CZ381397A3

CZ381397A3 - Arylsufonylaminobenzenové deriváty a jejich použití jako inhibitorů Xa faktoru

Info

Publication number: CZ381397A3
Application number: CZ973813A
Authority: CZ
Inventors: Carl R. Illig; Richard M. Soll; Joseph M. Salvino; Bruce E. Tomczuk; Tianbao Lu; Nalin L. Subasinghe
Original assignee: 3-Dimensional Pharmaceuticals, Inc.
Priority date: 1995-06-07
Filing date: 1996-06-07
Publication date: 1998-06-17
Also published as: US5741819A; CA2223727A1; NO975740D0; NZ311410A; HUP9901086A3; IL122485A0; PL323473A1; AU6273696A; WO1996040100A1; EP0831800A1; AU722384B2; MX9709386A; NO975740L; EP0831800A4; HUP9901086A2; BR9609216A; NO309810B1; KR19990022450A; JPH11508242A

Description

··· · · 9· ··· ·· · ♦

	Arylsulfonylaminobenzenové deriváty inhibitorů faktoru Xa	a jejich	použití	jako
*	Oblast techniky: Předložený vynález se týká	sloučenin,	které	j sou

inhibitory produkce trombinu pomoci inhibice faktoru Xa, jejich farmaceuticky přijatelných solí a farmaceuticky přijatelných prostředků. Sloučeniny a prostředky jsou vhodné pro léčení arteriálních a venózních trombotických okluzních nemocí, zánětů a rakoviny.

Dosavadní stav techniky:

Serinová proteáza trombin hraje centrální roli při hemostáze a trombóze (Tapparelli a kol.,

Trends in

Pharmacological Science

14:366-316 (1993);Lefkovits and Topol,

Circulation 90(3):1522-1536 (1994); Harker,

Blood

Coagnlation and Fibrinolysis 5 (Suppl 1) .-S47-S58 koagulační kaskády buď přes kontaktem) nebo zevní

Aktivace endotelovému povrchu, faktoru tkáně) vede systém (aktivace systém (aktivace expozicí plazmy na nepoškození stěn nádoby, nebo uvolňování k řadě vnitřní konvergují na trombin. bezprostředně sraženiny), vedoucí k potenciálně biochemických dějů, které Trombin štěpí fibrinogen, hemostatické zátce (vytvoření aktivuje destičky přes zvláštní proteolytické štěpení buněčného povrchu trombinovým receptorem (Coughlin, Seminars in Hematology 31(4):270-277 (1994)), a sám zesiluje svou vlastní produkci prostřednictvím mechanismu zpětné vazby.

i

Jako mnohofaktorový protein vyvolává trombin řadu účinků na destičky, endotelové buňky, malé svalové buňky, leukocyty, srdce a neurony (Tapparelli a kol., Trends in Pharmacological Sciences 14:366-316 (1993); Church and Hoffman, Trends in Cardiovascular Medicine 4(3):140-146 (1993)). Aktivace destiček vede ke změně tvaru a k agregaci, stejně jako syntéze, uvolňováni a sekreci vazoaktivnich látek a lyzosomálnich enzymů. Aktivace endotelových buněk vede k sekreci stimulačních činidel vedoucích ke zvýšení vaskulární propustnosti a přilnavosti jednojaderných buněk, čehož jedním důsledkem je výron leukocytů na místě zrodu trombinu. Trombin indukuje fibroplast a proliferaci buněk hladkého svalstva naznačující, že trombin hraje klíčovou roli v rozvoji poranění následujícím vaskulární poškození. Zvýšení automaticity a prodloužení repolarizace bylo očekáváno u myocytů působících na srdce, vykazujících citlivost na trombin. Ukázalo se, že normální neuronální vývoj je rovněž ovlivněn trombinem. Proto inhibitory funkce trombinu mají terapeutický potenciál u hostitelů s kardiovaskulárními a ne-kardiovaskulárními nemocemi, včetně: infarktu myokardu, nestabilní angíny, mrtvice, restenozy; hluboké žilní trombózy; roztroušené intravaskulární koagulace způsobené traumatem, sepsí nebo nádorovými metastázami; hemodialýzy; chirurgie kardiopulmonárního bypassu; syndromu respirační úzkosti dospělých; endotoxického šoku; revmatické artritidy; vředovité kolitidy; indurace; metastáz; hypersrážlivosti během chemoterapie; Alzheimerovy nemoci; a Downova syndromu.

Dodnes se používají pouze tři skupiny sloučenin (hepariny, nízkomolekulární hepariny a kumariny, jako je warfarin) při léčení srážlivosti. Každá z těchto tříd má řadu omezeni (Weitz a Hirsch, Journal Clinícal Medicine 122:364-373 (1993); Raj a kol., The Američan Journal of the Medical • ·

Λ4

Sciences 307(2):128 (1994)). Všechny tři skupiny přímo inhibují trombin. Heparin a nízkomolekulární hepariny zvětšují u antitrombinu III a /nebo kofaktoru II heparinu inhibici trombinu, zatímco kumariny inhibují na vitaminu K závislé posttranslační modifikace. Uzavřené monitorování a titrace terapeutických dávek jsou požadovány při používání těchto léčiv tehdy, pokud jsou způsobeny proměnlivostí nemocného. Vedlejším účinkem, se kterým je možno se setkat, jsou hemorargické komplikace způsobené krvácením. Ve skutečnosti zůstává krvácení nejběžnějšim vedlejším efektem dlouhodobé orální antikoagulační terapie. Nedostatek aktivity u arteriální trombózy v případě heparinu je způsoben jeho neschopností inhibovat srážení vázaného trombinu. Nedostatek orální aktivity v případě heparinu a nízkomolekulárních heparinu brání jejich použití pro chronická podávání.

Přímé inhibitory trombinu z různých strukturních tříd byly nedávno identifikovány (Taparelli a kol., Trends in Pharmacological Sciences 14:366-376(1993); Claeson, Blood Coagulation and Fibrinolysis 5:411-436 (1994); Lefkovits a Topol, Circulation 90(3):1522-1536 (1994)). Ukázkové sloučeniny, které působí inhibici na aktivní místa trombinu, zahrnují α-chlorketon D-fenylalanyl-L-propyl-L-arginylchlormethylketonu (PPACK), boroarginin DUP714, peptid arginal GYK114766, cyklické peptidy cyklotheonamidy A a B, benzamidin NAPAP, a arylsulfonylarginin argatroban. Dále inhibitory trombinu peptidy hirudin a hirulogy překlenou svou aktivitou a vnější polohou okruh trombinu. Peptid hirugen a jednořetězové DNA aptamery inhibují trombin prostřednictvím zaplnění vnějších poloh. Tyto třídy protisrážlivých činidel mají ještě jeden nebo více z následujících sklonů: (1) špatná orální biodostupnost díky peptidické nebo oligonukleotidové povaze těchto činidel, nebo vysoké molekulové hmotnosti nebo naplněné povaze činidel;

(2) nadměrné komplikace spojené s krvácením; (3) špatná selektivita týkající se trombinu oproti jiným serinovým proteázám ( což na pokusných zvířatech může vést k mnoha, a někdy fatálním, hypotenzím a respiračním depresím); (4) toxicita jater; a (5) finanční náročnost.

Alternativním řešením pro inhibování funkce trombinu je inhibice faktoru Xa. Faktor Xa se spojuje s faktorem Va a vápníkem na fosfolipidové membráně a tím tvoří komplex protrombinázy. Tento protrombinázový komplex potom mění protrombin na trombin (Claeson, Blood Coagulation and Fibrinolysis 5:411-436 (1994); Harker, Blood Coagulation and

Fibrinolysis 5 (Suppl 1):S47-S58 (1994)). Předpokládá se, že inhibitory faktoru Xa nabízejí výhodu před činidly, které přímo inhibují trombin, neboť přímé inhibitory trombinu ještě umožňují výraznou novou tvorbu trombinu (Lefkovits a Topol, Círculation 90(3):1522-1536 (1994); Harker, Blood Coagulation and Fibrinolysis 5 (Suppl 1):S47-S58 (1994)). Skutečně, kontinuální tvorba nového trombinu je spíše považována za částečně odpovědnou za jev opětovného uzavření, než opětovné exponování přeformovaného trombinu vázaného sraženinou, neboť bylo nalezeno, že známky generace trombinu se zvyšují během a po trombolytickém ošetření infarktu myokardu. Proto se nyní věří, že zvýšená aktivita trombinu spojená s trombolýzou je díky, nejméně z části, nové tvorbě trombinu.

Konkrétní proteinové inhibitory faktoru Xa, jako odvozené z pijavky, 119-aminokyselinový protein antistatin a měkký protein odvozený z klíštěte TAP ( klíšťový antikoagulační peptid -tick anticoagulant peptide) urychlují lýzy sráženiny a brání opětovné okluzi, když se přidají jako přídavky k trombolýze (Mellot a kol., Círculation Research 70:1152-1160 (1992); Sitko a kol., Círculation 05:805-815 (1992)). Americký

patent US 5 385 885, vydaný 31. ledna 1995, popisuje u buněk hladkého svalstva proliferaci inhibični aktivity obou, TAP a antistatinu. Dále bylo uvedeno, že TAP a antistatin redukuji experimentální restenózu. Tyto výsledky připomínají, že faktor Xa může hrát roli v restenózním procesu přes svůj účinek při tvoření trombu nebo přes svůj mitogenní potenciál (Ragosta a kol. , Circulation 89:1262-1271 (1994)). Peptidový ekotin je dalším selektivním, reverzibilním, těsně vázajícím inhibitorem faktoru Xa, který vykazuje možnou antikoagulační aktivitu (Seymour a kol., Biochemistry 33:3949-3959 (1994); zveřejněná přihláška PCT WO 94/20535, zveřejněná 14. září 1994). Ixodidae, argasin a ancylostomatin jsou dalšími reprezentativními peptidickými inhibitory faktoru Xa, izolovanými ze zvířat, které se živí krví (Markwardt, Thrombosis and Hemostatis 72:411-419 (1994)).

Nepeptidické diamidino-deriváty, jako je pentahydrát hydrochloridu kyseliny ( + ) - (2S)-2-[4[-[[ (3S)-l-acetimidoyl-3pyrrolidinyl]oxy]fenyl]-3-[7-amidino--2-naftyl]propanové (DX9065a), vykazují antikoagulační aktivitu (Tidwell a kol., Thrombosis Research 79:339-349 (1980); Yamazaki a kol., Thrombosis and Hemostasis 72:393-395 (1994); Hara a kol., Thrombosis and Hemostasis 77:314-319 (1994); Nagahara a kol., Journal of Medicinal Chemistry 37:1200-1207 (1994)). Syntetické amidinoderiváty fenylalaninu a cykloheptanonu také vykazují potenci k inhibici faktoru Xa (Sturzebecher a kol., Thrombosis Research 54:245-252 (1989)).

Zveřejněná přihláška PCT WO 94/13693, zveřejněná 23. června 1994, popisuje peptidové analogy obsahující aldehydové skupiny. Přihláška popisuje, že analogy mají podstatnou potenci a specificitu jako inhibitory savčího faktoru Xa.

• · ·

Zveřejněná přihláška PCT WO 93/15756, zveřejněná 19. srpna

1993, a WO 94/17817, zveřejněná 18. srpna 1994, popisuje peptidylové aldehydy argininu, které vykazují inhibiční aktivitu vůči faktoru Xa a/nebo trombinu.

Zveřejněná přihláška PCT WO 94/20526, zveřejněná 15. září

1994, popisuje deriváty peptidu, které mají C-koncovou skupinu kyseliny borité. Přihláška popisuje, že tyto deriváty peptidu vykazují aktivitu inhibující protein a jsou možnými trombinovými inhibitory.

Zveřejněná přihláška PCT WO 94/20468, zveřejněná 15. září 1994, popisuje deriváty 4-aminopyridinu, které se považují za vhodné jako antitrombotická činidla.

Chemical Abstracts 96:181160 (1981) popisují N-(4-pyridylmethyl)benzamidy a způsoby jejich průmyslové výroby. Zejména se popisuje sloučenina 4-[ (fenylsulfonyl) amino]-N-(4pyridylmethyl)benzamid.

Chemical Abstracts 122:9661 (1994) popisují sulfonylaminobenzylaminové deriváty a jejich použití jako vředových inhibitorů . Konkrétně je popsána sloučenina N-2[[[ (4-chlorf enyl) methyljmethylaminojmethyljfenyl-5-chinolin sulfonamid.

Podstata vynálezu

Předložený vynález je veden na nové deriváty arylsulfonylaminobenzamidu nebo arylsulfonylaminobenzaminové deriváty vzorce I (viz dále). Také se popisuje způsob přípravy sloučenin vzorce I. Nové sloučeniny z předloženého vynálezu vykazují antitrombotickou aktivitu přes inhibici faktoru Xa.

Dále je popsán způsob léčeni trombózy, ischemie, mrtvice, restenózy nebo zánětu u savců, kteří potřebují takovou léčbu, a zahrnují podání účinného množství sloučeniny vzorce I uvedenému savci. Dále poskytuje farmaceutickou kompozici obsahující sloučeninu vzorce I a jeden nebo více farmaceuticky přijatelných nosičů nebo ředidel.

Podrobný popis výhodného provedeni

První provedeni předloženého vynálezu je vedeno na způsob léčení trombózy, ischemie, mrtvice, restenózy nebo zánětu, a zahrnuje podání savci, který tuto léčbu potřebuje, terapeuticky nebo profylakticky účinného množství sloučeniny vzorce I:

nebo jejích farmaceuticky přijatelných solí; kde

R¹ je alkyl, substituovaný alkyl, cykloalkyl, aryl, substituovaný aryl, heteroaryl nebo substituovaný heteroaryl;

o

R je jedním z vodíku, alkylu, cykloalkylu, arylu nebo aralkylu;

R³ je jedním z vodíku, hydroxyskupiny nebo alkoxyskupiny;

R⁴ je jedním z NH₂, fenylu, nebo C₃-ioheterocyklus, mající jeden nebo dva atomy dusíku, přičemž uvedený fenyl a uvedený C₃_₁₀heterocyklus jsou volitelně substituovány jedním nebo dvěma halogeny, hydroxyskupinou, hydroxyalkýlem, alkoxyskupinou, aminoskupinou, monoalkylaminoskupinou, dialkylaminoskupinou, aminoalkylem, monoalkylaminoalkylem a/nebo dialkylaminoalkylem;

X je jedním z -CH₂ - nebo - C(0)-;

8'

n je od nuly do jedenácti; a kde je X je navázáno na benzenový kruh v pozici orto-, metaného para- k sulfonylaminoskupině;

s tím, že když R⁴ je -NH2, potom R³ je vodík a n je jiné než nula; a také s tím, že když R³ je hydroxyskupina nebo alkoxyskupina, potom R⁴ je jiné než -NH2, a n je jiné než nula.

Druhý předmět předloženého vynálezu se týká nových sloučenin, a jejich farmaceuticky přijatelných kompozicí, které mají vzorec I (uvedený výše), nebo jejich farmaceuticky přijatelných solí; kde

R¹ je alkyl, substituovaný alkyl, cykloalkyl, aryl, heteroaryl nebo substituovaný heteroaryl;

R² je jedním z vodíku, alkylu, cykloalkylu, arylu nebo aralkylu;

R³ j^e jedním z vodíku, hydroxy nebo alkoxyskupiny;

R⁴ je jedním z -NH₂, fenylu, nebo C₃-i₀heterocyklu majícího jeden nebo dva atomy dusíku, přičemž uvedený fenyl a uvedený C₃-i₀heterocyklus jsou volitelně substituovány jedním nebo dvěma halogeny, hydroxyskupinou, hydroxyalkylem, alkoxyskupinou, aminoskupinou, monoalkylaminoskupinou, dialkylaminoskupinou, aminoalkylem, monoalkylaminoalkylem a/nebo dialkylaminoalkylem;

X je jedním z -CH₂ - nebo - C(0)-; a n je od nuly do jedenácti; a kde je X je navázán na benzenový kruh v pozici orto-, metaného para- k sulfonylaminoskupině;

s tím, že když R⁴ je -NH2, potom R³ je vodík a n je jiné než nula; a také s tím, že když R³ je hydroxyskupina nebo alkoxyskupina, potom R⁴ je jiné než -NH2, a n je jiné než nula; a dále s tím, že když R² je vodík nebo methyl, zatímco R³ je vodík, R⁴ je pyridyl, X je -C(0)-, a n je nula nebo jedna, potom R¹ je jiné než nesubstituovaný fenyl.

Pokud je R¹ heteroaryl nebo substituovaný heteroaryl, výhodné heteroarylové skupiny zahrnuji pyridyl, thienyl, chromenyl, benzoxazolyl, chinazolinyl, chinolinyl a tetrahydrochinolinyl. Výhodné skupiny, když R¹ je substituovaný heteroaryl, zahrnuji ty heteroarylové skupiny zmíněné jako výhodné, mající jeden nebo více substituentů vybraných z halogenu, Ci_₆alkylu, karboxyskupiny, aminoskupiny, Ci_₆alkylaminoskupiny a/nebo di (Ci_₆) alkylaminoskupiny.

Pokud je R⁴ C₃_₈heterocyklus, výhodné veličiny R⁴ zahrnují chinuklidinyl, piperidinyl, morfolinyl, pyrrolidinyl, pyrimidinyl a imidazol.

Výhodné veličiny R⁴ zahrnují -NH₂, fenyl, 2-pyridyl, 4pyridyl, 3-chinuklidyl, piperidinyl a aminomethylfenyl.

Je zřejmé, že vzorec I umožňuje, aby arylsulfonylaminová část byla navázána na některou z orto-, meta- nebo parapozicí, vzhledem ke skupině X, přičemž meta- je preferováno.

Výhodnými sloučeninami předloženého vynálezu jsou ty vzorce I, kde R¹ je výhodně substituovaný C6-i2aryl, ještě výhodněji C6_10aryl; R² je jedním z vodíku, Ci-8alkylu, C₃-₈cykloalkylu nebo C₆_i₂arylu; R³ je jedním z vodíku, hydroxy skupiny nebo Ci_8alkoxyskupiny; R⁴ je jedním z -NH2, fenylu nebo pyridylu, kdy uvedený fenyl a pyridyl jsou volitelně substituovány jedním nebo dvěma halogeny, hydroxyskupinou, Ci_₈alkoxyskupinou, aminoskupinou, mono(Ci_₄) alkylaminoskupinou, di (Ci_₄) alkylaminoskupinou, nebo amino(C!-₄) alkylem; X je -C(0)-; a n je nula až osm.

Nejvýhodnějšími jsou sloučeniny vzorce I, kde R¹ je fenyl. aminofenyl nebo naftyl; R² je vodík nebo C₁_₄alkyl; R³ je vodík, • ·

hydroxyskupina nebo C₁_₄alkoxyskupina; R⁴ je jedním z -NH₂, fenylu, pyridylu, 3-hydroxyfenylu, 4-hydroxyfenylu, 4-hydroxy-

3-methoxyfenylu, 3-hydroxy-4-methoxyfenylu, 4-dimethylaminofenylu a 3-aminomethylfenylu. Když R⁴ je -NH₂, nejvýhodnější hodnoty n zahrnují 3, 4 a 7. Když R⁴ je volitelně substituovaný fenyl nebo volitelně substituovaný pyridyl, nejvýhodnější hodnoty n zahrnují nulu a jedna.

Proto jsou následující sloučeniny nej výhodnější:

3-[ (2-naftalenyisulfonyl) amino]-N-[2-hydroxy-2- (3' -hydroxyfenyl) ethyljbenzamid;

3-[ (2-naftalenyisulfonyl)amino]-N-[2-hydroxy-2-(4'-hydroxyfenyl) ethyljbenzamid;

3-[ (2-naftalenyisulfonyl) amino]-N-[4 '-[(Ν', N' -dimethylamino) fenyl) met hyljbenzamid;

3-[ (2-naftalenyisulfonyl) amino]-N-[4 (amidinoamino) butyljbenzamid;

3-[ (fenylsulfonyl)amino]-N-[ (4-hydroxy-3-methoxyfenyl)methyl] benzamid;

3-[ (fenylsulfonyl) amino]-N-[2-hydroxy-2- (3'-hydroxyfenyl) ethyl] benzamid;

3-[ (fenylsulfonyl)amino]-N-[2-hydroxy-2-(4'-hydroxy-3'-methoxyfenyl) ethyl]benzamid;

3-[ (fenylsulfonyl)amino]-N-[2-(3'-hydroxy-4'-methoxyfenyl) ethyl] benzamid;

3-[ (fenylsulfonyl)amino]-N-[ (3'-BOC- aminomethylfenyl) methyl] benzamid;

3-[ (fenylsulfonyl)amino]-N-[ (3'-aminomethylfenyl)methyl] benzamidová hydrochloridová sůl ;

3-[ (2-naftalenyisulfonyl) amino]-N-[ (2 ' -pyridyl) methyljbenzamid;

3-[ (2-naf talenyisulfonyl) amino]-N-[ (3 ' -aminomethylf enyl) methyl] benzamid;

3-[ (fenylsulfonyl) amino]-N-[4-aminobutyl) Jbenzamid;

3-[ (3'-aminofenylsulfonyl) amino]-N-[4 '-[ (Ν', N'-dimethylamino) fenyljmethyljbenzamid;

3-[(2-naftalenylsulfonyl)amino]-N-[5-aminopentyl)benzamid; a

3-[ (2-naftalenylsulfonyl)amino]-N-[8-aminooktyl)benzamid.

Termín „alkyl, jak se zde používá, zahrnuje přímé i větvené řetězce radikálů do 12 atomů uhlíku, přednostně 1-8 uhlíků, jako je methyl, ethyl, propyl, isopropyl, butyl, t.butyl, isobutyl, pentyl, hexyl, isohexyl, heptyl, 4,4dimethylpentyl, oktyl, 2,2,4-trimethylpentyl, nonyl, decyl, undecyl, dodecyl, a jejich různé větvené řetězce isomerů.

Termín „substituovaný alkyl, jak se zde používá, zahrnuje alkylskupiny, jak jsou definovány výše, které mají jeden, dva nebo tři halogensubstituenty, nebo jeden C₆_₁₀aryl, Ci_₆alkyl (C₆-io) aryl, halogen (C₆-io) aryl, C₃_₈cykloalkyl, Ci_₆alkyl (C₃_₈) cykloalkyl, C₂_₈alkenyl, C₂_₈alkynyl, hydroxyskupinu a/nebo karboxyskupinu.

Termín „cykloalkyl, jak se zde používá, zahrnuje nasycené cyklické uhlovodíkové skupiny obsahující 3 až 12 uhlíků, výhodně 3 až 8 uhlíků, které zahrnují cyklopropyl, cyklobutyl, •cyklopentyl, cyklohexyl, cykloheptyl, cyklooktyl, cyklodecyl a cyklododecyl, některé z těchto skupin mohou být substituovány substituenty, jako je halogen, nižší alkyl, alkoxyskupina a/nebo hydroxyskupina.

Termín „aryl, jak se zde používá, jako sám o sobě nebo jako část jiné skupiny, označuje monocyklické nebo bicyklické aromatické skupiny obsahující od 6 do 12 uhlíků v kruhové části, výhodně 6 až 10 uhlíků v kruhové části, jako je fenyl, naftyl nebo tetrahydronaftyl.

Termín „aralkyl, jak se zde používá, označuje arylové skupiny, jak jsou definovány výše, které jsou navázány na Ci_₆alkylskupinu.

Termín „heterocyklická skupina nebo „heterocyklus, jak se zde používá, označuje skupiny, které mají 3 až 10 uhlíkových atomů, a majících jeden nebo více 4, 5, 6 nebo 7 členných nasycených nebo nenasycených kruhů obsahujících 1,2 nebo 3 kyslíkové, dusíkové nebo sírové heteroatomy ( kdy příklady heterocyklických radikálů jsou: tetrahydrofuran, 1,4-dioxan,

1,3,5-trioxan, pyrrolidin, piperidin, piperazin, imidazolin, isoindolin, chroman, isochroman, pyrazolidin, chinuklidin, pyridin, pyrrol, oxazol, indol, purin, pyrimidin, 1,3-dithian, azetidin, tetrahydropyran, imidazol, tiazol, isoxazol, pyrazol, chinolin, cytosin, thiamin, uráčil, adenin, guanin, pyrazin, 1methyl-1,4-dihydronikotin, kyselina pikolinová, pikolin, kyselina furoová, furfural, furfurylalkohol, karbazol, isochinolin, 3-pyrrolin, thiofen, furan, hexamethylenimin, εkaprolakton, ε-kaprolaktam, omega-thiokaprolaktam, a morfolin).

Termín „heteroaryl, jak se zde používá, označuje skupiny mající 3 až 14 atomů v kruhu; 6, 10 nebo 14 π elektronů sdílených v kruhovém uspořádání; a obsahujících atomy uhlíku a 1, 2 nebo 3 heteroatomy kyslíku, dusíku nebo síry (přičemž příklady heteroarylových skupin jsou: thienyl, benzo[b]thienyl, nafto[2, 3-b]thienyl, thianthrenyl, furyl, pyranyl, isobenzofuranyl, benzoxazolyl, chromenyl, xanthenyl, fenoxathiinyl, 2Hpyrrolyl, pyrrolyl, imidazolyl, pyrazolyl, pyridyl, pyrazinyl, pyrimidinyl, pyridazinyl, indolizinyl, isoindolyl, 3H-indolyl, indolyl, indazolyl, purinyl, 4H-chinolizinyl, isochinolyl, chinolyl, ftalazinyl, naftyridinyl, chinazolinyl, cinolinyl,pteridinyl, 4aH-karbazolyl, karbazolyl, β-karbolinyl,

fenantridinyl, akridinyl, perimidinyl, fenantrolinyl, fenazinyl, isothiazolyl, fenothiazinyl, isoxazolyl, furazanyl a fenoxazinyl skupiny).

Terminy „substituovaný aryl a „substituovaný heteroaryl, jak se zde používají, zahrnují arylskupiny a heteroarylskupiny, jak jsou definovány výše, které zahrnují jeden nebo dva substituenty na aromatickém kruhu (kruzích), jako je Ci_₆alkyl, C3-8cykloalkyl, Ci_₆alkyl (C₃_₈) cykloalkyl, C₂_₈alkenyl, C₂_₈alkynyl, kyanoskupina, aminoskupina, Cý-galkylaminoskupina, di(C!_₆) alkylaminoskupina, benzylaminoskupina, dibenzylaminoskupina, nitroskupina, karboxyskupina, karbo (Ci_₆) alkoxyskupina, trif luormethyl, halogen, Ci_₆alkoxyskupina, C₆_i_Oaryl (Ci_₆) alkoxy skupina, hydroxyskupina, Ci-6alkylthioskupina, Ci_₆alkylsulf inyl, Ci-6alkylsulf onyl, Cg-ioarylthioskupina, C6-ioarylsulf inyl a/nebo C₆-ioaryisulf onyl.

Termíny „alkoxyskupina nebo „aralkoxyskupina zahrnují jakoukoliv z výše uvedených alkylových nebo aralkylových skupin navázaných na atom kyslíku.

Termín halogen nebo „halo, jak se zde používá, znamená sám o sobě nebo jako část jiné skupiny, chlor, brom, fluor nebo jod, přičemž preferovaný je chlor.

Termín „monoalkylaminoskupina, jak se zde používá, označuje skupinu -NH₂, kde jeden vodík je nahražen alkylskupinou, jak je definována výše.

Termín „dialkylaminoskupina, jak se zde používá, označuje skupinu -NH₂, kde jsou oba vodíky nahrazeny alkylskupinami, jak jsou definovány výše.

Termín „aminoalkyl, jak se zde používá, označuje jakoukoliv z výše uvedených alkylskupin substituovaných skupinou -NH₂.

Termín „hydroxyalkyl, jak se zde používá, označuje jakoukoliv z výše uvedených alkylskupin, substituovaných jednou nebo více hydroxylovými částmi.

Termín „BOP, jak se zde používá, označuje benzotriazol-1yloxytris(dimethylamino)fosfonium-hexafluorfosfát.

Termín „BOC, jak se zde používá, označuje aminem chráněnou skupinu t.butoxykarbonylu.

Sloučeniny podle předloženého vynálezu mohou být připraveny standardními postupy, jak jsou naznačeny ve schématu I.

Schéma I

BOP >

DMF | ΚεΝ—TOn—<

• · * · · · • · · * · « • · · · «

«» · • · · · kde R¹, R², R³, R⁴ a n jsou definovány jako výše. Dále R⁴ skupiny, mající více než jednu aminoskupinu, mohou mít jednu nebo více aminem chráněných skupin navázaných na aminoskupiny, které nereagují s karboxylovou kyselinou. Vhodné aminem chráněné skupiny zahrnují benzyloxykarbonyl t.butoxykarbonyl (BOC).

(CBZ) nebo výhodně

Nza

3.

Ester kyseliny aminobenzoové (který je substituován) 2 se zpracuje příslušným sulfonylchloridem standardních podmínek za vzniku N-sulfonylovaného derivátu

Vhodná rozpouštědla pro tento krok zahrnují methylenchlorid, tetrahydrofuran, acetonitril a dimethylformamid. Reakce probíhá při okolní teplotě použitím slabé báze, jako je N-methylmorfolin, triethylamin nebo luditin. Hydrolýzou zvýšené teplotě po krátkou vodnou kyselinou, jako je kyselina karboxylová 4.

vodným hydroxidem, dobu, následovanou

2N HC1, vznikne

Konečný produkt se příslušným aminem chráněna) 5 výhodně při okyselením odpovídající vytvoří interakcí karboxylové kyseliny 4 (nebo diaminem, v němž je jedna aminoskupina použitím velmi dobře známých postupů vázání peptidu. Reagenty pro interakci zahrnují nejvýhodněji Castrovo činidlo diisopropylethylamin, nebo (HOBT), hydroxysukcinimid, karbonyldiimidazol difenylfosforylazid (DPPA)/NEt₃.

(CDI), (DPPA) /NEt₃, (BOP) / alternativně hydroxybenzotriazol

1,3-dicyklokarbodiimid (DCC), isobutylchloroformiát/NEt₃, nebo nebo difenylfosforylazid

Sloučeniny podle jsou syntetizovány benzaldehydu, použitím předloženého vynálezu, kde X je -CH₂- _rredukční aminací příslušného derivátu příslušného aminu 5.

Sloučeniny, které orto- nebo para, mohou mají arylsulfonylaminovou část v poloze být vytvořeny použitím běžně dostupného • ·

methylesteru kyseliny anthranilové nebo methyl-p-aminobenzoátu namísto methyl-3-aminobenzoátu.

Sloučeniny z předloženého vynálezu se odlišují svou schopností přednostně inhibovat faktor Xa ve srovnání s trombinem a/nebo plasminem. Jako inhibitory faktoru Xa inhibují sloučeniny z předloženého vynálezu produkci trombinu. Proto jsou sloučeniny vhodné pro léčení nebo prevenci stavů charakterizovaných abnormální venózní nebo arteriální trombózou, včetně produkce trombinu nebo účinku. Tyto stavy zahrnují, ale neomezují se na ně: hlubokou žilní trombózu; roztroušenou intravaskulární koagulopathii, která nastává při septickém šoku, virové infekce a rakovinu; infarkt myokardu; mrtvici; koronární arteriální bypass; nahradu kyčli; a vznik trombu vyplývajícího buď z trombolytické terapie nebo perkutánní transluminální koronární angioplastiky (PCTA). Sloučeniny podle předloženého vynálezu mohou být rovněž použity jako antikoagulanty v mimotělním krevním oběhu. Na základě působení obou, faktoru Xa a trombinu u typu hostitelských buněk, jako jsou buňky hladkého svalstva, endotelové buňky a neutrofily, nacházejí sloučeniny z předloženého vynálezu další použití při léčení nebo prevenci syndromu respirační úzkosti u dospělých; zánětlivých reakcí, jako je edem; zpětném poškození; atherosklerózy; a restenózy následující poškození jako je balonová angioplastika, aterektomie, a vložení arteriálního stentu.

Sloučeniny podle předloženého vynálezu mohou být vhodné pro léčení neoplasie a metastáz, stejně jako neurodegenerativních nemocí, jako je Alzheimerova nemoc nebo Parkinsonova nemoc.

Sloučeniny podle předloženého vynálezu mohou být použity spolu s trombolytickými činidly, jako je aktivátor plasminogenu tkáně, streptokináza a urokináza. Dále mohu být sloučeniny podle předloženého vynálezu použity spolu s jinými antitrombotickými nebo antikoagulačnimi léčivy, jako jsou, ale neomezuji se na ně, antagonisty fibrinogenu a antagonisty receptoru tromboxanu.

Pro medicinální použití jsou preferovány farmaceuticky přijatelné kyselé adiční soli, ty soli, v nichž anion výrazně nepřispívá k toxicitě nebo farmakologické aktivitě organického kationtu. Tyto kyselé adiční soli se získají bud reakcí organické báze vzorce I s organickou nebo anorganickou kyselinou, výhodně kontaktem v roztoku, nebo jakýmikoliv standardními postupy popsanými podrobně v literatuře, dostupné odborníkovi ze stavu techniky. Příklady vhodných organických kyselin jsou karboxylové kyseliny, jako je kyselina maleinová, kyselina octová, kyselina vinná, kyselina propionová, kyselina fumarová, kyselina isethionová, kyselina jantarová, kyselina palmoová, kyselina N-cyklohexylsulfamová, kyselina pivalová a podobné. Vhodnými anorganickými kyselinami jsou halogenovodíkové kyseliny, jako je HC1, HBr, HI, kyselina sírová, kyselina fosforečná a podobné.

Sloučeniny podle předloženého vynálezu mohou být podávány v účinném množství v dávkovém rozmezí od asi 0,1 do asi 500 mg/kg, výhodně mezi 0,1 až 10 mg/kg tělesné hmotnosti, v režimu dávkování jediné dávky nebo 2-4 rozdělení denní dávky.

Farmaceutické kompozice podle vynálezu mohou být podány zvířeti, které vyzkouší výhodné působení sloučenin podle vynálezu. Na prvém místě jsou lidé, avšak vynález nemá být takto omezen.

Farmaceutické kompozice podle předloženého vynálezu mohou být podány jakýmikoliv způsoby, kterými se dosáhne uvažovaného ···« účelu. Například může být podáni parenterální, subkutánni, intravenózní, intramuskulární, intraperitoneálni, transdermální, bukálni, nebo oční cestou. Obdobně, nebo obráceně, může být podáni orální cestou. Podávaná dávka závisí na věku, zdraví a hmotnosti pacienta, typu souběžného léčení, pokud je, častosti léčeni, a povaze potřebného účinku.

Spolu s farmakologicky účinnými sloučeninami mohou nové farmaceutické přípravky obsahovat vhodné farmaceuticky přijatelné nosiče obsahující excipienty a pomocné látky, takže mohou být farmaceuticky využity k úspěšnému zpracování aktivních sloučenin do přípravků. Farmaceuticky přijatelné přípravky podle předloženého vynálezu se vyrábějí způsobem, který je sám o sobě známý, například prostřednictvím běžného míchání, granulace, výroby dražé, rozpouštěním nebo lyofilizačními postupy. Farmaceutické přípravky pro orální užití se mohou získat spojením aktivních sloučenin s pevnými excipienty, výhodně mletím výsledné směsi a zpracováním směsi na granule po přídavku vhodných pomocných látek, pokud jsou požadovány nebo jsou nezbytné pro získání tablet nebo jader dražé.

Vhodnými excipienty jsou zejména plniva, jako jsou sacharidy, například laktóza nebo sacharóza, manitol nebo sorbitol, celulózové přípravky a/nebo vápenaté fosfáty, například fosforečnan vápenatý nebo hydrogenfosforečnan vápenatý, stejně jako plniva, jako je škrobová kaše, použitím například kukuřičného škrobu, pšeničného škrobu, rýžového škrobu, bramborového škrobu, želatiny, tragakantu, methylcelulózy, hydroxypropylmethylcelulózy, sodné karboxymethylcelulózy, a/nebo polyvinylpyrrolidonu. Pokud je to potřeba, přidá se dezintegrační činidlo, jako jsou výše uvedené škroby a také karboxymethylový škrob, zesítěný polyvinylpyrrolidon, agar nebo alginová kyselina nebo jejich sůl, jako je • · • · · · · · · • · · · · · alginát sodný. Pomocnými činidly jsou výše uvedená, činidla regulující tekutost a mazadla, například silika, talek, kyselina stearová nebo jejich soli, jako je stearát horečnatý nebo stearát vápenatý a/nebo polyethylenglykol. Jádra dražé jsou opatřena vhodnými potahy, které jsou, pokud je to požadováno, odolné vůči žaludečním šťávám. Pro tyto účely lze použít koncentrované roztoky sacharidu, které výhodně obsahuji arabskou gumu, talek, polyvinylpyrrolidon, polyethylenglykol a/nebo oxid titaničitý, roztoky laků a vhodná organická rozpouštědla nebo směsi rozpouštědel. Aby se připravily povlaky odolné vůči žaludečním šťávám, používají se roztoky vhodných celulózových prostředků, jako je ftalát acetylcelulózy nebo ftalát hydroxypropylmethylcelulózy. Pro identifikaci , nebo z důvodů charakterizace kombinací dávek účinné složky, se přidávají do tablet nebo povlaků dražé barviva nebo pigmenty.

Další farmaceutické přípravky, které mohou být použity orálně, zahrnují kapsle, způsobilé pro plnění, vyrobené z želatiny, stejně jako měkké uzavřené kapsle vyrobené z želatiny a změkčovadla, jako je glycerol nebo sorbitol. Kapsle způsobilé pro plněni mohou obsahovat aktivní sloučeniny ve formě granulí, které mohou být smíseny s plnivy jako je laktóza, pojivý jako jsou škroby a/nebo mazadly, jako je talek nebo stearát horečnatý, a , volitelně, stabilizátory. V měkkých kapslích jsou aktivní sloučeniny výhodně rozpuštěny nebo suspendovány ve vhodných kapalinách, jako jsou mastné oleje nebo tekuté parafiny. Dále mohou být přidány stabilizátory.

Vhodné formulace pro parenterální podání zahrnují vodné roztoky aktivních sloučenin ve formě rozpustné ve vodě, například ve vodě rozpustné soli a alkalické roztoky. Zejména výhodnými alkalickými solemi jsou amonné soli, připravené například s Tris, hydroxidem cholinu, bis-Tris propanem, Nmethylglukaminem, nebo argininem. Dále, suspenze aktivních

sloučenin mohou být podávány jako vhodné olejové injekční suspenze. Vhodná lipofilní rozpouštědla nebo 'nosiče zahrnují mastné oleje, například sezamový olej, nebo estery syntetických mastných kyselin, například ethyloleát, nebo triglyceridy nebo polyethylenglykol-400 (sloučeniny jsou rozpustné v PEG-400). Vodné injekční suspenze mohou obsahovat složky, které zvyšuji viskozitu suspenze, například sodnou karboxymethylcelulózu, sorbitol a /nebo dextran. Výhodně také mohou suspenze obsahovat stabilizátory.

Následující příklady ilustrují, ale neomezující se na ně, způsob a složení podle předloženého vynálezu. Další vhodné modifikace a adaptace různých podmínek a parametrů běžně uvažovaných a zřejmých pro odborníka ze stavu techniky jsou v duchu a rozsahu vynálezu.

Příklady provedeni

Přiklad 1

Příprava methyl-3-aminobenzoátu (11) .OMe

O

Směs methyl 3-nitrobenzoátu (18,1 g, 0,10 mmol) v ethanol/tetrahydrof uranu (THF) (9:1), a 1,8 g 10% Pd/C se hydrogenuje při atmosferickém tlaku a teplotě okolí po 24 hodiny. Reakční směs se zfiltruje přes Celit (Celit je registrovaná ochranná známka Johns-Manville Product Corporation pro křemelinu) a promyje se ethanolem. Rozpouštědlo se odstraní ve vakuu za vzniku v názvu uvedené sloučeniny jako světle žluté pevné látky (14,7 g; 97% výtěžek), která se použije bez další purifikace v další reakci ¹H-NMR (200 MHz; CDC1₃) δ 7,43 (d,

1H, J = 7,6 Hz), 7,35 (t, IH, J = 2,3 Hz), 7,25 (d, 1H, J = 2,3 Hz), 7,19 (d, 1H, J = 7,7 Hz), 3,89 (s, 3H), 3,7 ppm (bs, 2H).

Příklad 2

Methyl-3-((2-naftalenyl)sulfonyl) aminobenzoát (12)

Do 5,0 g (33 mmol) methyl-3-aminobenzoátu (11) , připraveného v příkladu 1, v 70 ml methylenchloridu obsahujícího 4,0 ml (36 mmol) N-methylmorfolinu, se přidá 7,49 g (33 mmol) 2-naftalensulfonylchloridu. Po míchání při teplotě místnosti přes noc se reakční směs ochladí 1 N HC1 (100 ml) . Suspenze se rozpustí v asi 250 ml THF a přidá se dostatek etheru k vyvolání dělení fází. Organický extrakt se promyje nasyceným roztokem chloridu sodného (2 x) . Organická fáze se suší (MgSO₄) a koncentruje se za vzniku 11,0 g (97% výtěžek) v názvu uvedené sloučeniny jako světle žluté pevné látky: ^XH-NMR (200 MHz; DMSO-d₆) δ 8,46 (s, 1H) , 8,13 (t, 2H) , 7,99 (d, 1H) , 7,55-7,75 (m, 5H) , 7,43 (dd, 21H) , 7,38 (d, 1H) , 3,79 ppm (s, 3H) .

Přiklad 3

Příprava 3-((2-naftalenyl)sulfonyl)aminobenzoové kyseliny (13)

Roztok 10,8 g (31,7 mmol) methyl-3-((2naftalenyl)sulfonyl)aminobenzoátu (12), připraveného v přikladu 2, se ve 100 ml 1 N NaOH míchá při 50 °C po 20 minut. Reakční směs se zchladí nadbytkem 2 N HC1, zředí se tetrahydrofuranem k rozpuštění suspenze. Přidá se ether, aby se vyvolalo dělení fází. Organický extrakt se suší (MgSO₄) a rozpouštědlo se odstraní ve vakuu. Triturací z ether/tetrahydrofuran/hexanu se získá 10,0 g sloučeniny uvedené v názvu: ¹H-NMR (200 MHz, DMSOd₆) 8 8,45 (s, 1H), 8,13 (t, 2H) , 7,99 (d, 1H), 7,54-781 (m, 5H) , a 7,77-7,43 ppm (m, 2H) . Hmot.spektrum (MALDI-TOF) vypočt. pro C17H13NO4S: 328,1 (M+H) a 350,0 (M+Na). Nalezeno:

328,7 (M+H), 349,8 (M+Na).

Příklad 4

Příprava 3-[ (2-naftalenylsulfonyl) amino]-N-[2-hydroxy-2- (3' hydroxyfenyl) ethylJbenzamidu (14)

O

Do 160 mg (0, 469 mmol) 3- ( (2-naftalenyl) sulfonylaminobenzoové kyseliny (13), připravené v příkladu 3, ve 2 ml N,N-dimethylformamidu, se postupně přidá 221 mg (0,50 mmol) Castrova činidla (benzotriazol-l-yloxytris(di-methylamino) fosfonium-hexafluorfosfát) a 500 μΐ (2,87 mmol) N,Ndiisopropylethylenaminu. Přidá se 94,8 mg (0,50 mmol) inorepinefřinu HC1. Po mícháni 20 minut se reakční směs zchladí 2 N HC1 (5 ml) a potom se extrahuje do ethylacetátu (2x4 ml). Organická fáze se promyje nasyceným NaHCO₃, suší se (Na₂SO₄) a koncentruje se za vzniku 150 mg v názvu uvedené sloučeniny jako pěny. NMR (DMNO-d₆; 300MHz) δ 10,56 (s, 1H) , 9,31 (s, 1H) ,

8,45 (m 2H) , 8,11 (t, 2H) , 8,00 (d, 1H) , 7,77 (dd, 1H, J = (1.8, 8.7 Hz), 7,59-7,72 (m, 3H) , 7,42-7,47 (m, 1H), 7,22-7,30 (m, 2H), 7,08 (t, 1H) , 6,77 (s, 1H) , 6,72 (d, 1H, J = 7,6 Hz),

6,62 (dd, 1H, J = 1.8, 7.7 Hz), 5,40 (d, 1H), J = 4,2 Hz), 4,63 (pentet, 1H) a 3,14-3,23 ppm (m, 1H) . Hmton. spektrum (MALDITOF) vypočt. pro C₂5H₂₂N₂O₅S: 485, 1 (M + Na). Nalezeno: 484, 9.

Příklad 5

Příprava

3-[ (2-naf talenylsulfonyl) amino]-N-[2-hydroxy-2- (4' - hydroxyfenyl) ethylJbenzamidu (15)

Uvedená sloučenina se připraví stejným postupem jako v příkladu 4 použitím 94,8 mg (0,5 mmol) ioktopaminu HC1.

Purifikace se dosáhne přechodem surového reakčního produktu přes 15 ml silikagelu použitím eluentů methylenchlorid/ ethylacetát (2:1 až 1:1) a získá se 122 mg v názvu uvedené sloučeniny jako pěny: NMR(DMSO-d₆; 300 MHz) δ 10,56 (S, 1H),

9,26 (s, 1H),	8, 44	(s,	1H),	8,36 (t, 1H, J = 5 Hz), 8,10	(t,
2H), J = 9 Hz)	, θ,ΟΟ (d,	8 Hz)	, 7,78 (dd, 1H,	J =	1,7	Hz,	8	Hz),
7,61-7,72 (m,	3H) ,	7,39·	-7,44	(m, 1H), 7,24-	7,29	(m,	1H)	f	7,12
(d, 2H, J = 7	Hz) ,	6, 69	(d,	2H, J = 7 Hz) ,	5,28	(d,	1H,	J	= 5
Hz, 4,60), 4,03 (q,	1H,	J = 7	Hz), 3,16-2,52	ppm	(m,	1H) .

Přiklad 6

Příprava 3-[ (2-naftalenylsulfonyl) amino]-N-[4' -[ (Ν' ,N' -dimethylamino) fenyljmethyljbenzamidu (16)

Do roztoku 160 mg (0, 469 mmol) kyseliny 3- ( (2-naftalenyl) sulfonyl)aminobenzoové (13), připravené v příkladu 3, v 1 ml N, N-dimethylformamidu, se přidá 1 ml 0,5 M (0,5 mmol) Castrova činidla (benzotriazo-l-yloxytris(dimethylamino)fosfonium hexafluorofosfát) v N,N-dimethylformamidu, a potom 500 μΐ N,Ndiisopropylethylenaminu. Po 5 minutách se roztok přenese po kapkách do roztoku 104 mg ( 0,47 mmol) 4-(dimethylamino)benzylamindihydrochloridové soli v N,N-dimethylformamidu. Po 30 minutách se reakční směs zchladí 10 ml nasyceného NaHCO₃, a extrahuje se do ethylacetátu (3 ml). Organická fáze se promyje

nasyceným NaHCO₃ (4 x 5 ml), koncentrovaným ve vakuu, a krystalizuje z ethylacetát/hexan/methylenchlorid/etheru za vzniku 90 mg v názvu uvedené sloučeniny: NMR (DMSO-dg; 300 MHz) 8 10,55 (s, 1H), 8,82 (t, 1H, J = 6 Hz), 8,44 (d, 1H, J = 1 Hz), 8,0-9 (t, 2H), 7,99 (d, 1H, J = 7 Hz), 7,77 (dd, 1H, J = 1,8 Hz), 7,61-7,72 (m, 3H), 7,44-7, 48 (m, 1H) , 7,22-7,29 (m, 2H), 7,09 (d, 2H, J = 9 Hz), 6,65 (d, 2H, J = 9 Hz), 4,27 (d, 2H, J = 6 Hz), 2,84 ppm (s, 6H).

Příklad 7

Příprava 3-[ (2-naf talenylsulfonyl) amino]-N-[ (4-amidinoamin) butyljbenzamídu (17)

Do míchací sulfát, s kulatým dnem, vybavené magnetickou se vloží agmatin sulfát ((4-aminobutyl)guanidin Chem.Co) (173,4 methylenchloridu (5

Do reakční mmol), suché 50ml nádoby tyčí, běžně dostupný od Aldrich suspendovaný atmosférou suchého v bezvodém dusíku.

mg;

ml)

0,76 se , pod přidá (0,44 ml;

chlortrimethylsilan diisopropylethylaminem (3,8 ml; 22,8 magneticky míchá při teplotě okolí po směsi přidá agmatin sulfát.

2, 66 mmol), mmol).

nádoby následovaný N,NReakční hodiny potom, směs se co se do

Do oddělené suché 25ml nádoby s vybavené kruhovým dnem, magnetickou míchací tyčí a zpětným chladičem, se vloží

3-((2-naftenyl)sulfonyl)aminobenzoová kyselina (13) (250 mg;

0,76 mmol) a thionylchlorid (2 ml) pod atmosférou suchého dusíku. Směs se ohřívá na 50 °C po jednu hodinu. Přebytek thionylchloridu se potom odstraní ve vakuu. Zbylý zbytek se rozpustí v bezvodém methylenchloridu (2x2 ml) a přenese se do reakční nádoby obsahující agmatin. Reakční směs se míchá při teplotě okolí po další jednu hodinu, po níž se směs nalije do ledově chladného nasyceného roztoku (25 ml) uhličitanu sodného. Vodná vrstva se extrahuje ethylacetátem (10 x 20 ml). Organická vrstva se suší nad síranem sodným, potom se odpaří za vzniku produktu uvedeného v názvu: ¹H-NMR (DMSO-d₆; 300 MHz) δ 8,457,12 (13H;m), 3,25-2,72 (2H;m) , 1, 53-1, 46 (2H;m), 1,26-1,01 (4H; m). Hmotn.spektrum (MALDI-TOF; matrice kyseliny sinapinové) vypočt. pro C22H25N5O3S: 440 [M+H]. Nalezeno: 440 [M+HJ.

Příklad 8

Příprava methyl 3-(fenylsulfonyl)amínobenzoátu (18)

Do 4,6 g (3,03 mmol) methyl -3-aminobenzoátu, připraveného v příkladu 1, ve 30 ml methylenchloridu obsahujícího 4,0 ml (36 mmol) N-methylmorfolinu, se přidají 4,0 ml ( 33 mmol) benzensulfonylchloridu. Po míchání při teplotě místnosti po dobu 1 hodiny se ochladí reakční směs vodou (100 ml). Suspenze se rozpustí v kombinaci ethylacetát/ether. Organická fáze se promývá postupně 2N HC1 a potom uhličitanem sodným. Organická fáze se suší (MgSO₄) , koncentruje a trituruje z ethylacetát/

27.

. -.....♦ -- • · · ·	T	• ·	• λ a · ..... • · · ·
• · ·	•	•	• · · ·
• · · ·	•	•	• · · · · ·
• · * · · . · ·		• · ·	• · · • · · ·

hexanetheru za vzniku 8,0 g (90%) sloučeniny uvedené v názvu jako bezbarvé pevné látky: NMR (DMSO-d₆; 300 MHz) δ 10,58 (s,

1H), 7,75-7,84 (m, 3H) , 7, 52-7,72 (m, 4H), 7,35-7,45 (m, 2H), a 3,82 ppm (s, 3H).

Přiklad 9

Příprava 3- (fenylsulfonyl) amínobenzoové kyseliny (19)

Do 8,0 g (27 mmol) methyl-3-aminobenzoátu se přidá 60 ml 2N NaOH. Po mícháni po 30 minut při teplotě okolí se reakční směs promyje etherem a potom se okyselí 2,5 N HC1. Reakční směs se extrahuje do ethylacetátu, suší se (MgSO₄) a koncentruje za vzniku 6,62 g (89%) po promyti pevné složky směsí ether/hexan: NMR (DMSO-d₆; 300 MHz) δ 13,0 (bs, 1H), 10,53 (s, 1H), 7,75-7,84 (m, 2H), 7,69 (t, 1H), 7,52-7,66 (m, 4H), 7,28-7,42 ppm (m, 2H). Hmotn. spektrum (MALDI-TOF) počít, pro C13H11NO4S: 300, 0 (M+Na) . Nalezeno 299,7.

Příklad 10

Příprava 3-[ (fenylsulfonyl) amino]-N-[ (4-hydroxy-3-metoxyfenyl) methylJbenzamidu (20)

N H

OMe

Do 139 mg (0,5 mmol) 3-(fenylsulfonyl)aminobenzoové kyseliny, jak se připraví v příkladu 9, v 1 ml N,Ndimethylformamidu, se postupně přidá 1 ml 0,5 M (0,5 mmol) Castrova činidla (benzotriazol-l-yloxytris(dimetthylamino)fosfonium hexafluorofosfát) v N,N-dimethylformamidu a potom 500 μΐ N,N-diisopropylethylaminu. Po 5 minutách se přidá 95 mg (0,5 mmol) 4-hydroxy-3-methoxybenzylaminu HC1. Po 30 minutách se reakční směs ochladí 7 ml 2 N HC1, extrahuje se do ethylacetátu (2 x 2 ml), promyje se vodou (3 x 4 ml) a potom nasyceným NaHCO₃ (1 x 4 ml) . Organická fáze projde přes Watersovu extrakční kolonu s pevnou fází (5 g silikagelu), do níž se přidá Na₂SO₃ působící jako sušící činidlo. Promytím ethylacetátem vznikne sloučenina uvedená v názvu: NMR (DMSO-d₆; 300MHz) 5 10,46 (s, 1H), 8,88 (t, 1H), 8,84 (s, 1H), 7,74-7,81 (m, 3H) , 7,50-7,70 (Μ, 6H) , 7,30 (t, 1H) 7,22 (d, 1H) , 6,87 (s, 1H), 6,69 (t, 2H), 4,31 (d, 2H) , 3,73 ppm (s, 3H) . Hmotn.

spektrum (MALDI-TOF; matrice kyselina gentisová) počít, pro C₂₁H₂₀N₂O₅S: 435,1 (M + Na). Nalezeno: 435, 0.

Přiklad 11

Příprava 3-[ (fenylsulfonyl) amino]-N-[ (2-hydroxy-3' -hydroxyfenyl) ethylJbenzamidu (21)

Sloučenina uvedená v názvu se připraví použitím stejného postupu, jako je popsaný v příkladu 10, a Inorepinefřinu (95 mg; 0,5 mmol) jako spojovacího aminu: NMR (DMSO-d₆; 300 MHz) δ 10,46 (s, 1Η), 9,31 (s, 1H), 8,46 (t, 1H, J = 5 Hz), 7,70-7,8 ((m, 2H), 7,41-7,7 (m, 5H), 7,30 (t, 1H) , 7,22 (d, 1H), 7,10 (t, 1H), 6,79 (s, 1H), 6,74 (d, 1H) , 6,63 (dd, 1H), 5,41 (d, 1H, J = 4 Hz), 4,64 (pentet, 1H) , 3, 36-3, 48 (m, 1H) , a 3,153,28 ppm (m, 1H). Hmotn. spketrum (MALDI-TOF; matrice kyselina gentisová) počít, pro C21H20N2O5S: 451,1 (Μ + K) . Nalezeno:

435.0, 451,2.

Příklad 12

Příprava 3-[ (fenylsulfonyl) amino]-N-[2-hydroxy-2- (4 ' -hydroxy-3' metoxyfenyl) ethyljbenzamídu (22)

Sloučenina uvedená v názvu se připraví použitím stejného postupu, jako je popsaný v příkladu 10, a tnormetanefrinu (110 mg; 0,5 mmol) jako spojovacího aminu: NMR (DMS0-d₆; 300 MHz) δ

10,45 (s, 1H), 8,81 (s, 1H) , 8,37 (t, 1H) , 7,71-7,8 ( (m, 2H) ,

7,45-7, 68 (m, 5H) , 7,29 (t, 1H) , 7,21 (d, 1H), 6,88 (s, 1H) , 6,71 (s, 2H) , 5,33 (d, 1H) , 4,63 (pentet, 1H) , 3,72 (s, 3H) a

3,2-3,4 ppm (m, 2H). Hmotn. spektrum (MALDI-TOF; matrice kyselina gentisová) počít, pro C22H22N2O6S: 463, 1 (M + Na), 481,1 (Μ + K). Nalezeno: 464.5, 480,5.

Příklad 13

Příprava 3-[ (fenylsulfonyl) amino]-N-[2- (3' -hydroxy-4' -metoxyfenyl) ethylJbenzamidu (23)

Sloučenina uvedená v názvu se připraví použitím stejného postupu, jako je popsaný v přikladu 10, a 4-0-methyldopaminu (102 mg; 0,5 mmol) jako spojovacího aminu: NMR (DMSO-d₆; 300 MHz) δ 10,45 (s, 1H) , 8,85 (s, 1H) , 8,48 (s, 1H), 7,74-7,78 (m, 2H), 7,4-7,7 (m, 5H) , 7,30 (t, 1H) , 7,21 (d, 1H) , 6,81 (d, 1H, J = 8 Hz), 6,65 (d, 1H, J = 2 Hz), 6,57 (dd, 1H), 3,71 (s, 3H) , 3,26-3,47 (m, 2H) , 2,64 ppm (t, 1H) . Hmotn. spektrum (MALDITOF; matrice kyselina gentisová) počít, pro C₂₂H₂₂N₂O₅S: 449, 1 (M + Na). Nalezeno: 448,9.

Příklad 14

Příprava N-BOC-m-xylylendiaminu (24)

Do 4,5 g (0, 033 mol) m-xylylendiaminu ve 100 ml THF obsahujících 6 ml (0,047 mmol) N,N-diisopropylethylaminu se přidají 3,0 g di-t.butyldikarbonátu. Reakční směs se míchá po minut, zchladí se 2 N NaOH, extrahuje se do methylenchloridu. Organická fáze se promyje vodou (5 x), a potom se okyselí 10% kyselinou citrónovou. Vodná fáze se alkalizuje 2 N NaOH a potom se extrahuje methylenchloridem. Organická fáze se suší (K₂CO₃) a koncentruje za vzniku 1,0 g sloučeniny uvedené v názvu: NMR (CDC1₃; 300 MHz) δ 7,31 (d, 1H) , 7,27 (d, 1H) , 7,23 (s, 1H), 7,18 (t, 1H), 4,87 (bs, 1H) , 4,32 (d, 2H) , 3,86 (s, 2H) , 1,45 ppm (s, 9H) .

Přiklad 15

Příprava 3-[ (fenylsulfonyl) amino]-N-[ (3' -BOC-aminomethylfenyl) methyljbenz amidu (25)

Sloučenina uvedená v názvu (45 mg) se připraví použitím stejného postupu, jako je popsaný v příkladu 10, použitím 118 mg aminu (24) z příkladu 14 jako spojovacího aminu. Purifikace se zajistí chromatografií přes 5 g Watersovy extrakční kolony pevné fáze (silikagel) použitím eluce ethylacetátem: NMR (DMSO-d_s; 300 MHz) δ 10,5 (bs, 1H) , 9,0 (t, 1H) , 7,0-7,8 (m,

13H) , 4,41 (d, 2H) , 4,09 ppm (d, 2H) . Hmotn. spektrum (MALDITOF; matrice kyselina gentisová) počít, pro C₂₆H₂₉N₃O₅S: 496, 2 (M + H), 518,2 (M + Na), 534,1 (Μ + K) . Nalezeno: 496.9, 517.9,

534.5 .

Příklad 16

Příprava hydrochloridové soli 3-[ (fenylsulfonyl) amino]-N-[ (3'aminomethylfenyl) methyl Jbenzamidu (26)

Sloučenina získaná v příkladu (35 mg) se 1 hodinu zpracovává s 1 ml 4 N HC1 v dioxanu.

ether/methylenchlorid/methanolu uvedené v názvu : NMR (DMSO-d_s; (t, 1H), 8,22 (bs, 2H), 7,0-7,8

Koncentrací a triturací z

se	získá 15	mg	sloučeniny
300	MHz) δ 10,5	(bs,	1H) , 9,07
(m,	13H), 4,44	(d,	2H) a 4,00

ppm (d, 2H). Hmotn. spektrum (MALDI-TOF; matrice kyselina gentisová) počít, pro C21H21N3O3S: 396, 1 (Μ + H) . Nalezeno:

396,0.

Příklad 17

Příprava 3-[ (2-naftalenylsulfonyl) amino]-N-[ (2' -pyridyl)methyl] benzamidu (27)

3-((Naftalenyi)sulfonyl·)aminobenzoová kyselina, jak je připravena v příkladu 3 (164 mg, 0,5 mmol), Castrovo činidlo • · (benzotriazol-l-yloxytris(dimethylamino)fosfonium hexafluorofosfát) (221 mg, 0,5 mmol), 2-(2-aminoethyl)pyridin (73 mg, 0,6 mmol) a triethylamin (0,2 ml) se smísí v suchém DMF (5 ml) a míchá se při teplotě místnosti po 3 hodiny. Směs se rozpustí v ethylacetátu (100 ml) a promyje se nasyceným NaHCO₃(2 x 50 ml), solankou (2 x 50 ml) a suší se nad Na₂SO₄. Odpařením rozpouštědla se získá sloučenina uvedená v názvu (185 mg, 86 %) jako bílá pěna: NMR (CDC1₃/CD₃OD) : δ 3,15 (t, 2H), 3,72 (t, 2H), 7,27 (t, 1H) , 7,43 (m, 5H), 7,59 (m, 2H), 7,78 (dd, 1H), 7,87 (m, 4H) , 8,37 (s, 1H), 8,47 (d, 1H) . Hmotn. spektrum (MALDI-TOF) počít, pro C₂₄H₂iN₃O₃S : 456, 5 (M + Na), nalezeno: 456,5.

Příklad 18

Příprava 3-[ (2-naftalenylsulfonyl) amino]-N-[ (3' -aminomethylf enyl) methyl jbenzamidu (28)

3-((Naftalenyl)sulfonyl)aminobenzoová kyselina, jak je připravena v příkladu 3 (230 mg, 0,7 mmol), Castrovo činidlo (benzotriazol-l-yloxytris(dimethylamino)fosfonium hexafluorofosfát) (310 mg, 0,7 mmol), m-xylylendiamin (680 mg, 5 mmol) a

triethylamin	(0,3 ml) se smísí v suchém DMF (5 ml) a míchá se
při teplotě	místnosti po 3 hodiny. Směs se rozpustí v
ethylacetátu	(100 ml) a promyje se nasyceným NaHCO₃ (2 x 50

ml), solankou (2 x 50 ml). Organická fáze se potom promyje 1 N HC1 (4 x 50 ml) a kyselý roztok se neutralizuje na pH 8 a extrahuje ethylacetátem ( 3 x 50 ml). Spojené ethylacetátové » ·

extrakty se promyji solankou (2 x 50 ml), suší se nad Na₂SO₄ a odpaří se za vzniku sloučeniny uvedené v názvu (130 mg, 42 %) jako bílé pevné látky: ^XH-NMR (300 MHz, DMSO-d₆ ): δ 3,82 (s,

2H), 4,40 (d, 2H), 7,27 (m, 5H) , 7,42 (t, 1H) , 7,65 (m, 3H) ,

7,78 (dd, 1H), 7,97 (d, 1H) , 8,05 (d, 1H), 8,08 (d, 1H), 8,42 (s, 1H) , 8,95 (t, 1H). Hmotn. spektrum (MALDI-TOF) počít, pro

C₂₅H₂3N₃O₃S: 4 68,5 (M + Na⁺) , nalezeno: 4 68,0.

Příklad 19

Příprava 3-[ (fenylsulfonyl) amino]-N- (4-aminobutyl)benzamidu (29)

3-(Fenylsulfonyl)aminobenzoová kyselina, jak je připravena v příkladu 9 (139 mg, 0,5 mmol), Castrovo činidlo (benzotriazol-l-yloxytris(dimethylamino)fosfonium hexafluorofosfát) (221 mg, 0,5 mmol), terč.aminobutylaminokarboxylát (100 mg, 0,6 mmol) a triethylamin (0,2 ml) se smísí v suchém DMF (5 ml) a míchá se při teplotě místnosti po 3 hodiny. Směs se rozpustí v ethylacetátu (100 ml) a promyje se nasyceným NaHCO₃(2 x 50 ml), solankou (2 x 50 ml) a suší se nad Na₂SO₄. Po odpaření rozpouštědla se zbytek smísí s 1:1 trifluoroctovou kyselinou (TFA) :CH₂C1₂ (10 ml), míchá se při teplotě místnosti po 2 hodiny a rozpouštědlo se odpaří za vzniku sloučeniny uvedené v názvu (140 mg, 81 %) jako TFA soli: ^-NMR (300 MHz, DMSO-d₆) : 8 1,17 (m, 4H) , 2,79 (t, 2H) , 3,23 (d, 2H) , 7,23 (d, 1H), 7,30 (t, 1H), 7,57 (m, 5H) , 7,60 (d, 2H) , 8,50 (t, 1H) .

Hmotn. spektrum (MALDI-TOF) počít, pro C₁₇H₂₁N₃O₃S: 370,4 (M +

Na), nalezeno: 370,7.

Příklad 20

Příprava 3-((3-nitrofenyl)sulfonyl)aminobenzoové kyseliny (30)

Do 1,51 g (10 mmol) methyl 3-aminobenzoátu, připraveného v přikladu 1, ve 40 ml methylenchloridu obsahujícího 2 ml Nmethylmorfolinu, se přidají 2,21 g (10 mmol) 3-nitrobenzensulfonylchloridu. Po míchání 3 hodiny při teplotě místnosti se přidá methylenchlorid (200 ml) a promyje se nasyceným NaHCO₃ (2 x 50 ml), IN HC1 (2 x 50 ml) a solankou (2 x 50 ml) a suši se nad Na₂SO₄. Po odpařeni rozpouštědla se zbytek rozpustí v THF (50 ml), přidá se 2 N NaOH (10 ml) a směs se zahřívá 2 hodiny na 60 °C. Po neutralizaci 1 N HC1 se směs extrahuje ethylacetátem (4 x 50 ml) a organická fáze se promyje solankou (2 x 50 ml), suší se nad Na₂SO₄ a odpařením se získá sloučenina uvedená v názvu (3,05 g, 94 %) jako bílá pevná látka: 1H-NMR (300 MHz, DMSO-d₆ ): δ 7,38 (m, 2H) , 7,65 (t, 1H) , 7,70 (s, 1H), 7,87 (t, 1H), 8,13 (dd, 1H) , 8,47 (dd, 1H) , 8,50 (t, 1H) , 10,81 (s, 1H), 13,11 (s, 1H).

Příklad 21

Příprava 3-[ (3' -aminofenylsulfonyl) amino]-N-[ (4' -[ (Ν' ,N' -dimethylamíno) fenyljmethyljbenzamidu (31)

3-((3-Nitrofenyl)sulfonyl)aminobenzoová kyselina, jak je připravena v příkladu 20 (322 mg, 1,0 mmol), Castrovo činidlo (benzotriazol-l-yloxytris(dimethylamino)fosfonium hexafluoro• · · · fosfát) (442 mg, 1,0 mmol), a N,N-diisopropylethyl-amin (0,4 ml) se smísí v suchém DMF (8 ml) a míchá se při teplotě místnosti po 3 hodiny. Směs se rozpustí v ethylacetátu (200 ml) a promyje se nasyceným NaHC0₃ (2 x 50 ml), solankou (2 x 50 ml) a suší se nad Na₂SO₄. Odpařením rozpouštědla se získá sloučenina uvedená v názvu (410 mg, 89 %) jako bílá pevná látka. ¹H-NMR (300 MHz, DMSO-d₆) : δ 3,06 (s, 6H) , 4,42 (d, 2H), 7,28 (d, 1H) , 7,35 (m, 3H) , 7,52 (m, 4H) , 7,86 (t, 1H) , 8,15 (d, 1H), 8,48 (m, 2H) , 9,13 (t, 1H) , 10,82 (s, 1H) . Hmotn. spektrum (MALDI-TOF) počít, pro C22H₂2N₄O₅S: 477, 5 (M + Na), nalezeno: 477,2.

Výše uvedená sloučenina (228 mg, 0,5 mmol) se rozpustí v THF (10 ml) a ethanolu (10 ml), do roztoku se přidá paladium na uhlíku (10 %, 20 mg) a směs se hydrogenuje při atmosferickém tlaku po 4 hodiny. Směs se potom zfiltruje přes Celit a promyje se THF, spojené filtráty se odpaří dosucha za vzniku sloučeniny uvedené v názvu (200 mg, 94 %) jako bílé pevné látky. ¹H-NMR (300 MHz, DMSO-d₆) : δ 3,05 (s, 6H) , 4,45 (d, 2H) , 7,20-7,90 (m, 12H), 9,15 (s, 1H), 10,48 (s, 1H). Hmotn. spektrum (MALDITOF) počít, pro C₂2H₂₄N₄O₃S: 447,5 (M + Na), nalezeno: 446, 9.

Příklad 22

Příprava

3-[ (2-naftalenylsulfonyl) amino]-N- (5-amínopentyl) benzamidu (32)

Sloučenina uvedená v názvu se připraví stejným postupem jako v příkladu 6 použitím 280 μΐ (2 mmol) 1, 5-diaminopentanu. Zpracování se skládá z následujících kroků: Extrakt ethylacetátu se okyselí 2 N HC1. Vodná fáze se zpracuje s nadbytkem nasyc. NaHCO₃ a potom se extrahuje ethylacetátem. Organická fáze se promyje nasyceným NaHCO₃ , suší se (Na₂SO₄) a koncentruje se za vzniku 43 mg uvedené sloučeniny jako tvrzeného skla: NMR (DMSO-d₆ , 300 MHz) 5 8,44 (d, 1H, 1,4 Hz), 8,38 (t, 1H, J = 5 Hz), 8,10 (t, 2H, J = 8 Hz), 7,99 (t, 1H, J = 8 Hz), 7,77 (dd, 1H, J= 1.8, 8 Hz), 7,60-7,72 (m, 5H), 7,41-7,45 (m, 1H) , 7,23-7,30 (m, 2H) , 3,19 (q, 2H) , 1, 43-1, 57 (m, 4H) , 1,14-1,34 ppm (m, 4H) . Hmotn. spektrum (MALDI-TOF) počít, pro C₂₂H₂₅N₃O₃S: 434,2 (M + Na). Nalezeno: 434,7.

Příklad 23

Příprava 3-[ (2-naf talenylsulfonyl) amino]-N- (8-aminooktyl) benzamidu (33)

V názvu uvedená sloučenina (13 mg) se připraví stejným postupem, jako v příkladu 22, použitím 340 mg 1,8-diaminooktanu. Purifikace produktu proběhne chromatografii na silikagelu (CH₂Cl₂/MeOH/NH₄OH (85:10:5 , sušeno nad Na₂CO₃) ) : NMR (DMSO-d₆, 300 MHz) δ 8,34 (s, 1H), 8,19 (t, 1H, J = 5 Hz), 8,01-8,05 (m, 1H) , 7,91-7,97 (m, 2H) , 7,76 (dd, 1H) , 7,55-7,63 (m, 2H), 7,35 (s, 1H) , 7,02-7,14 (m, 5H) , 3,16 (q, 2H) , 2,72

(q, 2H) , 1,47 ppm (q, 2H) . Hmotn. spektrum (MALDI-TOF) počít, pro C25H31N3O3S: 454,2 (Μ + H) , 476,2 (M + Na). Nalezeno: 454,0. 476,1.

Příklad 24

Příprava 3-[ (fenylsulfonyl) amino]-N-[3-chinuklidinylJbenzamidu (34)

3-(Fenylsulfonyl)aminobenzoová kyselina, jak je připravena v příkladu 9 (139 mg, 0,5 mmol), Castrovo činidlo (benzotriazol-l-yloxytris(dimethylamino)fosfonium hexafluorofosfát) (221 mg, 0,5 mmol), 3-aminochinuklidin hydrochlorid (100 mg, 0,5 mmol)a N,N-diisopropylethylamin (0,5 ml) se rozpustí v suchém DMF (2 ml) a reakční směs se míchá se při teplotě místnosti přes noc. Reakční směs se zředí nasyceným NaHCO₃ a extrahuje se ethylacetátem (3x). Spojený ethylacetát se promyje solankou a suší se nad Na₂SO₄. Po odpaření se zbytek čistí chromatografií na silikagelu použitím 86% methylenchlorídu a 14% methanolu obsahujícího 0,25 ml kyseliny octové za vzniku 65 mg (34% výtěžek). ^XH-NMR (300 MHz, DMSO-d₆) : d 1,69-2,14 (m,

5H), 3, 07-3, 35 (m, 6H) , 3,63 (t, 1H, J = 12 Hz), 4,22 (m, 1H) , 7,23-7,77 (m, 9H) , 8,53 (d, 1H, J = 6 Hz). Hmotn. spektrum (MALDI-TOF) počít, pro C₂₀H₂₃N3O₃S: 386,2 (Μ + H) , nalezeno:

386,2.

Příklad 25

In vitro inhibice purifik ováných. enzymů

Schopnost sloučenin podle předloženého vynálezu působit jako inhibitory trombinu, faktoru Xa a katalytické aktivity plasminu, byly zkoušeny stanovením koncentrace, která inhibuje aktivitu enzymu 50% využitím purifikovaných lidských enzymů. Koncentrace přidaného inhibitoru, která vykazuje 50% snížení původní rychlosti hydrolýzy, je definována jako IC₅₀ hodnota.

Všechny zkoušky jsou na bázi schopnosti testované sloučeniny inhibovat hydrolýzu substrátu peptidu p-nitroanilidu. V typickém příkladu je vhodný substrát připraven v DMSO, a zředěn pro testování pufrem sestávajícím z 50 mM HEPES a 130 mM NaCl při pH 7,5. Konečná koncentrace každého substrátu je uvedena dále. Koncentrace všech substrátů jsou nejméně 10 krát nižší než K_m , aby byla zajištěna úplná inhibice. Testované sloučeniny se připraví jako roztoky 1 mg/ml v DMSO, a připraví se tři další lOdělená ředění v DMSO. Roztoky enzymů se připraví v koncentracích, které jsou uvedeny dále ve zkoušce pufru.

Při typickém IC₅₀ stanovení se do každé pruhlubně z 96 prohlubní plotny pipetuje 280 μΐ roztoku substrátu, 10 μΐ inhibičního roztoku a plotna se uvede do tepelné rovnováhy při 37 °C v měřiči prohlubní molekulového přístroje po nejméně 10 minut. Reakce se iniciují přídavkem 20 μΐ podílu enzymu, a po 15 minut se zaznamenává zvýšeni absorbance na 405 nm. Pro výpočet se použijí hodnoty odpovídající méně než 10 % celkové hydrolýzy substrátu. Poměr rychlosti (rychlost změny absorbance jako funkce času) vzorku neobsahujícího inhibitor se dělí rychlostí vzorku s obsahem inhibitoru, a je znázorněn jako funkce koncentrace inhibitoru. Opakem sklonu je koncentrace

inhibitoru, která poskytuje 50% snížení aktivity enzymu. Koncentrace je označena jako IC₅₀.

Trombin

Aktivita trombinu se zkouší jako schopnost hydrolyzovat substrát N-benzoyl-Phe-Val-Arg-p-nitroanilidu (Bz-Phe-Val-ArgpNa), získaný od Sigma Chemical Company (St. Louis, MO) . Roztoky substrátu se připraví v koncentracích 60 μΜ (60 μΜ«Κ_ηι= 1,2 mM) ve zkušebním pufru. Výsledná koncentrace DMSO je 0,3%. Purifikovaný lidský α-trombin se získá z Enzym Research Laboratories, lne., a zředí se zkušebním pufrem na koncentraci 1,2 μΜ. Výsledné koncentrace reakčních složek jsou: [trombin] = 36 nM, [Bz-Phe-Val-Arg-pNa] = 66 μΜ, [inhibitor] = 60 až 0,06 μΜ.

Faktor Xa.

Aktivita faktoru Xa se zkouší jako schopnost hydrolyzovat substrát Bz-Ile-Glu-Gly-Arg-pNa, získaný od Sigmy. Roztoky substrátu se připraví v koncentracích 26 μΜ (26 μΜ«Κ_[η = 1,3 mM) ve zkušebním pufru. Výsledná koncentrace DMSO je 0,3%. Aktivivaný faktor Xa se získá z Enzym Research Laboratories, lne., a zředí se zkušebním pufrem na koncentraci 1,2 μΜ. Výsledné koncentrace reakčních složek jsou: [faktor Xa] = 10 nM, [Bz-Ile-Glu- Gly-Arg-pNa] = 26 μΜ, [inhibitor] = 60 až 0,06 μΜ.

Plasmin

Aktivita plasminu se zkouší jako schopnost hydrolyzovat substrát Tos-Gly-Pro-Lys-pNa, získaný od Sigmy. Roztoky

41' substrátu se připraví v koncentracích 22 μΜ (22 μΜ«Κ_π1

240 μΜ) ve zkušebním pufru. Purifikovaný lidský Laboratories, lne.,

Výsledná plasmin se zředí koncentrace DMSO je získá z Enzym Research zkušebním pufrem na

0, 3%.

se koncentraci 1,2 μΜ.

Výsledné koncentrace reakčních složek jsou: [plasmin] nM, [Bz-Ile-Glu-Gly-Arg-pNa] μΜ, [inhibitor] = 60 až 0,06 μΜ.

Výsledky získané použitím sloučenin 14, 16, 27, 32, 20, 22 a 31 jsou uvedeny v tabulce 1.

TABULKA 1

Sloučenina č.	Inhibice faktoru Xa (μΜ)	Inhibice trombinu	(μΜ)	Inhibice plasminu	(μΜ)
14	11,4	87,0		86,12
16	3,2	52, 8		0% až 60	μΜ
27	2,0	294		0% až 60	μΜ
32	7,6	0% až 60	μΜ	0% až 60	μΜ
20	19,2	0% až 60	μΜ	5,8
22	20, 8	38,3		0% až 60	μΜ
31	16, 5	0% až 60	μΜ	15,2

Výsledky dokládají, že sloučeniny z předloženého vynálezu jsou vysoce selektivními a silnými inhibitory faktoru Xa.

Nyní je vynález zcela popsán, a odborníkovi v oblasti techniky je zřejmé, že totéž lze uskutečnit v širokém a odpovídajícím rozmezí podmínek, složení a dalších parametrů bez ovlivnění rozsahu vynálezu nebo některého jeho provedení. Všechny zde citované patenty a publikace jsou zcela začleněny jako reference.

Claims

PATENTOVÉ NÁROKY

1. Sloučenina vzorce I: /<^CH ₂)n nebo její farmaceuticky přijatelné soli; kde

R¹ je alkyl, substituovaný alkyl, cykloalkyl, aryl, substituovaný aryl, heteroaryl nebo substituovaný heteroaryl;

R² je jedním z vodíku, alkylu, cykloalkylu, arylu nebo aralkylu;

R³ je jedním z vodíku, hydroxyskupiny nebo alkoxyskupiny;

R⁴ je jedním z -NH₂, fenylu, nebo C₃_i₀heterocyklu, majícího jeden nebo dva atomy dusíku, přičemž uvedený fenyl a uvedený C₃_₁₀heterocyklus jsou volitelně substituovány jedním nebo dvěma halogeny, hydroxyskupinou, hydroxyalkýlem, alkoxyskupinou, aminoskupinou, monoalkylaminoskupinou, dialkylaminoskupinou, aminoalkylem, monoalkylaminoalkylem a/nebo dialkylaminoalkylem;

X je jedním z -CH₂ - nebo - C(0)-;

n je od nuly do jedenácti; a kde je X je navázáno na benzenový kruh v pozici orto-, metanebo para- k sulfonylaminoskupině;

s tím, že když R⁴ je ~NH2, potom R³ je vodík a n je jiné než nula; a také s tím, že když R^J je hydroxyskupina nebo alkoxyskupina, potom R⁴ je jiné než -NH2, a n je jiné než nula; a dále s tím, že když R² je vodík nebo methyl, zatímco R³ je • · vodík, R⁴ je pyridyl, X je -C(0)-, a n je nula nebo jedna, potom R¹ je jiné než nesubstituovaný fenyl.
2. Sloučenina podle nároku 1, kde

R¹ je výhodně substituovaný C₆-i₂aryl;

R² je jedním z vodíku, Ci-₈alkylu, C₃-₈ cykloalkylu nebo C₆-i2 arylu;

R³ je jedním z vodíku, hydroxyskupiny nebo Ci_₈alkoxyskupiny;

R⁴ je jedním z -NH₂, fenylu, piperidinylu chinuklidínylu nebo pyridylu, kdy uvedený fenyl a pyridyl jsou volitelně substituovány jedním nebo dvěma halogeny, hydroxyskupinou, Ci_₈alkoxyskupinou, aminoskupinou, mono(Ci_₄) alkylaminoskupinou, di (Ci_₄) alkylaminoskupinou, amino (Ci_₄) alkylem;

X je -C(0)-; a n je nula až osm.
3. Sloučenina podle nároku 2, kde R¹ je C₆-i₀aryl, který je výhodně substituován aminoskupinou.
4. Sloučenina podle nároku 2, kde

R¹ je fenyl, aminofenyl nebo naftyl;

R² je vodík nebo Ci_₄alkyl;

R³ je vodík, hydroxyskupina nebo Ci_₄alkoxyskupina;

R⁴ je jedním z -NH₂, fenylu, pyridylu, 3-hydroxyfenylu, 4hydroxyfenylu, 4-hydroxy-3-methoxyfenylu, 3-hydroxy-4methoxyfenylu, 4-dimethylaminofenylu a 3-aminomethylfenylu;

když R⁴ je výhodně substituovaný fenyl nebo výhodně substituovaný pyridyl, nejvýhodnější hodnoty n zahrnují nulu a j edna.
5. Sloučenina podle nároku 4, kde R⁴ je -NH₂, a n je 1 až 8.
6. Sloučenina podle nároku 5, kde n je jedním ze 3,4 nebo 7.
7. Sloučenina podle nároku 4, kde

R⁴ je jedním z pyridylu, 3-hydroxyfenylu, 4hydroxyfenylu, 4-hydroxy-3-methoxyfenylu, 3-hydroxy-4methoxyfenylu, 4-dimethylaminofenylu a 3-aminomethylfenylu a n je nula nebo jedna.
8. Sloučenina podle nároku 1, kterou je jedna z

3-[ (2-naftalenylsulfonyl)amino]-N-[2-hydroxy-2-(3'-hydroxyfenyl) ethyljbenzamidu;

3-[ (2-naftalenylsulfonyl) amino]-N-[2-hydroxy-2- (4 '-hydroxyfenyl) ethyljbenzamidu;

3-[ (2-naftalenylsulfonyl) amino]-N-[4 '-[(Ν', N'-dimethylamino) f enyl) met hyljbenz amidu;

3-[ (2-naftalenylsulfonyl) amino]-N-[4 (amidinoamino) butyl] benzamidu;

3-[ (fenylsulfonyl)amino]-N-[ (4-hydroxy-3-methoxyfenyl)methyl] benzamidu;

3-[ (fenylsulfonyl)amino]-N-[2-hydroxy-2-(3'-hydroxyfenyl)ethyl] benzamidu;

3-[ (fenylsulfonyl)amino]-N-[2-hydroxy-2-(4'-hydroxy-3'methoxyfenyl) ethyljbenzamidu;

3-[ (fenylsulfonyl) amino]-N-[2- (3'-hydroxy-4 '-methoxyfenyl) ethyljbenzamidu;

3-[ (fenylsulfonyl)amino]-N-[ (3'-BOC- aminomethylfenyl) methyl] benzamidu;

• · · · · · · 9 • · 9 • · • · · · • ---------_i TT-- • · · · · • • · · · • · • « · ··· ·* ·’ • · · • · • ·

3-[ (fenylsulfonyl)amino]-N-[ (3'-aminomethylfenyl)methyl] benzamidové hydrochloridové soli ;

3-[ (2-naftalenylsulfonyl) amino]-N-[ (2 ' -pyridyl) methyljbenzamidu;

3-[ (2-naftalenylsulfonyl)amino]-N-[ (3'-aminomethylfenyl)methyl] benzamidu;

3-[ (fenylsulfonyl) amino]-N-[4-aminobutyl) jbenzamidu;

3-[ (3' -aminof enylsulf onyl) amino]-N-[4 '(Ν', N' -dimethylamino) fenyl]methyl]benz amidu;

3-[ (2-naftalenylsulfonyl)amino]-N-[5-aminopentyl)benzamidu; nebo

3-[ (2-naftalenylsulfonyl) amino]-N-[8-aminooktyl) benzamidu.
9. Sloučenina podle nároku 1, kterou je 3-[ (2-naftalenylsulfonyl ) amino]-N-[2-hydroxy-2- (3' -hydroxyf enyl) ethyljbenzamid.
10. Sloučenina podle nároku 1, kterou je 3-[ (2-naftalenylsulfonyl) amino]-N-[4 '-[ (Ν', N'-dimethylamino) -fenyl) methyl] benzamid.
11. Sloučenina podle nároku 1, kterou je 3-[ (2-naftalenyl- sulfonyl) amino]-N-[ (2 ' -pyridyl) methyljbenzamid.
12. Sloučenina podle nároku 1, kterou je 3-[ (2-naftalenyl- sulfonyl ) amino]-N-[5-aminopentyl) benzamid.
13. Sloučenina podle nároku 1, kterou je 3-[ (fenylsulfonyl)amino]-N-[ (4-hydroxy-3'-methoxyfenyl)methyl] benzamid.
14. Sloučenina podle nároku 1, kterou je 3-[ (fenylsulfonyl)amino]-N-[2-hydroxy-2-(4'-hydroxy-3'-methoxyfenyl)ethyl] benzamid.
15. Sloučenina podle nároku 1, kterou je 3-[ (3'-aminofenylsulfonyl) amino]-N-[4 '-[ (Ν', N'-dimethylamino) -f enyl]methyl]benzamid.
16. Farmaceutická kompozice obsahující sloučeninu podle nároku

1.
17. Farmaceutická kompozice podle nároku í6 dále obsahující farmaceuticky přijatelný nosič nebo ředidlo.
18. Způsob léčení trombózy, ischemie, mrtvice, restenózy nebo zánětu zahrnuje podání savci, který potřebuje toto léčení, léčebně nebo preventivně účinného množství sloučeniny vzorce I: nebo jejích farmaceuticky přijatelných solí, kde

R¹ je alkyl, substituovaný alkyl, cykloalkyl, aryl, substituovaný aryl, heteroaryl nebo substituovaný heteroaryl;

R² je jedním z vodíku, alkylu, cykloalkylu, arylu nebo aralkylu;

R³ je jedním z vodíku, hydroxy nebo alkoxyskupiny;

R⁴ je jedním z -NH₂, fenylu, nebo C₃_i₀heteřocyklu majícího jeden nebo dva atomy dusíku, přičemž uvedený fenyl a uvedený C₃-i₀heterocyklus jsou volitelně substituovány jedním nebo dvěma halogeny, hydroxyskupinou, hydroxyalkýlem, alkoxyskupinou, aminoskupinou, monoalkylaminoskupinou, díalkylaminoskupinou, aminoalkylem, monoalkylaminoalkylem a/nebo dialkylaminoalkylem;

X je jedním z -CH₂ - nebo - C(0)-; a n je od nuly do jedenácti; a kde je X je navázán na benzenový kruh v pozici orto-, metaného para- k sulfonylaminoskupině;

s tím, že když R⁴ je -NH2, potom R³ je vodík a n je jiné než nula; a také s tím, že když R³ je hydroxyskupina nebo alkoxyskupina, potom R⁴ je jiné než -NH2, a n je jiné než nula.
19. Způsob podle nároku 18, kde uvedenou sloučeninou podávanou uvedenému savci je jedna z

3-[ (2-naftalenylsulfonyl) amino]-N-[2-hydroxy-2- (3' hydroxyfenyl) ethyljbenzamidu;

3-[ (2-naf talenylsulf onyl) amino]-N-[2-hydroxy-2- (4' hydroxyfenyl) ethyljbenzamidu;

3-[ (2-naftalenylsulfonyl) amino]-N-[4 ' -[ (Ν',N'-dimethylamino) fenyl) methyljbenzamidu;

3-[ (2-naftalenylsulfonyl)amino]-N-[ (4-amidinoamino)butyl] benzamidu;

3-[ (fenylsulfonyl)amino]-N-[ (4-hydroxy-3-methoxyfenyl)methyl] benzamidu;

3-[ (fenylsulfonyl) amíno]-N-[2-hydroxy-2- (3 '-hydroxyfenyl) ethyl] benzamidu;

3-[ (fenylsulfonyl) amino]-N-[2-hydroxy-2- (4 ' -hydroxy-3' methoxyfenyl) ethyljbenzamidu;

• · · · · • · · · · • 9 · · · 99

3-[ (fenylsulfonyl)amino]-N-[2-(3'-hydroxy-4'-methoxyfenyl) ethyl]benzamidu;

3-[ (fenylsulfonyl)amino]-N-[ (3'-BOC- aminomethylfenyl)methyl] benzamidu;

3-[ (fenylsulfonyl)amino]-N-[ (3'-aminomethylfenyl)methyl] benzamidové hydrochloridové soli ;

3-[ (2-naftalenylsulfonyl) amino]-N-[ (2 '-pyridyl)methyl]benzamidu;

3-[ (2-naftalenylsulfonyl)amino]-N-[ (3'-aminomethylfenyl)methyl] benzamidu;

3-[ (fenylsulfonyl) amino]-N-[4-aminobutyl) ]benzamidu;

3-[ (3'-aminofenylsulfonyl) amino]-N-[4 '-[ (Ν', N'-dimethylamino) fenyl]methyl]benz amidu;

3-[ (2-naftalenylsulfonyl) amino]-N- (5-aminopentyl) benzamidu ;

nebo 3-[ (2-naftalenylsulfonyl)amino]-N-[8-aminooktyl)benzamidu.