CZ41097A3 - Způsob monitorování začátku plodného období v ovulačním cyklu - Google Patents

Description

Způsob spočívá ve vyhodnocování výsledků ' měření absolutní nebo relativní koncentrace

Ί .

látky analyzované v tělní tekutině, jako je například estradiol nebo jeho metabolit. Pokud je při měření prováděném v současném cyklu od konce mentruace nalezena v tělní tekutině koncentrace stejná jako je koncentrace u průměrné ženy ve 28-denním cyklu 3 dny před ovulací, pak je v současném cyklu Ihned avi,i ¹ - sováno plodné období. Pokud je analyzovanou ' látkou E3G, pak se jeho koncentrace stanovuje alespoň jednou ve dnech 4 až 7 současného CO cyklu, - počítáno od začátku menstruace, t|,_} Pokud koncentrace E3G měřená v těchto .dnech je rovna nebo vyšší než koncentrace prahová, stanovená v rozmezí 25 až 35 ng/ml, pak je v současném cyklu ihned avisováno plodné období.

CZ 410-97

I'·' o<

-.5.

Λ 10 20 * 30

\)·

O

S C í

Způsob^ monitorováni pvul<čnifi© cyklu

Oblast techniky

ΛΟ,

XI

CJI a

CT<·

O i cn ; H: rc

....Vynález ...j_zabýyá_ ..způsoby. monitorování ovulačního cyklu u samic savců/ zvláště u žen.

Dosavadní stav techniky _L ..'........ V několika minulých desetiletích byly zkoumány _ možností a způsoby přirozeného plánování rodičovství, při kterých jsou jednotlivé fáze ovulačního cyklu určovány monitorováním fysiologických parametrů. V evropské patentové přihlášce EP-A-706346 je popsán způsob monitorování ovulačního cyklu pomocí měření .estradiolu nebo jeho metabolitů v moči, zvláště eszron-3-glukuronidu, jehož zvyšující se hladina upozorňuje na začátek plodné fáze cyklu. Další odvozené způsoby monitorování ovulace jsou popsány v patentových; přihláškách EP-A-656118, EP-A-656119 a-EP-A-656120. V uvedených patentových přihláškách a dále ještě v mezinárodních patentových přihláškách WO 95/13531 a WO 96/09553 jsou popsána také příslušná testovací zařízení ..a testovací kity. V těchto vynálezech je vypracován způsob,monitorování ovulačního cyklu, kterým je možné monitorovat odlišné typy cyklů u různých žen, stejně jako odlišné cykly téže ženy. Vzhledem k individuální variabilitě ovulačních cyklů u žen je zejména pro antikoncepční účelynezbytné, aby při monitorování

- Λ _ť-. s.» , cyklu došlo k spolehlivému upozornění na nadcházející plodné období.

Ačkoli většina žen v populaci má cyklus normální délky (v průměru 28 dní), u některých žen proběhne příležitostně nebo často cyklus velmi krátký. Cyklus pak trvá pouze 20 nebo 21 dní, v krajním případě i méně. Plodné období (s ohledem na životnost spermií) pak začíná velmi brzy. Při způsobu, monitorování cyklu, kdy ukazatelem počínajícího plodného období je vzestup koncentrace E3G nebo podobného metabolitu v moči, nemusí být ve velmi· krátkém cyklu časný nástup plodné fáze snadno rozpoznán. Aby se zabránilo selhání metody, je třeba při monitorování počítat s neočekávanými krátkými cykly. .

Podstata vynálezu

Způsob monitorování ovulačního cyklu podle vynálezu je založen na stanovování koncentrace látky analyzované.v tělní tekutině. Analyzovaná látka má významný vztah ke stavu plodnosti a její koncentrace se začíná měřit od šestého dne cyklu. Cyklus je- označen za plodný, pokud se aktuální koncentrace analyzované látky

2Q významně liší od koncentrace v daný den očekávané.

Příkladem může být estradiol nebo jeho metabolity, které se vylučují do moči a jiných tělních tekutin. Hladina estrádiolu v moči je mezi 5. a 7. dnem cyklu (počítáno od začátku menstruace) nejnižší a po několika dnech stoupá na hodnoty, které jsou známkou blížící se ovulace. Hladiny estrádiolu mají obvykle tento průběh, existují však výjimky.

Vynález se zabývá upozorněním na nástup ·· ·*·,. ’ plodného období v ovulačním cyklu ženy získaném na ³⁰ základě měření absolutní nebo relativní koncentrace látky, jako je estradiol nebo jeho metabolity, analyzované v tělní tekutině. Pokud jev právě probíhajícím cyklu naměřena koncentrace analyzované látky v tělní tekutině stejná, jako je koncentrace analyzované látky u průměrné ženy ve 28-denním cyklu 3 dny před ovulací, pak se probíhající cyklus nalézá v plodném období.

Vynález se' zabývá zejména způsobem zajištění upozornění na nástup plodného období v ovuíačním cyklu ženy na základě'měření absolutní nebo relativní koncentrace E3G v moči po ukončení menstruace. Plodné období nastává·, pokud je--koncentrace E3G rovna nebo vyšší než koncentrace prahová, zvolená v rozmezí od 25’ do 35 ng/ml.

S měřením koncentrace E3G je vhodné začít mezi 4. a 7. dnem cyklu (počítáno od. začátku menstruace), nejlépe 6. den.

Vynález se zabývá způsobem monitorování stavu plodnosti v savčím ovuíačním cyklu, který spočívá ve stanovení změny koncentrace látky analyzované v tělní tekutině, přičemž koncentrace této látky se v plodném období,mění. Měření se provádí od 4. do 8. dne současného cyklu. Pokud koncentrace dosáhne hodnoty, která je rovna nebo větší, než je koncentrace očekávaná 3 dny před ovulací (den ovulace je určen na základě měření během jednoho nebo více předcházejících cyklů u téhož jedince), nastává plodné období. Při tomto způsobu monitorování je určována změna koncentrace estradiolu nebo jeho metabolitu v tělní tekutině.

Vynález se zabývá také způsobem'monitorování . stavu plodnosti v ovuíačním cyklu ženy, který spočívá ve stanovení změny koncentrace E3G v moči během časné fáze cyklu upozorňující na nástup plodného období. Koncentrace E3G se určuje buď absolutní nebo relativní,

I.10 ^! ·ν ?W ιτ

«Ί a to 6. den cyklu nebo kolem něj. Pokud' je koncentrace ^:

E3G 6. den cyklu alespoň rovna koncentraci dosažené u téže ženy v jednom nebo více předcházejících cyklech 3 dny před ovulací, nastává v současném cyklu plodné období.

Pro ilustraci je vynález popisován v . ;

souvislosti s měřením látek analyzovaných v moči, zvláště E3g (estron-3-glukuronid) a LH

..(•Iuteinizačni...hormon________________________ _ .. __________;

Vedle již zmíněného estron-3-glukuronidu je pro účely vynálezu možné měřit jiné metabolity estradiolu, jako -je estradiol-3-glukuronid, - - . ... ú estradiol-17-glukuronid, estriol-3-glukuronid; j.

estriol-16-glukuronid a (zvláště pro veterinární účely). estron-3-sulřát. Z dalšího popisu vyplývá, že vynález je možné zcela aplikovat'na data zjištěná při měření ' ' y;

koncentrací jiných látek analyzovanýčh v tělní -J

-ř tekutině, které mají významný vztah ke stádiu '1 ovulačního cyklu. Obecně jsou takovými látkami hormony 7 a jejich metabolity, například foíikuly stimulující \ hormon *(FSH). Příkladem relativně dostupných- > ' , alternativních tělních tekutin mohou být sliny, cervikální hlen, pot, kožní maz, slzy nebo poševní hlen. Samozřejmě je možné použít také vnitřní tělní tekutiny, například krev> jejichž nevýhodou ale je, že jsou odebírány invasívními metodami.

Výhodou· tohoto .způsobu'monitorování je, že měření koncentrace vybrané-látky nebo látek v tělní tekutině nemusí být absolutní. Stačí, aby byl testováním analyzované látky získán určitý signál, který má vztah k aktuální koncentraci a který lze převést na číselnou hodnotu. Porovnáním takto získaných číselných hodnot z různých stádií cyklu se určí, zdali došlo k signifikantní změně aktuální koncentrace nebo ne. Termín koncentrace” analyzované látky užívaný v této patentové přihlášce a v nárocích má tedy přenesený význam.

V příkladu se vynález zabývá způsobem monitorování plodných období v ovulačním cyklu samice savce, který spočívá v testování koncentrace látky analyzované v tělní tekutině, zvláště ‘estradiolu nebo jeho metabolitu. Koncentrace analyzované látky je měřena alespoň jednou v období od 1. do 7. dne současného cyklu, čímž je pro současný cyklus stanovena referenční hodnota koncentrace neboli signál. Hodnota ¹⁵ koncentrace nebo signál získaný měřením dále v průběhu cyklu je pak porovnávána s referenční hodnotou

.... ---..........koncentrace- nebo· signálu,·-což - umožňuj e--rozpo-z-nat· -změnu-,která v cyklu normální délky ukazuje na blížící se ovulaci. Vynález doplňuje tento.způsob monitorování o bezpečné odhalení neobvykle krátkých cyklů.

’5

Vynález se zabývá způsobem monitorování stavu plodnosti ženy, který spočívá v testování koncentrace estradiolu nebo jeho metabolitu v tělní tekutině. Porovnáním získaných hodnot s hodnotou referenční nebo signálem se určí, zda-li je koncentrace zvýšena a je tedy známkou blížící se ovulace. Referenční hodnota nebo signál se pro současný cyklus stanoví na základě · testování koncentrace v tělní tekutině téže ženy alespoň jednou mezi 4. a 7. dnem včetně, s výhodou 5. a nebo 6. den současného cyklu. Testování dále pokračuje, nebo je opět započato 9. den současného cyklu (nebo kolem něj) a potom pokračuje každý den alespoň jednou až do té doby, kdy je nalezena významně zvýšená koncentrace.·V cyklu probíhá od tohoto okamžiku plodné období bezprostředně následujících alespoň' 12 dní nebo do ukončení cyklu (t.j. začátku menstruace), nastane-li dříve. Pokud není významně zvýšená.koncentrace nalezena do 15. dne včetně, j.e cyklus plodný alespoň 14, s výhodou 15 dní bezprostředně následujících po 15. dnu, nebo do ukončení cyklu, nastane-li dříve.

θ Výsledkem těchto postupů je způsob kontracepce spočívající v:

a) testování koncentrace estradiolu nebo jeho metaboliťu v .moči ženy alespoň jednou od 4 . do 7. dne. včetně, s výhodou 5.-a nebo 6. den_;současného cyklu, čímž se stanoví'referenční hodnota nebo signál pro současný cyklus;

^ř~Bj~kaž'dddehhim'tě^to'vanr'kdnce'htíračě~eštřádrdlu v moči od 9. do 15., s' výhodou do 14. dne současného θ ·. cyklu; a . '

c) vyhnutí se-nechráněnému pohlavnímu styku po dobu alespoň 12 dnů bezprostředně následujících po nálezu významně zvýšené koncentrace.estradiolu v moči, nebo v případě, že významně zvýšená koncentrace, v moči není nalezena do 15. dne (s výhodou do 14.'· dne), vyhnutí se nechráněnému pohlavnímu styku alespoň 14, s •výhodou 15, dní po 15. dni, nebo od 15. dne do ukončení cyklu (t.j. začátku menstruace), nastane-li dříve.

-j Obecně lze říci, že typický způsob monitorování _stavu plodnosti samice savce je založen na testování koncentrace alespoň jedné látky v tělní tekutině, ' přičemž analyzovaná látka má v období před ovulací významný vztah ke stadiu ovulačního cyklu. Referenční hodnota koncentrace analyzované látky nebo signál pro současný cyklus se stanoví tak, že se změří její koncentrace alespoň jednou v intervalu od 1. do 7. dne včetně'(den 1. je den začátku menstruace) . Koncentrace analyzované látky je dále stanovena alespoň jednou (běžně opakovaně, např. denně) před pravděpodobným dnem ovulace. Porovnáním hodnoty (nebo hodnot) takto naměřené koncentrace nebo signálu s hodnotou referenční

10' se zjistí, zda-li nastává, nebo vzhledem k předchozímu testu nastala' změna koncentrace charakteristická pro blížící se ovulaci.

.· Způsob* monitorování' stavu plodnosti jedince ženského pohlaví je tedy založen na testování .

koncentrace alespoň jedné látky v tělní tekutině, přičemž tato-látka má významný vztah ke stadiu —„ovu-lačního -c-y-k-iu—v—období—před-ovulací—Referenční--hodnota koncentrace, analyzované látky nebo signál pro současný cyklus se .stanoví. tak, že se změří její ²⁰ koncentrace alespoň jednou v intervalu od' 1. do 7. dne včetně’(den 1. je den začátku menstruace). Koncentrace analyzované látky se stanoví alespoň jednou (běžně opakovaně, např. denně) v období, které začíná 5,' s výhodou 6, dní před hlavním dnem, na který nastala ovulacé v jednom nebo více předcházejících cyklech u téhož jedince. Porovnáním získaných hodnot-koncentrací nebo signálů s hodnotou referenční je rozpoznáno, zda-li nastává, nebo vzhledem k předchozímu testu nastala změna koncentrace· analyzované látky *

upozorňující na blížící se ovulaci. Opakované testování nemusí začít dříve než 9 dní před dnem ovulace.

Referenční hodnota koncentrace se stanoví z výsledků měření mezi 4. a 7. dnem včetně, s výhodou 5. a nebo 6. den, nejlépe z jednoho měření provedeného 6. den.

Pokud je v den, kdy se má stanovit referenční hodnota koncentrace, nalezená koncentrace rovna nebo vyšší než bezpečnostní prahová hodnota, nachází se cyklus v plodném období. Testování tělesné tekutiny musí pokračovat dalších několik dní, aby mohl být určen den aktuální ovulace, nebo jiný parametr, používaný pro stanovení konce plodného období.

Významná změna koncentrace analyzované , látky., charakteristická pro blížící se ovulaci, zvláště pokud j_e analyzovanou látkou estradiol nebo jeho metabolity, je obecně zaznamenána, když poměr referenční koncentrace (r) ke koncentrací testované (i) splňuje následující kritéria:

2Q 1,5 < = (i) / (r) < = 2,5

Pokud analyzovanou látkou je E3Ga referenční hodnota je stanovena 6. den, pak : (í) / (r) > = 2

V případě, že je při měření koncentrací použit takový zkouškový formát, v němž je získán signál, který jev opačném poměru k aktuální koncentraci (jako je při kompetitivní zkoušce), pak je vztah mezi signály (i) a (r) opačný, než jak je uveden výše.

.30

Mezi stanovením referenční hodnoty koncentrace a počátkem opakovaného testování vzniká běžně alespoň jednodenní proluka, kdy není nutné provádět žádné testování. Takže například uživatelka provede jeden test v časné fázi cyklu, například 6. den, a několik dní poté začíná krátký rozvrh opakovaných, například denních, testování, který je ukončen po obdržení informace dostatečné k rozpoznání plodného období a s výhodou též k rozpoznání jeho konce v tomto cyklu. Ukončení testování nastává v den vrcholu LH nebo během několika dalších dní, takže po zbývající část cyklu již testování neprobíhá.

, ,

Vhodnou tělesnou tekutinou je moč a velmi vhodnou látkou pro analýzu je tedy estradiol nebo jeho metabolity, jako je estron-3-glukuronid.

Den ovulace je možné odvodit'z dat získaných 15 měřením alespoň ve 3, nejlépe alespoň v 5 po sobě následujících předcházejících cyklech.

-·*·------- —— ,—Den·'·ovulace- se- stanov-uj-e—z-a -účelem-sestavení----testovacího rozvrhu v současném cyklu a k jeho odvození se používá výsledků měření z alespoň jednoho těsně předcházejícího cyklu.

Nejpravděpodobnější den ovulace .lze velmi pohodlně určit z hodnot získaných pomocí rolling referenční base, která sestává z neměnného počtu po sobě následujících cyklů těsně předcházejících cyklu současnému. Tuto rolling referenční basi tvoří 3 až 12 těsně předcházejících cyklů, s výhodou 5 až 6 těsně předcházejících cyklů. Pomocí takové rolling referenční base je možné zaznamenat každý významnýposun v ovulaci a upravit podle něj začátek dalšího testování.

Popsaný způsob monitorování ovulačního cyklu provádí uživatelka pomocí testovacího kitu, který se skládá z jednoho nebo více testovacích zařízení na určování koncentrace (absolutní nebo relativní) výše zmíněné alespoň jedné látky ve výše popsané tělní tekutině, z návodu na použití, v- němž je uživatelka poučena, během jakého výše popsaného časového období má výše popsané testování začít, a dále ze zařízení, které uživatelce umožňuje odvodit zmíněné Časové období a nebo přesný den začátku.testování na základě znalosti dne, na který nastala u uživatelky ovulace v alespoň jednom předcházejícícm cyklu. Tento' testovací kít se skládá z Určitého počtu zařízení na testování tělní tekutiny na jedno použití a ze zařízení na odečítání a 'interpretaci výsledků tohoto testování. Součástí kitu může být i náhradní balení testovacích zařízení na jedno použití určené pro kterýkoli způsob monitorování, tak jak jsou-popsány výše, a také návod, který uživatelce doporučuje použít všechna přiložená testovací zařízení na jedno použití během jednoho ovulačního cyklu. i

Výhodou těchto způsobů monitorování je, že je prováděno účinné monitorování ovulačního cyklu pouze na základě měření koncentrace(í) testované(ých) látky(ek) v tělní tekutině. Získaná data není nutné spojovat s dalšími parametry. Není tedy nutné doplňovat- výsledky testování o běžné měření basální'teploty.

Díky tomu, že se referenční hodnota koncentrace odvozuje z dat získaných v časné fázi současného cyklu, není nutné provádět kalibraci a je zajištěno, že basální reference je osobní pro testovaný -subjekt. Na rozdíl od dříve používaných způsobů založených na každodenním testování to vede k jasnějšímu rozpoznání významné změny koncentrace v preovulační fázi.

Analyzovaná látka, .která je použita pro zajištění upozornění na blížící se ovulaci, musí v časovém intervalu od začátku testování (tak jak je zde stanoveno} do konce, bezpečně neplodného období před ovulací vykázat za normálních okolností zachytitelnou změnu.

Vynález je popisován na příkladu hormonů E3G, luteinizačního hormonu (LH), .a pregnandiol-3-glukuronidu v moči, avšak princip vynálezu lze použít i na testování dalších biochemických markérů v jiných tělních tekutinách, například na testování hormonů estrogenu a progesteronu v krvi nebo ve slinách.

Vynález je možné použít v kombinaci s pozorováním .

. . jiných fyziologických známek stavu plodnosti ženy, například se sledováním markérů v jiných tělních . tekutinách.

i ' .

. Den ovulace lze stanovit pomocí kteréhokoli chemického nebo fyziologického parametru, nejvhodnějším způsobem je ale měření hladiny LH. Ráz LH je jistou známkou blížící se ovulace. Den ovulace stanovený podle : rázu LH slouží jako výchozí orientační bod. Je vysoce pravděpodobné, že ode dne ovulace, přesně stanoveného podle rázu LH, nebude uživatelka plodná déle než 3 dny· (4 dny od nárůstu hladiny LH) .. Z praktického hlediska je,důležité, že za všech okolností je· indikačním prahem _3Q pro'ráz' LH koncentrace LH y moči 20 mlU/ml.

V textu užívaný výraz ráz LH znamená dramatický nárůst koncentrace LH, který předchází ovulací. V oboru je také používán výraz LH max, t.j.

' i • <

IF;

vrchol koncentrace LH. U většiny žen je z praktických důvodů vhodné monitorovat cyklus každý den. U části .populace, asi u 20% žen, nelze vrchol LH pozorovat, dokud nezačne koncentrace LH klesat. Pro účely vynálezu je kritickým parametrem pozorovatelný vrchol LH.

Konec plodného.období je možné určit ze znalosti koncentrace estradiolu (nebo jeho. métabolitů) v současném cyklu. Konec plodného období nastává den po vrcholu hodnoty koncentrace. Protože je vrchol 10 koncentrace E3G v moči méně snadno rozpoznatelný než ráz LH, je vrchol E3G určován vzhledem k prahové hodnotě·, stanovené například podle vztahu (i)/(r) > . 2,5 , s výhodou'> - 3. , ¹⁵ přičemž vrchol.nastává v den, kdy je.tento vztah při testování v současném' cyklu poprvé naplněn. Pokud je: signál. E3G v opačném poměru, k aktuální koncentraci, pak'jev opačném-poměru i tento vztah. V některých případech k tomu dochází tentýž den, kdy je nalezen významný, nárůst .E3G* charakterisující blížící se. ovulací. Plodné období cyklů..končí z.a šest, nebo pro . větší bezpečnost ža sedm nebo osm, dní po nálezu vrcholu E3G. Vynález spočívá ve způsobu monitorování plodného období v současném cyklu pouze na základě testování estradiolu a jeho métabolitů.

Jiný způsob určování konce plodného období (to znamená ne přímo.dne ovulace) se provádí měřením hladin hormonu P3G' v moči. Hladina P3G v moči je poměrně nízká až do .začátku luteální fáze, kdy prudce stoupá. Nález zvýšené hladiny P3G tedy znamená, že v cyklu nastala luteální fáze, t.j. poslední neplodné období. Zvýšení hladiny P3G v moči lze stanovit při porovnáni s výší hladiny P3G v současném cyklu nebo v' jednom nebo více cyklech předchozích. Hladina P3G je například zvýšená jak v případe, kdy je vyšší než součet čtyř. předchozích hladin P3G v témže cyklu, tak v případě, kdy je vyšší než 3500 ng/ml. Hladina P3G je zvýšená, dosáhne-li jednoho ze· dvou těchto prahů, i když je hodnota tohoto dosaženého prahu nižší než hodnota toho druhého. Nález' zvýšené hladiny P3G znamená, že žena je již. do konce cyklu,neplodná.

^; Nález jak LH, tak P3G je znamením, že-žena je od této chvíle až do konce cyklu neplodná, přičemž jeden hormon je pojistkou tomu .druhému. Nálezu LH lze s výhodou použít jako indikátoru ovulace právě !

probíhající nebo těsně nadcházej ící ,· neboť na rozdíl od. P3G je možné z hladin LH den ovulace přesně určit.

Způsoby detekce látek analyzovaných v tělních' tekutinách, jako jsou metabolity hormonů v moči, jsou známy z oboru. Vhodné testovací metody a zařízení k jejich provádění jsou popsány v naší britské patentové přihlášce GB 2204398 a v, naší evropské patentové přihlášce EP-A-383619.

Způsob monitorování stadia ovulačního cyklu podle vynálezu spočívá v měření složky v moči, je tedy · nutné testovat vzorek moči.· Složku v moči lze stanovit vhodnou imunologickou zkouškou. Pro určování složek v moči je možné snadno upravit některé z mnoha testovacích zařízení na-pevné basi, jako jsou dipsticks nebo chromatografické proužky popsané v literatuře.. Zařízení musí indikovat přinejmenším relativní hladiny analyzované látky, například E3G, v prahových pásech. V patentových přihláškách EP 0225054, EP 0183442, EP

0186799 a GB 2204398 jsou uvedeny příklady jednoduchého testovacího zařízení, které lze snadno upravit pro použití v domácím prostředí. K testování je možné použít testovací proužky na jedno použití popsané v patentové přihlášce GB 2204398. Testovací proužky jsou jednoduchým způsobem kontaktovány s močí a výsledek testu je zřejmý v semikvalitativní formě: na proužku je například umístěna serie testovacích zon, jejichž reakce je tím více pozitivní, čím vyšší jsou hladiny analyzované látky. V patentové přihlášce WO 96/09553 jsou popsány optimální testovací'proužky-na nichž se stanovuje jak É3G, tak LH. Při testování je výhodnější použít více proužků reagujících na různé prahy analyzované látky. Jinou možností je visuálně odečitatelná kvantitativní'zkouška založená na postupu;

viditelné (např. barevné) plochy nebo čela po povrchu (např. radiální difuse). Lze použít například enzymem značenou esej.'

Součástí vynálezu je zaznamenávací zařízení, které je vybaveno prostředky na odečítání výsledků testů z moči, například pro měření rěflektance nebo fluorescence testovacích proužků. Takové vybavení . umožňuje přesněji číselně definovat hladinu analyzované látky, a tím zvyšuje spolehlivost metody. Ideální měřící systém využívající' optického signálu je přesně popsán ve WO 95/13531. N

Při současném měření dvou a více analyzovaných látek je možné“použít zařízení na testování jedné tělní tekutiny, a to například tím způsobem, že.zařízení testuje více zkušebních proužků, nebo tím způsobem, že je testován proužek jeden, na kterém lze detekovat hladinu různých analyzovaných látek nezávisle na sobě.

Zaznamenávací zařízení musí být schopno asimilace, zapamatováni a podržení dat o koncentraci analyzované látky, stejně jako předpovídání dalších cyklů na základě těchto dat. Pro odborníky v oboru elektroniky, kteří jsou informováni o faktorech, které musí'být při výrobě takového zařízeni vzaty v úvahu a o.

. skutečnosti, že zařízení musí být přizpůsobeno uživatelce, je snadné vybavit,takové zařízení přesnou elektronikou s vybranými charakteristikami. Tato detailní elektronika není součástí 'vynálezu. Pro , ilustraci viz patentové přihlášky.EP-A-706346 a.WQ 95/13531. ' i . Stanovení, prahové, hodnoty

Ve studii testovalo 54 žen po .9 cyklů vzorky .

.první ranní moči. Ve vzorcích byla stanovována koncentrace E'3G a LH pomocí .běžných zkoušek EIA.

<· ' ·

Výsledky jsou shrnuty v následující, tabulce:

den ve vztahu k	koncentrace E3G
ovulaci	(ng/ml)
0' '	47,5
-1	40,1
-2	31,3 .
-3	23,3
-4	18,9
.-5	15,3
-6	13,6
-7	12, 0
*8	.10,9
-9	1072’
-10 ’ .	9,7

Předpokládalo se, že den ovulace nastal den po rázu LH. Den -10 byl typickým 6. dnem cyklu.

Ze studie vyplynulo, že příslušná prahová hodnota E3G pro 6. den, bezpečná při velmi krátkém cyklu, je 30 ng/ml, t.j. je vyšší než ranní koncentrace v den -3, ale nižší než ranní koncentrace v den -2.

Je-li počítáno s chybou experimentu, pak je hodnota zvolená v rozmezí 25 - 35 ng/ml vhodná. Aktuálně zvolená hodnota bude kolísat mezi rizikem, že nebude rozpoznán velmi krátký cyklus a mezi požadavkem vyhnout se zbytečně obezřelému algoritmu a určit nezbytně nutné množství tzv. nebezpečných dnů v cyklu normální délky.

Příklady provedení vynálezu

Následující příklady vycházejí z výsledků studie prováděné ve Velké Británii v roce 1996, v níž 625 dobrovolných párů používalo určování plodného období v ovuíačním cyklu pomocí testovacích kitů na stanovení hladiny hormonu v moči· jako svou jedinou

2o antikoncepční metodu. Analyzovanými látkami byly E3G a LH a byly měřeny testovacími proužky popsanými v patentové přihlášce WO 95/13531. V souladu s principy stanovenými v patentové přihlášce EP-A-706346 byla basální koncentrace E3G v každém cyklu určena 6. dén a významný vzestup koncentrace E3G sloužil jako upozornění na nástup plodného období cyklu. Toto bylo doplněno počítáním dnů podle kalendáře, kdy plodné období začínalo automaticky 3 dny před

- * - nejpravděpodobnějším dnem rázu LH stanoveným podle 20 předchozích cyklů. V několika případech došlo k otěhotnění. Po skončení studie byly elektronické monitory vráceny a jejich paměti převedeny do počítače k vyhodnocení a určení příčin nechtěných těhotenství.

V souladu s patentovou přihláškou WO 96/09553 bylo měření koncentrace E3G v moči prováděno kompetitivní zkouškou. Signál získaný z testovacího zařízení (procento optické transmise relevantní zónou ' testovacího proužku) byl v opačném poměru k aktuální koncentraci E3G ve vzorku moči. Zkouška s E3G byla standardisována použitím vysoce čištěného krystalického estron-3-glukuronidu (É_x-3-G) dodávaného firmou Sigma Chemical Co. (kód výrobku E 1752), rozpuštěného ν'Ο,ΟΙΜ ' fosfátovém, pufru s '0,85 g/100 ml solného roztoku a s

0,1 g/100 ml azidu sodného.

'.Z výsledků studie vyplynulo, že k několika těhotenstvím došlo z toho důvodu, že daný cyklus byl mnohem kratší než bylo předpokládáno á že tudíž plodné období začalo dříve,'než, bylo podle algoritmu určeno.

Následující'tři příklady uvádějí data těch dobrovolných párů,.k jejichž otěhotnění došlo z důvodu velmi krátkého cyklu. Na těchto příkladech'je zřejmé, že při přísnějším vyhodnocování by bylo plodné období avisováno, pokud by signál E3G byl 6.denmenší než 20% transmise. Tak byk těhotenstvím nedošlo.'

V testovacím kitu používaném v dané studii při zkoušce E3G odpovídala hladina 20%, transmise pufrované koncentraci E3G.30+-5 ng/ml. Z výsledků studie vyplynulo, že koncentrace E3G zvolená, v rozmezí 25 až 35 ng/ml a stanovovaná 6. den nebo těsně kolem něj je dostatečně bezpečná i ve velmi krátkém_fcyklu.

Příklad 1

cyklus	délka	den rázu LH
i	26	14
2	25	X

3	26	14
4	' 24	,x
5	25	14
6'	27	13
7	.32	X
8	26	13
9	P	11
		těhotenství

V cyklu 9 došlo k otěhotnění a ráz LH nastal ¹⁰ I·' ‘ . - ' - .

nejdříve ze všech předešlých cyklů.

Průběh signálů u této dobrovolnice byl v cyklu, . „kdy došlo k otěhotnění, následující:·

den -	6	9	10	11 ;	12	13	14	15
LH	2	2	5	15	„5	4	3	5
E3G	18	' 16	11	14	15	'21	15 '	16

V tomto cyklu začalo plodné období 10. den. To 20 bohužel dobrovolnici umožnilo mít nechráněný^:pohlavní .

'.styk v. domněle bezpečných dnech.^;7,8- a 9.. Jeden z těchto styků vedl pravděpodobně k početí.' ¹ /

Umístěním prahu 20%T na 6. den je možné vytvořit systém, který avisuje plodné období okamžitě.

Příklad 2

'cyklus	délka	den rázu LH“
1	31	17
2	28	X
3	28	14
4	30	17
5	29	1?

6	29	15
7	31	17
8	P .	14

V cyklu, při kterém došlo k otěhotnění, nastal ráz LH nejdříve ze všech předcházejících cyklů, a zároveň byl tento cyklus kratší, než je u této dobrovolnice obvyklé.

Průběh signálů v cyklu,, kdy došlo k otěhotnění, byl následující:

den	6	11	12	13	14	15	16	17 '
LH	4	6	6	5	17	9	7	6
E3G	20	16	12	14	13	14	16	18

Plodné období začalo 12. den.

K- otěhotnění došlo pravděpodobně při styku 9. den. Dobrovolnice měla styk též ve dnech 3,4 a 5, ale při nich se spermie vzhledem ke svým fysiologickým vlastnostem nemohly uplatnit.

Umístěním prahu 20%T na 6. den je možné dosáhnout toho, že plodné období bude avisováno ihned.

Příklad 3

cyklus	délka	den rázu LH
1	30	16
2	24	X
3	24	12
4	26	13

5

P

11 těhotenství

Ráz LH nastal opět nejdříve ze všech pozorovaných cyklů.

V cyklu, kdy došlo k otěhotnění, je průběh signálů následující:

den	6	8	9	10	11	12	13	14
LH·	4	. 1	0	6	13	9	5	0
E3G	15	25	20	13	10	14	20-	18 ·

Začátek plodného období'byl 6.' den. Ke styku' došlo ve dnech 4,6,7,8 a 9, pokaždé v bezpečném období. , _> ,

Pokud,by byl absolutní práh 20% T umístěn na 6. den,·, byl by v tomto .případě začátek plodného období avisován již 6. den a ke stykům ve dnech 6,7,8 a 9 by . nedošlo·.. Styk, který proběhl 4. den, byl ode dne rázu LH, a tím od ovulace,' vzdálen příliš, než aby se spermie mohly uplatnit.' '' '

Zastupuje :

Claims (8)

1. PATENTOVÉ NÁROKY

   1. Způsob upozornění na začátek plodného období v ovuíačním cyklu ženy spočívající v měření absolutní

   5 nebo.relativní koncentrace analyzované látky v tělní tekutině, která je ukazatelem stavu plodnosti, jako je například estradiol nebo jeho metabolit, vyznačující se tím, že· pokud je v současném cyklu při měření, které je.započato koncem

   10' menstruace, nalezena hodnota koncentrace v tělní tekutině stejná jako hodnota,koncentrace v tělní tekutině, která se u průměrné ženy ve 28-denním cyklu vyskytuje 3 dny před,ovulací, pak je v tomto současném cyklu ihned avisováno plodné, období.
2. 2. . Způsob upozorněnína začátek.plodného období v . ovuíačním cyklu ženy-podle.nároku 1, .

   vyznačující se £ í m, ž e je měřena koncentrace estron-3-glukuronidu' ,(E3G) v moči.

   20. . ' '·· ... . '
3. 3. Způsob upozornění na,začátek plodného období v ,f · ’ ovuíačním cyklu ženy spočívající vyměření absolutní nebo relativní koncentrace E3G v moči, vyznačuj í.cí se.tím, že plodné období

   25 je avisováno. ihned, pokud je při měření koncentrace E3G . prováděnémod konce menstruace zjištěna koncentrace, která je rovna nebo je větší než koncentrace prahová, zvolená v rozmezí 25 až 35 ng/ml.
4. 4. Způsob upozornění na začátek plodného období podle nároku 3, vyznačující se tím, ž e měření koncentrace E3G je provedeno alespoň jednou ve dnech 4 až 7 současného cyklu (počítáno od začátku
5. 5 menstruace).

   5. Způsob monitorování stavu plodnosti v ovulačním cyklu u savců založený na určení změny koncentrace látky se vztahem k plodnému období analyzované v tělní

   10 tekutině, vyznaČ.ující se .tím, že pokud je při měření provedeném ve. dnech 4 až 8 současného cyklu nalezena koncentrace stejná, jako je koncentrace očekávaná 3 dny před ovulací (stanovené na základě měření v jednom nebo více předcházejících cyklech u

   15 téhož jedince), pak je ihned avisován začátek plodného období.
6. 6. Způsob monitorování!ovulačního cyklu podle nároku 5, vyznačující se tím, že je v tělní

   20 tekutině určována změna koncentrace estradiolu nebo jeho metabolitu, jako je E3G, během ovulačního cyklu ženy.
7. 7. Způsob' monitorování stavu plodnosti během ovulačního cyklu ženy, kdy jako upozornění na začátek plodného obdobíslouží změna absolutní nebo relativní koncentrace E3G- v moči během ranné fáze cyklu (měření

   5 je provedeno 6. den současného cyklu, nebo kolem něj), vyznačující se tím, že pokud je koncentrace E3G, změřená 6. den současného cyklu nebo kolem něj, alespoň rovna koncentrací,, která je u téže ženy dosahována v jednom nebo více předcházejících
8. 10 cyklech 3 dny před ovulací, pak je v současném, cyklu ihned ayísováno plodné období.