CZ3197A3

CZ3197A3 - Complexes of cascade polymers, process of their preparation and pharmaceutical composition containing thereof

Info

Publication number: CZ3197A3
Application number: CZ9731A
Authority: CZ
Inventors: Heribert Dr Schmitt-Willich; Johannes Dr Platzek; Ulrich Dr Niedballa; Bernd Dr Raduechel; Andreas Dr Muehler; Thomas Dr Frenzel; Wolfgang Dr Ebert
Original assignee: Schering Ag
Priority date: 1994-07-07
Filing date: 1995-07-04
Publication date: 1997-07-16
Also published as: PL318043A1; HUT76804A; DE59510632D1; CA2194560A1; ATE236658T1; JP3701678B2; SI9520068A; DK0768898T3; HU9700025D0; NZ289845A; DE4425857A1; JPH10502679A; WO1996001655A1; AU2980895A; ZA955682B; IL114405A0; SK167496A3; EP0768898B1; CN1151701A; NO970055L

Description

Mtoé VŠCTEČfOt * advokát 12000 PRAHA i, HáttuMA 2

Komplexy kaskádových polymerů, způsob jejich výroby a farmaceutický prostředek tyto látky-obsahující

Oblast techniky

Vynález se týká nových komplexů kaskádových polymerů, prostředků tyto sloučeniny obsahujících, použití komplexů v diagnostice a terapii, jakož i způsobu výroby těchto sloučenin a prostředků. ' - . . - - “= - . r

Dosavadní stav techniky

Občas klinicky používané kontrastní prostředky pro moderní zobrazující postupy, totiž jadernou spinovou tomo-

R grafii (MRI) a počítačovou tomografii (CT) [Magnevist , Pro Hance**, Ultravist** a Omniscan**] se rozptylují v celém extracelulárním prostoru těla (intravasální prostor a in-terstitium) . Tento prostor rozptýlení zahrnuje' asi' 20 % objemu těla.

Extrácelulární MRI-kontrastní prostředky byly klinicky nejprve s úspěchem použity při diagnostice cerebrálních a spinálních procesech onemocnění, neboť se zde vyskytuje zcela zvláštní situace se zřetelem na regionální prostor rozptýlení. V mozku a v míše nemohou mimobuněčné látky opustit ve zdravé tkáni na základě bariery krev-mozek nitro-cévní prostor. Při chorobných procesech, rušících tuto barieru krev-mozek (například maligní tumory, záněty, mye-lopatická onemocnění a podobně) , vznikají uvnitř mozku potom oblasti se zvýšenou propustností (permeabilitou) cév pro tyto mimobuněčné kontrastní látky (Schmiedl a kol., MRI of blood-brain barrier permeability in astrocytic gliomas: áppíicatioh of smáli and large .molécular.weight contrasť media. Magn. Resoň.*Med. 22: 288, 1991). Využitím’tohoto .· ' *: · por uše ní"-pérmeabiii ty cčv-může—bý-t~ve--v-ysokém-J<ontraš.tu *

* ' ¥· 'C rozeznaná nemocná tkáň oproti tkáni zdravél . i ' ' T ‘ ' ’ ' ' - * "·' , „· * Kromě mozků a .míchy neplatí ".ovšem takováto bariera permeability pro výše^uvedené kontrastní látky (Canty á*kol... First-páss entry of nonionic agent into the:.rayó-, ' ’ · ’ · , ' ‘ Λ cárdial extravascular space. Effects on radiographic esti-· mate of- transit tl.mě "árfd'b!bbd volume. Circulation 8.4: „20-71, 1991). T íinneni ^obohaceni kontrast ního‘čin i dla—j iž—závis lé ’ · f — * % ; ^ ·· 'ňá perráěabxlitě cév,. ale pouze na velikostí-mámobuněčného - ··- e-1 .. . ► . prostoru odpovídájících :tkánx. Ohraničení cév vzhledem ,.k. intertinálnímu prostoru není při použití .těchto kontrastních látek možné.·’ _ __2_.___ · v

Obzvláště pro zobrazení cév by mělo obzvláštní význam, aby se kontrastní látka rozptýlila výlučné do prostoru cév. Takovýto "blood-pool-agent" by měl umožňovat .pomocí buněčné tomografie ohraničit dobře prokrvenou tkáň od tkáně špatně prokrvené a tím diagnostikovat ischemíí. Také tkáň náchylná k infarktu by se měla vymezit na základě své anémie od ostatní zdravé nebo ischemické tkáně, když se použije va-sální kontrastní látka. Toto je obzvláště důležité, když jse například o to, rozlišit srdeční infarkt od ischemie.

Dosud se musí většina pacientů, u kterých je podezření na kardiovaskulární onemocnění (tato onemocnění jsou častou příčinou úmrtí v západních průmyslových zemích) , podrobit náročnému diagnostickému vyšetření. V angioterapii jsou v současné době využívána rentgenová diagnostika za pomoci jod t t 3 í obsahujících kontrastních látek. Tato vyšetření jsou spojena s různými nevýhodami, například s risikem zatížení zářením * jakož i s nepříjemnostmi a zatížením, která především vznikají tím, že jod obsahující kontrastní látky ve srovnání s NMR-kontrastními látkami musí být použity v podstatně vyšší koncentraci.

I

Existuje tedy potřeba na NMR-kontrastní látky, které mohou označovat cévní prostor (blood-pool-agent). Tyto sloučeniny se musí vyznačovat dobrou snášenlivostí a vyso- kl>ll uuímiua li (vysoky stupen signalnt intensity'·1· ρ.ΐ MOT1! / - Náběh k vyřešení alespoň části tohoto problému použitím komplexotvorných činidel, která jsou vázána na makromolekuly nebo biomolekuly, byl dosud úspěšný pouze velmi omezené.

Tak není například počet paramagnetických center v komplexech, které jsou popsané v Evropských patentových přihláškách č. 0 088 695 a 0 150 844 , dostatečný pro přijatelnou tvorbu obrazu. γ

Zvyšuje-li se počet potřebných kovových iontů vícenásobným zavedením komplexotvorných jednotek do makromolekulám! biomolekuly, tak je to spojeno s netolerovatelným ovlivněním afinity a/nebo specifity této biomolekuly (J. Nucl. Med. 24, *158 (1983)). &>· 1' '

«ί. \ í Ψ

Makromolekuly mohou být obecné vhodné jako kontrastní látky pro angiografii. Albumin-GdDTPA (Radiology 1987: 162: 205) například však vykazuje 24 hodin po intravenos-ní aplikaci krysám obohacení ve tkáni jater, které Činí asi 30 % dávky. Kromě toho je za 24 hodin eliminováno pouze

4 - 4, i l· ‘Vf* 4' -j . - . ' fc- 20 % dávky. v*' r w'· “ i / '> JÍ *

Makromolekulám! polylysin-GdDTPA (EVvropská patentová přihláška*0 233 6l9) se Ukázal rovněž schopný jáko T"blood-“pool-ugent-^-(-pr ef-eru j-ící ikrev__před _tkáni) . Tato V Λ . sloučenina se 'skládá podle podmínek přípravy ze směsi mole-kul různé velikosti. Při vylučovacích pokusech.na krysách Λ * •íi'· ^ i ,ohlo býr ukázáno, že tyto makromolekuly jsou vylučovány - . i ... .· _. , v v ♦ u · ϊ r · · *»««»· - .. .-¾¾. ^ t filtrací ledvinami nezměněné. ’ Dle podmínek sýřit esy. může * · · ·\Γ· . ·' ř 'polylysin-GdDTPA ale také obsahovat·· takové ..molekuly, „které ··',' Jl· jsou tak'veliké,- že při glomeřulárrií filtraci kapilárami f. ^ledvin^ř^Tt^němóhou^a^tak v'těle" zůstávají. . ' - ---.-2 1 v 'ý V * * Také byly popsány nna-kromolekulárhl·. kontrastní...látky, ha . .. • \ . ' r basi Uhlovodíků, například •dextřanu (EP-A-0 326.. 226). .Ne- ·.*· · t. * výhoda těchto sloučenin spočívá, v tom, že tyto obsahují : pouze asi -5-signá-l zesilujících .paramagnetických kationtů. :—'—:—-—π · ' .- r— -_ V Evropské patentové přihlášce č. 0 430 863 popsané polymery představují již krok na cestě kblood-pool-agents, protože již nevykazují charakteristickou heterogenitu ve vztahu k velikosti a hmotnosti*"molekul. Zůstává však stále ; V otevřený požadavek na budoucí úplnou vylučitelnost, snášenlivost a/nebo účinnost. · * Vyvstává tedy úkol, připravit pro použití nové diagnostické prostředky, obzvláště pro rozeznání a lokalisaci onemocnění cév, které by neměly uváděné nedostatky. Tento úkol je řešen předloženým-vynálezem.

·' ·

>

Podstata vynálezu

Bylo zjištěno, že komplexy, které sestávají.z dusík obsahujících kaskádových polymerů, opatřených komplexotvor-nými ligandy, alespoň 16 iontů prvku s pořadovým číslem 20 až 29, 30, 42, 44 nebo 57 až 83 , jakož i popřípadě, kationtů anorganických a/nebo organických basí, aminokyselin nebo amidů aminokyselin a popřípadě obsahují acylované aminosku-piny, jsou překvapivě výborné vhodné pro NMR- a rentgenová diagnostika, bez toho, že by vykazovaly výše uvedené nevý-

Předmětem předloženého vynálezu jsou komplexy kaskádových polymerů obecného vzorce I / A-{X-[Y-(Z-/V-Kw/z)y]x}a (I). ? i ve kterém A značí dusík obsahující kaskádové jádro basální multi-,t; plicity a,· : — 4 '•ύ X a Y značí nezávisle na sobě přímou vazbu nebo kaskádovou ^reprodukční jednotku reprodukční multiplicity x, popřípadě y, ? Z a V značí nezávisle na sobě kaskádovou reprodukční jednotku reprodukční multiplicity z , popřípadě w , K značí zbytek komplexotvorné látky, a. značí číslo 2 až 12 a - 6 - . » , J I · ' |X - - ' 'x, y, z a v. - značí nezávisle na sobě číslo » 1 až 4 · t - Vám omezením! .že alespoň dvě reprodukční j ednotky ~j sou různé a že,pro produkt platí multiplicity ^

j ' t . ' L 16 í a :vx y z f.í w s 64 · _ ť.; / - . . ·.’ y - .· .'· .. _

Jako kaskádová jádra A jsou vhodné : ' dusíkový atom, - ' } '* *' u

' 1 > t———“ \ . “ . ιΊ./ \N—CH2 (CH2)m -N—-CH2 (CH2jn —N „ \ 2/ Ll P tl u il

• N-CH2—CH2—N / u CH, CH, 2'm (CH2)m (CH,), \ 2 u

N—CH,—CH,—N Ϊ

7 U 2 u 2

—CH2CH, —N —OL-CH, —N —CH2CHa

U

U r^u ru —NI —Π-L-H-L —N —CH„CH, wi igwi ig ’ - -r ·ϋ **

2 u

2 U *

-

9 U 2 značí Q2 nebo E , přičemž 1

E značí skupinu — (CH ) —CH N * \ 2 Q, přičemž 1 o značí číslo 1 až 6 , 1 2 Q značí vodíkový atom nebo Q . a Q značí přímou vazbu, M značí alkylenový řetězec s 1 až 10 uhlíkovými atomy, který je popřípadě přerušen 1 až 3 kyslíkovými atomy . a/nebo je popřípadě substituovaný 1 až 2 oxoskupi-nami a . značí rozvětvený nebo nerozvětvený- alkylový zbytek s 1 až 10 uhlíkovými atomy, nitroskupinu, aminoskupinu, skupinu karboxylové kyseliny nebo skupinu i

U

M-N \ 2

U 2 přičemž počet Q odpovídá basální multiplicitě.

Nejjednodušší případ kaskádového jádra představuje dusíkový atom, jehož tři vazby (basální multiplicita = 3) jsou v prvním "vnitřním kroku" (generace 1) obsazeny třemi - 10 - reprodukčními jednotkami X. popřípadě Y (když X značí přímou vazbu) , popřípadě Z (když X a Y- značí přímou vazbu) ; jinak formulováno : tři vodíkové atomy odpovídajícího kaskádového startéru amoniaku A(H)a = NH^ jsou sub-- -s-t-i tuované—t r.emi .^reprodukčními jednotkám i X , popřípadě Y , popřípadě Z . V kaskádovém jádře obsažený počet Q2 dává při tom opět basální multiplicitu a .

Reprodukční jednotky X, Y, Z a V obsahují .skupiny -NQ^Q2 , přičemž Q1 značí vodíkový atom nebo Q2 a ‘Q2 značí přímou vazbu. V*·reprodukční jednotce* (například 'X) obsažený počet Q-- odpovídá reprodukční multiplicitě této i r. » ' ' #' ” ' ** \ * “jednotky—(napříkladx—v př-ípadě_X.)_.„..Produkt všech multi-plícit a.x’.y.-z.-w udává p.oč.et .v kaskádovém polymeru vázaných komplexótvorných zbytků K . Polymery podle předloženého vynálezu obsahují nejméně 16 a nejvýše 64 zbytků ( K v molekule, které mohou vázat jeden až.maximálně tři fv~Dřrpadě—dvoimocnvch—iontů-1—výhodně jeden iont, prvku výše uvedených pořadových čísel.

Poslední generace, to znamená na komplexotvorné zbytky K -vázaná reprodukční jednotka V je připojena na K. přes NH-skupiny (-NQ Q s- 0 \ ve významu vodíkového atomu a Q2 = přímá vazba) , zatímco předcházející reprodukční jed- 2 notky mohou být navzájem spojené jak přes skupiny m-NHQ (například acylačními reakcemi) , tak také přes skupiny -NQ2Q2 (například alkylačními reakcemi).

Komplexy kaskádových polymerů podle předloženého vynálezu mají maximálně 10 generací (to znamená, že může být přítomna více než pouze jedna reprodukční jednotka X, Y á Z v molekule) , výhodně však 2 až 4 generace, přičemž alespoň dvě z reprodukčních jednotek v molekule jsou 11 různé. -Jako výhodná kaskádová jádra.^A je možno uvést taková, která spadají pod výše uvedené obecné vzorce, když m značí čísla 1 až 3 , obzvláště číslo 1 . n značí čísla 1 až 3 , obzvláště číslo 1 , í P značí Čísla 0 až 3 , obzvláště číslo 1 , o značí číslo 1 * M značí skupinu rCH2- , -CO- nebo -CH2C0- RP w * •τν» n #—* i LllUUi. et^imí nil -CH2NU1U2 , -CH-3 něho.. -

Jako další výhodné kaskádové startéry A(H)a je možno například uvést : (v závorce je uvedena basální raultiplicita a , udaná pro případ následující monosubstituce, popřípadě disubstituce, sloužící pro stavbu následujících generací) tris (aniinoethyl) amin (a=6, popř. 3): tris(aminopropyl)amin (a=6. popř. .3) diethylentřiamiíi- i. (a=5, popř. 3) triethylentriamin (a=6, popř. 4) tetraethylenpentamin (a=7. popř. 5) 1,3,5-xris(aminomethyl)benzen (a=6, popř. 3) ťriamid kyseliny trimesinové (a=6, popř. 3) (a=3) (a=4) (a=5) (a=4) (a=6) (a=10) ; (a*8, popř. 4) 1,4,7-triazacyklononan 1.4.7.10- tetraazacyklododekan 1,4,7,10,13-pentaazacyklopentadekan 1.4.8.11- tetraazacyklotetradekan 1,4,7,10,13,16-hexaazacyklooktadekan 1,4,7,10,13,16,19,22,25,28-deaazacyklo-triakontan tetrakis(aminomethyl)methan

1,1. l-tris(aminomethyl)ethan ' ' (a?=6, popř. 3) ; J '......f, ^ ^ · V ^ v · f tris (aminopropýl)- nitřomethan' λ * * ’ (á=6.' ‘ popř. .3) 2.4,6-triamino^l,3Í5-triazin: j '* (a=6, popř;*3) amid . kyseliny 1,3,5,7-adamantantetra- , t·- / kar-b ox-y-l-ov é --r----:—. - —. (a=8 popř . 4)· : i ' " , ' ** Ύ amid. kyseliny 1,3 ’ ,-5,5 ’-difenylether- - - ;· ; · 't,: · , - ' · !- * ··*· - :·; · ' -í*» t „ * ' . tetrakar.boxylov.é ^ t * 1 ‘r (a=8, popř. ^4) ; amid kyseliny. 1,2-bis[fenoxyethan] - -.A. ψ ,· j. ” . . . — fc - i, ·\ -3',3’’,5’,5’’-tetrakarbóxýlové ' (a=8, popř.. 4) ; 1,4,7,10,13,16,21 *24-oktaazabicyklo- .

[8,8,8]hexákosan - ^ j * * 7 (a=6) . . * ^——— Je-treba poukázat nat07^žedefinice~jako--kaskádové . ' é* _ jádro A-—a -t-í-m- dě-lení -kaskádového jádra- a první,-reprodukční jednotky je čistě formální a :,.tím .může*» být, zvolené, nezávisle, na skutečné syntetické stavbě požadovaných komplexů kaskádových, polymerů,. „V,Tak ,se; může považovat například v příkladě w ' · , ’ r t · ' J ..... ' 4—^použií:ý^triisf=ami-nóe-thyl^am-iri-A-j-ak--samot-n-ý^á.-kó—kaskádové jádro A (viz jako první pro A uvedený obecný vzorec, kde m=n=p=l , U^=E s o=l a U1=U^=Q^) , ale také jako dusíový » atom (=s asádové jádro A) , terý má jao první generace tři reprodukční jednotky, vzorce

Q 1 /

—CH2 —CHj —N

V (viz definice E) .

Kasádové reprodukční jednotky X, Y, Z a V jsou nezávisle na sobě určené vzorci

i 13 3 U—N

pricemz u1 značí Q1 nebo E u2 značí Q2 nebo E ,

1 Q

E značí skupinu

-(CH2)0 — CH2—N \ 2Q, • *· přičemž ' V . ' *<*,· v ' ' .< ' ' \v - : ·* ..... • * ·. , * " 6 značí číslo 1 až 6 , ť - ' * * . -Q~- -značí—vodí-kov-ý—atom-nebo- 0 * - ‘‘značí, přímou, vazbu, »

^ ' 7’ ‘V " .. - *' . .T > 4 : · ; - -··'' - v. * - 'p* · · j. značí alkylenový řetězec s 1 .až 20 uhlíkovými atomy, který je popřípadě přerušen 1 až 10 atomy kyslíku a/nebo jednou až dvěma skupinami -N(CQ)_-R , jedním 1 . ^ Η a ; í -aždv ěma" fe ny le n o výmia/π e b o jedním- ažrdvěrna fenyl-en- - - ·>- .¾ . . · r oxyloyými^žbytky a/nebo je popřípadě-subsT-ituovaný— ' J/ * . *i ...* ' ' * # “r j ednou- až dvěma oxox-kupinarai, - th-iooxoskupinami , kar- boxyskupinami , alkylkajrboxyskupinami; s .1, až. 5 uhlí-: kovýnii atomy v alkoxylu,-alkoxýškupinami .s 1 až 5 ·..· .uhlíkovými.atomy,..hydroxyskupinami „nebo „alkýlovými; s kup i nám i—s-^í-^až^-5—uhl-ík ovým i—at omy-r-př-i-ěemž- q značí číslo 0 nebo 1 a 2 R značí vodíkový atom/ methylovou skupinu nebo i ethylovou skupinu, která je popřípadě substituovaná 1 až 2 hydroxyskúpinami nebo jednou karboxylovou skupinou, značí vodíkový atom nebo skupinu i

U

3 f U—N \ 2 u

značí methinovou skupinu =CH , když současně U 15 značí přímou vazbu nebo skupinu M a U3 má význam skupiny U3 , nebo ψ 1 >- V značí skupinu a>

... když současně^ ;:i U4_ a U3, jsou identické a jznačí^ přímou vazbu nebo skupinu M . ‘ !. Výhodné kaskádové reprodukční jednotky X, Y, Z a .V· jsou takové, u kterých ve výše uvedených obecných vzorcích ,t, značí zbytek U3 skupiny -co-, -coch2och2co-i -coch2-, -ch2ch2-, -conhc6h4-, -coch2ch2co-, -coch2-ch2ch2co- , -coch2ch2ch2ch2co-, zbytek přímou vazbu nebo skupinu -CH2CO- , zbytek U3 přímou vazbu nebo skupiny -(CH2)4-, -CH2CO-, -CH(COOH)-, CH2OCH2CH2-, -CH2C6H4-, CH2-C6H4OCH2CH2- a zbytek E skupinu i

Q /

—CHa—CH2—IM

V

Jako příklady uvedených kaskádových produkčních jednotek X, Y, Z a V je možno uvést : -CH2CH2NH-; -CH2CH2N<; -COCH(NH-)(CH2)4NH-; 16 -COCH(K<) (CH2)4N< · -COCH2OCH2CON(CH2CH2NH-);2; , ‘ -C0CH20CH2Č0N(CH2ČH2N<)2; ‘-COCH2N(CH2CH2NHíy2:; * . -C0CH2N(CH2CH2N<)2: -C0CH2NH-; -COCH2N<; . -COCH2CH2CON(CH2CH2NH-)2; -COCH2CH2GQN(GH2eH2N<)2; -G0GH?QGH2CONH - C^H^CH [GH.2CQtl(GH.2CH.?Níb).-7_l 7 :V J ’ -COCH2OCH2CONH-C6H4-CHÍCH2CON(CH2CH2N<)2]2· - COGH2CH2COrNH-C6H4-CH [ CH2CON (CH2CH2NH - ) 2 ] 2; -cóch2ch2co-nh-c^h4-gh[ch2con(ch2ch2n<)2.]2; -CÓNH-CgH4-CHrCH2eÓN(GH2CH2NH-)2]2;' -ěONH-C6H4-CH[GH2CON(CH2CH2N<)2]2; -COCH(NH-)CH(COOH)NH--COCH(N <)CH(COOH)N<; řCON(CH2CH2NHr)2‘

'/ \

-COCH2OCH2CONH con(Ch;ch2nH'); -coch2och2conh

CON(CH2CH2N<), CON(CH2CH2N<)2

17 -CON

CON(CH2CH2NH-)2 CON(CH2CH2NH-)2

-CONH

^CON(CH2CH2N<)2 Ϊ CON(CH2CH2N<)2

-COCH2CH2CONH

CON{CH2CH2NH-)2 CON(CH2CH2NH-)2 -coch2ch2conh

CON(CH2CH2N<}2 CON(CH2CH2N<)2 - 18 - .V* .'ν', . 'V·*, ν,ί./ΐ-!

,och2gh2nh- “0GH2GH2NH^

OGH2CH2N< -GGH2CH2N<- OCH2CH2NH-

2CH2NH- OCH2CH2N<

2CH2N< och2ch2n< OCH2CH2NHr.

0{CH2GH20)2CH2CH2NH-

(CH2CH20)2CH2CH2N< 0(CH2CH20)2CH2CPH2NH- O(CH2CH20)2CH2CH2NH-0{CH2CH20)2CH2CH2N< 0{CH2CH20)2CH2CH2N<

Komplexotvorné zbytky K jsou,popsané obecnými vzorci Ia a Ib : rooc-r2hc \ /

N—CH2 —CH2—N

OL ca

Cti, CH,

N—CH-—ca — N chr2-coór' ''''W-coon m

19 R OOC-H2C — N —CH2 CH2 - -h j-CH2CH2- —J -N . r CH2-COOR CH2-C O- a

R OOC-H2C ch2-coor (IB) ve kterých R* značí nezávisle ňa sobě vodíkový atom nebo ekvivalent kovového iontu pořadového čísla 20 až 29, 39, 42 až 44 nebo 57 až 83 , Λ R^ Značí vodíkový atom, methylovou skupinu nebo ethylovou skupinu, která je popřípadě substituovaná 1 až 2 hydroxyskupinami nebo jednou karboxyskupinou, 20 vy značí skupinu -CH2-CH(0H)-U5-T nebo f-CH2-C0-lT , přičemž ’ ^ “τ ;·· ** · * . .'» * . '-·'·* * £ . » * “ í · * ► * ♦ « · _ značí přímou, rozvětvenou, nasycenou nebo nena-—:-svcenou-alkvlenovou skuoinu s 1 až 20 uhlíko- . " · ·* — m «· ' τ . - - ' vými atomy, obsahující 1 až 5 imínoskupin,Γ 1 až. ' 3 fehylenové skupiny, i až ,3 fenýlenoxyskupiny _ . ' 1 až 3 fenyleniminoskupiny, 1“ až 5 ámidoskupxn, — ···. α —Γ , - [·. "* - ' ’» .V ' · , Γ 1 áž 2 hydrazidové skupiny,"1 'až>5· karbonyiovych * ^ '* r skupin, 1 až. 5 ethylenoxyskupin,, jednu močovino-vóu skupinu, jednu thiomočovínovou;skupinu,-' 1 až - ~ “^--ž^karboxyaj.k-y-1 imi-noskupiny-, -1 -až^;2 ^est er.oyé. .sku- ·*·' . ' i , ..... V· ·* '**·' *« ijr?'V'··· ·ΐ; ♦?·' ·#-: -píny, -l^-až 10—k-y-s l-íkových atomů. .1 až' 5 atomů ‘ * r sí-r-y -a *1 až, 5 ‘ dusíkových .atomů _a/nebo podřipa- ' <-V. · ' 1. ; .. -t - . , dě-substituovanou 1 ažJ5 hydróxyskupinami,1 až V, ·' ’ .. s,. . *, }·^·.· , . ι· , 2 merkaptoskupinami, V až 5 oxoskupinami.,. 1 až; 5 ____. _t h i ox os k upinami, 1 až 3 kařboxyskupinami., A1 až 5 -—^karboxvai-k-ylovvm-i—skupinami-.—l_až_l5__e.5_teroyviiii skupinami a/nebo 1 až 3 aminoskupinaini,, přičemž popřípadě obsažené fenylenové skupiny mohou být substituované 1 'až 2 kařboxyskupinami, 1 až 2 sulfonovýihi. skupinami nebo 1 až 2 hydroxysku-

T · . , T pinámi, ' . 7 2 fi U značí přímou vazbu nebo zbytek -NR -U -T a -T . značí skupinu ^rCO-α , -NHCO-a nebo -NHCS-a , značí vazebné místo na termiňálním dusíkovém atomu poslední generace, 'reprodukční jednotky V a značí číslo 0, 1,-2 nebo 3 .

A 21

Jako výhodné komplexotvorné zbytky K je možno uvést takové, u kterých ve výše uvedeném vzorci IA obsahuje al kylenový řetězec s 1 až 20 uhlíkovými atomy, výhodně s 1 až 12 uhlíkovými atomy, skupiny -ch2-, -ch2nhco-, -nhcoch2o-, -nhcoch2oc6h4-, -N(CH2C02H)--nhcoch2c6h4-, -nhcsnhc6h4-. -ch2oc6h4-, ch -ch2o-, a/nebo je substituován skupinami -C00H, -CH2C00H.

Jako příklady pro je možno uvést následující skuni nv : *... , ~ ' r " v · -ch2-( -ch2ch2V, -ch2ch2ch2-. -c6h4-, -c6h10v, ch2c6h5-, -ch2nhcoch2ch(CH2C02H)-c6h4-, -ch2nhcoch2och2-, -ch2nhcoch2c6h4-.

- ch2nhcsnh-c6h4-ch (ch2cooh ) ch2 - , -CH2OC6H4-N(CH2COOH)CH2-. -CH2NHC0CH20(CH2CH20)4-c6h4- , -ch2o-c6h4-, -ch2ch2-o-ch2ch2-, -ch2ch2-o-ch2ch2-o-ch2ch2-,

22 f- i ϊψ '· 1 ' . , . . ' ’> ...... . . i.·» . „Když je prostředek podle předloženého vynálezu určen i ' v ’ · : ' 1 · . pro použití v NMR-diagnostice, tak musí být centrální iont - . - * * * y komplexní soli paramagnetický. · toto jsou obzvláště dvojmoc-né a trojmocné ionty prvků pořadových čísel.'\21 až 29, ‘42.*' 44 a 58 až 70 . Vhodné ion ty ~j sou napřTřllíd^hrdiíiTé^že - i leznaté kobáltnaté, nikelnaté;: měďnaté přaseodymité , sa- ; marinité á ýterbitéf1 _ Kvůli svému velmi, silnému'magnetickému '" 1 v .Λ , l,' /.momentu/ jsou obzvláště .výhodné ionty gadolinité, terbité, ’ v fc dysprosité, holmité, erbité, manganaté a železité.

Když je prostředek podle předloženého vynálezu určen

:'3F -i- pro použití v rentgenové diagnostice, tak musí být centrální ionť odvožen od prvků vyšších pořadových· čísel, aby se dosáhlo dostatečné absorpce rentgenových* pápršíců: Bylo zjištěno, že ,k tomuto účelu jsou vhodné diagnostické'·prostředky; které obsahují fyziologicky přijatelnou komplexní sůl. s čentVálním”ióhtém';z přvků^pořadových čísel *21 až .29, 3,9, 42, 44 a 57 až 83 ; toto je například iont láňtháňitý"a výše uvedené ionty řady lanthanidů.

Komplexy kaskádových polymerů podle předloženého vynálezu obsahují alespoň 16 iontů výše uvedeného pořadového čísla.

Zbytkové kyselé vodíkové atomy, to znamená takové, které nebyly substituované centrálním iontem, mohou být zcela nebo částečně nahrazeny kationty anorganických a/nebo organických basí, aminokyselin nebo amidů aminokyselin.

Vhodné anorganické kationty jsou například ionty lithné, draselné, vápenaté, horečnaté a obzvláště sodné. Vhodné kationty organických basí jsou mimo jiné kationty primárních, sekundárních nebo terciárních aminů, jako je například ethanolamin, diethanolamin, morfolin, glukamin, N,N-dimethylglukamin a obzvláště N-methylglukamin. Vhodné kationty aminokyselin jsou například kationty lysinu, argininu a ornithinu, jakož i amidů jinak kyselých nebo neutrálních aminokyselin.

Sloučeniny podle předloženého vynálezu, které mají molekulovou hmotnost 10 000 až 80 000 D , výhodné 15 000 až 40 000 D , mají již zmiňované požadované vlastnosti. Obsahují pro svoje použití potřebný velký počet kovových : iontů, ^stabilně vázaných .v. komplexu. ·

Obohacují se v oblastech se zvýšenou permeabilitou Cév, například v tumorech, dovolují vysátí přes perfusi tkání, dávají možnost stanovit objem krve ve tkáních, zkracují selektivně relaxační doby, popřípadě density krve a dovolují obrazové znázornit permeabilitu krevního řečiště Takovéto fyziologické informace se nedají získat použitím extracelulárních kontrastních látek, jako je například p

Gd-DTPA [Magnevist ] . Z těchto hledisek vyplývají také oblasti použití při moderních obraz poskytujících postupech jaderné spinové monografie a počítačové tomografie : specifická diagnosa maligních tumorů, brzká kontrola terapie při cytostatické, antiflogistické nebo dilatativní terapii, brzké rozeznání minimálně perfundovaných oblastí (například v myokardu) , angio-grafie při cévních onemocněních a rozpoznání a diagnosa (sterilních nebo infekčních) zánětů.

Jako další výhody ve srovnání s extracelulárními kontrastními látkami, jako je například Gd-DTPA [Magnevist^] j třeba vyzdvihnout vyšší efektivitu jako kontrastního prostředku pro jadernou spinovou tomografii (vyšší relaxivita), což vede k podstatné redukci diagnosticky, po- tfebVié^dávky. Současně 'se. mohou kontrastní činidla· podle "i : předloženého vynálezu formulovat jako roztoky isoosmolárně ke krvi atsnižqvat tím osmotické' zatížení těla, což se od-.' » * * -ráží—ve-lsnížené—toxici.tě_sub.s.tance_jfvvšši práh toxicity)*. =

Nepatrné dávky a vyšší práh toxicity vedou k šignifikantní- .·* * - - · - * λ . ·<: ,} * -V, . , .

mu zvýšení^bezpečnosti použití kontrastních^činidel při moderních obraz poskytujících^metodách. A - ··. -m-. . .ΙΛ ..A - ' ·--* ^ ... * ’ V . "·' **^ T”** - ~ i .Ve srovnání s makrómolekulárnímí kontrastními, činidly t ... w , . i ·*; " · ha basi uhlóhydřátů, například dextranu * (ΕΡΌ 326;226),, ' " · ? .. ř.:k teré ~nesou rrj ak rj iž -by lo^uvažovánoř. zp.rav i-d 1 a pouze-aš i 4- · " . X » T' ' ’ - - . ' ' ^ · - , · 5 %—signal'zešilujícíhoparamagnetického-katipňtu ,-.maji__ komplexy; polymerů .podle předloženého v_y.ná lezu obsahy zpravidla asi' 20. % pařamágnetického -kationtu. . Tím. způsobují , v makromolekuly podTe předloženéhovynálezuipro molekulu, podτ statně, vyšší „zesí lení _signálu, __což ^současně vede k tomu , že dávk-aT^ktrerá—j e^pQt-řebná^pro^jadejrnouTispihoVíbu—tomografii—j,e ve srovnání s dávkou makromolekulárního kontrastního, činidla na baši uhlóhydřátů podstatně nižší.

Pomocí komplexů polymerů podle předloženého vynálezu jě umožněno konstruovat a vyrobit makromolekuly tak, aby. měly jediiotně definovanou molekulovou .hmotnost. Je tím překvapivé možné řídit velikost makromolekul tak, aby tyto byly. dostatečně ,veliké, že mohou opouštět vasální prostor pouze pomalu, ale aby byly současně dostatečně, malé,, aby mohly ještě prostupovat kapilárami ledvin, které máji velikost 300 až 800 A.

Ve srovnání s jinými polyměrními sloučeninami podle stavu techniky se vyznačují komplexy kaskádových polymerů podle předloženého vynálezu zlepšenou schopností vylučování, 25 vyšší účinností, větší stabilitou a/nebo lepší prijatelnos-t í .

Další výhoda předloženého vynálezu spočívá v tom, že nyní byly dány k disposici komplexy s ligandy hydrofilními nebo lipofilními, makrocyklickými nebo s otevřeným řetězcem, nízkomolekulární nebo vysokomolekulárními. Tím je dána možnost řídit snášenlivost a farmakokinetiku těchto komplexů polymerů chemickou substitucí. Předmětem předloženého vynálezu je dále způsob výroby komplexů kaskádových polymerů, jehož podstata spočívá v tom, že se nechají reagovat sloučeniny obecného vzorce 1’ ď) Tjř· Α-{Χ-[Υ-(Ζ-/ν-βν/2)γ]χ>& ve kterém A značí dusík obsahující kaskádové jádro basální multi-plicity a, X a Y značí nezávisle na sobě přímou vazbu nebo kaskádovou reprodukční jednotku reprodukční multiplicity x, popřípadě y, Z a V značí nezávisle na sobě kaskádovou reprodukční jednotku reprodukční multiplicity z , popřípadě w , a značí číslo 2 až 12 , x, y, z a w značí nezávisle na sobě číslo 1 až 4 a β značí vazebné místo terminálních NH-skupin poslední -. 26' - generace reprodukční jednotky V ; * ' , 1 ’ -f* s tím omezením, že alespoň dvě reprodukční^jednotky jsou -různé a že pro produkt platí multiplicity *7 * * 16 ^ a ;X . y . z . v s 64 T, , > - -> » - - , > * .. ' ' ·* .t.fj r, • · r, . * ' χ φ · 1 '}. s komplexem nebo. komplexotvornoů látkou ,.’ ΚV. .obecného, vzorce ΙΆ nebo I’B.. « . . 3' 1.,,. N-£H2 —CHj^N g ’ Γ" . OL ' i' CHj. I CH, «ť· >· · (ΓΑ) CHR2-COOR1

'CHRZ-COOR r 1'

R OOC-H-C CH--COOR CH2-C*0- N —CHZ CH2

N-GH-CH

N v

R OOOLC r

CH2-COOR (ΓΒ), přičemž R* značí nezávisle na sobě vodíkový atom, ekvivalent iontu kovu pořadového čísla 20.až 29, 39, 42 až 44 27 nebo 57 až 83 , nebo ochrannou skupinu kyseliny, znáči vodíkový atom, methylovou skupinu nebo ethylovou skupinu, která je popřípadě substituovaná jednou nebo dvěma hydroxyskupinami nebo jednou karboxyskupi-nou, R3’ značí skupinu -CH2-CH(OH)-U6-T nebo -CH2-CO-U7’, přičemž i značí přímou nebo rozvětvenou, nasycenou nebo nenasycenou alkylenovou skupinu s 1 až 20 uhlíkovými atomy, popřípadě obsahující 1 až 5 iminoskupin, 1 až 3 fenylenové skupiny, 1 až 3 fenoxyskupiny, 1 až 3 fenyleniminoskupiny, 1 až 5 amidoskupin, 1 až 2 hydrázidové skupiny, 1 až 5 karbonylových skupin, 1 až 5 ethylenoxyskupin, 1 močovinovou skupinu, 1 thiomočovinovou skupinu, 1 až 2 karboxyalkyliminoskupiny, 1 až 2 esterové skupiny, 1 až 10 kyslíkových atomu, 1 · , až 5 atomů síry a/nebo 1 až 5 dusíkových atomů a/nebo popřípadě substituovanou 1 až 5 hydroxyskupinami , 1 až 2 merkaptoskupinami, 1 až 5 oxo-s kup i námi, 1 až 5 thioxoskupiriami, 1 až 3 karbo-xyskupinami, 1 až 5 kařboxyalkylovými skupinami, 1 až 5 esterovými skupinami a/nebo 1 až 3 amino-skupinami, přičemž popřípadě přítomné fenylenové skupiny mohou být substituované 1 až 2 karboxy-skupinami, 1 až 2 sulfonovými skupinami nebo 1 až 2 hydroxyskupinami, U značí přímou vazbu nebo zbytek -NR -U -T* a ~ Τ’ značí-skupinu- i-C*0- , --COOH ·,.-N=C=0, nebo . y. v .. . in=c=s. , ' ' ' ·' « - ·« ... .; * ~ ' - · ·.. ·ί ..... - · ;; /; - ' r r .CO značí aktivovanou karboxylovou skupinu a \ ‘ iv t

r ‘ 'značí číslo’ 0, 1,- 2 nebo 3 ,M

' ' ·* .* s tím omezením, že·pokud K’ značí komplex, alespoň dva (u dvojmocných kovů), popřípadě tři (u trojmocných kovů)- ze > % substituentů R1 značí ekvivalent, kovového, iontu výše uýgdjenýčh prvků ale.se zde vyskytují1!,podle potřeby další.. karboxylové skupiny ve formě,svých solí's anorganickými a/nebo, .organickými basemi, aminokyselinami, nebo amidy.,amino- 1Γ .......... - .... ». -ΐ?ι..· .........· -*- ··--♦ · kyselin, » ·.. V»nt .

popřípadě přítomné ochranné skupiny se odštěpí,, takto získané kaskádové polymery — pokud K* značí komplexótvbrndu látku - se o sobě známým způsobem nechají reagovat s alespoň jedním oxidem kovu nebo solí kovu prvku pořadového čísla 20 až 29,-39, 42, 44 nebo 57 až 83 a popřípadě,se potom v takto získaných komplexech kaskádových polymerů ještě přítomné kyselé .vodíkpvé atomy, zcela nebo částečně substituují ka-1 tionty anorganických a/nebo organických basí, aminokyselin nebo amidů aminokyselin a popřípadě se ještě přítomné terminální aminoskupiny podle potřeby ^ před nebo po kom-plexaci kovem -- acylují.

Jako příklady aktivovaných karbonylových skupin C*0 v komplexech, popřípadě komplexotvorných látkách K’ je možno uvést anhydrid, p-nitrofenylester, imidester kyseliny hydroxyjantarové, pentafluorfenylester a chlorid kyseliny. 29

Addice nebo acylace. prováděné pro zavedení komptexo- tvorných jednotek, se provádějí se substráty, které obsahují potřebný substituent K (eventuelně vázaný na odštěpítelnou skupinu) , nebo je z nich požadovaný substituent reakcí generován .

Jako příklady addičních reakcí je možno uvést reakce isokyanátů a isothiokyanátů, přičemž reakce isokyanátů se provádí výhodně v aprotickém rozpouštědle, jako je například tetrahydrofuran, dioxan, dímethylformamid, dimethylsulfoxid a methylenchlorid, při teplotě v rozmezí. 0 °C až 100 °C , výhodně 0 °C až 50 °C , popřípadě za přídavku organické base. jako je například triethylamin, pyridin, lutidin, N^ethyldiisopropylamin a N-methylmorfolin. Reakce s iso-thiokyanáty se provádí zpravidla v rozpouštědlech, jako je například voda nebo nižší alkoholy, jako je methylalkohol, ethylalkohol, isopropylalkohol nebo jejich směsi, dímethylformamid nebo směsi dimethylformamidu a vody, při teplotě v rozmezí 0 °C až 100 °C , výhodně 0 °C až 50 °C, popřípadě za přídavku organické nebo anorganické base, jako je například triethylamin, pyridin, lutidin, N-ethyldiiso-propylamin, N-methylmorfolin nebo hydroxidy alkalických kovů. nebo kovů alkalických zemin, jako je například hydroxid lithný, hydroxid sodný, hydroxid draselný nebo hydroxid vápenatý, nebo uhličitany uvedených kovů, jako je uhličitan hořečnatý.

Jako příklady acylačních reakcí je možno uvést reakci volných karboxylových kyselin pomocí pro odborníky známých metod (například J. P. Greenstein, M. Vinitz, Chemistry of the Amino Acids, John Viley & Sons, N. Y. (1961), str. 943-945), Jako výhodné se však ukázalo převést skupiny karboxylových kyselin před acylační reakcí do aktivované 4» 4 V .4 . 30- .<1 » * ** formy, jako je například anhydrid.'aktivní ester nebo" l’ ' w' a t, chlorid kyseliny (například^E. Gross. J . „Me.ienhofer ; ;/The ^ Peptides, 'Academie Press. N.' Y. (1979), Vol. 1, str. 65-314 N. F. Albertson, Org.React. 12, Ί57 (1962)):: ' ' Příkladně je možno pro reakci anhydridů" uvést reakci monoanhydridu kyseliny Ň^-(2,6-.diqxomonomorfolinoethyl)-N^ - (ethoxýkAíbonylmethyl)-3,6-díazaoktándikart)pxýloyé s .'odpovídajícími požadovanými'-kaskádovými ^polymery, .obsahu jí čími terminální áminoskiipiny, ”ve vodě, v polárních rózpouštěd- ** · .'·'* . β * -.· V . - -t. & . > ^ ·’ v. · i. l-X, ·» \ . ^ . lech, jako je například dioxan, tetrahýdrofuran, dimethyl-formami^.;,, jdimethylsulfoxíd nebo, acetonitri.1 nebo v jej ich\ siněsich pri; basickéro ;ρΗ,5* výhodné 8 až* 10 , V * ,· t přídavku v,básiL, jako jé například hydroxid 'sodnýír-hydroxid ~ draselný, triethylámin.nebo. pyridin ,ipři teplotě·ý rozmezí · ' ’.*t. ' \ M . ‘ Λ ' 0 °C až 50 °C ., výhodně' při teplotě místnosti .^Prouplijou reakci ve vodě sě pracuje výhodněfse dvojnásobným:až .troj -násobnvrií* přebytkem* mbhoanhýdriiiu. * * * ; * A ‘ - ' ' ec> ί y-»k τλ S -» kaeiolrom nli ^ '* iiWrK η/ΐήβ Jí o»7 ^ 1 Π . . 2Π£ΙΠΙβΠ2ΐ 7 3 ... ' V případě reakce s aktivním esterem je možno poukázat na literaturu, známou pro odborníky (například Houbén Veyl, Methoden der-organischen Chemie, Georg“ Thieme Verlág, Stuttgart, díl E-5 (1985): 633). Může,.se provádět za pod- ' i ' 1 r ' mínek, uvedených výše pro reakci s anhydridy. Mohou se ale také použít aprotická rozpouštědla; jako je například met-hylenchlórid a chloroform. V případě reakcí s chloridy kyselin se používají pouze aprotická rozpouštědla, jako je například methylenchlorid., chloroform, toluen nebo tetrahýdrofuran při teplotě v rozmezí -20 °C až 50 °C , výhodně 0 °C ,až 30 .°C . Dále je možno poukázat na pro odborníky známou literaturu (například Houben-Veyl, Methoden der Organischen Chemie, Georg-. 31

Thieme-Verlag, Stuttgart (1974), díl 15/2, str. 355-364).

Pokud R1 značí ochrannou skupinu kyseliny, přicházejí v úvahu nižší alkylové, arylové a aralkylové skupiny, například methylová skupina, ethylová skupina, propylová skupina, butylová skupina, fenylová skupina, benzylová skupina, di-fenylmethylová skupina, trifenylmethylová skupina a dále bis-(p-nitrofenyl)-methylová skupina a trialkylsilylové skupiny. . . Popřípadě požadované odštěpení ochranných skupin se provádí metodami pro odborníky známými, například hydroly-sou, hydrogenolysou nebo alkalickým zmýdelněním esterů alká-liemi ve vodno alkoholickém roztoku pří teplotě v rozmezí 0 °C až 50 °C , nebo v případě terč.-butylesteru pomocí kyseliny trifluoroctové. i 1

Popřípadě neúplně ligandy nebo komplexy acylované terminální aminoskupiny mohou být, pokud je to požadováno, převedeny na amidy nebo poloamidy. Například je možno uvést reakci s. acetanhydridem, anhydridem kyseliny jantarové nebo i anhydridem kyseliny diglykolové.

Zavedení požadovaných kovových iontů se provádí například způsobem popsaným v DE-OS 34 01 052 tak, že se oxid nebo sůl (například dusičnan, octan, uhličitan, chlorid nebo síran) prvku pořadového čísla 20 až 29, 42, 44 nebo 57 až 83 rozpustí ve vodě a/nebo nižším alkoholu (jako je methylalkohol, ethylalkohol nebo isopropylalkohol) a nechá se reagovat s roztokem nebo suspensí ekvivalentního množství komplexotvorného ligandu a potom, pokud je to požadováno, se přítomné kyselé'vodíkové atomy nebo kyselinové skupiny substituují kationty anorganických a/nebo organických basí, 32

* , v

^ i í> aminokyselin nebo amidů aminokyselin.1 r » " ‘T ' ‘ ” ' ' "v ’ ’ J-......ř • · * »* 1

Zavedení požadovaných kovových iontů se'může provádět jak na-stupni komplěxotvorné látky ΓΑ nebo I’B , to znamená' před kopulací na-kaskádové polymery, tak také po.kopulaci -nemetalisovaných ligandů . I’A nebo I’B . · i V·· É- ; - . - m 5 ·., .' ♦· ' ·! a . . · ' i >· I f · ? , -i · s*. . • t-* - V . - *· · · j T · ; * . Neiitralisacé se při tom provádí pomocí anorganických basí, například hydroxidů, uhličitanů nebo hydrogenuhliči-Ai tanu, například ‘sodíku, draslíku, lithia, hořčíku,nebo váp- v ’ . "f .. ' y niku a/nebo organických basí,‘jako.mimo jiné primárních seku, n dát nich á; terciárních aminů,. jako. je. například..e.thanol-^ . amin, ’ mórf olin," glukamin. N-‘méthylglukamin a M. N-dimethyl^.____ glukamih, jakož .i basických aminokyselin; jako je-například

* ·-*··-- -.·. . ·.,··· · · -^ -7*7^ ~~ "* 'V ~ ' T" "T lysin,*arginin a ornithin, nebotamidů.původně neutrálních v v v *· ' 1 ' . ' rt ‘ nebo kyselých aminokyselin, jako je například .kyselina r « * hippurová nebo glycinacetamid. »*»· - . ip. · » ··«.».-· .^ · ***'“ · * '· ** * ^

Pro výrobu neutrálních komplexních sloučenin sefrmůže například ke kyselým komplexním solím ve vodném roztoku nebo suspensi přidávat tolik požadované base, až se . dosáhne-bodu neutrality. Získaný roztok se může potom za vakua zahustit do sucha. Často je výhodné, když se vytvořené, neutrální soli vysráží přídavkem s vodou mísitelných rozpouštědel, jako jsou například nižší alkoholy (methylalkohol, ethylalkohol, isopropylalkohol a podobně) , nižší ketony . (aceton a podobně) nebo polární ethery (tetrahydrofuran, dioxan, 1,2-dimethoxyethan a podobně)-, čímž se získají lehce isolovatelné a dobře čistitelné krystalisáty. Jako obzvláště výhodné se ukázalo přidávání požadovaných basí k reakční směsi již během tvorby komplexů, čímž se ušetří jeden reakční krok.

Když obsahují kyselé komplexní sloučeniny více volných kyselých skupin, tak je často účelné vyrobit neutrální směsné soli, které obsahují jak anorganické, tak také organické katíonty jako protionty.

Toto se může například provést tak, že se komplexo-tvorné ligandy ve vodné suspensi nebo roztoku nechají reagovat s oxidem nebo solí prvku, poskytujícího centrální iont a s polovinou množství organické base, potřebné pro neutralisaci, vytvořená komplexní sůl se isoluje, podle potřeby se čistí a potom se pro úplnou neutralisaci smísí s potřebným množstvím anorganické base.' Pořadí přídavků basí může být také opačné. Čištění takto získaného komplexu kaskádového polymeru se provádí po případném nastavení hodnoty pH přídavkem kyseliny nebo base na 6 až 8 , výhodně 7 , výhodně ultra-

R filtrací membránou vhodné velikosti pórů (například Amicon XM30 , Amicoň^ YM10", Amicon^ YM3) ěbo gelovou filtrací na vhodných Sephadex -gelech. Výroba terminální skupiny nesoucích kaskádových polymerů, potřebných pro kopulaci na komplexotvorné látky K’, (popřípadě také odpovídající kovy obsahující komplexy) vychází všeobecně z komerčně dostupných, popřípadě podle literárních údajů vyrobítelných dusík obsahujících kaskádových startérů A(H)a .. Zavedení generačních iontů X, Y, Z a V se provádí pomocí metod známých z literatury (například J. March, Advanced Organic Chemistry, 3. ed.; John Viley & Sons, (1985), 364-381) acylačními, popřípadě alky-lačními reakcemi s chráněnými aminy, majícími požadovanou strukturu, které obsahují pro vazbu na kaskádové jádro schopné funkční skupiny, jako například karboxylové 34 kyseliny, isokyanáty, isothiokyanáty nebo aktivované karbo-xylové kyseliny (jako anhydridy, aktivní estery, chloridy .c kyselin) , popřípadě halogenidy (jako například chloridy, bromidy, jodidy) ,· aziridin, mesylát, tosylát nebo jiné, pro odborníky známé odštěpitelné skupiny.

. V

Bylo zde již zdůrazněno, že rozlišování inezi kaskádo-1 vým jádrem A a reprodukčními jednotkami je čistě formální. Ze syntetického”hlediska může· být výhodné, že se nepoužije formální kaskádový startér, A(H)a , ale dusíkové atomy; patřící podle definice ke kaskádovým jádrům, se zavedou teprve s první generací. Tak jnapříklad pro syntesu sloučeniny, popsané v příkladě lb) , výhodnější nealkylovat formální kaskádové jádro triamid kyseliny trimesinové s například benzyloxykarbónyiaziridinem (šestkrát) , ale nechat reagovat, trichlorid, kyseliny trimesinové. s (bis[2-.(benzyloxy- % karbonylamino)-ethyl]raminem ~ (třikrát)v

Jako ochranné, skupiny aminoskupin je možno uvést;.pro odborníky běžné benzylox.ykarbonylovou skupinu; terč., -buto-xykarbonylovou skupinu; trifluoracetylovou- skupinu, . fluo-renylmethoxykarbonylovou. skupinu; benzylovou .skupinu;' a; for-mylovou skupinu (th.κV. Greene, P. G. M. Vuts, Protective . Groups in Organic syntheses, 2, Ed. John Viley &, Sons (1991), sťr. 309-385) . Po odštěpení těchto ochranných skupin, které se rovněž provádí pomocí metod známých z literatury, může se zavést do molekuly následující požadovaná generace. Vedle této ze dvou reakčních stupňů (alkyláce, popřípadě acylace a odštěpení ochranných skupin) sestávají- i cí výstavby jedné generace je také možné rovněž ve dvou reakčních stupních současné zavedení dvou, například Χ-[Υ]χ , nebo více generací, například X-[Y-(Z)y]x . Výstavba těchto vícegeneračních jednotek se provádí alkylácí. popřípadě acylací nechráněných aminů sě strukturou požadovaných reprodukčních jednotek ("reprodukční amin") se druhým reprodukčním aminem, jehož aminové skupiny jsou přítomné ve chráněné formě.

Sloučeniny obecného vzorce A(H)a , potřebné jako kaskádový startér, jsou komerčně dostupné, nebo je možno je vyrobit podle metod známých z literatury nebo analogicky (například Houben-Veyl, Methoden der Org. Chemie, Georg-Thieme-Verlag, Stuttgart (1957), díl 11/1; M. Micheloni ^a. kol. , Inorg. Chem. (1985), 24, 3702 ; T. J. Atkins a kol. , Org. Synth., Vol. 58 (1978), 86-98 ; The ČHémíštrý of Hetě-rocyclic Compounds : J, S. Bradshaw a kol., Aza-Crown-Macrocycles, John Viley & Sons, N. Y. (1993)). Jako příklady je možno uvést :

Tris(aminoethyl)amin [např. Fluka Chemie AG, Schveiz; Aldrich-Chemie, Derutschlandl; Tris(aminopropyl)amin [např. C. Voerner a kol. , Angew. Chem. Innt. Éd Engl. (1993), 32. 1306]; Diethylentriamin [např. fluka; Aldrichl; ·

Triethylentetramin [např. Fluka; Aldrich]; f Cr

Tetraethylenpentamin [např. Fluka;. Aldrich]; 1,3,5-Tris(aminomethyl)benzen [např.*T.M. Farrett a kol., J. Am. Chem. Soc. (1991), 113. 2965]; amid kyseliny trimesinové [např. H. Kurihara; Jpn. Kokai Tokkyo Koho JP 04077481; CA i\J_, 162453]; 1,4,7-Triazacyklonan [např. Fluka; Aldrich]; 1,4,7,10,13-Pentaazacyklopentadekan [např. K.V. Aston, Eur. Pat Appl. 0 524 161, CA 120, 44580]; 1,4,8,11-Tetraazacyklotetradekan [např. Fluka; Aldrich]; 1,4,7,10,13,16,19,22,25,28-Dekaazacyklotriakontan [např. A. Andres a kol., J. Chem. Soc Dalton Trans. (1993), 3507]; l.l,l-Tris(aminomethyl)ethan [např. R.J. Geue a kol, Aus. J.

Chem . (1983), '36, 927]; Tris(aminopropyl)-nitrpmethan [např. G.R.. Něvkome- á -kol. , -angew. Chem.» 103-, 1205 (1991) analogicky s R,C· Larock, Comprehénsivé Organic=; : , .

Transf ormátions , VCH Publishers,*N.Y. (.1989) 419-420] * amid kyseliny 1,3,5,7-Adamantantetrakarboxy Lové [např.- . Stet-ter a kol., Tetr. Lett. 1967 * 18411 : * ‘

* ‘amid kyseliny 1,2-Bis[ Phenoxyethan ]-3 ’ , 3 V5' , 5 ’ ’ - ' Y t. i 'l> ,í ... . ... f-. .... .t. . ... - > . * - *-----: ‘ tetrakarboxylové- tnapř/M. P' Gollman a . kol. J.Am. -Chem.λ -*-Soc. (-1988) , .110, 3477-86 -analogicky· z předpisu pro-příklad 1b) j; .'-řM ·* ; ,, . , ^ ‘ . v. 1 , ... »· · '·*· - 1 ,*4,7,10,13,16,21,24-Oktaazabicyklo[8.8.’. 8. ]hexakosan [např ., P.H. ; Smith a kol., J . Org.: Chem. Ί1993) , 58.79391. *... - > “ 'iťVň "vf" r' · ,,.r ·<. ϊ,^ Výroba reprodukčních'aminů, obsahujících výše uvedené’ v .i' i, . „rf . — —.· ··,·**. · ·$·* ' — I* '1 - iř*if · '1· .-'ΛΗτ·- “ . — «Γ— y— .ι - ‘ ~ '~f ,1#"el ' funkční skupiny,- potřebnýchrpro výstavbu generací,.se . ., f provádí podle předpisů,.· popsaných ; v^ěxperimentáíní' .část i;, ; ··' . „ \ -a· popřípadě podle ‘ metod*;'.-'popsaných v literatuře ,. nebo :analo- · gicky. ^ 1 1 ' v 1 ‘ ·_,

Například je možno uvést f

Nalfa NePsilon-DÍ-C0-0-GH2C6H5-Lysin-p-nitrofenylester; [předpis k příkladu'lc) ]'; . H00C-CH20CH2C0-N(CH2CH2NH-C0-0-CH2C6H5)2 [předpis k příkladu 7a)]; HOOC-CH2N(CH2CH2NH-CO-0-CH2C6H5)2 [předpis k příkladu.9e];í ,í HOOC-CH2CH2CO-N(CH2CH2NH-COCF2)2 [vyrobeno, podle předpisu pro příklad 7a)] tak, že se namísto z bis(benzyloxykarbo-nylaminomethyl)aminu vychází z bis(trifluoracetylamino-ethyl)aminu a namísto z anhydridu-kyseliny dig-lykolové se 37 -

vychází z anhydridu kyseliny jantarové] ; hooc-ch2och2conh-c6h4-ch[čh2con(ch2ch2nh-co-o-ch2c6h5)2]2 * W . [vyrobeno podle předpisu pro příklad 7a) tak, že se namísto z bis(bezyloxykarbonylaminoethyl)aminu vychází z aminu, popsaného v příkladu 9b)] ; 0*C=N-C6H4-CH[CH2C0N(CH2CH2NH-C0-0-CH2C6H5)2]2 [předpis k příkladu 9c] ; 0 / NH-C0-0-CHaC6H5 [předpis k příkladu 21b)] ; a0 ' nh-co-o-ch2c6hs

' ,'jfí CON(CH2CH2NH-C0-0-CH2CgH5)2 / \ HOOC-CH2OCH2CONH-

//A CON(CH2CH2NH-CO-0-CH2C^H5)2 [předpis k příkladu 17f) ] ; v · 38

vyroceno podle předpisu k příkladu 17f) 'L ’ taIt. že se reakce provádí namísto s an-hydridem kyseliny diglykqlové s trifosge-^ nám analogicky jako*je popsáno v předpise 'ýs:7“ ‘v. příkladě 9c) ; ' , / < ' ' . 7 ,V; ·* ; " ‘ ‘ . . - . % f í · : > N-benzyloxykarbonyi-aziridin ' [předpis k příkladu. 15a) ] f ’ ··' dostupný například U:~f í-rnr Bachem California- ; *« ’ 'ϊ+,.'Λ»

Nrbenzyloxykarbonyl-glycin * ; CX>^2CH2NHCCWXWzC6H5 HOOC—y ý—“ OCH2CH2NHCOO-CH2C6Hs \ OGHaCHjNHGGKD-CHaCsHs vyrobeno podle C. J. Cavallita a kol., J. Amer. Chem. Soc. 1943, 65, 2U0, tak, že se namísto z benzylchloridu vychází z N-CO-O-Cl^CgH^-(2-bromethyl)aminu [A. R. Jacobson a kol., J. Med. Chem. (1991), 39 34, 2816] . Výroba komplexů a komplexotvorných látek obecného vzorce I’A a I’B se provádí podle předpisů, popsaných v experimentální části, popřípadě podle metod známých z literatury (například EP 0 512 661 , 0 430 863 , 0 255 471 a 0 565 930) nebo analogicky. Výroba farmaceutických prostředků podle předloženého vynálezu se provádí rovněž pomocí o sobě známých způsobů tak, že se komplexní sloučeniny podle předloženého vynálezu, popřípadě za přídavku v galeniče obvyklých přísad, suspendují nebo rozpustí.ve vodném.mediu a potom se popřípadě sus-pense nebo roztok sterilisuje. Jako vhodné přísady je možno uvést například fyziologicky neškodné pufry (například tromethamin) , přísady komplexotvorných látek nebo slabých komplexů (například kyselina diethylenaminpentaoctová nebo korespondující komplexy Ca-kaskádových polymerů) , nebo pokud je zapotřebí elektrolyty, například chlorid sodný, nebó pokud je zapotřebí antioxídanty, například kyselina askorbová.

Když jsou pro enterální aplikaci nebo jiné účely požadovány suspense nebo roztoky prostředků podle předloženého vynálezu ve vodě nebo fyziologickém solném roztoku, smísí se s jednou nebo několika v galeniče obvyklými pomocnými látkami (například methylcelulosou, laktosou nebo mannitem) a/nebo tensidy (například lecitinem, Tweenem^ nebo Myrjem^) a/nebo aromatickými látkami pro korekci chuti (například etherickými oleji).

Principielně je také možné vyrobit farmaceutické prostředky podle předloženého vynálezu také bez isolace ! - ·' - 40 - ' L· ' ·* >. *· . komplexní soli. V každém případě pozorně vzít zřetel na to. .. *aby,.se tvorba chelátu prováděla·* takaby' byly soli podle i předloženého vynálezu*a roztoky'solí prakticky prosté ne- • ', v . t ·, komplexovanýcb^toxicky působících kovových iontů,:* ' Φ- ,sToto je -možno.; záj istit například pomocí barevných ín- . 70 · t ' t * t r ^ . i <· -* * v. κ ‘ v; ^ ' dikátorů, jako'je xylenolorangé; kontrolní titrací během'i-"proCešu .výroby. * Předmětem'opřědloženéhó vynálezu je tedy o." Λ *- ‘ ' . t *- .takp^způsob-výroby komplexních-sloučenin a jejich solí. í Jako poslední· zabezpečení zůstává čištění isolované kom- rv plexní soliv 'i ' ":>-··νj'tj··· j ' ' V 'κί íi'Sp‘ Λ . -A. d 4 ř. v Farmaceutické prostředky podle ^předloženého vynálezu— obsahujjí výhodné<v"Λ; pmólj.až ligol £l,.J^|ď&xni solida dávkuj í-se zpravidla v množství>>0,0001 až. 5 mmol/kg. Jsou určené * ff b 1 f. ,t! pro enterálni^á; par en t er.ální v aplikaei. Komplexní '"sloučeni-ny podle^pfedlpžéného·vynálezu přicházejí v úvahu pro'pou- .žití ' , ϋ- i}·· ». .¾1 2 3 4¾ tv 1 pro NMR-diagnostiku a rentgenovou diagnostiku ve formě svých komplexů s ionty prvků s pořadovými; čísly 21 až 29, 39, 42, 44 a 57 až $3 ; . í.- .· ·' · · 7 \ ' ’ · . 2 pro-radiodiagnostiku a radioterapii ve formě svých .

'V 3 komplexů s radioisotopy prvků pořadových čísel 27, 29, 31, ,32, 37 až 39, 43j 49, 62, 64, 70, 75 a- 77 , 4

Prostředky podle předloženého vynálezu splňuj í nej -různější předpoklady pro vhodnost jako kontrastní činidla pro jadernou spinovou tomografii. Tak jsou výborně vhodně k tomu, aby po orální nebo parenterální aplikaci zvýšením intensity signálu výrazně^zlepšovaly.obraz, získaný pomocí jaderné spinové tomografie. Dále vykazují vysokou účinnost, 41 která je potřebná k tornu, aby se tělo zatěžovalo pokud možno nepatrnými množstvími cizích Látek a také dobrou přijatelnost, která je nutná k tomu, aby se zachoval neinvasivní t charakter zkoušek.

Dobrá rozpustnost ve vodě a nepatrná osmo.la.lita prostředků podle předloženého vynálezu dovoluje výrobu vysoce koncentrovaných roztoků a tím udržení objemového zatížení oběhu v přijatelných hranicích a vyrovnání zředění tělními tekutinami. To znamená, že NMR-diagnoStika musí být stonásobně až tisícinásobně lépe. rozpustná ve vodě než pro NMR-spektroškopii. Dále vykazují prostředky podle předlo- h v zeného vynálezu nejen vysokou stabilitu in vitro, ale také překvapivě vysokou stabilitu in vivo, takže uvolnění nebo výměna iontů - Samých o sobě jedovatých - které nejsou v komplexech kovalentně vázané, v průběhu doby, v nových .-v kontrastních činidlech úplně opět vylučovanýých, probíhá ^ .r zcela pomalu. Všeobecně se prostředky podle předloženého vynálezu ^ dávkují pro použití jako NMR-diagnostika v množství 0,0001,. až 5 mmol/kg , výhodně 0,005 až 0.5 mmol/kg . Detaily použití jsou například diskutovány v publikaci H.-J. Veinmann a kol.. Am. J. of Roentgenology 142. 619 (1984) .

Obzvláště nízké dávky (pod 1 mg/kg tělesné hmotnosti) l ► organospěcifických NMR-diagnostik jsou použitelná například pro důkaz tumorů a srdečního infarktu. Dále mohou být komplexní sloučeniny podle předloženého vynálezu výhodně použitý jako susceptibilitní reagencie a jako shift-reagencie pro in-vivo-NMR-spektroskopii. S, 4," -- 42; - *— V í .. -'3!ju .* · 1 Prostředky podle předloženého·vynálezu,jsou na základě "svých radioaktivních- vlastností J’a' dobré stability*v nich ob- : » ... · ^ sažených komplexních sloučenin vhodné jako radiodiagnostika. Detaily o jejich použití a dávkování'jsou popsány nap ř i klad v publikaci "Radiotracers for Medical Applications", CRC-

Press, Boča Ráton, Florida. , . !·, #·* -*.·· * ,· L „l· ·· ' V ,, Λ v. Další obraz poskytuj ící metodou-s radioisotopy je pošitřonová emisní tomografie, iktetá využívá positrony 1 'f·· , - · .· ; < . « A A * • ..emitujíc.í isotopy, jako,je ..například, -^Sc, . Sc/.fífFe, ^Co<a ^®Ca (Heiss, V. D:\Phelps, Μ. E; Positron Emission "·"" *·. , ‘ ► ^ Jpmography^ pf^ Bráin^, XSpringer.*yerlag~Berlin., HeidelbergríNew York,. 4' ί·

Vzhledem k tomu; že. se, látky, podle předloženého.! r. ,k * ,ϊ " " V: ' V. * ' vynálezu obohacují' v maligních: tumorech... (žádná difuse : do,, zdravé tkáně, ale vysoká prostupnost cévami tumoru), mohou: ^aké^podpoř.oyAt^zařoy^c.3,-^tpif^p.i i^al ' T&3:.CLJ5.e odlisuje od odpovídající diagnostiky pouze množstvím a^dru- hem použitého isotopu:. Cílem je při.tom rozrušení buněk tumoru ná energii bohatým krátkovlnným záxením.s pokud možno nepatrným'dosahem. K: tomu se využívá, vzájemného-*působení : kovů, obsažených v komplexech (například· železa nebo..gado- *. - · * " '.. ·* . liniá) s ionisujícím zářením (například rentgenovými paprsky) nebo s neutronovým zářením. Tímto efektem se signifikantně zvýší lokální dávka ozáření na místě, kde se nachází kovový komplex i(například v.tumoru). Aby se dosáhlo stejné dávky záření v maligní tkáni, může se při použití takovýchto kovových komplexů zatížení zdravé tkáně zářením podstatně zredukovat a tím snížit zatěžující vedlejší účinky pro pacienty. Konjugáty kovových komplexů podle předloženého vynálezu jsou tedy vhodné ...také jako ra-diosensibílisujicí látky při ozařovací terapii maligních 43 tumorů (například využitím Móssbauerova efektu při neutronové terapii). Vhodné β-emitujíci ionty jsou například 4**Sc, 4^Sc. 4®Sc. ^Ga, ^Ga a . Vhodné a-emitujicí ionty s nepatrnými poločasy rozpadu jsou například 21^Bi, ^*^Bi a ^*4Bi , přičemž výhodný je ^^Bi . Vhodný fotony a elektrony emitující iont je *^®Gd , který se může získat ze **^Gd bombardováním neutrony.

Když je prostředek podle předloženého vynálezu určen pro použití ve variantě ozařovací terapie, navržené R. L. Milisem a kol: (Nátuře Vol. . 336 ,..,(1988)., str. 787) , tak jnu-sí být centrální iont odvozen od Mópbauerova isotopu, jako je například ^Fe nebo . Při aplikaci in vivo terapeutických prostředků podle ,, předloženého vynálezu, mohou se tyto aplikovat společně s ^ vhodným nosičem, jako je například sérum nebo fyziologický T roztok chloridu sodného a společně s jiným proteinem, jako je například lidský sérový albumin. Dávkování je při tom závislé na druhu celulární poruchy, na používaném kovovém r iontu a na druhu obraz poskytující metody.

Terapeutické prostředky podle předloženého vynálezu se aplikují parenterálné, výhodně iňtravenosně.

Detaily použití radioterapeutik jsou diskutovány například v publikaci R. V. Kozaka a kol. , TIBETIC, Oktober 1986, 262 .

Prostředky podle předloženého vynálezu jsou výborně vhodné jako rentgenová kontrastní činidla, přičemž obzvláště je třeba vyzdvihnout to, že se s nimi nedají poznat v biochemicko farmakologických zkouškách žádné příznaky reakcí n ' , ' , . _, podobných anafylaxíi*, známých z použití jod obsahujících · -'·* „ f . - 1 ' * ·- j '- * ·'" V * *' ,lu ' kontrastních činidel. Obzvláště cenné jsou kvůli;dobrým ^ 'r :.f*- ", i absorpčním vlastnostem v oblastech vysokých napětí pro digi tální substrakční techniky . ‘ ^ ‘ J V' ' * Všeobécně se prostředkytpodle.předloženého vynálezu -* " "»··. . - .V* ·ί ' ’* tíř -* 'dávkují pro použitíT.jako rentgenová‘kontrastní činidla ' - J · * -v ’ f * í analogicky jako například u meglumin-diatrizoátu v množství ΐ ~ v »ν·Λ^Γΐί-“·.·7ιί · . ··· - .· - ...... - i 0,1 až 5 ..mmol/kg '* výhodně ,0,25 až'l mmol/kg .

Detaily použití rentgenových kontrastních činidel jsou ~ϋ i s kuto váný* nápř í kl ad v publikači Bar ke," Rontgenkontráši -mittél, G. Thieme,: Leipzig (1970) a P.' Thurn, E. Bácheler- , a * j'f J . 4; . ' i- r · Í f ' "Einf uhrung iri 'ďieRónigendiagnostiV", 0. . .Thieme, Stuttgart, New* York "(1977) , -*! · *. ' :y *'A- ·' "·· —. :Vcelku -se^podařilO^syntetispvat' nové.’ kompTexótvorhé"“ ; t- · _" . . v l,< m···„ ·. : >—r- “ laťkyy/kovové^komplexy a "kóvóvé kótjplěxhí' soli j které ><>te- vírají nové možnosti v diagnostické a terapeutické medici- * ně. , Následující příklady provedení Slouží k bližšímu . " ' · ' 'I· V · # •tC . 1 " ! objasnění předmětu vynálezu. ' ; v .···.' , Příklady provedeni vynálezu Přikladl a) Bis[2-(benzyloxykarbonylamino)-ethyl]-amin 51", 5 g (500 mraol) diethylentriaminu a 139 ml (1 mol) triethylaminu se rozpustí v dichlormethanu a při tep- 45 lotě -20 °C se smísí se 161 g benzylkyanoformiátu (Fluka) v dichlormethanu a reakčni směs se míchá přes noc při teplotě místnosti. Po ukončení reakce se směs odpaří, získaný zbytek se vyjme do diethyletheru, organická fáze se promyje roztokem uhličitanu sodného a vysuší se pomocí bez-vodého síranu sodného. Filtrát se smísí s hexanem a vytvořená sraženina se odfiltruje a usuší. Výtěžek : 163,4 g (88 % teorie).

Elementární analysa •t '· ... H 6,78 N 11,31 H 6,83 N 11,28 vypočteno: C 64,67 zjištěno: C 64,58 b) Triamid kyseliny N,N,N\Ν’, N” ,N”-hexakis[ 2-(ben-zyloxykarbonylamino)-ethyl1-trimesinové ·#' 13,27 g ,-(50 mmol), trichloridu kyseliny trimesinové (Aldrich) a 34,7 ml (250 mmol) triéthylaminu se rozpustí v dimethylformamidu a při teplotě 0 °C se smísí se 65,0 g (175 mmol) aminu, popsaného v příkladě la) a reakčni směs se potom míchá přes noc při teplotě místnosti. Získaný roztok se ve vakuu odpaří a zbytek se chrornátografuje za použití ethylesteru kyseliny octové na silikagelu. Výtěžek : 39,4 g (62 % teorie).

Elementární analysa vypočteno: zjištěno: H 5,95 H 5,95 C 65,24 C 65,54 N 9,92 N 9,87

V - 46 ·**&* - y «·. ,r ο) Ν&1^,Ν6Ρ8ί?-οη-^Ϊ5(Ν,Ν' -dibenzyloxykarbonyl-lysyl) -lysin, chráněný "trirlysin" . -< 3,6,g (20 mmol) lysin-hydrochlorídu a 6,95 ml ’ . r -mm ol·)—-triethylaminu—se—rozpustí—v—djitiethylformaniiduT^smlsí se se ^ 26,8 g ' (50 mmol) ^ Na^^a,NePs^-*-Pn-dibenzyloxy.karbp,r nyl-lysin-p-nitrofenylesteru (Bachem).'a reakční. směs sp ^ i ' 'k míchá^po^dpbu 2 dnů při teplotě místnosti, ^Po. ukončení>re-akce se'směs ve-vakuu odpaří, získaný zbytek sě vyjme do ethylesteru kyseliny octové a*vytřepe se,zředěnou kyselinou chlorovodíkovou.- Organická fáze se vysuší pomocí bezvodého síranů sodného, rozpouštědlo seiOdpaří-a získaný zbytek še ; chromátografuje, za použit.í směsi ethylacetátu a ethylalkoho- 1 t V· t

lu s odstupňovaným gradientem. V Výtěžek. 10,7 g (57 %,teorie) ‘ .. ..

Elementární analysa vypočteno: C 63,95 H 6,65 N 8,95 zjištěno: C 63,63 H 6,69 N 8,93 d) Úplně chráněný benzyloxykárbonyl-24-polyamin na basi triamidu kyseliny Ν,Ν,Ν’,N*,N’*,N’’-hexakis[2-(tri- . lysylamino)-ethyl]-trimesinové ' i . 1,27 g (1 mmol) hexa-benzylkarbonylaminu, popsaného v příkladě lb) , se rozpustí v ledové kyselině octové a za míchání se smísí se 33% .bromovodíku v ledové kyselině octové. Po 60 minutách se počínající srážení dokončí pomocí diethyletheru, vzniklý hexa-amin-hydrobromid se promyje diethyletherem, ve vakuu se usuší a bez dalšího čištění se použije v dále popisované reakci. Výtěžek : 0,95 g (kvantitativní). 47 7,0 g (7,5 mmol) "tri-lysinu" , popsaného v příkladě lc) , 1,2 g (7,5 mmol) 1-hydroxybenzotriazolu a 2,4 g (7,5 ramol) . 2-> (lH-benzotriazol-l-yl)-1,1,3,3-tetrainethyl-uronium tetrafluorborátu (TBTU; Peboc Limited, UK) se rozpustí v dimethylformamidu a míchá se po dobu 15 minut.

Tento roztok se potom smísí s 5,16 ml (30 mmol) N-ethyl-diisopropylaminu as 0,95 g (1 mmol) výše popsaného hexa-amin-hydrobromidu a reakční směs se míchá přes noc při teplotě místnosti. Po ukončení reakce se směs za vakua odpaří á získaný 'zbytek šé' čhřomatograřuje'na^siiikagelu za použití směsi ethylacetátu a ethylalkoholu (2:1). Výtěžek : 4,5 g (76 % teorie). t

Elementární analysa - vypočteno: C 64,35 H 6,71 N 10,52 zjištěno: C 64,08 H 6,57 N 10,29. e) 24-gadolinium-DTPA-monoamid na basi· triamidu kyseliny Ν,Ν,Ν*,Ν’,Ν’’,Ν’’-hexakis[2-(trilysylamino)-ethyl]--trimesinové 1,20 g (0,2 mmol) póly-benzyloxykarbonylaminu, popsaného v příkladě Id) , se rozpustí v ledové kyselině octové a za míchání se smísí se 33% bromovodíkem v ledové kyselině octové. Po 3 hodinách se dokončí počínající srážení pomocí diethyletheru, vzniklý 24-amih-hydrobromid se promyje diethyletherem a ve vakuu se usuší. získaný zbytek Se potom vyjme do vody a přídavkem 1 N hydroxidu sodného se hodnota pH upraví na 9,5 .. Do tohoto roztoku se přidá 5,8 g (14,4 mmol) kyseliny N^-(2,6-dioxomorfolinoethyl)--N^-(ethoxykarboňylmethyl)-3,6-diazaoktandikarboxylové 48 *- f # ' 'V * * ^ · -«(příklad 13a) EP O 331 *616) v pevné formě, přičemž se hod- nota pH udržuje dalším přídavkem hydroxidu sodného na.kon- ' ' -··,· . stantní hodnotě .9,5 . Po ukončení přídavku se pro\ 1 1 '.l' « , ' . «»í • - , ' -< * * r ·- · -'! - Ί*.. · ..·*«. .#

zmýdelnění DTPA-ethylesteru nastaví hodnota pH pomočí 5<-N 4 ' ^ . ψ —-hydro x-idu—s od néh o-n a—<—-1-3—a-—re akční—sm ěs—se -míehá—pře s-noe . · ·: • tr : při teplotě místnosti. Potom se hodnota pH nastaví '« ' · V» >- ····...· * Λ, ^ ” “ -V b M « -*; · j koncentrovanou'kyselinou1chlorovodíkovou na 5.,,smísí se-se λ *r * · j· \ λ.. ί ► ' » k t 1 -v 2,61 g. (7,2 mmol) Gd^O? , míchá .se po dobu 30 minut při'. ........... . . .. . ...r- . . Λ - i ^teplotě 80 °C,a po ochlazení še^odnota pH upraví na 7 'a směs se*odsolí na ultrafiltrační membráně YM3 AMICON. • '** · ’ * V H , t * + Řetentát se konečně podrobí membránové·filtraci a lyofili- šaci.’ * - "/ ;·.-·-- ~ ^ Výtěžek : 3,31 g (9476 % teori ej obsah vody ^(Karl-Fischer)i L: 8,5 ./% / stanovení Gd (AAS) : 22,9. %.

Elementární-.analysa- (vztaženo na -bez.vodou látku).-·- Ί' ........ vypočteno: C 34,89 H 4,17 Gd 23,57 N 10,24 Ná" 3,45 zjištěno: C 35,26. H 4,32 Gd 22,82 N 10,56 Na 3,14.

Analogickým způsobem se získá s yterbiový * komplex.

Elementární analysa (vztaženo na bezvodou látku) vypočteno: C 34,08 zjištěno: C 33,90 H 4,08 Yb 25,34 H 4,22 Yb 25,06 N 10,00. Na 3,37 N 9,83 Na 3,14. 49 Příklad 2 a) 10-[5-(2-karboxyfenyl)-2-hydroxy-5-oxo-4-aza-pentyl ] --1,4,7-tris(karboxymethyl)-1,4,7,10-tetraazacyklodo-dekan 50 g (144,3 mmol) l,4,7-tris(karboxymethyl)-l,4,7, 10-tetraazacyklododekanu (D03A) se rozpustí ve 250 ml vody a hodnota pH se nastaví pomocí 5 N hydroxidu sodného na 13 . Potom se během jedné hodiny přikape roztok 38,12 g' :' (167,ůrmmol) N-(2,3-epoxypropyl)-ftalimidu ve * 100 ml. , dioxanu a reakční směs se míchá po dobu 24 hodin při teplotě 50 °C a hodnota pH se udržuje přídavkem 5 N hydroxidu sodného na 13 . Hodnota pH získaného roztoku se nastaví 10%.kyselinou chlorovodíkovou na 2 a tento se ve vakuu odpaří. Získaný zbytek se rozpustí v malém množství vody a čistí se na sloupci iontoměniče (Reillex = poly-(4-vi-nyl)-pyridin, eluens voda) . Hlavní frakce se ve vakuu odpaří a získaný zbytek se konečně čistí pomocí chromatogra-fie na RP-18 (LiChroPrep / pohyblivá fáze : gradient směsi tetrahydrofuran/methylalkohol/voda) .. Po odpaření hlavních frakcí se získá 63,57 g (71 % teorie) amorfní pevné látky.

Obsah vody : 8,5 % .

Elementární analysa (vztaženo na bezvodoú látku) vypočteno: C 52,90 H 6,57 N 12,34 zjištěno: C 52,65 H 6,68 N 12,15 b) 10-(š-amnino-2-hydroxy-propyl)-1,4,7-tris)karboxy-methyl)-!,4,7,10-tetraazacyklododekan - 50 ΆΑ (- · ' . Τ' > .·νπ· 50 g (88,1 mmol) sloučeniny z,příkladu 2a) se ' * .' * 1 " * zahřívá .ve 300"ml· koncentrované kyseliny chlorovodíkové po i ’ .· „ * ·: ' . . dobu *24 hodin k varu pod zpětným chladičem. Potom se l t f í r ' ^ reakční*'směs· odpaří dó sucha, získaný zbytek se rozpustí „v malém množství vody a čistí se na slo.up.c.i_!.ion.toměniče—------ (ReillexR = póly-(4-vinyl)pyridin, eluče vodou)ť' Hlavní , .*.· ·. · ' · ’··» *· t,' i ·♦. . '· frakce se odpaří do sucha. _ _ „v.1 v *' \ , r „ · . " . j i’ . ? \ · v - * . ř‘ v ·* Výtěžek1: ,39,0 g ;(95 %;teorie) ^sklovité pevné látky obsah vody : 10,3 ‘ ; , , , ..Elementární analysa"^ (vztaženo na bezVodou látku). ' i.· *v ·*. < * </· · -vy p oč t eno:

G^48X6S H7T93 N-16-70^ Λ : zj.išx.ěna::.:;^ /-C.48.,^7., -Ηί-8,-09^ U N -16-,55-. . ^v·· * c) Gadoliniový, komplex-10-(3-amino-2-hydřoxy-přopyl)~7 . -1,4,7-ťris (karboxymethyl)-1.,4,7., 10-tetraazacyklo- :-^dodekanu.. —·> - - ·. - 38 g (90,6 mmol) . sloučeniny z příkladu 2b) se rozpustí ve. 300 ml vody a'přidá se 16,42 g -(45,3 mmol) oxidu gadoliriia. Reakčni směs se zahřívá.po dobu 3 hodin.na t.eplotu 90 C-1, načež se ochlazený roztok míchá s 5 ml ky selého ióntoměniče (IR-120/H+-forma) a 5 ml basického ion-toměniče .(IŘA-4l0/0H“-forma) po.dobu jédné hodiny při teplotě místnosti. Iontoměniče se potom odfiltrují a po lyo-filisaci filtrátu se získá. 57,23 g (98 % teorie) amorfní pevné látky.

Obsah vody : 11,3% 51

Elementární analysa (vztaženo na bezvodou látku) vypočteno: C 35,59 H 5,27 Gd 27,41 N 12,21 zjištěno: C 35,32 H 5,38 Gd 27,20 N 12,31 ·» d) Gadoliniový komplex 10-[7-(4-nitrofenyl)-2-hydroxy-5--oxo-7-(karboxymethyl)-4-aza-héptyl]-1,4,7-trís(kar-boxymethyl)-1,4,7,10-tetraazacyklododekanu

Ke 20 g (34,86 mmol) sloučeniny z příkladu 2c) ve 200 ml· dimethylformamidu a . 20 ml triethylaminu.se přidá 9,84 g (41,8'mmol) anhydridu kyseliny 3-(4-nitrofenyl)--glutarové (Journal of Org. Chem., Vol, 26, 3856-(1961)) a reakční směs se míchá přes noc při teplotě místnosti. Po- r tom se odpaří vew vakuu do sucha a získaný zbytek se pře-krystalisuje ze směsi isopropylalkoholu a kyseliny octové ^ (95 : 5) . , Výtěžek : 27,46 g. (94 % teorie) žlutavé pevné látky obsah vody : 3,4 % .

‘W I j-V

Elementární analysa (vztaženo na bezvodou látku). *. vypočteno: C 41,58 H 4,86 Gd 19,44 N 10,39 zjištěno: C 41,38 H 4,97 Gd 19,28 N 10,17. e) Gadoliniový komplex 10-[7-(aminofenyl)-2-hydroxy-5--oxo-7-(karboxymethyl)-4-aza-heptyl]-1,4,7-tris(karboxymethyl) -1 ,4,7-tetraazacyklododekanu 25 g (30,9 mmol) sloučeniny z příkladu 2d) se rozpustí ve 250 ml methylalkoholu a přidá se 5 g palladiového katalysátoru (10 % pd na C). Směs se hydrogenuje přes noc pří teplotě místnosti, načež se katalysátor odfiltruje

'1 '·!?. - 52 - o % * * /a filtrát se ve-vakuu odpařím do sucha. ,, „·. "Výtěžek : 24,07 g, (97 % teorie)" krémově zbarvené pevné látky, . *l 7V : . ‘ . . • obsah vody": 3,0 % ". *' “ ' '/* ' “ í

Elementární analysa (.vztaženo na bezvoďou ‘látku) l' ·*'*.· t .= ' -t ,, . . . y. ^ · - - λ -* .· - — " J '.f* ' * "1 .'* » · ·> „ r* < * . : :* ^ . · - - - * j: · ·- * , -H .·· - .. .. ’ vypočteno^ ’ 'C43Í18“ Hv5,31 ,Gd 20,19. N 10,79 zjištěno^ C 43i;27 ' H-5,48 Gd 20,02 N 10,61 ' ·. *' ,i . ,* í ? , . . i. .·. * ‘ ,\»r f) Gonadoliniový-komplex-10-[7-(4-isothiokyánátofeňyl)- , > i * , v -.. ^^.-,2-hydroxy:-'5-oxo- 7í?(karboxymethy.l)'-4v=aza-heptyl·] - r. . Λ : · , ·> . , , · . . .-« --—^' -1,4,7, lO-tetraazacyklododekanu^^——- 1-r V - ·' .... ;> *’ í." = . -¾. 15’fg (19,26. mmol) sloučeniny. z příkladu , >2e), se rozpustí /.ve 100 ml vodý :a ;přidá se, 6,6’4 (57^8 mnidl)/- thiofosgenu v 50 ml chloroformu. . Reakční.smés se.míchá ρο_ —dobu^jedné^hodíny^přir-tepitotě-—50-°G^—načež^se-och3:aďSrTiaT7— teplotu místnosti, organická fáze se oddělí a vodná fáze se vytřepe dvakrát vždy 100 ml chloroformu. Vodná fáze se potom odpaří: do sucha a. získaný .zbytek se při teplotě místnosti . rozmíchá se 100 ml isopropylalkoholu. Pevná látka se odfiltruje a promyje se-diethýletherem. Po sušení přes noc ve vakuu při teplotě 40 °C se získá 15,9 g (98 % teorie) krémově zbarvené pevné látky.

Obsah vody : 3., 5 % .

Elementární analysa (vztaženo na bezvodou látku) vypočteno: C 42,43 H 4,79 Gd 19,15 N 10.24...S 3,91 zjištěno: C 41,38 H 4,97 Gd 19,28 N 10,17 S 3,96. 53 g) Thiomočovinový konjugát z gadoliniového komplexu 10-[7-(4-isothiokyanátofenyl)-2-hydroxy-5-oxo-7-(kar-boxymethyl)-4-aza-heptyl]-1,4,7-tris(karboxymethyl)--1,4,7,10-tetraazacyklododekanu s triamidem kyseliny 24-amin-N,N,N’,N’, Ν’’ ,N’’-hexakis[2-(trilysyl-amino)--ethyl]-trimesinové , 1,20 g (0,2 mmol) 24-benzyloxykarbonylaminu z příkladu ld) se rozpustí v ledové kyselině octové a za míchání se smísí se 33% bromovodíkem v ledové kyselině octové. Po 3 hodinách se pomocí diethvletheru^dokončí počínající srážení a vzniklý 24-amin-hydrobromid se promyje di-ethyltherem a vysuší se ve vakuu. Získaný zbytk se potom vyjme do vody a přídavkem 1 N., hydroxidu sodného s zalkalisuj na pH 9,5 . Do tohoto roztoku se po částech přidá 6,08 g (7,2 mmol) isothibkyanátu, popsaného v.předchozím;příklade 2f) , v pvné formě, přiČmž se hodnota pH udržuje konstantní dalším přídavkem hydroxidu sodného na 9,5 . Po ukončení přídavku s rakční směs míchá přes noc při teplotě místnosti á nakonc se znutralisuje zřděnou kyselinou chlorovodíkovou. Získaný roztok s.podrobí ultrafiltraci (Amicon YM3) a retentát se lyofilisuje. Výtěžek : 4,16 g (83 % teorie), obsah vody (Karl Fischer) : 8,2 % , , stanovení Gd (AAS) : 14,7 % .

Elementární analysa (vztaženo na bezvodou látku) vypočteno:C 43,08 H 5,11 Gd 16,41 N 11,51 Na 2,40 S 3,35 zjištěno: C 43,47 H 5,32 Gd 16,19 N 11,23 Na 2,04 S 3,07.

Analogickým způsobm se získá s N-mthyl-D-glukaminm . .:1 '* - 54 - namísto hydroxidu sodnéhu N-methy.Í-D-.glukaminová sůl .; • l· Λι*>· '· ··>.. — .á T. .· ··.*»· * r*L ·'$„' iz,· -· η 4 ·. · **’· £ ’ «!( * v V'·* \.r ' ‘1 * ^ . i s*-. * - * p

Elementární analysaT(vztaženo na bezvodou látku) Jťyp.ojčxe.n.oj„CM.3_„9_l„_H_5^.9.3_ad_.13.t.8.9__řL_1.0„f.9„8__S^.2.,.83,^_________ zjištěno: C 41,38 H.4,97 Gd 19,28 N 10,17 S 2,60‘. . . · ·* · 4*“ ' ,'t > -'V i P ř í k lad a) .. Gadoliniový komplex 10-(8-karboxý-2-hydroxy-5-pxo-4-*. L·;. ^- Saza-7- oxa-okty-l^ -l^v^-1ris (“karbqxyméthy l·) --1%Μι 7,1-0- -tetraazacyklododékanu- 10 g (17,43. iňniol·)· sloučeniny z příkladu , 2c)1 . sé .·. rozpustí" ve ‘ 100 ml" vody a‘přidárše 20 ml t riéthy laminu.: Při teplotě 0 °C se přidá 5.80 g,. (50' minol) ^anhydriid.u. .. . - *, ^ ^ - 1 - - .· ^ f i.. -r ' ^kyeeM^y^di^iy^ol-óvé^a^eakčni^sině-s-ee^iníchá^Tio-ídoburííaHio1-— din při této teplotě. Potom se odpaříPve vakuu do. sucha a získaný zbytek se chromatografuje navsilikagelu · (pohyblivá, fáze : méthy.lalkohol/.amóniak (20% aq.) 2.0 1.) . Produkt ,: obsahuj ící. frakce sě odpaří'1 do, sucha'; získaný .zbytek se. . . T - 5. vyjme dó*100 ml vody *a'hodnota pH tohoto roztoku se nastaví přídávkem kyselého iontoměniče (IR ,120 H+) na 2,46 . Iontoměnič se potom odfiltruje, promyje se dvakrát malým -množstvím v.ody a roztok se odpaří do sucha. Získaný zbytek se krystalisuje ze směsi methylalkoholu aVacetonu. Po usušení ve vakuu (125 ?C , přes noc) se získá 7,57 g (63i % teorie) bezbarvé krystalické pevné látky.

Obsah vody :3,19¾. 56

Retentát se, pokud je to zapotřebí, upraví na hodnotu pH 7, podrobí se membránové filtraci a konečně se lyofilisuje. Výtěžek : 3,62 g (88 % teorie), obsah vody (Karl Fischer) : 8,1 %, í;. stanovení Gd (AAS) : 18,7 % .

Elementární analysa (vztaženo na bežvodou látku) vypočteno: C 40,24 H 5 46 Gd 19,97 N 12,23 zjištěno: C 40,07 H 5,63 Gd 20,20 N 12,17’ Příklad4 * a) N,N,N-tris[2-Na^^a,NePs^^on-dibenzoyloxykarbonyl--lysylamino)-ethyl]amin í 1,46 g (10 mmol) tris(2-aminoethyl)aminu a 2157.4 g (40 mmol) Na^^a,NePs^^on-dibenzoyloxykar.bonyl,-lysin-p-nit-rofenylesteru se rozpustí v dimethylformamidu a přes noc se míchá pří teplotě místnosti. Po ukončení reakce se reakční,, směs ve vakuu odpaří, získaný zbytek se rozmíchá v diethyl-etherii, vytvořená sraženina se odsaje a krystalisuje se z ethylesteru kyseliny octové. Výtěžek : 12,55 g (94 % teorie).

Elementární analysa t. vypočteno: C 64,75 H 6,79 N 10,49 zjištěno: C 64,48 H 6,88 N.10,26 . b) Plně chráněný benzyloxykarbonyl-24-polyamin na basi. N,N,N-tris[2 - (Na^a,NePs^on-bis{trilysyl}-lysylami.- , -L - " Elementární analysa (vztaženo na bežvodóu látku) , ‘ f . ►.·', ' ť - . . * * ►' : f -v* * '!' Ϊ ' ‘ t V Jk ... Í..,. ; ř . · · i vypočteno: C 36,57 . . H 4,97 * Gd 22,80 N 10,15 f.. ‘ · - . . t * . ·£ r * 4 zjištěno: * C -36,43 =H 5,06 ^Gd 22,70; N.10,01. -V- . - -V - .v- ..:-¾.. " - t. - . ~ :7 ^ 7 1——'~—·1., .·"«———------- - v” b) > 24-amid-konjugát z gadoliniového komplexu 10-[8-kar- ·.<·,·. i, /f' ^ £ A' φ - .« i ! V ’ * ... ' ' boxry-2-hydroxý-5-óxo-4-áza-7-oxlioktýl]-i ;4 „7-tris- , ^ V ' 77:; '. " “.*.·· -- ,,·► -·.· -f · <- · > ·- - ( ’ (karboxymethyl).-1,4 7,10-teťráazacyklododekanu s tria- midem kyseliny424-amin-N,N,N’,Ν’,Ν’Ν’’-hexakis[2-

. % »' v ' «, ' ·+ , ’ .7, - (trilýsyl-amino.)'-ethyl]-triméšinové"· , ť ♦ . • \ *" _ ' *. a ; ;1-r.20^gT-..(-0-,-2^|nmpl-):- - 24„r7benzyloxyká^bonyláminu, - - - ’ ·.'*'* 1 . 1 , ^ ρΓ. ·' ‘ « ‘ ť.. ^ , ·. ^ ^ ·Γ ; - _—popsaného v ..příkladě’vLld-).^,—se rozpustí v ledové—kyselině-o.čt.oy.éLa .za jníchání. s,eT smísí ..sé.^.33.%" bř.om o vodíkem v+ledové ‘' - ··: · 7.* i· u ' · v · "·. ' · ·;» · . i' kyselině octové: Po ' 3 hodinách ,se počínající - srážení do-' ! končíř pomočí diethyletheru, . vzniklým ;24“amÍn-hydrobr6mid se ^ promyje diethyletherem, ve vakuu se usuší av.bez dalšího ^ -čištění—se-po.užij;e^y^dálé—popisované—ré.ákei—. . . .-^ Výtěžek ; 0,95 g (kvantitativní). 4,14 g (6 mmol) komplexní kyseliny,,, popsané v přÍT klade 3a) , 0,96 g ř(6 mmol) . 1-hydroxybenzotriazolu (HOBt) a 1 ,'92 g (6 mmol) (lH-benzotriažol-l-yl)-1‘, 1, 3,3-tetramethyl-uronium tetřafluorborátu (TBTU; Peboc Limited, UK) se rozpustiv dimethylformamidu a reakční směs se míchá po dobu 15 minut. Tento roztok se potom smísí se 4,13 ml (24 mmol) N-ethyldiisopropylaminu a s 0,95 g (0,2 mmol) výše popsaného 24-amin-hydrobromidu a reakční směs se nechá míchat přes noc při teplotě místnosti. Po ukončení reakce se přidá 0,23 g (2 mmol) anhydridu kyseliny diglykolové a míchá se ještě.po dobu jedné hodiny. Potom se 'směs ve vakuu odpaří, získaný zbytek se vyjme do vody a čistí se přes ultrafiltrační membránu AMIC0N YM1Ó -. 57 no)-ethyl]aminu 1,33 g (1 mmol) hexa-benzyloxykarbonylaminu, popsaného v příkladě 4a) , se rozpustí v ledové kyselině octové a za míchání se smísí se 33% bromovodíkem v ledové kyselině octové. Po 60 minutách se počínající srážení dokončí pomocí diethyletheru, vzniklý hexylamin-hydrobromid se promy-je diethyletherem, ve vakuu se vysuší a bez dalšího čištění se použije při další reakci. Výtěžek : 1,02 g (kvantitativní). 7,0 g (7,5 mmol) Nalfa,NePsiÍ°n-bis(N,N’-dibenzyl-oxykarbonyl-lkysyl)-lysinu (chráněný "tri-lysin") se analogicky jako v příkladě ld) aktivuje pomocí TBTU a hydro-xybenzotríazolem a analogicky se nechá reagovat s 1,02 g vi (l mmol) výše popsaného N,N,N-tris[2-(lysylamino)ethyl]-amin-hexahydrobromidu a 5,16 ml (30 mmol) N-ethyldiiso-propylaminu a zpracuje se stejným způsobem, jako je tam popsáno. Výtěžek : 4,42 g (73 % teorie). * •f

Elementární analysa (vztaženo na bezvodou látku) vypočteno: C 64,25 H 6,89 N 10,64 zjištěno: C 64,06 ' H 7,04 N 10,69 . c) 24-Gadolinium-DTPA-monoamid na basi 24-aminu N,N,N-tris[2-(Na^^a,NePs^^on,bis(trilysyl>-lysylamino) -ethyl]amin 1,21 g (0,2 mmol) 24-benzyloxykarbonylaminu, popsaného v příkladě 4b) , se rozpustí v ledové kyselině octové a za míchání se smísí se 33% bromovodíkem v ledové kyselině - 58 -. •» r -í. ř A.. f. » -jL· r 4 ... p . í • k '' ... ... . r · . ’ . , octové. Po 3 hodiních se počínající .srážení dokončí pomocí Í . " 1 1 2 diethyletheru, vzniklý 24-amin-hydřobromid se promyje Γ . ·» ' diethyletherem a vek vakuu se vysuší. Získaný ..zbytek se 4 T Sř .. ' podle předl i su‘y uvedeného v,;příkladě le)M , ácyluje 1 5,8 .g _(14.4 mmol)_kyseliny N - (2.6-dioxomorfolinoethy1 ) -NV- (st- hoxykarbonylmethyl)-3,6-diazaoktandikarboxylové a.komplexu- ' 4· í f,· 1 ‘ 1 -i ... - . s2 1 , " 1 , 3 v je šě2,61 g (7,2 mmol) Οϋ2θ^ ... Získá se takto 3,30 g 4- (92 % teorie) bezbarvého lyofiíisátu. , ' . t J · * ' Obsah vody (Karl Fischer) : 10,3 % r ,) ' ' ' ť r stanovení Gd. (AAS) : 20,72.%.;.. k - Elemen-tární- anal-ysa" (-vztaženo na bezvodou d:átku); r i.

1 j/y.počteno-:-C 34,9,7 -H-. 4-, 25- Gd 23-,-48 ’-Na--3.,43 -N -1-0-,-28- ^ - 24· i a , . , "zjištěno: C 34,69 H 4,31- Gd 23.,20.. Na 2 3,05 N 10,37 .. 2- ~ * · 2 - - T , ' 2·.'" ^ " " » 2 - : · i2 + ·2·''"· ' f 3 ^Analogickým způsobem, se získá. za „použití. . Dy^Os __ —d-yspros-i-o v-ý-^komp2—-——-·: —-

Elementární analysa (vztaženo na bezvodou látku) vypočteno: C 34,70 H £,.22 'Dy 24,07, Na 3,4Γ ,N 10,'20 zjištěno: C 34,50 H 4,42 Dy 23,81 Na 3,02 N 10,06 Příklad 5 a) 24-thiomočovinový konjugát z gadoliniového komplexu £ 10- [7- (4-isothiokyanátofeiiyl) -2-hydroxy-5-Oxo-7- (kar-boxymethyl)-4-aza-heptyl]-1,4,7-tris(karboxymethyl)--1,4,7,10-tetraazacyklododekanu ze 24-aminu, konden-sovaného z N,N,N-tris[2-(lysylamino)-ethyl]aminu s j^alfa Nepsilon_^£s^ySy^j lysinu ("tri-lysin") ? 59 1.21 g (0,2 mraol) 24-benzyloxykarbonylaminu, popsa ného v příkladě ld), se rozpustí v ledové kyselině octové a za míchání sě smísí se 33% bromovodíkem v ledové kyselině octové. Po 3 hodinách se počínající srážení dokončí pomocí diethyletheru, vzniklý 24-amin-hydrobromid se promyje diethyletherem a ve vakuu se vysuší. Získaný zbytek se potom vyjme do vody a podle předpisu, uvedeného v příkladě 2g) se při pH 9,5 nechá reagovat se 6,08 g (7,2 mmol) gadoliniového komplexu 10-[7-(4-isothiokyanátofenyl)-2--hydroxy-5-oxo-7- (karboxymethyl) -4-azaheptyll -1.4.7-: tris7 (karboxymethyl)-1,4,7,10-tetraazacyklododekanu a reakční směs se po ultrafiltraci lyofilisuje. . . Výtěžek : 4,31 g (87 % teorie), obsah vody (Karl Fischer) : 6,9 %, stanovení gadolinia (AAS) : '15,0 % .

Elementární analysa, (vztaženo na bezvodou látku) vypočteno:C 43,11 H 5,16 Gd 16,36 N 11,54 Na 2,39 S 3,34 zjištěno: C 42,89 H 5,35 Gd 16,09 N 11,67 Na 2,18 S 3,23 . Příklad 6 a) 24-amidový konjugát z gadoliniového komplexů 10-[8-karboxy-2-hydroxy-5-oxo-7-oxaoktyl]-1,4,7-tris^ (karboxymethyl)-1,4,7,10-tetraazácyklododekanu se 24-aminem, kondensovaným z N,N,N-tris[2-(lysylamino)--ethyllaminu s Na^a,NePs^-I-on-bis(lysyl)lysinem ("tri-lysin") 1.21 g (0,2 mmol) 24-benžyloxykarbonylaminu, popsa- v*i - 60 -, ného,V' příkladě \ 4b) , se rozpustí v ledové kyselině octové ť j ' ( f h a zá míchání se’smísí-se 33% bromovodíkem,v· ledové kyselině octové. - Po 60 minutách· se póčínající srážení dokončí po-. mocíTdiethyletheru, vzniklý 24-amin-hýdrobromid sé promyje.: ťdiethvletherem. ve vakuu sé1 vysuší a bez da 1 šíhoJeiš.tění_se použije při'další reakci. . ' V' , ’ . . · , .. * - 1 2 V ·>·, =·2 ··2<··». Výtěžek : 0,96 g (kvantitativní). .. „ ^ ** 4,14 g (6 mmiblj kyseliny na. basi komplexu gadolinia, popsánéfv,příkladě.2 3a) ,,^ se analogicky jako^v příkladě . V . JP· 2 2 2. 3b)ť aktivuje pomocí TBTU a hydroxybenzotriazolu v diméthyl-tf ormami-du^a-ana-lpg-ieky^se-Lnechá reagovat^s výše -popsaným - . ·, .? 2'':· , 2 ‘ V. ’ '- J . ’· -24-amin-hydrobromidem—zapřídávku baše a-zpracuj e se—analo— gický.m .způsobem- , .., Výtěžek : 3,83 g> (92 % teorie), obsah vody - (Karl -Fischer) : 8,82%, stanovení Gd (AAS) j__18 ,.5__%.

£.

a 1

Elementární analysa (vztaženo na bezvodou látku) vypočteno: C 40,29 H 5,52 Gd 19,90 N 12,26 zjištěno:': C 39,97 . H 5,71 Gd 19,55 N 12,21 . 2 y 2 "s , - éí t P ř í k 1 a d 7 2 2 a) N,N’ -ibis(benzyloxykarbonyl).^3-(karboxýmethoxyacetyl)--3-azapentan-l,5-diamin , 1 2 37,14 g (100 mmol) bis(benzyloxykarbonyl-aminoet-hyl)aminu , popsaného v příkladě la) , se rozpustí v di--methylformamidu, na ledové lázni se smísí se 17,4 g (150 mmol) anhydridu kyseliny diglykolové (Janssen Chimica) 61 21 ml (150 mmol) triethylaminu a potom sé reakční směs míchá přes noc při teplotě místnosti. Získaný roztok se ve vakuu odpaří, zbytek se vyjme do ethylesteru kyseliny octové a vytřepe se zředěnou kyselinou chlorovodíkovou. Organická fáze se oddělí, vysuší se pomocí bezvodého síranu sodného a po odfiltrování síranu se nechá vykrystalisovat přídavkem hexanu. * Výtěžek : 41,4 g (85 % teorie).

Elementární analysa vypočteno: C 59,13 zjištěno: C 58,99 Ή 6,00. N 8,62 H 5,93 * N 8,70 . b) Ν,Ν’ ,Ν’ ’,Ν’ ’’-tetrakis{8-(benzyloxykarbonylamino)-6,- , - [ 2- (benzyloXykarbonylamino-ethyl) ] -5-oxo-3-oxaokta- , noyl}-cyklen 345 mg (2 mmol) 1,4,7,10-tetraazacyklododekanu (Cyclen; Fluka) se azeotropicky odvodní s* toluenem. K ochlazenému roztoku cyklenu v toluenu se při teplotě míst- . nosti přidá roztok 4,88 g (10 mmol) N,N’-bis(benzyloxy- ^ karbohyl)-3-[karboxymethoxyacetyl]-3-azapentan-l,5-diaminu (příklad 7a)) v tetrahydrofuranu, jakož i 2,47 g (10 » mmol) 2-ethoxy-l-ethoxykarbonyl-l,2-dihydrochinolinu (EEDQ; Fluka) a reakční směs se míchá přes noc. Po ukončení reakce se produkt vysráží přídavkem hexanu, oddekantuje se od rozpouštědla a ještě jednou se vysráží ze směsi tetrahydrof uran/hexan a potom tetrahydrofuran/toluen. Po vysušení ve vakuu se získá 2,78 g (68 % teorie) světle žluté pevné látky.

- V 62

Elementární analysa C 60,93 H 1 26,29 N 10,93 C 60,68 ' H 6,40 N 10,97 . ____ I ř··· # τ vypočteno: 'zjištěno; c) „ » 1 Úplně chráněný beňzyloxykarbonyí-32-pplyaniin na basi- · ^ 4» _ . f 1 _ · 32^aminu, kondensóváného Z N,N’ ,N" ’ ,N2 ’ tetrakis- . -řf' if· .> &— ... _ 2 ^ ^ { (8-benžylox.ykaj: bony lamino) -..6- [ 2- (behzyloxykarbónyl-amind) -ethyl ],-5-o'xo-3-oxabktanoyl] -cyklenu a Na 1 fa(NePsi 1on 1 bis (iysy1).τ1ys i nu ( ” tri7lysin‘') .. -2,05 vg—(.l..:niraol) ^okta-.benzy-loxykarbonylaminu, ^pppsa- _ —ného_v_pří k ladě^7b ) ,^se-rbzpustí—v— ledové—kyše li ně-oc-tové_ a ža „mleháníl.sé smísí -se; 3.3.% br.omov.odí kem. v.„ledoy.éi/ky.selině. '/V·.· ' ’ ’ .' " ' ' · ·. . octové. Po 60 minutách se. počínající . srážení,-dokončí . po-. . ^ - -Afi- - - 1 r i ' „ .moci dietriylether.u, vzniklý oktaTamin-hydróbromid se" promyjel dieťhyletheřem, ve vakuu se -vysuší _a bez dalšího čištění se <- -,p_oužij;ě—při—další^rěakčl........—. ...—... ·. . I.·.....·... —_ .2 .. ^— Výtěžek : 0,96 g : (kvantitativní). 9,4 g (10 mmol) chráněného, “tri-lysinu", popsaného v příkladě 'lc) , 1,5'g (10 mmol) l-hydroxybenzotriazolu 2 2 2 a 2 3,2 g (10 mmol) -2-(2lH-benzo,tr-iazo.l;-l-.yl) -1,1,3,3-te-třamethyluronium-tetraflporborátu (TBTU; Pebdc Limited, UK) se rozpustí v diměthylformamidu a míchá se po dobu 15 minut.' tento roztok se potom smísí s 5216 ml (30 mmol) 2 N-ethyldiisopropylaminu-á .1.,6 g (1 mmol) výše popsaného, okta-amin-hydrobromidu a reakční směs se míchá přes noc při teplotě místnosti. Po ukončení reakce se směs ve vakuu odpaří a získaný zbytek se chromatografuje na silikagelu za použití směsi dichlormethanu a methylalkoholu (10 : 1) . Výtěžek : 6,0 g (72 % teorie). 63

Elementární analysa vypočteno: C 63,32 H 6,76 N 10,74 zjištěno: C 62,98 H 6,91 N 10,43 , Příklad 8 a) 32-thiomočovinový konjugát Z gadoliniového komplexu 10-[7-(4-isokyanátofenyÍ)-2-hydroxy-5-oxo-7-(karboxy-... methyl) -4-aza-heptyl ]-1,4,,7-tris(karboxymethyl) -1,4, 7,10-tetraazacyklododekanu s deblokovaným 32^-aminem z příkladu 7c) , 1,67 g (0,2 mmol) 32-benzyloxykarbonylaminu, popša-něho v příkladě 7c) , se rozpustí v ledové kyselině octové -a za míchání se smísí se 33% bromovodíkem v ledové kyselině, octové. Po 3 hodinách se počínající srážení dokončí pomocí diethyletheru, vzniklý 32-amin-hydrobromid se promyje diethyletherem a vé vakuu se vysuší. Získaný zbytek se potom vyjme do vody a přídavkem 1 N* hydroxidu sodného se hodnota pH nastaví na 9,5 . Do toho- ' v to roztoku se potom po částech přidá 8,1 g (9,6 mmol) J l isothiokyanátu, popsaného v příkladě 2f) , v pevné formě,, přičemž hodnota pH se udržuje konstantní dalším přídavkem hydroxidu sodného na 9;5 . Po ukončení přídavku se reak-ční směs míchá přes noc při teplotě místnosti a potom se neutralisuje zředěnou kyselinou chlorovodíkovou. Získaný_ roztok se podrobí ultrafiltraci (Amicon YM3) a retentát se lyofilisuje. Výtěžek : 5,8 g (85 % teorie), obsah vody (Karl Fischer) : 9,1 %, k J - 64 - -i :l-. * -w ^''íl.K1 ^ l· u·»·-!, ,'-jáí ·Γ ‘·ν^' -* · -»W ''í-.J"'·- ;<· ' 1 ^ ' f *-7T- Η'·..- -ίμτ· > . ,-pi +i„ Fi -.i - , V I . ř . ’ stanovení - Gd.(AAS) : 15,2 , ,, i r : : - -; ;. ,J·*·-· „ ", · *' - '"«í

Elementární analysa (vztaženo na bezvodou látku) . ' = 1 ' r· ιί “ t " * - - rt ** í *- * j»* -*· i« ^ · - « ·* . ·.·». κ· vypočteno: C 43,05 H.5,15 Gd 16,22 N ll,56 Na 2,37 S 3,31 zjištěno: C 42,84 H 5,36 Gd '16,00 N 11,84 Na 2,10 S .2,97 f r, >.'5 1 τ ' '-l^ a) 1, ll-bis(benzyloxykarbonylamino.) -3,9-bis[2- (benzylr > , t · ·' ’ ;r: ’ ' . * x.y.k arbony 1 amino)ethyl 1-4,8-dioxo-6- (4-ni t toféijjy 1 V7 1-3,9-diážaundekan , · ' , T , .*. ' \ V " ' ··. /y f f· · * „ w*t .·**,·.τ - - *Ρ·- * -í 1. **' ' 1 1 > · :T . ‘ *r . , · ·. *. 6,33 g, (25 mmol) kyseliny 3-(4^nitřófenyl)-glutaro-vé -vCJAOrg. Chem. 26, 3856 (1961)) , 6,33/ g (55. mmpl.) N-hydroxysukcinimidu a ,20,43 g (55 mmol) bis(benzyloxy-_karboriy l -aminoethvl laminu ^ popsaného v přikkadě la) , He ” rozpustí v dimethylformamidu a po přídavku 11,35 g (551 mmol) dicyklohexylkarbodiimidu se reakční směs míchá po dobu 3 dnů při teplotě místnosti. Potom se odfiltruje dicyklohexylmočovina, filtrát se ve vakuu.odpaří do sucha a,získaný zbytek se ehrpmatografíčky čistí na .silikagelu,za’ použití éthylesteru kyseliny octové jako pohyblivé fáze. Výtěžek ,:',17,3 g (72 % teorie). Λ

Elementární análysa ;vypočteno: zjištěno: C 63,81 H 5,98 N 10,21 C 63,94 H 5,77 N 10,26 . b) 1, ll-bis(benzyloxykarbonylamino)-3,9-bis[2-(benzyl-oxykarbonylaroino)ethyl]-4,8-dioxo-6-(4-aminofenyl) - 65 ·?Η '·· . -3,9-diazaundekan 15.57 g (56 mmol) heptahydrátu síranu železnatého se rozpustí ve vodě, smísí se se 7,68 g (8 mmol) nitroslou-čeniny. popsané v příkladě 9a) ve stejném objemu ethylalkoholu a tato směs se zahřívá k varu. Při této teplotě se pomalu přikape 24 ml koncentrovaného amoniaku, přičemž se vytvoří černá sraženina. Suspense se nechá za míchání pomalu ochladit, potom se přefiltruje, sraženina se promyje ethylesterem kyseliny octové a spojené<filtráty se,ve vakuu odpaří.do sucha. Získaný zbytek se chromatografuje na si-likagelu za použití směsi ethylesteru kyseliny octové a ethylalkoholu (98 : 2) . , ' y ' Výtěžek : 4,84 g (65 % teorie).

Elementární analysa vypočteno: C 65,86 H 6,39 N 10,54 zjištěno: *' C 65,68 H 6,31 N 10.62 . . f c) N,N’,N’’,N’’’-cyklen-tetra-ureidový konjugát z 1,4,7,10-tetraazacyklododekanu s 1,ll-bis(benzyloxy-karbohylamino)-3,9-bis[2-'(benzyloxykarbonylamino)ethyl ]-4,8-dioxo-6-(4-isokyanátofenyl)-3,9-diazaundeka-nem 4,65 g (5 mmol) fenylaminu, popsaného v příkladě 9b) , se rozpustí v toluenu, pro odvodnění se dvakrát odpaří do sucha a vždy se opět vyjme do čerstvého toluenu. Tímto způsobem vysušený roztok aminu v toluenu se při teplotě 10 °C smísí s 0,54 g (1,8 mmol) thiofosgenu a míchá se po dobu jedné hodiny při teplotě 10 °C a přes noc při teplotě místnosti. K této šuspensi se přidá 0,17 g (1 mmol) - 66 - 'V*. ‘'Τ';·;

I bezvodého 1,4.7,lO-tetraazacyklpdodekanu; .(cyclen)(Áldrich) ' { ^ ·* ’ > , t , 4 . " ve směsi toluenu a pyridinu (10 : 1) a reakčni směs se i r % nechá míchat přes noc při teplotě místnosti. „ Potom se ve i . , 't 'i . . ' . · · * · } · ϊ vakuu" odpaří do "sucha a-získaný zbytek-v*ethylesteru kyše-,· 1líny octové se chromatogřafuje na silikagelu. Výtěžek : 3,55 g (89 % teorie). • ·, - * ' r % - ·—· ·- * - '* : v -- . *· ' ’ ··* · .

Elementární analysa ’ . * * > vypočteno: zjištěno: C 64,98- * H 6,16 - N 11,23 C 64,70 H *6,29 N 11,04 d)_Nr.N-bis[2- (benzyloxykárbónyláminoY-ethyl] -glycih- r... ι-terč, -butylester v < 'V >í»·. 18,6 g .(50 mmol) - bis[2-(benzylOxykarbonylamiho) ret-r| hyíl^aminu, popsaného v příkladě la) , ve směsi tetrahydro-furanu a vody, /25 : 1-) . se smísí se 4.2 g (30 mmólls.. uhličitanu draselného, při teplotě místnosti se k tétog^v suspensi přikape 11,7 g (60 mmol) terč.-butyl-bromacetátu a reakčni směs se-míchá při této. teplotě přes noc. Potom ,-.se. odfiltrují nerozpustné součástí, filtrát se odpaří :do sucha . a phromatografuje se na-silikagelu za použití směsi diet-hyletheru a di.isopropyletheru (1 : 1). Výtěžek : 20,4 g (84 % teorie)

Elementární analysa vypočteno: zj ištěno: C 64,31 C 64,35 H 7,26 H 7,00 N 8,65 N 8,58 67 e) N,N-bis[2-(benzyloxykarbonylamino)-ethylJ-glycín 19,4 g (40 mmol) terč.-butylesteru, popsaného v pří kládě 9d) , se smísí se 150 ml kyseliny trifluoroctové a roztok se míchá po dobu 20 minut při teplotě místnosti. Potom se produkt vysráží přídavkem diethyletheru a ještě jednou se rozmíchá s diethyletherem a konečně s vodou. Sra ženina se odfiltruje a vysuší. Výtěžek : 13,4 g (78 % teorie).

Elementární analysa vypočteno: C 61,52. H 6,34 N 9,79 zjištěno: C 61,64 H 6,20 N 9,94 f) Úplně chráněný benzyloxykarboňyl-32-polyamin z N,N’,N’’,N’’’-cyklen-tetra-ureido-konjugátu, konden-sovaného s N,N-bis[2-(benzyůloxykarbonylamino)-ethyl] glycinem, z příkladu 9c) f 3,99 g (1 mmol) hexadeka-benzyloxykarbonylaminu, po psaného v příkladě 9c) , se rozpustí v ledové kyselině octové a za míchání se smísí se 33% bromovodíkem v ledové kyselině octové. Po 90 minutách se počínající srážení dokončí pomocí diethyletheru, vzniklý hexadeka-amin-hydrobro-mid se promyje diethyletherem, ve vakuu se vysuší a bez dalšího čištění se použije při další reakci. Výtěžek : 3,2 g (kvantitativní). 8,6 g (20 mmol) N,N-bis[2-(benzyloxykarbonylamino)--ethyl]-glycinú , popsaného v příkladě 9e) , 3,2 g (20 mmolj” 1-hydrbxy'benzotriazolu a 6,4 g (20 mmol) -2-(1H--benzotriazol-l-yl)-1,1,3,3-te- tramethyluronium-tetra- 6a:- .....\-+r4f-C- : , . -t . 7. Z 4 ·*·,.· , . . :f.liiorborátu (TBTU; Peboc Limited, UK), se ^ rozpustí! v'di- , \methylformamidu a míchá se pó dobu 15 minut. Tento roztok ·'">' -1 se potom smísí se 13,76 ml (80 mmol) N-ethyldiisopro-pylaminu a 3,2‘g (1 mmol) ^výše <popsaného hexadekaT.amin--hydrobromidu a reakční směs se míchá přes^ noc při teplotě "místnosti.! Po ukončení reakce se směs ve vakuu,odpaří . 4 f ' *·** , * . . 1 " j. 'a získaný*zbytek ,se chromatografuje«narsilikagelu za použiti -i směsi dichlormethanU a methylalkoholu(9 ' : 1). * , Výtěžek : 7,3 g (87 % teorie) . - : „ ! í*.

Elementární andlySa vypočteno: C 62;69 H6,55 7 vN 13,29 zjísteno: C 62,37 H 6;72 N-13,38,. g) . 32-gadolinium-DTPA-monoamid .na -basi . deblokóvanéhb v “ * '. y *; 32-aminu z puříkladu 9f) r 1,69 g (0,2 mmol) poly-benzyloxykarbonylaminu, po-psaného v příkladě 9f) , se rozpustí v ledové kyselině octové a za míchání se smísí se 33% bromovodíkem y ledové kyselině octové. Po 3 hodinách se počínající srážení^dokončí- pomocí diethyletheru, vzniklý 32-amin-hydrobromid se ΐ ’ř 1 r , promyje diethyletherem a ve vakuu se vysuší. Získaný zbytek se potom vyjme do vody a přídavkem 1 N hydroxidu sodného se hodnota pH upraví na 9,5 . Do tohoto roztoku se potom v prvné formě přidá 7,3 g (19,2 mmol) kyseliny N -(2,6-di-oxomórfolinoethyl)-N^-(ethoxykarbonylmethyl)-3,6-diazaoktan-dikarboxylové (příklad 13a) z EP 0 331 616) , přičemž se hodnota pH udržuje konstantní dalším přídavkem hydroxidu sodného na 9,5 . Po ukončení přídavku se pro zmýdelnění ‘DTPA-ethyiestertr nastaví hodnota pH pomocí 5 N hydroxidu. ...... sodného na > 13 a reakční směs se nechá míchat přes noc při 69 teplotě místnosti. Potom se hodnota pH upraví pomocí koncentrované kyseliny chlorovodíkové na 5 , přidá se 3,48 g (9,6 mmoí) ^2()3 , míchá se po dobu 30 minut při tepíoté 80 °C , po ochla2eni se hodnota pH upraví an 7 a odsolí se za použití ultrafiltrační membrány YM3 AMICON . Retentát se konečně podrobí membránové filtraci a lyofilisaci. Výtěžek : 4,29 g (91 % teorie), obsah vody (Karl Fischer) : 9,1 %, stanovení Gd (AAS) : 22,7 % .

Elementární analysa (vztaženo na bezvodou látku) vypočteno:C 35,41 H 4,31 Gd 23,48 N 11,50 Na 1,72 zjištěno: C 35,39 H 4,20 Gd 23,22 N 11,69 Na 1,59 . Příklad 10 a) 32-Thiomočovinový konjugát z gadoliniového komplexu 10-[7-(4-isothiokyanátofenyl)-2-hydroxy-5-oxo-7-(kar-boxymethyl)-4-aza-heptyÍ]-1,4,7-tris(karboxymethyl) --1,4,7,10-tetraazacyklododekanu s deblokovaným '* „4 32-aminem z příkladu 9f) 1,69 g (0,2mmol) 32-benzyloxykarbonylaminu, popsaného v příkladě 9f) , se rozpustí v ledové kyselině octové a za mícháni se smísí se 33% bromovodíkem v ledové kyselině octové. Po 3 hodinách se počínající srážení dokončí pomocí diethyletheru, vzniklý 32-amin-hydrobromid se promyje diethyletherem a ve vakuu se vysuší. Získaný zbytek se potom vyjme do vody a přídavkem 1 N hydroxidu sodného se hodnota pH upraví ha 9,5 . Do tohoto roztoku se potom v prvné formě přidá 8,1 g (9,6 mmol) isothiokyanátu, - 71). -

••'v*·*...

a V * i - popsaného v příkladě 2-f) . přičemž hodnota pH ^udržuje konstantní dalším přídavkem hydroxidu'sodnéhotna 9,5 . Po ukončení, přídavku se reakční směs se nechá míchat, přes noc při teplotě místnosti ápotom se zneutralisuje pomocí kyse- ' ι'ΐ l-i-ny-rc h-l-or o v od í-kové —-Rozt Ok—se_potom podrobí ultraf iltraci (YM3.AMIC0N) a retentát se konečně lyofi Lisuj .é.,^ ^ ‘ Výtěžek ,: ..5,7 g ,(85,% teorie) ,, ' ( obsah vody (Karl Fischer) : 8,7 %’ * ... stanovení Gd (AAS) : 15,3. % „ /

Elementární analysa ' (vztaženo na bezvodou látku) "ÍT~ vypočteno: C 43t47 , fl-5,10- Gd l6v38 N 12,40 Na 1,20„S^3.34 * zj ištěno :; i" G'4-3\ 25' Ή :S.-,-27- i :Gtí 1-16,11 ' -N. 11 ^.,4-6-^N.a, 1 .3,62 P—ř-í ik._l„a_.d _. J.I.I.. i .' · · - a) N,N’;N'’,N’’’-tetrakis{N,N-bis[2-(benzyloxykarbonyl-amino)-ethyl]-glyčyl}-cyklen 3.45 mg . (2 mmol)/^ .1,4,7,ÍOTtetraazacyklododekanu '' · ·"i y. "v> * * φ · * ·

(Cyčlen; Fluka) se^azeotropicky odvodní pomnocí toluenu. :» K ochlazenému roztoku cyklenu v toluenu* se při teplotě místnosti přidá roztok 4,29 g (10 mmol) N,N-bis[2-(benzyl-oxy-kar-bony-laraino).-giy_cin!u.i popšajiéhov příkladě 9e) ,, v tetrahydrofuranu a “2,47 g (lO^mmol).. 2-ethoxy-l-ethoxy-’ kár.bonyl-1., 2-dihydřochinólinu (ĚEDQ; Fluka) a reakční směs sě míchá pres noc. Získaný roztok se potom ve vakuu odpaří do sucha a zbytek se chromátografuje ha silikagelu.za použití směsi' ethylesteru kyseliny octové a methylalkoholu (10 : 1)'- . - , ... Výtěžek : 2,69 g (74 % teorie). 4 l·* 71

Elementární analysa vypočteno: C 63,42 H 6,65 N 12.33 zjištěno: C 63,17 H 6,80 N 12,28 . b) Úplně chráněný benzyloxykarbonyl-32-polyaniin na basi - tetrakis{N ,N-bis [ 2-(trilysylamino)-- ethyl] -glycyl}-cyklenu i. ii82.g (i mmol). okta-benzyloxykarbonylaminu,._ popsaného v příkladě 11a) , se rozpustí v ledové kyselině octové a za míchání se smísí se 33% bromovodíkem v ledové kyselině octové. Po 90 minutách se počínající srážení dokončí pomocí diethyletheru, vzniklý okta-amin-hydrobxomid se promyje diethyletherem, ve vakuu se vysuší a bez dalšího čištění se použije při další reakci. Výtěžek : 1,39 g ‘(kvantitativní). 9,4 g (10 mmol) "tri-lysinu", popsaného v příkladě le) , 1,5 g (10 mmol). 1-hydroxybenzotriazolU a 3,2 g (20 mmol) 2-(ΙΗ-benzotriazol-1-yl)-1,1,3,3-tetramethyluro-nium-tetrafluorborátu (TBTU; Peboc Limited, UK) se rozpustí v dimethylformamidu a míchá se po dobu 15 minut. Tento roztok se potom smísí s 5,16 ml (30 mmól) N-ethyldiiso-propylaminu a 1,39 g (1 mmol) výše popsaného okta-aroin--hydrobromidu a reakční směs se míchá přes noc při teplotě místnosti. Po ukončení reakce se směs ve vakuu odpaří a získaný zbytek se chromátografuje na silikagelu za použití směsi dichlormethanu a methylalkoholu (10 : 1). Výtěžek : 6,0 g (74 % teorie). - 72' - , V.MÍÍMfrVr- mk>: - · «-á·1 2«li,. 4 ..« ^V·· fc. ' -i i ' ,r-2t'

Elementární analysa ,; vypočteno:i zjištěno: H 6,86 H 7,01 C 63,95 C 64;23 N 11,05: -N 10,92 :

... · „-ÍW 'V i 1 c) .. 32-gadolinium-DTPA^monoamid fia basi deblokováného ’·2 ·.'· ‘ -1- -2·· - »·. 2 í 1- ···" . - .fc2· > ·? ji 'i , > á 32-aminu,z příkladu lib). ,,'ν" ^ B ^ 2r \ / 1,62 g , ("0,2 imnol) polýrbenzyloxykarbony laminu1: po-, * % ^ ‘ i···".··, psaného v příkladě 11b) , se rozpustí v ledové kyselině i ' ’ . octové ,aj ža míchání se smísí" se1 , 33% břomóvodíkem v, ledové . ΐ J|! . ’ •kysel"iněl-oetové-:-^.P-o^2-3^-hodinách se počínající srážení do- » 1 ' ' . 11 ' . · 2-r g . končí' ppmocí—diethyletheru, -ízniklý_32-amin_-hvdrobfoniid se prpmyje -die.thyletherem2 a y.e. vakuu se, vysuší : Získaný zbytek se potom Vyjme do vody a přídavkem < 1 N hydroxidu sodného se ' , ... : Λ- i. 3 ^ ^ hodnota pH upraví na 9,5 . Do tohoto roztoku, se .potom, , v prvně formě přidá 7,7 g (19,2 uimbl) kyseliny N -(2,6- > , <n 2’““”3 ' · ‘ 4 5 '2 ' ' 2 -·. ' “ "9 < 9 · · .|UHW y. » dÍoxomorrf olá-noethy-l.WNS!Lf.e-thoxy.karbon.vlmethy 1) - 3.6- diaza- . oktandikarboxylové, popsané v příkladě 13a) , přičemž se hodnota pH udržuje konstantní dalším přídavkem hydroxidu sodného na 9,5 . Po ukončení přídavku se reakčni směs pro zmýdelnění DTPA-ethylesteru zalkalisuje 5 N hydroxidem sod- 2 · ( " v 3 stanovení Gd (AAS) : 22,1 % . 4 ným na pH <13 a nechá se míchat přes noc»při teplotě místnosti. Potom se okyselí pomocí koncentrované kyseliny chlorovodíkové na pH 5 , smísí se se 3,48 g (9,6 mmol) ^2¾ ®· se po dobu 30 minut.při teplotě 80 °C . 5

Roztok sě potom ochladí podrobí ultrafiltraci (YM3 AMICON) a retentát se konečně filtruje na membráně a lyo'f i lisuje. Výtěžek : 4,0 g (89 % teorie) obsah vody (Karl Fischer) : 4,9 %, 73

Elementární analysa (vztaženo na bezvodou látku) vypočtenorC 35,05 H 4,28 Cd 23,58 N 10,48 Na 3.01 zjištěno: C 34,82 H 4,40 Cd 23,19 N 10,46 Na 2.79 . Příklad 12 a) 32-thioroočovinový konjugát z gadoliniového komplexu 10- [7- (4-isothiokyanátófenyl) -2-hydroxy-5-oxo-7- (kar-boxymethyl)-4-aza-hcptyI] 1,4,7-tris(karboxymethyl) --1,4,7,10-tetraazacyklododekanu s deblokovaným 32-aminem z příkladu 11b) 1,62 g (0,2 mmol) 32-benzyloxykarbonylaminu, popsaného v příkladě 11b) , se rozpustí v ledové kyselině octové a za míchání se smísí se 33% bromovodíkem v ledové kyselině octové. ' Po 3 Hodinách se počínající srážení dokončí pomocí diethyletheru, vzniklý 32-amin-hydrobromid se promyje diethyletherem a ve vakuu se vysuší. Získaný zbytek se potom vyjme do vody a přídavkem 1 N hydroxidu sodného se hodnota pH upraví na 9,5 . Do tohoto roztoku se potom v prvňé formě po částech přidá 8,1 g (9,6 mmol) isothiokyanátu, popsaného v příkladě 2f) , přičemž hodnota pH se udržuje konstantní dalším přídavkem hydroxidu sodného na 9,5 . Po ukončení přídavku se reakční směs se nechá míchat přes noc při teplotě místnosti a potom se zneutralisuje pomocí kyseliny chlorovodíkové. Roztok se potom podrobí ultrafiltraci (YM3 AMICON) a retentát se konečně lyofilisuje. Výtěžek : 5,6 g (88 % teorie), obsah vody (Karl Fischer) : 3,5 %, stanovení Gd (AAS) : 15,9 % . 74

Elementární analysa (vztaženo na bezvodou látku) vypočteno: C 43,18 H 5,19 Gd 16,39 N 11,68 Na 2,10 S 3,34 zjištěno: C 42.95 H 5.33 Gd 16,02 N 11,90 Na 1,71 S 2,98 r · 1 —i— 1 * i Přiklad 13' * · a) . Triamid kyseliny N,N,N’?N’,N**,N’’.7hexakis{2-['N,N- - bis(2-benzyloxykarbonylaminoethyl)amino]ethyltri- , mesinové * - . . ____ . ... .

* , J > #>. ’ * > t r M 1,27 g. ‘(.1 .mmol) hex a -benzy loxy karbony lam i ημ, popsaného v příkladě lb) , se rozpustí v ledové kyselině octové a ža míchání se smísí se' 33% bromovodíkem v ledové kyselině octové. Po 60 minutách se počínající, srážení do- končí^pomocí-die.thv-letheru__vznikly hexamin-hydrobromid. se promyje diethyletherem, ve vakuu se vysuší a bez dalšího čištění se použije v dále popsané reakci. Výtěžek : 0,95 g (kvantitativní). ·- , 0,95 g (1 mmol) takto vyrobeného hydrobromidu se suspenduje v 50 ml acetonitrilu a přidají se 3 ml triet-hylaminu. 'Potom se přidá 3,54 g (20 mmol)v N-benzyloxy-kyrbonyl-aziridinu (vyrobeno podle J. Chem. Soc. Perkin Trans. 1, 21-26, 1993) a po dobu 5 dnů. se zahřívá pod zpětným chladičem pod ochrannou dusíkovou atmosférou. Potom se reakčni směs odpaří do sucha, získaný zbytek se vyjme do 100 ml methylenchloridu a roztok se dvakrát promyje vždy 100 ml 5% roztoku uhličitanu draselného. Methylen-chloridová fáze šé usuší pomoci bezvodého síranu hořečna.tého a zahustí se. Získaný zbytek še chromatografuje na 75 silikagelu za použití směsi mechylenchloridu, methylalkoholu a tríethylaminu (20 : 1 : 0.1) . Výtěžek : 2,31 g -(89 % teorie) ,světle žluté vazké olejovité kapaliny.

Elementární analysa vypočteno: C 65,34 H 6,65 N 11,35 zjištěno; C 65,12 H 6,80 N 11,19 . .. {jj -Jciániid kyseliny-Ν,Ν,·Ν’ ,Ν’-,Ν·’ ’ ,Nv’-hexakis{2-[N,_N--bis(2-aminoethyl)amino]ethyltrimesinové 2,2 g (0,85 mmol) sloučeniny z příkladu 13a) se rozpustí ve 100 ml methylalkoholu a přidají se 3 g Pearl-manova katalysátoru (hydroxid palladnatý na aktivním uhlí; . Fluka) . Hydrogenuje se po dobu 10 hodin při teplotě místnosti ža tlaku 0,5 MPá. Potom se katalysátor odfiltruje a filtrát se odpaří do sucha. Výtěžek : 825 mg (99 % teorie).

Elementární analysa vypočteno: C 55,02 H 10,16 N 26,94 zjištěno: C 54.87 H 10,25 N 29,85 . c) Úplné chráněný benzyloxykarbonyl-24-polyamin na basi triamidu kyseliny Ν,Ν,Ν’,N',N*’,N’’-hexakis{2-[N,N--bis(2-(N,N-bis-aminoethyl)amino)ethyl]-aminoethyl > --trimesinové 800 rag (0,814 mmol) sloučeniny z příkladu 13b) se rozpustí ve 150 ml a přidá se 5,77 g (32,56 mmol) N-benzyloxy.karbonylraziridinu (vyrobeno podle J . Chem.. Soc, Perkin Trans. 1.. 21-26,' 1993) a po dobu ,5 dnů se zahřívá # ,J· τ ν'· - ' rt 1 2 -V1ý' 3' > pod zpětným chladičem pgd.ochrannou dusíkovou atmosférou!

* V

Potom se reakční'směs odpaří do sucha a. získaný zbytek se „ chromatografuje na silikagelu za použiti směsi methylenchlo-V 2 ' 2 ‘ . ’· · 2 ridu, methylalkoholu a triethylaminu (20 : ,1 : 0,1) . , i 2 Výtěžek 3,62'g2. (85 % teorie) svétle^žluté pevné, látky. ·· - 2 · -r V v 2·2. · 2 .· 2 · · V - · · : .· v Λ ř 2·.·;. _ s ' > - l- , · # “ 2· / * , ^1

Elementární analysa (vztaženo' na‘ -bezvodou látku) · vypočténo: Č 65,39 ;„H , 6,99 N 12,04 zjištěno ---C 65 ,-212--------H2-7,-10--^N^ll ,-90------- 2........ J. , ' . 2. ' 1 ΛΓ V ' ' '"í '.V'’ ‘-""-“y· 2 - __ 1 1;d)., ,}„. -.Úplně ..phrán.ě.fiý...benzyj.oxykar,b.o.ny.lr4_8-polyaniin na-2basi., ...... . · j- ’" " . · i '·' / ' '»'· 24-lysy'1-der'ivátu z příkladu.,2, :13c) -,λ - ' ·.. • 2· · ^ · ! , ' " - _ i. ··· ..... ·' .... _l,05_g (0,2 mmol) sloučeniny z příkladu 13c) se2 rozpust í^ve.^30^inl^etrhy-lalkohoiu_a^přidá^se^l^g J.ear^^!__l mánova katalysátořu (hydroxid palladnatý na aktivnímmhlí). Hydr.ogenuje se po dobu 10 hodin při teplotě místnosti za tlaku .0,5 MPa.. Potom se. katalysátor odfiltruje.,. filtrát se odpaří dó'sucha, a produkt se. přímo použij e4. v; dále·.popsané-. - 2 , ’ HP' _ reakci·. 2 Výtěžek : 0,40 g (kvantitativní). 3 3,11 g (7,5 mmol) Nalfa,Nepsilon-bis(benzyloxykar-bonyl).-lysinu . (Bachem, 4Schyeiz) , 1,2 g (7.,5 mmol) 1-hyd-roxybenzotriazolu a 2,4 g (7,5 mmol) 2-(lH-benzotriazol--1-yl)-1,1,3,3-tetramethyluronium-tetrafluorborátu (TBTU; Peboc Limited, UK) se rozpustí v dimethylformamidu a reak-čni směs se míchá po dobu 15 minut. Tento roztok se potom smísí-s 5,16 ml (30 mmol) N-ethyldiisopropylaminu a 0,40 g (0,2 mmol) výše popsaného 24-polýaminu a míchá-se 77 pres noc při teplotě místnosti. Po ukončení reakce se směs ve vakuu odpaří a získaný zbytek se chromátografuje na silikagelu za použití směsi ethylacetátu, ethylalkoholu a triethylaminu (2:1: 0,2). Výtěžek 1,36 g (59 % teorie).

I

Elementární analysa vypočteno: C 64,69 H 6,95 N 11,30 zjištěno: C 64,42 H 7,11 N 11,19 . e) . 48-gadolinium-DTPA-monoamid na basi deblokovaného 48-aminu z příkladu 13d) 1,15 g (0,1 ramol) sloučeniny z příkladu 13d) , se „ rozpustí v ledové kyselině octové a za míchání se smísí se 33% bromovodíkem v ledové kyselině octové. Po 3 hodinách?;-se počínající srážení dokončí pomocí diethyletheru, vzniklý 48-amin-hýdrobromid~se promyje diethyletherem a ve vakuu se vysuší. ' % ' · / Získaný zbytek se potom vyjme do vody a přídavkem 1 Ň hydroxidu sodného se hodnota pH upraví na 9,5 . Do tohoto roztoku se potom v pívné formě přidá 5,8 g (14,4 mmol) kyseliny N^-(2,6^dioxomorfolinoethyl)-N^-(ethoxykarbonyl-methyl)-3,6-diazaoktandikarboxylové, popsané v příkladě 13a) EP 0 331 616 , přičemž hodnota pH še udržuje konstantní dalším přídavkem hydroxidu sodného na 9,5 . Po ukončení přídavku se pro zmýdelnéní DTPA-ethylesteru upraví hodnota pH přídavkem 5 N hydroxidu sodného na >13 a reakčni směs se nechá míchat přes noc při teplotě místnosti a potom se okyselí pomocí kyseliny chlorovodíkové na pH 5 . Roztok se potom smísí se 2,61 g (7,2 mmol) Gd203 , míchá se po - 78-

.. Ju, U dobu / 30 , minut při ^teplotě 80 °C a„ pp ochlazení. á^ úpravě hodnoty pH-na 7 -se podrobí’ ultrafiitraci -(YM3 AMICON)r a retentát se konečně podrobí membránové^filtraci a>lyofili-• ·. ' » + suj.e se. - x/·.'· - » ? ·,’ - < -~rr Výtěžek : 3,15 g (92 %^teorie), , , Λ obsah vody (Karl Fischer) : 8,9 %, ; ř 1 ,Λ: ·.. »·. . ΐ .. ' * . ’ f stanovení Gd(AAS) : 21,9 %·. '* ·

Elementární analysa (vztaženo na bezvodou>látku) ♦ vypočteno:C 35,03 H 4,34 Gd 24,22 N 10,65 Na 2,21 i , ' * * _z ji š.t ěnoj^C. .34,84..; H..4 ,-.50,... Gd^23,.6.3,1, .,N. .10 ,.8.7^:Na 2-, Q4^., . ' i'

’ * 'v · .*"·' ·<Γ-.ϊΤ· t ·· 4 » . - ?·’ *··· - * ·+· ·· HŤk *- · · ·· * · .-A * P > ř «i k- 1 a d 14 f. ·λ#·^ 1 — . i* Ή a) 48-thiomočovinový konjugát z gadoliniového komplexu 10 - Γ 7 - (4 - i s o t h i okvanátofenv1)-2 - hy dřoxv-5-oxo-7-( kar- boxymethy1) -4-aza-hepty1]-1,4,7-1ri s(karboxymethy1)--1,4,7,10^-tetraazacyklododekanú s deblokovaným 48-aminem z příkladu. I3d) í. ' 1 1,15. g- ,(0,l,ímmol) / sloučeniny, z příkladu 13d). ,-*se' -rozpustí v.ledové kyselině octové a zá.míchání sé smísí se 33% bromovodíkem v ledové kyselině.octové. Po 3 hodinách se počínající srážení dokončí pomocí diethyletheru, vzniklý 48-amin-hydrobromid se.proroyje diethyletherem a ve vakuu se vysuší. Získaný zbytek se potom vyjme do vody a přídavkem 1 N hydroxidu sodného se hodnota pH. upraví na 9,5 . Do v" tohoto roztoku se potom v prvné formě po-částech přidá 6,8 g (7,2 mmol) isothiokyanátu, popsaného v příkladě 2f) , 79 přičemž hodnota pH se udržuje konstantní dalším přídavkem hydroxidu sodného na 9,5 . Po ukončení přídavku se reakční směs nechá míchat přes noc při teplotě místnosti a potom se zneutralisuje pomocí kyseliny chlorovodíkové. Roztok se potcnn podrobí ultrafiltraci (YM3 AříICON) a retenxát se konečně lyofilísuje. Výtěžek : 3,91 g (82 % teorie), obsah vody (Karl Fischer) : 4,5 %, stanovení Gd (AAS) : 16,6 % .

Elementární analysa (vztaženo na hezvodou látku) vypočteno: C 43,33 H 5,24 Gd 16,71 N 11,82 Na 1,53 S 3,41 zjištěno: C 43,04 H 5,54 Gd 16,19 N 12,10 Na,1,26 S 3,89 Příklad 15 a) 1,4,7,10,13,16-hexakis-[2-(benzyloxykarbonylamino) - etyl]-l,4,7,10,13,16-hexaazacyklooktadekan 1,25 g (5 mmol) 1,4,7,10,13,16-hexaazacyklododekanu (Hexacyclen; Fluka) se azeotropicky odvodní pomnocí toluenu. K ochlazenému roztoku hexacyklenu v toluenu se při teplotě místnosti přidá roztok 10,63 g (60 mmol) N-benzyloxykarbonylaziridinu (J. Chem. Soc. Perkin Trans. 1, 21-26, 1993) v acetonitrilu a reakční směs se zahřívá po dobu 3 dnů pod dusíkovou atmosférou pod zpětným chladičem. Získaný roztok se potom odpaří do sucha a zbytek se chroraa-tografuje na silikagelu za použití směsi ethylesteru kyseliny octové, methylalkoholu a triethylaminu (8:2: 0,5) . Výtěžek : 5,68 g (86 % teorie) světle žluté vazké olej o- 80 ’ vité kapaliny- 4

Elementární analysa (vztaženo na bezvodou látku) * Λ -vypočteno:-; C-6 5-,-43——H—-7-32-N-l-2-,-7-2---— -— zjištěno: C 65,20 H 7,51 N 12,49 . ť

:+ it ... +- , I .· - ,9

b) Úplně chráněný.bénzyloxykařbonyl-24-polyamin na basi 1,4,7,10,13,16-hexakis[2-(trilysylamino)-ethyl]-hexa-cyklenu - . * t * 1“; 32 g (1 mmol) hexa-benzyloxykarbonylaminuz pří- - kladu 15a)—serozpustí v^ledové kyšelině~octové a za~ J ' 11 4 * míchání se smísí se 33% -bromovbdíkem v ledové kyselině octo^ vé. Po 60-minutách se počínající srážení dokončí pomocí, diethyletheřu,. vzniklý! héxaamin-hyďrobroraid.. se~ promyjév _diethyletherem, ve. t/akuu. se vysuší a _bez“ dalšího: čištění; se:, -—-použi-j-e-Hlodáie^opsané-^reakci": -. —rr · Výtěžek : 1,48 g (kvantitativní). tsc 7,0 g (7,5 mmol) chráněného "tri-lysinu” , popsaného v příkladě lc) ,1,2 g (7,5 mmol) 1-hydroxybenzotriazolu a 2,4 g (7,5 mmol) 2-(lH-benzotriazol-l-yl)-l,l,3,3-te-tramethyluroniiím-tetrafluorborátu (TBTU; Peboc Limited, ' UK) se rozpustí v dimethylformamidu a reakční směs se míchá po dobu 15 minut. Tento roztok se potom smísí s 5,16 ml (30 mmol) N-ethyldiisopropylaminu a 1,48 g (1 mmol)* výše popsaného hexa-amin-hydrobromidu a-míchá se přes noc při teplotě místnosti: Po ukončení reakce se směs ve vakuu odpaří a získaný zbytek se chroraatografuje na silikágelu za použití směsi dichlormethanu a methylalkoholu (10 : 1). Výtěžek : 5,02 g (83 % teorie). 81

Elementární analysa vypočteno: C 64,40 H 7,00 N 11,13 zjištěno: C 64,16 H 6,82 N 10,88 . c) 24-gadolinium-DTPA-monoamid na basi 1,4,7,10,13,16- -hexakis[2-(trílysyl-amino)ethyl]-hexacyklenu 1,21 g (0,2 mmol) póly-benzyloxykarbonylaminu,popsaného v příkladě 15b) , se rozpustí v ledové kyselině octové a za míchání se-smísí se 33% h torno vodíkem .v ledové kyselině octové. Po 3 hodinách se počínající srážení dokončí pomocí diethyletheru, vzniklý .24-amin-hydrobromid se promyje diethyletherem a ve vakuu se vysuší. Získaný zbytek se potom vyjme do vody a přídavkem 1 Ν' i·* hydroxidu sodného se hodnota pH upraví na 9,5 . Do tohoto, roztoku se potom v prvné formě přidá 5,8 g (14,4 mmol) kyseliny N^-(2,6-dioxomorfolinoethyl)-N^-(ethoxykařbonyl-methyl)-3,6-diazaoktandikarboxylové, popsané v příkladě 13a) EP 0 331 616 , přičemž hodnota pH se udržuje konstantní dalším přídavkem hydroxidu sodného na 9,5 . Po ukončení přídavku se pro zmýdelnění DTPA-ethylesteru upraví hodnota pH přídavkem 5 N hydroxidu sodného na >13 a reakční směs se nechá míchat přes noc při teplotě místnosti a potom se okyselí pomocí kyseliny chlorovodíkové na pH 5 . Roztok se potom smísí se 2,61 g (7,2 mmol) Gd203 , míchá se po dobu 30 minut při teplotě 80 °C a po ochlazení a úpravě hodnoty pH na 7 se podrobí ultrafiltraci (YH3 AMICON) a retentát se konečně podrobí membránové filtraci a lyofili-suj e se. Výtěžek : 3,17 g (92,5 % teorie), obsah vody (Karl Fischer) : 8,7 %, - 82 -. Γ«Γ > v ,stanovení.Gd (AAS) 21,9 % . I 'j - J, . . í

Elementární*analysa (vztaženo na bezvodou látku) ,-ť _v.y.počreno.:.C_35_,.94_H_4.,A.5^Gd_24.,-13_N_10.,7.5_Na^2.,.65^ ' ř * zjištěno:, C 36,19 H 4,26 ’ Gd' 24,39 N 10,48 Na 2,29^ . £ ,· li _ * ••‘f * .,··» w*. ><·. * '4 t,. , · . . . < - j , %„ ‘ P ř í k il^ta' d jK 16 - ."V n » · · 5 ' . • .«' ř i VJ . .·. * * ^ ’· -í ' *.* ; t , ·'*· -a) < 48-thioirióčovinóvý konjugát z gadoliniového komplexu ' ·:.; ’.. * 7. . j * . f r*r -^10 - 0-7-7-(4 - i-soth-i-oky anátóf eny-l·) -2 -hy dr oxy --5 ~ ox o-7 - ( kar - ~ ——---boxymet-hyl) -4-áza-hěpty 1-1-1-^4^7-t-ris (karboxymethyl) ---- >· : ^1,4,7-, 10-.tetraazacyklododekahujs-24-aminem. ..i. , | » - *- 1,47,10,13,ló^hexakis[27trilysýlamiňo)-ethyl]-hexa-" cyklenUjř· * v v ' -l-^21^W‘í4T‘2Mmnol-)ft^-6»henzy4-GX-yk^i&onyl^inu.,^£psa? ného v příkladě 15b) , se rozpustí v ledové kyselině .octové r * "·. a za míchání se smísí se 33% bromovodíkem v ledové kyselině očtové. Po 3 hodinách se počínající srážení'dokončí- pomocí diéthyletheru, vzniklý 24-amin-hydrobromid se prorayje diet- t r , v i hyletherem a ve vakuu se vysuší. . # Získaný zbytek se potom vyjme do vody a přídavkem 1 N hydroxidu sodného se hodnota pH upraví na 9,5 . Do to-'hoto roztoku se potom v prvné formě .po částech přidá 6,08 g (7,2 mmol) isothiokyanátu, popsaného v příkladě 2f) , přičemž hodnota pH se udržuje konstantní-dalším přídavkem hydroxidu sodného na 9,5 . Po ukončení přídavku se reakční směs nechá míchat přes noc při teplotě místnosti a potom se zneutrališuje pomocí kyseliny chlorovodíkové. Roztok se potom podrobí ultrafiltraci (YM3 AMICON) a reientát še ko- 83 nečně lyofilisuje. Výtěžek : 4,33 g (89 % teorie), obsah vody (Karl Fischer) : 7,0 %, stanovení Gd (AA$) : 15,7 % .

Elementární .analysa (vztaženo na bezvodou látku) vypočteno:C 43,94 H 5,32 Gd 16,67 N 11,88 Na 1,83 S 3,40 zjištěno: C 43,70 H 5,16 Gd 16,21 N 12,05 Na 1,94 S 3,78 Přiklad 17 a) Gadoliniový komplex 10-[6-(4-nitrofenyl-2-hydroxy-5--oxb-4-azahexyl)-l,4,7-tris(karboxymethyl)-1,4,7,10--tetraazacyklododekanu 20 g (34,86 mmol) sloučeniny z příkladu 2c) se rozpustí ve 200 ml vody a hodnota pH se upraví pomocí 2 N hydroxidu sodného na 10 . Při teplotě 0 °C se přikape roztok 13,97 g (70 mmol) chloridu kyseliny 4-nitrofenyl-octové v 50 ml dioxanu a hodnota pH reakční směsi se udržuje přídavky 2 N hydroxidu sodného na 10 , Směs se potom míchá po dobu 2 hodin při teplotě místnosti, načež se zneutralisuje pomocí 10% kyseliny chlorovodíkové na pH 7 a vodný roztok se dvakrát extrahuje vždy 200 ml ethylesteru kyseliny octové. Potom se vodná fáze odpaří do sucha

O a získaný zbytek se chromátografuje (RP-18/LiChroPrep ; pohyblivá fáze : tetrahydrofuran/methylalkohol/voda) . Produkt obsahující frakce se odpaří do sucha a získá se 22,5 g (81 % teorie) krémově zbarvené pevné látky.

Obsah vody : 7,5 % . - 84 - .

Elementární analysa (vztaženo na bezvodou látku) ’* •Š" . '· ' i: ' ' " ' " > vypočteno: C 50,75 ^ H 4,79 Gd 21,34 ^'11,41 s zjištěno: ’ C^Ó.él" Η*4,89 Cd 21,15 N 11,*30:. . __*_ _^ _+___4 · b) . Gadoliniový komplex 10-[6-(4-aminofenyl-2-hydroxy-5- ; í· * *' ' > 3 '· · ' ·Γ r * ' , -oxo-4-azahexyl)-1,4,7-tris(karboxýmethyl) ti,4,7 110- ; . -Í.. i , .-v' ·' · - ·· . ' * :>’' ·'·* * -tetraazacyklododekanu · -*! ' - *^·* * * . ..\ " ' ; v' ' ; ' ; ř . ' :· - - - ^ 21 g (28,5 mmol·) sloučeniny z příkladu 17a)ř se .¾ i. . " * . . t. 1 rozpustí vV .200 ml methylalkoholu a přidjí se 4 g palla- Π jp, ^ _ ' ,· _ Λ 1,, ^diovéhowka’talysát'ořU“ ^(lO^^Pd^na^ C)^^ ^Hydr^^ěnuje "sé* po d obu^ 6 ho din~p ř i t e plotě m í s t nos ti . Katalysátor se potom 7“ s f ‘ ' 11 > v odfdi-t-ruj e^a - fditrát 'se " odpaří do-sucha:: = '.. v Výtěžek :* 20,56 g (99 %.teorie) žlutavé sklovité.pevné" látky*'«' ' t, i .obsah_y.ody*1:™_13.ř.l_%-------— ----............—* ’5ί5ΐ2τΓ '

Elementární-analysa (vztaženo na bezvodou látku): vypočteno: C 42,48 H 5,28 .Gd 22,25' N 11,891 zj ištěno: ? C. 42,31 WS, 41 . Gd 22,07— N 11,67 .f · '· ···'. · "· .· V>1' ‘ .ν ' ' , ; -il i * c) Gadoliriibvý komplex 10-[6-(4-isothiokyanátofenyl-2--hydroxy-5-oxo-4-azahexyl) -1,4,7-tris(karboxymethyl) -1,4., 7,10-tetraazacyklododekanu , 20 g (28,5 mmol) sloučeniny z příkladu 17b) se Ϊ rozpustí ve 100 ml vody a přidá se 9,76 g (84,9 mmol) thiofosgenu v 50 ml chloroformu. Reakční sěs se míchá po dobu jedné hodiny při teplotě 50 °C , načež se ochladí na teplotu místnosti, organická fáze se oddělí a vodná fáze,se dvakrát vytřepe vždy 100 ml chloroformu. Vodná fáze se 85 odpaří do sucha a získaný zbytek se se pří teplotě místností rozmíchá ve 200 ml isopropylalkoholu. Pevná látka se odfiltruje, promyje se diethyletherem a suší se přes noc za vakua při teplotě 40 °C . Výtěžek : 21,7 g (99 % teorie) lehce krémově zbarvené pevné látky, obsah vody : 3,4 % .

Elementární analysa (vztaženo na bezvodou látku) vypočteno * C 41,70 H 4,71 : Cd 2i,00 N 11,22 S 4,28- < zjištěno: C 41,55 H 4,85 Gd 20,85 N 11,11 S 4,20. d) Diamid kyseliny Ν,Ν,Ν’,N’-tetrakis[2-(benzyloxykarbo- nylamino)-ethyl].-5-nitro-isoftalové , a 14,86 g (40 nmrol) bis[2-(benzyloxykarbonylamino)- : -ethyl]-aminu, popsaného v příkladě ,.la) , a 20,24 g (200 mmol) triethylaminu se rozpustí v diraethylformamidu, smísí, se se 4,96 g (29 nnnol) dichloridu kyseliny 5-nitro-iso-ftalové (J. Chem. Soc. 1957,, 1172^-1175) a reakční směs sel míchá přes noc při teplotě místnosti. Roztok še ve vakuu odpaří a získaný zbytek se chromatografuje na silikagelu za použití- ethylesterú kyseliny octové. Výtěžek : 11,5 g (62,6 % teorie) vazké olejovité látky. Elementární analysa vypočteno: C 62,80 H 5,60 N 10,68 zjištěno: C 62,62 H 5,77 N 10,41 . A- e) Diamid kyseliny Ν,Ν,Ν’ ,Ν'-tetrakis[2- (benzyloxykarbony lamino)-ethyl]-5-araxno-isoftalové - 86.- 4.

- 86.- 4. * -A τ— 9,18 g nitrosloučeniny, popsané v předcházejícím příkladě , ve 200 ml ethylalkoholu, se přidá k'roztoku 27,’8 g . -v·. ·* : ' « -- -.1 i a·' (100 mmlo) heptáhydrátu síranu železnatého ve 200 ml vody —a—sěs~se-zahřeje-k-varuT^Po-přídavkut-50-ml—koncentrovaného amoniaku se reakční směs míchá dalších 90 minut za varu pod ^zpětným chladičem. -Získaná suspense se ochladí,- ěthylálko- 4 i,» i ‘ · «·. ·-·..,·» · · ; "·. - . · ·" * , hol sej. za vakua odstraní a vodná fáze se se vytřepe ethyl-esterem kyseliny octově. Získaná organická fáze se vysuší^ pomocí bezvodého síranu sodného a získá se 8,61 g (97 % teorie) produktu ve formě bezbarvé vazké olejovité látky'.,,. -j w"· er ' * K. . -i T -«fctjpk-í: . - * V* &· Λ. ».* . v- . i 1 " · 1 ' · « · v vl , · ' i, . ···. ,. i

Element ární analysa Γ vypočteno ž jištěno: .H 6,02 H 5,96 C 64,93 „ Č ^65,10 N> 11;, 04.. N 10,89 _f) Díamiřincyseriny ΝΤΝ^’νΝ’-tétrakiT[r2^(b'enzyl~oxykar-.. bonylaraino) -ethyl] -5 - (karboxymethbxyacety.laraino:)ť=.1... -isoftalové -.4,44 g (5 mmol) · aminosloučeniny, popsané v předchá- r zejícím ,příkladě, v dimethylformamidu, se na ledové lázni , .. h, smísí s 5,05 g (50 mmol) triethylamínu a 2,9 g (25 mmol) anhydridu kyseliny diglykolové (Fluka)ra a reakční směs se míchá po dobu 2 hodin -př-i teplotě 0 °C . potom se ve vakuu odpaří do sucha, získaný zbytek se rozdělí mezi ethyiesteř kyseliny octové a 1 M kyselinu citrónovou, pro-myje se vodou do neutrální reakce a organická fáze se vysuší. Výtěžek : 4,62 g (92 % teorie) vazké olejovité kapaliny. 87

Elementární analysa vypočteno: C 62,20 H 5,72 N 9,77 zjištěno: C 62,03 . H 5,60 N 9,89 . g) Úplně chráněný benzyloxykarbonyl-hexadeka-amin na basi Ν,Ν,Ν’,Ν’ -tetrakis(trilysylaminomethyl)-methanu 3,0 g (22,69 mmol) tetrakis(aminomethyl)methanu (vyrobeného podle US 4 485 237 A, 1984) , 127,85 g (136,15 mmol) ' Sloučeniny'z přikladu ' lc)ro a --15,67 g >(136,15 mmol) N-hydroxysukcinimidu se rozpustí ve 300 ml dimethylform-amidu a při teplotě 0 °C se přidá 28,09 g (136,15 mmol) dicyklohexylkarbodiimidu. Reakční směs se míchá po dobu jedné hodiny při teplotě 0 °C a potom 2 dny při teplotě ( místnosti, potom se přidá 300 ml ethylesteru kyseliny r octové, vysrážená močovina se odfiltruje a filtrát se ve vakuu zahustí do.-sucha.·: Získaný zbytek se chrornátografuje na silikagelu za použití směsi methylenchloridu a isopropyl-alkóholu (20 : 1) . Výtěžek : 58,02 g (67 % teorie) bezbarvé vazké olej ovité ' kapaliny

Elementární analysa Λ

1 . A vypočteno: C 64,52 H 6,76 N 10,28 zjištěno: C 64,41 H6,91 N 10,05 . h) Úplně chráněný benzyloxykarbonyl-64-amin ze 16-aminu Ν,Ν,Ν’,N’-tetrakis(trilysyláminomethyl)-methanu, kon-densovaného s tetraamin-monofcarboxylovou kyselinou z příkladu 17f) í." 88 í." 88 .4 - -r «· r· *-»·** -ť-· t r < 1,91 g (0,5 řrimol) 16-benžyloxykarbonylaminu z pfí- , ^ t ~ . . -* . - ^ -i , .. I* ^ ^ .rf1 ^ kladu, 17g) se rozpustí v ledové 'kyselině octové a za ·' · - 'ο; ‘ . ’ y míchání t se smísí se 33%’bromovodíkem v ledové kyselině 'octové. Po 3: hodinách se počínající srážení dokončí pomocí-¾, ** · .v , .. r Λ ,· * ie thy-le-theru *Vv-znik-l-ý—1-6 - amin-hydrobromid—se-promyje-p*— * IV . f . diethylétherera, ve vakuu se vysuší a bez dalšího čištění se . použije/k dále tpopsané reakci. }.· - v j f - ·.*· ' Výtěžek : 1)48 g (kvantitativní). * 12,05 g (12 mmol) itetraminmonokarboxylové kyseliny,, ; popsané .v příkladě .17f); 1,92 ,¾ ,j(12 romol) 1-hydroxy- . :—benzotriazolu^a ^3T8‘4^g-;^ 12tfimoiy~ -2^( ΙΉ,^βηζοΧΥίείζρΓ^ 1- V ; ,-yl)-lrlv3·, 3 - te trámethyluron i um - te tr af luor borátu (TBTU,', 'Γ Í-J - . ' ' ' ' I ' 4 . 1 ' J!

Pehae .'LÍmd-tedvVlilC-) ·' se,..rozpustí' v’ dimethylf ormajnřdu* á ‘re-.^' akční směs se míchá, po dobu 15 minut. ,· Tento roztok' se Ja.· ; ’ -:íiÍ ·.' · potom smísí se 6,20 ml- (36 mmol) N-ethýldiisopropylamihu. . Jk_14:8 ,.g. .,.(0., .5^ mmol) ^rvýš,é „popsaného^ 16 - amin-hydrobromidti.. -^a^michá^se-pfes-noe-při^-teparotě-mřstňostiT^Po^ukohčend. '·. · reakce se směs ve vakuu odpaří a získaný zbytek se chr.omato-grafuje na sžlikagelu za použití směsi ethylesteru kyseliny octové a ethylalkoholu*- (2.: 1). Výtěžek : 4,54 g (52 % .teorie) světle žluté olejovaté kapaliny. / ·

Elementární analysa vypočteno: zj ištěno: H 6,01 H 6,22 C 62,58 C 62,39 N 11,24 N 11,00 1 64-thiomočovinový konjugát z gadoliniového komplexu 10-[6-(4-ísothiokyanátofeny L)-2-hydroxy-5-oxo-4-aza--hexyl} -1' 4,7-tris(kařboxymethyl)-l, 4,7,10-tetraaza-cyklododekann s de blokovaným 64 τ póly aminem podle 89 příkladu 17h) 1,74 g (0,12 mmol) 64-benzyloxykarbonylaminu, popsaného v příkladě 17h) , se rozpustí v ledové kyselině octové a za míchání se smísí se 33% bromovodíkem v ledové kyselině octové. Po 3 hodinách se počínající srážení dokončí pomocí diethylethéru, vzniklý 64-amin-hydrobromid se přomyje diet-hyletherem a ve vakuu se vysuší. Získaný zbytek se potom vyjme do vody a přídavkem 1 N hydroxidu sodného se hodnota píí upraví na 9,5,,. Do tohoto roztoku se potom v prvně formě po částech přidá 7,20 g (9,6 mmol) isothiokyanátu, popsaného v příkladě 17c) , přičemž hodnota pH se udržuje konstantní dalším přídavkem hydroxidu sodného na 9,5 . Po ukončení přídavku se reakční směs nechá míchat přes noc při teplotě místnosti a potom se > zneutralisuje pomocí kyseliny chlorovodíkové. Roztok se potom podrobí ultrafíltřací (YM3 AMICON) a retentát se ko- . nečně lýofi lisuj ě.' . ‘ Výtěžek : 5,31 g (86 % teorie), .- obsah vody (Karl Fischer) : 8,0 %, .... ^ stanovení Gd (AAŠ) : 16,2 % . .

Elementární analysa (vztaženo na bezvodou látku) vypočteno: C 43,59 H 5,14 Gd 17,72 N 12,92 S 3,61 zj ištěno: C 43,36 H 5,41 Gd 17,18 N 13,20 S 3,04 P ř i k 1 a d 18 a) Benzylester kyseliny 2-íiitro-5-hydroxy-benzoové , 40 g ¢(218,4 mmol) kyseliny 2-hydtoxy-5-nitro-ben- zoóvé, m236,17 g *(2,184,mol) benzylalkoholu a 1 g kyše- ‘ ’ * ' 1 ř r . liny p-toluensulfonové se zahřívá po dobu i:2 dnů na odlučo-

» Η»' Λ· · ' . Ί . .-1- -- » *Α· s * PV váči vody. Potom se směs odpaří do sucha a získaný^ zbytek se-ch-r-omatog-r-af-uje-na-s-i-l-i-kage-l-u—za—použ-i-t-í-směs-i—met-hý-l-en— ' . i chloridu, hexanu a acetonu (15, : 5 : 1) i Λ·- < , ,<* *. * t ‘ ν''·... .. . ; ' 1 . . · ' <· V ' + ‘ ‘ 4 ' ·* ·..., Výtěžek.. 50,, 72 g (85 % teorie) r.žluté pevné látky. lC^,.

Elementárním analysa' * ť vypočteno: Č 61,54 ' H . 4', 06 íy N 5,13

~z i±š t ěno‘: "r rvť^e-* 61τ31 H" J4~, 17~ 't“N"''5v05': V < ' . . H. 1 ^ ». v .w * ·. * - / .¾ -» b) : T-erc . -bu-t-ylester^kyse-li-ny -2- [-4;-nitrp-2—benžyioxykar-bony!)-fenoxy]-octové ,i: J i. V ’ * Λ* . f ; v ’ ·* >.· v.. ·„ * * ______K .iJ.5jCL.g_Xl 8 3„ mmol )__* s loučeniny.. z „ pří kladu -,._18a)iJ,_______ Ί- :i λ. - ·· v ^ ^0r5^g^(r366“mmoli):^jíemhě^práškovi:téko^hydróxidu-drasjeJLného ř . ·. a 500 mg tetrabutylamoniumhydrogensulfátů v 500 ml toluenu se přidá při teplotě 0 °C 42,8 g ;(220 mmol) terc.-butyl- esteru kyseliny brbmočtové a-reakční/směs se .míchá,-po-dobu £ r * * 3 hodin při-teplotě^ 0.°^. potom se rakční směs smísí srn 500 ml ledové vody, silně se promíchá po dobu 2-íminut a organická fáze se oddělí. Organická fáze se potom vysuší pomocí bezvodého síranu hořečnatého a ve vakuu se odpaří. Získaný zbytek se chr.omatograf.uje na silikagelu za použití směsi methylénchloridu ; hexanu a' acetonům (15 : 10 : 1) . Výtěžek : 47,5 g (67 %, teorie) žluté vazkéJolejovité* kapaliny. ' 91

Elementární analysa vypočteno: C 62,01 H 5,46 N 3,62 zjištěno: C 62,13 H 5,55 N 3,50 . c) Kyselina 2-[4-nitro-2-(benzyloxykarbonyl)-fenoxyj--octová 40 g (103,26 mmol) sloučeniny z příkladu 18b) se rozpustí ve 300 ml methylenchloridu, při teplotě 0 °C. se přikape 100 ml kyšěliny triřluoroctové á reakčnl" směs se -nechá zahřát, na teplotu místnosti. Po 4 hodinách se odpaří do sucha a získaný zbytek se překrystalisuje z malého množství směsi diethyletheru a hexanu. Výtěžek : 32,5 g (95 % teorie) lehce nažloutlé pevné 4 látky. 1- Elementární analysa" vypočteno: C 58,01 H 3,96 N 4,23 zjištěno: C 58,17 H 3,81 N 4,18 . d) N-hydroxysukcinimidester kyseliny 2-[4-nitro-2-(benzyloxykarbonyl) -fenoxy] -octové { 10 g (30,19'mmol) sloučeniny z příkladům 18c) a 4,17 g (36,28 mmol) N-hydroxysukcinimidu se rozpustí ve' 20 ml chloroformu a při teplotě 0 °C se přidá 7,48 g (36,23 mmol) dicyklohexylkarbodiimidu. Reakční směs se míchá po dobu 24 hodin při teplotě místnosti a potom se ochladí a odfiltruje se vysrážená močovina. Filtrát se ve vakuu odpaří do sucha a získaný zbytek se překrystalisuje z malého množství isopropylalkoholu. Výtěžek : 12,03 g (93 % teorie) lehce nažloutlé kryšta- • η. r··* · '*> i -&r *?·«* h· lické'pevné látky . -Elementární analysa

vypočteno: * zjištěno: C 56,08 H 3,76 N 6,54 .C 56,17 H 3*. 84" N 6,41. ? - i.·* t ,»e) Gadolini-ový komplex 10-[6-(4--nitro-2- (bérizyloxykarbo-'·< . nyl)-fenoxy)-2-hydroxy-5-oxb-4-aza-hexyl)-l,4,7-Tris- ... i i'v -(karboxymethyl·) -1,4^7,10t etraazacyklodbdekanu ; · - ' - ri.l '.gl*, (25-i 68 rmmol)-- sloučeniny z příkladu 2 b) , .ve Λ „ ; i··. ' . · . * ’ ’ ' , . t V ' · · T·*· ·’ . 100 ml diméthylformamiihia 20-.ml triethylamimr se' při V *, . 4, ^teplotě místnosti přidá 13,26 g (23,11 nimol) ", sloučeniny. z_příkladu 18d) s^reakční, sě.s. se.„mícháT přes nocPotom,se...... V , ,, tl ‘ -**1·' ’

—-ye^vák-uu^odpářdHdo-^sucha^a-získáný^zbytek—se^chromatografuj:eT^_vT na RP-18 (LiChroPrep^/pohyblivá fáze : voda/tetrahydrofu-ran-gradient). . Výtěžek : 19,02 g (81 % teorie) amorfní pevné látky, obsah vody,..: 3,1 % . ...·" v 4^ t .···,

Elementární analysa (vztaženo na bezvodou látku) vyppčle?_ó: . Q 44,69 H 4,66 Gd 17,73. N 9,47 zjištěno: C 44,48 H 4,80 Gd 17,56 N 9*28 . f) Gadoliniový komplex 10-[6t(4-amino-2-karbqxy-fenoxy)--2-hydroxy-5-oxo-4-aza-hexyl)-1,4,7-tris-- (kacboxymethyL)-1,4,7,10-tetraazacyklododekaau 18 g (20,3 mmol) sloučeniny z příkladu 18e) se 93 rozpustí ve 200 ml methylalkoholu a pfidá se 5 g palladiového katalysátoru (10 % Pd na C) , načež se hydrogenuje po dobu 8 hodin při teplotě místnosti. Katalysátor se potom odfiltruje a filtrát se odpaří do sucha. Výtěžek : 15,88 g (98 % teorie) krémově zbarvené pevné •r látky. obsah vody : 4,1 % .

Elementární analysa (vztaženo na bezvodou látku) vypočteno: - C 40,72- H 4,86 Gd 20,51, N, 10,96 ....... zjištěno: C 40,51 H 4,97 Gd 20,32 N 10,73 . g) Gadoliniový komplex 10-[6-(4-isothiokyanáto-2-karbo^ xy-feiioxy)-2-hydroxy-5-oxo-4-aza-hexyl)-l,4,7-tris- «... -(karboxymethyl)-1,4,7,10-tetraažacyklbdodekanu - 15 g (19y56 miňól): sloučeniny z příkladu 18f) se rozpustí ve '100 ml vody a-přidá še 6,75 g (58,7 mmol) < thio-fosgenu v 50 ml chloroformu. Reakční směs se míchá po dobu jedné hodiny při teplotám 50 °C , načež se ochladí na ; i teplotu místnosti, oddělí se organická fáze á vodná fáze se # dvakrát vytřepe vždy 100 ml chloroformu. Vodná fáze se odpaří do sucha a získaný zbytek se při teplotě místnosti rozmíchá do 100 ml isopropylalkoholu. Pevná látka se odfiltruje a promyje se diethyletherem, Po sušení přes noc ve vakuu při teplotě. 40 °C se získá 16.5 g (98 % teorie) krémově zbarvené pevné látky.

Obsah vody : 5,8 % . 94 94 3 i

Elementární analysa (vztaženo na bézvodou látku) { vypočteno: C 40,09 H 4,36 Gd 19,44 N 10,39 S 3,96 zjištěno: C 40,15 H 4,45 , Gd 19,23 NÍ0.19 S3r.-87. h) 64-thioraočovinový konjugát z gadoliniového komplexu „10-[6-(4-isothiokyanáto-2-karboxý-fenoxy)-2-hydroxy--5-oxo^4-aza-hexyl]-1,4,7-tris(karboxymethyl)-1,4,7, lO-tetraazacyklodoďekanu s deblokovariým 64-polyamineia podle příkladu 17h) - . V k 1-,74 g.(0- l^mmol)^ “64-benzyloxykar bony laminu, pópša-ného a v—příkladě—17h) , se rozpustívledové kyselině octové v t, fc + * a za míchání se smísí se 33% bromovodíkem v ledové.kyselině octové.. Po 3 hodinách se počínající srážení dokonči pomocí diethyletheru, vzniklý'64-amin-hydrobrdraid se promýje diet-Jryletherem a ve vakuu se vysuší . ........ __- — ... ^ . Získaný zbytek se potom vyjme do vody a přídavkem 1 N hydroxidu sodného se hodnota pH upraví na 9,5 * Do' tohoto roztoku se potom-,ν prvně formě po částech přidá 7,76

JI g. (9,6-mmol) isothiokyanátu, popsaného v příkladě I8g) , i přičemž hodnota. pH se udržuje konstantní dalším přídavkem hydroxidu sodného na 9,5 . ' Po ukončení přídavku se reakční směs nechá míchat přes noc při teplotě místnosti a potom ,se zneutralisuje pomocí zředěné kyseliny chlorovodíkové. Roztok se potom podrobí ultrafiltraci (YM3 AMICON)" a retentát se konečně lyofilisuje. ” Výtěžek : 5,21 g (79 % teorie), obsah vody (Karl Fischer) : 6,0 stanovení Gd (AAS) : 15,1 % . - 95 - tární analysa (vztaženo na bezvodou látku) ;no:C 41,14 H 4,60 Gd 16,22 N 11,83 Na 2,37 S 3,31 io: C 40,89 H 4,70 Gd 16,65 N 11,90 Na 2,08 S 3,73 <1 a d 19 '"vselina 3- (4-isokyanátofenyl) -glutarová i *,e"' 22*12 g (100 mmol) kyseliny 3 (4-ammofenyl) wé ve 300 ml chloroformu se přidá 11,5 g (100 thiofosgenu a reakční směs se zahřívá po dobu 50 >ři teplotě 40 °C . potom se odpaří do sucha a zís-ytek se překrystalisuje z malého množství směsí íso-alkoholu a diethyletheru. 22,5 g (85 % teorie) krémově zbarvené krystalické pevné látky. . ’ '*· “'· "1L 1 * V . 1 * tární analysa sno: C 54,33 H 4,18 N 5,28 12,09 no: C 54,17 H 4,29 N 5,14 12,15 .

Gadoliniový komplex l0-{6-[4-(2-karboxy-l-karboxymet- hyl-ethyl)-fenyl] -2-hydroxy-5-thioxo-4,6-diaza-hexyl) - -1,4,7-tris(karboxymethyl)-1,4,7,10-tetraazacyklodo- dekanu -» 20 g (37,2 mmol) sloučeniny z příkladu 2c se roz ve 200 ml dimethylformamidu a 50 ml rtiethylaminu á se 11,84 g (44,63 mmol) sloučeniny z příkladu Reakční směs se míchá přes noc při teplotě míst- · ek se iny fuje etra- né 3,82 3,75. te- 4,6- te- se 'C se Re-čež se ovina. ;theru. :á >rraě - 96 - ' * r i Vf nosili, načež se odpafí ve vakuu do sucha, získaný zbytek se rozpustí ve směsi 200 ml ethylalkoholu a 30 ml kyseliny octové a znovu se odpafí. Tento zbytek se chromatografuje

TI na RP-18 (LiChroPrep /pohyblivá fáze : gradient voda/tetra-hydrofuran). Výtěžek : 26,22 g (81 % teorie) krémově zbarvené pevné látky, obsah vody : 3.6

Elementární analysa (vztaženo na bezvodou látku) vypočteno: C 41,52 H 4,93 Gd 18,74 N 10,02 S 3,82 zjištěno: C 41,33 H 5,05 Gd 18,61 N 10,17 S 3,75. c) Gadoliniový komplex 10-{6-[4-(2,6-dioxo-3,4,5,6-te-trahydro-2H-pyran-4-yl)-fenyl]-2-hydroxy-5-thio-4,6--diazahexy1}-l,4,7-tris(karboxymethy1)-l,4,7,10-te-traazacyklododekanu 10 g (li,92 mmol) sloučeniny z příkladu 19b) se rozpustí v 50 ml dimethylformamidu a při teplotě 0 °C se přidá 3,7 g (17,88 mmol) dicyklohexylkarbodiimidu. Re-akční směs se míchá přes noc při teplotějnístnosti, načež se ochladí na teplotu 0 °C a odfiltruje se vysrážená močovina. K filtrátu se potom za míchání přikape 500 ml dietyletheru. Po sušení přes noc ve vakuu při teplotě 50 °C se získá 9,6 g (95 % teorie) v názvu uvedené sloučeniny ve formě lehce nažloutlé pevné látky.

Obsah vody : 2,7 % . 97

Elementární analysa (vztaženo na bezvodou látku) vypočteno: C 42,43 H 4,79 Gd 19,15 N 10,24 S 3,91 zjištěno: C 42,28 H 4,93 Gd 19,03 N 10,05 S 3,83. d) 64-amidnový konjugát z gadolinioVého komplexu 10-{6-[4-(2,6-dioxo-3,4,5,6-tetrahydro-2H-pyran-4-yl)--fenyl]-2-hydroxy-5-thioxo-4,6-diaza-hexyl}-l,4,7--tris(karboxymethyl)-1,4,7,10-tetraazacyklododekanu s deblokovaným 64-polyaminem podle příkladu 17h) 1,74 g (0,1 mmol) 64-benzyloxykarbonylaminu, popsaného v příkladě 17h) , se rozpustí v ledové kyselině octové a za míchání se smísí se 33% bromovodíkem v ledové kyselině octové. Po 3 hodinách se počínající sráženi dokončí pomocí diethyletheru, vzniklý 64-amin-hydrobromid se promyje diet-hyletherem a ve vakuu se vysuší. Získaný zbytek se potom vyjme do vody a přídavkem 1 N hydroxidu sodného se hodnota pH upraví na 9,5. Do tohoto roztoku se potom v prvné formě po částech přidá 15,76 g (19,2 mmol) isothiokyanátu, popsaného v příkladě 19c), přičemž hodnota pH se udržuje konstantní dalším přídavkem hydroxidu sodného na 9,5 . Po ukončení přídavku se reakční směs nechá míchat přes noc při teplotě místnosti a potom se zneutralisuje pomocí zředěné kyseliny chlorovodíkové. Roztok se potom podrobí ultrafiltrači (YM3 AMICON) a retentát se konečně lyofilisuje. Výtěžek : 5,64 g (83 % teorie), obsah vody (Karl Fischer) : 7,6 %, stanovení Gd (AAS) : 14,7 % . - 98 - 98 mL* . T*-1, i· *a .'·__

I

Elementární'analysa, (vztaženo na*bezvodou látku) vypočteno:C 43,08 H 4,96 Gd 16;02 N 11,68,. Na.2,34 S,?3,27 zjištěno: C 43',1)3 ^ H 4,97 Gd 15,86 N lť,96 Na 2,05 S^3,ll 20 P ř í k 1 a d i-' · * * i a) 10-[3-(4-aminofenoxy)-2-hydroxypropyl]-1,4,7řtris· > , , u , (karboxymethyl)-1,4,7, ΙΟ·?tetraazacyklododekan ,

' 1 1» Y Γ ' JI " ř * l'5“g^(‘27‘77‘ mmol‘) K“10 -[‘3-!L('4-'nitrofenoxy ) - 2-hydroxypro-pyli^lT^TT^tris (*karbóxyine'thyl-)^d.-7477vl0-dod.ékanu—(ΈΡ-0^485 ~ J . . .. ' 1' \ ' iJ . . t> _ ' ' * -045-,- Scheri-ng- -AGy •‘ρίτί'+Ι-^α-)·.·'.-••sěr.r.oz-pust-í-:.vp.~ J-250-. ml* methyl- t,?-alkoholu a přidá , se 5 g palladiového. katalysátoru ·*ϋ(10 % .P,d * · ’ . , .'V *' . h v r« *" na aktivním uhlí) ,!‘načež” se hydřogénuje^přeš' noc při"h;* • i· ' „teplot ě„,místnost i ,.^Kat,alysátpr^se..pot,Q!i!. odfiltruje^a^zís-___ r % ,·..-',:·· .11 , l"*' , ν*Λ '** '-kaný^-f:-iili-trát^še-ve“vakuu^odpaří“do^suehaŤ^-’—........

Vytěžek : 14,43.g (98 % teorie) krémově zbarvené pevné látky, obsah vody : 3,8 % . r í - . - · '· * > - , - · . Elementární análysa (vztáženo na bezvodou látku) „ vypočteno: C 54,00 H 7,29 N 13,69 zjištěno: C 5.3,88 H 7,41 N 13,51 . b) 10-[3-{4-bis(karboxymethyl)-aminofenoxy}-2-hydroxypropyl ]-1,4,7-tris(karboxymethyl)-1,4,7,10-tetraaza-cyklododekan 14 g (27,37 mmol) sloučeniny z příkladu 20a) , 15,21 g (109 mmol)m kyseliny bromoctové a 4l,5 g (300. 99 mmol) uhličitanu draselného ve 200 ml ethylalkoholu se zahřívá po dobu 2 dnů za varu pod zpětným chladičem. Pevná látka se potom odfiltruje a k filtrátu se přidá 50 ml koncentrované kyseliny chlorovodíkové, načež se ve vakuu odpaří do sucha. Získaný zbytek se čistí na RP-18 (LiChro

O

Prep^/pohyblivá fáze : tetrahydrofuran/voda-gradient). Výtěžek : 7,81 g (43 % teorie) krémově zbarvené pevné látky, obsah vody.: 5,4 % .

Elementární analysa (vztaženo na bezvodou látku) vypočteno: C 51,67 H 6,58 N 11,16 zjištěno: C 51,48 H 6,71 N 11,03 . c) Gadoliniový komplex 10-(3-{4-bis(karboxymethyl)-ami-nofenoxy}^2-hydroxypropyl]-1,4,7-tris(karboxymethyl) --1,4,7,10-tetraazacyklododekanu K 7,5 g (11,95 mmol) sloučeniny z příkladu 20b)m a 2,17 g (5,97 mmol) gadoliniumoxidu se přidá 100 ml vody a míchá se po dobu 3 hodin při teplotě 90 °C . Potom se nechá reakční směs ochladit na teplotu místnosti a nechá se míchat po dobu jedné hodiny se 3 ml kyselého kationtoméniče (IR-120/H+-forma). Iontoměnič se potom odfiltruje a filtrát še lyofilisuje. Výtěžek : 10,18 g (97 % teorie) amorfního prášku, obsah vody :11,3¾.

Elementární analysa (vztaženo na bezvodou látku) vypočteno: C 41,48 H 4,90 Gd 20,11 N 8,96 zjištěno: C 41,27 H 4,98 Gd 19,93 N 8,85 . 100 d) Gadoliiliový .komplex 10- [ 3-{4- (2,6-dioxomorfolino)-fe-noxy) -2-hydroxypropyl ] -1,4,7--tris (karboxymethyl) --1,4,7,10-tetraazacyklododekanu 10 g (12,79 mmol) sloučeniny z příkladu 20c) se rozpustí v 50 ml dimethylformamidu a při teplotě 0 °C se přidá 5,28 g (25,58 mmol) dicyklohexylkarbodiimidu. Re-akční směs se míchá přes noc při teplotě místnosti, potom se ochladí na teplotu 0 °C a vysxážená močovina se odfiltruje. K filtrátu se přikape za míchání 500 ml diethyletheru, přičemž v názvu uvedená sloučenina vykrystalisuje. Tato se potom odfiltruje a promyje diethyletherem. Po sušení přes noc za vakua při teplotě 50 °C se získá 9,67 g (69 % teorie) v názvu uvedené sloučeniny ve formě lehce nažloutlé amorfní pevné látky.

Obsah vody : 3,0 % .

Elementární analysa (vztaženo na bezvodou látku) vypočteno: C 42,46 H 4,75 Gd 20,59 N 9,17 zjištěno: C 42,27 H 4,91 Gd 20,36 N 9,03 . e) 64-amidnový konjugát z gadoliniového komplexu l0-{3-[4-(2,6-dioxomorfolino)-fenoxy]-2-hydroxypropyl) -1, 4,7-tris(karboxymethyl)-1,4,7,10- -tetraazacyklododekanu s deblokovaným 64-polyaminem podle příkladu 17h) 1,74 g (0,1 mmol) 64-benzyloxykarbonylaminu, popsaného v příkladě 17h) , se rozpustí v ledové kyselině octové a za míchání se smísí se 33% bromovodíkem v ledové kyselině octové. Po 3 hodinách se počínající srážení dokončí pomocí diethyletheru, vzniklý' 64-ámiň-hydrobromiď se1 promyje /diet- • , . .· u . . ' f- * · »· · ·' ·,“» · V - ' *·-' *·'· - · * hýletherem a ve vakuu se vysuší. ; ’ * ' r-T . , ‘Získaný zbytek se potom vyjme do vody v a přídavkem" !i v ·' M ' ,v 1—N—hydrox-i-du—sódného—se~hodnota-pH“upraví na 9T5 Do to- · · w í * r ' ^ . +. * / hoto roztoku se potom v prvné formě po částech přidá ,^14;68 g (19,2 mino!)- anhydridu, popsaného*v příkladě. 20d) / ~:í přičemž hodnota pH se udržuje konstantní dalším přídavkem hydroxidu sodného na 9,5 . Po ukončení přípávku.se řeakční směs nechá míchat přes noc při teplotě místnosti a potom se zneutralisiijě pomocí zředěné kyseliny chlorovodíkové'. Roz-tok“se 'potom 'podrobí"“ultraf ilt raci (YM3 AMICGN) 1 a retenxát • . . .·'··' -r - - * i . ^ * , ______ · . .___.__ se konečně ^lyof irisu je r‘-y , i ' Výtěžek ; -*5 /00 ;g ^'(78^%^teórié) ,· "

* ' I ‘ 4 S obsah vody (Karl ^Fischer) : 7,7 5, stanovení Gd (AAS)*:, 15,7 % . ssscv'

Elementární analysa (vztaženo, na bezvodou.látku) vypočteno:C 43,15 ^ H 4,93 zj ištěiio: C 43,1-7 · H. 4,89

Gd 17,01 N 10,89 Na 2/49, Gd 16,80 !.;Ν'10/54/ ' Ná'2/33 21 Příklad a) Kyselina meso-2,3-bis (benzyloxykarbonylamino) - janta rová 14,81 g (100 ramol) kyseliny diaminojantarové (meso forma) se suspenduje ve 300 ml tetrahydrofuranu a hodnota pH se upraví pomocí 2 N hydroxidu sodného na 9 . Při teplotě 0 °C se přikape za silného mícháni 42,65 g (250 102 mmol) benzylesteru kyseliny chlorraravenči, rozpuštěných v 50 ml tetrahydrofuranu a hodnota pH se udržuje současným přídavkem 2 N hydroxidu sodného na 9 . Reakční směs se potom nechá míchat po dobu 5 hodin při hodnotě pří 9 a při Teplotě místnosti, načež se hodnota pH upraví přídavkem 10¾ kyseliny chlorovodíkové na 2 a přidá se 300 ml nasyceného roztoku chloridu sodného. Organická fáze se potom oddělí, ve vakuu se odpaří do sucha a získaný zbytek se chromato-grafuje na silikagelu za použití směsi roethylenchloridu a methylalkoholu (10 : 1) a 2 % kyseliny octové. Výtěžek : 27,07 g (65 %teorie)· bezbarvé pevné.látky.

Elementární analysa vypočteno: C 57,69 H 4,64 N 6,73 zjištěno·: C 57,59 H 4,93 N 6,66 . b) Anhydrid kyseliny 2,3-bis(benzyloxy kar bony lamino) --jantarové 25 g (60,04 mmol) sloučeniny z přikladu Zla) se míchá ve 200 ml aeetanhydridu po dobu 12 hodin při teplotě 50 °C . Potom se ochladí na ledové lázni na teplotu 0 °C a pomalu se přikape 600 ml diethyletheru. Vytvořené krystaly se odfiltrují, promyjí se dvakrát vždy 100 ml diethyletheru a vysuší se ve vakuu přes noc při teplotě 50 °C . Výtěžek : 23,44 g (96 % teorie) bezbarvých lístků. Elementární analysa vypočteno: C 60,30 H 4,55 N 7,03 zjištěno: C 60,15 H 4,65 N 6,94 , 103 c) Úplné chráněný benzyloxykarbonyl-32-amin na basi (diamino)-sukcinylovaného N,N',N’’ ,N’’’-tetrakis-(trilysyl-aminoethyl) -methanu 10 g (2,62 mmol) sloučeniny z příkladu 17d) se rozpustí ve 100 ml ledové kyseliny octové a zá míchání s'é ,,, ¥ přidá 100 ml 33% bromovodíku v ledové kyselině octové. "Po 2 hodinách^se počínající srážení dokončí diethyletherem, * vzniklý hexadeka^-bromid se odfiltruje a. promyje diethyletherem a bez dalšího čištění se použije v další reakci. * Výtěžek : kváň^iťátivníV» ' ; Takto získaný hydrobromid se rozpustí ve 200 ml pyridinu a„ 20 ml triethylaminu.:a přidá-se . l.g .(δ,18 mmol.) 4-dimetylaroinopýridinu, Při teplotě 0 °C se potom přikape — „—33,40-g__~(83,84-, mmol)—rSloučeniny-z-příkladu- -21b)— rozpuš--těných^ve “T0Ó—ml^in^ťKyrfořmáraičiu a reakcm. směs sé:~miofirá přes noc při teplotě místnosti. Potom se odpaří do sucha, získaný zbytek se vyjme do 300 ml methylenchloridu a pro-myje se třikrát, vždy 100 ml -/5% roztoku uhličitanu:drasel-- ného. Organická -fáze*sě vysuší pomocí bezvodého síranu; horečnatého, ve vakuii se zahustí a získaný zbytek sé chro-matografuje na silikagelu*za použití směsi methylenchloridu a methylalkoholu (20 : 1). . Výtěžek : 17,07 g (81 % teorie) bezbarvé pevné látky. Elementární - analysa vypočteno: C 59,28 H 5,61 N 10,45 zjištěno: C 59,13 H 5,79 N 10.29 . 104 d) 1-hydroxy-ll-(4-nitrofenoxy)-3,6,9-trioxaundekan

Ke 100 g (515,0 mmol) tetraethylenglykolu, 73 g (1300 mraol) jemné práškovítého hydroxidu draselného a 500 mg tetrabutylamoniumhydrogensulfátu v 500 ml toluenu se při teplotě 0 °C přidá 18,16 g (128,7 mmol) 4-fluornitroben-zenu a reakční směs se míchá přes noc při teplotě místnosti. Potom se přidá 1000 ml nasyceného roztoku chloridu sodného, organická fáze se oddělí, vysuší se pomocí bezvodého síranu horečnatého a ve vakuu se odpaří do sucha. Získaný zbytek se chromatografuje na silikagelu.za použití směsi methylen-chloridu a isopropylalkoholu (15 : 1) . Výtěžek : 27,19 g (67 % teorie) žlutavé olejovité kapaliny, která za stání ztuhne.

Elementární analysa

V vypočteno; C 53,33.. H 6,71 N 4,44 . zjištěno: G.53,20 H.6,85 N 4,28 . e) l-i:erc.-butoxy-13-(4-nitrofenoxy)-2,5,8,ll-tetraoxa-tridekan

Ke 25 g (79,28 mmol) sloučeniny z příkladu 21d) , 8,9 g (158,6 mmol) jemně práškovítého hydroxidu draselného a 200 mg tetrabutylamoniumhydrogeňsulfátu ve 300 ml toluenu se při teplotě 0 °C přidá 18,6 g (95,1 mraol) terč.-butylesteru kyseliny bromoctové a reakční směs se míchá po dobu 3 hodin při teplotě 0 °C . Potom se přidá 200 ml vody, organická fáze se oddělí, vysuší se pomocí bezvodého síranu hořečnatého a za vakua se odpaří do sucha, získaný zbytek sě chromatografuje na silikagelu za použití směsi methylenchloridu a acetonu (10 : 1) . ' i.) , - 105 - Μ Výtěžek : 29.6 -g (87 % teorie)1 2 žlutavé,Ivazké olejovíté i -i - -A2.2· kapaliny. ť'

Elementární analysa i Ji. i,·. Ή· . 1 vypočteno: C 55,93 H 7,28 2 N 3,26 1 l ujištěno;, ič 55,78 v'h-7,41v N;3,15 / »f ·’·. ,'f) ·2 1-karboxy-13- (4-nitrofenoxy) -2,5,8,11-tetraoxa-tri- ' t « Λ ' 2 · děkan 2·· · 2" 2 ^ , . v —^8"g-^(-6'5“ 2^mmol·)—Tsloučeniny-TZ ^příkladu tJlle). . se . .,

1 2(, . , . V 1,1 ^ ‘ ‘ 2 ’^J —rozpustí ve— 200^ml—methylenchloridu, při—teplotě—0—C-se f' . :-- : 2 . . ·· ••přikape-^l50'-«l--kyseliný-ítrif-uor-octové. a- reakění-směs se e :..·«·:· · · ' · ' . t «' nechá ohřát na teplotu místnosti. Po jedné hodině,. se: dpaří , , V ť' . j " . . . do sucha á7 získaný zbytek ;se překrystaluje z málého; množství a. hexanu. . ............ 1, 2 ____ _(_ —Výt-ěžek-^-:--T2-3T4-g—^(-96-%-t-eorie)4--lehee-ž-l-u-t-avě—zbarveňě-pev- né látky.

Elementární analysa' vypočteno: C 51,-47 «-'6,21 '· N 3,75 zjištěno: C 51,38 ‘ H 6,31 N. 3,61 . g) . N-hydroxyšukcinimidester 1 - kar boxy-.13 - (4 - ni tr of enoxy) -2,5,8,ll-tetráoxatridekanu 10 g (26,78 mmol) sloučeniny z příkladům 21f) a 3,7 g (32,14 mmol) N-hydroxysukcinimidu se rozpustí ve 20 ml chloroformu a při teplotě 0 °C se přidá 6,63 g (32,14 mmol) dicyklohexylkarbodiimidu. Reakční směs se míchá po dobu 24 hodin při teplotě místnosti, načež se ochladí na 106 ledové lázní a vysrážená močovina se odfiltruje. Filtrát se odpaří ve vakuu do sucha a získaný zbytek se překrystaluje z malého množství ísopropylalkoholu. Výtěžek : 11,21 g (89 % teorie) lehce žlutavé krystalické pevné látky.

Elementární analysa vypočteno: C 51,06 H 5,57 N 5,95 zjištěno: C 51,17 H 5,61 N 5,83 . h) Gadoliniový komplex 10-[18-(4-nitrofenoxy)-2-hydroxy--5-oxo-4-aza-7,10,13,16-tetraaza-oktadecyl] -1,4,7--tris(karboxymethyl)-1,4,7,10-tetraazacyklododekanu <r · K 10 g (17,43 minol) sloučeniny z příkladu 2c) ve 100 ml dimethylformamidu a 20 ml triethylaminu se při > - T ' teplotě místnosti přidá 9,84 g (20,92 mmol) sloučeniny z příkladu 21g) a reakční směs se míchá přes noc. Potom se odpaří ve vakuu db sucha a získaný zbytek se chromatografuj e

D na RP-18 (LiChroPrep /pohyblivá fáze : voda/tetrahydrofuran-gradient). Výtěžek : 14,3 g (83 % teorie) amorfní pevné látky, obsah vody : 5,8% .

Elementární analysa (vztaženo na pevnou látku) vypočteno: C 42,66 H 5,51 Gd 16,93 N 9,05 zjištěno: C 42,51 H 5,68 Gd 16,80 N 9,15 . f) Gadoliniový komplex 10-[18-(4-aminofenoxy)-2-hydroxy--5-oxo-4-aza-7,10,13,16-tetraoxa-oktadecyl]-1,4,7--tris(karboxymethyl)-1,4,7,10-tetraazacyklododekanu 107 14 g' (15,07 mmol) sloučeniny z příkladu 2lh)' se rozpustí ve 1 200 ml methylalkoholu, přidají ,se 4 g palladi ového katalysátoru (10 % Pd na C) a hydrogenuje se po do--bu—8—hodin~pri—teploté-^mí stnost i..—.Kataly.sátor_s.e^po.t.ojn odfiltruje a filtrát se odpaří do sucha. Výtěžek : 13,41 g (99 % teorie) krémově zbarvené pevné ; látky, ; obsah vody : 6,1 % . ' *

Elementární analysa (vztaženo na bezvodou látku) vypočteno:™ G~44,09 —H 5,94 -—Gdl7,49 N-9,55 zjištěno: C 43,93 H 6,10 Gd 17,28 N 9,22 k)

Gadoliniový komplex 10-[18-(4-isókyanátofenoxy)-2- »·:; ^hy dt oxy- 5,- oxo^-aza^ 7,10,13,16-tetraoxa-oktadecyl ] -^-l^dT^-tris^karboxymet-hy-l·-)^-!-^-^-^^:-"tet-r-aazacyklodo-dekanu . 10 g (11,12 mmol) sloučeniny z příkladu· 21i) se„t rozpustí ve 100 ml vody a přidá se 3,84 g (33,36 mmol)e* thiofosgenu v 50 ml chloroformu. Reakční směs se míchá,po dobu jedné hodiny při teplotě 50 °C , potom se ochladí na teplotu místnosti, organická fáze se oddělí a vodná fáze se dvakrát vy třepe vždy 100 ml chloroformu. Vodná fáze se odpaří do sucha a získaný zbytek se při teplotě, místnosti rozmíchá ve 100 ml acetonu. Pevná látka se odfiltruje a promyje se diethýietherem. Po sušení přes noc ve vakuu při teplotě 40 °C se získá 10,47 g (97 % teorie) krémově zbarvené pevné látky.

Obsah vody : 3,0 % * 108

Elementární analysa (vztaženo na bezvodou látku) vypočteno: C 43,39 H 5,46 Gd 16,71 N 8,93 S 3,41 zjištěno: C 43,20 H 5,60 Cd 16,53 N 8,75 S 3,36 . 1) 32-thiomočovinový konjugát z gadoliniového komplexu 10-[18-(4-ísokyanátofenoxy)-2-hydroxy-5-oxo-4-aza--7,10,13,16-tetraoxa-oktadecyl]-1,4,7-tris(karboxy-methyl)-1,4,7,10-tetraazacyklododekanu s deblokováným 32-aminem z příkladu 21c) 1,61 g (0,2 mmol) 32-benzyloxykarbonylaminu, popsaného v příkladě 2Íc) , se rozpustí v ledové kyselině octové a za míchání se smísí še 33% bromovodíkem v ledové kyselině octové. Po 3 hodinách se počínající srážení dokončírpomocí diethyletheru, vzniklý 32-amin-hydrobromid se promyje diet-hyletherem a ve vakuu se vysuší. Získaný zbytek se potom vyjme do vody a přídavkem 1 N hydroxidu sodného se hodnota pH upraví na 9,5 . Do tohoto roztoku se potom v pevné formě po částech přidá 9,OS g (9,6 mmol) isothiokyanátu, popsaného v příkladě 21k), přičemž hodnota pH se udržuje konstantní dalším přídavkem hydroxidu sodného na 9,5 . Pa ukončení přídavku se reakční směs nechá míchat přes noc při teplotě místnosti a potom se zneutralisuje pomocí zředěné kyseliny chlorovodíkové; Roztok se potom podrobí ultrafiltraci (YM3 AMICON) a retentát se konečně lyofilisuje. Výtěžek : 6,10 g (83 % teorie), obsah vody (Karl Fischer) : 3,5 %, stanovení Gd (AAS) : 14,0 % . * 109 - , ii>· w” '1 — 2 1»1f1;··

A <v; . i 1

Elementární. analysa (vztaženo na b.ezvodou, látku) _ * vypočteno:C 43,14 H 5,51 Gd 14,70 · N 10,31 Na 1,07 S 3,41 * t zjištěno: G 42,96 H 5^7? " Gd Ί4.50. N 10.39 .Na 0,94 S 2,76 P ř i k .1 ;á d 4-22, 32-thibmočov.inovýJkonj-úgát z.gadoliniového komplexu 1 , 1 i ' ‘ ' V \ Ϊ. ‘ 4 ’ ' A, · 10-[3-(4-isokyanátofenoxý)-2-hydroxy-,propyl] -1,4,7-tris-(karboxymethyl)-1,4.7,10-tétřaazacyklododekanu s deblo- ' _ ^ .. T i . . > -kov-aným~32~aminem^z.x)ř.íkladu-~21c.):>.---iíi., . .. _______· .

- ’ 1 ' 'H . - ^V· · 1·' ••V ^s· f m .'t/. +; , f 1tr. ·1 . iV ' · " ,p . i . . "... 1 r ' '' ’ 1. . ‘ . . ......1 . 1 V, i fr·' · ;’ . 1 1_. «... . . . . r - - _:_ ' _|_j_ _ ^ \ ·. i .61.;g_ jj(0.; 2 ,mmol;),3 2r benzyípxykarbonylaminu. p_op_sa- , /' ' h i ' ' ' 1 . , . v j něho v příkladě 21c) , se rozpustí v ledové kyselině, octové -a -zá-. mí chán i se smísí. :se^33% bromovodíkem: ..y:‘.'ledové . kyselině^. >. " -Λ t ^rV«vv141·» octové. Po 3 hodinách se počínající srážení dokončí .pomocí •3®· . t 1 r 1 "č1 g (9,6 mmol) isothiokyanátu, popsaného v příkladě 12d) 1 EP-485 045 , přičemž hodnota pH se udržuje konstantní dalším přídavkem hydroxidu sodného na 9,5 . Po ukončení přídavku se reakční směs nechá míchat přes noc při teplotě místnosti a potom se zneutralisuje pomocí zředěné kyseliny chlorovodíkové. Roztok se potpm podrobí ultrafiltraci (YM3 AMICON) a retentát se konečně lyofilisuje. Výtěžek : 4,56 g (82 % teorie), obsah vody (Karl Fischer) : 4,0 %, stanovení Gd (AAS) : 17,9 % . 2 ^d_iethy_lérhe.ru.,_vzniklv^3,2^amin-hyjdro.b.romi.d_s.e^pxoTnyje4idj.ejt-J hyletherema ve vakuu se vysuší. Získaný zbytek .se potom vyjme do vody a. přídavkem 1 N hydroxidu-sodného.se hodnota pH upraví na 9,5 . Do to1 T· hóto roztoku se. potom v.;’,peyné:formě po částech přidá 6,80 110

Elementární analysa (vztaženo na bezvodou látku) vypočteno:C 40,81 H 4,76 Gd 18,81 N 11,52 Na 1,37 S 3,84 zjištěno: C 40,67 H 4,98 Gd 18,60 N 10,70 Na 1,21 S 3,47 Příklad 23 a) Hexakis-N-(2-aminoethyl)-(1,3,ř]-triazin-2,4,6-trí- tyitriamin 18,41 g (100 mmol) 2,4,6-trichlor-s-triazinu a , 92,99 g (315 mmol) bis-(2-trifluoracetylaminoethyl)-aminu (vyrobeno podle US-P č. 4 415 737) se suspenduje ve směsi 300 ml vody a 300 ml dioxanu a za míchání se teplota zvýší: na 50 °C . Při kapá váním nasyceného roztoku hydrogenuhli-čitanu' draselného se hodnota ph udržuje*v rozmezí 7 až 8 . Když se již hodnota pH nemění, zvýší, se přídavkem, 1 N hydroxidu draselného na 9 a teplota se zvýší na 30 minut na 70 °C . Potom se ve vakuu směs zahustí na 1/10 svého ;.· objemu, ochladí se na ledové lázni a sraženina se oddělí i odsátím, získaný zbytek se prekrystaluje z isopropylalko-holu. Získá se takto 29 g v názvu uvedené sloučeniny s teplotou tání 168 až 172 °C .

Elementární analysa (vztaženo na bezvodou látku) vypočteno: C 46,85 H 9,44 N 43,71 zjištěno: C 46,62 H 9,80 N 43,92 . ltl b) Úplně chráněný benzyloxykarbonyl-24-polyamin na basi hexakis-N-[2-(trilysyl-amino)-ethyl]-[1,3,5} -triazin--2,4,6-triyltriamin 7,0 g (7,5 mmol) chráněného "tri-lysinu", popsaného v příkladě lc) , 1,2 g (7,5 imnol) l-hydroxybenzotriazolu a 2,4 g (7,5 mmol) 2-(lH-benzotriazol-l-yl)-l,l,3,3-te-tramethyluronium-tetrafluorborátu (TBTU) se rozpustí ve 100 ml dimethylformamidu a reakční směs se míchá po dobu 15 minut. Roztok se potom smísí s 5,16 ml (30 mmol) N-et-nyldiisopropylaminu a 385 mg (1 mmol) hexakis-N-[2-ami-noethyl]-[1,3,5]-triazin-2,4,6-triyltriaminu (příklad 23a)) a reakční směs se míchá přes noc při teplotě místnosti. Po ukončení reakce se směs ve vakuu odpaří a získaný zbytek se chromatografuje na silikagelu za použití směsi ethylesteru kyseliny octové a ethylalkoholu (3:1). Výtěžek : 4,02 g (68 % teorie) . v* 1 'V<-

Elementární analysa vypočteno: C 63,98 H 6,80 N 11,37 zjištěno: C 64,15 H 7,19 N 11,51 . c) 24-gadolinium-DTPA-monoaraid na basi hexakis-N-[2- -(trilysyl-amino)-ethyl]-[1,3,5]-triazin-2,4,6-tri-yltriaminu 1,18 g (0,2 mmol) poly-benzyloxykarbonylaminu, popsaného v příkladě 23b) , se rozpustí v ledové kyselině octové a za míchání se smísí se 33% bromovodíkem v ledové kyselině octové. Po 3 hodinách se počínající srážení dokončí pomocí diethylethexu, vzniklý 24-amin-hydrobromid se promyje diethyletherem a ve vakuu se vysuší. 112 Získaný zbytek se potom vyjme do vody a přídavkem 1 N hydroxidu sodného se hodnota pH upraví na 9,5 . Do tohoto roztoku se potom v pevné formě přidá 5,8 g (14,4 mmol) kyseliny N^-(2,6-dioxomorfolinoethyl)-N^-(ethoxykar-bonylmethyl)-3,6-diazaoktandikarboxylové, popsané v příkladě 13a) EP-0 331 616 , přičemž hodnota pH se udržuje konstantní dalším přídavkem hydroxidu sodného na 9,5 . Po ukončení přídavku se hodnota pH reakční směsi upraví pro zmýdelnění DTPA-ethylesteru 5 N hydroxidem sodným na > 13 a nechá se míchat přeš noc při teplotě, místnosti. Potom se hodnota pH upraví pomocí koncentrované kyseliny chlorovodíkové na 5 a smísí se se 2,61 g (7,2 ramol) Gd20^ , míchá se po dobu 30 minut při teplotě 80 °C a po ochlazení se zneutralisuje na pH 5 . Roztok se potom podrobí ultrafil-traci (YM3 AMICON) a retentát se konečně filtruje přes membránu lyofilisuje. Výtěžek : 3,38 g (88 % teorie), obsah vody (Karl Fischer) : 7,3 %, stanovení Gd (AAS) : 20,1 % . <

Elementární analysa (vztaženo na bezvodou látku) vypočteno: C 40,78 H 4,37 Gd 19,68 N 8,77 Na 2,88 zjištěno: C 41,03 H 4,61 Gd 18,82 N 8,98 Na 3,01 .

Analogickým způsobem se získá za použití ^2^3 dysprosiový komplex.

Elementární analysa (vztaženo na bezvodou látku) vypočteno: C 40,51 H 4,34 Dy 20,21 N 8,71 Na 2,86 zjištěno: C 40,39 H 4,60 Dy 19,90 N 8,95 Na 2,62 . -113 -

Η-

;p ř ί k r a.cT 24 *A % = * ‘ · * " , ► / - . · , . ' * . ‘+ , a) '* "Ί *‘‘4,7,1Ό-; 13,16-hexákis [ benzyloxykarbonylglycyl ] - * , -1.4.7^ ΙΟ;13Ť16-hexaazacvklooktadekán * ! * t, ' ~ l" * t- . · · <. 516; mg (2 mmol) 1,4,7,10,'13,16-hexáázacyklóoktade- ^ , ,, '' ;71 í; “ -· . ť 5 kanu; (Hexacyclen; Fluka). -se s'toluenem azeotropicky . * -odvodní.k K^ochlázenému roztoku hexacyklenu v toluenu přidá při teplotě místnosti roztok .-3,14„g (15 mmol) benzyloxy- -•Λ,; , vV * “ : , * ' ^ , kárbonýl-glycinu \ (fluka) v tetrahydrofuranu a .3,71 -g (15 -i’ _ * .· * . . ··*.» -mmolý".~ě-eΐ-hoxyτ-l·-eΐhqx-ykar-bony-l-lr2-dihydrochinolinu_. . (EEDfí *· - · ··!»». * · ..v » ' -’· * * ' . *. ·. r ** * *- -· —Fluka) ^a reakčnísměsse míchá-přes-noc___LPo ukončeni„re- „akce-sě-produk-tipřídaykem, hexanu..-vy.sráží a .vytvořená . sraženina se chromatografuj.e na silikagelu za použití směsi dichlormethanu; hexanu a isopropylaikoholu - (20 : 10 : 1). Výtěžek : 1,83 g_(65 % teorie) .__„Vf ·' 1 2 *' vj·. v ^^ * « ;i " r 1 ' * *' *" 1

Elementární analysa t vypočteno:' C 61,53 H 6,02 N 11,96 zjištěno: "C 61,'40 H 5,96 N 12’,08 . 2 i,:" .* . . j " * * ’ ;r - Λ 7 b) 1,4,7,10,13,16-hexakis fN.N-bisíbenzyloxykařbonylanii-noethyl) -glycyl]-1,4,7,10,13,16-hexaazačyklooktadekan 1,41 g* (1 mmol) hexa-benzylpxykarbonylaminu, popsaného v předchozím příkladě, se rozpustí v ledové kyselině octové a za míchání se smísí se 33% bromovodíkem v ledové kyselině octové. Po 60 minutách se počínající srážení dokončí pomocí diethyletherú, vzniklý héxamin-hydrobromid se promyje diethylethérem, ve vakuu se vysuší a bez dalšíhoř čištění sě použije v dále popsané reakci. 114 114

Výtěžek : kvantitativní. 1,09 g (1 mmol) takto vyrobeného hydrobromidu se suspenduje v 50 ml acetonitrilu a přidaji se 3 ml triet-hylaminu Potom se přidá 3,54 g (20 mmol) N-benzyloxy-karbonylaziridinu (vyrobeno podle J. Chem. Soc. Perkín Trans. 1, 21-26, 1993) a reakční směs se zahřívá pod zpětným chladičem pod dusíkovou atmosférou po dobu 5 dnů. Potom se odpaří do sucha, získaný zbytek se vyjme do 100 ml methylenchloridu a promyje se dvakrát vždy 100 ml 5% roztoku uhličitanu draselného. Methylenchloridová fáze se vysuší pomoci bezvodého síranu horečnatého, odpaří se a získaný zbytek se chromatografuje na silikagelu za použití směsi methylenchloridu, methylalkoholu a triethylaminu (20 : 1 : 0,1) . Výtěžek : 2,29 g (84 % teorie) světle žluté važké olejovaté kapaliny.

Elementární analysa vypočteno: C 63,42 H 6,65 N 12,33 zjištěno: C 63,29 H 6,60 N 12,47 . c) Úplně chráněný benzyloxykarbonyl-24-polyamin ze 12-aminu 1,4,7,10,13,16-hexakisfN,N-bis(aminoethyl) -glycyl]-1,4,7,10,13,16-hexaazacyklooktadekanu, alky-lovaného benzyloxykarbony1-aziri dinem 1,36 g (0,5 mmol) sloučeniny z příkladu 24b) se rozpustí ve 100 ml methylalkoholu a přidají se 3 g Pearl-manova katalysátoru (hydroxid palladnatý na aktivním uhlí; Fluka) , načež se hydrogenuje po dobu 10 hodin při teplotě místnosti a tlaku 0,5 MPa . Potom se katalysátor odfiltru- - 115 4 M r Λ1 2-- J-ifr. . je, ^filtrát se odpaří do sucha a získaný izbytek se bez dalšího čištění,použije v následující, reakci. Výtěžek : 0,56 g (kvantitativní).·

1 2, ·'- i- i. W ψ 2 --11 I K 0;5‘6 g . ‘ (0,5 mmol")' takto vyrobeného volného " 12-aininu v 50 ml acetonitrilu se přidá ,3,54 jg (20 mmol) 2 ?2 S. " . 2 ; l ,,, "'.N^benzyloxykarbonylaziridinu ^ (vyrobenípodlé,..J . Chem. Soc. y W. / ' ' ’ . '2 " ” . f. , ' ť ' , .

Per-kin; Trans.„1,- 21-26 , „1993) a reakčníí směs se zahřívávpo . · ·· · · 2 ; - i " ' ' - ,i v. rr dobu, (5 dnů pod zpětným chladičem a pod dusíkovou atmosfé- . » f r rou. Potom se odpaří do sucha, získaný zbytek se vyjme do 100 mi; methylerichloridu a promyje se dvakrát vždy. 100 ml * 5% řoztoku^uhličitáriu draselného. V MéthyléncHlóridová fáze ; ^ n - 1 , _____^ , _________, f > ' · - . . · _ ·- : · ' . . se oddělí, vysuší se pomocí bezvodého síranu hořéčnatéhb - a odpaří se. Získaný zbytek se chromatografuje ria ^ šilikagelu“-zá použití i směsi, methylenchloridu .^methylalkoT. holu a.triethylaminu (20 : 1 : .0,1);, ; , . 'Výtěžek""2723~gOTC8'3"“%”téóřiě)T^svetle”ž 1'uťé ' važké’ plej o^" ř v·’ 2 2 v “4r< V.f)|

1

Vité kapaliny'.

Elementární analysa • I 2 2; · vypočteno: C4 64,41 H.6,98 N 12,52 ·' “ V·. V·2·· · 1 . · '’. '22’ ’ ” w —....· .. · · ·· > -Λ zjištěno i Č 64,20 H 7,15 N 12,44 . d) 24-Gadóliniiim-DTPA-raonoaniid na basi deblokovaného 2 24-aminu"z přikladu ' 24c) .. .. ' -j: . , ·' . ‘ v· · .1,07 g (0,2 mmol) sloučeninypopsané v příkladě 24c) , se rozpustí v ledové kyselině octové a za míchání se smísí se 33% bromovodíkem v ledové kyselině octové. Po 3 hodinách se počínající srážení dokončí pomocí diethyletheru, vzniklý 24-amin-hydrobrpmid se promyje diethyletherem a ve vakuu se vysuší. - 116 Získaný zbytek se potom vyjme do vody a přídavkem 1 N hydroxidu sodného se hodnota pH upraví na 9,5 . Do tohoto roztoku se potom v pevné formě přidá 5,8 g (14,4 mmol) kyseliny N3-(2,6-dioxomorfolinoethyl)-N^-(ethoxykar-bonylmethyl)-3,6-diazaoktandikarboxylové, popsané v příkladě 13a) EP-0 331 616 , přičemž hodnota pH se udržuje konstantní dalším přídavkem hydroxidu sodného na 9,5. Po ukončení přídavku se hodnota pH reakční směsi upraví pro zmýdelnění DTPA-ethylesteru 5 N hydroxidem sodným na > 13 a nechá se míchat přeš noc při teplotě místnosti. Potom se hodnota pH upraví pomocí koncentrované kyseliny chlorovodíkové na 5 a smísí se se 2,61 g (7,2 mmol) , míchá se po dobu 30’ minut při teplotě 80 °C a po ochlazení se í zneutralisuje na pH 7 . Roztok se potom podrobí ultrafil-traci (YM3 AMICON) a retentát se konečně filtruje přes membránu ályofilisuje. Výtěžek : 2,90 g (89 % teorie), , obsah vody (Karl Fischer) : 8,0 %, stanoveni Gd (AAS) : 23,4 % .

Elementární analysa (vztaženo na bezvodou látku) '1 vypočteno: C 34,61 H 4,40 Gd 25,17 N 11,21 Na 0,92 zjištěno: C 34,34 H 4,50 Gd 24,93 N 11,06 Na 1,10 . Příklad 25 Příklad aplikační formy á) 24-kálcium-DTPA-monoamid na basi triamidu kyseliny Ν,Ν,Ν’ ,N’ ,N’ ’ ,N’ ’-hexakis(2-(trilysyl-amino)-ethyl]--trimesinové 1,20 g (0,2 mmol) póly-benzyloxykarbonylaminu, po- jt psaného v příkladě ld) , se rozpustí v ledové kyselině octové a za míchání se smísí se 33% bromovodíkem, v. ledové- ' j kyseTine octové, > P'o^3_ho'dlnach~sě~počínajíc í^srážení .dokončí pomocí diethyletheru, vzniklý 24-amin-hydrpbromiď se ^ 1 ..y. promyje diethyletherem a vě vakuu, se vysuší: ~ ·ΐ ...» im * /*·.... '-.V ‘ . ;· V''.' - ‘L~: “ ” ' ”· * li ' .·. Získaný zbytek se potom .vyjme do(vďdy.a přídavkem' 1 N hydroxidu sodného se;jhodhota'.pH ,upraví' na 9,5 . Do tohoto roztoku se potom v pevné formě přidá 5,8. g (14,;4 'mmol).«4kysel iny; - (2,6,-ďioxpmorfólinqetHý 1 - (ethoxýkar r * bonylmethyl)-3,6-diazaoktandikarboxylově, popsané ,v příkla- ’ ‘ .,v. .· * · ""'.Λ " . ·.. r " »'< ' · * dě í3á) ΊΒΡ-/0 "331: 616 ',, přičemž hodnota ’pH'7sět udržuje" ' ' /1, 1 , * * t ‘ ' \ 'j . konstantní dalším přídavkem-hydroxidu ..sodného;na 9,5 ..Po ukončení přídavku ^ise; hodnota pH reakční směsi. upraví pro 4 -rzmýdeinění’—DT4^7ethylest«ru^5,-:N-hydroxd*demrTOdným\iia5f«»<-l3-* J , _ ' 1 , . j i " ' 3ř"’ · 4*’ «. á nechá s'e míchat přě"s noc při ťepIóte^ísthoátTT PWóiň sě hodnota pH upraví přídavkem kationtoměniče (Amberlite IR 120, H+-forma) na 4,5. , iontoměnič se. odfiltruje a filtrát se smísí s 1,07 g (14,4 mmol) hydroxidu vápenatého.. Roztok se'potom zneuttalisuje zředěným hydroxidem:_sodným na ;pH 7 . Roztok se potom'podrobí ultrafiltraci (YM3 AMICON) J a retentát se konečně filtruje přes membránu a lyofilisuje. Výtěžek : 2,76 g (95 % teorie), obsah vody (-Karl Fischer) : 7,2 % . v .

Elementární analysa (vztaženo na bezvodou látku a počítáno jako 1,5 sodná sůl pro komplex) vypočteno: C 41,42 H 5,04 Ga 7,13 N 12,15 Na 6,14 zjištěno: C 41,09 H 5,33 Ga 6,97 N 12,30 Na 6,52 . 118 b) Výroba roztoku gadoliniového kaskádového polymeru, popsaného v příkladě 1 16,68 g (0,025 mol gadolinia) sloučeniny, popsané v příkladě le) , se rozpustí v 60 ml vody pro injekce. Po přídavku 702 mg (1,25 mmol vápníku) Ca-komplexu, popsaného v předchozím příkladě a 121 mg trishydroxymethylamino-metháriu se hodnota pH upraví zředěnou kyselinou chlorovodíkovou na 7,0 a doplní se vodou pro injekce do 100 ml.

Roztok se podrobí ultrafiltraci, naplní se do lahviček a sterilisuje se teplem. Příklad 26 " .Λ

I a) 4,7,13,16,21,24-hexakis{8- (benzyloxykarbonylamino) - -6- [2- (benzyloxykarbonylamino-ethyl]-5-oxo-3-oxaokta-noyl}.-oktaazabicyklo[*8.8.8]hexakosan 741 mg (2 mmol) l,4,7,10,13,16,21,247oktaazabicyk-lo[8.8.Sjhexakosanu (P. H. Smith a kol., J. Org, Chem.,

1993, 58, 7939) se azeotropičky odvodní s toluenem. K . vs ochlazenému roztoku bicyklu v toluenu se pří teplotě místnosti přidá roztok 7,32 g (15 mmol) Ň,Ň’-bis(benzyloxy-karbonyl) -3- [karboxymethoxyacetyl] -3-azapentan-l, 5-diaminu (příklad 7a)) v tétrahydrofuranu a ' 3,71 g ' (15 mmolj 2 - ethoxy-1 - ethoxy-kar bony 1 -1,2- d ihydr oxychinolinu (EEDQ ; Fluka) a reakční směs se míchá přes noc. Po ukončení reakce se produkt vysráží přídavkem hexanu, oddekantuje se od rozpouštědla a ještě jednou se přesráží ze směsi tetrahydro-furanu a hexanu a konečně ze směsi tétrahydrofuranu a toluenu. Po vysušení ve vakuu se získá 4,53 g (71 % teorie) světle žluté pevné látky. 119 -

Elementární 'analysa " 119 - vypočteno: -2j-ištěno--_ C*61,04 H 6,45 C 60.89 H 6.55 N 11; 42 ' N 11,61 : . »,b) Úplně chráněný 48-benzyloxykarbonyl-polyamin'ná ;basi . ·-·» | ř + *·_.·♦£'.. . . ‘ 1 2 3 4 5" 48-aminu,-kondensovaného ze 4",7,13,16,2Í,-24-hexakiš·- \_ . ^. »·'* . {8-(benžyloxýkárbóhyláraino)-6-[2-(benzýloxykarbonyl·- . * ‘ amino-ethyl]-5-oxo-3-oxaoktanoyl}-oktaazabicyklo- ’ [8.8.8]hexakosanu s Na;lfa,MePsilon-bis(lysyl)-;lysinem (“rt-r-i--1-ysi-n': 1 , . * - * ~ --.· 3 ,1*9·. g .-(1 .iRjnol.)..^ 12r„benzyloxy^árl^nyla^^u^ 'popsa.-* ^ 2 něho v příkladě 26a) , se rozpustí,v>ledové kyselině octové 3 "a za míchání sé smísí se-33% bromovódíkem*v,ledové kyselině.’ ________octové. Po - 90 minutách sé počínající srážení dokončí.porno- —cí-^rii e-T-hv-l et-her-u-.^vzniklv—dodeka-amin-hvdrobromid se. promyj e diethyletherem, ve vakuu še vysuší a bez dalšího čištění se použije v dále popsané reakci. 4 Výtěžek 2,7 g (kvantitativní). » . 1 . .V . ' - _ . 1 gT (5 mmol)fchráněného "tri-lysinu", .popsaného 5 příkladě lč) , 2,25 g (15 mmol) l-hydroxybenzqtriazoiu a 4,8 g (15 mmol) 2T(lH-benzotriazol-l-yl)-1,1,3,3-tetra-methyluronium-tetrafluorb.orátu (TBTU; Peboc Limited, UK) se rozpustí v dimethylformamidu .a,. reakční směs se míchá po dobu 15 minut. Tento roztok se potom smísí se 7,74 ml>: r(45 mmol) N-ethyldiisopropyláminu á -2,7 g (1 mmol) .výše popsaného deka-amin-hydrobromidu a reakční směs se míchá přes noc při teplotě místnosti'. Po ukončení reakce se směs ve vakuu odpaří*á získaný zbytek se chromatografuje na si-likagelu zá použití směsi dichlormethanua methylalkoholů 1 > * 120 (10 : 1) - Výtěžek : 9,4 g (74,4 % teorie) .

Elementární analysa vypočteno: C 63,33 H 6,80 N 10,87 zjištěno: C 63,14 H 6,72 N 10,98 . j ' c) 48-gadolínium-DTPA-monoamid na basi deblokovaného 48-aminu z příkladu 26b) 2,53 g (0,2 mmol) poly-benzyloxykarbonylaminu, popsaného v příkladě 26b) , se rozpustí v ledové kyselině . octové a za míchání se smísí se 33% bromovodíkem v ledové kyselině octové. Po 3 hodinách sé počínající srážení dokončí pomocí diethyletheru, Vzniklý 48-amin-hydrobromid se promyje diethyletherem a ve vakuu se vysuší. *·( v · Získány zbytek; se potom vyjme do vody a přídavkem 1 N hydroxidu sodného se hodnota pH upraví na 9,5 . Do tohoto roztoku se potom v pevné formě přidá 11,55 g (28,8 mmol) kyseliny N-(2,6-dioxomorfolinoethyl)-N-(ethoxykar-bonylmethyl)-3,6-diazaoktandikarboxylové, popsané v příkladě 13a) EP-0 331 616 , přičemž hodnota pH se udržuje konstantní dalším přídavkem hydroxidu sodného na 9,5 . Po ukončení přídavku se hodnota pH reakční směsi upraví pro zmýdelnění DTPA-ethylešteru 5 N hydroxidem sodným na > 13 a nechá se míchat přes nóc při teplotě místnosti. Potom se hodnota pH upraví přídavkem koncentrované kyseliny chlorovodíkové na 5 , smísí se s. 5,22 g (14,4 mmol) GČ203 a míchá se po dobu 30 minut při teploě 80 °C . Po ochlazení še roztok se potom zneutralisuje zředěným hydroxidem sodným na pH 7 a podrobí se ultrafiltraci (YM3 AMICON) 121 a retentát se konečně filtruje pres membránu a lyofilisuje. Výtěžek : 5,90 g (83 % teorie); obsah vody (Karl Fischer) : 8,3 % , stanovení Gd (AA5) : 21,6 % . 122 - b) 10-(karboxymethyl)-1,4,7-tris(terc.-butyloxykarbonyl-methyl)-1> 4,7,10-tetraazacyklododekan (jako. natrium-bromidový komplex) 20 g (26,12 mmol) sloučeniny z příkladu 27a) se rozpustí ve 300 ml isopropylalkoholu a přidají se 3 g. palladiového katalysátoru (10 % Pd na C) , načež se^hydro-genuje přes noc při teplotě místnosti. Katalysátor se potom odfiltruje a filtrát se odpaří do sucha. Výtěžek : 17,47 g' (99 % teorie) bezbarvého amorfního ; prášku.

Elementární analysa •i?. í-w vypočteno: C 49,78 H 7,76 N 8,29 Na 4,44 Br 11,83 zjištěno: C 49,59 H 7,59 N 8,17 Na 4,40 Br 11,70 . “ ; ' lJ “ * * í c) 24-N-(2-D03Ayl1acetyl)-kaskádový polyamid, na basi 24-aminu triamidu kyseliny Ν,Ν,Ν’ ,N* ,N’ * ,N.’ ’ -hexakis- ; n [2-(trilysylamino)-ethyl]-trimesinové 6,0 g (1 mmol) poly-benzyloxykarbonylaminu, popsaného v příkladě ldj , se rozpustí v ledové kyselině octové a ža míchání se smísí se 33% bromovodíkem v ledové kyselině octové. Po 3 hodinách se počínající srážení dokončí pomocí diethyletheru, vzniklý 24-amin-hydrobromid se promyje diethyletherem a ve vakuu se vysuší. 32,43 g (48 mmol) kyseliny, popsané v předchozím příkladě 27b) , se rozpustí v dimethy1formámidu, smísí se se 7,35 g' (48 mmol) 1-hydroxybenzotriažolu, 15,41 g (48 mmol) TBTU (Peboc Limited UK) a 49,3 ml (288 mmol) N-ethyldiisopropyláminu a reakční směs se míchá po dobu 20 '* -fc-v"1 *j· ·--· ' ·*'' -ψ· * yi -> .rm -Jí *- -j>·' ·*'·* * -··· · .. b··· t y minut při teplotě místnosti. . Získaný roztok sé potom smísí ;·' -v ''' - .5 ' ' ' ť : ' 1 s výše. popsaným 24-amin-hydrobromidem (1 mmol), a: reakční * i* < '· - * * - směs se míchá po dobu 4 dnů při teplotě místnosti1. Roztok i m , ' “ s e—p ak—ve —vakuu—zah u s-tjí-r-^z-í-s kaná—o le jo v-i-t-á—kap a-l-i-na—s e—n a^ •ledové.lázni ochladí, smísí se^s kyselinou trifluoroctovou, míchái,se přes.’noc pri teplotě místnosti a^potom.Jse vysráží di ethyl etherem: Získaná' sraženina i se usuší ve Vakuu, vyjme se do vody , hodnota pH. še Eupraví na 7. , na ..ultrafiltrační membráně YM3^Amicon se zbaví nízkomolekulárních součástí ř f’ ' ' ^ · r. ta rétentát se konečně podrobí membránové filtraci a lyofilí “'SáciT^'· "•'i'ϊ......·:=.“· - V· Výtěžek^: ^12,5^ g~~:(83%~teoriej, obsah- vody -(:K-ar l^Fřscher-) : 9 r7 i ! ipf :A"

Elementární analysa,..(vztaženo- ná bezvodou·, látku): -vypočteno:^C^45T-21^^H^5 v97~ zjištěno: C 45,04 H 6,15 -N^1-4t49 ^Na^l27l‘5-N 14,26 Na 11,97

LiÍÍL5íí· Γ d) 24-Gd-komplex N-.(D03Aýl-áčetyl).-.kaskáového polyamidu·.; < na bas i 24-aminu triamidu kyselinyN,N,N,,N’,N,’,N’’- hexakis[2-(trilysylamino) -ethyl]-trimesinové 6,81 g (0,5 mmol) komplexotvorné kyseliny, popsané v předchozím příkladě- 27c) se rozpustí- ve—vodě a pomocí zředěné^kyseliny chlorovodíkové se hodnota pHupráví na 3 , smísí se se 2,17 g. (6 mmol) Gd203 , míchá se po dobu 30 minut při teplotě 80 °C , po ochlazení se hodnota pH upraví na 7 a odsolí se pomocí ultrafiltrační membrány YM3 Ό '

Amicon . Retentát se potom pro odstranění neneutrálních vedlejších produktů vede přes aniontoraěnič IRA 67 (OH"-forma) a kationtoměnič IRC 50 (H+-forma) a získaný roztok se 124 konečné podrobí membránové filtraci a lyofilisaci. Výtěžek : 5,44 g (63,9 % teorie), obsah vody (Karl Fischer) : 7,5 % , stanovení Gd (AAS) : 21,95 % .

Elementární analysa (vztaženo na bezvodou látku) vypočteno: C 39,13 H 5,16 N 12,54 Gd 23,97 zjištěno: C 38,90 H 5,29 N 12,41 Gd 23,55 . Příklad 28 a) 10- (4-karboxy-2-oxo-3-azabutyl)-l,4,7-tris(terc.-bu-toxykarbonylmethyl)-1,4,7,10-tetraazacyklododekan

Km 10 g (14,80 mmol) sloučeniny z příkladu 27b) ve 100 ral dimethylformaraidu se přidá 1,73 g (15 mmol) N-hyd-roxysukcimmidu a ochladí se na teplotu 0 °C . Potom se přidá 4,13 g (20 mmol) dicyklohexylkarbodiimidu a reak-ční směs se míchá po dobu jedné hodiny při teplotě 0 °C a % potom po dobu 2 hodin při teplotě místnosti. Bále se ochladí na teplotu 0 °C a přidá se 5,1 g (50 mmol) tri-ethylamínu a 2,25 g (30 mmol) glycínu, načež se míchá přes noc při teplotě místnosti. Vysrážená močovina se odfiltruje, filtrát se odpaří do sucha, získaný zbytek se vyjme do vody a dvakrát se extrahuje methylenchloridem. Organická fáze se vysuší pomocí bezvodého síranu horečnatého, ve vakuu se odpaří a získaný zbytek se chromátografuje na šilikagelu za použití směsi methylenehloridu a methylalkoholu (15 : 1) . Výtěžek : 8,20 g (88 % teorie) bezbarvé pevné látky. 125

Elementární analysa - vypočteno: C 57,21 H 8,80 N 11,12 zjištěno: C 57,10 H 8,91 N 11,03 , b) 24-N-(5-D03Ayl-4-oxo-3-azapéntanpyl)-kaskádový polyamid na basi 24-aminu triamidu kyseliny Ν,Ν,Ν’,N*,N’’,N’'-hexakis[2-(trílysylamíno)-ethyl]--.trimesiňové 6,0 g (1 mmol) poly-benzyloxykarbonylaminu, popsaného ‘v příkladě......rd) , se rozpustí v ledové/Kyselině octové a za^michání^se smísí.se 33% bromovodíkem v ledové kyše,líně octové. Po 3 hodinách se počínající srážení dokončí.pomocí, diethyletheru, vzniklý 24-amin-hydrobromid se promyje diethyletherem a ve vakuu se vysuší.,· · ^^(-48^minol')wkyseliny77p‘ops7áně^v^p'ř'edbhotžl1ii ' v příkladě 28a) , se rozpustí v dimethylformamidu, smísí se se 7,35 g (48 mmol) 1-hydroxybenzotriazolu, 15,41 g ; (48 mmol) TBTU (Peboc Limited.UK) a 49,3 ml (288 mmol) . N-ethyldiisopropylaminu.a reakční směs se míchá po dobu ’ 20 minut při teplotě místnosti. Získaný roztok se-potom smísí s výše popsaným 2.4-amin-hydrobromidem (1 mmol) a reakční směs se míchá po dobu 4 dnů při teplotě místnosti.* Roztok- se ^pak ve vakuu zahustí, získaná olej ovitá kapalina se ha ledové lázni ochladí, smísí se s kyselinou trifluoroctovou, míchá se přes noc při teplotě místnosti a potom se vysráží diethyletherem. Získaná sraženina se usuší ve vakuu, vyjme se do vody, hodnota pH se upraví na 7 , na ultrafiltrační membráně YM3 Amicon se zbaví nízkomolekulárních součástí a retentát se konečně podrobí membránové filtraci a lyofilisaci. 126 Výtěžek : 12,9 g (79,2 % teorie), obsah vody (Karl Fischer) : 7,9 % . %

Elementární analysa (vztaženo na bezvodou látku) vypočteno: Č 44,93 H 5,91 N 15,41 Na 11,04 zjištěno: C 44,77 H 6,15 N 15,60 Na 10,86 . c) 24-Gd-komplex N-(D03Ayl-4-oxo-3-azapentanoyl)-kaskáo-vého 'polyamidu na basi 24-aminu triamidu kyseliny . Ν,Ν,Ν’,N’,N’’,N’’-hexakis[2-(trilysylamino)-ethyl]--trimesinové i % 8,14 g '(0,5 mmol) komplexotvorné kyseliny, popsané j; v předchozím příkladě 28b) se rozpustí ve vodě a pomocí zředěné kyseliny chlorovodíkové se hodnota pH upraví na 3 , smísí se-se— 2,17„;g; :.(.6 mmolj'; Gd2C>3 ./míchá se po dobu 30 minut při teplotě 80 °C , po ochlazení se hodnota pH upraví na 7 a odsolí se pomocí ultrafiltrační membrány YM3 D í

Araicon . Retentát se potom pro odstranění neneutrálních , vedlejších produktů vede přes aniontoměnič IRA 67 (OH"-forma) a kationtoměnič IRC 50 (H+-forma) a získaný roztok se konečně podrobí membránové filtraci a lyofilisaci. Výtěžek : 6,3 g (67,7 % teorie), obsah vody (Karl Fischer) : 8,0 % , stanovení Gd (AAS) : 19,6% .

Elementární analysa (vztaženo na bezvodou látku) vypočteno: C 39,37 H 5,18 N 13,50 Gd 22,05 zjištěno: C 39,44 H 5,02 N 13,73 Gd 21,79 127 PříkladA '

Srovnání in-vivo s extracelulárním kontrastním činidlem V následujícím pokusu se ukazuje vhodnost sloučeniny, popsané v příkladě 7d) , jako blood-pool-agens . .·'

Jako pokusná zvířata slouží 5 samčích krys (Schering-SPF)m o hmotnosti 300 až 350 g . Před pokusem se otevře břišní dutina, střeva se přesunou a potom se přes zadní bři-šní~ bl'ánu'chřrurgickou jehlbu 'pbdvužóuňá obou stranách —KLedvinové^pánvičky (arterielní+venosníjT Potom se břišní dutina opět uzavře.. -Zvířatům se aplikuje 0,3 ml (50 mmoí/l)m intravenosně roztok následujícího kontrastního činidla : směs vždy *1 dílu sloučeniny z příkladu. 7d) , _y^následuj ícímíoznačováno* jako.».sloučenina -1 — a dysprosiového —komp -1βχη^-10---(-1—ΐΊγ dr o xymethyl^2/3^diliydroxyprbpy Γ)^1Τ477 - 1 - tris (karboxyméthyl) -1,4,7,10-tetraazacyklododekanu, vyrobeného podle EP 448 191 , v následujícím označováno jako sloučenina 2 ... Přes katetr v Arteria carotis communis se. odebírají vzorky krve v následujících časových bodech : 15, 30,^45, 60 a 90 sek., 3, 5, 10 a 15 minut p.i.. V získaných vzorcích krve se měří paralelně koncentrace gadolinia (Gd) a dysprosia (Dy)m pomocí atomové imisní spektrometrie (ICP-AES) . V kťevním řečišti zůstávající podíl injikova-ného kontrastního činidla sloučeniny 1 (Gd) a sloučeniny 2 (Dy, srovnávací látka) může být srovnáván různým značením u stejných zvířat. Vzhledem k tomu, že renální vylučování není možné, může být úbytek koncentrace v krvi vztahován pouze na rozptýlení v krevním řečišti a na difusi do inter-stitilní tkáně. 128 Výsledky : difuse sloučeniny 1 do interstitia je ve srovnání s extracelulárním kontrastním činidlem sloučeniny 2 podstataně zpomalen (viz obr. 1) .

Na obr. 1 je znázorněna závislost koncentrace Gd (sloučenina 1) a Dy (sloučenina 2) v krvi na čase u krys (n=5)m s podvázanými ledvinovými pánvičkami.

Extracelulárni kontrastní činidlo (sloučenina 2) difunduje tak rychle do interstitielního prostoru těla, že již po jedné minutě p.i. je dosaženo equílibria (ukázáno konstantní hladinou v krvi). Naproti tomu u kaskádového » polymeru (sloučenina 1) se nejem měří vyšší koncentrace.v krvi (důkaz na nižší objem rozptýlení), ale také po celou dobu pokusu 15 minut se ještě nedosáhne equilibriam (důkaz... velmi pomalu probíhající difuse do inters.titielní tkáně). , To znamená, že se sloučenina· 1 chová jako blut-pool-kon-trastní činidlo.

Claims

- * 4JBr. Min» /advokát . - 129. -/ i2>?0?fVťA2.HáSasB8 «Γ t·' v- -Ί * ť A -* ~ » r" P :A T E N T 0 V É N*Á R ťó K Y A ’ · , *' f t / . . ní ^. . , · 'w 1 USVU \ -Komp-lex-y—kaskádoy-ých~po-l-ymer-ů-,—obsahuj-íc-í- á) komplexotvorné , ligandy..obecného : vzorce I i- #·. *.. JAIOINISVU 0HiAinŠkW0«d avy Q _J 6 ' i '9 0 1 ,οΐξοα řl • A-{X-ÍÝ-(Ž-/V^kv/Z)yl^a ^^ (I) '\ý, .. 4 · s 8-58000 tf * · ’í‘2 ' ve kterém : í ’ A *-—^značídusík-obsahující kaskádové jádro basálnÍTmulti- f ... Λ' * "' r: / pldeisc-y-^ř-a,·/·*··. / 1 / -,-/ -¾ ^ ;ΐ 4 ‘r>'\ Ύ . X a' Y značí nezávisle.na sobě‘přímou važbu'nebo kaskádovou -/·- . reprodukční „ jednotku.reprodukční.,multip.lipity. _ x-,„po.-„. -přřp adě—fy, ^ Z o. V značí nezávisle na sobě kaskádovou reprodukční jednotku reprodukční multiplicity .z , popřípadě .w , 1 \ ' • — - ^ ·; í- · i* *, · · · - ' K Značí zbytek komplexotvorné látky., ř a znáči číslo 2 až. 12 a x, y, -z a v značí nezávisle na sobě číslo 1 až 4 , s tím omezením, že alespoň dvě reprodukční jednotky jsou různé a že pro produkt platí multiplicity 16 s a . x . y . z . v s 64 , b) alespoň 16 iontů prvku pořadového čísla 20 až 29, 39, 131) 42, 44 nebo 57-83 , c) popřípadě kationty anorganických a/nebo organických basí, aminokyselin nebo amidů aminokyselin, jakož i d) popřípadě acylované terminální aminoskupiny.
2. Komplexy kaskádových polymerů podle nároku 1 , vyznačující se tím, že A značí dusíkový atom, U \ N-CH2—CRj—N / U CH, CH, p-y, 2'm u2/ P N—CH,—CH-—N Λ \ 2 u 2u z U

N —CH2CH2 —N —CH2-CH2 — N —CH2CH2 -N

Z 12 u- ............U -

r v

U '1 R C(M N. V ··*, - '

132 ;:$Α" U - υ / υ \-CHa—(CH^N-CH,—(CHafej^N^2 υ

N κ \ pricemz m a n značí čísla 1 až 10 , P wznací číslo 0 až 10 , U1 značí Q* nebo E , U2 značí Q2 nebo E , přičemž E značí skupinu —(CH2)Q —CR, i * - 133 i * - 133 ý. r κ Ί -μ m · M -r· -* • l 1« přičemž i rr 1 * if 1I1 V A *<b ("V ,' V ’ ' 0 značí číslo 1 až 6 r <ψ -Q1 . 1 1 '··*., '' značí vodíkový atom Q2 .· .,h κ J- 2načí přímou vazbu. t· ·· t , _ „ .* i - ~ --a· ' L .. -} . i í* M značí alkylenový řétězec -s ‘1 až 10 uhlíkovými atomy, kterýže popřípadě přerušen i .‘až 3 kyslíkovými'atomy a/nebo je popřípadě substituovaný 1 až 2 oxoskupi-i .·..» námi ;· a1? * ·.· 4* !„ '** v ď ·, 1 V : * ' *· --,.= . A J ^ I . I. Ru * ' značí rozvětvený nebo “něřózvětvěný ^alkýrbvý žbytéic s j /*’ J. ' * 1 * ažrl 04 uhlíkovými;* atomy·,, .nitroskupinu, .fáminoskupimj>~ . *· - ··'·-,·>* Λ'^-ÍH.ri . - 1 ...... - "· ‘ "i * skupinu-kar.boxylově kyseliny nebo; skupinu ‘«i ‘ ’ · U M-N ' 2 u přičemž počet Qr odpovídá.básální multiplicitě.
3. Komplexy kaskádových polymerů podle nároku Γ V vyznačující se tím, že kaskádové reprodukční jednotky X-, Y, Z a V značí nezávisle na sobě E , ,U U--N V 134 ,Ν U υ 'U 3 υ—v -υ .υ “Ν -υ ϋ - υ —Ν

X 2 υ / υ 'ϋ pncemz υ1 značí Q* nebo Ε , υ2 značí Q2 nebo Ε , přičemž Ε ....... " z0’ značí skupinu —(CH2j0 —CHa—Ν 2 přičemž o značí číslo 1 až 6 , Q1 2 značí vodíkový atom nebo Q a V - 135 - V - 135 -U3% E- značí přímou vazbu,' znáči*alkylenový řetězec s *1 až 20 uhlíkovými atomy, . .» · ,t ., . ' ··*.*· · · .. ktérý je popřípadě 'přerušen ,1 až 10 atomy kyslíku ΐ * · . 2 -a/-nebo-jednou-a-ž—dvěma—skupi-nami-—-N (-G0-)—-R——;—j e d rví m-až dvěma fenylenovými a/nebo jedním až dvěma fenylen-oxylovými. zbytky a/nebo je popřípadě,substituovaný ‘ 'i· r · I · .· . ' £ . .,$'*· T " ' * jednouaž dvěma oxoxkupinami thiobxóškupinami , kar-'1 boxyskupinámi, alkylkarboxyskupinami s 1 až 5 uhlí-kovými atomy v alkoxylu, alkoxyskupinami s 1, až 5 t uhlíkovými atomy, hydroxyskupinami(nebó.alkylovými * . Λ J V ’ .T Vf V-'.. ^ ... i “skupinám i ~rrs~'“T“ážr'5,. uhlíkovými 'atomy, ípričeniž ' v';/ : q < -;· Vznačí-črslo 0 nebo 1 a v..T . značí vodíkový atom,?methylovou skupinu nebo, ..ethyl ovou-skupi nu ,-Jtterá^«-^opMpadě- suhstl·-·?— ' * τ " - ’ ·· · · . tuovaná 1 až 2^hydroxyskupinami' nebo’ "jednou . J*' . "· '· v.-sři · . karboxylovou skupinou, zhačí vodíkový atctm nebo skupinu. i 1 ..... . .... . -.· .1 n.1 " '-*· .· vu · · . / ’ 'j 3 7 U-N \ 2 u V značí methinovou skupinu =CH , když ‘současně značí přímou vazbu nebo skupinu M a . má význam skupiny U3 , nebo značí skupinu Λ . 136 /·' CO·

když současné a vazbu nebo skupinu M . jsou identické a značí přímou
4. Komplexy kaskádových polymerů podle nároku 1 , vyznačující se tím, že komplexotvorný zbytek K , vázaný na terminálnlch dusíkových atomech poslední generace reprodukčních jednotek V , značí zbytek obecného vzorce IA nebo IB -........ - ..... 3 i 2· · -. - -·♦ ..... - R R OOC-R HC '..... / N —CH2 —CH2 —N I Ί ch2 ch2 CH2 <j»2 —CH2—CH2 — N chr2-coor1 (IA)i /a , · CHR -COOR .137 - ι* ' i·4*· R OOC-HjC CHj-COOR CHj-CO-a 1 1 λ f u „ , í —ch2 ch2 — 1 Λ . ( ta, -N-CH2Crí2-^ v . V Γ * i . \ ' - : ·;' r’oOC-H2C A'-»·..-, - *· . . "· " -y V ; · % . . v K .* 'i % - -* - , ( :h,-ccor’’- , (IB) * 1 „značí„Jlězáyis.le na...sobě vodíkový atom nebo ekvivalent kovového jionzu jRpřadového čísla 20 ja± 29, 39, 42 až » ·" · .7' : - X * «►*'' ''"v-’ ~ 44 nebo 57*až 83 , . značí vodíkový atom, methylovou- skupinu :nebo ethylovou ve kterých t · -1 ’4 -..c· --C* J* ^·> v" Í .* w. . r „-J1 2 *Γ«Λ- 1 skupinu, která ie POPřÍDadé^substituovanál až _2'.:“ hydroxyskupihami nebo jednou karboxyskupinou, yy-’ R·^ značí skupinu -CHj-CHÍOH)-U^-T nebo -Cl^-CO-lJ^ ,. přičemž ' ' 2 > · t: ·. ....... · t;- .... . . ·. ‘ · · ·; " značí přímou, rozvětvenou, nasycenou nebo nenasycenou alkylenovou skupinu s 1 až 20 uhlíko.-vými atomy, obsahující 1 až 5 iminoskupin, li až 3 fenylenové skupiny, 1 až 3 fenylenoxyskupiny, 1 až 3 feriyleniminoskupiny, 1 až 5 amidoskupin, 2 až 2 hydrazidové skupiny, 1 až 5 karbonyloyých skupin, 1 až 5 ethylenoxyskupin, jednu močovino-vou skupinu, jednu thiomočovinovou skupinu, 1 až .2' kařboxyalkyliminoskupiny, 1 až 2 esterové skupiny, 1 áž 10 kyslíkových atomů, 1 až 5 atomů 138 138

*> síry a 1 až 5 dusíkových atomů a/nebo popřípadě substituovanou 1 až 5 hydroxyskupinami, 1 až 2 merkaptoskupinami, 1 až 5 oxoskupinami, 1 až 5 thioxoskupinami, 1 až 3 karboxyskupinami, 1 až 5 karboxyalkylovými skupinami, 1 až 5 esterovými skupinami a/nebo 1 až 3 aminoskupinami, přičemž popřípadě obsažené fenylenové skupiny mohou být substituované 1 až 2 karboxyskupinami, 1 až 2 sulfonovými skupinami nebo 1 až 2 hydroxysku-pinami, * \P značí přímou vazbu nebo zbytek -NR^-U^-T á * 7 * I ' T značí skupinu -CO-α , -NHCO-a nebo -NHCS-a , a značí vazebné místo na terminálním dusíkovém atomu poslední generace, reprodukční jednotky V a ř značí číslo 0, 1, 2 nebo 3 .
5. Komplexy kaskádových polymerů podle nároku 4 , vyznačující še tím, že alkylenový řetězec s 1 až 20 uhlíkovými atomy ve významu U'** obsahuje skupiny ů -CH2-, -CH2NHCQ~, -NHCOCH20-, -NHCOCH2OC6H4-, -N(CH2C02Hj-i -NHČÓCH2C6H4-, -NHCSNHC6H4-,- -CH2GC6H4-, -CH2CH20 a/nebo je substituován skupinami -C00H nebo -CH2C00H .
6. Komplexy kaskádových polymerů podle nároku 4 , vyznačující se tím, že značí skupiny -ch2-, -ch2ch2-, -ch2ch2ch2-, -cóh4-, -c6h10-, -ch2c6h5-, -ch2nhcoch2ch(ch2co2h)-c6h4- , • * · i!· • * · i!· • A' - 139 - .*ch2nhcoch2och2-,·.·* vCH2NHCOCH2C6H4 -1 3 j i. ΐ -» \ j£H?NHCOCH

4- -CH2NHCSNH-C6H4-CH(CH2C00H)ch2-. rCH2OC6H4-N(CH2COOH)CH2',.. -CH2NHC0CH20(CH2CH20)4-g6h4- ; ^CH.20rÍC 5 Hΐ - v-> , ř -CH2CH2-0^CH2CH2^,^.CH2CH2-P-CH2CH2i.p^CH2CH^· »» ___ v ·· '.ť **

Λί’κη.'ί:'
7. Komplexy kaskádových*polymerů .podle nároku .3 _ . ·!. ... . λ7 ' 1 "1 ...j v y z:n(a(iru j.í c .í . ,s_e. . t. í m·»,,' že..zbytek U pb- „ sažený v kaskádových Reprodukčních jednotkách X, Y, Z a|V, značí skupiny -co-, -coch2och2co-, -cgch2T, -ch2ch2-\ -cpnhc6h4-, -C0CH"2CH2C0-, -coch2-ch2ch2co-, -coch2ch2ch2ch2co-', • **· zbytek přímou vazbu nebo skupinu -CH2CO- , zbytek přímou vazbu nebo skupinu -(ČH2)4-, -CH2CO-, -CH.(COOH) - , CH20CH2ČH2-, -CH2C6H4- nebo' -ch2-c6h4och2ch2- a - 140 Q / zbytek E skupinu _q_( —CH2—N 2 \ 2 Q
8. Komplexy kaskádových polymerů podle nároku 3 , vyznačující se tím, že kaskádové reprodukční jednotky X, Y, Z a V značí nezávisle na sobě -CH2CH2NH-; -CH2CH2N<; -C0CH(NH-)(CH2)4NH-; -C0CH(N<)(CH2)4N<; -C0CH20CH2C0N(CH2CH2NH-)2; -C0CH20CH2C0N(CH2CH2N<) 2; -COCH2N(CH2CH2NH-)2; -C0CH2N(CH2CH2N<)2; -COCH2NH-; -C0CH2N<; -C0CH2CH2C0N(CH2CH2NH-)2; -C0CH2CH2N<)2; -C0CH20CH2C0NH-C6H4-CK[CH2C0N(CH2CH2NH-) 212; -C0CH20CH2C0NH-C6H4-CH [CH2C0N (CH2CH2N<)2 ] 2; -COCH2CH2CO-NH-C6H4-CH[CH2CON (CH2CH2NH-) 2 ] 2; -C0CH2CH2C0-NH-C6H4-CH[CH2C0N(CH2CH2N<)212; -C0NH-C6H4-CH[CH2C0N(CH2CH2NH-)2]2; - CONH - C6H4 - CH [ CH2C0N (CH2CH2N<) 2 ] 2; -C0CH(NH-)CH(C00H)NH-; -C0CH(N<)CH(C00H)N<; CON(CH2CH2NH-)2 -coch2och2conh C0N(CH2CH2NH-)2 1/ % -141 - -141 - -CON

n' *. v ..

»<. v? 1 'ϊ /ϊ: ' ;*i ·· M' vt -COCH2CH2CONH

-coch2ch2conh

CON(CH2GH2NH-)2 v CON(CH2CH2NH-), CON(CH2CH2N<)2 .' * W .. ; · ÓOŇ (CH2CH|N<)2 : i. "Λ. \* Γ u CON(CH2CH2NH-)2 / CON(CH2CH2NH-)2 CON(CH2CH2N<)2 CON(CH2CH2N<) 142 / och2ch2nh-

och2ch2n< och2ch2nh- och2ch2n<

0(GH2CH2C)2CH2CH2NH- 0(CH2CH20}2CH2CH2NH-

(CJH2CH20)2CH2CH2N< 0(CH2CH,0)2CH2CH2N< 0(CH2CH20)2CH2CH2NH- ; 0(CH2CH20}2CH2CH2N< -COCH2OCH2CONH

CX)N(CH2CH2Ň<)2 CON(CH2CH2N<)2 143. - “ι ''•jf \
9.. Komplexy kaskádových polymerů podle nároku*2 , vyznačující se t i m , ze m značí čísla 1 až 3 , np; O ; ‘M- -·' R o značí čí sla H až 3 í( , i. · ,· . , λ . ». ·, V. značí čísla 0 až 3 , ' * i í značí číslo 1 t Λ ' * V · _ . * . značí skupinu -CH^- „ -CO- nebo -CH^CO- a značí^ skupinu -CHjNU^U^., -CH-j nebo -N02 . .Ji·" 10/ y. Farmaceutický .prostř.e d e k..—obsahu jie-í- alespoň—j-éden;—A komplex^kaskádového polymeru„.podlé. nároku.Λ ... ^popřípadě·;·=^ /V. . Γ"*'1..... - *' 'O '' . " ,. ' · m s přísadami, obvyklými v galenice.. - ’ * , , ·' . . .' " - ' ·'· .: - '· .· .... . · i · 11 .,-¾ " Použití aíespoň^jed n oho—p.olym e r-n á-h o —kom p 1- ex-u—p od-le-nároku 1 pro výrobu prostředků pro NMR-diagnostiku á^rent· genovou diagnostiku. 13.' r Způsob výroby komplexů kaskádových polymerů podle"-nároků 1 až 9 , vyznačující se tím, že se nechají reagovat sloučeniny obecného vzorce I’ A-(x-[y-(z-/v-pu/2)y]x}a (i·) * ve kterém A značí dusík obsahující kaskádové jádro basální multi-plicity a, 144 X a Y značí nezávisle na sobě přímou vazbu nebo kaskádovou reprodukční jednotku reprodukční multiplicity x, po- V * případě y, Z a V značí nezávisle na sobě kaskádovou reprodukční jednotku reprodukční multiplicity z , popřípadě w , a značí číslo 2 až 12 , 9 x,· y, z a w značí nezávisle na sobě číslo 1 až 4 a β značí vazebné místo terminálních NH-skupin poslední generace reprodukční jednotky V ,. s tím omezením, že alespoň dvě reprodukční jednotky jsou různé a že pro produkt platí multiplicity 16 s,a, . x . y . z . w ^ 64 , s komplexem nebo komplexotvornou látkou K* obecného vzorce I’A nebo I’B 3' R OOC-R HC \ N —CH2 —CH2.—N CH, CH, CH, CH, (ΓΑ) N—CH2-—CH^ — N CHR -CO OR 'SNhR*-CO OR

145 r R OOC-HzC CH2-COOR1 CHj-C*0- N^ČHj CHj--N-CH2CH2-]—N Γ R OOC-H2C

pricemz 1 > i R značí nezávisle na ,sobě vodíkový atom, ekvivalent iontu kovu pořadového čísla 20 až 29, 39, 42 až 44f nebo 57 až 83 , nebo ochrannou skupinu kyseliny,

vou skupinu, která je popřípadě substituovaná jednou nebo dvěma hydroxyskupinami nebo jednou karboxyskupi-nou, R3’ Označí skupinu -CH2-CH(OH)-U6-T* -nebo -CH2-C0-U7 ’ , přičemž značí přímou;nebo rozvětvenou, nasycenou nebo ‘nenasycenou, alkylenovou skupinu s 1 až 20 uhlíkovými atomy .. .popřípadě obsahující 1 až 5 " iminoskupin, 1 až 3 fenylenové skupiny, 1 až 3 fenoxyskupiny, 1 až 3 fenyleniminoskupiny, 1 až 5 amidoskupin, 1 až 2 hydrazidové skupiny, 1 áž 5 karbonylových skupin, 1 až 5 ethylenoxyskupin > 1 močovinovou skupinu, 1 thiomočovinovou skupinu, 1 až 2 karboxyalkyliminoskupiny, 1 až 2 esterové skupiny, 1 až 10 kyslíkových atomů, 1 až 5 atomů síry a/nebo 1 až 5 dusíkových atomů a/nebo popřípadě substituovanou 1 až 5 hydroxy-skupinami, 1 až 2 merkaptoskupinámi, 1 až 5 oxo-skupinami, 1 až 5 thioxoskupinami, 1 až 3 karbo-xyskupinami, 1 až 5 karboxyalkylovými skupinami, 1 až 5 esterovými skupinami a/nebo 1 až 3 amino-skupinami, přičemž popřípadě přítomné fenylenové skupiny mohou být substituované 1 až 2 karboxy-skupinami, 1 až 2 sulfonovýmí skupinami nebo 1 až 2 hydroxyskupinami, i U7 značí přímou vazbu nebo zbytek -NR^-U^-T’ a T’ značí skupinu -C*0- , -C00H ,-N=C=0 nebo C*0 značí aktivovanou karboxylovou skupinu a * # r značí číslo 0, 1, 2 nebo 3 , s tím omezením, že pokud K’ značí komplex, alespoň dva (u dvojmocných kovů), popřípadě tři (u trojmocných kovů) ze substituentů R* znáči ekvivalent kovového iontu výše uvedených prvků a že se zde vyskytují podle potřeby další karboxylové skupiny ve formě svých solí s anorganickými a/nebo organickými basemi, aminokyselinami nebo amidy aminokyselin, popřípadě přítomné ochranné skupiny se odštěpí, takto získané kaskádové polymery - pokud K’ značí komplexotvornou - -147 - se o sobě známým způsobem. nechaj i reagovat s.alespoň jedním oxidem kovu nebo solí kovu prvku pořadového čísla;l 201 ' i až 29, -3-9·; *:42, " 44 nebo 57 až 83‘ á popřípadě se potom v takto získaných komplexech:kaskádových polymerů ještě přítomné kyselé vodíkové atomy^zcela neborčástečhé substituují ka·^·_ tionty anorganických a/nebo organických basí, aminokyselin1 nebo .amidů aminokyselin aipopřípadě se ještě přítomné ‘ " " ,--.7 w" .· - < — · , terminální aminoškupiny podle potřeby -'před ňěbb po kom^" -plexaciHcovem - acyluj í. .*» v T -á '"· * Γ 4’ - · ^ i^piS-Ob^výroby-^farmaceutických—prostředků-pódl-e· riá-r-oku -Vjy^z^n^alč^u^j íJc^í_ s e_t í-m- ,—že se komplex5---- kaskádového polymeru. rozpuštěný nebosuspendovaný-ve vodě . nebo· fyziologickém"solpém roztoku, převede stpopřípadě v£\ .· ví- 1 ” i ' *·. · - " . * . . galepice obvyklými přísadami na formu, vhodnou pro enterální k ·* · nebo parenterální aplikaci . ' · ; · -t _ ______

ϊ- _Í3^ T 10 + ř 'UA·· i

* I