CZ75498A3

CZ75498A3 - Radioaktivně značené deriváty biotinu

Info

Publication number: CZ75498A3
Application number: CZ98754A
Authority: CZ
Inventors: Helmut Mäcke
Original assignee: Mallinckrodt Medical, Inc.
Priority date: 1995-09-18
Filing date: 1996-09-17
Publication date: 1999-09-15
Also published as: NO981202L; CA2232411A1; NO981202D0; JPH11513374A; IL123725A0; EP0857071A1; MX9802107A; WO1997010854A1

Description

(57) Anotace:

Vynález se týká značené biotinové sloučeniny, kde blotlnovou sloučeninu představuje obecný vzorec I, ve kterém n Znamená 1 nebo 2, R představuje chelatotvornou skupinu k chelatizaci atomu kovu a Sp je prostorová skupina, která obsahuje alespoň 4 atomy vytvářející rozestup mezi NH a R a kde tato biotinová sloučenina je značena atomem kovu zvoleným ze a/ souboru sestávajícího z radioaktivních izotopů ^mTc, ²⁰³Pb, ⁶⁶Ga, ⁶⁷Ga ⁶⁸Ga, ⁷²As, uY_In H3ni_In U4m_In 97_Ru 62_Cu 64_Cu 52^ ^52mMn, ^5,Cr, ¹⁸⁶Re, ¹⁸⁸Re, ⁷⁷As, ⁹⁰Y, ⁶⁷Cu, ¹⁶⁹Er, ^117mSn. ¹²¹Sn, ^l27Te, ¹⁴²Ργ ¹⁴³Pr, ^I98Au, ¹⁹⁹Au, ¹⁴⁹Tb, ¹⁶¹Tb, ¹⁰⁹Pd, ¹⁶⁵Dy, . ¹⁴⁹Pm, ’^5IPm,¹⁵³Sm, ¹⁵⁷Gd, ¹⁶⁶Ho, ¹⁷²Tm, ¹⁶⁹Yb, ¹⁷⁵Yb, ^I77Lu, ¹⁰⁵Rh, a ^lllAg, nebo b/ souboru sestávajícího z paramagnetických atomů kovů Cr, Mn, Fe, Co, Ni, Cu, Pr, Nd, Sm, Yb, Gd, Tb, Dy, Ho, a Er, přičemž uvedený atom kovu je připojen k biotinové sloučenině pomocí zmíněné chelatotvorné skupiny. Vynález se dále týká farmaceutického přípravku obsahujícího uvedenou značenou biotinovou sloučeninu, použití této sloučeniny pro diagnózu a léčení a kitu pro přípravu radiofarmaceutického přípravku.

(13) Druh dokumentu: A3 (51) Int. Cl⁶:

A 61 K 51/04

A 61 K 49/00 // (A 61 K 01/04,

A 61 K 103:10, A 81 K 121:00.

A 61 K 123:00)

Radioaktivně značené deriváty biotinu

Oblast techniky

Tento vynález se týká značených biotinových sloučenin, způsobů přípravy těchto sloučenin, farmaceutického přípravku obsahujícího tyto sloučeniny, použití tohoto přípravku pro diagnózu a léčení a kitu pro přípravu radiofarmaceutického přípravku.

Dosavadní stav techniky

V oboru je dobře známo, že různé polypeptidy nebo proteiny, jako jsou monoklonální protilátky (MAb), se vázají s vysokou afinitou k antigenům spojeným s tumory. V důsledku' toho radioaktivně značené monoklonální protilátky (MAb*) jsou úspěšně používány pro lokalizaci tumorů in vivo v nukleární medicíně. Jednou z hlavních nevýhod při použití MAb* je jejich prodloužená krevní clearance. Důsledkem toho je, ze se obvykle dosahuje malý poměr tumoru a pozadí a radiační dávka pro normální tkáně je vysoká.

db

Nadějný vývoj v aplikaci MAb v nukleární diagnóze je předem stanoveným cílovým přístupem. Proto pro tuto metodu podávání proteinu specifického pro tumor (protilátky) a látky způsobující radioaktivitu nastává v oddělených časových okamžicích. Tato metoda je možná při použití systému avidin/ biotin. Jsou dva rozdílné základní postupy, které se mohou používat pro lokalizaci tumorů s tímto předem stanoveným cílovým systémem avidin/biotin [Paganelli a kol., Nucl. Med. Commun., 12, 211-234 (1991)], a to dvoustupňový přístup a trojstupňový přístup. Při dvoustupňovém přístupu se preparát (strept)avidinu připravený in vitro a polypeptid vyhledávající tumor, například protilátka, injikují o jeden, dva nebo tři dny později, po injekci radioaktivně značeného biotinu. Při třístupňovém přístupu se biotinylovaná MAb (první krok), (strept)avidin (druhý krok) a radioaktivně značený biotin (třetí krok) zavedou pacientovi injekcí postupně (v časovém intervalu přibližně 24 hodin). První dva kroky, stejně jako první krok dvoustupňového přístupu má za výsledek avidinaci tumoru. Kromě toho biotinylované MAb, které nejsou lokalizovány na tumoru, ale stále cirkulují v krvi, jsou makroagregovány přebytkem avidinu. Tyto adukty avidin/MAb o vysoké molekulární hmotnosti jsou rychle absorbovány a katabolizovány v játrech. Třetí krok zahrnuje podávání in vivo radioaktivně značeného biotinu. V důsledku rychlé krevní clearance netumorově vázaného biotinového derivátu se očekávají dobré poměry tumoru a pozadí, které se dosahují rychle.

Pro vizualizaci tumorů se vyžaduje biotin značený radionukleotidem, výhodně radionukleotidem kovu, nebo paramagnetickým ionem kovu. Protože biotin má nedostačující vlastní funkční skupiny pro stabilní vázání kovu, vhodný bifunkční ligand má být vázán k biotinu, aby se umožnilo vázání s požadovaným atomem kovu. Biotinové deriváty s radioaktivně značeným kovem jsou popsány v literatuře, například v US patentu č. 5 283 342, ve WO 93/25240, v Koch a Mácke (Angew. Chemie, Int. Ed., 31, 1507-1509 (1509) a Vizzi a kol. (J. Nucl. Med. 32, 920 (1991) - Proč. 39^thAnn. Mt. , No. 403) je ohodnoceno 12 různých biotinových derivátů značených techneciem-99m. Závěrem těchto autorů je, že zkoumané deriváty biotinu značené Tc-99m projevují nestabilitu in vivo, jako důsledek toho, že se v normálních tkáních nalézají vysoké hladiny Tc-99m.

• ·*♦ * · ·

Podstata vynálezu

Předmětem tohoto vynálezu je dosáhnout značenou biotlnovou sloučeninu, která má vysokou afinitu k avidinu, srovnatelnou s afinitou samotného biotinu, a která má zlepšenou stabilitu in vivo, to znamená zlepšenou resistenci k enzymatickému odbourávání, která dovoluje vlastní použití v diagnóze a léčení.

Tento předmět se dosahuje značenou biotinovou sloučeninou, která je reprezentována obecným vzorcem I

ve kterém

n	znamená 1 nebo 2,
R 3*	představuje chelatotvornou skupinu k chelatizaci atomu kovu a
Sp	je prostorová skupina, která obsahuje alespoň 4 atomy vytvářející rozestup mezi NH a R a

kde tato biotinová sloučenina je značena atomem kovu zvoleným ze

a) souboru sestávajícího z radioaktivních izotopů ®Tc,

Yb, ¹⁷⁷Lu, ¹⁰⁵Rh a ^^^Ag, nebo

b) souboru sestávajícího z paramagnetických atomů, kovů Cr, ....

Mn, Fe, Co, N.i, Cu, Pr, Nd, Sm> Yb, Gd, Tb, Dy, Ho a Er, přičemž uvedený atom kovu je připójen k biotinové sloučenině pomocí zmíněné čhelatotvórné skupiny.'

Výše definovaná prostorová skupina Sp je výhodně skupina obecného vzorce II

ve kterém znamená biradikál vzorce

-NH-(CH₂)_ro- nebo -NH-C(=X)-(CH₂)_x-Y-(CH₂)_m-C(CO₂H)Hkde x a y jsou každý nezávisle na sobě 0 nebo 1 m je celé číslo od 1 do 4 p znamená celé číslo od 0 do 4, ’ · · ·· · ···· * ··· • ·.>· · · ·· ···# · • · · · · · · ♦ · ·«·*«· · · · · ♦ · · ·

- 5 X představuje atom kyslíku nebo síry a

Y znamená skupinu vzorce NH, co nebo atom siry.

Výše uvedená chelatotvorná skupina R je výhodně zvolena ze souboru sestávajícího z N_tPgS(^_^_g) tetradentátních chelatizačnich činidel, kde t + q = 2 - 4 nebo ze skupin odvozených od kyseliny ethylendiamintetraoctové (EDTA), kyseliny diethylentriaminpentaoctové (DTPA), kyseliny cyklohexyl-1,2-diamintetraoctové (CDTA), kyseliny ethylenglykol-0,0'-bis(2-aminoethyl)-N,N,N',N'-tetraoctové (EGTA), kyseliny N,N-bis(hydroxybenzyl)ethylendiamin-N,N'-dioctové (HBED), kyseliny triethylentetraminhexaoctové (TTHA), kyseliny 1,4,7,lO-tetraazacyklododekan-Ν,Ν',N,N¹-tria -tetraoctové (D03A a DOTA), kyseliny 1,4,7,10-tetraazacyklotridekan-Ν,Ν¹,N,N'-tri- a -tetraoctové (TRI3A a TRITA), kyseliny hydroxyethyldiamintrioctové (HEDTA), kyseliny l,4,8,ll-tetraazacyklotetradekan-N,N',N,N¹-tetraoctové (TETA), substituované DTPA, substituované EDTA nebo od deferoxaminu (desferrioxaminu) nebo od sloučeniny obecného vzorce III

ve kterém

R^ znamená popřípadě substituovanou uhlovodíkovou skupinu s rozvětveným nebo nerozvětveným řetězcem, přičemž tato skupina je popřípadě přerušena alespoň jedním heteroatomem zvoleným z atomu dusíku, kyslíku a síry a/nebo alespoň jednou skupinou NH a

Q znamená skupinu, která je schopna reagovat s aminoskupinou peptidu a která je výhodně vybrána ze souboru sestávajícího z karbonylu, karbimidoylu, N-(C],-C_S )alkylkarbimidoylu, N-hydroxykarbimidoylu a N- (C-^-Cg) alkoxykarbimidoylu.

Vhodné příklady N^PgS(₄_^_g) tetradentátních chelatotvorných činidel jsou vybrána ze souboru zahrnujícího sloučeniny obecného vzorce IV až XIII

R₇ 0	/
0 hkHnh _R1	^HN ' ⁸ H₂C ' ΌΗ₂
f I R_e -^xH HN	^R,j 'ei cl í Rl4 ' g HG ^x *
dl	Rio
HOOC ' R_e

(IV) (V)

Y

HN ' NH

ÍCH₂)

R₁₅ HN ^{7 8x}NH R_í7

(Vlil) (IX) (X) • · · · * ·»

ve kterém

R₆ až R_2o znamenají každý nezávisle na sobě atom vodíku nebo alkylovou skupinu s 1 až 4 atomy uhlíku, za předpokladu, že alespoň jeden z Cg až C₉ znamená symbol Y,

R_2i znamená atom vodíku nebo C0₂-alkylovou skupinu s 1 až 4 atomy uhlíku v alkylové části, ^r22 ^{a r}23 3^sou každý jednotlivě alkylkarbonylová skupina s 1 až 4 atomy uhlíku v alkylové části, benzoylová skupina nebo benzylová skupina, v znamená 0 nebo 1, s znamená 2 nebo 3,

R₂₄ představuje skupinu vzorce CH₂COOH nebo její funkční derivát,

A znamená alkylenovou skupinu s 1 až 4 atomy uhlíku, jestliže je žádoucí, substituovanou C0₂-alkylovou, CH₂CO-alkylovou, CONH₂ nebo C0NHCH₂C0₂-alkylovou « « « · * ·· skupinou, fenylenovou skupinu nebo fenylenovou skupinu substituovanou C0₂-alkylovou skupinou, přičemž alkylové skupiny obsahuji 1 až 4 atomy uhlíku,

G znamená skupinu NH nebo atom síry,

Y znamená valenční vazbu nebo funkční skupinu schopnou se vázat s prostorovou skupinou a

Z znamená atom síry nebo kyslíku.

Pokud Y znamená funkční skupinu, Y výhodně zahrnuje isokyanatoskupinu, isothiokyanatoskupinu, formyl, o-halogennitrofenyl, diazoniovou skupinu, epoxyskupinu, trichlor-sym.-triazinyl, ethyleniminoskupinu, chlorsulfonyl, alkoxykarbimidoyl, (substituovaný nebo nesubstituovaný) alkylkarbonyloxykarbonyl, alkylkarbonylimidazolyl nebo sukcinimidooxykarbonyl, přičemž skupina je výhodné připojena k (C^-Cjlq )uhlovodíkovému biradikálu.

Vhodnými příklady uhlovodíkových biradikálu jsou biradikály odvozené od benzenu, alkanů s 1 až 6 atomy uhlíku, alkenů se 2 až 6 atomy uhlíku a alkylbenzenů s 1 až 4 atomy uhlíku v alkylové části.

Příklady vhodných chelatorů obecného vzorce III jsou popsány v mezinárodní patentové přihlášce WO 89/07456, stejně jako nesubstituované nebo substituované 2-iminothiolany ‘ a 2-iminothiacyklohexanony, obzvláště 2-imino-4-merkaptomethylthiolan.

Výše uvedené značené biotinové sloučeniny byly testovány na řadě vhodných modelových experimentů, které umožňují předvídat výsledky pro aplikace in vivo. Tyto experimenty jsou popsány v příkladech. Z výsledku těchto experimentů bude zřejmé, že značené biotinové sloučeniny podle tohoto vynálezu mají vlastnosti, které způsobují, že jsou vhodné pro diagnostické a léčebné účely. Pokud je značeno vhodným atomem pro diagnostické účely, značená biotinová sloučenina.zůstává, dostatečnědlouho neporušena po podání, co dovoluje zobrazit cílový tumor bez presentace porušujícího pozadí. Jestliže je značeno vhodným radioizotopem pro léčebné účely, takto značené biotinové sloučeniny jsou nadějné terapeutické přípravky pro ošetřování řady maligních tumorů.

Nové biotinové sloučeniny značené kovem podle tohoto. vynálezu se mohou připravovat způsobem, který je znám jako takový pro příbuzné sloučeniny. K tomuto účelu se biotinová molekula deřivatizuje vhodným chelatotvorným činidlem jaké je vymezeno výše, například N_tPgS(₄__t_g) tetradentátním chelatotvorným činidlem nebo EDTA.

DTPA atd., po zavedení prostorové skupiny Sp jako je definována výše, po kterém se dostane sloučenina obecného vzorce I

ve kterém • 9 9 * · ♦· • 9··· · ··· • «9 *· *999 * • * * · 9 99 _v* 99 ···· η znamená 1 nebo 2,

R představuje chelatotvornou skupinu k chelatizaci atomu kovu a

Sp je prostorová skupina, která obsahuje alespoň 4 atomy . .. vytvářející rozestup mezi NH a R,......

se nechá reagovat s kovem, jak je zde definován výše, ve formě soli nebo chelatu vázaného k poměrně slabému chelatoru za účelem vytvoření komplexu.

Vhodné příklady soli nebo chelatů požadovaného kovu jsou ^{1 i:i}In-citrát a -acetát, ⁹^^m-Tc-tartrát a podobně. Reakce vedoucí ke vzniku komplexu se může obecně provádět jednoduchým způsobem a za mírných podmínek.

Tento vynález se také týká biotinové sloučeniny obecného vzorce I, jak je definována výše, přičemž tato sloučenina se může používat pro svrchu popsaný způsob přípravy značené biotinové sloučeniny.

Přítomný vynález se dále týká farmaceutického přípravku, obsahujícího kromě farmaceuticky přijatelné nosné látky a pokud je žádoucí alespoň jedné farmaceuticky přijatelné pomocné látky jako aktivní látku značenou biotinovou sloučeninu, která je zde vymezena výše.

Vynález se také týká způsobu detekce a lokalizace tumorů v těle teplokrevného žijícího jedince, který spočívá v tom, že se

i) podá tomuto jedinci přípravek obsahující (strept)avidin ve spojení s polypeptidem projevujícím selektivní afinitu k uvedenému tumoru, ii) načež se po avidinaci tohoto tumoru podá uvedenému jedinci přípravek obsahující množství dostatečné pro vnější zobrazení značené biotinové sloučeniny, jak je vymezena výše, přičemž biotinová sloučenina je značena

a) radioaktivním kovovým izotopem vybraným ze souboru sestávajícího z ^99mTc, ²⁰³Pb, ⁶⁷Ga, ⁶®Ga, ⁷²As, -^In, ^113mIn, ⁹⁷Ru, ⁶²Cu, ⁶⁴Cu, ⁵²Fe, ^52mMn a ⁵¹Cr nebo

b) paramagnetickým atomem kovu zvoleným ze souboru sestávajícího z Cr, Mn, Fe, Co, Ni, Cu, Pr, Nd, Srn, Yb, Gd, Tb, Dy, Ho a Er, a iii) konečné podrobí tento jedinec vnějšímu zobrazeni cílových míst v těle tohoto jedince ve vztahu k aktivitě pozadí.

Na místo výše popsaného dvoustupňového postupu se může použít svrchu diskutované předem cílené třístupňové metody. Při této metodě se používá dále popsaného postupu: i-a) podá se uvedenému jedinci přípravek obsahující biotinyloVaný polypeptid, který projevuje selektivní afinitu k tumoru, i-b) potom se podá přípravek obsahující (strept)avidin, přičemž oba kroky nahrazují výše popsaný krok i).

Tento vynález se také týká způsobu intraoperativní detekce a lokalizace tumorů v těle teplokrevných žijících jedinců, který zahrnuje

i) podání uvedenému jedinci přípravku obsahujícího (strept)avidin ve spojení s polypeptidem projevujícím selektivní afinitu k uvedenému tumoru, ii) poté, po avidinaci tohoto tumoru, podání uvedenému jedinci přípravku obsahujícího značenou biotinovou sloučeninu, jak je vymezena výše, v množství dostatečném pro detekci • · • ··· τ záření sondou, přičemž biotinová sloučenina je značena a

iii) konečně poté, co se ponechá aktivní látka vázat a absorbovat v tumoru a po clearanci krve od radioaktivity, podrobení tohoto jedince rádioimunodetekční technice v příslušné oblasti těla tohoto jedince, za použití sondy pro detekci τ zářeni. ......

Výše zmíněný radioizotop, tedy ¹⁶¹Tb, dovoluje použít takto značenou peptidovou sloučeninu v technice radioaktivně vedené chirurgie, ve které se relevantní tkáně v těle pacienta mohou detekovat a lokalizovat intraoperativně pomocí sondy pro detekci τ záření. Chirurg muže intraoperativně použít této sondy k nalezeni poškození, ve kterém se nastává absorbce sloučeniny značené uvedeným radioizotopem, co je emitor τ fotonu o nízké energii.

Je zřejmé, že na místo dvoustupňového postupu se může použít třístupňového postupu, jak je zde rozebráno výše.

Biotinové sloučeniny podle tohoto vynálezu za předpokladu, že jsou radioaktivně značeny izotopy vhodnými k tomuto účelu, se mohou použít pro léčebné ošetřování tumorů. Tak vynález se dále týká způsobu léčebného ošetřování tumorů v těle teplokrevného žijícího jedince, který spočívá v tom, že se

i) podá tomuto jedinci přípravek obsahující (strept)avidin ve spojení s polypeptidem projevujícím selektivní afinitu k uvedenému tumoru, ii) načež se po avidinaci tohoto tumoru podá uvedenému jedinci přípravek obsahující značenou biotinovou sloučeninu, jak je vymezena výše, v množství dostatečném pro boj s tumory nebo pro potlačení tumorů, přičemž značená biotinová • · • ··· • · • »· sloučenina odpovídá sloučenině zde definované výše a tato biotinová sloučenina je značena kovovým izotopem zvoleným ze souboru sestávajícího z ^114mIn, ¹⁸⁶Re, ¹⁸⁸Re, ⁷⁷As, ⁹⁰Y, ⁶⁵Ga, ⁶⁷Cu, ¹⁶⁹Er, ^117lnSn, ¹²¹Sn, ¹²⁷Te, ¹⁴²Pr, ¹⁴³Pr, ¹⁹⁸Au, ¹⁹⁹Au, ¹⁴⁹Tb, ¹⁶¹Tb, ¹⁰⁹Pd, ¹⁶⁵Dy, ¹⁴⁹Pm, ¹⁵¹Pm, ¹⁵³Sm, ¹⁵⁷Gd, ¹⁵⁹Gd, ¹⁶⁶Ho, ¹⁷²Tm, ¹⁶⁹Yb, ¹⁷⁵Yb, ¹⁷⁷ ¹⁰⁵Rh a ¹¹³Α9..............

Lu,

Bude zřejmé, že místo výše uvedeného dvoustupňového postupu se múze použit třístupňový předem cílený způsob, jak je rozebráno výše.

V případě, že se jako diagnostický přípravek používá radioaktivně značná biotinová sloučenina, je často nemožné dát přípravek připravený pro okamžité použití uživateli k jednomu použití v souvislosti s často malým časem skladovatelnosti radioaktivně značené sloučeniny a/nebo krátkým poločasem rozpadu použitého radionuklidu. V takových případech uživatel bude provádět značící reakci s radionukleidem v klinické nemocnici nebo v laboratoři. K tomuto účelu se potom nabízí různé reakční složky pro uživatele ve formě tak zvaného kitu. Je zřejmé, že manipulace nezbytná k provedení požadované reakce má být tak jednoduchá, jak jen je možné, aby umožnila uživateli připravit z kitu radioaktivně značený přípravek s použitím zručnosti, která je nutná pro jeho jedno použití. Proto tento vynález se také týká kitu pro přípravu radiofarmaceutického přípravku.

Kit podle tohoto vynálezu může obsahovat

a) přípravek obsahující (strept)avidin ve spojení s polypeptidem projevujícím selektivní afinitu k tumoru,

b) biotinovou sloučeninu obecného vzorce I znázorněného výše, ve kterém symboly mají svrchu uvedený význam, ke kteréžto • * · · * · * · • «· · ♦ · · · 9 999 • · 9 99 · · ··»«· • · · · · · ·9

9·9 99 9999.99 sloučenině, pokud je to žádoucí, je přidána inertní farmaceuticky přijatelná nosná látka a/nebo formulační prostředek a/nebo pomocná látka,

c) roztok soli nebo chelatu kovového izotopu vybraného ze souboru sestávajícího z ²⁰³Pb, ⁶⁶Ga, ⁶⁷Ga, ⁶⁸Ga, ¹¹¹In, ^113raIn, ^114mIn, ⁹⁷Ru, ⁶²Cu, ^99mTc, ¹⁸⁶Re,

⁷²As, ¹⁸⁸Re, ^117mSn., ¹²¹Sn, ¹²⁷Te, ¹⁴²Pr, ¹⁴³Pr, ¹⁹⁸Au, ¹⁹⁹Au, ¹⁴⁹Tb, ¹⁶¹Tb, ¹⁰⁹Pd, ¹⁶⁵0y, ¹⁴⁹Pm, ¹⁵¹Pm, ¹⁵³Sm, ¹⁵⁷Gd, ¹⁶⁶Ho, ¹⁷²Tm, ¹⁶⁹Yb, ¹⁷⁵Yb, ¹⁷⁷Lu, ¹⁰⁵Rh a ^lxlAg, a

d) instrukce pro použití s předpisem pro reakci složek přítomných v kitu.

Výhodně biotinová sloučenina určená k použití jako složka výše uvedeného kitu je modifikována prostorovou skupinou Sp a chelatotvorným činidlem R, jak je uvedeno výše. Výsledná biotinová sloučenina usnadňuje stále připojení radionuklidu jednoduchým způsobem. Vhodná chelatotvorná činidla pro modifikaci biotinové molekuly jsou zde popsána podrobněji výše. ^wt^pq^s(4-t-q) ^tetradentátní chelatotvorná činidla, dusík obsahující di- nebo polyoctové kyseliny nebo jejich deriváty, stejně jako sloučeniny uvedené výše, poskytují předem neobyčejně vhodné připojení různých kovových radionuklidů, jako ³³¹In a ·*·^33ιηΙη, k molekule biotinu. Kit k dodáni pro uživatele múze také zahrnovat složku (složky) definované pod a) a b) výše, společné s instrukcemi pro použití, zatímco roztok soli nebo chelatu radionuklidu, definovaný pod c) výše, který má omezený poločas skladováni, se může dodávat pro uživatele odděleně.

Výše uvedený kit je určen pro použití ve dvoustupňovém předpisu. Pokud na místo toho se má použít třístupňový předem cílený způsob, jak bylo uvedeno výše, je vhodný dále uvedený «· · · · · ·· ♦ ♦ • ··» * ···· ♦♦ *· • ··· ♦ · · · ··· * · • · · · ♦ ···· ··« ··· ·· ·· ·· . ··

- 15 kit:

a-i) přípravek obsahující biotinylovaný polypeptid, který projevuje selektivní afinitu k tumoru a a-ii) přípravek obsahující (strept)avidin, přičemž oba přípravky nahrazují výše uvedený přípravek a).

V případě, že kit slouží, k přípravě, radiofarma- . . .

ceutického přípravku, který je značen ^99mTc, ¹⁸⁶Re nebo ¹⁸⁸Re, takový kit podle tohoto vynálezu může zahrnovat,' kromě složky (složek) definovaných pod a) a b) výše,

c) redukční činidlo a pokud je to žádoucí, chelator a

d) instrukce pro použití s předpisem pro reakci složek kitu s ^99mTc ve formě technecistanového roztoku nebo s ¹⁸⁶Re nebo 1 op

Re ve formě rhenistanového roztoku.

Jestliže je to žádoucí, určité složky kitu mohou být kombinovány za předpokladu, že jsou kompatibilní. Těchnecistanový nebo rhenistanový roztok může jednoduše dostat uživatel z vhodného výrobního zařízení.

Pokud radionuklid je sám přítomen v kitu, reakce tvořící komplex s biotinovou sloučeninou obecného vzorce I uvedenou výše se může jednoduše dosáhnout spojením složek v neutrálním nebo pufrovaném prostředí a vyvoláním jejich reakce. Pro tento účel může být radionuklid dodán biotinové sloučenině ve formě chelatové vazby ke srovnatelně slabému chelatoru, jak je zde popsáno výše.

Pokud kit zahrnuje biotinovou sloučeninu, jak je zde vymezena výše, a je určen pro přípravu radiofarmaceutického přípravku, který je značen ^99mTc, ¹⁸⁶Re nebo ¹⁸⁸Re, radionuklid bude výhodně přidán odděleně ve formě technecistanového nebo rhenistanového roztoku. V tomto případě kit

A	« «	♦	a ·		*
• *·	• ·		• a		··
•	• · 9	• ·	« ·· ·	•	•
4	• ·	« ·	*	•	•
		a ·	• a		*·

bude obsahovat vhodné redukční činidlo a pokud je to žádoucí, chelator, přičemž redukční činidlo má redukovat technecistan nebo rhenistan. Jako redukční činidlo se může použít například ditioničitan nebo kovové redukční činidlo. Jako redukční činidlo pro výše uvedené kity se výhodně používá kovové redukční činidlo, například Sn(II), Ce(III), Fe(II), Cu(I), Ti(III) nebo Sb(III), přičemž Sn(II) je mimořádné.....

vhodný. Příklady vhodných sloučenin dvojmocného cínu jsou chlorid cínatý, vinan cínatý, fosfonát nebo difosforečnan cínatý a glukohepotonat cínatý. Modifikovaná biotinová složka výše uvedených kitu, to znamená výhodně biotinová sloučenina, se může dodávat jako roztok, například ve formě fyziologického roztoku na bázi chloridu sodného, nebo některého pufrovaného roztoku, nebo může být přítomna ve vysušeném stavu, například za lyofilizovaných podmínek. Pokud se používá jako složka pro injekční kapalinu, má být sterilní, přičemž v případě kdy je složka v suchém stavu, uživatel má výhodně použít sterilní fyziologický roztok na bázi chloridu sodného jako rozpouštědlo. Jestliže je to žádoucí, výše zmíněná složka může být stabilizována obvyklým způsobem pomocí vhodných stabilizátorů, například kyseliny askorbové, kyseliny gentisové nebo jejich solí, nebo může obsahovat jiné pomocné prostředky, například plniva, jako je glukóza, laktóza, mannitol a podobně.

Příklady provedeni vynálezu

Vynález bude nyní podrobněji popsán v souvislosti s dále zařazenými zvláštními příklady.

Příklad 1

Způsob syntézy 6-[N-(biotinylsulfoxid)-p-aminobenzylJ- 17 -1,4,8,11-tetraazaundekanu (6) (obr. 1)

Obr. 1: biotinsulfoxid-N₄

Biotinsulfoxid se syntetizuje jak popsal Melville [D, B. Melville, J. Biol. Chem., 208, 495 (1954)]. Sulfoxid existuje ve dvou izomerních formách: a-(+)-biofinsulfoxid a p-(-)-biofinsulfoxid (obr. 2).

Obr. 2: Dvě izomerní formy biotinsulfoxidu

Tyto izomerní formy se mohou oddělit frakcionovanou krystalizací a/nebo chromatografií na silikagelu.

6-(p-Nitrobenzyl)-1,4,8,ll-tetraaza-5,7-dioxoundekan (1)

1,07 g (4 mmol) diethylesteru kyseliny p-nitrobenzylmalonové [G. Ruser a kol., Bioconj. Chem., 2, 345 (1990)] se suspenduje ve 40 ml methanolu a k suspenzi se přidá 5,3 ml (80 mmol) ethylendiaminu. Směs se vaří pod zpětným chladičem po dobu 12 hodin. Rozpouštědlo a přebytek ethylendiaminu se odpaří a surový produkt se čistí chromatografií na silikagelu (CHCl₃/MeOH/NH₃(25%) = 5:5:1, R_f = 0,3). výtěžek odpovídá 1/4 g.

MS (FAB) m/z (relativní intenzita): 324 (MH⁺, 100);

^H-NMR (300 MHz; dg-DMSO): 8,14 (d, 2H, O-Ar~H-), 8,04 (t, 2H, CH₂-NH-CO), 7,46 (d, 2H, m-Ar-H), 3,45 (t, 1H, CH-CH₂-Ar), 3,15 (d, 2H, CH₂-Ar), 3,05 (m, 4H, CH₂-NH-),

2,50 (m, 4H, CH-NH₂);

¹³C-NMR (90 MHZ, d₆-DMSO): 168,25 (2C, C=O), 147,71 (1C, C(Ar)-NO₂), 145,86 (1C, CH₂-C(Ar)), 129,95 (2C, Ar), 123,06 (2C, Ar), 54,00 (1C, CH-CH₂-Ar), 41,93 (2C, CH₂-NH(CO)), 40,86 (2C, CH₂-NH₂), 34,48 (1C, ČH₂-Ar).

Elementární analýza odpovídá ^C14^H21^N5°4·

6-(p-Nitrobenzyl)-1,4,8,11-tetraazaundekan (2)

480 mg (1,48 mmol) surové sloučeniny (1) se nechá reagovat za teploty místnosti s 30 ml (20 ekvivalentů) 1M boranu v tetrahydrofuranovém roztoku a reakční směs se vaří pod zpětným chladičem po dobu 60 hodin. K rozložení přebytku boranu se opatrně přikape přebytek methanolu k reakční směsi, která se předem ochladila na teplotu 0 °C. Methanol se odpaří za sníženého tlaku a odparek se suspenduje v ethanolu a vystaví působení ultrazvuku během několika minut. Nerozpuštěný podíl se odfiltruje a do filtrátu se zavádí plynný chlorovodík po dobu 20 minut. Vzniklá sraženina se zachytí a dále čistí sloupcovou chromatografií (silikagel, i ··» • · ··* · · · · · · * · · • * · · · · · · «| 99 ·· *·

- 19 CHCl₃/MeOH/NH₃(25%) = 5:5:2). Výsledný vyčištěný amin se rozpustí v ethanolu a dostane se odpovídající hydrochloridová sůl jako bílá tuhá látka zaváděním plynného chorovodíku do tohoto roztoku (460 mg). Při jiném provedení se sraženina přímo rekrystaluje z methanolu nasyceného plynným chlorovodíkem, bez předchozího čištění chromatografií.

Výtěžek odpovídá 70 %;

R_f =0,36 (SÍ0₂, CHCl₃/MeOH/NH₃(25%) = 5:5:2);

MS (FAB) m/z (relativní intenzita): 296 (MH⁺, 100); ^H-NMR (360 MHz, dg-DMSO) (hydrochlorid): 8,21 (d, 2H, O-Ar-NO₂), 7,68 (d, 2H, m-Ar-N0₂), 3,50-2,64 (m, 15H) ;

¹³C-NMR (90 MHz, dg-DMSO): 146,29 (2C, C(Ar)NO₂, CH₂-Ar), 130,46 (2C, Ar), 123,36 (2C, Ar), 47,56, 44,68, 35,04, 34,97.

Elementární analýza je v souladu s ^c14^c14^h29ⁿ5°2'

N,N,N',N'-Tetabutoxykarbonyl-6-(p-nitrobenzyl)-1,4,8,11-tetraazaundekan (3)

1,5 g (3,5 mmol) sloučeniny (2) se suspenduje v 5 ml dioxanu a k suspenzi se přidává ÍN roztok hydroxidu sodného až do hodnoty pH 12. K reakční směsi se při teplotě tání ledu přidá 4,5 ml (21 mmol, 6 ekvivalentů) di-terc.-butyldikarbonátu ve 30 ml dioxanu a 40 ml 1N roztoku hydroxidu sodného. Směs se míchá za teploty místnosti přes noc. Ke směsi se potom přidá 100 ml diethylétheru a 50 ml vody. Etherová vrstva se oddělí a čtyřikrát extrahuje vždy 30 ml vody, vysuší síranem sodným a odpaří. Výsledný olej se nemůže krystalovat, ale ukazuje strukturu potvrzující FAB-MS (m/z: 696) a je čistý podle chromatografie na tenké vrstvě (silikagel, Rf = 0,5, směs ethylacetátu a hexanu v poměru 9:1). Výtěžek 2,2 g, to jest 90 %. FAB-MS: m/z: 696. ^H-NMR and IČ jsou v souladu se strukturou.

Ν,Ν’, N,N'-Tetrabutoxykarbonyl-6-(p-aminobenzyl)-l,4,8,11-tetraazaundekan (4)

1,3 g (1,9 mmol) sloučeniny (3) se rozpustí ve 40 ml 80% methanolu, k .roztoku se přidá 150 mg 10% palladia na uhlí a hydrogenace se provádí po dobu 3 hodin, za teplotý místnosti. Katalyzátor se odfiltruje, směs se odpaří a chromatografií na silikagelu se dostane čistá látka (Silica gel 60, kolona 32 x 2 cm, eluent: směs hexanu a ethylacetátu v poměru 2:3). Výtěžek odpovídá 0,53 g (43 %). Sloučenina se čistí chromatografií na tenké vrstvě a vysokoúčinnou kapalinovou chromatografií a je charakterizována FAB-MS (m/z =666) a ¹H-NMR.

6-[N-(Biotinylsulfoxid)-p-aminobenzyl]-N,N,N'-tetrabutoxykarbonyl-l,4,8,ll-tetraazaundekan (5)

34,4 mg a-( + )-biotinsulfoxidu se rozpustí v 700 μΐ dimethylformamidu, k roztoku se přidá 42,5 mg 0-(7azabenzotriazol-l-yl)-1,1,3,3-tetramethyluroniumhexafluorfosfátu (HATU) a 23 μΐ diisopropylethylaminu (Húnigova báze) a směs se nechá za teploty místnosti po dobu 10 minut. Poté se přidá 88 mg sloučeniny (4) a 23 μΐ Hunigovy báze v 1 ml dimethylformamidu. V míchání reakční směsi se pokračuje po dobu 20 minut. Reakční směs se přidá ke 2 ml ethylacetátu a 2 ml 5% roztoku hydrogenuhličitanu sodného. Organická vrstva se dvakrát promyje roztokem hydrogenuhličitanu sodného a nasyceným roztokem chloridu sodného, vysusí síranem sodným, odpaří a krystaluje ze systému diethylether, isopropylether a hexan. Výtěžek: 96 mg (80 %). Sloučenina se čistí chromatograf icky a charakterizuje FAB-MS (m/z = 908).

6-[N-(Biotinylsulfoxid)-p-aminobenzyl)-1,4,8,11-tetraazaundekan (6) (Obr. 1) ' 96 mg sloučeniny (5) se rozpustí ve 2 ml kyseliny trifluoroctové, thioanisolu a vody v poměru 96:2:2 a ponechá po dobu 2 hodin za teploty místnosti. Poté se látka vysráží přidáním 2 ml diethyletheru a vysuší za vysokého vakua. Výtěžek odpovídá 96 mg. K odstranění malého množství nečistot a zbývajícího thioanisolu se sloučenina čistí C18-HPLC. FAB-MS: m/z = 508.

Příklad 2

99m_Tc značení sloučeniny (6) μg sloučeniny (6), získané jak je popsáno v příkladu 1, se rozpustí ve 300 μΐ vodného roztoku (5 mg) dihydrátu citrátu sodného. K tomuto roztoku se přidá 200 až 400 μΐ (1000 až 2000 MBq) ^95mTcO4“ (eluátové vyvíjení) a 20 μΐ (20 μg) čerstvě připraveného 10 mg roztoku dihydrátu chloridu cínatého profouknutého dusíkem (10 mg/10 ml 0,lM kyseliny chlorovodíkové). Hodnota pH se upraví na 10 roztokem hydroxidu sodného. Reakční směs se udržuje za teploty místnosti po dobu 30 minut. Výtěžek komplexování je vyšší než 97 %. Na koloně-Hamilton PRP-1 (ΙΟμιη, 4,1 x 150 mm) a při isokratické eluci s 10 mM 100% fosfátového pufru (hodnota pH 7, 0 až 5 minut), s následujícím lineárním gradientem (5 až 10 minut, 20% MeCN a 80% fosfátový pufr) a isokratickou elucí až do 15 minut se dostanou ^99mTc komplexní eluty za 10 min 4 s (průtok: 1,5 ml/min). Za stejných podmínek se eluují (99mTc)-6-(p-aminobenzyl)-1,4,8,11-tetraazaundekanové eluty ♦ * ·

- 22 za 8 min 45 s. Komplex je stabilní v citrátu a fosfátovém pufru po dobu alespoň 10 hodin.

Příklad 3

Vázání (^99mTc)-sloučeniny (6) k avidinu (^99mTc)-sloučenina (6), získaná jak je popsáno v příkladu 2, se umístí na kolonu avidinu kondenzovaného ke kuličkám agarózy, které se předem třikrát zpracovaly vždy s 1,5 ml fosfátového pufru (hodnota pH 8,9.). Kolona se pětkrát promyje vždy 1,5 ml pufru. Zůstatková aktivita na koloně činí 97+3% (n = 3). Pokud se kolona předem nasytí studeným biotinem, zachová se méně než 2 % aktivity. Závěrem tak je, že vázání avidinu je specifické.

Přiklad 4

Stabilita (^99mTc)-sloučeniny (6) v lidském seru

Biotinidáza je enzym nacházející se v různých orgánech a v lidském seru, kde funguje jako biotin-amid amidohydroláza, například hydrolýzuje kyselinu N-(d-biotinyl)-p-aminobenzoovou a biocytin. Studuje se stabilita amidové vazby v čerstvém lidském seru. Vše se ponechá během 4 hodin a poté se dostane množství neporušené (^99mTc)-sloučeniny (6),

T r*· získané v příkladu 2, které pokleslo přibližně o 15 + 2 %, co je daleko lepší než u odpovídajícího konjugátu s biotinem. Důsledkem toho je skutečnost, že optimální doba scintigrafie s konjugátem biotinu značeným ⁹⁹ⁱⁿ-Tc je za 2 hodiny po injekci, přičemž stabilita (⁹⁹ⁱⁿTc)-sloučeniny (6) v lidském seru je přiměřená pro studii na lidech.

SPQLgéNÁ AúVOKÁŤNÍ KANĎBLÁŠ všetečka ZELENÝ Svorník kalenský A PARTNEŘI

Claims

PATENTOVÉ NÁROKY

1. Značená biotinová sloučenina, kde tato biotinová sloučenina je představována obecným vzorcem I ve kterém *

n znamená 1 nebo 2,

R představuje chelatotvornou skupinu k chelatizaci atomu kovu a

Sp je prostorová skupina, která obsahuje alespoň 4 atomy vytvářející rozestup mezi NH a R a kde tato biotinová sloučenina je značena atomem kovu zvoleným ze

a) souboru sestávajícího z radioaktivních izotopů ^99mTc,

²⁰³Pb, ⁶⁶Ga, ⁶⁷Ga, ⁶⁸ Oa, ⁷² As, In, ⁹⁷Ru, ⁶²Cu, ⁶⁴CU, ⁵²Fe, ^52mMn, ⁵¹ Cr, ^⁸⁸ Re, ¹⁸⁸ Re, ⁷⁷As, ⁹⁰Y, ⁶⁷Cu, ¹⁶⁹Er, ^117mSn, ¹²¹Sn, 127_Tef 142_pr/ ³⁴³Pr, ¹⁹⁸Au, ¹⁹⁹Au, ¹⁴⁹Tb, ¹⁶¹Tb, ¹⁰⁹Pd, ¹⁶⁵oy, ¹⁴⁹Pm, ¹⁵¹Pm, ¹⁵³Šm, ¹⁵⁷Gd, ¹⁶⁶Ho, ¹⁷²Tm, ¹⁶⁹Yb, ¹⁷⁵Yb, ¹⁷⁷LU, ¹⁰⁵Rh a ^11:LAg, nebo

b) souboru sestávajícího z paramagnetických atomů kovů Cr, • 9 • *

Μη, Fe, Co, Ni, Cu, Pr, Nd, Sm, Yb, Gd, Tb, Dy, Ho a Er, přičemž uvedený atom kovu je připojen k biotinové sloučenině pomocí zmíněné chelatotvorné skupiny.
2. Značená biotinová sloučenina podle nároku 1, kde prostorovou skupinou Sp je skupina obecného vzorce II ve kterém znamená biradikál vzorce

-NH-(CH₂)_m- nebo -NH-C(=X)-(CH₂)_X-Y-(CH₂)_m-C(CO₂H)H-, kde x a y jsou každý nezávisle na sobě 0 nebo 1, m je celé číslo od 1 do 4, p znamená celé číslo od 0 do 4,

X představuje atom kyslíku nebo síry a

Ϋ znamená skupinu vzorce NH, CO nebo atom síry.
3. Značená biotinová sloučenina podle nároku 1 nebo

2, kde chelatotvorná skupina R je zvolena ze souboru • · sestávajícího z N_tPgS(₄__t_g) tetradentátních chelatizačních činidel, kde t + q = 2 - 4 nebo ze skupin odvozených od kyseliny ethylendiamintetraoctové (EDTA), kyseliny diethylentriaminpentaoctové (DTPA), kyseliny cyklohexyl-1,2-diamintetraoctové (CDTA), kyseliny ethylenglykol-Ο,Ο'-bis(2-aminoethyl)-N,N,N',N'-tetraoctové (EGTA), kyseliny N,N-bis(hydroxybenzyl)ethylendiamin-N,N’-dioctové (HBED), kyseliny triethylentetraminhexaoctové (TTHA), kyseliny 1,4,7,10-tetraazacyklododekan-N,N',N,N¹-tria -tetraoctové (D03A a DOTA), kyseliny 1,4,7,10-tetraazacyklotridekan-Ν,Ν',N,N'-tri- a -tetraoctové (TRI3A a TRITA), kyseliny hydroxyethyldiamintrioctové (HEDTA), kyseliny 1,4,8,ll-tetraazacyklotetradekan-N,N',N,N'-tetraoctové (TETA), substituované DTPA, substituované EDTA nebo od deferoxaminu nebo od sloučeniny obecného vzorce III ve kterém

Rjl znamená popřípadě substituovanou uhlovodíkovou skupinu s rozvětveným nebo nerozvětveným řetězcem, přičemž tato skupina je popřípadě přerušena alespoň jedním heteroatomem zvoleným z atomu dusíku, kyslíku a síry a/nebo alespoň jednou skupinou NH a

Q znamená skupinu, která je schopna reagovat s aminoskupinou peptidu a která je výhodně vybrána ze souboru sestávajícího z karbonylu, karbimidoylu, N-(C^-Cg )alkylkarbimidoylu, N-hydroxykarbimidoylu a « · * · v « *

- 26 N-(C^-Cg)alkoxykarbimidoylu.
4. Značená biotinová sloučenina podle nároku 3, kde chelatotvorná skupina R je vybrána ze souboru zahrnujícího obecné vzorce IV až XIII

R₇ O di HOOC ' R_e

HH ^hnx

H₂C-CH ^R··^

Rh ^x G HG ^z Ή12

R10 (IV) (V)

Y

R_1S HN ^? ”>IH R_v

OÍd HO¹ « Ι1· ve kterém

Rg až R₂o znamenají každý nezávisle na sobě atom vodíku nebo alkylovou skupinu s 1 až 4 atomy uhlíku, za předpo.......kladu, že alespoň jeden z Cg až Cg' znamená symbólY,

R₂₁ znamená atom vodíku nebo C0₂~alkylovou skupinu s 1 až

4 atomy uhlíku v alkylové části, '

R₂₂ a R₂₃ jsou každý jednotlivě alkylkarbonylová skupina s 1 až 4 atomy uhlíku v alkylové části, benzoylová skupina nebo benzylová skupina, v znamená 0 nebo 1, s znamená 2 nebo 3,

Ř₂4 představuje skupinu vzorce CH₂COOH nebo její funkční derivát,

A znamená alkylenovou skupinu s 1 až 4 atomy uhlíku, jestliže je žádoucí, substituovanou C0₂-alkylovou, CH₂CO-alkylovou, CONH₂ nebo CONHCH₂CO₂-alkylovou skupinou, fenylenovou skupinu nebo fenylenovou skupinu substituovanou C0₂ ^_alkylovou skupinou, přičemž alkylové skupiny'obsahují 1 až 4 atomy uhlíku, <

G znamená skupinu NH nebo atom síry,

Y znamená valenční vazbu nebo funkční skupinu schopnou • · · · · · se vázat s prostorovou skupinou a znamená atom síry nebo kyslíku.
5. Způsob přípravy značené biotinové sloučeniny podle nároku 1, vyznačující se tím, že se biotinová sloučenina obecného vzorce I znázorněného v nároku IJ kde symboly mají význam uvedený v nároků í, nechá reagovat s atomem kovu, jak je definován v nároku 1, ve formě soli nebo chelatu vázaného k poměrně slabému chelatoru k vytvoření komplexu.
6. Biotinová sloučenina k použiti podle nároku 5, která má obecný vzorec I

O' ve kterém znamená 1 nebo 2, představuje chelatotvornou skupinu k chelatizaci atomu kovu a

Sp je prostorová skupina, která obsahuje alespoň 4 atomy vytvářející rozestup mezi NH a R.
7. Farmaceutický přípravek, vyznačuj ící se t í n, že obsahuje kromě farmaceuticky přijatelné nosné látky a pokud je žádoucí alespoň jedné farmaceuticky přijatelné pomocné látky jako aktivní látku značenou biotinovou sloučeninu podle nároku 1, 2, 3 nebo 4.

'
8. Způsob detekce a lokalizace tumorů v těle teplokrevného žijícího jedince, vyznačující se t í m, že se

i) podá tomuto jedinci přípravek obsahující (strept)avidin ve spojení s polypeptidem projevujícím selektivní afinitu k uvedenému tumoru, ii) načež se po avidinaci tohoto tumoru podá uvedenému jedinci přípravek obsahující množství dostatečné pro vnější zobrazení značené biotinové sloučeniny podle nároku 1, 2, 3 nebo 4, přičemž biotinové sloučenina je značena

a) radioaktivním kovovým izotopem vybraným ze souboru sestávajícího z ^99mTc, ²⁰³Pb, ⁶⁷Ga, ⁸⁸Ga, ⁷²As, '••^L1In, ^113mIn, ⁹⁷Ru, ⁶²Cu, ⁶⁴Cu, ⁵²Fe, ^52mMn a ⁵¹Cr nebo

b) paramagnetickým atomem kovu zvoleným ze souboru sestávajícího z Cr, Mn, Fe, Co, Ni, Cu, Pr, Nd, Sm, Yb, Gd, Tb, Dy, Ho a Er, a iii) konečně podrobí tento jedinec vnějšímu zobrazení ke stanoveni cílových míst v těle tohoto jedince ve vztahu k aktivitě pozadí.
9. Způsob detekce a lokalizace tumorů v těle teplokrevného žijícího jedince, vyznačující se tím, že se

i) podá uvedenému jedinci přípravek obsahující biotinylovaný polypeptid, který projevuje selektivní afinitu k tumoru, ii) potom podá přípravek obsahující (strept)avidin, iii) načež se po avidinaci tohoto tumoru podá uvedenému jedinci přípravek obsahující množství dostatečné pro vnější • 9 • · · ·

9 9 9

- 30 zobrazení značené biotinové sloučeniny podle nároku 1, 2, 3 nebo 4, přičemž biotinová sloučenina je značena

a) radioaktivním kovovým izotopem vybraným ze souboru sestávajícího z ^99mTc, ²⁰³Pb, ⁶⁷Ga, ⁶⁸Ga, ⁷²As, ¹¹¹In, ^113raIn, ⁹⁷Ru, ⁶²Cu, ⁶⁴Cu, ⁵²Fe, ^52mMn a ⁵¹Cr nebo

b) parámagnetickým atomem kovu zvoleným ze souboru sestávajícího z Cr, Mn, Fe, Co, Ni, Cu, Pr, Nd, Srn, Yb, Gd, Tb, Dy, Ho a Er, a iv) konečně podrobí tento jedinec vnějšímu zobrazení ke stanovení cílových míst v těle tohoto jedince ve vztahu k aktivitě pozadí.
10. Způsob intraoperativní detekce a lokalizace tumorů v těle teplokrevných žijících jedinců, vyznačuj ící se t í m, že se

i) podá uvedenému jedinci přípravek obsahující (strept)avidin ve spojení s polypeptidem projevujícím selektivní afinitu k uvedenému tumoru, ii) poté, po avidinaci tohoto tumoru, podá uvedenému jedinci přípravek obsahující značenou biotinovou sloučeninu podle nároku 1, 2, 3 nebo 4, v množství dostatečném pro detekci ί zářeni sondou, přičemž biotinová sloučenina je značena ¹⁶^Tb, a iii) konečně poté, co se ponechá aktivní látka vázat a absorbovat v tumoru a po clearanci krve od radioaktivity, podrobí tento jedinec radioimunodetekční technice v příslušné oblasti těla tohoto jedince, za použití sondy pro detekci i záření.
11. Způsob intraoperativní detekce a lokalizace tumorů v těle teplokrevných žijících jedinců, vyznačuj ící se t í m, že se

i) podá uvedenému jedinci přípravek obsahující biotinylovaný ·'·· w » — - -* ··· · · · ♦ · · · · ♦ • * · t · · · · ♦ ·· ·«· «· ·* ·· ·· polypeptid, který projevuje selektivní afinitu k tumoru, ii) potom podá přípravek obsahující (strept)avidin, iii) poté, po avidinaci tohoto tumoru, podá uvedenému jedinci přípravek obsahující značenou biotinovou sloučeninu podle nároku 1, 2, 3 nebo 4, v množství dostatečném pro detekci τ záření'sondou, přičemž biotinová sloučenina je značena ¹⁶¹Tb, a iv) konečně poté, co se ponechá aktivní’ látka vázat a absorbovat v tumoru a po clearanci krve od radioaktivity, podrobí tento jedinec radioimunodetekční technice v příslušné oblasti těla tohoto jedince, za použití sondy pro detekci τ záření.
12. Způsob léčebného ošetřování tumorů v těle teplokrevného žijícího jedince, vyznačující se tím, že se

i) podá tomuto jedinci přípravek obsahující (strept)avidin ve spojení s polypeptidem projevujícím selektivní afinitu k uvedenému tumoru, ii) načež se po avidinaci tohoto tumoru podá uvedenému jedinci přípravek obsahující značenou biotinovou sloučeninu podle nároku 1, 2, 3 nebo 4, v množství dostatečném pro boj s tumory nebo pro potlačení tumorů, přičemž biotinová sloučenina je značena kovovým izotopem zvoleným ze souboru sestávajícího z ^114mIn, ¹⁸⁶Re, ^⁸⁸Re, ⁷⁷As, ⁹⁰Y, ⁶⁶Ga, ⁶⁷Cu, ¹⁶⁹Er, ^117mSn, ¹²¹Sn, ¹²⁷Te, ¹⁴²Pr, ¹⁴³Pr, ¹⁹⁸Au, ¹⁹⁹Au, ¹⁴⁹Tb, ¹⁶¹Tb, ¹⁰⁹Pd, ¹⁶⁵Dy, ¹⁴⁹Pm, ¹⁵¹Pm, ¹⁵³Sm, ¹⁵⁷Gd, ¹⁵⁹Gd, ¹⁶⁶Ho, ¹⁷²Tm, ¹⁶⁹Yb, ¹⁷⁵Yb, ¹⁷⁷Lu, ¹⁰⁵Rh a ^mAg.
13. Způsob léčebného ošetřování tumorů v těle teplokrevného žijícího jedince, vyznačující se tím, že se

i) podá uvedenému jedinci přípravek obsahující biotinylovaný polypeptid, který projevuje selektivní afinitu k tumoru, ii) potom podá přípravek obsahující (strept)avidin, iii) načež se po avidinaci tohoto tumoru podá uvedenému jedinci přípravek obsahující značenou biotinovou sloučeninu podle nároku 1, 2, 3 nebo 4, v množství dostatečném pro boj s tumory nebo pro potlačení tumorů, přičemž biotinová sloučenina je značena kovovým izotopem zvoleným ze souboru sestávajícího z ^114mIn, ¹⁸⁶Re, ¹⁸⁸Re, ⁷⁷As, ⁹⁰Y, ⁶⁶Ga, ⁶⁷Cu, 169_Er# 117m_Sní 121_srb 127_τθ_# 142_ρΓ/ 143_pr, 198_AU/ 199^, ¹⁴⁹Tb, ¹⁶¹Tb, ¹⁰⁹Pd, ¹⁶⁵Dy, ¹⁴⁹Pm, ¹⁵¹Pm, ¹⁵³Sm, ¹⁵⁷Gd, ¹⁵⁹Gd, ¹⁶⁶Ho, ¹⁷²Tm, ¹⁶⁹Yb, ¹⁷⁵Yb, ¹⁷⁷Lu, ¹⁰⁵Rh a ⁿⁱAg.
14. Kit přo přípravu radiofarmaceutického přípravku, vyznačující se tím, že obsahuje

a) přípravek obsahující (strept)avidin ve spojení s polypeptidem projevujícím selektivní afinitu k tumorům,

b) biotinovou sloučeninu obecného vzorce I znázorněného v nároku 1, kde symboly mají význam uvedený v nároku 1, ke kteréžto sloučenině, pokud je to žádoucí, je přidána inertní farmaceuticky přijatelná nosná látka a/nebo formulační prostředek a/nebo pomocná látka,

c) roztok soli nebo chelatu kovového izotopu vybraného ze

souboru sestávajícího z ²⁰³Pb, ⁶⁶Ga , ⁶⁷Ga, , ⁶⁸Ga, ⁷²As, ^ιηΙη, 113 in j , ^114mIn, ⁹⁷Ru, ⁶²Cu, ^99mTc, ¹⁸⁶Re, ¹⁸⁸Re, ⁶⁴CU, ⁵²Fe, ^52mMn, ⁵¹Cr, ⁷⁷As, ⁹⁰Y, ⁶⁷CU, ¹⁶⁹Er, ^117roSn, ¹²¹Sn, ¹²⁷Te, ¹⁴²Pr, ¹⁴³Pr, ¹⁹⁸Au, ¹⁹⁹Au, 149_Tb/ ¹⁶¹Tb, ¹⁰⁹Pd, ¹⁶⁵Dy, ¹⁴⁹Pm, ¹⁵¹Pm, ¹⁵³Sm, ¹⁵⁷Gd, ¹⁶⁶Ho/ ¹⁷²Tm, ¹⁶⁹Yb, ¹⁷⁵Yb, ¹⁷⁷Lu, ¹⁰⁵Rh a ^i:L1Ag, a

d) instrukce pro použití s předpisem pro reakci složek přítomných v.kitu.
15. Kit pro přípravu radiofarmaceutického přípravku, vyznačující se tím, že obsahuje a ···

a) přípravek zahrnující biotinylovaný polypeptid, který projevuje selektivní afinitu k tumorům,

b) přípravek obsahující (strept)avidin,

c) biotinovou sloučeninu obecného vzorce I znázorněného v nároku 1, kde symboly mají význam uvedený v nároku 1, ke kteréžto sloučenině, pokud je to žádoucí, je přidána inertní farmaceuticky přijatelná nosná látka a/nebo formulační prostředek a/nebo pomocná látka,

d) roztok soli nebo chelatu kovového izotopu vybraného ze souboru sestávajícího z ²⁰³Pb, ⁶⁶Ga, ⁶⁷Ga, ⁶⁸Ga, ⁷²As, ⁱⁿln, ^113mIn, ^114mln, ⁹⁷Ru, ⁶²Cu, ^99mTc, ⁵⁴Cu, ⁵²Fe, ^52mMn, ⁵¹Cr, ⁷⁷As, ⁹⁰Y, ⁶⁷Cu,

¹²¹Sn, ¹²⁷Te, ¹⁴²Pr, ¹⁴³Pr, ¹⁹⁸Au, ¹⁹⁹Au, ¹⁰⁹Pd, ¹⁶⁵ _Dy, ¹⁴⁹Pm, ¹⁵¹Pm, ¹⁵³sm, ¹⁵⁷Gd, ¹⁶⁹Yb, ¹⁷⁵Yb, ¹⁷⁷Lu, l°5_Rh a ^i;L1Ag, a

¹⁸⁶Re, ¹⁶⁹Er, ¹⁴⁹Tb, ¹⁶⁶Ho, ¹⁸⁸Re, ^117msn, ¹⁶¹Tb, ¹⁷²Tm,

e) instrukce pro použití s předpisem pro reakci složek přítomných v kitu.
16. Kit pro přípravu radiofarmaceutického přípravku, vyznačující se tím, že obsahuje

a) přípravek obsahující (strept)avidin ve spojení s polypeptidem projevujícím selektivní afinitu k tumorům,

b) biotinovou sloučeninu obecného vzorce I znázorněného v nároku 1, kde symboly mají význam uvedený v nároku 1, ke kteréžto sloučenině, pokud je to žádoucí, je přidána inertní farmaceuticky přijatelná nosná látka a/nebo formulační prostředek a/nebo pomocná látka,

c) redukční činidlo a pokud je to žádoucí, chelator a

d) instrukce pro použití s předpisem pro reakci složek kitu s Tc ve formě technecistanového roztoku nebo s Re nebo ¹⁸⁸Re ve formě rhenistanového roztoku.
17. Kit pro přípravu radiofarmaceutického přípravku, « '· vyznačující se tím, že obsahuje

a) přípravek zahrnující biotinylovaný polypeptid, který projevuje selektivní afinitu k tumorům,

b) přípravek obsahující (strept)avidin,

c) biotinovou sloučeninu obecného vzorce I znázorněného v nároku 1, kde symboly mají význam uvedený v nároku 1, ke kteréžto sloučenině, pokud je to žádoucí, je přidána inertní farmaceuticky přijatelná nosná látka a/nebo formulační prostředek a/nebo pomocná látka,

d) redukční činidlo a pokud je to žádoucí, chelator a

e) instrukce pro použití s předpisem pro reakci složek kitu

QQ-m > I s Tc ve formě technecistanoveho roztoku nebo s Re nebo Ί flfi

Re ve formě rhenistanového roztoku.