CZ372099A3 - Použití alfa-methyl-p-tyrosinu k inhibici produkce melaninu v pigmentových buňkách duhovky - Google Patents
Použití alfa-methyl-p-tyrosinu k inhibici produkce melaninu v pigmentových buňkách duhovky Download PDFInfo
- Publication number
- CZ372099A3 CZ372099A3 CZ19993720A CZ372099A CZ372099A3 CZ 372099 A3 CZ372099 A3 CZ 372099A3 CZ 19993720 A CZ19993720 A CZ 19993720A CZ 372099 A CZ372099 A CZ 372099A CZ 372099 A3 CZ372099 A3 CZ 372099A3
- Authority
- CZ
- Czechia
- Prior art keywords
- tyrosine
- latanoprost
- methyl
- melanin
- iris
- Prior art date
Links
- 230000008099 melanin synthesis Effects 0.000 title claims description 13
- NHTGHBARYWONDQ-JTQLQIEISA-N L-α-methyl-Tyrosine Chemical compound OC(=O)[C@](N)(C)CC1=CC=C(O)C=C1 NHTGHBARYWONDQ-JTQLQIEISA-N 0.000 title description 3
- 230000002401 inhibitory effect Effects 0.000 title 1
- 210000004694 pigment cell Anatomy 0.000 title 1
- XUMBMVFBXHLACL-UHFFFAOYSA-N Melanin Chemical compound O=C1C(=O)C(C2=CNC3=C(C(C(=O)C4=C32)=O)C)=C2C4=CNC2=C1C XUMBMVFBXHLACL-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 34
- 108060008724 Tyrosinase Proteins 0.000 claims abstract description 19
- 102000003425 Tyrosinase Human genes 0.000 claims abstract description 18
- 208000030159 metabolic disease Diseases 0.000 claims abstract description 3
- GGXICVAJURFBLW-CEYXHVGTSA-N latanoprost Chemical compound CC(C)OC(=O)CCC\C=C/C[C@H]1[C@@H](O)C[C@@H](O)[C@@H]1CC[C@@H](O)CCC1=CC=CC=C1 GGXICVAJURFBLW-CEYXHVGTSA-N 0.000 claims description 41
- 229960001160 latanoprost Drugs 0.000 claims description 41
- 210000002752 melanocyte Anatomy 0.000 claims description 11
- 208000010412 Glaucoma Diseases 0.000 claims description 7
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 claims description 6
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 claims description 6
- 238000000034 method Methods 0.000 claims description 6
- 101710147108 Tyrosinase inhibitor Proteins 0.000 claims description 5
- 239000003814 drug Substances 0.000 claims description 5
- 238000002560 therapeutic procedure Methods 0.000 claims description 5
- 239000008194 pharmaceutical composition Substances 0.000 claims description 4
- 239000000030 antiglaucoma agent Substances 0.000 claims description 3
- 239000003112 inhibitor Substances 0.000 claims description 3
- 230000000144 pharmacologic effect Effects 0.000 claims description 2
- TVHAZVBUYQMHBC-SNHXEXRGSA-N unoprostone Chemical compound CCCCCCCC(=O)CC[C@H]1[C@H](O)C[C@H](O)[C@@H]1C\C=C/CCCC(O)=O TVHAZVBUYQMHBC-SNHXEXRGSA-N 0.000 claims description 2
- 229960004317 unoprostone Drugs 0.000 claims description 2
- 125000001231 benzoyloxy group Chemical group C(C1=CC=CC=C1)(=O)O* 0.000 claims 1
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 abstract description 7
- 230000019612 pigmentation Effects 0.000 abstract description 6
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 abstract description 3
- 239000002981 blocking agent Substances 0.000 abstract description 2
- 230000002265 prevention Effects 0.000 abstract description 2
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 15
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 14
- 230000036564 melanin content Effects 0.000 description 7
- 150000003180 prostaglandins Chemical class 0.000 description 6
- 208000012641 Pigmentation disease Diseases 0.000 description 5
- OUYCCCASQSFEME-QMMMGPOBSA-N L-tyrosine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=C(O)C=C1 OUYCCCASQSFEME-QMMMGPOBSA-N 0.000 description 4
- UCTWMZQNUQWSLP-UHFFFAOYSA-N adrenaline Chemical compound CNCC(O)C1=CC=C(O)C(O)=C1 UCTWMZQNUQWSLP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 4
- XXUPXHKCPIKWLR-JHUOEJJVSA-N isopropyl unoprostone Chemical compound CCCCCCCC(=O)CC[C@H]1[C@H](O)C[C@H](O)[C@@H]1C\C=C/CCCC(=O)OC(C)C XXUPXHKCPIKWLR-JHUOEJJVSA-N 0.000 description 4
- OUYCCCASQSFEME-UHFFFAOYSA-N tyrosine Natural products OC(=O)C(N)CC1=CC=C(O)C=C1 OUYCCCASQSFEME-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- SFLSHLFXELFNJZ-QMMMGPOBSA-N (-)-norepinephrine Chemical compound NC[C@H](O)C1=CC=C(O)C(O)=C1 SFLSHLFXELFNJZ-QMMMGPOBSA-N 0.000 description 3
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 3
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 3
- HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M Sodium hydroxide Chemical compound [OH-].[Na+] HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 3
- 102000004142 Trypsin Human genes 0.000 description 3
- 108090000631 Trypsin Proteins 0.000 description 3
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 3
- 229940088598 enzyme Drugs 0.000 description 3
- 230000003061 melanogenesis Effects 0.000 description 3
- 229960002748 norepinephrine Drugs 0.000 description 3
- SFLSHLFXELFNJZ-UHFFFAOYSA-N norepinephrine Natural products NCC(O)C1=CC=C(O)C(O)=C1 SFLSHLFXELFNJZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 239000000049 pigment Substances 0.000 description 3
- 239000012588 trypsin Substances 0.000 description 3
- 229950008081 unoprostone isopropyl Drugs 0.000 description 3
- 102000029816 Collagenase Human genes 0.000 description 2
- 108060005980 Collagenase Proteins 0.000 description 2
- AHMIDUVKSGCHAU-UHFFFAOYSA-N Dopaquinone Natural products OC(=O)C(N)CC1=CC(=O)C(=O)C=C1 AHMIDUVKSGCHAU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000012404 In vitro experiment Methods 0.000 description 2
- WTDRDQBEARUVNC-LURJTMIESA-N L-DOPA Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=C(O)C(O)=C1 WTDRDQBEARUVNC-LURJTMIESA-N 0.000 description 2
- WTDRDQBEARUVNC-UHFFFAOYSA-N L-Dopa Natural products OC(=O)C(N)CC1=CC=C(O)C(O)=C1 WTDRDQBEARUVNC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- AHMIDUVKSGCHAU-LURJTMIESA-N L-dopaquinone Chemical compound [O-]C(=O)[C@@H]([NH3+])CC1=CC(=O)C(=O)C=C1 AHMIDUVKSGCHAU-LURJTMIESA-N 0.000 description 2
- 230000000903 blocking effect Effects 0.000 description 2
- 150000003943 catecholamines Chemical class 0.000 description 2
- 230000001684 chronic effect Effects 0.000 description 2
- 229960002424 collagenase Drugs 0.000 description 2
- BORBLDJNKYHVJP-FXBDTBDDSA-N dolichodial Chemical compound C[C@H]1CC[C@H](C(=C)C=O)[C@@H]1C=O BORBLDJNKYHVJP-FXBDTBDDSA-N 0.000 description 2
- BRZYSWJRSDMWLG-CAXSIQPQSA-N geneticin Chemical compound O1C[C@@](O)(C)[C@H](NC)[C@@H](O)[C@H]1O[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O[C@@H]2[C@@H]([C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](C(C)O)O2)N)[C@@H](N)C[C@H]1N BRZYSWJRSDMWLG-CAXSIQPQSA-N 0.000 description 2
- -1 isopropyl ester Chemical class 0.000 description 2
- 238000005259 measurement Methods 0.000 description 2
- 208000028591 pheochromocytoma Diseases 0.000 description 2
- 150000003166 prostaglandin E2 derivatives Chemical class 0.000 description 2
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 2
- APIXJSLKIYYUKG-UHFFFAOYSA-N 3 Isobutyl 1 methylxanthine Chemical compound O=C1N(C)C(=O)N(CC(C)C)C2=C1N=CN2 APIXJSLKIYYUKG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- WHNCXIBKVUPNHR-UHFFFAOYSA-N 3,4-dihydroxy-1h-indole-2-carboxylic acid Chemical compound C1=CC(O)=C2C(O)=C(C(=O)O)NC2=C1 WHNCXIBKVUPNHR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- YFTGOBNOJKXZJC-UHFFFAOYSA-N 5,6-dihydroxyindole-2-carboxylic acid Chemical compound OC1=C(O)C=C2NC(C(=O)O)=CC2=C1 YFTGOBNOJKXZJC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108060003345 Adrenergic Receptor Proteins 0.000 description 1
- 102000017910 Adrenergic receptor Human genes 0.000 description 1
- 206010001557 Albinism Diseases 0.000 description 1
- 108091003079 Bovine Serum Albumin Proteins 0.000 description 1
- 241000282693 Cercopithecidae Species 0.000 description 1
- 102000009016 Cholera Toxin Human genes 0.000 description 1
- 108010049048 Cholera Toxin Proteins 0.000 description 1
- 241000692783 Chylismia claviformis Species 0.000 description 1
- RYGMFSIKBFXOCR-UHFFFAOYSA-N Copper Chemical compound [Cu] RYGMFSIKBFXOCR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- JPVYNHNXODAKFH-UHFFFAOYSA-N Cu2+ Chemical compound [Cu+2] JPVYNHNXODAKFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 206010072289 Eye colour change Diseases 0.000 description 1
- 102000003974 Fibroblast growth factor 2 Human genes 0.000 description 1
- 108090000379 Fibroblast growth factor 2 Proteins 0.000 description 1
- 229930182566 Gentamicin Natural products 0.000 description 1
- CEAZRRDELHUEMR-URQXQFDESA-N Gentamicin Chemical compound O1[C@H](C(C)NC)CC[C@@H](N)[C@H]1O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](O[C@@H]2[C@@H]([C@@H](NC)[C@@](C)(O)CO2)O)[C@H](N)C[C@@H]1N CEAZRRDELHUEMR-URQXQFDESA-N 0.000 description 1
- 206010020772 Hypertension Diseases 0.000 description 1
- 241000288906 Primates Species 0.000 description 1
- NINIDFKCEFEMDL-UHFFFAOYSA-N Sulfur Chemical compound [S] NINIDFKCEFEMDL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 201000005188 adrenal gland cancer Diseases 0.000 description 1
- 208000024447 adrenal gland neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 230000001800 adrenalinergic effect Effects 0.000 description 1
- 235000001014 amino acid Nutrition 0.000 description 1
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 description 1
- 230000001384 anti-glaucoma Effects 0.000 description 1
- 230000009286 beneficial effect Effects 0.000 description 1
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 1
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 1
- 238000004364 calculation method Methods 0.000 description 1
- 238000006555 catalytic reaction Methods 0.000 description 1
- 238000004113 cell culture Methods 0.000 description 1
- 239000006285 cell suspension Substances 0.000 description 1
- 230000008859 change Effects 0.000 description 1
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 1
- 239000003086 colorant Substances 0.000 description 1
- 229910052802 copper Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000010949 copper Substances 0.000 description 1
- 229910001431 copper ion Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000002537 cosmetic Substances 0.000 description 1
- 235000018417 cysteine Nutrition 0.000 description 1
- XUJNEKJLAYXESH-UHFFFAOYSA-N cysteine Natural products SCC(N)C(O)=O XUJNEKJLAYXESH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229940127089 cytotoxic agent Drugs 0.000 description 1
- 239000002254 cytotoxic agent Substances 0.000 description 1
- 231100000599 cytotoxic agent Toxicity 0.000 description 1
- VJNCICVKUHKIIV-UHFFFAOYSA-N dopachrome Chemical compound O=C1C(=O)C=C2NC(C(=O)O)CC2=C1 VJNCICVKUHKIIV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000002255 enzymatic effect Effects 0.000 description 1
- 210000000981 epithelium Anatomy 0.000 description 1
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 1
- 239000012091 fetal bovine serum Substances 0.000 description 1
- 229960002518 gentamicin Drugs 0.000 description 1
- ZDXPYRJPNDTMRX-UHFFFAOYSA-N glutamine Natural products OC(=O)C(N)CCC(N)=O ZDXPYRJPNDTMRX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000036541 health Effects 0.000 description 1
- 229940088597 hormone Drugs 0.000 description 1
- 239000005556 hormone Substances 0.000 description 1
- 230000033444 hydroxylation Effects 0.000 description 1
- 238000005805 hydroxylation reaction Methods 0.000 description 1
- 150000004336 hydroxyquinones Chemical class 0.000 description 1
- 238000007654 immersion Methods 0.000 description 1
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 1
- 230000005764 inhibitory process Effects 0.000 description 1
- 230000002427 irreversible effect Effects 0.000 description 1
- 239000000463 material Substances 0.000 description 1
- 230000007246 mechanism Effects 0.000 description 1
- 230000002503 metabolic effect Effects 0.000 description 1
- 230000035772 mutation Effects 0.000 description 1
- 229920005615 natural polymer Polymers 0.000 description 1
- 210000005036 nerve Anatomy 0.000 description 1
- 230000003287 optical effect Effects 0.000 description 1
- 229940094443 oxytocics prostaglandins Drugs 0.000 description 1
- 238000002638 palliative care Methods 0.000 description 1
- 239000008188 pellet Substances 0.000 description 1
- 238000006116 polymerization reaction Methods 0.000 description 1
- 150000003169 prostaglandin F2α derivatives Chemical class 0.000 description 1
- 238000009790 rate-determining step (RDS) Methods 0.000 description 1
- 230000009467 reduction Effects 0.000 description 1
- 230000004044 response Effects 0.000 description 1
- 239000000758 substrate Substances 0.000 description 1
- 229910052717 sulfur Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000011593 sulfur Substances 0.000 description 1
- 210000002820 sympathetic nervous system Anatomy 0.000 description 1
- 229940124597 therapeutic agent Drugs 0.000 description 1
- 230000001225 therapeutic effect Effects 0.000 description 1
- 230000000699 topical effect Effects 0.000 description 1
Landscapes
- Acyclic And Carbocyclic Compounds In Medicinal Compositions (AREA)
Abstract
Je popsáno použití činidel blokujících syntézu tyrosinasy pro
prevenci trvalé pigmentace duhovky způsobené deposity
melaninu, kteráje indukována fakmakologickynebo
metabolickými poruchami.
Description
Oblast techniky
Předkládaný vynález se týká použití činidle blokujících syntézu tyrosinasy pro prevenci trvalé pigmentace duhovky způsobené deposity melaninu indukovanými farmakologicky nebo metabolickou nerovnováhou.
Dosavadní stav techniky
Bylo prokázáno, že latanoprost (13,14-dihydro-17-fenyl18,19,20-tri-nor-PGF2agfa isopropyl ester), syntetický analog prostaglandinu (EP-A-0364317), stejně jako přirozené prostaglandiny, jako je pGF2alfa a PGE2, indukují zvýšenou pigmentaci duhovky opic během chronické léčby (Selén G.,
Stjernschantz J., Resul B., Prostaglandin-induced iridial pigmentation in primates, Surv. Opthalmol. 1997, 41, Suppl. 2: S125 až S128). Přesný mechanismus této reakce na léčbu prostaglandiny není znám, ale zvýšená syntéza melaninu (melanogenese) musí proběhnout, aby se barva oka stala tmavší. Také u pacientů léčených latanoprostem (Wistrand, P.J.,
Stjernschantz J. , Olsson K., The incidence and time-course of latanoprost-induced iridial pigmentation as function of eye color. Surv. Opthalmol. 1997, 41 Suppl. 2: S129 až S138) nebo isopropylunoprostonem (13,14-dihydro-15-keto-20-ethyl-PGF2a^^a isopropylesterem) (Yamamoto T., Kitazawa, Y, Iris-color change devoloped after topical isopropyl unoprostone treatment, J. Glaucoma 1997, 6: 430 až 432) se někdy vyskytlo ztmavnutí duhovky při chronické terapii. Zdá se, že k tomuto nežádoucímu účinku jsou predisponováni zejména pacienti s heterochromatickou duhovkou, t.j. modro-zelenou, Šedo-zelenou, hnědo-zelenou nebo ·· 4 4 4 4 4 4 4 ·· «4 · 4 4*4» 4···
4 4 4 4 4 4··· • · 4 4 4 4 4 4-4 4 4 4 • 444 4 * 4 4 4 4 4
4 · · 4 4 4 4 4 » · 44
- 2 světle hnědou barvou očí. Protože nežádoucí účinky mohou mít negativní kosmetické důsledky, zejména u pacientů s jednostranným glaukomem, kteří jsou léčeni pouze na jedno oko, a protože tyto nežádoucí účinky jsou ireversibilní a relativně časté, bylo by vhodné tyto nežádoucí účinky překonat, i když nejsou zdravotním rizikem pro pacienty, u kterých se vyvinou.
Melanin, velký přirozený polymer, je tvořen z aminokyseliny tyrosinu. V počátku tvorby melaninu je tyrosin hydroxylován na L-Dopa, která je dále oxidována na dopachinon. Enzym katalýzující obě tyto reakce se nazývá tyrosinasa. Dopachinon je labilní sloučenina, která je přeměněna na dopachrom, černě zbarvenou sloučeninu, která je nutná pro tvorbu DHICA (kyselina dihydroxyindolkarboxylová) oligomerů, které jsou nutné pro konečnou polymerizaci, při které vzniká eumelanin (černý nebo hnědý melanin). Dopachinon může alternativně reagovat s cysteinem a při této reakci vznikají oligomery obsahující síru a nakonec feomelanin (žlutavý nebo červený melanin). Významné je, že krok omezující rychlost v produkci melaninu je reakce katalyzovaná tyrosinasou. Chybění funkční tyrosinasy, například z důvodu mutace genu pro tyrosinasu, vede vždy k albinismu, protože v těle nemůže být tvořen žádný pigment.Je zajímavé, že stejný enzym (tyrosinasa) je také nutný v sympatických neuronech a nadledvinkách pro produkci noradrenalinu, neurotransmiteru, a adrenalinu, hormonu, protože tyto sloučeniny jsou biosyntetizovány z tyrosinu. Proto budou mít sloučeniny blokující tyrosinasu vliv jak na melanogenesy, tak na funkci sympatického nervového systému.
Podstata vynálezu
Nyní bylo zjištěno, že inhibitory tyrosinasy, konkrétně ce-methyl-p-tyrosin, inhibují produkci melaninu indukovanou • · • · · · • * ·
• · · ♦ • · · · • · · * podáváním derivátů PGF2aifa a PGE2, jako je latanoprost a unoproston.
Proto léčba takovými inhibitory tyrosinasy před, v průběhu a po podávání derivátů prostaglandinů u pacientů s glaukomem inhibuje tvorbu melaninu melanocyty duhovky a brání změnám barvy očí u těchto pacientů.
Klasickým činidlem pro blokování syntézy tyrosinasy je α-methyl-para-tyrosin, lék známý po názvem metyrosin (J. Am. Chem. Soc. 77: 700, 1958), který je falešným substrátem pro enzym. Proto není tvořena L-Dopa a v důsledku toho nemůže být tvořen ani melanin, ani adrenalin/noradrenalin. Lék byl použit pro paliativní léčbu feochromocytomu, nádoru nadledvinek, který vede k vysokým koncentracím katecholaminů v krvi a proto k vysokému krevnímu tlaku. Při použití dostatečně vysokých koncentrací může a-methyl-para-tyrosin významně blokovat biosyntézu adrenalinu/noradrenalinu, stejně jako melaninu. Při použití při klinických koncentracích pro léčbu feochromocytomu je koncentrace katecholaminů v těle značně snížena (Weiner N., Drugs, that inhibit adrenergic nerveš and block adrenergic receptors, V Goodman Gilman A., Goodman LS, Rall TW, Murad F., eds.: Goodman and Gilman's the Pharmacological basis of Therapeutics, Macmillan, New York, 1985, str. 181 až 214) a v in vitro pokusech podle předkládaného vynálezu byla produkce melaninu významně snížena. V podstatě jakékoliv činidlo, které interferuje s tyrosinasou bude mít stejné příznivé účinky vedoucí k blokádě produkce melaninu.
Takovými činidly jsou například hydroxychinony a substance, které reagují s ionty mědi, protože měď je nezbytným kofaktorem pro tyrosinasu, a různé typy falešných substancí pro enzym. V
• · · · důsledku toho, pokud jsou tato činidla podána bud' separátně, nebo ve směsi s latanoprostem, isopropylunoprostonem nebo jakýmkoliv jiným prostaglandinem, který indukuje melanogenesi, tak může být zabráněno tvorbě pigmentu v duhovce nebo může být tato tvorby alespoň významně snížena.
Příklady provedení vynálezu
Tato aktivita oí - methyl-p-tyrosinu byla demonstrována v následujících příkladech:
Materiál a techniky
Buněčná kultura
Uveální melanocyty byly izolovány a kultivovány z očí dospělých dárců. Duhovka byla vyříznuta a byla umístěna do misky zadním povrchem nahoru. Pigmentový epitel duhovky byl oddělen od stromatu po ponoření do 0,25% roztoku trypsinu (Gibco, USA) při 37 na dobu 2 hodin. Zbylé stroma duhovky bylo umístěno do 0,25% roztoku trypsinu při 4 °C na dobu 18 hodin a potom následovala inkubace při 37 po dobu 1 hodiny. Izolované buňky byly shromážděny. Roztok trypsinu byl nahrazen roztokem kolagenasy (400 U/ml, v F-12 mediu, Sigma, USA) a provedla se inkubace při 37 °C. Roztok kolagenasy byl nahrazen a buňky byly odebrány, centrifugovány, resuspendovány a plotnovány každou hodinu po dobu 3 hodin.
Izolované uveální melanocyty byly kultivovány na Falcon kultivačních discích (Becton Dickinson, USA) s FIC mediem, které se skládalo z F-12 media doplněného 10% fetálním hovězím sérem, mM glutaminu (vše od Gibco), 10 ng/ml cholera toxinu, 0,1 M isobutylmethylxantinu, 50 gg/ml gentamicinu (vše od Sigma) a 20
ng/ml basického fibroblastového růstového faktoru (Promega,
USA). Kultivační disky byly inkubovány ve zvlhčené atomosféře 5% CC>2. Medium bylo měněno třikrát týdně. Geneticin (Sigma, USA), cytotoxické činidlo, byl přidán (100 gg/ml) na dobu 3 až 7 dnů, pokud to bylo nutné.
Od dárců s různou barvou duhovky (modrou a hnědo-modrou) bylo v tomto pokusu izolováno 8 buněčných kmenů uveálních melanocytů.
Měření melaninu
Kultivované uveální melanocyty byly odděleny roztokem trypsinu-EDTA a byly počítány v hemocytometru, buněčné suspenze byly centrifugovány a peleta byla rozpuštěna v 1 N NaOH. Koncentrace melaninu byla stanovena měřením optické density při 475 nm a srovnáním se standardní křivkou získanou za použití syntetického melaninu (Sigma). Obsah melaninu byl vyjádřen v ng/buňku.
Výpočet produkce melaninu
Produkce melaninu byla vypočtena z obsahu melaninu a počtu buněk na začátku a na konci každé generace za použití následujícího vzorce:
Cp = CtP - C0/l.3D (P-l) kde Cq a Ct představují obsah melaninu na buňku v čase 0 a v čase t, v příslušném pořadí; P je zvětšení populace za čas t, D je zdvojovači čas uveálních melanocytů; a Cp je produkce melaninu na buňku za den během času t.
· · · · · • · · · 0 0 0 * 0 » 0 0 · · ♦ • 0 000000 0 · 0 0 0 0 0
0· 000 00 0 0
Aktivita tyrosinasy
Aktivita tyrosinasy byla hodnocena v devíti buněčných kmenech za použití adaptované Pomerantzovi techniky, která je založena na měření uvolněné enzymatickou hydroxylací tyrosinu.
Výsledky
Obsah melaninu v melanocytech duhovky kultivovaných z 5 kmenů buněk hnědých duhovek a 3 kmenů buněk z hnědo-modrých duhovek se zvyšoval po přidání latanoprostu v nejvyšších molárních koncentracích. Stejné výsledky byly zjištěny pro produkci melaninu a aktivitu tyrosinasy (tabulka 1 a 2).
Po přidání a-methyl-p-tyrosinu (10“^ M) bylo pozorováno významné snížení obsahu a produkce melaninu a tyrosinasové aktivity při latanoprostu 10 az 10 M jak v melanocytech kultivovaných z hnědých duhovek, tak z hnědo-modrých duhovek (tabulka 1 a 2).
Tyto výsledky ukazují, že produkce melaninu v melanocytech duhovky je ínhibována a-methyl-p-tyrosinem.
Předkládaný vynález se také týká farmaceutických prostředků obsahujících deriváty PGF2alfa ne^° PGE2 s anti-glaukomovou aktivitou a inhibitor tyrosinasy, které jsou kombinovanými prostředky pro simultání, separátní nebo sekvenční použití v terapii glaukomu. Konkrétně se vynález týká farmaceutických prostředků obsahujících latanoprost jako anti-glaukomové činidlo a a-methyl-p-tyrosin, které jsou kombinovanými prostředky pro simultání, separátní nebo sekvenční použití v terapii glaukomu.
V předpokládaném terapeutickém použití bude a-methyl-ρ-tyrosin výhodně podán lokálně nebo orálně v denní dávce přibližně 100-500 mg.
Ačkoliv se předkládaný vynález týká zejména inhibice produkce melaninu indukované latanoprostem, může být α-methyl-p-tyrosin úspěšně použit pro inhibici stejných nežádoucích účinků pigmentace indukované jinými terapeutickými činidly nebo metabolickými poruchami jiného původu.
Tabulka 1: 5 buněčných kmenů (hnědých) - růstové stadium -
| Obsah melaninu (ng/buňku) | |||
| bez | a-methyl-p-tyrosinu | a-methyl-p-tyrosin IO”5 | |
| bez latanoprostu | |||
| (kontrola) | 0,0138 | 0,0133 | |
| O latanoprost 10 | M | 0,0141 | 0,0135 |
| Ύ latanoprost 10 | M | 0,0151 | 0,0136 |
| latanoprost 10 | M | 0,0161* | 0,0137 |
| latanoprost 10”5 | M | 0,0149* | 0,0131 |
p <0,01 vs. kontrola » · · I
I »9 1 k · · « to *
Tabulka 1 - pokračování
Produkce melaninu (ng/buňku/den) bez α-methyl-p-tyrosinu a-methyl-p-tyrosin bez latanoprostu
| (kontrola) | 0,0031 | 0,0033 | |
| latanoprost 10® | M | 0,0038 | 0,0035 |
| latanoprost 10-7 | M | 0,0046* | 0,0039 |
| latanoprost 10”^ | M | 0,0036 | 0,0029 |
| latanoprost 10”^ | M | 0,0047* | 0,0031 |
| p <0,01 vs. kontrola |
| Aktivita tyrosinasy (jednotky) | ||
| bez a-methyl-p-tyrosinu | a-methyl-p-tyrosin 10“ 5 | |
| bez latanoprostu | ||
| (kontrola) | 36,7 | 33,6 |
| latanoprost 10_® | M 36,7 | 35,5 |
| latanoprost 10-7 | M 38,3 | 38,7 |
| latanoprost 10“θ | M 42,5 | 34,6 |
| latanoprost 10“5 | M 63,1* | 31,5 |
p <0,01 vs. kontrola • » · · · 9 *9 · *99 » 9 « 9
9 9 9 » » 9 9 9 ♦ · · « »9 :: :.:::
9 · 9·9
9 9 9 9 9 «
| Tabulka 2: 3 buněčných | kmenů (hnědo-modré) | - růstové stadium - |
| Obsah melaninu | (ng/buňku) | |
| bez ot | -methyl-p-tyrosinu | α-methyl-p-tyrosin 10“5 |
| bez latanoprostu | ||
| (kontrola) | 0,0121 | 0,0122 |
| latanoprost 10“® M | 0,0127 | 0,0119 |
| latanoprost 10“7 M | 0,0142* | 0,0123 |
| latanoprost 10”® M | 0,0149* | 0,0125 |
| latanoprost 10“5 M | 0,0151* | 0,0128 |
p <0,01 vs. kontrola
| Produkce melaninu | (ng/buňku/den) -methyl-p-tyrosin IO“5 | ||
| bez | α-methyl-p-tyrosinu a | ||
| bez latanoprostu | |||
| (kontrola) | 0,0021 | 0,0023 | |
| latanoprost 10“® | M | 0,0038 | 0,0025 |
| latanoprost 10 | M | 0,0046* | 0,0029 |
| latanoprost 10“® | M | 0,0056* | 0,0029 |
| latanoprost 10“^ | M | 0,0067* | 0,0031 |
p <0,01 vs. kontrola
- 10 Tabulka 2 - pokračování
Aktivita tyrosinasy (jednotky) bez α-methyl-p-tyrosinu a-methyl-p-tyrosin
| bez latanoprostu (kontrola) | 32,5 | 32,4 |
| latanoprost 10“θ M | 33,7 | 34,6 |
| latanoprost 10-7 M | 48,1* | 31,7 |
| latanoprost 10M | 52,5* | 34,6 |
| latanoprost 10M | 62,7* | 39,5 |
p <0,01 vs. kontrola • · *··· * · 9 · * ·« • · · # ♦ · » «»·» 4 4 4 »44 ··«· • « ♦ « · W *»**·* « · 4 ♦ 4 · · «»·· • · · · 4 » ♦ · » ·4 4 4
Claims (8)
- Patentové nároky1. Použití inhibitorů tyrosinasy pro přípravu léku, který brání produkci melaninu melanocyty duhovky, která je indukována farmakologicky nebo metabolickou poruchou.
- 2. Použití podle nároku 1, kde produkce melaninu je indukována deriváty EGE2alfa ne^° PGE2'
- 3. Použití podle nároku 2, kde deriváty PGE2alfa ne^° PGE2 3 sou latanoprost nebo unoproston.
- 4. Použití podle jakéhokoliv z předcházejících nároků, kde inhibitorem tyrosinasy je ce-methyl-p-tyrosin.
- 5. Farmaceutický prostředek vyznačující se tím, že obsahuje derivát PGE2alfa 3ak° anti-glaukomové činidlo a inhibitor tyrosinasy, který je kombinovaným prostředkem pro simultání, separátní nebo sekvenční použití v terapii glaukomu.
- 6. Farmaceutický prostředek podle nároku 5vyznačuj ící se t í m, že obsahuje latanoprost jako anti-glaukomové činidlo a α-methyl-p-tyrosin, který je kombinovaným prostředkem pro simultání, separátní nebo sekvenční použití v terapii glaukomu.
- 7. Způsob pro prevenci produkce melaninu melanocyty duhovky vyznačující se tím, že obsahuje podání účinného množství inhibitoru tyrosinasy.
- 8. Způsob podle nároku 7vyznačující se tím, že inhibitorem tyrosinasy je α-methyl-p-tyrosin.
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CZ19993720A CZ372099A3 (cs) | 1998-04-21 | 1998-04-21 | Použití alfa-methyl-p-tyrosinu k inhibici produkce melaninu v pigmentových buňkách duhovky |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CZ19993720A CZ372099A3 (cs) | 1998-04-21 | 1998-04-21 | Použití alfa-methyl-p-tyrosinu k inhibici produkce melaninu v pigmentových buňkách duhovky |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CZ372099A3 true CZ372099A3 (cs) | 2000-04-12 |
Family
ID=5467150
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CZ19993720A CZ372099A3 (cs) | 1998-04-21 | 1998-04-21 | Použití alfa-methyl-p-tyrosinu k inhibici produkce melaninu v pigmentových buňkách duhovky |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| CZ (1) | CZ372099A3 (cs) |
-
1998
- 1998-04-21 CZ CZ19993720A patent/CZ372099A3/cs unknown
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| RU2218159C2 (ru) | ПРИМЕНЕНИЕ α-МЕТИЛ-п-ТИРОЗИНА ДЛЯ ИНГИБИРОВАНИЯ ПРОДУЦИРОВАНИЯ МЕЛАНИНА В МЕЛАНОЦИТАХ РАДУЖНОЙ ОБОЛОЧКИ | |
| Skaper et al. | Neurotrophins rescue cerebellar granule neurons from oxidative stress‐mediated apoptotic death: selective involvement of phosphatidylinositol 3‐kinase and the mitogen‐activated protein kinase pathway | |
| Shinkai et al. | Inhibition of in vitro tumor cell invasion by ginsenoside Rg3 | |
| JP2003519654A (ja) | 脈管形成を抑制するためのエピガロカテキンガラートの使用 | |
| JP2002508399A (ja) | メタボトロッピックグルタミン酸受容体の作動薬及びその使用 | |
| EP1745786B1 (fr) | Composés neuroprotecteurs et compositions pharmaceutiques les comprenant | |
| US20150110755A1 (en) | Elastin producing fibroblast formulations and methods of using the same | |
| DRAGO et al. | α-Methyl-p-tyrosine inhibits latanoprost-induced melanogenesis in vitro | |
| FR2926020A1 (fr) | Composition cosmetique et/ou dermatologique | |
| US20120309785A1 (en) | Use of Cysteamine in Treating Parkinson's Disease | |
| KR20010022323A (ko) | 중추신경세포의 보호 및 생존촉진제 | |
| CZ372099A3 (cs) | Použití alfa-methyl-p-tyrosinu k inhibici produkce melaninu v pigmentových buňkách duhovky | |
| CA2306423A1 (en) | Methods for increasing schwann cell survival | |
| US6872751B2 (en) | Composition and method for augmenting or restoring the production of fetal protein in patient in need thereof | |
| HK1027978A (en) | THE USE OF α-METHYL-P-TYROSINE TO INHIBIT MELANDIN PRODUCTION IN IRIS MELANOCYTES | |
| WO2004045573A1 (en) | Composition for skin whitening containing n-acetylophytosphingosine | |
| WO1998041209A1 (en) | Protective agents for cells constituting nervous system | |
| WO2019195222A1 (en) | Skin care compositions and their applications | |
| JPH04234819A (ja) | 脳の老化及び中枢神経系の機能不足状態の予防及び治療のためのデルマタン硫酸の使用 | |
| Elghozi et al. | Fusaric acid-induced elevation of homovanillic acid in the CSF as an index of brain noradrenaline synthesis | |
| RU2775597C2 (ru) | Ингибитор продукции реактивных форм кислорода для лечения заболеваний, связанных со свободными радикалами кислорода | |
| JP2804850B2 (ja) | チロシナーゼ活性阻害及びメラニン生成抑制剤 | |
| NEFF et al. | Trophic Factors and GM1 Ganglioside in the Basal Ganglia | |
| KR20070074567A (ko) | ＳＴＡＴ３ 인산화 억제 및 Ｎｏｔｃｈ１ 발현 억제제 | |
| WO1994012464A1 (en) | Protective role of polyamines in modifications of basement membrane macromolecules |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| PD00 | Pending as of 2000-06-30 in czech republic |