CZ310080B6 - Kmen houby Trichoderma harzianum CCM 9213 a použití tohoto kmene v přípravku pro podporu růstu rostlin a pro ochranu rostlin proti houbovým patogenům - Google Patents

Kmen houby Trichoderma harzianum CCM 9213 a použití tohoto kmene v přípravku pro podporu růstu rostlin a pro ochranu rostlin proti houbovým patogenům Download PDF

Info

Publication number
CZ310080B6
CZ310080B6 CZ2023-28A CZ202328A CZ310080B6 CZ 310080 B6 CZ310080 B6 CZ 310080B6 CZ 202328 A CZ202328 A CZ 202328A CZ 310080 B6 CZ310080 B6 CZ 310080B6
Authority
CZ
Czechia
Prior art keywords
ccm
strain
trichoderma harzianum
plant growth
trichoderma
Prior art date
Application number
CZ2023-28A
Other languages
English (en)
Other versions
CZ202328A3 (cs
Inventor
Jana Konopická
Konopická Jana Ing., Ph.D.
Rostislav Zemek
CSc. Zemek Rostislav Ing.
Jiunn Luh Tan
Jiunn Luh MSc. Tan
Eric Palevsky
Eric Dr. Palevsky
Original Assignee
Biologické centrum AV ČR, v. v. i.
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Biologické centrum AV ČR, v. v. i. filed Critical Biologické centrum AV ČR, v. v. i.
Priority to CZ2023-28A priority Critical patent/CZ310080B6/cs
Publication of CZ202328A3 publication Critical patent/CZ202328A3/cs
Publication of CZ310080B6 publication Critical patent/CZ310080B6/cs

Links

Classifications

    • CCHEMISTRY; METALLURGY
    • C12BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12NMICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N1/00Microorganisms, e.g. protozoa; Compositions thereof; Processes of propagating, maintaining or preserving microorganisms or compositions thereof; Processes of preparing or isolating a composition containing a microorganism; Culture media therefor
    • C12N1/14Fungi; Culture media therefor
    • AHUMAN NECESSITIES
    • A01AGRICULTURE; FORESTRY; ANIMAL HUSBANDRY; HUNTING; TRAPPING; FISHING
    • A01NPRESERVATION OF BODIES OF HUMANS OR ANIMALS OR PLANTS OR PARTS THEREOF; BIOCIDES, e.g. AS DISINFECTANTS, AS PESTICIDES OR AS HERBICIDES; PEST REPELLANTS OR ATTRACTANTS; PLANT GROWTH REGULATORS
    • A01N63/00Biocides, pest repellants or attractants, or plant growth regulators containing microorganisms, viruses, microbial fungi, animals or substances produced by, or obtained from, microorganisms, viruses, microbial fungi or animals, e.g. enzymes or fermentates
    • A01N63/10Animals; Substances produced thereby or obtained therefrom
    • A01N63/12Nematodes
    • AHUMAN NECESSITIES
    • A01AGRICULTURE; FORESTRY; ANIMAL HUSBANDRY; HUNTING; TRAPPING; FISHING
    • A01NPRESERVATION OF BODIES OF HUMANS OR ANIMALS OR PLANTS OR PARTS THEREOF; BIOCIDES, e.g. AS DISINFECTANTS, AS PESTICIDES OR AS HERBICIDES; PEST REPELLANTS OR ATTRACTANTS; PLANT GROWTH REGULATORS
    • A01N63/00Biocides, pest repellants or attractants, or plant growth regulators containing microorganisms, viruses, microbial fungi, animals or substances produced by, or obtained from, microorganisms, viruses, microbial fungi or animals, e.g. enzymes or fermentates
    • A01N63/30Microbial fungi; Substances produced thereby or obtained therefrom
    • AHUMAN NECESSITIES
    • A01AGRICULTURE; FORESTRY; ANIMAL HUSBANDRY; HUNTING; TRAPPING; FISHING
    • A01NPRESERVATION OF BODIES OF HUMANS OR ANIMALS OR PLANTS OR PARTS THEREOF; BIOCIDES, e.g. AS DISINFECTANTS, AS PESTICIDES OR AS HERBICIDES; PEST REPELLANTS OR ATTRACTANTS; PLANT GROWTH REGULATORS
    • A01N63/00Biocides, pest repellants or attractants, or plant growth regulators containing microorganisms, viruses, microbial fungi, animals or substances produced by, or obtained from, microorganisms, viruses, microbial fungi or animals, e.g. enzymes or fermentates
    • A01N63/30Microbial fungi; Substances produced thereby or obtained therefrom
    • A01N63/38Trichoderma
    • AHUMAN NECESSITIES
    • A01AGRICULTURE; FORESTRY; ANIMAL HUSBANDRY; HUNTING; TRAPPING; FISHING
    • A01PBIOCIDAL, PEST REPELLANT, PEST ATTRACTANT OR PLANT GROWTH REGULATORY ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR PREPARATIONS
    • A01P21/00Plant growth regulators
    • AHUMAN NECESSITIES
    • A01AGRICULTURE; FORESTRY; ANIMAL HUSBANDRY; HUNTING; TRAPPING; FISHING
    • A01PBIOCIDAL, PEST REPELLANT, PEST ATTRACTANT OR PLANT GROWTH REGULATORY ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR PREPARATIONS
    • A01P3/00Fungicides

Landscapes

  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Pest Control & Pesticides (AREA)
  • Plant Pathology (AREA)
  • Environmental Sciences (AREA)
  • Virology (AREA)
  • Mycology (AREA)
  • Agronomy & Crop Science (AREA)
  • Dentistry (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Botany (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Tropical Medicine & Parasitology (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • Breeding Of Plants And Reproduction By Means Of Culturing (AREA)
  • Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)

Abstract

Řešení se týká kmene houby Trichoderma harzianum pro podporu růstu rostlin a pro ochranu rostlin proti houbovým patogenům, který je uložen v mezinárodní sbírce mikroorganizmů CCM, Masarykova univerzita, Kamenice 753/5, 625 00 Brno, pod přírůstkovým číslem CCM 9213. Spory kmene houby mohou být použity pro podporu růstu rostlin a pro ochranu rostlin proti houbovým patogenům v přípravku, který obsahuje organický nosič, spory kmene houby Trichoderma harzianum CCM 9213, spory kmene houby Cordyceps fumosorosea CCM 8367 a dále entomopatogenní hlístici Steinernema feltiae NFUST.

Description

Kmen houby Trichoderma harzianum CCM 9213 a pouziti tohoto kmene v pripravku pro podporu rûstu rostlin a pro ochranu rostlin proti houbovÿm patogenûm
Oblast techniky
Vynâlez se tÿkâ kmene houby Trichoderma harzianum CCM 9213 a pouziti tohoto kmene v pripravku pro podporu rûstu rostlin a pro ochranu rostlin proti houbovÿm patogenûm.
Dosavadni stav techniky
Ochrana rostlin pred houbovÿmi chorobami se provâdi prevâzne pomoci chemickÿch fungicidû, které vsak predstavuji riziko pro zivotni prostredi i zdravi lidi. Z tohoto dûvodu je pouziti techto pripravkû postupne omezovâno legislativou a hledaji se setrnejsi zpûsoby ochrany rostlin. Jednou z moznosti je vyuziti prirozenÿch antagonistickÿch vztahû mezi organismy, konkrétne hub rodu Trichoderma, u nichz byl prokazan antagonistickÿ efekt k celé rade patogennich hub, jak je popsano v dokumentu EP 2274414, kterÿ popisuje pripravek obsahujici kmen Trichoderma atroviride jako aktivni slozku. Trichoderma spp. jsou fakultativni parazité sirokého spektra fytopatogennich hub vcetne Alternaria spp., Bipolaris sorokiniana (Sacc.) Shoem, Botrytis cinerea Pers., Fusarium culmorum W.G. Smith, Fusarium graminearum Schwabe a Sclerotinia sclerotiorum. Jakmile Trichoderma sp. v pûde rozpozna svého hostitele, jeji hyfy se zacnou bohate vetvit a pomoci techto hyf mykoparazit kontaktuje hostitele. Kdyz mykoparazit dosâhne hostitele, jeho hyfy se casto obtoci kolem hostitelskÿch hyf a nasledne zacnou kolonizovat celou stélku hostitelského druhu houby. Zastupci tohoto rodu jsou kosmopolitni a rostou v celé rade substrâtû. Krome mykoparazitickÿch ùcinkû jsou znamy i schopnosti zit jako saprotrofové, rozklâdat organické zbytky a zvysovat pristupnost zivin pro rostliny. Nekteré kmeny Trichoderma mohou bÿt také entomopatogenni.
Dalsi moznost osetreni câsti rostlin je popsâna v dokumentu CZ 307159, kterÿ popisuje zpûsob osetreni semen plazmatem spolu s kmenem houby Trichoderma virens CCM 8732, pricemz k osetreni dochâzi po sberu semen v plazmovém vÿboji za snizeného tlaku. Takové osetreni je sice efektivni, nicméne nepopisuje moznost osetreni rostliny ve fâzi rûstu, kdy je nâchylnâ na houbové patogeny z pûdy a tedy chybi ochrana rostlin proti houbovÿm patogenûm a také neni zajistena podpora rûstu rostlin.
Tato nevÿhoda je câstecne vyresena v dokumentech EP 2320742 a EP 3194564, které popisuji pripravky pro kontrolu chorob rostlin a podporu rûstu rostlin pomoci kombinace druhû Trichoderma harzianum T22 a Trichoderma virens G41 nebo kombinace druhû Trichoderma harzianum, Trichoderma lignorum, Trichoderma viridae, Trichoderma reesei, Trichoderma koningii, Trichoderma pseudokoningii, Trichoderma polysporum, Trichoderma hamatum, Trichoderma gamsii a Trichoderma asperellum. Nevÿhodou techto pripravkû vsak je, ze poskytuji ochranu a kontrolu rûstu pouze u vybranÿch druhû rostlin a proti pûvodcûm chorob, jako je Rhizoctonia, Sclerotinia, Phytophthora, Pythium a jiné. Jednou z nevÿhod vÿse popsanÿch reseni je také nemoznost dlouhého skladovâni pripravkû za pokojové teploty.
Ùkolem vynâlezu je proto najit vhodnÿ, specializovanÿ kmen rodu Trichoderma, kterÿ by byl schopnÿ zajistit zvÿsenou ochranu rozmanitému poctu druhû rostlin proti houbovÿm patogenûm a také by podporoval rûst rostlin zajistenim potrebnÿch zivin, dâle by byl kompatibilni s entomopatogenni houbou Cordyceps fumosorosea, pricemz jeho konidiospory nebo mikrosklerocia by bylo mozné adjustovat do nosice obsahujiciho organickou hmotu, cimz by se pripravil pripravek, kterÿ by bylo mozné dlouhodobe skladovat i za pokojové teploty.
- 1 CZ 310080 B6
Podstata vynalezu
Vytcenÿ ùkol je vyresen nalezenim kmenu houby Trichoderma harzianum. Tento kmen byl ulozen v mezinarodni sbirce mikroorganizmû CCM, Masarykova univerzita, Kamenice 753/5, 625 00 Brno, pod prirûstkovÿm cislem CCM 9213. Druhova identita byla overena molekularnegenetickou analÿzou a sekvence je ulozena v Genbank pod prirûstkovÿm cislem MN960375.1.
Tento kmen houby Trichoderma harzianum CCM 9213 je pouzivan pro podporu rûstu rostlin a/nebo pro ochranu rostlin proti houbovÿm patogenûm.
Vytcenÿ ùkol je dale vyresen pomoci pripravku pro podporu rûstu rostliny a/nebo pro ochranu rostlin proti houbovÿm patogenûm, kterÿ obsahuje organickÿ nosic a spory kmene houby Trichoderma harzianum CCM 9213 o koncentraci nejméne 1 χ 104 na 1 ml nosice. Takové slozeni pripravku patricne zvysuje objem korenového systému a celkovou plochu, kterou mûze rostlina prijimat ziviny, a tedy se zvysuje rychlost rûstu rostliny, dale tento symbiotickÿ vztah Trichoderma s rostlinou zamezuje pristupu houbovÿm patogenûm k rostline.
Ve vÿhodném provedeni obsahuje pripravek dale spory kmene houby Cordyceps fumosorosea ulozenÿ v mezinarodni sbirce mikroorganizmû CCM, Masarykova univerzita, Kamenice 753/5, 625 00 Brno, pod prirûstkovÿm cislem CCM 8367 v pomeru 1:1 az 10:1 ke sporam kmene houby Trichoderma harzianum CCM 9213. Takovÿ pomer kmenû houby Trichoderma harzianum a Cordyceps fumosorosea v pripravku poskytuje synergickÿ efekt v ùcinku pripravku na rostliny.
V dalsim vÿhodném provedeni obsahuje pripravek dale entomopatogenni hlistici Steinernema feltiae kmene NFUST o koncentraci minimalne 1*103 invaznich larev na 1 ml nosice. Obohaceni pripravku o hlistici zvysuje mnozstvi produkované biomasy a zamezuje lihnuti a mnozeni smutnic.
Vÿhodou kmene Trichoderma harzianum CCM 9213 je schopnost zajistit zvÿsenou ochranu rozmanitému poctu druhû rostlin proti houbovÿm patogenûm a také podpora rûstu rostlin zajistenim potrebnÿch zivin. Dalsi vÿhodou kmene Trichoderma harzianum CCM 9213 je, ze je kompatibilni s entomopatogenni houbou Cordyceps fumosorosea, pricemz jeho konidiospory nebo mikrosklerocia je mozné adjustovat do nosice obsahujiciho organickou hmotu, cimz se pripravuje pripravek, kterÿ je moznÿ dlouhodobe skladovat i za pokojové teploty.
Objasneni vÿkresû
Uvedenÿ vynalez bude blize objasnen na nasledujicich vyobrazenich, kde:
obr. 1 znazomuje graf produkce spor kmenû hub Trichoderma sp. v interakci s patogenem S. sclerotiorum, obr. 2 znazomuje graf produkce spor kmenû hub Trichoderma sp. v interakci s patogenem B. cinerea, obr. 3 znazomuje graf produkce spor kmenû hub Trichoderma sp. v interakci s patogenem R. solani, obr. 4 znazomuje graf produkce spor kmenû hub Trichoderma sp. v interakci s patogenem F. culmorum, obr. 5 znazomuje graf produkce spor kmenû hub Trichoderma sp. v interakci s patogenem F. graminearum,
- 2 CZ 310080 B6 obr. 6 znazomuje graf produkce spor kmenû hub Trichoderma sp. v interakci s patogenem F. oxysporum, obr. 7 znazomuje graf produkce spor kmenû hub Trichoderma sp. v interakci s patogenem F. poae, obr. 8 znazomuje graf zmeny koncentrace Trichoderma harzianum CCM 9213 a Cordyceps fumosorosea CCM 8367 v prûbehu skladovani pûdniho substratu inokulovaného jednim ci obema druhy hub, obr. 9 znazomuje graf vlivu osetreni pûdniho substratu pomoci Trichoderma harzianum CCM 9213, Cordyceps fumosorosea CCM 8367 a Steinernema feltiae NFUST na narust biomasy bylin, obr. 10 znazomuje graf vlivu osetreni pûdniho substratu pomoci Trichoderma harzianum CCM 9213, Cordyceps fumosorosea CCM 8367 a Steinernema feltiae NFUST na snizeni vÿskytu smutnic (Diptera: Sciaridae).
Priklady uskutecneni vynalezu
Priklad 1: Rychlost rûstu a intenzita parazitace Trichoderma harzianum CCM 9213 v interakci s houbovÿmi patogeny rostlin v in vitro podminkach ve srovnani s jinÿmi kmeny rodu Trichoderma.
Pro testy byly vybrany tyto druhy houbovÿch patogenû rostlin: Sclerotinia sclerotiorum, Botrytis cinerea, Rhizoctonia solani, Fusarium culmorum, Fusarium graminearum, Fusarium oxysporum a Fusarium poae.
Suspenze o standardnim titru 1*107 spor v 1 ml vybraného testovaného druhu hub rodu Trichoderma sp. byla inokulovana ve forme kapky pomoci laboratorni klicky o objemu 10 μΐ na okraj Petriho misky o prûmeru 90 mm. Tercik fytopatogenni houby o prûmeru 7 mm byl umisten na protilehlou stranu. Kontrolni varianta byla pripravena jak pro vybrané kmeny hub rodu Trichoderma sp., tak i pro fytopatogeny. Fytopatogeny i mykoparaziti byli inokulovani zvlasf na oba protilehlé okraje Petriho misky. Petriho misky byly vlozeny v plastikovÿch saccich do termostatu o teplote 25±1 °C. Hodnoceni interakci bylo provedeno sedmÿ den pomoci fotodokumentace a stanovenim zôny dotyku a zôny mykoparazitismu.
Vÿsledky ukazaly vysokou rychlost sireni kmene Trichoderma harzianum CCM 9213, tab. 1, i vysokÿ stupen parazitace jednotlivÿch patogenû timto kmenem, tab. 2.
Tabulka 1: PrUmer±SE sirky zôny dotyku (v mm) kmenU rodu Trichoderma sp. v interakci s vybranÿmi fytopatogennimi houbami na Petriho misce 7. den po inokulaci, *a,b,c: prUmery ve sloupci se stejnÿm pismenkem nejsou statisticky rozdilné (One way ANOVA, a 0.05; Tukey HSD test).
- 3 CZ 310080 B6
Rostlinnÿ patogen
Kmen rodu Trichoderma S.sclerotiorum B.cinerea R. soiani F.cuimorum F.graminearum F.oxysporum F. poaa
Kontrola 41,50±0,00 41,50±0,00 41,50±0,00 0,00±0,00 0,00+0,00 41,50±0,00 41,50±0,00
a d a d d f d
ILGA301 - 39,75+0,50 54,50+0,58 37,00+0,00 66,50+0,58 61,75+2,22 56,75±0,50 55,75+1,89
CCM 9213 b b be a ab ab a
ILGA402 35,25±0,50 53,50±1,00 38,25±0,50 65,75±0,50 62,25±0,96 55,00±1,15 53,00±1,41
c b b ab ab ab be
ILGA501 39,25±0,96 53,00±0,82 37,00±0,00 67,50±1,00 60,75±0,50 55,25±0,96 54,25±0,50
b b be a ab ab ab
CZKO302 45,75±0,50 53,25±0,96 37,00±0,00 66,50±0,58 62,50±0,58 57,75±0,96 55,00±0,00
a b be a a a ab
CZRA4 36,75±1,50 56,50±1,00 38,75±1,50 64,50±0,58 58,50±1,73 51,75±0,50 49,75±0,50
b a b b c e c
CZKO4 39,75±0,96 50,50±0,58 35,25±0,96 62,25±0,96 59,75±1,50 53,00±1,41 48,50±0,58
b c d c ab d c
CZKA201 36,00±0,82 53,00±0,82 33,25±0,50 66,50±1,00 58,75±1,89 54,00±0,00 52,00±0,82
b b e a c c be
Tabulka 2: PrumérSE sirky zôny parazitace (mm) kmenù rodu Trichoderma sp. v interakci s vybranymi fytopatogennimi houhami na Petriho misce 7. den po inokulaci. *a,b,c: prûmëry ve sloupci se stejnym pismenkem nejsou statisticky rozdilné (One way ANOVA, a=0,05; Tukey HSD test).
Rostlinnÿ patogen
Kmen rodu Trichoderma S. sclerotiorum B. cinerea R. soiani F. culmorum F. graminearum F. oxysporum F. poae
Kontrola 0,00+0,00 0,00±0,00 0,00±0,00 0,00±0,00 0,00±0,00 0,00±0,00 0,00+0,00
f e e e d f e
ILGA301 - 16,00+0,82 28,50+0,58 18,00+0,82 16,50+0,58 21,25+2,22 26,25±0,50 22,25+0,50
CCM 9213 c b a ab a a a
ILGA402 17,00±1,15 29,50±1,00 19,25±0,96 17,25±0,50 20,75±0,96 8,25±1,26 20,25±1,71
b b a a a c b
ILGA501 4,50±0,58 30,00±0,82 14,25±0,50 15,50±1,00 6,00±0,00 5,00±0,00 12,50±0,58
ds b c be b e c
CZKO302 6,00±0,82 13,00±0,00 12,25±0,50 0,00±0,00 2,75±0,50 17,00±0,00 4,00+0,00
d c d e c b d
CZRA4 4,00±0,00 6,50±1,00 17,50±0,58 0,00±0,00 3,00±0,00 6,50±0,58 3,25+0,50
ds d ab e c d d
CZKO4 26,50±0,50 32,50±0,58 19,00±0,00 3,25±0,50 3,50±0,58 7,00±0,82 4,50+0,58
a a a d c cd d
CZKA201 4,00±0,00 30,00±0,82 13,25±0,50 16,50±1,00 4,50±0,58 4,50±0,58 3,75+0,50
de b cd ab be e d
Pfiklad 2: Produkce spor Trichoderma harzianum CCM 9213 v interakci s houbovÿmi patogeny rostlin v in vitro podminkach ve srovnâni s jinyrni kmeny rodu Trichoderma.
Po 14. dnech inkubace hub rodu Trichoderma sp. v interakci s fytopatogeny byla stanovena produkce spor mykoparazitickÿch kmenù. Cilem testu bylo stanovit mnozstvi vyprodukovanÿch spor mykoparazitù pri interakci s fytopatogeny. Kultura kmenù mykoparazitickÿch hub v interakci s fytopatogeny byly spolu s zivnou pùdou bramborového dextrôzového agaru neboli PDA homogenizovâny v mixéru s adekvatnim mnozstvim vody. Pomoci Neubauerovy pocitaci komùrky byla stanovena produkce spor, kterâ se vyjâdfila na jednu Petriho misku. Kontrolni varianta byla pfipravena ze suspenze mykoparazitù. Mykoparazité byli inokulovâni na protilehlé okraje Petriho misky. Vÿslednâ produkce spor byla nâslednë vydëlena 2.
-4CZ 310080 B6
Vÿsledky ukazaly, ze kmen Trichoderma harzianum CCM 9213 dosahoval vysoké produkce jak samostatne, tak v interakci s vetsinou rostlinnÿch fytopatogenû, grafy jsou znazorneny na obr. 1 az obr. 7.
Priklad 3: Submerzni kultivace Trichoderma harzianum CCM 9213
Z konidiospor ziskanÿch ze sporulujici kultury houby na pevném médiu (PDA) v Petriho miskach bylo pripraveno inokulum tak, ze se vytvorila suspenze konidiospor ve sterilnim roztoku 0,05 % obj. smacedla Tween 80®. Suspenze byla prefiltrovana pres sterilni gazu pro odstraneni zbytkû mycelia a shlukû spor. Pomoci Neubauerovy pocitaci komûrky byla stanovena koncentrace spor v suspenzi a na zaklade vÿsledku byla nasledne upravena na koncentraci 1x107 spor na ml suspenze. Priprava suspenze probihala ve sterilnim prostredi laminarniho boxu tzv. flow boxu. Do autoklavované Erlenmeyerovy banky o objemu 1 l bylo odmereno 380 ml sterilniho kapalného média bramborovo-dextrôzového vÿvaru neboli PDB a pomoci sterilni pipety bylo inokulovano v laminârnim boxu 20 ml suspenze houby. Banka byla uzavrena sterilni kultivacni zatkou a poté umistena na orbitâlni trepacku. Kultivace probihala pri trepâni rychlosti 200 otacek za minutu a teplote 25 °C po dobu 4 dnû. Po této dobe, behem které se zmenila barva média ze zelené na zlutozelenou, se vytvâri mikrosklerocia houby. Vÿsledna koncentrace houby v médiu byla stanovena radou redeni a kultivaci na selektivnim médiu specialne navrzeném pro houby rodu Trichoderma. Po 4 az 7 dnech se hodnotil pocet kolonii v jednotkach CFU na misce a ùdaje byly prepocitany na 1 ml média. Vÿsledky ukazaly, ze submerzni kultivaci lze dosahnout koncentrace minimalne 1x107 CFU/ml média.
Priklad 4: Perzistence Trichoderma harzianum CCM 9213 v pûdnim substratu samostatne a v kombinaci s entomopatogenni houbou Cordyceps fumosorosea CCM 8367.
Bylo odmereno 500 ml pestebniho substratu, do kterého bylo naaplikovano postrikem v michacim zarizeni 5 ml suspenze konidiospor Trichoderma harzianum CCM 9213 o koncentraci 1x107 v 1 ml. Ve druhé variante bylo obdobne aplikovano do 500 ml pestebniho substratu 5 ml suspenze blastospor Cordyceps fumosorosea CCM 8367 o koncentraci 1x107 v 1 ml. Ve treti variante byly do 500 ml substratu aplikovany obe houby po 5 ml o koncentraci ch 1x107 v 1 ml. Osetrenÿ substrat byl uzavren v PE sâccich a ulozen do termostatu s teplotou 20 °C. Vsechny tri varianty byly provedeny ve trech opakovanich. Jednou za mesic byl odebiran vzorek o hmotnosti 25 g. Ze vzorku byl vytvoren vÿluh, kterÿ byl naaplikovan na Petriho misky, pro kazdÿ vzorek byla pripravena 2 sub-opakovâni. Houba Cordyceps fumosorosea byla kvantifikovana pomoci média na bazi dodine a Trichoderma harzianum na selektivnim médiu specialne navrzeném pro houby rodu Trichoderma. Po 4 az 7 dnech se hodnotil pocet kolonii v jednotkach CFU na misce a ùdaje byly prepocitany na 1 ml substratu.
Vÿsledky ukazaly, ze koncentrace hub se v prûbehu sesti mesicû jen mirne snizila a ze pûdni substrat je vhodnÿm nosicem, zobrazeno na obr. 8. Vÿsledky rovnez potvrdily, ze mykoparaziticka houba Trichoderma harzianum CCM 9213 nemela negativni vliv na prezivani entomopatogenni houby Cordyceps fumosorosea CCM 8367, zobrazeno na obr. 8. Oba druhy bioagens jsou proto kompatibilni a lze je ve vÿhodném usporâdâni kombinovat v jednom pripravku.
Priklad 5: Vyuziti Trichoderma harzianum CCM 9213 v kombinaci s Cordyceps fumosorosea CCM 8367 pro zlepseni vitality rostlin.
Byl proveden pokus s pokojovÿmi rostlinami Calathea makoyana. Deset rostlin zakoupenÿch v zahradnictvi bylo presazeno do vetsich kvetinacû a umisteno do skleniku s teplotou 20 °C. Rostliny byly chraneny pred pred primÿm sluncem a zalévany vodou s nizkou tvrdosti (tj. destilovanou vodou smichanou s vodovodni vodou v pomeru 1:1). Rostliny byly prihnojovany 1x mesicne komercnim vodorozpustnÿm hnojivem (Wuxal Super, AgroBio Opava s.r.o.) v redeni 1:2000. Pet nahodne vybranÿch rostlin bylo osetreno suspenzi Trichoderma harzianum
- 5 CZ 310080 B6
CCM 9213 o koncentraci 5/107 v 1 ml suspenze a soucasne suspenzi Cordyceps fumosorosea CCM 8367 o koncentraci 1/107 v 1 ml suspenze. Dâvka osetreni byla 1 mililitr kazdé suspenze spor na jeden kvetinâc. Zbÿvajicich pet rostlin bylo ponechâno bez osetreni a slouzilo jako kontrola. Za jeden mesic po osetreni byl stanoven pocet zdravÿch a odumrelÿch listû u kazdé rostliny.
Vÿsledky ukâzaly, ze na konci pokusu mely osetrené rostliny 86,7 % listû zdravÿch, zatimco u neosetrenÿch rostlin bylo zdravÿch jen 70,2 % listû. Rozdil je statisticky vÿznamnÿ (χ2 test. P=0,0296).
Priklad 6: Vyuziti Trichoderma harzianum CCM 9213 v kombinaci s Cordyceps fumosorosea CCM 8367 a hlistici Steinernema feltiae NFUST pro zlepseni rûstu rostlin.
Byl proveden sklenikovÿ pokus s rerichou a smesi bylin vysetÿch do pestebniho substrâtu v kvetinâcich. Ctyricet kvetinâcû o velikosti priblizne 0,74 l bylo naplneno priblizne 0,52 l organického substrata pro vÿsadbu (Natura®, Agro CS, Ceskâ republika). Dvacet ze 40 pripravenÿch kvetinacû bylo oseto Lepidium sativum, priblizne 30 semen na kvetinâc. Zbÿvajici kvetinâce byly osety smesi bylin: bazalka, kopr, kerblik a petrzel; priblizne 10 az 15 semen v papirovém pâsku na kvetinâc. Rostliny byly pestovâny ve skleniku pri teplote 25 °C s dostatkem svetla. Zalévaly se dle potreby a tÿdne prihnojovaly komercnim kapalnÿm hnojivem (NPK: 83,5-5, Wuxal Super, AgroBio Opava, sro) v redeni 1:1000.
Dvacet kvetinâcû, 10 osâzenÿch Lepodium sativum a 10 smesi bylin, bylo osetreno 25. den po vÿsevu tak, ze do kazdého kvetinâce bylo aplikovâno 1 ml suspenze Cordyceps fumosorosea CCM 8367 o koncentraci 5/107 blastospor/ml, 1 ml suspenze Trichoderma harzianum CCM 9213 o koncentraci 1/107 konidiospor/ml a 11 000 invaznich larev Steinernema feltiae NFUST. Dalsich 20 kvetinâcû nebylo osetreno a slouzilo jako kontrola. Lepidium sativum bylo sklizeno 21 dni po osetreni, tj. 21 DAT. Rostliny byly urezâny co nejblize substrâtu a nâsledne byly suseny na vzduchu ve skleniku po dobu priblizne 5 dnû neboli 120 h a dâle suseny v susârne pri 60 °C po dobu 3 hodin. Hmotnost suché biomasy byla stanovena pomoci analytickÿch vah (Sartorius, R160P, Nemecko). Rostliny smesi bylin byly sklizeny 35 dni po osetreni, tj. 35 DAT. Rostliny byly urezâny co nejblize k substrâtu a nâsledne byly suseny na vzduchu ve skleniku po dobu priblizne 4 dnû neboli 96 h a dâle suseny v susârne pri 60 °C po dobu 7,5 h. Suseni v susârne bylo rozdeleno do 3 relaci, kde prvni dve relace trvaly kazdâ 3 hodiny a posledni 1,5 hodiny. Po vysuseni byly rostliny zvâzeny na analytickÿch vâhâch (Sartorius, R160P, Nemecko). Sklizené kvetinâce byly zakryty prûhlednÿmi plastovÿmi nâdobami o velikosti priblizne 0,6 l. Na plastovÿch nâdobâch byly dva bocni otvory zakryté jemnou sit’ovinou pro snizeni vlhkosti a zabrâneni kondenzaci v zakrytém prostoru. Pro zachyceni dospelcû smutnic (Diptera: Sciaridae), které se ze substrâtu lihly byla pouzita bilâ desticka o velikosti priblizne 0,006 m2 opatrenâ lepem, kterâ byla umistena do kazdého kvetinâce. Pocet smutnic byl stanoven po 28 dnech od sklizne.
Vÿsledky prokâzaly statisticky prûkaznÿ nârûst biomasy, zobrazeno na obr. 9, i snizeni poctu smutnic v osetreném substrâtu oproti kontrolâm, zobrazeno na obr. 10.
Prûmyslovâ vyuzitelnost
Kmen houby Trichoderma harzianum CCM 9213 a pouziti tohoto kmene pro podporu rûstu rostlin a pro ochranu rostlin proti houbovÿm patogenûm podle tohoto vynâlezu lze vyuzit zejména ke zlepseni rozkladu organické hmoty v pûde, uvolneni zivin a zvÿseni vitality rostlin.

Claims (4)

1. Kmen houby Trichoderma harzianum pro podporu rùstu rostlin a pro ochranu rostlin proti houbovÿm patogenùm ulozenÿ v mezinârodni sbirce mikroorganizmù CCM, Masarykova 5 univerzita, Kamenice 753/5, 625 00 Brno, pod pnrùstkovÿm cislem CCM 9213.
2. Pouziti kmene houby Trichoderma harzianum CCM 9213 podle naroku 1 pro podporu rùstu rostliny a/nebo pro ochranu rostlin proti houbovÿm patogenùm.
3. Pnpravek pro podporu rùstu rostliny a/nebo pro ochranu rostlin proti houbovÿm patogenùm, vyznacujici se tim, ze obsahuje organickÿ nosic a spory kmene houby Trichoderma harzianum 10 CCM 9213 podle naroku 1 o koncentraci nejméne 1/104 na 1 ml nosice.
4. Pnpravek podle naroku 3, vyznacujici se tim, ze dale obsahuje spory kmene houby Cordyceps fumosorosea ulozenÿ v mezinarodni sbirce mikroorganizmù CCM, Masarykova univerzita, Kamenice 753/5, 625 00 Brno, pod pnrùstkovÿm cislem CCM 8367, v mnozstevnim pomeru 1:1 az 10:1 ke sporam kmene houby Trichoderma harzianum CCM 9213 podle naroku 1.
15 5. Pnpravek podle naroku 3 nebo 4, vyznacujici se tim, ze dale obsahuje entomopatogenni hlistici
Steinernema feltiae o koncentraci minimalne 1/103 invaznich larev na 1 ml nosice.
CZ2023-28A 2023-01-26 2023-01-26 Kmen houby Trichoderma harzianum CCM 9213 a použití tohoto kmene v přípravku pro podporu růstu rostlin a pro ochranu rostlin proti houbovým patogenům CZ310080B6 (cs)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CZ2023-28A CZ310080B6 (cs) 2023-01-26 2023-01-26 Kmen houby Trichoderma harzianum CCM 9213 a použití tohoto kmene v přípravku pro podporu růstu rostlin a pro ochranu rostlin proti houbovým patogenům

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CZ2023-28A CZ310080B6 (cs) 2023-01-26 2023-01-26 Kmen houby Trichoderma harzianum CCM 9213 a použití tohoto kmene v přípravku pro podporu růstu rostlin a pro ochranu rostlin proti houbovým patogenům

Publications (2)

Publication Number Publication Date
CZ202328A3 CZ202328A3 (cs) 2024-07-24
CZ310080B6 true CZ310080B6 (cs) 2024-07-24

Family

ID=91947234

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CZ2023-28A CZ310080B6 (cs) 2023-01-26 2023-01-26 Kmen houby Trichoderma harzianum CCM 9213 a použití tohoto kmene v přípravku pro podporu růstu rostlin a pro ochranu rostlin proti houbovým patogenům

Country Status (1)

Country Link
CZ (1) CZ310080B6 (cs)

Citations (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2001083706A1 (en) * 2000-05-02 2001-11-08 Chung Young Ryun A microbial pesticide active against plant fungal pathogens and process for preparation thereof
US20120178624A1 (en) * 2009-09-17 2012-07-12 Susan Gail Willets Kaminskyj Method for Increasing Plant Growth Using the Fungus Trichoderma Harzianum
CN110272833A (zh) * 2019-08-05 2019-09-24 海南大学 哈茨木霉hl119及其应用
US20230172212A1 (en) * 2021-12-08 2023-06-08 The United States Of America, As Represented By The Secretary Of Agriculture Compositions and methods for promoting soil microbials for plant heatlth and stress tolerance

Patent Citations (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2001083706A1 (en) * 2000-05-02 2001-11-08 Chung Young Ryun A microbial pesticide active against plant fungal pathogens and process for preparation thereof
US20120178624A1 (en) * 2009-09-17 2012-07-12 Susan Gail Willets Kaminskyj Method for Increasing Plant Growth Using the Fungus Trichoderma Harzianum
CN110272833A (zh) * 2019-08-05 2019-09-24 海南大学 哈茨木霉hl119及其应用
US20230172212A1 (en) * 2021-12-08 2023-06-08 The United States Of America, As Represented By The Secretary Of Agriculture Compositions and methods for promoting soil microbials for plant heatlth and stress tolerance

Non-Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
GRONDONA I., ET AL.: "Physiological and biochemical characterization of Trichoderma harzianum, a biological control agent against soilborne fungal plant pathogens", APPLIED AND ENVIRONMENTAL MICROBIOLOGY, vol. 63, no. 8, pages 3189 - 3198, XP002970668, ISSN: 0099-2240 *

Also Published As

Publication number Publication date
CZ202328A3 (cs) 2024-07-24

Similar Documents

Publication Publication Date Title
KR101279044B1 (ko) 판토이아 디스퍼사 wcu35 균주, 이를 함유하는 식물병 방제용 조성물 및 식물병 방제방법
Alwathnani et al. Biological control of fusarium wilt of tomato by antagonist fungi and cyanobacteria
US4259317A (en) Preparation for the protection of emerging sugar beets against damping-off, and method of its production
KR101279027B1 (ko) 바실러스 아밀로리퀴피시언스 lm11 균주, 이를 함유하는 식물병 방제용 조성물 및 식물병 방제방법
BG61345B1 (bg) Изолати от триходерма,фунгицидни състави,съдържащи тези изолати,и използването им срещу в.сinеrеа и s.sсlеrотiоruм
MX2007008234A (es) Una nueva cepa de trichoderma atroviride, un medio de cultivo conteniendola, asi como la utilizacion de dicha cepa en particular como estimulante de la germinacion y/o del crecimiento de las plantas.
Topolovec-Pintarić et al. Enhanced growth of cabbage and red beet by Trichoderma viride
JP2010540622A (ja) 表面の微生物棲息密度向上させる組成物及びその用途
Carrasco et al. Commercial cultivation techniques of mushrooms
KR20120061580A (ko) 심플리실리움 라멜리콜라 krict3 균주, 이를 함유하는 식물병 방제용 조성물 및 식물병 방제방법
Subash et al. Mass cultivation of Trichoderma harzianum using agricultural waste as a substrate for the management of damping off disease and growth promotion in chilli plants (Capsicum annuum L.)
CN101637187B (zh) 一种防治植物真菌病害的菌剂
JP5561637B2 (ja) きのこの揮発性抗菌物質を用いた防菌・除菌技術
WO2018012815A1 (ko) 바실러스 아밀로리쿼파시엔스를 이용한 식물의 생육촉진용 조성물 및 그 용도
RU2534213C2 (ru) Способ получения биологического средства для защиты растений от фитопатогенов и нематод на основе штамма гриба рода trichoderma и биологическое средство, полученное способом
KR101679243B1 (ko) 버섯 재배키트 및 이를 이용한 버섯 재배방법
CN114747596A (zh) 一种用于地下害虫防治的微生物制剂及其应用
WO2025027461A1 (en) Bacterial strains of bacillus amyloliquefaciens species and applicaiton of strains bacillus amyloliquefaciens species in plant cultivation
JP2018177799A (ja) 植物の土壌病害防除方法
KR101279026B1 (ko) 바실러스 아밀로리퀴피시언스 kb3 균주, 이를 함유하는 식물병 방제용 조성물 및 식물병 방제방법
KR20050034000A (ko) 병원성 진균에 길항력을 가지는 신규의 식물 내생 세균인버크홀더리아 비에나멘시스 엠씨1404 및 이를 함유하는항진균성 미생물 살균제
CZ310080B6 (cs) Kmen houby Trichoderma harzianum CCM 9213 a použití tohoto kmene v přípravku pro podporu růstu rostlin a pro ochranu rostlin proti houbovým patogenům
EP1387613A1 (en) Biological control of soil dwelling pests
RU2302114C1 (ru) Препарат "экстрагран" для стимуляции роста и защиты растений от болезней
KR100566265B1 (ko) 신규 식물 외생 길항 미생물인 슈도모나스 퓨티다 cb11균주 및 이를 함유하는 항진균성 미생물 살균제