic se může měnit. Množství protilátky částicové značky, dostupné ve vzorku by mělo překračovat' předpokládanou koncentraci ₍ analyzátu ve vzorku. Tyto koncentrace mohou být nastaveny prostřednictvím experimentování- tak,- že přítomnost volného « analyzátu ve vzorku tekutiny vede na podstatnou hladinu t

vázání volného analyzátu k protilátkám na částicích a tedy do 10' podstatné míry zabraňuje možnému vázání částicové značky na nehybný analyzát nebo jeho analog v detekční zóně. Principem tohoto testu j.e to, že .na průměrné částici je dostatečný * počet aktivních molekul protilátky pro zajištění vazby částic v detekční zóně, ale přesto má přítomnost analyzátu ve vzorku omezený účinek, na toto vázání. Míra,, do jaké se částice budou vázat v detekční zóně, je tedy nepřímo úměrná koncentrací analyzátu ve vzorku tekutiny. V testu ' ve formátu .pásků je protilátka částicové značky .uložena před detekční zónou, takže aplikovaný vzorek tekutiny prochází ’ materiálem částicové značky a' nese jej do detekční .zóny. U, tohoto uspořádání testu je nezbytné zajistit, aby potenciální reakce mezi volným analyzátem a protilátkou částicové značky byla alespoň v podstatě dokončena -před tím, 'než tato reakční činidla dorazí do detekční zóny. Míra, do jaké se částice váží k nehybnému analyzátu nebo jeho analogu v detekční zóně, je tedy závislá na zbytkové nezreagované protilátce zbývající na částicích. Je'nezbytné zajistit,.aby koncentrace nehybného ” analyzátu nebo jeho analogu v detekční zóně byla vysoká pro zlepšení účinného zachycení částic, které procházejí skrz tuto zónu. Aby se zlepšila účinnost předcházejícího vázání protilátky částicové značky s volným analyzátem ve vzorku tekutiny, je velmi žádoucí, aby protilátka na částicích mela velmi vysokou afinitu pro analyzát. tato afinita je výhodně alespoň 10®, a zvláště výhodně alespoň přibližně 10ⁱ⁰, litrů/mol. Použití protilátek s takto vysokou afinitou zajišťuje účinné zachycení volného analyzátu částicemi a navíc zajišťuje, že za podmínek testu, jakmile již byly molekuly analyzátu vázány k protilátce na částicích, je velmi nepravděpodobné, že se uvolní nebo zamění s molekulami nehybného analyzátu nebo jeho analogu, jak částice procházejí skrz detekční zónu.

Obecné principy předkládaného vynálezu, které byly uvedeny výše, platí rovněž pro test, který je určen pro stanovení dvou nebo více analyzátu, přičemž alespoň jeden z , .

nich je monovalentni.

V jednom provedení navrhuje ' předkládaný vynález způsob stanovení přítomnosti a/nebo koncentrace dvou nebo více analyzátu v jednom vzorku tekutiny, jako je vzorek moci, přičemž alespoň jeden z těchto analyzátu je zjistitelný prostřednictvím reakce vázání v sendvičovém formátu, která zahrnuje dvě vazební reakční činidla specifická pro různé epitopy v uvedeném analyzátu a alespoň jeden další z uvedených analyzátů je hapten (a tudíž není zjistitelný snadno prostřednictvím reakce vázání v sendvičovém formátu), přičemž tento způsob zahrnuje kroky:

a) vytvoření zařízení zahrnujícího pásek z porézního materiálu, podél kterého může migrovat vzorek tekutiny, tento pásek má dvě nebo více prostorově oddělené detekční zóny (alespoň jednu na analyzát, který má být zjištěn) umístěné za místem, kde se přivádí vzorek tekutiny k ·'*· tomuto pásku, -přičemž z těchto zón: .

i) alespoň jedna . zóna obsahuje nehybné íif,· zachycovací činidlo, které je specifickým vazebním činidlem c pro uvedený první analyzát, nebo specifické vazební činidlo, .·* které může zachytit soubor sendvičového formátu včetně uvedeného prvního analyzátu, a¹ ‘ ii) alespoň jedna další . zóna obsahuje nehybné ¢, zachycovací činidlo, kterým je bud’ hapten nebo jeho analog;

b) vytvoření jednoho nebo více souborů částic schopných migrovat skrz pásek se vzorkem tekutiny, přičemž z i těchto souborů:

i) alespoň jeden soubor nese vazební j činidlo «

specifické pro uvedený první analyzát, nebo specifické pro další specifické vazební činidlo, 'které' může participovat v ' reakci v sendvičovém formátu.s .uvedeným prvním analyzátem, a ii) alespoň jeden další soubor nese vazební činidlo pro uvedený hapten; a

c) způsobení, že uvedené soubory částic budou suspendovány v uvedeném vzorku tekutiny a budou migrovat s tímto vzorkem tekutiny skrz uvedený pásek; přítomnost uvedeného prvního analyzátu ve vzorku tekutiny vede na vázání částic v uvedené alespoň jedné detekční zóně v množství přímo 25 úměrném vzhledem ke koncentraci tohoto prvního , analyzátu v uvedeném vzorku tekutiny, a přítomnost uvedeného haptenu ve vzorku tekutiny vede na snížení vázání částic uvedeného alespoň jednoho dalšího souboru v uvedené další detekční zóně v množství přímo úměrném vzhledem, ke koncentraci tohoto haptenu v uvedeném vzorku tekutiny, detekční zóna obsahující nehybný hapten nebo nehybný analog haptenu je výhodně umístěna za detekční zónou sdruženou s prvním analyzátem.

Příkladem prvního analyzátů je luteinizační hormon (LH). Příkladem druhého analyzátů je estradiol nebo jeho 5 metabolit, jako je estron-3-glukoronid (E3G).

* Výhodně jsou částicemi latexové částice, které mohou být zabarveny.

ΐί·

Zvláště výhodně je afinita specifického vazebního » ]_q činidla proti haptenu alespoň přibližně 10⁹, výhodně přibližně ' 1O¹⁰, litrů/mol.

Výhodně je rozsah částic vázaných v každé z uvedených 4 detekčních zón stanoven prostřednictvím měření extinkce elektromagnetického záření, jako je světlo, při jeho přenosu * 15 ·' skrz tloušťku uvažovaného pásku.

Předkládaný vynález rovněž navrhuje testovací zařízení pro použití při stanovení dvou nebo více analyzátů v _; jednom vzorku tekutiny, přičemž alespoň, jeden z těchto analyzátů je zjistitelný prostřednictvím reakce vázáni v sendvičovém formátu, která zahrnuje dvě vazební reakční činidla specifická pro různé epitopy v uvedeném analyzátů a alespoň jeden další z uvedených analyzátů je hapten (a tudíž ' není zjistitelný snadno prostřednictvím reakce vázání v sendvičovém formátu), přičemž toto'zařízení zahrnuje, výhodně ^; 25 uvnitř ochranného pouzdra:

a) pásek z porézního materiálu, podél kterého může migrovat vzorek tekutiny;

b) dvě nebo více prostorově oddělené detekční 30· zóny (alespoň jednu na. analyzát, který má být zjištěn) na uvedeném pásku umístěné za místem, kde se přivádí vzorek tekutiny k tomuto pásku, přičemž z těchto zóh:

i) alespoň jedna zóna obsahuje nehybné zachycovací činidlo,. které je specifickým vazebním činidlem pro uvedený první analyzát, nebo specifické vazební činidlo, které může zachytit soubor sendvičového formátu včetně uvedeného prvního analyzátu, a ii) alespoň jedna, další zóna obsahuje nehybné zachycovací činidlo, kterým-je buď hapten nebo jeho analog;

c) jeden nebo více souborů, částic, umístěných před uvedenými detekčními zónami- a schopných . migrovat skrz pásek se vzorkem tekutiny, přičemž.z těchto souborů:

i) alespoň jeden soubor .nese vazební činidlo specifické pro uvedený,. první analyzát,' nebo specifické pro další specifické vazební činidlo, které může -participovat v reakci v sendvičovém formátu s uvedeným prvním analyzátem, a ii) · alespoň jeden další soubor . nese' vazební činidlo pro uvedený hapten; přičemž .

přítomnost uvedeného, prvního analyzátu ve -vzorku tekutiny vede na vázání částic v uvedené alespoň jedné detekční zóně v množství přímo úměrném vzhledem ke koncentraci tohoto prvního- analyzátu v uvedeném vzorku tekutiny, a přítomnost, uvedeného haptenu ve vzorku tekutiny vede na snížení vázání ' částic uvedeného .alespoň jednoho dalšího souboru v uvedené další detekční zóně v množství přímo--úměrném vzhledem ke koncentraci tohoto haptenu v

-V uvedeném. vzorku tekutiny, detekční zóna obsahující nehybný hapten nebo nehybný analog haptenu je výhodně umístěna za detekční zónou sdruženou s prvním analyzátem.

Výhodně je materiál pásku alespoň průsvitný skrz svojí tloušťku. Ideálním materiálem pro pásek je nitrocelulóza.

A í

·’ t

Vzhledem k tomu, že test pro hapten není konkurenční reakcí, ve které je možnost volné výměny mezi analyzátem ve vzorku a analyzátem upraveným jáko reakční činidlo v testu (v tomto případě nehybný analyzát nebo jeho- analog na pásku), je podstatné, aby v průběhu trvání testu byla analyzátu ve vzorku zajištěna dostatečné možnost vázat se s částicemi nesoucími protilátku předtím, než tyto částice dosáhnou relevantní detekční zóny na pásku. Pro zjištění tohoto znaku je žádoucí, aby zde byla poměrně dlouhá kontaktní doba mezi částicovým reakčním činidlem a vzorkem. Podle toho, v určitých hranicích přijatelné fyzikální geometrie testovacího zařízení, by detekční zóna obsahující nehybný analyzát nebo' jeho analog měla být tak daleko za zdrojem částicového značkového reakčního činidla, jak jen je možné. Zejména když je testovací zařízení určeno pro stanovení dvou nebo více analyzátů ve, stejném vzorku tekutiny a alespoň jeden z těchto dalších analyzátů je stanoven prostřednictvím reakce v sendvičovém formátu, měla by být detekční zóna pro hapten v ideálním případě za detekční zónou nebo zónami sdruženými s testy sendvičového formátu.

Jedno zvláštní provedení předkládaného vynálezu je tedy test s formátem pásku pro dva analyzáty pro stanovení LH a E3G v aplikovaném vzorku moči, přičemž dva testovací výsledky jsou detekovány -v prostorově oddělených detekčních zónách na pásku a zóna pro. E3G je umístěna z detekční zónou pro LH vzhledem k místu, kde je aplikován vzorek tekutiny.

z r j, - ·*

Testovací, .zařízeni zahrnující pásek z porézního materiálu, podél .kterého může tekutina, jako je aplikovaný vzorek, migrovat prostřednictvím difúze nebo vz-líhání pro uvedení jednoho nebo více testovaných reakčních činidel do malé detekční zóny v pásku, jsou nyní, ve velkémíře používána pro kvalitativní a polo. kvantitativní analýzy, analyzátů, které mohou být detekovány prostřednictvím sendvičových testů , '3 s pevnou fází. Pokud jsou použity přímé značky, jako jsou soli zlata a obarvené latexové ..částice, mohou tyto testy odhalit výsledek ve formě snadno,čitelné pouhým lidským okem. Výsledek je proveden koncentrováním detekovatelného materiálu v poměrně malé oblasti porézního,.nosného materiálů.

V jednom provedení- předkládaný vynález zajišťuje kvantitativní test ve formátu pásku, ve kterém je testovací výsledek odhalen vázáním v detekční zóně značeným reakčním činidlem zaujímajícím více aktivních vazebních míst specifických pro testovaný analyzát. Značkou je detekovatelná mikročástice, jako je (obarvená) latexová ..částice, sůl kovu (například zlata), barvená sůl, nebo·· nekovové elementární částice (například uhlík, selen), o, velikosti-..dostatečně malé pro umožnění “migrace skrz porézní materiál pásku, ale dostatečně’ velké pro umožnění vytvoření - detekovatelného konečného '-výsledku,· když je značený materiál' koncentrován v

... - ' SÝV >·'*· . ' ó’ . , detekční zóně. Cásticové značky typů, které -již jsou . *-’·-· 'i'· ‘ .7· používány v sendvičových testech .ve formátu pásků/ jsou ; Ί . · ·. .*>*··' · 1 . , .. . ť f ' 7/ ideální.

V typickém atestu podlev.předkl-ádaného vynálezu r J AA v 1» « · / ·' , . /«r ' specifických, .vazebních , míst ve značeném reakčním »ί,ί; a * » · ·-> a · zajištěno použitím množství shodných protilátek, je více

Φ. -rt 1 činidlu výhodně

..A i, ·* monospecifických (například monoklonálních) protilátek, uchycených ke každé značené částici.

Oproti očekávání bylo překvapivě zjištěno, Že zejména při testu na hapten vede použití částicových značek, zaujímajících .více shodných aktivních vazebních míst specifických pro analyzát, na podstatné zvýšení citlivosti. Lze předpokládat, že' přebytek ' vazebních -míst na značené částici umožňuje účinné vázání částice v detekční zóně 'nesoucí'hapten. .Ovšem, .možná vzhledem ke geometrii systému,

Π · .k· _y .....

která může být nahlížená jako planarm povrch detekční zóny a~’ • více či méně kulová značená částice, předcházející vázání pouze relativně malého množstvíanalyzátu, kterým je hapten, i , ,, ze¹ vzorku’ k zakřivenému povrchu . značené,· částice způsobuje jistý stupeň zábrany vázání značené částice v detekční zóně, což je dostatečné pro, ' ovlivněni vázání a . způsobuje detekovatelný účinek.

Lze předpokládat, že je značně žádoucí, aby, jakmile' molekula analyzátu bude specificky' vázána ke značené částice, zůstala takto vázána v průběhu ,zbytku testového protokolu

·. vědoucího jia vytvoření detekovatelného testovacího výsledku'v detekční zóně. .Jedním způsobem dosažení tohoto···-znaku... je.

použití specifického vazebního činidla ve značeném reakčním činidle, k.teré má velmi vysokou afinitu pro daný analyzát. Je nyní výhodné použít monoklonální protilátky, které, mají 25 .· .

afinitu pro analyzát 10“. Ve spojení s testem na hapten ve formátu pásků bylo shledáno výhodným použití značených .specifických vazebních činidel.majících afinity na analyzát alespoň přibližně 10^s a' zvláště výhodně alespoň přibližně IQ¹⁰ litrů/mol. Dobrý způsob měření afinity v'roztoku je popsán v publikaci .Fríquet a kol.,J.' Immunol Methods, Vol 77 (1985), i strany 305-319. Monoklonální protilátky mající takové vysoké afinity mohou být získávány běžným způsobem a identifikovány “ běžnými selekčními postupy. Ačkoliv je žádoucí použít .protilátky, které vykazují vysokou afinitu v roztoku, není tento znak jediným· způsobem dosažení tohoto, aspektu předkládaného vynálezu. Je vysledováno, že protilátka, která vykazuje poměrně nízkou afinitu v roztoku může být transformována v.· jejích účinných vlastnostech, pokud je znehybněna na pevné fází. ' .

¹

Důležitým' provedením předkládaného vynálezu je

·. kvantitativní test- v. páskovém formátu pro analyzáty tělních tekutin člověka, zejména pro hapteny. Zvláštním případem je takový tesť pro estradiol nebo jeho metabolit, jako je estron-3-glukoronid (E3G).. Zvláště důležitým provedením 15 předkládaného vynálezu jetest . v'paskovem formátu pro E3G v moči, který je, schopen kvantitativního stanovení E3G v rozsahu koncentrací 5 60 ng/ml močí. Takový test je'zvláště vhodný pro použití v proceduře určené pro zajištění informace uživatelce o stavu plodnosti v ovulačním cyklu..Koncentrace '

estradiolu nebo jeho metabolitu v. tělní tekutině je považována za vhodný indikátor tohoto stavu'.

Pokud je to žádoucí, může testovací zařízení podle předkládaného vynálezu, které bylo popsáno výše, navíc zahrnovat' schopnost stanovit; .další analyzáty ve stejném vzorku, pokud je to vhodné prostřednictvím použití' běžné, sendvičové testovací technologie. Tak například je jedním provedením předkládaného vynálezu, testovací zařízení v páskovém formátu, které může zajistit kvantitativní stanovení

E3G v moči, jak bylo uvedeno výše, a současně- kvantitativní stanovení luteinizačního hormonu (LH) v moči prostřednictvím * ' sendvičové/'testovací^ procedury,·' přičemž výsledky E3G a LH jsou' vyhodrióčová'ňy^r ve' dvou ⁵ samostatných detekčních zón-ách. Výhodně u těchto kombinovaných‘testů může být značka stejná pro každý test, přestože osoba v oboru znalá snadno nahlédne, že obvykle by bylý vyžadovány dva soubory částicových značek, z nichž jeden by nesl mnoho vazebních míst pro E3G'a druhý by nesl specifický vazební materiál pro LH. Detekční zóna pro E3G bude obsahovat nehybný E3G_wnebo jeho analog, a detekční zóna pro LH bude obsahovat-^nehybný specifický vazební materiál, jako je protilátka proti,LH..

Obecný popis výhodného.'čtecího systému testovacích výsledků' r * ‘‘ΐίΑ 'Vr Y ;· ' , _v “ Tento 'aspekt předkládaného vynálezu se týká zařízeni pro čtení výsledků testu aá· .testovacích czaří zení pro použití ve. spojení se čtecími'’zařízeními. . ·

Testovací zařízení pro domácí použití, jako jsou těhotenské testy, jsou nyní velmi dobře zavedené. V případě těhotenského testu, který pouze uživátélce musí zajistit výsledek ' ano/ne, umožňuje v- současnosti ' dosažitelná

-T í technologie, aby testovací' výsledek ' byl čten snadno pouhým p- .. ⁴'~ * , *' *·· ' · / *»· i a ¹ okem bez nutnosti'jakéhokoliv pomocného vybavení.

Testy pro domácí použití jsou určené primárně pro detekci fyziologických změn v lidském těle s cílem' zlepšit ·..?.'· . . · .· . . · ' Ί-» · . ' . ‘..', F . - . pr\ zdraví, obecně dobrou životosprávu nebo . životní styl - . - . .. ·. .' ’.. j lo jednotlivce. Spotřebitel se stává stále pozornějším ke svému ii *:.,>·.- , - tV /‘Λ i’ zdraví a schopnost spotřebitele monitorovat jeho nebo její i-..κ.ϊ .t.♦ ^r · .· i,. η.,... r/ tělesné funkce se zlepšuje. V některých případech je tento '·, . · , _η , , stav usnadněním vzájemné spolupráce mezi jednotlivým

L ·:?·& t^s· ’ ·< 4, · : ' ^ς· · _t spotřebitelem aprofesionálním pracovníkem v medicíně (GP) .

f

Existuje mnoho testů indikujících fyziologické změny v lidském těle,..které v současnosti mohou být prováděny pouze . s využitím složitých laboratorních technik. Aby se zajistila vhodná informace týkající se testovaného jednotlivce, musí obecně tyto testy vyhodnotit výsledek v přesných číselných hodnotách, například koncentrace určitého analyzátu v tělní tekutině.

> .·· . '

..

V. 15

-'20

V oboru je tedy poptávka, po testovacím systému, . ze.jména„,p.oužitelnému,».prp^ testování., vzorků, .tělních tekutin „v domácím prostředí, který kombinuje výhody vzorkového testování společně s jednoduchým -a- levným .numerickým . .stanovením testovacího' výsledku... ^:' · ·?

, · U.S'·'·'.-' ' '.i. “ . . . < h· - · V technické ‘literatuře je popsáno mnoho testovacích zařízení s návrhem;,. že testovací 'výsledek by .mohl být čten. s použitím .'optického' zařízení. Často je - navrhováno' využití: fluorescenčního vyzařování nebo světelného- .odrazu..·' Tákové‘( techniky jsou většinou vhodné pro použití '.ve složitých· laboratořích. V patentovém spisu . EP-A2 -212599, který popisuje., mnohozónové .analytické '. prvky mající koncentrační'' . zónu, ' . i · .

detekova-telného’signálu·, . je .učiněn návrh, 'že- detekovatelnýsignál indikující testovací·výsledek'v zóně by mohl být měřen . prostřednictvím^,f elektromagnetického/ záření, . jako .je- světle, přenášeného zónou. EP-A2-212599 indikuje,, že analytický, prvek může být vyroben' z porézního .vláknitého materiálu, jako ; je papír nebo nitrócelůlóza'. V tomto spisu' ale nejsou uvedeny žádné praktické dětaily pro .indikaci toho, jak by mohlo' být provedeno přesné'měření s použitím; přenášeného světla., ' -Překvapivě bylo předkladateli. této přihlášky' zjištěno, že kvantitativní informace může být odvozena

-prostřednictvím . přenosového . čtení testovacího pasku 'nebo

Ί*

0' ··' * ý v

podobně, pokud-;· dopadající elektromagnetické -záření -je jednotné v- >oblasti;-testovacího · pásku, která obklopuje’'a zasahuje za ...testovací^zónu.. ' ,·.·.·

V jednom 'provedení předkládaný vynález navrhuje způsob čtenl· výsledku ·těstu, · prováděný prostřednictvím koncentrování detekovatelného'materiálu v relativně malé zóně nosného prostředku ve formě pásku/- plátku nebo vrstvy, jehož tloušťkou lze přenášet elektromagnetické zářeni, jako je světlo, přičemž alespoň část jednoho čela uvedeného nosného prostředku je vystavena dopadajícímu elektromagnetickému záření,·· které' je- v podstatě' jednotné v čělé této částí, uvedená ‘část ''-'obsáhujé'*'·uvedenou zónu a elektromagnetické, záření vystupující z-protilehlého čela nosného prostředku je' měřeno pro zjištění testovacího výsledku.

Výhodně -má dopadající elektromagnetické záření v podstatě jednotnou - intenzitu.

Tato jednotnost může být dosažena, například, zajištěním.—kólimovaného zdroje elektromagnetického záření použitím běžných. :zaostřoyacích „pro-středků, jako jsou čočky a svět-loyody·..,' ,_f? prcu, ..._h-za jištění/ vu, paralelního · ..dopadajícího elektromagnetického záření, které-, dopadá vypodstatě na celou vystavenou č,ásť-nosného prostředku. . '-..y·..·.

vynálezů ozařuje‘

Ovšem, / ^Jve ' ·· výhodnějším provedení předkládaného ' V Λ i , ' ', je’^r>dopadající elektromagnetické záření“ difuzní' a 'vystavenou část nosného prostředku jednotné s náhodným rozptylem.

V íjíriémť'provedení - navrhuje testovací zař í ^!zen i^ťáhr nu j i cí?'' p o r é z η ί, nosný pásek’ nebo'’ vrstvu', skrz jehož o ,r, , ,«- -,.m·***:,.:· předkládaný^h výnalez pro* tekutinu·'propustný tloušťku může ' difuzně prostupovat elektromagnetické záření, nosný prostředek je uvnitř pouzdra a- zahrnuje alespoň jednu detekční zónu, ve které je vyhodnocován testovací výsledek prostřednictvím specifického vázání detekovatelného materiálu přímo nebo nepřímo k vazebnímu činidlu nehybnému v uvedené detekční zóně, přičemž .detekce uvedeného materiálu se provádí jako odezva na elektromagnetické záření a pouzdro má přenosové oblasti elektromagnetického’ záření, umožňující' elektromagnetické energii z vnějšího zdroje, aby procházela , zařízením, a přičemž detekční zóna leží v cestě elektromagnetického záření mezi ' uvedenými přenosovými' oblastmi elektromagnetického.záření. ··..

Výhodně porézní nosný pásek, nebo vrstva zahrnuje papír, niťrocelulózu nebo podobně, výhodně s tloušťkou ' ' nepřekračující 1 mm..' v ještě dalším provedení navrhuje předkládaný vynález kombinaci testovacího zařízení a čtecího zařízení testovacího výsledku, přičemž:

2o ’ .a) testovací zařízení zahrnuje porézní, pro tekutinu propustný nosný,pásek nebo vrstvu,) skrz jehož tloušťku může difuzně prostupovat elektromagnetické, záření, tento nosný . prostředek je výhodně uvnitř pouzdra- nebo krytu a zahrnuje alespoň jednu detekční- zónu,- ve které ' je vyhodnocován testovací .výsledek ' prostřednictvím specifického vázání detekovatelného materiálu přímo nebo nepřímo k vazebnímu činidlu nehybnému v uvedené detekční zóně;

b) pouzdro nebo kryt, pokud je přítomno, má přenosové oblasti elektromagnetického :záření, umožňující elektromagnetickému záření z vnějšího zdroje, aby procházelo skrz zařízení, přičemž detekční zóna leží v cestě mezi přenosovými oblastmi;

c) čtecí zařízení testovacího výsledku má přijímací prostředky pro přijetí alespoň části uvedeného testovacího zařízení-'·,·’ přičemž, tato . část zahrnuje detekční zónu pro prezentaci této detekční zóny čtecím prostředkům, které zahrnují- zdroj jednotného elektromagnetického záření a jeden nebo více snímačů umístěných tak, že po vložení testovacího zařízení do- přijímacích' prostředků může testovacím, zařízením procházet elektromagnetické ' záření a intenzita elektromagnetického záření ' vystupujícího z testovacího zařízení může být detekována prostřednictvím tohoto snímače (těchto snímačů) .

Výhodně přijímací prostředky zahrnují spojovací prostředky uveditelne do záběru s odpovídajícími spojovacími prostředky na testovacím zařízení pro zajištění, že po přijetí testovacího zařízení čtecím zařízením ’ je detekční zóna (zóny) umístěna a udržována y předem stanoveném prostorovém vztahu vzhledem k čtecím prostředkům.

Výhodně ' přijímací prostředky ' zahrnují ovládací prostředky spouštěné prostřednictvím přijetí testovacího zařízení, přičemž.tyto ovládací prostředky způsobují iniciaci čtení detekční zóny -(zón) -. -

Pokud je testovací zařízení opatřeno pouzdrem, je výhodné, aby toto pouzdro testovacího zařízení zahrnovalo vnitřní středící prostředky, které zabírají s odpovídajícími středícími prostředky sdruženými. s nosným prostředkem, takže detekční zóna je uvnitř pouzdra testovacího zařízení umístěna v předem stanoveném prostorovém vztahu vzhledem ke středícím prostředkům na pouzdru testovacího zařízení. Výhodně tyto vnitřní středící prostředky zahrnují čep . nebo podobně, uveditelný- do záběru s otvorem, drážkou nebo podobně v nosném prostředku, přičemž detekční zóna je v předem stanoveném místě na nosném prostředku vzhledem k uvedenému otvoru nebo drážce.

V průběhu výroby testovacího zařízení mohou být použity odpovídající středící prostředky pro usnadnění nebo pro řízení -přesného vytvoření detekční zóny na nosném prostředku, například prostřednictvím technik nanášení reakčních činidel. Navíc, nebo alternativně, může být prostřednictvím tohoto způsobu středění usnadněno nebo řízeno přesné uložení nosného.prostředku dovnitř pouzdra testovacího zařízení.

, '

V dalším provedeni předkládaný vynález navrhuje, čtecí !

zařízení testovacího výsledku pro použití ve spojení s testovacím zařízením zahrnujícím porézní, pro tekutinu propustný nosný pásek nebo vrstvu, skrz jehož tloušťku může

2θ difuzně .prostupovat elektromagnetické -záření, tento nosný prostředek- zahrnuje -detekční zónu, ve které je vyhodnocován testovací výsledek prostřednictvím specifického vázání detekovatelného materiálu přímo nebo nepřímo k vazebnímu činidlu .nehybnému v uvedené detekční zóně, tato detekce materiálu se orovádí iako odezva na elektromagnetické záření, přičemž toto čtecí zařízení testovacího výsledku zahrnuje:

a) přijímací prostředky pro přijetí alespoň části testovacího zařízení, přičemž tato část zahrnuje uvedenou detekční zónu;

b) čtecí prostředky sdružené s přijímacími prostředky, přičemž tyto čtecí prostředky zahrnují:

i) alespoň jeden zdroj jednotného rozptýleného, výhodně elektromagnetického záření; a ii) jeden nebo . více snímačů schopných detekce intenzity uvedeného elektromagnetického záření;

přičemž zdroj a. snímač (snímače) jsou umístěny tak, že při přijetí uvedené části testovacího zařízení uvnitř přijímacích prostředků je detekční zóna umístěna v cestě mezi zdrojem a snímačem (snímači).

Tato kombinace testovacího zařízení/čtecího zařízení může být uživateli dodávána jako jeden testovací kit. Obecně ale, zatímco čtecí zařízení bude relativně trvalou jednotkou, kterou uživatel může v čase použít vícekrát (a která může být vybavena elektronickou pamětí/prostředky zpracování dat, které umožní vyhodnocení výsledků mnoha po sobě jdoucích testů), budou testovací zařízení určena pro použití pouze jednou a potom budou vyhozeňa. Testovací zařízení tedy mohou být dodávána uživateli samostatně od čtecího zařízení, například v baleních po více kusech.

Prostřednictvím přesného vzájemného zajištění mezi testovacím zařízením a čtecím zařízením, a také prostřednictvím zajištění přesného zarovnávání polohy detekční zóny uvnitř samotného testovacího zařízení, bude testovací zóna prezentována vzhledem ke čtecímu zařízení v konstantní předem stanovené poloze pokaždé, když je testovací zařízení vloženo do čtecího zařízení. Konstrukce optického systému uvnitř čtecího zařízení (světelný zdroj a snímače) mohou tudíž být tak jednoduché jak jen je možné, protože není podstatné, aby snímače zahrnovaly, například, jakékoliv snímací zařízení, které by jinak bylo vyžadováno, pokud by přesné umístění detekční zóny nebylo známé. Vyloučením potřeby použití složitého optického čtecího systému mohou být výrazně ' sníženy náklady na čtecí zářízení/monitor. Zjednodušení optického čtecího systému může rovněž umožňovat, aby čtecí zařízení/monitor mělo malou velikost, což napomáhá výhodnému a .. příjemnému použití v domácím prostředí. Samozřejmě, že ve čtecím zařízení mohou být obsaženy snímací prostředky, pokud je to žádoucí.

Přídavnou výhodou vytvoření vnitřního středícího nebo . zarovnávačího systému, který zajišťuje přesné umístění detekční zóny uvnitř testovacího zařízení, je to,' že může být usnadněna automatická výroba a kontrola kvality testovacích zařízení. Protože se předpokládá, například, v případě monitoru ovulačního cyklu, že spotřebitel bude potřebovat použít několik testovacích zařízení každý měsíc, může být nutné testovací zařízení vyrábět ve velkých množstvích při nízkých .nákladech. Vnitřní systém zarovnání může. usnadnit _y ¹ automatickou výrobu a velkou výrobní rychlost.

V principů ,může být podle vynálezu využito jakéhokoliv elektromagnetického záření pro provedení přenosového měření. Elektromagnetické záření by ovšem mělo být schopné podrobení se rozptylu. Výhodně je tímto elektromagnetickým zářením světlo ve viditelném pásmu nebo v blízkosti viditelného pásma. To zahrnuje infračervené světlo a ultrafialové světlo. Obecně se · předpokládá, že detekovatelný materiál použitý jako značka ve vzorku je takový materiál, který vzájemně reaguje se světlem ve viditelném pásmu nebo v blízkosti viditelného pásma, například absorpcí. Vlnová délka vybraného elektromagnetického záření je výhodně na nebo v blízkosti vlnové délky, která je silně ovlivněna, například absorbována, značkou. Například, pokud je značkou substance, která je silně zabarvena, to jest viditelná běžným lidským okem, pokud je materiál koncentrován, je optimálním elektromagnetickým zářením světlo s komplementární vlnovou délkou. Částicové přímé značky, například částice hydrosolů kovů (například zlata), hydrosolů nekovových prvků (například selenu, uhlíku), barevných hydrosolů a barveného latexu (polystyrén,) jsou optimálními příklady takových materiálů. Například v případě modře zbarvených latexových částic je optimálním elektromagnetickým zářením viditelné červené světlo, které bude silně absorbováno těmito modrými částicemi.

Ve výhodném provedení předkládaného vynálezu by přenesené elektromagnetické záření dosahující snímače (snímačů) mělo být rozptýlené. Toto rozptýlení může vzniknout jako důsledek přenosu elektromagnetického záření skrz nosný pásek nebo vrstvu, ale výhodněji je dosahováno prostřednictvím zdroje elektromagnetického záření, který emituje energii ve značně rozptýlené formě. Ve výhodném provedení předkládaného vynálezu tento zdroj produkuje značně rozptýlené záření a nosný pásek nebo vrstva, skrz který toto 25 záření je následně přenášeno, je ve srovnatelných hodnotách mnohem slabší difuzér.

Primární výhodou použití rozptýleného světla nebo jiného záření v této souvislosti je to, že čtení vzorkovacích výsledku bude s mnohem menší pravděpodobností nepříznivě ovlivněno znečištěním nebo kontaminujícím materiálem na .43' ť

F t

í !

I ί' f

,’ί t- ·' <$. ϋφ - ,· „ vzorkovacím- zařízení’. Například špína' nebo škrábance -na rť .p ‘ ý 7 -^TS _Ί vzorkovacím zařízení v ‘oblasti, kterou musí být záření přenášeno, by - mohly*- silně ovlivňovat přesnost zjišťovaných výsledků, pokud by -'bylo použito spíše zaostřené soustředěné světlo než ¹ rozptýlenésvětlo. Prostřednictvím použití zdroje rozptýleného světla je možné, vytvořit čtecí zařízení vzorkovacích výsledků,. kteréi.„ může přesně interpretovat výsledky vzorku, který,, je .-proveden dokonce na v podstatě průhledném vzorkovacím,-zařízení,, . aniž by dané vzorkovací i-í ty ' i ' výsledky byly nepříznivě, ovlivněny drobným znečištěním nebo poškozením (například povrchové škrábance) na vzorkovacím zařízení. ,

Ve' výhodném provedení předkládaného vynálezu je elektromagnetické 'záření ze zdroje pulsní. Prostřednictvím synchronizace detektorů (snímačů) tak, že pracují pouze ve fázi s pulsním zdrojem záření, je možné eliminovat jakoukoliv interferenci na pozadí, která by mohla být způsobena vnějším zářením, například okolním světlem. Předpokládá se, že vzorky budou většinou prováděné za podmínek přirozeného denního světla nebo, dokonce mnohem častěji, umělého světla. Umělé světlo má obvykle pulsní povahu (typicky '50 až 100 Hz) způsobenou· střídavou povahou elektrického napájení, upravením p-ulsního-; zdroje záření pro osvětlení vzorkovacího zařízení uvnitř čtecího_rzařízení může být zcela ignorováno pronikání . přirozeného-.denního světla.. Výběrem pulsní frekvence tak, že je dostatečně,odlišná,od nejobvyklejšího umělého světla, může ibýt rovněž,_Ύzabráněno jakékoliv interferenci způsobené umělým • -· +· · -'-i · , ; ._ή

- světlem. Výhodně -by pulsní frekvence záření měla být alespoň *· ^k ' ** íl . ’ kolem 1 kHz. Optimální pulsní frekvence je kolem 16 kHz.

Elektronika potřebná pro dosažení synchronního pulsního snímání je zcela-běžná pro osoby v oboru znalé.

Použití pulsního světla je velmi výhodné také proto, že potom monitor nemusí být světlotěsný. To nejen, že zjednodušuje konstrukci . monitoru, ale čtení vzorkovacích výsledků pak může být prováděno, zatímco monitor je otevřený, čímž se dále zjednodušuje činnost uživatele.

Zdroj světla nebo jiného elektromagnetického záření může ..zahrnovat zcela -běžné- komponenty. Optimálními příklady jsou komerčně' dosažitelné LED diody, výhodně vybírané tak, aby poskytovaly vhodnou vlnovou délku.světla, která je silně absorbována deťekóvatélným - materiálem’ koncentrovaným v · »·* . ' testovací zóně (zónách) . Světlo z těchto LED diod by mělo procházet skrz silný rozptylovač před dosažením vzorkovacího zařízení. Pokud je to žádoucí, může být použito pole LED '1.

diod, které jsou připojené na napájení.

'(r* vlastnosti částicových

Vhodné rozptylovače mohou být vyrobeny, například, z plastových materiálů á jsou dosažitelné komerčně. Pokud je to nezbytné, mohou být světelné rozptylovací rozptylového materiálu zlepšeny zahrnutím materiálů, jako je oxid titaničitý a síran barnatý. Optimální rozptylový materiál zahrnuje polyester nebo polykarbonát obsahující , oxid _ titaničitý. Vhodné . přimíchané.., ,množství částicového materiálů je alespoň přibližně 1 % hmotnostní, výhodně přibližně 2 %. hmotnostní. Prostřednictvím použití rozptylovače mohou být současně měřeny všechny relevantní oblasti vzorkovacího pásku a jsou .eliminovány rozdíly' na světelném výstupu ze zdroje.

Snímač (snímače) pro detekci vystupujícího světla může být běžným komponentem, jako' jsou řotodiody, například křemíkové fotodiody.

Výhodně je před tímto snímačem (snímači) umístěn 5 druhý rozptylovaČ, který' může být vyroben ze stejného materiálu jako' primární rozptylovaČ. , Toto¹ uspořádání zajišťuje, , že pohled viděný snímačem 'není ovlivněn přítomností nebo absencí testovacího. pásku ve čtecí hlavě. Důsledkem je, že’monitor může být kalibrován za nepřítomností ¹⁰ testovacího pásku,,a pak mohou být měřeny vzorkovací výsledky za přítomnosti' vzorkovacího pásku.

Použitím jednotného světelného zdroje je možné zajistit čtecí systém pro testovací pásky a podobně, který je relativně-tolerantní ke..změnám v uložení testovací zóny (zón) 15' - .

z jednoho pásku na druhý, za nepřítomnosti snímače polohy. Pokud se ale týká přesností měření.vzorků lze získat skutečně ' podstatné výhody, pokud je uložení testovací zóny řízeno, jak j e zde· popsáno .

Pro účely .zlepšení pravděpodobností početí, jsou již prodávána.· testovací zařízení, která umožňují uživateli monitorovat, v moči koncentraci luteinizačního hormonu (LH), která ostře stoupne přibližně jeden den před ovulací. Denní testování koncentrace . LH v moči se provádí, například, použitím technologie měřící tyčinky, přičemž testovací výsledky jsou zajištěny zabarveným koncovým bodem a intenzita barvy je. úměrná koncentraci LH. Pokud je spotřebitel opatřen barevnou mapou, která umožňuje srovnávání denních výsledků se standardem, může být vlna LH zjištěna jednoduše okem.

3Q Naneštěstí je monitorování koncentrace LH velmi řídký příklad vzorkování, které se týká polo - kvantitativního údaj.e, který je přístupný touto jednoduchou technologií, což je možné pouze proto, že relativní, nárůst koncentrace LH vlny je takovou dramatickou událostí. Pro většinu ostatních potenciálně použitelných vzorků jsou změny koncentrace analyzátu v tělesných tekutinách mnohem subtilnější a jsou přesně zjistitelné pouze prostřednictvím technických prostředků.

Existuje tudíž potřeba rozšířit v současnosti dosažitelnou kvalitativní testovací technologii pro domácí použití také do oblasti přesného kvantitativního testování. Výhodným příkladem, který je logickým rozšířením současného zájmu spotřebitele o testování gravidity v domácím prostředí a o testování odhadu ovulace, je rozšíření na přesné monitorování ovulačního cyklu, nejen pouze pro zvýšení pravděpodobnosti početí,' aie také pro zajištění spolehlivé informace pro účely antikoncepce. Již byly provedeny návrhy pro analyzování tělesných tekutin se shora uvedeným cílem. Společným faktorem je monitorování periodických změn v koncentracích různých hormonálních metabolitů v' moči.

Předkládaný vynález může být použit při stanovení jakéhokoliv analyzátu v tělesné tekutině, zejména při monitorování lidského ovulačního cyklu prostřednictvím stanovení jednoho nebo více hormonů nebo jejich metabolitů v tělesné tekutině, jako je moč, například buď LH a/nebo estron-3-glukoronid (E3G).

V této souvislosti se předpokládá, že domácí testovací zařízení tekutých vzorků bude obecně zahrnovat porézní nosný materiál, jako je pásek, skrz .který může pronikat nanesený vzorek tekutiny, jako je moč, přičemž vzorkovací výsledky jsou provedeny prostřednictvím specifické vazby detekovatelného materiálu v přesně definované oblasti (detekční zóně) nosného materiálu,· jako je úzká linka nebo malý bod, obsahující nepohyblivou specifickou vazební reakční látku. Předkládaný vynález se tedy týká způsobů, kterými lokalizace detekovatelného materiálu v takové detekční zóně může být stanovena přesně jednoduchým a levným postupem. Domácí zařízení pro analýzu moči, například testy gravidity a .testy odhadu ovulace, jsou nyní v Širokém měřítku dostupné komerčně. Mnoho těchto zařízení je založeno na principech imunochromatografie a’ typicky zahrnují duté pouzdro konstruované z plastového materiálu, která obsahuje porézní vzorkovací pásek nesoucí předem dávkovaná -reakční činidla. Tato reakční činidla' uvnitř zařízení- mohou zahrnovat jedno nebo více reakčních činidel označených přímou značkou, jako jsou mikročástice barevného hydrosolu, hydrosolu kovu (například zlata), nebo- barveného latexu, (například polystyrén), které·' jsou viditelné, okem, pokud .jsou koncentrovány v relativně malé ' .testovací oblasti pásku. Uživatel pouze .potřebuje nanést vzorek moči na jednu část pouzdra, aby inicioval vzorkování. -Vzorkovací výsledek se . stane viditelný pouhým okem v .průběhu několika minut bez další .akce prováděné uživatelem. Příklady takových zařízení jsou popsány v patentových spisech EP-A-291194 a ΞΡ-Α-383619.' Sběr vzorku se výhodně provádí prostřednictvím savého prvku, který tvoří část zařízení a který může snadno odebrat'vzorek tekutiny,- například z proudu moči. Případně může tento savý prvek vyčnívat z pouzdra zařízení, aby byla usnadněna aplikace vzorku.

Dalším provedením elektronické' zařízení pro předkládaného .vynálezu je monitorování stavu plodnosti

	.. lidského ovulačního cyklu a pro zajištění uživateli tohoto
L·'.	zařízení indikace o stavu plodnosti, přičemž toto zařízení
« -	zahrnuje:
5 τ	a) čtecí prostředky pro čtení testovacího zařízení dvou analyzátů, jak je popsáno· v tomto popisu; b) ' prostředky zpracování .informace pro stanovení, z uvedeného čtení testovacího zařízení, hodnot koncentrací uvedených alespoň dvou analyzátů ve vzorku tělní tekutiny;
10	c) prostředky zpracování' informace a paměťové 'prostředky pro odvození, ze stanovených hodnot koncentrací a z. dříve stanovených hodnot ' koncentrací, indikace aktuálního
	stavu plodnosti lidského subjektu, který je testován; a.
. 15	d) zobrazovací prostředky pro sděleni aktuálního stavu plodnosti uživateli tohoto elektronického.: zařízení.
20 ;	Výhodně zařízení dále zahrnuje přijímací prostředky pro přijetí testovacího zařízení, přičemž čtecí prostředky jsou umístěny 'uvnitř těchto přijímacích prostředků. Čtení je • nejlépe dosahováno prostřednictvím optického .přenosu skrz testovací zařízení, . které, je právě přijaté v přijímacích
25	prostředcích. Výhodně zobrazovací' prostředky zahrnují jeden nebo více světelných zdrojů,- které zajišťují barevný signál pro uživatele, přičemž změna stavu plodnosti je indikována změnou barvy. Další provedení předkládaného vynálezu, která budou
30	zřejmá z-následujícího podrobného- popisu, zahrnují testovací zařízení 'pro použití- -.jako součást . kombinace '·»·, -n čtecího/testovacího zařízení, způsoby výroby těchto testovacích zařízení, a způsoby použití těchto testovacích zařízení a čtecích zařízení.

Pouze prostřednictvím neomezujícího příkladu budou v následujícím popisu testovací zařízení a čtecí zařízení podle předkládaného vynálezu podrobněji popsána s odkazy na připojené výkresy.

Přehled obrázků na výkresech

Obr.l znázorňuje ,obecný pohled na vrstvu porézního

-i 'materiálu, například papír, v průběhu operace ukládaní reakčního činidla na tuto vrstvu a operace rozdělování této vrstvy na testovací . pásky,Obr.2 znázorňuje rozložený pohled, na testovací

I · .

zařízení podle předkládaného vynálezu,' které . obsahuje testovací pásek vyrobený tak, jak je znázorněno na obr. 1;

Obr.3· znázorňuje ve zařízení podle uvnitř : čtecí předkládaného prostřednictvím testovací pásek,· pozměněné měřítko komponentů;

schematickém řezu testovací obr. 2, které je umístěno hlavy' monitoru . -.podle . vynálezu, pracující světelného . . přenosu skrz přičemž na ose y je pro .znázornění uspořádání

Obr. 4a, obr. 4b a obr, 4c znázorňují v částečně rozložené formě hlavní- znaky. celého monitoru podle předkládaného vynálezu, jmenovitě:

Obr.4a . znázorňuje víko a horní polovinu pouzdra;·

Obr.4b znázorňuje desku s elektronickými obvody, obsahující čtecí hlavu;

Obr.4c znázorňuje spodní polovinu pouzdra a přidružený zásobník na baterie;

Obr.5 znázorňuje ve. .zvětšeném měřítku, čtecí hlavu < patrnou na obr. 4b;

Obr. 6 znázorňuje-pohled na testovací zařízení přímo směrem dolů do přijímací štěrbiny čtecí hlavy, která je' znázorněna na obr. 5;

Obr. 7 znázorňuje pohled v příčném řezu na jeden konec testovacího zařízení, který je konstruovaný' , prc vložení do přijímací . štěrbiny čtecí hlavy;

Obr. 8 znázorňuje, -v.e -Schematické funkce, které . mohou ' být elektronickém .monitoru pro předkládaného vynálezu, jak lidský ovulační cyklus;

formě, základní vyžadovány .v použití podle je aplikován na

Obr.9a znázorňuje testovací analyzované prvky;

pásek pro dva

Obr.9b znázorňuje v podélném řezu testovací zařízení - obsahující - testovací... ,pásek . znázorněný na obr. 9;

Obr.9a a obr. 9b jsou popsány v Příkladu 5 níže.

i

Příklady provedení vynálezu .Na obr. 1 je znázorněna vrstva 100 porézního ^! materiálu, .například nitrocelulózy, která je určena k tomu,' aby byla rozdělena na množství shodných testovacích pásků 101

_. .. ..· prostřednictvím řezání podél - cent-rální osy. A-A a příčných os B-B. ' ·!>

Paralelní líriky (102' - 107) testovacích reakčních .

činidel jsou uloženy na' vrstvu)100 před rozdělením. Pouze pro účely příkladu se . předpokládá, že ~ reákčnííríi'' činidly 'jsou první^ nehybná' protilátka, v linkách 102 a. 107,. a druhá odlišná . nehybná protilátka.v linkách 103 a'106. Ukládání, reakčních. činidel' může , být prováděno prostřednictvím pera 108 nebo

A· ni podobně, pracujícím. ’na počítačem řízeném x-y .vynášecím .mechanismu’ .(není znázorněn) a- plněným vhodným roztokem reakčního činidla přes dávkovači'pružnou trubičku109. Pokud ) je - materiálem vrstvy' :,100 nitrocélulóza, mohou ; být reakční \ činidla, jako jsou protilátky a antigeny, znehybněna prostřednictvím' jednoduchého přímého nanesení' na tuto nitřocelulózu, následovaným zablokováním materiálu vrstvy, například prostřednictvím albuminu .nebo.polyvínyialkoholu. Po uložení a' zablokování reakčních činidel, mohou být naneseny dvě linky .104 ·a 105 mobilního značeného reakčního činidla, jako 'je' antigen......^;(-například- E3G).._.nebo .,, jiná _ protilátka (například .anti LH) značená například částicovou· -přímou značkou, . jako je barvený .latex. Toto- uložení .může- být provedeno, , například, prostřednictvím'*dalšího'· pera -/není . znázorněno). Alternativně může být značené Činidlo (značená činidla) .drženo v. .samostatné'porézní destičce nebo podobně, spíše než, aby bylo naneseno přímo na- materiál testovacího pásku.

J.

Za účelem dosažení přesného uložení linek obsahujících reakční činidla je každý podélný okraj 110, 111 vrstvy 100 děrován množstvím malých děr 112, z nichž každá je situována uvnitř šířky označeného pásku 113. Díry 112 jsou vyrobeny ve vrstvě 100 před uložením jakéhokoliv reakčního činidla. Neupravená vrstva je umístěna na rámu {není znázorněn) nebo podobném pracovním povrchu prostřednictvím tyče 114 přitlačené směrem dolů na každý příčný okraj vrstvy. Pouze jedna z těchto tyčí je (částečně) znázorněna. Každá.tyč má množství směrem dolů vystupujících čepů 115, z nichž každý zapadá, přesně- do jedné z děr 112. Vedení ' dráhy pera 108 ukládajícího reakční činidlo je vyrovnáno přesně s umístěním tyčí držících vrstvu a tudíž je ukládání reakčního činidla prováděno v předem stanovené přesné lince vzhledem k děrování ve vrstvě.

Po. . provedení všech nezbytných · uložení reakčních činidel adalších úprav je vrstva rozdělena prostřednictvím řezacích prostředků (nejsou znázorněny) na jednotlivé shodné pásky 101. :Každý- jednotlivý pásek tedy obsahuje jednu polohovací díru 112 se dvěma linkami (například 102 a 103) nebo reakčnímí zónami obsahujícími reakční činidla, které jsou umístěné vzhledem k díře 112 v přesných předem stanovených polohách a procházejí přes celou šířku každého pásku. V místě vzdáleném od díry 112 je oblast (například 1Q4) pásku, která nese .mobilní značené reakční činidlo. Přesné umístění značeného reakčního činidla vzhledem k díře 112 není nezbytně tak kritické, jako je kritické umístění reakčních zón.

. Jak je znázorněno na obr. 2, zahrnuje testovací zařízení podle předkládaného vynálezu plastové pouzdro, které

I j

I í

!

má horní a spodní polovinu 200 a 201, které jsou upravené tak,'aby obsahovaly testovací pásek 101 a také savý přijímací prvek 202 vzorku, který může vyčnívat ven' z jednoho konce 203 sestaveného pouzdra. V sestaveném zařízení potom tento savý přijímací prvek 202. přesahuje konec 204 testovacího pásku v blízkosti uloženého značeného reakčního činidla. Horní polovina 200 pouzdra' obsahuje okénko 205 nebo otvor, skrz které mohou být sledovány obě detekční zóny 102 a 103 z vnějšku pouzdra. Horní polovina pouzdra obsahuje na svém vnějším· povrchu 206 kruhovou prohlubeň .207 na centrální podélné ose pouzdra v malé vzdálenosti za sledovacím okénkem vzhledem ke konci 203 pouzdra, který obsahuje savý přijímací prvek vzorku. Na vnitřku horní' poloviny pouzdra je směrem dolů vyčnívající čep 208' nebo- kolík, který je umístěn přímo . pod prohlubní 207. Průměr tohoto, směrem dolů vyčnívajícího čepu 208 nebo kolíku' odpovídá průměru - díry '112 v testovacím pásku 101, takže tento pásek může být positivně umístěn uvnitř sestaveného zařízení na tomto čepu.

Spodní polovina 201 pouzdra rovněž obsahuje světlo přenášející okénko 209 nebo otvor, které, v sestaveném zařízení, leží přímo proti sledovacímu okénku 205 v horní polovině pouzdra. Spodní polovina pouzdra rovněž obsahuje prohlubeň 210, která může přijímat spodní konec čepu 208 nebo kolíku, když jsou dvě poloviny pouzdra-sestaveny dohromady, aby vytvořily obal.

V sestaveném zařízení operace uzavření pásku a savého 'prvku mezi horní a spodní polovinu pouzdra způsobí, že přesahující části 204 a 211., pásku a savého prvku jsou sevřeny dohromady, aby vytvořily takové spojení, které dobře povede vlhkost.

Obecně se předpokládá, že materiál pouzdra bude neprůhledný, například bílý nebo obarvený plastový materiál, ale pouzdro může být také průhledné nebo téměř průhledné, pokud je to žádoucí..

Na obr. 3 je patrné testovací zařízení 300 umístěné uvnitř štěrbiny 301 v monitoru 302. Tato oblast testovacího zařízení obsahuje dvě protilehlá okénka 205 a 209.

Pouzdro monitoru ; je opatřeno, štěrbinou pro přijetí 23 části testovacího zařízení, která obsahuje okénko pro sledování výsledku. Na opačných stranách štěrbiny je světelný zdroj 303 a čtecí hlava 304.

Štěrbina obsahuje výstupek nebo výčnělek 305, který · může zapadat do . prohlubně 207 na vnějším čelu pouzdra ]_5 testovacího zařízení. Takto je tedy dosaženo přesné pozitivní umístění .pouzdra uvnitř štěrbiny. Protože prohlubeň je v pevné poloze vzhledem k .vnitřnímu čepu 208 nebo kolíku uvnitř testovacího zařízení a tudíž vzhledem k polohovací, díře 112 v testovacím pásku 101,. jsou dvě detekční 'zóny. 102 a 103 na

2o pásku umístěny v.přesné poloze vzhledem ke čtecí hlavě. Díra v testovacím pásku tedy. působí jako pozitivní reference v průběhu výroby testovacího zařízení .'a zajišťuje, že po použití tohoto'zařízení a prezentaci monitoru budou detekční zóny na pásku pokaždé ve stejné poloze vzhledem ke čtecí hlavě. V důsledku toho tedy v. tomto případě není nutné, aby čtecí hlava obsahovala snímací prostředky pro lokalizaci příslušných ' detekčních .zón u každého prezentovaného testovacího zařízení.

Osvětlovací zařízení nebo světelný zdroj 303 zahrnuje množství LED diod 306 pro vytváření světla a svítí na testovací pásek'· přes' rozptylovač 307 a sledovací okénko 209 ve spodní ' polovině pouzdra testovacího· zařízení. Světlo prochází skrz tenký nitrocelulózový testovací pásek 101 a opouští testovací ·zařízení skrz okénko 205 pro sledování výsledku v hodní polovině pouzdra. Bezprostředně vně okénka 205 je druhý- rozptylovač 308-., Po průchodu skrz tento druhý rozptylovač 308 dopadá , světlo^; na desku 309, která má množství otvorů 310, 311, 312, 313- a-; 314. Celkově je zde tedy pět otvorů, z nichž dva·. (311/. 313) jsou přiléhající k detekčním zónám a ostatní (310, 312 , a. 314) leží v polohách po každé straně těchto otvorů.u detekčních zón. Otvory mají štěrbinový ' ' ' ' ^J ' 'i.·*, tvar odpovídající detekčním linkám na pásku. Šířka každého ze ' - co »» » t .

dvou otvorů ' 311 a'· 313 odpovídajících detekčním zónám j,edvojnásobnou šířkou každého ze tří ostatních otvorů, které působí jako ovládací prvky.

Světlo procházející těmito otvory pokračuje dále odpovídající štěrbinou 315, 316, 317, 318 a 319 v přepážkové desce .320. Na úplném konci každé· štěrbiny je snímač 321 ' ·^Γ·4.

světla. Tyto snímače 321 mají stejnou Velikost a pracovní *1’ i ! ¹ ‘ - * í · * , .i __L , specifikaci. Na předním čelu 322 přepážkové desky 320 má 'ft ‘ j,^wi -^lk ‘ každá štěrbina stejnou velikost* jako odpovídající otvor. Na

C ^v' i- --1., zadním čelu přepážkové desky,'přiléhajícím ke ·«„' (· J ‘ .

má každá štěrbina 'stejnou velikost jako čelo snímačům-světla snímače⁴'světla, který k ní přiléhá. Podle toho tedy mají dvě štěrbiny ¹ (-316,

F* ·

318), sdružené s otvory u detekčních zón, paralelní'·'.strany. Tři štěrbiny (315, 317 a 319), sdružené s řídícími otvory, zvětšují’ svojí-velikost, s; tím, jak se blíží směrem ke^snímači světla.

Λ,·,

Štěrbina v monitoru může rovněž obsahovat ''upínací nebo přítlačné prostředky,, jako je jedna nebo více pružně

N> .

předpjatých desek nebo čepů (nejsou znázorněny), pro další zlepšení pozitivního umístění testovacího zařízení uvnitř štěrbiny.

V optimálním případě je stejný optický signál odvozen

C z každého .otvoru nezávisle ha přesném umístění linky proti otvorům. Otvory mohou mít různou velikost pro dosažení tohoto cíle. Rozměry referenční zóny by měly být vybrány tak, aby odpovídaly tak přesně jak jen je možné aktuální ploše 'detekční· zóny na pásku.

¹⁰ '

Pro. snížení pravděpodobnosti přeslechů mezi otvory by testovací-pásek·'měl být· držen .tak blízko otvorů jak jen je možné, když je testovací' zařízení umístěno ve štěrbině monitoru. . ' 1 '

Jak bylo popsáno, výše, je ve čtecím zařízení pět optických měřících kanálů. 'Navíc :zde může být šestý elektronický referenční .. kanál, který zajišťuje kalibraci

..elektronických zisků v obvodech snímačů.

Typický , testovací ' pásek může podél svoji .délky θ vykazovat 'gradient koncentrace detekovatelné značky, proti kterému musí.být detekovatelná'značka' měřena v'reakční.zóně. Abý tento gradient' byl vzat do úvahy, jsou tato' měření v optimálním případě prováděna na každé straně reakční zóny na testovacím pásku. Signál z reakční zóny -může být vyjádřen 5 ' jako poměr celkového signálu zaznamenaného ze dvou sousedních referenčních- oblastí na pásku.

Pět měřících kanálů je rozděleno do dvou reakčních zón a tří referenčních zón.. Jedna referenční zóna, umístěná mezi dvěma' reakčními zónami, zajišťuje . referenční optické měřeni pro obě měření reakčních, zón.

Odrazový měřící systém musí být celý namontován na jedné straně testovacího pásku. 'Pro dosažení stejné úrovně kompaktnosti čtecího zařízení s pěti kanály by bylo vyžadováno použití (relativně) drahých součástek vyrobených na zakázku. Přenosová konstrukce může být vyrobena zcela z n·· C 'i \ < .

komerčně dosažitelných, vysokoobjemových optoelektronických , , i’ 1* * součástek, což umožňuje výrobu monitoru, který je kompaktní a relativně 'levný.

Pět snímačů 321 je . namontováno na zadním čele přepážkové desky. Každý snímač sleduje testovací pásek skrz otvor v ' přepážkové desce. Přepážková deska brání světlu viděnému.jedním otvorem, aby dopadala na sousední snímače, a rovněž zajišťuje určitou tolerancí -uložení linek. Poloha testovací zóny uvnitř pole pohledu snímače se může měnit od jedné hrany otvoru k druhé ve .směru, osy x. Jakákoliv změna signálu, která takto vznikne, je. funkcí úhlového uložení vzhledem ke středu měřícího snímače. Hloubka přepážkové desky může být vybrána za účelem ří zení ^možného, úhlové ho,,., uložení testovací zóny vzhledem ke snímači a za -účelem udržení přesnosti čtení.

Výčnělek 305 je udržován v přesné poloze vzhledem k otvorům. Referenční čep je umístěn do· prohlubně 2,07., v, pouzdru

Λ , A . testovacího zařízení. Tato ' prohlubeň je , rovněž·.»,přesně umístěna vzhledem k vnitřnímu čepu 208, vytvořenému· ·,na • 't ϋ ?· - ^K. ' testovacím, zařízení, na kterém, je testovací pásek uložen prostřednictvím své vlastní polohovací díry vyražené,,skrz •A ··,.«* V - 4 ·· ’ * .i ^,Λ ' pásek. Reakční zóny jsou . přesně, uloženy vzhledem k-itéto ·· -: .,·>·. 4 - - * ' polohovací díře. Tímto způsobem, v mezích ‘ výrobních n' eí * -i / · tolerancí, -jsou reakční zóny drženy v přesných^'polohách vzhledem k otvorům, skrz které snímače sledují testovací pásek.

Osvětlovací zařízení může sestávat z řad LED diod zapuštěných nebo umístěných za· rozptylovým médiem, které zajišťuje jednotné a rozptýlené osvětlení testovacího pásku, pokrývající referenční a signálové zóny.

Začlenění rozptylovače mezi otvory a testovací pásek je výhodné.pro kalibrační účely. Za účelem kalibrace každého z optických ' kanálů za. ‘nepřítomnosti testovacího 'pásku je' vysoce žádoucí, aby každý snímač, snímal.světlo z určitých oblastí osvětlovacího· zařízení, jako' je tomu v případě, kdy je.'..testovací, zařízení přítomno. Rozptylovat může být .vybrán tak, že' je dominantním rozptylovačem v optické cestě, takže vložení testovacího pásku nepřispívá podstatně ke změnám v rozložení osvětlení, které je .sledováno snímači. Navíc může rozptylovací element .umožňovat, aby ' Optická . sestava obsahovala otírací .čistý povrch, který je žádoucí při· dlouhodobém opakovaném používání optické sestavy. Modulací intenzity .osvětlovacího zařízení' mohou být kalibrovány optické kanály bez pomoci .pohyblivých částí, neviditelně pro uživatele před vložením testovacího zařízení!

Testovací pásek, .může sestávat z optické rozptylové vrstvy' ž^-nitřóceTůró-žy—hěbo^-·podobně! výhodně““úmí-šťěne·mezi^-' dvě. vrstvy opticky čirého filmu, například z polyesteru, jako je Mylar'. Tento čirý film chrání nitrocelulózu, uvnitř které probíhají- vzorkovací reakce. Provádění odrazových měření skrz tenké průhledné filmy je obzvláště obtížné, protože vznikají problémy se. zrcadlovými odrazy. Přenosová měření umožňují, aby optika byla konstruována kolmo vzhledem k měřícímu povrchu, a minimalizují nepříznivé účinky způsobené odrazem.

Předkládaný vynález je zejména použitelný pro čtení testovacích pásků vyrobených ' z nitrocelulózy a podobných rozptylových membrán, které výhodně nemají tloušťku větší než přibližně 1 mm.

Jak je znázorněno na obr. 4a, zahrnuje monitor lisované pouzdro, například z plastovéhomateriálu, které má obecně oválný nebo zakulacený tvar. Toto pouzdro v principu sestává z'horní^!poloviny 400 a spodní poloviny, z nichž pouze horní polovina je vidět na· obr. 4a. Na pravé straně 'pouzdra

400 je vybrání 401, které má dozadu skloněné zadní čelo 402. Toto zadní 'čelo 402 obsahuje otvor 403 pro. tlačítko (není znázorněno) , okénko 404 pro odhalení' zobrazovacího panelu .(není znázorněn) a dvě okénka 405 a -406 pro odhalení barevných světélek nebo jiných indikátorů (opět nejsou znázorněny) pro předání informace uživateli. Od levého, konce

401 zasahuje dlouhá štěrbina 407 pro zajištění přístupu pro čtecí hlavu (není· znázorněna). Vybrání 401 a '.štěrbina 407 jsou uzavíratelné prostřednictvím víčka' 408, které je uchyceno k zadní straně pouzdra prostřednictvím dvou závěsných bodů 409 a 410. Horní povrch 411 pouzdra 400' je mírně vybrán, aby přijal víčko při uzavření, takže vnějšek uzavřeného zařízení prezentuje uživateli relativně hladký kontinuální povrch. Víčko může být otevřeno, aby se odhalily uživateli přístupné znaky monitoru. Víčko je uzavíratelné prostřednictvím pružinové svorky, (není- znázorněna na obr. 4a), která vystupuje směrem nahoru skrz otvor 412 v přední hraně 413 pouzdra. Přední hrana 413. pouzdra obsahuje další otvor 414, skrz který může být odhaleno další indikátorové světlo (není znázorněno)..

Jak je - znázorněno na obr. 4b, má obvodová deska 430 zakulacený pravoúhlý tvar, který odpovídá vnitřnímu tvaru pouzdra, a nese všechny operační znaky monitoru. Tyto 2naky zahrnují tlačítko 431, které uživatel může stlačit pro iniciaci monitorování ovulačního cyklu. Pokud je obvodová deska namontována uvnitř pouzdra a zakryta jeho horní polovinou,· je. tlačítko přístupné skrzotvor 403. Napravo od .tlačítka je vizuální zobrazovací panel 432, .jako je zobrazovací j ednotka-s tekutými krystaly,. . který uživatel může vidět skrz okénko 404. Napravo od zobrazovacího panelu jsou dva světlovody 433 a 434,. které přenášejí, například, barevné světlo (jako je Červené á zelené) ze dvou LED diod nebo podobných světelných zdrojů (nejsou -.znázorněny). Vhodné čipy a .paměťové obvody - 435 · a 436 .jsou namontovány na obvodové- desce. Další světlovod 437, namontovaný na přední hraně 438 obvodové desky, může přenášet světlo z další LED diody (není znázorněna) k otvoru 414. Toto světlo může indikovat, například, uživateli, žé je vyžadován test. Toto' světlo může mít jinou barvu než mají světla sdružená se zobrazovacím panelem, například žlutou. Bateriová .přípojka 439 visí ze spodní části obvodové desky pro připojení' k bateriím umístěným ve spodní části pouzdra (viz obr. 4c) . Na přední straně obvodové desky je rovněž spínač 440 ovladatelný pružinovou švěrou' víčka 408'.

Ná levé straně' obvodové desky' je namontována čtecí hlava 441, která zahrnuje centrální přijímací štěrbinu 442 pro přijetí jednoho konce testovacího zařízení (není znázorněno). Na přední straně přijímací štěrbiny 442 je

I -^9, ΐ:

ί τΐ i

osvětlovací zařízení 443 a bezprostředně naproti v zadní straně štěrbiny je optický snímací systém 444, takže světlo může procházet skrz štěrbinu (a skrz testovací zařízení, když je vloženo) a může být vyhodnocováno snímačem.

Jak je znázorněno na obr. 4c, má spodní polovina 460 pouzdra celkový oválný tvar, který odpovídá horní polovině 400 a zajišťuje umístění obvodové, desky 430. Přední hrana 461 pouzdra 460 zahrnuje pružinovou svorku 462 pro uchycení víčka 480 při uzavření.' Svorka 462 je uvolňována tlakem na přední čelo 463, který je vyvíjen například špičkou prstu. Dno 464 pouzdra obsahuje komoru pro baterie (níže)., a malý přístupový otvor 465 je vytvořen směrem k pravému' konci pouzdra, skrz .který může procházet bateriová přípojka 439 a může být spojena s bateriemi 466. Baterie jsou uchyceny prostřednictvím víčka 467, které ' může 'být připevněno ke spodní straně 468 pouzdra.

Jednotlivé součásti pouzdra mohou být lisovány z nárazuvzdorných nebo podobných plastových materiálů, jako je polystyrén a polykarbonát, a mohou být drženy pohromadě prostřednictvím zaklapávacíčh svěř nebo závitových šroubů nebo prostřednictvím jiného vhodného mechanismu.

Při pohledu,na zvětšenou ilustraci čtecí 'hlavy, která je znázorněna na obr. 5, je patrné, že štěrbina 442 pro přijetí testovacího zařízení má tvar s paralelními stranami, ale její šířka je zvětšena- na jejím pravém konci 500 stupňovitě tak, aby se vytvořila dvě ramena nebo dva dorazy 501, 502, proti kterým může dosedat odpovídajícím způsobem zvětšená . část testovacího zařízení. Toto uspořádání může usnadnit účinné vložení testovacího zařízení do čtecí hlavy. Uvnitř užší pracovní částí 503 štěrbiny je na zadní stěně' 505

štěrbiny namontováno tlačítko 504, které stlačeno pro aktivaci čtecího mechanismu, testovacího zařízení způsobí odpovídající tlačítka.

musí být úplně Správné vložení stlačení tohoto

Na zadní stěně 505 štěrbiny je rovněž pevný polohovací čep 506, který musí zabírat s odpovídající dírou ve vloženém testovacím zařízení. Na zadní stěně 505 je také světlo přenášející panel 507, který zakrývá optické snímače. Tento panel '507' vystupuje směrem ven za rovinu zadní stěny 505- -štěrbiny...a, má_ šikmé hrany '508, 509, které mu poskytují charakteristický profil . ..Na opačných koncích přední stěny 510' 'štěrbiny jsou dva čepy (nejsou'patrné na obr. 5), které jsou předpjaté směrem ven do štěrbiny, například prostřednictvím, pružinových, mechanismů, které jsou obsaženy ve dvou krytech 511, 512.

Tyto stejné znaky jsou ilustrovány na obr. 6, který je pohledem přímo směrem do přijímací štěrbiny.. Jsou patrné dva předpjaté čepy 600, 601. Účelem těchto čepů je zajistit předpínací prostředky pro tlačení vloženého testovacího zařízení proti zadní stěně 505 štěrbiny. Pokud přijímatelná část testovacího zařízení má správně' tvarované díry nebo prohlubně pro přijetí pevných polohovacích čepů 506 a vyčnívajícího “pánělli '~5O7~, může-- být · toto..testovací zařízení přítl.ačeno___dostatečně blízko k zadní' stěně štěrbiny, aby stlačilo tlačítko 504 a iniciovalo proceduru' “optického snímání. ” * <

Obr. 7' v řezu znázorňuje část testovacího zařízení

700, které má .profil, který může 'spolupracovat se znaky patrnými na obr·. 6. Toto testovací zařízení může být vloženo do štěrbiny širší, centrální částí 701 dosedající proti dorazům 501, 502. Přední konec 702 testovacího zařízení má mírně zkosenou hranu 703 pro 'usnadnění.vkládání do štěrbiny za čep 600. Testovací zařízení zahrnuje duté pouzdro obsahující porézní testovací pásek 704 umístěný mezi dvě vrstvy 705, 706 transparentního materiálu,‘ Jak bylo popsáno dříve, je porézní testovací pásek 704 přesně umístěn uvnitř pouzdra testovacího zařízení prostřednictvím čepu 707, který prochází skrz. díru 708 v pásku. Na vnějšku pouzdra testovacího zařízení v bodě odpovídajícím středu polohovacího čepu 707 je kónická díra 709, která může přijímat pevný polohovadí:'čep'’506_ ve.'štěrbině čtecího zařízení. Každá strana pouzdra testovacího zařízení má otvor 710, 711, které, když je testovací 'zařízení ’ správně vloženo ' do, štěrbiny, budou přiléhat ke světelnému zdroji 443 respektive ke snímačům 444 světla. Profily těchto dvou otvorů jsou různé a zejména profil otvoru 711 na stejné ploše testovacího'zařízení .jako je kónická díra 709 je tvarován tak, aby odpovídal profilu vyčnívajícího panelu 507 zakrývajícího snímače světla. Tímto uspořádáním je zajištěno, že čtecí·hlava bude pracovat pouze tehdy,· když testovací - zařízení bude vloženo -ve správné orientaci pro zajištění, že tlačítko 504 je stlačeno.

Mělo, by být zcela zřejmé, že celkové uspořádání a obecný tvar monitoru může podléhat velmi širokému rozsahu změn a variací vzhledem k tomu, které bylo popsána výše, aniž d)y--tak— byl-- překročen— rozsah—předkládaného—vynálezu... Obecný. tvar a uspořádání čtecí hlavy je diktováno potřebou

- V spolupracovat účinně se vzorkovacím zařízením, ale tento tvar může být různý v,e velmi širokém rozsahu. Uspořádání á povaha, uživateli přístupných ovládacích prvků a prvků nebo znaků zobrazování informace může být podobně podrobeno širokému rozsahu různých změn a je diktováno rovněž do velké míry také estetickými požadavky a hledisky.

Detailní elektronické obvody monitorovacího zařízení, schopného přizpůsobení, zapamatování a zpracování údajů o koncentraci analyzátu, stejně tak jako vytvoření výhodných elektronických znaků a' prvků zařízení popsaného v tomto popisu- a pokud je to vhodné také předpovídání budoucích událostí, jako je stav plodnosti v ovulačním cyklu, na základě těchto údajů, mohou být velmi snadno realizovány osobami znalými' v elektronických oborech, jakmile budou tyto osoby seznámeny s faktory, které takové zařízení musí brát do úvahy, a s informací, kterou zařízení musí poskytovat uživateli.. Pouze prostřednictvím příkladu jsou základní funkce, které mohou být u těchto zařízení vyžadovány, vyznačeny na obr. 8 připojených výkresů a jsou stručně popsány níže. Jednotlivé prvky nebo znaky mohou být zcela běžné a tradiční a osoby znalé v elektronických oborech zcela jistě nahlédnou,, že pro dosažení cílů předkládaného vynálezu mohou být použity i' jiné kombinace a uspořádání těchto znaků a prvků. ' Například tak mohou' být namísto běžných mikroprocesorů na bázi čipové technologie použity tak zvané, pevně zapojené systémy a nervové sítě. .

Jak je znázorněno na obr. 8, zahrnuje kombinace v podstatě čtecí jednotku 800 pro odvození informace- z testovacího zařízení, jako je testovací pásek, přičemž tato testovací jednotka zahrnuje osvětlovací zařízení 801 a čtecí zařízení 802 (zde reprezentováno fotodiodou). Čtecí jednotka přivádí signál do převodní jednotky 803 pro převod optického signálu na formu použitelnou pro mikroprocesor 804. Jako případný dodatečný znak je možné upravit kalibrační systém

805 pro převod; signálu,,* odvozeného , ze čtecí jednotky, na ' .*» * « '*· ·’ údaje . odpovídající, například, absolutním hodnotám koncentrace. ,

Pro regulací měření v průběhu cyklu může být vyžadován časovač, jako jsou hodiny 806 . Mikroprocesor 804 zpracovává, ukládá do paměti a interpretuje výsledky ve světle předchozích událostí, zejména zaznamenaných v přecházejících cyklech. Uživatelské rozhraní 807 bude obecně zahrnovat alespoň prostředky, jako je tlačítko, které uživatel může ovládat na začátku cyklu pro iniciací činnosti zařízení jako celku. Přívod 808 energie by měl obsahovat prostředky, jako je zálohovací paměťový kondenzátor 809, pro zabránění ztrátám zaznamenaných údajů, když bude potřebné vyměnit baterie.

Informace může být předávána uživateli prostřednictvím, například, zobrazovací jednotky z tekutých krystalů nebo LED diod. Pokud je to žádoucí, může být informace o stavu plodnosti předávána uživateli prostřednictvím jednoduché vizuální indikace, například kombinací barev znázorňující, například, zelenou pro neplodné období a červenou pro plodné období. Zejména pokud je zařízení určeno primárně jako pomůcka pro antikoncepci, mělo by být bezpečné proti selhání prostřednictvím- znázornění plodného signálu.. ,4 ;>ιχ , ;

Jak bylo popsáno výše odpovídají znaky-'^Λ803 a¹' 806 společně znaku 435 (obr. 4b), a znak 804 odpovídá¹ 'znaku.'436 )obř. 4b).

Přenosová spektrofotometrie je široce i používanou technikou pro kvalifikaci koncentrací barvených prvků v čirých tekutých roztocích. Komerčně dosažitelné spektrofometry obecně vyžadují značné úpravy pro provádění měření na difúzních (rozptylových) roztocích. Přenosová spektrofotometrie není obecně považována za vhodný způsob měření vysoce difúzních vzorků, takže obecně je používána pouze tam, kde nemůže být použito alternativního přístupu. Pro účely předkládaného vynálezu nabízí přenosové měření pozitivní výhody oproti mnohem obvyklejšímu odrazovému, přístupu používanému dříve na testovacích páscích.

⁰ · - - - · Některé běžné páskové testy používají odrazové měření pro zjištění koncentrace obarveného prvku na povrchu pásku (například monitory, glukózy). Chemie těchto' testů· probíhá ve velmi tenké, vrstvě na povrchu testovacího pásku. Naproti tomu' chemie výhodných páskových zařízení podle předkládaného vynálezu probíhá skrz celou tloušťku testovacího pasku.

. Vzhledem ke změnám v průtoku a-v uložení-reakčních. činidel se podle hloubky může lišit koncentrace detekovatelné značky zachycené v reakční zóně.

Zakřivení, povrchové materiály, povrchová úprava a účinky rozpouštědel .mohou měnit poměr zrcadlového a rozptylového odrazu. Pro' odrazová měření je ..to' rozptýleně' odražené světlo od povrchu pásku, .které nese signálovou informaci . (to·' ‘jest světl-o-.-, reagovalo... s._. detekovatelnou

---------...—značkou )..,.._z_atímco zrcadlově odražené světlo nebude obsahovat jakoukoliv informaci (protože toto světí^ů^šldžkou,--která- se pouze odrazila od povrchu bez reakce s detekovatelnou . značkou v dífuzním pásku). Bez využití relativně objemných a drahých systémů je obtížné zkonstruovat' odrazový měřící —“-který by minimalizoval zrcadlový odraz na míru

30- i—- . .. ., .

umožňující přenosové měření, zejména s použitím rozptýleného světla jako podle předkládaného vynálezu.

Odrazové systémy vyžadují použití testovacího povrchu, který musí být odstraněn z optické cesty pro účely 5 kalibrace. Tento referenční povrch se nesmí poškodit, pokud má tvořit část optické sestavy. Navíc je vyžadován mechanický pohyb pro- posunutí tohoto referenčního materiálu, když je třeba měřit testovací pásek. Tyto problémy jsou vyloučeny při použití předkládaného vynálezu.

Vedle specifických příkladů detekovatelných materiálů již uvedených výše,, mohou být podle předkládaného vynálezu použity i další materiály,. které blokují nebo odrážejí elektromagnetické záření, spíše . než aby toto záření ' absorbovaly,' například bílé částice, jako jsou latexové částice v jejich přirozeném nezabarveném .stavu. Alternativně může být značkou reagující složka..nebo katalyzátor, který se účastní při vytváření materiálu absorbujícího záření nebo blokujícího záření, například enzym, který- reaguje se substrátem, aby vytvořil detekovatelný materiál, jako je .

zbarvený materiál, v detekční zóně.

Příklady

Aspekty předkládaného vynálezu jsou ilustrovány v následujících Příkladech. tyto Příklady se týkají monitorování lidského ovulačního cyklu.

Příklad 1

Tento- příklad uvádí výhodný algoritmus na kterém může být založen způsob monitorování podle předkládaného vynálezu.

Krt dodaný uživatelce’ zahrnuje množství jednorázových testovacích zařízení moči pro dva. analyzáty, která jsou

ΒΊ i* i

schopná testovat E3G v moči a LH v moči ve formě čitelné prostřednictvím monitoru, který je uživatelce rovněž dodán. Tato jednorázová testovací zařízení a monitor jsou typu, který byl popsán výše. Monitor může přijímat každé použité testovací zařízení a může stanovit koncentraci každého analyzátů v moči. Tato informace .je uchována v monitoru a porovnána s podobným údajem získaným, v následujících dnech stejného cyklu. Monitor má menstruační tlačítko, které uživatelka musí stlačit na počátku cyklu, a zobrazovací panel nebo podobně pro ' předání informace o stavu cyklu a pro indikaci uživatelce, kdy by mělo být provedeno testování.

a) Struktura pravidel algoritmu '

Cíle jsou následující:

i) identifikovat polohu LH vlny -v jednotlivém cyklu;

ii) identifikovat, podstatné zvýšení koncentrace E3G v jednotlivém cyklu vzhledem ke koncentraci E3G ve dnu 6 tohoto cyklu;

iii) výhodně zabezpečit proceduru zabezpečení proti selhání v případě selhání identifikace podstatného zvýšení koncentrace E3G v očekávaném intervalu.

Počet testů, dosažitelný v každém standardním' měsíci je omezen na 8 a je použita testovací strategie, která bude maximalizovat šance dosažení bodů i) a ii).

b) Spouštěcí cykly

Za účelem vytvoření odpovídající počáteční databáze vyžaduje monitor v průběhu prvního cyklu použití šestnáct testů. To je nutné pro vytvoření základních dat pro individuální uživatelku. Uživatelka stlačí menstruační tlačítko na monitoru ráno po začátku její menstruace. Tento den je zaznamenán monitorem jako den 1. Testování začíná ve dnu 8 a pokračuje denně až do dne 23. Toto testování má za cíl maximalizovat šanci na sledování LH vlny.

Na začátku cyklu 2 a na začátku všech následujících cyklů je stlačeno menstruační tlačítko, jak .bylo uvedeno výše. Od cyklu 2 dále je pro každý cyklus použito pouze osm ⁰ testů. Všech osm testů musí být ze stejné dodávky a všechny musí být. dokončeny. Ve všech cyklech od cyklu 2 dále začíná testování ve dnu 6. Pro cykly 2 a 3 jsou provedeny testy dva až osm v po sobě jdoucích dnech, přičemž se začíná, v typickém í

dnu LH vlny mínus čtyři dny. Od cyklu 4 dále, označovaném jako první standardní cyklus, jsou testy dva až osm prováděny v řadě od typického dne LH vlny mínus pět dnů. 'Typický den LH vlny je definován jako průměrný den LH vlny pro až šest předcházejících měsíců.

c) Začátek plodné fáze . ... -^cV cyklu 1 monitor deklaruje, že žena je plodná ode dne 6 dále, protože ještě nebyla shromážděna informace o vlastnostech cyklu. V cyklech 2 a 3 může monitor použít typickou pólohu LH vlny z předcházejícího cyklu (cyklů) pro , stanovení začátku plodné fáze.' Protože je ale dosažitelné pouze omezené množství údajů o cyklu, bude monitor stále deklarovat, že žena je plodná v průběhu cyklů 2 a 3 ve dnu 6 nebo v typickém dnu LH vlny mínus 7 dnů, podle toho co nastane později.

V následujících standardních cyklech je začátek plodné fáze nastaven prostřednictvím detekce podstatné změny v signálu o E3G vzhledem ke dnu 6. Pokud poměr aktuálního denního signálu pro E3G (SJ ke signálu ve dnu 6 (S₆) dosáhne nastavené prahové hodnoty, jak bylo uvedeno výše, je žena označena jako plodná. Za účelem zabezpečení proti selhání deklaruje' monitor, že žena je plodná ve dnu typické LH viny mínus dva dny,, za nepřítomností dříve detekované podstatné změny v-signálu E3G.

______d. _r. Konec plodné fáze . Při. normální činnosti je konec plodné fáze definován jako čtvrté .ráno po 'Zjištění LH vlny.. Za nepřítomnosti detekovatelné LH vlny v průběhu testovací sekvence systém .deklaruje .konec plodné fáze šest dnů po posledním testu. Zdůvodnění tohoto výpočtu je následující.·Testovací režim je . konstruován tak, aby pokryl typickou polohu LH vlny plus jeden den.· Publikované studie údajů WHO ukazují, že proměnlivost'polohy LH vlny u žen je 1,8 dne. Přidání pěti dnů k deklarované.plodné periodě po již dokončeném testování vlna nemá není umožňuje dvěma směrodatným odchylkám předpokládat, ze LH nastane uvnitř označené plodné periody.

Při nenormální činnosti (cyklus 1), kdy monitor informací o typické poloze LH vlny,' pokud tentcparametr2 5------zjištěn··,—je—konec-plodn.é_fáze__deklarován na den 28 cyklu.

Příklad 2 ... _v

Tento příklad používá reprezentativní profily E3G u dvou žen - o jedné je známo, že má nízké úrovně E3G v moči, a o druhé je známo, že má tyto úrovně relativně vysoké. 'V prvních dvou sloupcích každé tabulky je 30 dnů každého cyklu označeno ve smyslu jejich plodnosti. První fáze je označena jako neplodná a sestává z té části folikulární fáze, v průběhu které by nechráněný pohlavní styk neměl mít za následek početí, potom následuje přechodová fáze, v průběhu které nastávají změny, jež vedou na stav plodnosti, a v průběhu které je vyžadován pozitivní signál pro indikaci začátku plodné, fáze. Tato plodná fáze je ta fáze před a po ovulaci, v průběhu které, má nechráněný pohlavní styk s největší pravděpodobností za následek početl. Její trvání, před ovulací . jé.diktováno zcela účinnou dobou života spermií, která -je zase ovlivněna· fakrory řízenými- ženskými hormony, . zejména v. hlenu. Post fertilní, luteální fáze je tou dobou, po-které již vajíčko opustilo dělohu a početí v aktuálním cyklu jíž není možné.

Hodnoty. E3G jsou uvedeny ve třetím sloupci, tyto hodnoty byly odvozeny prostřednictvím imunotestu .na vzorcích ' ranní moči, odebíraných každý den. Tento imunotest byl běžný konkurenční test enzymu a značené protilátky. Tyto hodnoty jsou uvedeny v ng/ml.

. . ' Vlastní ovulace se předpokládá ve 24 hodinách následujících po LH vlně. Tyto hodnoty LH byly stanoveny .prostřednictvím běžného sendvičového imunotestu· s enzymem a značkou na stejných vzorcích, ale tyto hodnoty nejsou nb^aže⁷¹·⁷ v t ab¹¹1ⁿ° cr^to^^ Hfii tvrn. wvci aHv-am ίο Haium 25 ’ ““ ^J“

Ovulace. ™ ¹ r—' ^{1 1} ~~~~

Pro každý cyklus byl použit algoritmus podle Příkladu' ^T

1, přičemž spouštěcí okamžik pro E3G je:

[i]/[den 6] > 2

Žena A

Cyklus A 1: Počáteční cyklus

Den « Testování Fáze Hodnota Červený .Vlastní

E3G stav ovulace

L neplodná plodná postfertilní

1.9 .3,1 '5,4

2,1

5,3

10,5

7.7

5.2

8.3

6.8

4.3

4.9

5.3

3.3 * 8r 8c + 8c 8c

8c tt 8c

8c 8c 8r

8c 8c 8c * + *

8c * 8c

8c 8r 8r * + *

8c + 8c

8r 8c 8c

8r +

8c 8r 8c

8c 8c 8c

8c 8c 8c

LHS + 1

	22 23	t *	M ff	. 4,9 6,2
	24		n
5	25		rv
	26		π
	27		TI
	28		Tf
10	29		Tl
	30		Tf
		'' LH vína	bylá “ ve	dnu 17,	proto opakované testování
	• začne	ve dnu 13	v příštím	cyklu.		»
15		Cyklus A	2
	Den	Testování	Fáze	Hodnota ,Červený	Vlastní
			-	' E3G	stav	ovulace
20 ...	1 - . 2.	•	neplodná tf1
	3	1.	' TI
	4		TI
	5		ff
25	6	*	ri	3,5
	7 ' . θ *' 9 .		y : i· '·		*·· >i 'ks iK i»
		ff f'		db dr dr	>. ' · r

4r Ά·

11		II			Jr * Je
12		rf			Je Jr Jr
13	+	π	8,9		Jr Jr Jr
14	J-	plodná	14,6		Jr Jr Jr
15	Jr	rr	12, 6		Jr Jr J·
'16 .	Je	it	8,8		Jr Je Je
17	*	rt	15,8 .		Jr Je Je
18	Je	rr	6,9		* Je Jr
19	je	ti	6,5		Jr Je Jr
20		postfertílní
21		11
22		ri
23		rt
24		rr
25		lf
26		lf
27		11
28		(t
29		rr
30		ii
	Průměr	vlny LH (LHS	) z cyklů	Al	a A2
proto	opakované testování	začne ve	dnu	12
cyklu.		-

e den 16,5, následuj ícím

LHS + 1 i

(

7,5

Cyklus A 3
Den Testování Fáze	Hodnota	Červený.	Vlastní
	E3G	stav	ovulace

neplodná

-•4r.

Jb

4.

.

¹⁷

21,

1,6 •Ar + Ar • Ar

Ar Ar Ar plodná poštfertilní

6,2 .23, 6

21/3

8, 3

4,5.

3,7

3,4 *· Ar Ar nr Ar * if -k

Ae Ae Ar

LHS + 1

Průměr vlny LH. z cyklů Ai až A3: den ”15,7. Den započetí opakovaného testování pro- první standardní cyklus: den 10. Den zabezpečení' proti selhání u prvního standardního cyklu: den 13.

Cyklus A 4

První standardní cyklus

Den ' Testování Fáze Hodnota Červený Vlastní

E3G stav ovulace ’

neplodná

3,1

It

10	*	II	6,1
11	Se	plodná	16,7	***
12	*	IT	10,8	Se + Sr
13	*	lf	22,8
14	*	Π	21,3			LHS + 1
15	*	TI	9,4
16		Ti'	12,2	Se * Sr
17		postfertilní
18		19
19		11
20-		ff
21		* II
22		tl-
23		il
24		1t
25		lf
26		Tf
:27		II
28		ti
29		II
30		II		-
	Dny	upozorňující na	vlastní	ovulací:	3.	Průměr vlny
LH z	cyklů	Al až . A4 : den	15,3.. Počáteční	den	opakovaného

”78 testování pro příští cyklus: ; den 10. selhání pro následující cyklus: den 13.

Den zabezpečení proti

Cyklus A 5

Druhý standardní cyklus

Den	Testování	Fáze	Hodnota E3G	Červený stav	Vlastní ovulace
1		neplodná
2		n
3		* FI
4		’ Fl
5		Π
6	Jr	FI	4.,8
7		w%·’ Γ.;.	> 'í‘ '
8			4 1 ' Ρ· 1 ϊ Ί * 1
		c *s. i z	íí .dfeu ~’·	‘ 4
9
		1 . ·,	- f,: .
10	k	FI	8,5
11	*	IF	7,3 .
12	*	TF	6,3
13	k	fl	...... 7	Jf Jf Jr
14	k	plodná	' 11,8	Jf + Jr
..15	*	II	...19,3 .·	Jr + 4*^
		• 1 ' ‘ 4 :i
16	Jf	II	18,5	Jf Jf Jr
17		Fl		Jr Jf *	,ΙίΗ.Ε.. + ..1
18		TI		Jf Jf Jf

•postfertilrií ' 24 ,, . .

25’ .........

.......

'27^-7 γ ·· ------7 /28’ ’ ' ' ‘ ' ”'. ' · ··'· . . . 7.. .

i· ' T ; j '* ” ' > -_f < ¹ '·' · ’ >...

*'·*-, ' ¹ '·. ' ' · , ► «Λ V H ·

29- ·. 1......T “.

Dny upozorňující na vlastní .ovulaci: 4 (spuštěno prostřednictvím zabezpečení proti selhání)Průměr vlny LH z cyklů Al až A5: ' den 15,4”. Počáteční' den opakovaného testování pro příští ' cyklus: den 10. Den zabezpečení proti selhání pro následující cyklus: den 13.

Žena B

- _Cvklu5 Bl: Počátečnleyklus · ' - ... ~_£__ '. · Ur,7^r,t3. . Červený Vlastní

Den.....Testováni , —tuze ---------, _E3G stav· ovulace neplodná ***·' 0= dr dr d ί

¹⁵ • 20

28.

plodná postfertilní

25.1

10.1

16,8

28,2

24, 6

28.7

27.7

62,6

68,5

61.9

103, 4

85,4

45, 4

14.9

46, 6

49,3 dr dr dr dr dr dr dr d dr dr dr dr ' dr dr dr * dr dr dr dr dr dr dr dr dr dr dr dc db dr dr dr dr

LHS + 1

Vlna LH byla , ve dnu 19, proto v příštím cyklu započalo opakované testování ve dnu 15.

4.

Cyklus· B 2

Den Testování	Fáze	Hodnota	Červený	Vlastní
		E3G	stav	ovulace

neplodná

28,9

II

II •k k -k ii ·***

II ★ * * plodná rv • 62

94, 6

58, 4 * * 9r * * *

LHS + 1

II £· v

18	* »	42, 4 '
19	* H ’*	60,4
20	* II	56	* * *
21	* postfertilní	35
22	II
23	rr
24	II
25	II
26	II
27	lf
.28	A· „ U	- . '· ¥
29	IT '
3Ó	II
	' ‘ J, h , ’
	Průměr ·' vlny LH ' (LHS)	z cyklů	BI a B2
•0 proto	opakované -testování“započne ve	dnu 13
cyklu.	v ·

e den 17,5, následujícím ' Cyklus B 3

Den Testování Fáze

Hodnota Červený E3G stav

Vlastní ovulace neplodná ³

-W· - .1:

5 *···* ·' .'*»* Λ.

n*’· ··' ’ ··,·

VI

5.

’25' .9 ' 10

17,2 * * *

” 13	4c	. ... . 1,	23,9	, *.*'*
		plodná.. . . ..rr	63,8
-14- -			;ν-J-ν-·· ·-
is'.;·	, ί	- τ; - ~ .	-.22,-1 .	*·*>· ·
16'		’ΪΙ 1 3 !» 7	65,90	; 4r 4? *’.
17	4γ	II	41,2	,·<' LHS
' 18 .	*	Π	7,6 .	* * *
' 19		π	35,3	. * *
20		postfertilní'
21·'		τι	-
2,'22 '		ιτ		4 ·« ·

, * ’-μρ·. , ' _ ·«*-* / - r-^:·

Průměr vlny LH z cyklů B1 až.B3: den 17. Počáteční den opakovaného testování pro. první standardní cyklus: den 12. Den zabezpečení pro první standardní cyklus: den 15.

Cyklus B4

První standardní cyklus

Den Testování Fáze Hodnota Červený Vlastní

E3G stav ovulace ίο

1	neplodná
2		Π
3		II
4		fl
5		11	1
6	Jf	TI	12,9
7		11
8		II
9		»1
1Ό		II
11		TI
12	*	lf	' 38,3	Jp Jr Jr
13	Jr	plodná	70/6	Jr* J-
14	*	lf	74,6	* Jr Jr
15	* '	TI	70, 6	Jr Jr Jr
16	Jr	lf	49,7	Jr Jr Jr
17	Jr	ff	23,5	Jr Jr Jr

²¹ , 24 ' .26

15 * 29,8 *** postfertilní

Η

IV . . Η it

IV •ττ ,, ;.

π

Μ

II

Dny upozorňující na vlastní ovulaci: 4 . Průměr' vlny LH z .cyklů Bl až B4: den .16,5. Počáteční den opakovaného - testování pro příští cyklus: den 11. Den' Zabezpečení proti selhání pro následující cyklus: den .14.

Cyklus B 5

Druhý standardní cyklusDen Testování Fáze . Hodnota Červený Vlastní

E3G stav ' ovulace

I

1- , ¹ neplodná . 2

3

15.

ΤΙ

TT '· * ” - 7,2

TT

TT

TT fl

•fc	II	14,1 '
Ar '	II	17,4 '
A·	It	' 41,3	Ar Ar Ar
k !	II *	'57,5	Ar Ar Ar
*	. plodná	42	Ar Ar Ar
Ar	fl	.55,4	Ar A- Ar
	lf	60,1	Ar Af Af
	II		Ar A- Ar
	fl .		A A- Ar
	TT		A· Ar Ar

postfertilní lf

II

II lf

TT

ΙΪ

LHS + 1

'. 87

Dny upozorňující na vlastní ovulaci: 5. Vlna LH byla 5 zjištěna v poslední den testování. Průměr vlny LH z cyklů Bl až B5: den 16,6. Počáteční den opakovaného testování pro příští cyklus: den ‘11. Den zabezpečení proti selhání pro následující cyklus: , děn 14.

Příklad 3 '

1Tento příklad ilustruje velmi jednoduchý, ale velmi výhodný systém lidské antikoncepce, ' vyžadující na cyklus pouze omezený počet testů analyzátu E3G v moči.

Uživatelka /je- opatřena měsíční - dávkou 8 shodných jednorázových testovacích zařízení, z nichž každé zahrnuje ¹⁵ testovací pásek, na který může být nanesen vzorek moči, přičemž tento pásek obsahuje všechna potřebná reakční činidla pro umožnění vytvoření signálu indikujícího koncentraci E3G, například prostřednictvím · konkurenční reakce zahrnující značené specifické vazební reakční* činidlo, které, se bude 20 ,.. . :

vázat^:v detekční zóně na pásku v množství přímo nebo nepřímo .úměrném koncentraci E3G ve vzorku močí. Je rovněž dodáno optické elektronické čtecí zařízení, které' mění. signálovou . informaci· z použitého pásku na numerický údaj a zpracovává tento údaj, aby uživatelce poskytlo odpovídající informaci 25 týkající se stavu cyklu.

Počáteční test moči je proveden ve dnu 6 aktuálního cyklu (den 1 je dnem ve kterém jsou poprvé zjištěny měsíčky} pro vytvoření· základní reference pro koncentraci E3G v tomto cyklu.

Druhý test moči je proveden ve dnu 9 a každý den potom dokud buď nejsou využity všechny testy nebo dokud není poskytnuta indikace zvýšené koncentrace E3G indikující bezprostřední ovulaci. Dostatečně zvýšená koncentrace E3g je deklarována, když poměr referenční koncentrace [r] k testové koncentraci [i] poprvé splní kritérium:

[i] / [r] > 2 v případě přímé úměrnosti mezi testovým signálem a koncentrací E3g, nebo kritérium:

.10 v případě nepřímé úměrnosti. ·* - · -

Nechráněný pohlavní styk je vyloučen ve dnu, ve kterém je zjištěna dostatečně zvýšená koncentrace E3G, a ve '

bezprostředně následujících dnech potom.

Pokud dostatečně zvýšená koncentrace E3G není zjištěna před využitím· všech testů, je nechráněný pohlavní styk vyloučen v 15 bezprostředně následujících dnech po

2Q posledním testovém dnu. .

Jako další zabezpečení - proti selhání je špička E3G , použita (jak je definována výše v tomto popisu) pro . zaznamenání dne ' ovulace v . předcházejících cyklech a uživatelka je upozorněna', že plodná fáze jíž začala, když dostatečně zvýšená koncentrace E3G není zjištěna před ] 3 dny před .průměrným dnem ovulace.

Početí nenastane.

Tento příklad zajišťuje užívatelce. tu výhodu, že je za měsíc vyžadováno pouze několik testů. Je tak rovněž dosaženo výrobního zjednodušení, protože je testován pouze jeden analyzát (E3G).

Pokud je to žádoucí, může být tento test vytvořen jako mnohem , vyspělejší, například umožněním, aby událost ovulace byla detekována zahrnutím údaje o koncentraci LH v moči, a shromažďováním údajů z předcházejících cyklů, takže . ¹ abstinenční perioda může být dále redukována bez zvýšení pravděpodobnosti početí, jak bylo obecně popsáno v tomto ¹ popisu......- V ' ^c ·-* *· · ’- · ^A ‘ :Pří kl ad 5 ,——, , . ·.' - ...... __ __ .. _

-ΖΌ· • - -Tento -příklad ilustruje ‘kombinovaný,;test.. LH/E3G podle předkládaného'vynálezu. Fyzikální· konstrukce a způsoby.výroby odpovídajících zařízení, včetně výroby reakčních činidel, jsou'· detailně popsány v patentových spisech EP-A-291194 a EP-A383619.

⁴ ' E3G latex je připraven kombinováním modře zbarvených latexových částic ( střední průměr 380 nm) s anti ' E3G monoklonální protilátkou s; afinitou v roztoku přibližně 10¹⁰ litrů/mol. Protilátka (170 pg/mí.) je smíchána s' latexovými - .,-'.··. ... - - ·., částicemi (0,5 % tuhých látek)· v pufru boritanů sodného;s·ρΗ 8/5.' Prázdná '.vazební místa na latexovém .povrchu jsou blokována prostřednictvím BSA [25 mg/ml].. Latex je potom propláchnut,. abv se odstranily neadsorbované materiály.

LH latex je připraven z anfi’^''”5'ěfa~EH~mbno'kí’on'aTn'i * protilátky adsorbované na ,modře. zbarvených., latexových částicích (380 nm). Tento proces je proveden, a poměrem protilátky ku latexu 100 pg/ml na 0.,5 % tuhých látek v pufru boritanů . sodného (pH 8,5) obsahujícího etanol (poměr . 6 kú 1 objemových dílů), načež následuje blokování volných vazebních míst prostřednictvím BSA (25 mg/ml). Latex je potom propláchnut, aby byly odstraněny neadsorbované materiály.

Vrstva (silná 1,4 mm) z' komerčně dosažitelného, makroporézního polyetylénu předem upraveného detergenty, který má velikost pórů přibližně 100 mikronů, je nasycena vodnou suspenzí stejných množství obou souborů latexových částic, připravených podle shora uvedeného popisu, na celkově 0,008 % tuhých látek, v pufru Tris s pH 8,5, který obsahuje 3 % BSA a 1 % cukrux Tato vrstva je sublimačně sušena a řezána na části každá o velikosti 6 x 12 mm, které mají jímavost tekutin přibližně 50 pL.

Páskem tuhé fáze, na kterém jsou detekovány úrovně E3G a LH, je nitrocelulóza s jmenovitou velikostí pórů 8 um, vázaná k polyesterové podkladové vrstvě. Komplex proteinu E3G (ovalbumin) a anti - alfa ·LH protilátka jsou odděleně rozmístěny na nitrocelulóze v různých místech (viz obr. 9) s použitím .roztoků obsahujících 2 mg/ml odpovídajícího reakčního činidla ve fosfátovém pufru o pH 7,4. Nitrocelulóza je blokována prostřednictvím PVA předtím,· než je řezána na pásky.

Shora.uvedená reakční činidla jsou použita v sestavě testovacího zařízení, jak je obecně popsáno a ilustrováno v provedení 1 v patentovém spisu EP-A-383619.

Obr. 9a a obr. 9b .připojených' výkresů ilustrují toto zařízení.·

Obr. 9a znázorňuje pásek 901 nitrocelulózy na podkladovém pásku 902 z transparentního polyesteru. Tento pásek má délku 4 0 mm a šířku 6 mm. Linka 903 reprezentuje polohu anti - LH protilátky nehybné na pásku. Tato linka je přibližně 1 mm široká a je centrována 10 mm od levého konce 904 pásku 901. Linka 905 reprezentuje polohu nehybného E3G.. To je rovněž linka přibližně 1 mm široká a je centrována 16 mm od levého konce pásku.

£

Obr.' 9b znázorňuje sestavené zařízení v řezu. Toto zařízení zahrnuje pouzdro mající horní polovinu 910 a spodní polovinu· 911. Savý prvek 912 (knot) pro přijetí vzorku vyčnívá z levého konce 913 pouzdra. Makroporézní těleso- 914 obsahující dva soubory latexových částic je v kontaktu s knotem uvnitř pouzdra.. Toto pouzdro rovněž obsahuje pásek 901 a jemu přidružený podkladový .pásek 902. Vzorek tekutiny nanesený na sběrač' 912 vzorku může postupovat přes makroporézní těleso 914 do pásku 901. Pouzdro má horní otvor

915 nebo okénko a spodní otvor 916 nebo okénko, která jsou 15 upravena vzájemně proti sobě, takže světlo může procházet skrz pouzdro z jedné strany na druhou,a přitom bude procházet částí pásku. Tato část obsahuje obě reakční linky 903 a 905. Koncová část 917 pouzdra může obsahovat výlevku nebo vysoušeči prostředek, pokud je to žádoucí,

Pokud,je vzorek moči, obsahující LH a E3G nanesen na toto zařízení, prochází 'přes těleso 914 a do ⁽pásku. Dva soubory latexových částic jsou uvolňovány a neseny se vzorkem. V závislosti na koncentracích uvedených dvou ^5 analyzátů ve- vzorku se latexové částice nesoucí odpovídající vazební materiál budou vázat k pásku v linkách 903 a 905. Stupeň vázání částic v těchto linkách může být stanoven světélným přenosem skrz pásek, jak je-detailně popsáno výše.

I

Vzájemná poloha linek E3G a LH, jak je popsáno výše, podstatně zlepšuje účinnost se kterou odpovídající koncentrace těchto dvou analyzátů mohou být stanoveny.

Zastupuje :

ť

Claims (39)

1. ď. WQ&j

   PAT E N T 0 V É N Á R 0 K Y 1. Testovací kit pro použití při monitorování ovulačního cyklu samičky savce, zejména ženy, zahrnující množství

   jednorázových testovacích zařízení pro vzorkování a testování 5 tělní tekutiny, jako je moč, a zajištění čitelných signálů indikujících, koncentrace alespoň dvou- analyzátů v tělní tekutině, přičemž tyto analyzáty mají podstatný vztah ke stavu plodnosti v ovúlačním cyklu, společně s elektronickým čtecím zařízením/monitorem pro čtení a interpretaci uvedených čitelných signálů pro poskytnutí uživateli indikaci o stavu plodnosti, v y z ή a.čiU j/í c i se t i m , že

   a) , uvedené čitelné signály jsou čteny, zatímco jedno í

   z testovacích zařízení je umístěno uvnitř přijímacích prostředků·uvedeného čtecího zařízení/monitoru;

   b) uvedené .čitelné signály jsou vytvářeny prostřednictvím koncentrování prvního detekovatelného materiálu, výhodně značkovaného reakčního činidla, v první detekční zóně porézního nosiče, jako je testovací pásek, uvnitř testovacího zařízení a prostřednictvím koncentrování· druhého detekovatelného materiálu, výhodně značkovaného reakčního činidla, v druhé detekční zóně uvedeného porézního nosiče, zatímco vzorkovaná tělní tekutina proudí, například prostřednictvím vzlínání, skrz tento porézní nosič, uvedená druhá detekční zóna je výhodně umístěna směrem za první 25 detekční zónou vzhledem·, k přijímací části testovacího zařízení, které je v kontaktu s tělní tekutinou, aby iniciovalo test;

   c) signál v· první detekční zóně je indikací koncentrace v tělní tekutině prvního analyzátů, výhodně luteinizačního hormonu (LH), který vykazuje, zřetelnou změnu koncentrace těsně spojenou s časem vlastní ovulace; a

   5 d) signál v druhé detekční zóně je indikací koncentrace v tělní tekutině druhého analyzátů, výhodně estradiolu nebo jeho metabolitu, jako je estron-3-glukoronid (E3G), který vykazuje zřetelnou změnu koncentrace spojenou se začátkem plodné fáze daného ovulačního cyklu.

   10 _v .
2. 2. Testovací kit podlé nároku 1, vyznačující se t í m , že druhá detekční zóna je umístěna za první detekční zónou. .
3. 3. Testovací kit podle nároku 1 nebo . 2,

   25 vy'značující se tím, že první detekční zóna obsahuje nehybnou anti - LH protilátku a druhá detekční zóna

   obsahuje nehybný E3G nebo nehybný analog E3G. 4. Testovací kit podle kteréhokoliv z nároků 1 až 3, vyznaču j i c í. se t í m , že čitelné signály

   jsou čteny prostřednictvím optického přenosu skrz testovací zařízení.
4. 5.. Testovací kit podle nároku 4, vyznačující se t í m , že čtecí zařízení/monitor zahrnuje:

   a) zdroj rozptýleného světla o vlnové délce, která je silně pohlcována uvedenými detekovatelnými materiály;

   b) snímací prostředky pro snímání dopadajícího světla z uvedeného zdroje;

   c) prostředky pro přijetí a držení testovacího zařízení s každou z detekčních zón ve světelné cestě mezi zdrojem a snímacími prostředky; a

   d) elektronické prostředky spojené se snímacími prostředky, přičemž tyto elektronické prostředky jsou naprogramovány, aby odvodily ze snímaného dopadajícího světla míru rozsahu, do kterého byl detekovatelný materiál

   5 koncentrován v každé z detekčních zón.
5. 6. Testovací kit podle nároku 5, vyznačuj ící se t í m , že rozptýlené světlo je. pulsní a elektronické prostředky jsou . naprogramovány pro· řízení snímacích prostředků, aby snímací prostředky, pouze snímaly dopadající světlo ve fázi s tímto pulsním světlem, . přičemž pulsní frekvence tohoto .světla je výhodně alespoň přibližně 1 kHz'.
6. 7. Testovací kit podle nároku¹ 5,, v y ζ· n a č u j í c í se tím, že přijímací prostředky zahrnují spojovací

   5 prostředky uveditelné· do záběru s, odpovídájíčími spojovacími prostředky na testovacím . zařízení pro zajištění, že po přijetí testovacího zařízení čtecím zařízením/monitorem jsou detekční zóny umístěny a udržovány v předem stanoveném prostorovém vztahu vzhledem ke snímacím prostředkům.

   ⁰ 8.' Testovací· kit podlé nároku 7, vyznačuj ící se tím, že přijímací prostředky zahrnují ovládací prostředky spouštěné prostřednictvím přijetí' testovacího zařízeni, přičemž tyto ovládací prostředky způsobují iniciaci

   čtení detekčních zón. 9. Testovací kit podle nároku 7 nebo 8, v y z načující se t í m , že testovací zařízení má pouzdro .. nebo kryt, které zahrnuje vnitřní středící

   prostředky, které zabírají s odpovídajícími středícími prostředky sdruženými .s porézním nosným prostředkem,, takže detekční zóny jsou uvnitř pouzdra nebo krytu testovacího zařízení umístěny v předem stanoveném prostorovém vztahu vzhledem ke středícím prostředkům na pouzdru nebo krytu testovacího zařízení.
7. 10. Testovací kit podle nároku 8, vyznačuj ící se tím, že vnitřní středící prostředky zahrnují čep nebo podobně, uveditelný do záběru s otvorem nebo drážkou v porézním nosném prostředku, přičemž detekční zóny jsou v předem stanovených místech na porézním nosném prostředku vzhledem k uvedenému otvoru nebo drážce.
8. 11. ' Testovací kit podle kteréhokoliv z předcházejících nároků, vyznačující’ se tím, .že čitelné 'signály jsou vytvářeny prostřednictvím- koncentrace částicových značených reakčních činidel v odpovídajících detekčních zónách.
9. 12.. . Testovací kit podle . kteréhokoliv z ..předcháze j ících nároků, vyznačující se tím, že obsahuje dostatečné množství jednorázových testovacích zařízení' pro umožnění uživatelce provést testování na denním základě pro maximálně 16 dnů v kterémkoliv jednom ovulačním cyklu.
10. 13. Náhradní balení obsahující množství, výhodně ne více než 12 a v optimálním případě 7.. až '10, jednorázových testovacích zařízeni pro doplnění testovacího kitu podle kteréhokoliv, ž předcházejících nároků,, výhodně s instrukcí pro uživatele, aby použil všechny z těchto testovacích zařízení .v průběhu trvání jednoho ovulačního cyklu.
11. 14. Způsob monitorování lidského ovulačního cyklu s použitím testovacího kitu podle kteréhokoliv z nároků 1 až 12, vyznačující se tím, že testování se 'provádí alespoň jednou v průběhu intervalu dnů 1 až 7 včetně,

    5 vypočítaného od začátku měsíčků, pro stanovení hodnoty nebo signálu referenční koncentrace pro druhý analyzát v současném cyklu, uvedené testování se dočasně pozastaví, a potom se testování provádí alespoň· jednou (výhodně denně) v průběhu periody dnů, která začíná pořadovým dnem 5, výhodně pořadovým

    10 dnem 6, před průměrným pořadovým dnem, ve kterém nastala vlastní ovulace v jednom nebo více předcházejících ovulačních cyklech u stejného individuálního subjektu, druhé ' hodnoty nebo signály koncentrace analyzátu, získané v průběhu uvedené periody dnů, se porovnají s referenční hodnotou nebo signálem
12. 15 koncentrace pro·· stanovení, zda vzhledem k předcházejícímu testu probíhá' nebo proběhla změna koncentrace indikující bezprostřední ovulaci. ‘

    15. Způsob podle nároku 14, vyznačuj ící·,se tím, že referenční hodnota koncentrace je stanovena z testu (testů) provedeného v průběhu intervalu dnů 4 až 7 včetně.
13. 16.. Způsob', podle nároku 15, vyznačující· se tím, že referenční hodnota .koncentrace je stanovena z

    25 testu (testů) provedeného' ve dnu 5 a/nebo ve dnu 6, výhodně pouze jedním testem provedeným ve dnu 6.

    .
14. 17.. Způsob podle kteréhokoliv z nároků 14 až

    16. vyznačující se' tím, že tělní tekutinou je moč a druhým analyzátem je estradiol nebo jeho metabolit,·

    30 . .

    jako je E3G.
15. 18. Způsob podle nároku 17, vyznačující se tím, že podstatná změna mezi hodnotou referenční koncentrace [r] a testovací hodnotou [i], indikující bezprostřední ovulaci, je dána vztahem:

    5 1,5 < [i]/[r] < 2,5 v případě přímé ¹ úměrnosti mezi testovacím signálem a . . koncentrací analyzátů, nebo , inverzním vztahem v případě nepřímé úměrnosti mezi ' testovacím signálem a koncentraci analyzátů.

    0 '
16. 19. Způsob podle nároku 18, vyznačující se tím, že analyzátem je E3G-a podstatná změna v koncentraci E3G -[i], indikující bezprostřední ovulaci, je dána vztahem:[i] / [r] >2 v případě přímé úměrnosti mezi testovacím signálem a koncentrací E3G, nebo inverzním vztahem v.· případe neprime úměrnosti mezí testovacím signálem a koncentrací E3G.
17. 20. Způsob podle kteréhokoliv z nároků .14 až

    19, vyzná č^u j í c 1 . se tím, že se stanoví 3· ..koncentrace LH v -tělní tekutině pro .identifikaci, dne vlastní ovulace v současném cyklu.
18. 21. Způsob podle kteréhokoliv z nároků 14, až

    20, vyznačující se tím, že se odvodí průměrný den ovulace z údaje shromážděného v průběhu alespoň ⁵ 3, výhodně alespoň 5, po sobě jdoucích předcházejících cyklů.
19. 22. Způsob podle kteréhokoliv z nároků 14 až

    21, vyznačující'' se tím, že se odvodí průměrný den ovulace z údaje získaného v průběhu alespoň bezprostředně předcházejícího cyklu.
20. 23. Způsob podle nároku 22, vyznačující se tím, že se odvodíprůměrný den ovulace z údaje získaného z klouzavé referenční báze sestávající z pevného počtu po sobě jdoucích cyklů bezprostředně předcházejících současnému

    5 cyklu.
21. 24. Způsob podle nároku 23, vyznačující se tím, že klouzavá referenční báze sestává z bezprostředně předcházejících 3 ' až 12 cyklů, výhodně z bezprostředně předcházejících 5 nebo 6 cyklů.
22. 25. Způsob podle . kteréhokoliv z nároků 14 až 24, vyznačuj. ící se tím, že konec plodné fáze se deklaruje ze znalosti vlny LH v současném cyklu.

    I v
23. 26. Způsob podle nároku -25, vyznačující se tím, že konec plodné'fáze se, považuje za nastalý čtvrtý den následující po zjištění vlny LH.

    ( .
24. 27. Způsob podle kteréhokoliv z nároků 14 až

    26,. vyznačující se. tím, že začátek plodné fáze se deklaruje, pokud .očekávaná podstatná změna v druhé koncentraci analyzátu nebyla zjištěna před alespoň 2, výhodně alespoň 3, dny před pořadovým dnem v současném cyklu, na který je předpovídána vlastní ovulace ňa základě znalosti odvozené z měření první koncentrace analyzátu, získaných, z jednoho nebo více předcházejících cyklů.
25. 28. Testovací zařízení pro použití při stanovení dvou nebo více analyzátů . v jednom vzorku, tekutiny, přičemž alespoň jeden z těchto analyzátů je zjistitelný prostřednictvím reakce vázání v sendvičovém formátu, která zahrnuje dvě vazební reakční činidla specifická pro různé epitopy v

    100 uvedeném analyzátu a alespoň jeden další z uvedených analyzátu je hapten (a tudíž není zjistitelný snadno prostřednictvím reakce vázání v sendvičovém formátu), vyznačuj ící se tím, že zahrnuje,

    5 výhodně uvnitř ochranného pouzdra:

    a) pásek z porézního materiálu, podél kterého může migrovat vzorek tekutiny;

    b) dvě nebo více prostorově oddělené detekční zóny (alespoň jednu na analyzát, který má být. zjištěn) na

    10 uvedeném pásku umístěné' za místem, kde se přivádí vzorek tekutiny k tomuto pásku, přičemž z těchto zón:

    i) alespoň jedna zóna obsahuje nehybné zachycovací činidlo, které je .specifickým vazebním činidlem pro uvedený první analyzát, nebo specifické vazební činidlo,

    15 které může zachytit soubor sendvičového formátu včetně uvedeného prvního analyzátu, a ii) alespoň jedná další zóna obsahuje nehybné zachycovací činidlo, kterým je bud’ hapten· nebo- jeho analog;

    c) jeden nebo více souborů částic, umístěných

    20 ' před uvedenými detekčními zónami a schopných migrovat skrz ' pásek se vzorkem tekutiny, přičemž z těchto souborů:

    i) . alespoň jeden soubor nese vazební činidlo specifické pro uvedený první analyzát, nebo specifické pro další- specifické vazební činidlo rovněž přítomné v zařízení,

    25 které může participovat v reakci v sendvičovém formátu s uvedeným prvním analyzátem, a . ii) alespoň jeden další soubor nese vazební činidlo pro uvedený hapten; přičemž přítomnost uvedeného prvního analyzátu ve vzorku

    30 tekutiny vede -na vázání Částic v uvedené alespoň jedné

    101 detekční zóně v množství přímo úměrném vzhledem ke koncentraci tohoto prvního analyzátu v uvedeném vzorku

    Ψ tekutiny, a přítomnost uvedeného haptenu ve vzorku tekutiny vede na .snížení vázání částic uvedeného alespoň jednoho dalšího souboru v uvedené další detekční zóně v množství přímo úměrném vzhledem ke koncentraci tohoto haptenu v uvedeném vzorku tekutiny, detekční, zóna obsahující nehybný hapten nebo nehybný analog haptenu je výhodně umístěna za detekční zónou sdruženou s prvním analyzátem.
26. 29. Zařízení podle nároku 28, vyznačující se tím, že druhá detekční zóna je umístěna za první detekční zónou.
27. 30. Zařízení podle nároku 28 nebo 29, vyznačující se t í m , že prvním analyzátem je luteinizační hormon (LH) .
28. 31. Zařízení podle kteréhokoliv z nároků 28 až 30, vyznačujíc! se tím, že druhým analyzátem je estradíol nebo j eho Tnetabolit, jako je E3G.
29. 32'. Zařízení podle kteréhokoliv z .nároků 28 až 31, vyznačující se tím, že vzorkem tekutiny je moč.
30. 33.. 2ařízení podle kteréhokoliv z nároků 28 až 32, vyznačující se tím, že částicemi jsou latexové částice, výhodně obarvené.
31. 34. Zařízení, podle kteréhokoliv z nároků 28 až 33, vyznačující se tím, že afinita specifického vazebního činidla proti haptenu je alespoň přibližně 10⁹, výhodně přibližně 10¹⁰, molů/litr.

    102
32. 35.- Zařízení podle kteréhokoliv z nároků 28 až 34, vyznačující se tím, že materiál pásku je alespoň průsvitný skrz svojí tloušťku.
33. 36. Způsob stanovení přítomností a/nebo koncentrace dvou nebo více analyzátů v jednom vzorku tekutiny, přičemž alespoň jeden z' těchto analyzátů je zjistitelný prostřednictvím reakce vázání v sendvičovém .formátu, která zahrnuje dvě vazební reakční činidla specifická pro různé epitopy v uvedeném . analyzátů a alespoň jeden další z uvedených analyzátů je hapten (a tudíž není prostřednictvím reakce vázání formátu),vyznačuj'ící se kroky:

    zjistitelný snadno v sendvičovém.

    tím, že zahrnuje

    a) vytvoření zařízení zahrnujícího . pásek z porézního materiálu, podél kterého může migrovat vzorek tekutiny, tento pásek má dvě. nebo' více prostorově .oddělené detekční zóny (alespoň jednu na analyzát, který má být zjištěn) umístěné za místem, kde se přivádí vzorek tekutiny k tomuto pásku, přičemž z těchto zón:

    ., i) alespoň jedna zóna obsahuje nehybné zachycovací činidlo, které je specifickým vazebním činidlem pro uvedený první analyzát, nebo specifické vazební činidlo, které může zachytit soubor sendvičového formátu včetně uvedeného prvního analyzátů, a ii) alespoň jedna další zóna obsahuje nehybné zachycovací činidlo, kterým je buď hapten nebo jeho analog;

    b) vytvoření'· jednoho nebo více souborů částic schopných migrovat skrz pásek se vzorkem tekutiny,, přičemž z těchto souborů:

    i) alespoň jeden soubor nese vazební činidlo

    103 specifické pro uvedený první analyzát, nebo specifické pro další specifické vazební činidlo, které může participovat v

    I reakci v sendvičovém formátu s uvedeným prvním analyzátem, a ii) alespoň jeden další soubor nese vazební

    5 Činidlo pro uvedený hapten; a

    c) způsobení, že uvedené soubory částic budou suspendovány v uvedeném vzorku tekutiny a budou migrovat s tímto vzorkem tekutiny skrz uvedený pásek; přítomnost uvedeného prvního analyzátu ve vzorku tekutiny vede na vázání

    10 částic v uvedené alespoň jedné detekční zóně v množství přímo úměrném vzhledem ke koncentraci tohoto prvního analyzátu v uvedeném vzorku tekutiny, a. přítomnost uvedeného haptenu ve vzorku tekutiny vede na snížení vázání částic uvedeného alespoň jednoho dalšího souboru v uvedené další detekční zóně

    15 v množství přímo úměrném vzhledem ke koncentraci tohoto haptenu v uvedeném vzorku tekutiny, detekční zóna obsahující nehybný hapten . nebo nehybný analog haptenu 'je výhodně umístěna za detekční zónou sdruženou s prvním analyzátem.
34. 37. Způsob podle nároku 36, vyznačující se tím, že druhá detekční zóna je umístěna za první detekční zónou.·
35. 38. Způsob podle nároku 37, vyznačující setím, že míra vázání částic v každé z detekčních zón se

    25 stanoví prostřednictvím měření útlumu elektromagnetického záření, jako je světlo, při přenosu skrz tloušťku uvedeného pásku.
36. 39. Elektronické zařízení pro monitorování stavu plodnosti lidského ovulačního. cyklu a pro zajištění uživateli tohoto30 zařízení indikace o stavu plodnosti, vyznačuj ící

    104 se t í m , že zahrnuje:

    a) čtecí prostředky pro čtení testovacího zařízení podle nároku 28;

    b) prostředky zpracování informace pro stanovení, z uvedeného čtení testovacího zařízení, hodnot koncentrací uvedených alespoň dvou analyzátů ve vzorku tekutiny;

    c) prostředky zpracování informace a paměťové prostředky pro odvození, ze 'stanovených hodnot koncentrací a z dříve stanovených hodnot koncentrací, indikace aktuálního stavu plodnosti lidského subjektu, který je testován; a d) · zobrazovací ’ prostředky' ~ pro' “sdělení” aktuálního' stavu'plodnosti uživateli tohoto elektronického zařízení.’
37. 40. Elektronické vyznačuj ící přijímací 'prostředky zařízení podle nároku 39, se t í m , že navíc zahrnuje pro přijetí testovacího zařízení, přičemž čtecí · prostředky jsou umístěny uvnitř těchto přijímacích prostředků.
38. 41. Elektronické .zařízení podle nároku 40, vyznačující se tím, že čtení je dosahováno prostřednictvím optického přenosu skrz testovací zařízení, které je přijaté v přijímacích prostředcích.
39. 42. Elektronické zařízení podle kteréhokoliv z nároků 39 až

    41, v y z na č u j í c í

    H 1 TVl *7'Λ v· O T Ί

    -L Ul , Í-C V prosťřecíký^-žáhrnuj'í ^—j'edeň^—ňěbcTv£cě^—svěťelných“zdrojůktěré Zajišťují ..barevný signál pro uživatele, přičemž · změna stavu plodnosti je indikována změnou barvy.