CZ308881B6 - 6-aryl-9-glykosylpuriny a jejich použití - Google Patents

6-aryl-9-glykosylpuriny a jejich použití Download PDF

Info

Publication number
CZ308881B6
CZ308881B6 CZ2014875A CZ2014875A CZ308881B6 CZ 308881 B6 CZ308881 B6 CZ 308881B6 CZ 2014875 A CZ2014875 A CZ 2014875A CZ 2014875 A CZ2014875 A CZ 2014875A CZ 308881 B6 CZ308881 B6 CZ 308881B6
Authority
CZ
Czechia
Prior art keywords
arabinofuranosylpurine
deoxyribofuranosylpurine
darabinofuranosylpurine
methoxybenzylamino
group
Prior art date
Application number
CZ2014875A
Other languages
English (en)
Other versions
CZ2014875A3 (cs
Inventor
Karel DoleĹľal
Dr. DSc Doležal Karel Mgr.
Lucie Plíhalová
Plíhalová Lucie Mgr., Ph.D.
Hana Vylíčilová
Hana Mgr. Vylíčilová
Marek Zatloukal
Zatloukal Marek RNDr., Ph.D.
Ondřej Plíhal
Plíhal Ondřej RNDr., Ph.D.
Jiří Voller
Voller Jiří Mgr., Ph.D.
Miroslav Strnad
DrSc. Strnad Miroslav prof. Ing.
Original Assignee
Univerzita Palackého v Olomouci
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Univerzita Palackého v Olomouci filed Critical Univerzita Palackého v Olomouci
Priority to CZ2014875A priority Critical patent/CZ308881B6/cs
Priority to EP15774847.6A priority patent/EP3229771B1/en
Priority to PCT/CZ2015/050005 priority patent/WO2016091235A1/en
Priority to SG11201704019TA priority patent/SG11201704019TA/en
Priority to US15/527,613 priority patent/US10100077B2/en
Priority to PCT/CZ2015/050013 priority patent/WO2016091236A1/en
Priority to EP15816356.8A priority patent/EP3229772B1/en
Priority to PL15816356T priority patent/PL3229772T3/pl
Priority to US15/528,056 priority patent/US10550144B2/en
Publication of CZ2014875A3 publication Critical patent/CZ2014875A3/cs
Publication of CZ308881B6 publication Critical patent/CZ308881B6/cs

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07H—SUGARS; DERIVATIVES THEREOF; NUCLEOSIDES; NUCLEOTIDES; NUCLEIC ACIDS
    • C07H19/00—Compounds containing a hetero ring sharing one ring hetero atom with a saccharide radical; Nucleosides; Mononucleotides; Anhydro-derivatives thereof
    • C07H19/02—Compounds containing a hetero ring sharing one ring hetero atom with a saccharide radical; Nucleosides; Mononucleotides; Anhydro-derivatives thereof sharing nitrogen
    • C07H19/04—Heterocyclic radicals containing only nitrogen atoms as ring hetero atom
    • C07H19/16—Purine radicals
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/70—Carbohydrates; Sugars; Derivatives thereof
    • A61K31/7042—Compounds having saccharide radicals and heterocyclic rings
    • A61K31/7052—Compounds having saccharide radicals and heterocyclic rings having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. nucleosides, nucleotides
    • A61K31/706—Compounds having saccharide radicals and heterocyclic rings having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. nucleosides, nucleotides containing six-membered rings with nitrogen as a ring hetero atom
    • A61K31/7064—Compounds having saccharide radicals and heterocyclic rings having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. nucleosides, nucleotides containing six-membered rings with nitrogen as a ring hetero atom containing condensed or non-condensed pyrimidines
    • A61K31/7076—Compounds having saccharide radicals and heterocyclic rings having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. nucleosides, nucleotides containing six-membered rings with nitrogen as a ring hetero atom containing condensed or non-condensed pyrimidines containing purines, e.g. adenosine, adenylic acid
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K8/00—Cosmetics or similar toiletry preparations
    • A61K8/18—Cosmetics or similar toiletry preparations characterised by the composition
    • A61K8/30—Cosmetics or similar toiletry preparations characterised by the composition containing organic compounds
    • A61K8/60—Sugars; Derivatives thereof
    • A61K8/606—Nucleosides; Nucleotides; Nucleic acids
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61Q—SPECIFIC USE OF COSMETICS OR SIMILAR TOILETRY PREPARATIONS
    • A61Q17/00—Barrier preparations; Preparations brought into direct contact with the skin for affording protection against external influences, e.g. sunlight, X-rays or other harmful rays, corrosive materials, bacteria or insect stings
    • A61Q17/04—Topical preparations for affording protection against sunlight or other radiation; Topical sun tanning preparations
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61Q—SPECIFIC USE OF COSMETICS OR SIMILAR TOILETRY PREPARATIONS
    • A61Q19/00—Preparations for care of the skin
    • A61Q19/08—Anti-ageing preparations
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07H—SUGARS; DERIVATIVES THEREOF; NUCLEOSIDES; NUCLEOTIDES; NUCLEIC ACIDS
    • C07H19/00—Compounds containing a hetero ring sharing one ring hetero atom with a saccharide radical; Nucleosides; Mononucleotides; Anhydro-derivatives thereof
    • C07H19/02—Compounds containing a hetero ring sharing one ring hetero atom with a saccharide radical; Nucleosides; Mononucleotides; Anhydro-derivatives thereof sharing nitrogen
    • C07H19/04—Heterocyclic radicals containing only nitrogen atoms as ring hetero atom
    • C07H19/16—Purine radicals
    • C07H19/173—Purine radicals with 2-deoxyribosyl as the saccharide radical
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07H—SUGARS; DERIVATIVES THEREOF; NUCLEOSIDES; NUCLEOTIDES; NUCLEIC ACIDS
    • C07H19/00—Compounds containing a hetero ring sharing one ring hetero atom with a saccharide radical; Nucleosides; Mononucleotides; Anhydro-derivatives thereof
    • C07H19/02—Compounds containing a hetero ring sharing one ring hetero atom with a saccharide radical; Nucleosides; Mononucleotides; Anhydro-derivatives thereof sharing nitrogen
    • C07H19/04—Heterocyclic radicals containing only nitrogen atoms as ring hetero atom
    • C07H19/16—Purine radicals
    • C07H19/19—Purine radicals with arabinosyl as the saccharide radical
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/70—Carbohydrates; Sugars; Derivatives thereof
    • A61K31/7042—Compounds having saccharide radicals and heterocyclic rings
    • A61K31/7052—Compounds having saccharide radicals and heterocyclic rings having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. nucleosides, nucleotides
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/70—Carbohydrates; Sugars; Derivatives thereof
    • A61K31/7042—Compounds having saccharide radicals and heterocyclic rings
    • A61K31/7052—Compounds having saccharide radicals and heterocyclic rings having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. nucleosides, nucleotides
    • A61K31/7056—Compounds having saccharide radicals and heterocyclic rings having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. nucleosides, nucleotides containing five-membered rings with nitrogen as a ring hetero atom
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/70—Carbohydrates; Sugars; Derivatives thereof
    • A61K31/7042—Compounds having saccharide radicals and heterocyclic rings
    • A61K31/7052—Compounds having saccharide radicals and heterocyclic rings having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. nucleosides, nucleotides
    • A61K31/706—Compounds having saccharide radicals and heterocyclic rings having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. nucleosides, nucleotides containing six-membered rings with nitrogen as a ring hetero atom

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Dermatology (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Birds (AREA)
  • Gerontology & Geriatric Medicine (AREA)
  • Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
  • Saccharide Compounds (AREA)

Abstract

6-aryl-9-glykosidpuriny obecného vzorce I, kde Gly znamená β-D-arabinofuranosyl nebo β-D-2´-deoxyribofuranosyl, Ar znamená benzyl nebo furfuryl, které mohou být nesubstituované nebo substituované jedním nebo více, s výhodou jedním až třemi, substituenty vybranými ze skupiny zahrnující hydroxyl, alkyl, halogen, alkoxy, amino, merkapto, karboxyl, kyano, amido, sulfo, sulfamido, acyl, acylamino, acyloxy, alkylamino, dialkylamino, alkylmerkapto, trifluormethyl, trifluormethoxy, a jejich použití jako regulátorů růstu, vývoje a stárnutí živočichů, rostlin a mikroorganismů.

Description

Vynález se týká 6-(benzylamino/furfurylamino)-9-p-D-arabinofuranosylpurinu nebo -β-ϋ-2'deoxyribofuranosylpurinu, které zpomalují stárnutí rostlinných, živočišných i lidských buněk.
Dosavadní stav techniky
Substituované deriváty adeninu jsou známy jako fýtohormony. Skála jejich vlastností je poměrně široká, zejména je známa jejich protinádorová a proapoptotická aktivita, tedy aktivity související zejména se snížením a omezením růstu nádorových buněk. Byly připraveny některé glykosylované deriváty, zejména ribosylované. Z arabinosylových derivátů byl připraven 6-benzylamino-9arabinosylpurin a publikován jako látka uplatňující se při inhibici replikace viru tabákové mozaiky v uříznutých listech Nicotiana glutinosa (Barai et al. Vestsi Akademii Nauk Belarusi 1: 18-22, 1992). 6-chlorpurinarabinosid byl připraven z 6-chlorpurinribosidu a byla zkoumána jeho antivirová aktivita (Maruyama et al. Chem. Pharm. Bull. 44: 2331-2334, 1996). Z důvodů protivirového testování byly také připraveny některé methylované deriváty 6-(benzylamino)-9-βD-arabinofuranosylpurinu a byla testována jejich protivirová aktivita na potírání virů Vaccinia virus a virus Herpes simplex. U benzylaminového derivátu nebyl pozorován žádný efekt a stejně tak ani u připravených 2-methylbenzyl, 3-methylbenzyl, 2,3-dimethylbenzyl, 2,6-dimethylbenzyl, 3,4-dimethylbenzyl derivátů. Slabá aktivita proti viru Vaccinia virus, kmen IHD byla pozorována u 2,4-dimethylbenzyl a 2,5-dimethylbenzyl substituentů (Masakatsu et al. Chem. Pharm. Bull. 25: 2482-2489, 1977). Určité A6-substituované deriváty adenin arabinosidu byly připraveny jako selektivní inhibitory varicella-zoster viru a byly to substituenty 6-methylamino, 6-dimethylamino, 6-ethylamino-, 6-A-ethylmethylamino-, Α,Α-diethylamino-, 6-w-propylamino-, 6isopropylamino-, 6-w-hexylamino-, 6-cyklohexylamino-, 6-anilino (Koszalka et al. Antimicrob. Agents Chemother. 35: 1437-1443,1991).
Předmětem tohoto vynálezu jsou glykosylované deriváty adeninu s antisenescenčními vlastnostmi, které jsou málo anebo vůbec toxické, a přitom vysoce účinné v procesech stárnutí, buněčného dělení a diferenciace.
Podstata vynálezu
Předmětem vynálezu je použití 6-aryl-9-glykosidpurinů obecného vzorce I
kde
- 1 CZ 308881 B6
Gly znamená P-D-arabinofuranosyl nebo p-D-2'-deoxyribofuranosyl,
Ar znamená benzyl nebo furfuryl, které mohou být nesubstituované nebo substituované jedním nebo více, s výhodou jedním až třemi, substituenty vybranými ze skupiny zahrnující hydroxyl, alkyl, halogen, alkoxy, amino, merkapto, karboxyl, kyano, amido, sulfo, sulfamido, acyl, acylamino, acyloxy, alkylamino, dialkylamino, alkylmerkapto, trifluormethyl, trifluormethoxy, jako kosmetických přípravků pro zpomalení stárnutí rostlin, savců, nebo pro in vitro zpomalení stárnutí buněk rostlin či savců, například keratinocytů a fibroblastů.
Dále je předmětem vynálezu způsob regulace stárnutí rostlin in vivo, nebo mikroorganismů, rostlinných a živočišných buněk in vitro, při němž se aplikuje látka obecného vzorce I.
Není-li uvedeno jinak, pak:
alkyl znamená přímý nebo rozvětvený C1-C6, s výhodou C1-C4, alkylový řetězec, acyl znamená acylovou skupinu s počtem uhlíků 2 až 6, halogen znamená atom halogenu vybraný ze skupiny zahrnující atom fluoru, atom bromu, atom chloru a atom jodu, sulfo znamená -SO,RC. ve které Rc znamená atom vodíku, přímou nebo rozvětvenou alkylovou, alkenylovou nebo alkynylovou skupinu obsahující 1 až 6 uhlíkových atomů, sulfoamido znamená -NHSO,R(|. kde Rd znamená atom vodíku, přímou nebo rozvětvenou alkylovou skupinu obsahující 1 až 6 uhlíkových atomů.
Výhodnými sloučeninami podle vynálezu jsou substituované heterocyklické sloučeniny vybrané ze skupiny zahrnující: 6-furfurylamino-9-p-D-arabinofuranosylpurin, 6-(2-fluorbenzylamino)-9P-D-arabinofuranosylpurin, 6-(3-fluorbenzylamino)-9-p-D-arabinofuranosylpurin, 6-(4fluorbenzylamino)-9-p-D-arabinofuranosylpurin, 6-(2-brombenzylamino)-9-p-Darabinofuranosylpurin, 6-(3-brombenzylamino)-9-p-D-arabinofuranosylpurin,6-(4brombenzylamino)-9-p-D-arabinofuranosylpurin, 6-(3-jodbenzylamino)-9-p-Darabinofuranosylpurin, 6-(2-chlorbenzylamino)-9-p-D-arabinofuranosylpurin,6-(3chlorbenzylamino)-9-p-D-arabinofuranosylpurin, 6-(4-chlorbenzylamino)-9-p-Darabinofuranosylpurin, 6-(2-methoxybenzylamino)-9-p-D-arabinofuranosylpurin,6-(3methoxybenzylamino)-9-p-D-arabinofuranosylpurin, 6-(4-methoxybenzylamino)-9-p-Darabinofuranosylpurin, 6-(2-hydroxybenzylamino)-9-p-D-arabinofuranosylpurin,6-(3hydroxybenzylamino)-9-p-D-arabinofuranosylpurin, 6-(4-hydroxybenzylamino)-9-p-Darabinofuranosylpurin, 6-(3,5-dihydroxybenzylamino)-9-p-D-arabinofuranosylpurin, 6-(3,4dimethoxybenzylamino)-9-p-D-arabinofuranosylpurin, 6-(3,5-dimethoxybenzylamino)-9-p-Darabinofuranosylpurin, 6-(2,3-dimethoxybenzylamino)-9-p-D-arabinofuranosylpurin, 6-(2,4dimethoxybenzylamino)-9-p-D-arabinofuranosylpurin, 6-(3-hydroxy-2-methoxybenzylamino)-9P-D-arabinofuranosylpurin, 6-(4-methylfurfurylamino)-9-p-D-2'-deoxyribofuranosylpurm, 6-(5methylfurfurylamino)-9-p-D-2'-deoxyribofuranosylpurin, 6-(4-hydroxyfurfurylamino)-9-p-D-2'deoxyribofuranosylpurin, 6-(5-hydroxyfurfurylamino)- 9-p-D-2'-deoxyribofuranosylpurin, 6-(2brombenzylamino)-9-p-D-2'-deoxyribofuranosylpurin, 6-(3-brombenzylamino)-9-p-D-2'deoxyribofuranosylpurin, 6-(4-brombenzylamino)-9-p-D-2'-deoxyribofuranosylpurin, 6-(3chlorbenzylamino)-9-p-D-2'-deoxyribofuranosylpurin, 6-(4-chlorbenzylamino)-9-p-D-2'deoxyribofuranosylpurin, 6-(2-methoxybenzylamino)-9-p-D-2'-deoxyribofuranosylpurin, 6-(3methoxybenzylamino)-9-p-D-2'-deoxyribofuranosylpurin, 6-(2-hydroxybenzylamino)-9-p-D-2'
-2 CZ 308881 B6 deoxyribofuranosylpurin, 6-(3-hydroxybenzylamino)-9-p-D-2-deoxyribofuranosylpurin, 6-(4hydroxybenzylamino)-9-β-D-2'-deoxyribofuranosylpurin.
Předmětem předkládaného vynálezu jsou 6-aryl-9-glykosidpuriny obecného vzorce I
kde
Gly znamená P-D-arabinofuranosyl nebo P-D-2'-deoxyribofuranosyl,
Ar znamená benzyl nebo furfuryl, které jsou substituované jedním nebo více, s výhodou jedním až třemi, substituenty vybranými ze skupiny zahrnující hydroxyl, halogen, alkoxy, amino, merkapto, karboxyl, kyano, amido, sulfo, sulfamido, acyl, acylamino, acyloxy, alkylamino, dialkylamino, alkylmerkapto, trifiuormethyl, trifluormethoxy.
Dále jsou předmětem předkládaného vynálezu kosmetické a/nebo tkáňové a/nebo růstově regulační přípravky obsahující jako účinnou látku alespoň jednu sloučeninu vzorce I. Tkáňové přípravky jsou zejména použitelné v biotechnologiích, zejména v tkáňových kulturách pro mikropropagaci rostlin. Růstové regulátory jsou určené pro využití v zemědělství, zejména pro zvýšení výnosu a kvality zemědělských produktů.
Kosmetická aplikace
Vhodné podání pro kosmetickou aplikaci je lokální, topické. Kosmetický přípravek zpravidla obsahuje od 0,1 do 95 % hmotn. aktivní látky, přičemž jednorázové dávky obsahují přednostně od 10 do 90 % hmotn. aktivní látky a při způsobech aplikace, které nejsou jednorázové, obsahují přednostně od 1 do 10 % hmotn. aktivní látky. Formy aplikace jsou např. masti, krémy, pasty, pěny, tinktury, rtěnky, kapky, spreje, disperze atd. Přípravky jsou připravovány známým způsobem, např. běžným mícháním, rozpouštěcími nebo lyofilizačními procesy.
Roztoky aktivních látek, suspenze nebo disperze, obzvláště izotonické vodné roztoky, suspenze a disperze, mohou být připraveny před použitím, např. v případě lyofilizovaných preparátů obsahujících aktivní látku samotnou nebo s nosičem jako je například mannitol.
Olejové suspenze obsahují jako olejovou složku rostlinné, syntetické nebo semisyntetické oleje. Oleje, které zde mohou být zmíněny, jsou obzvláště kapalné estery mastných kyselin, které obsahují jako kyselou složku mastnou kyselinu s dlouhým řetězcem majícím 8 až 22, s výhodou pak 12 až 22 uhlíkových atomů, např. kyselinu laurovou, tridekanovou, myristovou, pentadekanovou, palmitovou, margarovou, stearovou, arachidonovou a behenovou, nebo odpovídající nenasycené kyseliny, např. kyselinu olejovou, alaidikovou, eurikovou, brasidovou a linoleovou, případně s přídavkem antioxidantů, např. vitaminu E, β-karotenu nebo 3,5-di-tercbutyl-4-hydroxytoluenu. Alkoholová složka těchto esterů mastných kyselin nemá více než 6
-3 CZ 308881 B6 uhlíkových atomů a je mono- nebo polyhydrická, např. mono-, di- nebo trihydrické alkoholy jako methanol, ethanol, propanol, butanol nebo pentanol a jejich isomery, ale hlavně glykol a glycerol. Estery mastných kyselin jsou s výhodou např. ethyloleát, isopropylmyristát, isopropylpalmitát, „Labrafil M 2375 (polyoxyethylenglyceroltrioleát, Gattefoseé, Paříž), „Labrafil M 1944 CS (nenasycené polyglykolované glyceridy připravené alkoholýzou oleje z meruňkových jader a složený z glyceridů a esterů polyethylenglykolu; Gattefoseé, Paříž), „Labrasol (nasycené polyglykolované glyceridy připravené alkoholýzou TCM a složené z glyceridů a esterů polyethylen glykolu; Gattefoseé, Paříž), „Miglyol 812 (triglycerid nasycených mastných kyselin s délkou řetězce Cx až C12 od Hůls AG, Německo) a zvláště rostlinné oleje jako bavlníkový olej, mandlový olej, olivový olej, ricinový olej, sezamový olej, sójový olej a olej z podzemnice olejně.
Masti jsou emulze oleje ve vodě, které obsahují ne více než 70 %, ale přednostně 20 až 50 % vody nebo vodné fáze. Tukovou fázi tvoří uhlovodíky, např. vazelína, parafinový olej nebo tvrdé parafiny, které přednostně obsahují vhodné hydroxysloučeniny jako mastné alkoholy a jejich estery, např. cetylalkohol, nebo alkoholy lanolinu, s výhodou lanolin pro zlepšení kapacity pro vázání vody. Emulgátory jsou odpovídající lipofilní sloučeniny jako sorbitanové estery mastných kyselin (Spaný), s výhodou sorbitanoleát nebo sorbitanisostearát. Aditiva k vodné fázi jsou např. smáčedla jako polyalkoholy, např. glycerol, propylenglykol, sorbitol a polyethylenglykol, nebo konzervační prostředky či příjemně vonící látky.
Mastné masti jsou nevodné a obsahují jako bázi hlavně uhlovodíky, např. parafin, vazelínu nebo parafínový olej, a dále přírodní nebo semisyntetické tuky, např. hydrogenované kokosové triglyceridy mastných kyselin nebo hydrogenované oleje, např. hydrogenovaný ricínový olej nebo z podzemnice olejně, a dále částečné glycerolové estery mastných kyselin, např. glycerol mono- a distearát. Dále obsahují např. mastné alkoholy, emulgátory a aditiva zmíněná v souvislosti s mastmi, která zvyšují příjem vody.
Krémy jsou emulze oleje ve vodě, které obsahují více než 50 % vody. Používané olejové báze jsou mastné alkoholy, např. isopropylmyristát, lanolin, včelí vosk, nebo uhlovodíky, s výhodou vazelína (petrolátum) a parafínový olej. Emulgátory jsou povrchově aktivní sloučeniny s převážně hydrofilními vlastnostmi, jako jsou odpovídající neiontové emulgátory, např. estery mastných kyselin polyalkoholů nebo jejich ethylenoxy adukty, např. polyglycerických mastných kyselin nebo polyethylen sorbitanové estery či kyselé estery polyglycerických mastných kyselin (Tween), dále polyoxyethylenové étery mastných alkoholů nebo polyoxyethylenové estery mastných kyselin, nebo odpovídající iontové emulgátory, jako alkalické soli sulfátů mastných alkoholů, s výhodou laurylsulfát sodný, cetylsulfát sodný nebo stearylsulfát sodný, které jsou obvykle používány v přítomnosti mastných alkoholů, např. cetylstearylalkoholu nebo stearylalkoholu. Aditiva k vodné fázi jsou mimo jiné činidla, která chrání krémy před vyschnutím, např. polyalkoholy jako glycerol, sorbitol, propylenglykol a polyethylenglykol, a dále konzervační činidla a příjemně vonící látky.
Pasty jsou krémy nebo masti obsahující práškové složky absorbující sekreci jako jsou oxidy kovů, např. oxidy titanu nebo oxid zinečnatý, a dále talek či silikáty hliníku, které mají za úkol vázat přítomnou vlhkost nebo sekreci.
Pěny jsou aplikovány z tlakových nádob ajsou to kapalné emulze oleje ve vodě v aerosolové formě, přičemž jako hnací plyny jsou používány halogenované uhlovodíky, jako chlor-fluor nižší alkany, např. dichlorfluormethan a dichlortetrafluorethan, nebo přednostně nehalogenované plynné uhlovodíky, vzduch, N2O či oxid uhličitý. Používané olejové fáze jsou stejné jako pro masti a také jsou používána aditiva tam zmíněná.
Tinktury a roztoky obvykle obsahují vodné-etanolickou bázi, ke které jsou přimíchány zvlhčovadla pro snížení odpařování, jako jsou polyalkoholy, např. glycerol, glykoly a polyethylenglykol, dále promazávadla jako estery mastných kyselin a nižších polyethylenglykolu, tj. lipofilní látky
-4 CZ 308881 B6 rozpustné ve vodné směsi nahrazující tukové látky odstraněné z kůže ethanolem, a pokud je to nutné i ostatní neutrální látky a aditiva.
Vynález je dále objasněn s pomocí příkladů, které ale jeho rozsah neomezují.
Objasnění výkresů
Obr. 1: Růstová křivka pro sloučeninu 6-benzylamino-9-p-D-arabinofuranosylpurin (příklad 12).
Obr. 2: Účinek 6-furfurylamino-9-p-D-arabinofůranosylpurinu (2212) a 3-fluorbenzylamino-9-pD-arabinofuranosylpurinu (2213) na retenci chlorfylu v extirpovaných listových segmentech pšenice (příklad 15).
Příklady převedení vynálezu
Příklad 1: Příprava 6-(3-methoxybenzylamino)-9-^-D-arabinofuranosylpurinu
K roztoku 9-p0-D-arabinofůranosyl)hypoxantinu (100 mg, 0,37 mmol) a (benzotriazol-1yloxy)tris(dimethylamino)fosfoniumhexafluorfosfát (BOP) (196 mg, 0,44 mmol) v dimethylformamidu (DMF) (1,86 ml) byla přidána DIPEA (W-diisopropylcthylamin) (97 μΐ, 0,56 mmol), následně byl přidán 3-methoxybenzylamin (56 μΐ, 0,56 mmol). Výchozí látka 9-(/?-Darabinofůranosyl)hypoxantinje komerčně dostupný (Jena Bioscience, N-1002) nebo se dá připravit z 9-(/ED-arabinofůranosyl)adeninu. Reakční směs byla za pokojové teploty míchána pod argonem přes noc (16 hodin). Reakční směs byla zahuštěna na vakuové rotační odparce a poté byla reakční směs dále zpracována jedním ze dvou následně uvedených postupů. Buď byla reakční směs po odpaření přečištěna sloupcovou kapalinovou chromatografií (mobilní fáze chloroform-methanol 19/1) nebo byla po odpaření k odparku přilita po částech vychlazená voda (15 ml) a krátce vortexována, pochvíli se začala postupně uvolňovat nažloutlá látka. Reakční směs byla vložena do lednice přes noc. Produkt byl zfíltrován a jednou rekrystalizován z isopropanolu a dvakrát z ethanolu. Produktem je bílá krystalická látka. V obou případech izolace činil výtěžek reakce 40 %, TLC (chloroformmethanol (90:10 (v:v)): jedna skvrna; HPLC: čistota > 98%. [M+H+]388, 'HCDMSO-ďe, 300 MHz) δ ppm: 3,65 - 3,66 (m, 2H), 3,70 (s, 3H), 3,78 (d, J = 3,7 Hz), 4,14 (s, 2H), 4,67 (bs, 2H), 5,09 (t, J = 5,3 Hz), 5,52 (d, J = 3,8 Hz), 5,61 (d, J = 4,5 Hz), 6,27 (d, J = 3,9 Hz), 6,77 (d, J = 7,1 Hz), 6,89 (s, 1H), 6,91 (s, 1H), 7,20 (t, J = 7,6 Hz), 8,19 (s, 1H), 8,21 (s, 1H), 8,34 (bs, 1H). MS:
Příklad 2: Příprava 6-(3-hydroxybenzylamino)-9-(^-D-arabinofůranosylpurinu
K roztoku 9-(/?-D-arabinofůranosyl) hypoxantinu (100 mg, 0,37 mmol) a BOP (196 mg, 0,44 mmol) v DMF (1,86 ml) byla přidána DIPEA (ΛΆ'-diisopropylcthylamin) (97 μΐ, 0,56 mmol) následně byl přidán 3-hydroxybenzylamin (50 μΐ, 0,50 mmol). Výchozí látka 9-(β-Όarabinofůranosyl) hypoxantin je komerčně dostupný (Jena Bioscience, N-1002). Reakční směs byla za pokojové teploty míchána pod argonem přes noc (10 hodin). Reakční směs byla zahuštěna na vakuové rotační odparce a přečištěna sloupcovou kapalinovou chromatografií (mobilní fáze chloroform-methanol 19/1). Produktem byla bílá krystalická látka. Výtěžek reakce činil 35 %, TLC (chloroformmethanol (90:10 (v:v)): jedna skvrna; HPLC: čistota > 98%, [M+H+]374, NMR: TRDMSO-A,. 300 MHz) δ ppm: 3,66 (s, 2H), 3,78 (s, 1H), 4,15 (s, 2H), 4,63 (bs 2H), 5,12 (s, 1H), 5,55 (s, 1H), 5,64 (s, 1H), 6,28 (s, 1H), 6,58 (d, J = 7,5 Hz), 6,73 (s, 1H), 6,76 (s, 1H), 7,07 (t, J = 7,5 Hz), 8,19 (s, 1H), 8,21 (s, 1H), 9,27 (bs, 1H)
Příklad 3: Příprava 6-(3-fluorbenzylamino)-9-^-D-arabinofůranosylpurinu
- 5 CZ 308881 B6
K roztoku 9-(^-D-arabinofuranosyl)hypoxantinu (100 mg, 0,37 mmol) a BOP (196 mg, 0,44 mmol) v DMF (1,86 ml) byla přidána DIPEA (Λξ/V-diisopropylethylamin) (97 μΐ, 0,56 mmol) následně byl přidán 3-fiuorbenzylamin (70 μΐ, 0,76 mmol). Výchozí látka 9-(β-Όarabinofuranosyl)hypoxantin byl připraven z 9-(/?-D-arabinofůranosyl)adeninu. Reakční směs byla za pokojové teploty míchána pod argonem 24 h. Reakční směs byla zahuštěna na vakuové rotační odparce a poté byla reakční směs dále po odpaření k odparku přilita po částech vychlazená voda (15 ml) a krátce vortexována, po chvíli se začala postupně uvolňovat nažloutlá látka. Reakční směs byla vložena do lednice na 10 h. Produkt byl zfiltrován a jednou rekrystalizován z isopropanolu a dvakrát z ethanolu. Produktem je bílá krystalická látka. V obou případech izolace činil výtěžek reakce 70%, TLC (chloroformmethanol (90:10 (v:v)): jedna skvrna; HPLC: čistota > 98 %. [M+H+] 376, NMR: 'H(DMSO-A„ 300 MHz) δ ppm: 3,66 (s, 2H), 3,79 (s, 1H), 4,14 (s, 2H), 4,74 (bs, 2H), 5,09 (s, 1H), 5,50 (s, 1H), 5,60 (s, 1H), 6,29 (s, 1H), 7,17 (s, 4H), 8,22 (s, 2H), 8,37 (bs, 1H).
Příklad 4: Příprava 6-furfurylamino-9-(/?-D-arabinofuranosylpurinu
Do reakční nádoby (10 ml) mikrovlnného reaktoru CEM SP byl předložen 6-chlorpurin tetraacetylarabinopyranosidu (100 mg, 0,242 mmol) v methanolu (3 ml), poté byl přidán furfurylamin (26,8 μΐ, 0,291 mmol) s triethylaminem (151 μΐ, 1,09 mmol). Reakční směs byla vložena do mikrovlnného reaktoru CEM Discover SP a reakční podmínky byly nastaveny následovně: dynamická metoda, tzn. nastaven reakční čas na 3 h, teplota na 100 °C, výkon na 50 wattů a tlak 100 psi. Reakční směs byla zahuštěna na vakuové odparce a přečištěna pomocí sloupcové kapalinové chromatografie (mobilní fáze: chloroform-methanol 9/1) Produktem je bílá látka: kinetin arabinopyranosid směs a a β anomeru 5/1. Jednotlivé isomery byly od sebe zcela separovány. Výtěžek: 30 % a anomeru a 10 % β anomeru. Výchozí látka 6-chlorpurin tetraacetylarabinopyranosidu byla připravena tak, že do vysušené baňky byl předložen 6-chlorpurin (0,412 g, 2,66 mmol) a jehlou přes septum byla přidána tetraacetylarabinosa (0,771 g, 2,42 mmol) rozpuštěná v suchém acetonitrilu (15 ml). Poté byl postupně jehlou přikapáván chlorid ciničitý (5,6 mmol 0,6 ml). Reakční směs byla míchána za pokojové teploty přes noc pod argonem. Směs byla zahuštěna na vakuové rotační odparce a poté byl přilit ethylacetát (25 ml). Organický podíl byl extrahován hydrogenuhličitanem sodným (30 ml) a vodou (2x 30 ml) a poté byla organická frakce vysušena síranem sodným a zahuštěna na vakuové rotační odparce. Produkt byl přečištěn sloupcovou kapalinovou chromatografií, mobilní fáze dichlormethan-aceton 9/1. Odpařením čistých frakcí vznikl čirý gelovitý odparek, který byl pomocí diethyletheru převeden na pěnovitý bílý produkt (6-chlorpurin tetraacetylarabinopyranosid), který byl směsí a a β anomeru. Výtěžek: 50 %, HPLC čistota: 98 %, [M+H+] 348, NMR: 'H(DMSO-ó/(,. 300 MHz) δ ppm: 3,61 - 3,72 (m, 2H), 3,78 (d, J = 3,9 Hz), 4,14 (s, 2H), 4,69 (bs, 2H), 5,11 (t, J = 5,4 Hz), 5,54 (d, J = 3,9 Hz), 5,62 (d, J= 4,8 Hz), 6,22 (d, J = 2,7 Hz), 6,27 (d, J = 4,2 Hz), 6,36 (t, J = 3,0 Hz), 7,54 (s, 1H), 8,21 (s, 3H)
Tabulka 1: Látky připravené metodou podle příkladů 1 až 4 a elementární analýza připravených látek
Elsss-erřéámí analýza
%c ES-MS
Furfurd síhlbss 5 1.5751,6 4.9/4 S 20.2,-25,2 348
a tra* 54^'54,1 4.8/4,8 18,728,4 376
a tra* 54,4/53.9 4.8/4.7 cd ^4 376
54,4/54,3 4,8/4,8 18,7/18.3 376
52.1/52,0 4.6-4,7 17.9/17.5 392
52.1/51.9 46/4.6 17,9/17.3 392
á-dsioriseBZírĚamšass 52,131,8 4.6/4,5 17,9/17.1 392
-6CZ 308881 B6
L-dhlorisenzvhusisssa 52,1/51,8 4,64.5 Π 9/131 392
46,8.4^3 4,2/4.1 16,1/15,5 437
46,8/47,8 4,2/4.5 1015.6 437
4-braissčbeszyhQÚQS 46,3/46,9 4,2/43 16,1/15,4 437
3-ÍOdsbsBzvlaissEm 42,3/42.4 333.9 14,5/14,6 484
55,3/55,9 5,5/53 18.1/17.9 388
55,3/55,5 5,5/5,7 18,1/183 388
55.8/55.6 5.5/5,5 umí 388
54,7/54,6 5.1 5 0 18,8./18,8 374
54,7/54,5 5.1/5,1 18,8/18,5 374
44iv'dr»xYben^l^Q3^ 54.7/54.6 5.1/4,9 18,8/18,6 374
47,9/47,8 4.04.1 16,4/16,5 427
3 A-dkhksbmzvhsůuo 47.9/47,9 4.074.2 16.416,5 427
2.3 -dihydrosy 52,4/52.5 4.9/43 18,0.8,1 39®
33 -div drsxy bsEzvlasisio 52.4-52.6 49/4.9 18,08,3 39®
53.6/53,4 5.235,1 17.4/17,5 404
53,6/53,5 5.2/5.9 17,4/17,6 404
SJ-dúae&cscvbesosv' lamms 54,7/54,S 5..6/5.7 16.8/16,7 438
54,7/54,6 5,6353 16,8/16,6 438
3,4-dÍ3e&aSwb«^ 54.7/54.8 5.^.« 163/16.5 41S
3.5 -dúsaetheobeszylasi áao 54,7/54,6 5.635,7 163/16,9 438
Přikládá: Příprava látky 6-(3-methoxybenzylamino)-9-p-D-arabinofuranosylpurinu ve čtvrtprovozním měřítku
Vstupní suroviny: 9-p-D-Arabinofuranosyl-hypoxanthin (1072 g, 4 mol), (Benzotriazol-l-yloxy)tris(dimethylamino)fosfonium hexafluorfosfát (BOP) v množství 2124 g (4,8 mol), dimethylformamid (DMF) v množství 20 1, Λζ/V-Diisopropyl-řV-ethylamin (DIPEA) v množství 1045 ml (6 mol), 3-Methoxybenzylamin v množství 658 g (4,8 mol), demi voda 40 1, 2propanol 30 1.
Postup:
Do 50 1 skleněného duplikovaného reaktoru Al, opatřeného teploměrem (PT100) a zpětným chladičem, se předloží dimethylformamid 20 1. Reaktor se řádně naplní inertní atmosférou (dusík). Je zapnut spínač míchání a násypným otvorem. Za použití respirátoru se nasype do reaktoru 9-βD-arabinofuranosyl-hypoxanthin a BOP (2124 g). Jakmile dojde k rozpuštění pevné fáze, přidá se DIPEA (1045 ml,) a3-methoxybenzylamin báze (658 g), přičemž je reaktor pod neustálým mírným proudem dusíku. Poté se reakční směs vyhřeje pomocí duplikace na teplotu 50 °C, při níž se míchá po dobu 20 hodin. MOK: po 12 h reakce vzorek na TLC: 1 ml aliquot se zředí 4 ml methanolu a roztok se nanese vedle všech výchozích látek a standardu produktu na TLC destičku, která se nechá vyvíjet v mobilní fázi: chloroform - methanol - vodný amoniak; 4:1:0,05). Pokud nedochází k úplnému doreagování, pokračuje se dále v míchání při 50 °C, resp. je možné přistoupit i k přidání dalšího podílu BOP (200 g). Pokud dojde k uspokojivé konverzi (> 90 %), reakční směs se vychladí pomocí duplikace na teplotu 20 až 25 °C a poté se vypustí do transportní nádoby. Reaktor se následně vypláchne malým množstvím methanolu (3x 1 1), přičemž methanolické oplachy se spojí s reakční směsí). Reakční směs se zahustí na cirkulační odparce pomocí vakua vodokružné vývěvy; parametry tlak/teplota dle pokynů technologa. Destilační zbytek se za horka vypustí do transportní nádoby. Proplach odparky se provede opět horkým methanolem - zpracuje se zvlášť na rotační vakuové odparce. Do reaktoru Al se předloží demi voda (40 1), zapne se míchání a chlazení v duplikaci. Obsah reaktoru se ochladí na 10 °C a pozvolna se začne dávkovat destilační zbytek reakční směsi (viz shora uvedený text). Transportní nádoba se vypláchne methanolem (3x 250 ml) a methanolický oplach se rovněž nalije do reaktoru. Obsah reaktoru se míchá 3 hodiny při teplotě 10 až 15 °C. Vyloučený precipitát se odsaje na velké Bůchnerově nálevce a promyje se
-7 CZ 308881 B6 vychlazenou (+5 °C) vodou (4x 1 1). Surový produkt se suší v horkovzdušné sušárně při 80 °C do konstantní hmotnosti. Výtěžek: 1200 až 1250 g.
Krystalizace
Násada pro 6-(3-methoxybenzylamino)-9-p-D-arabinofuranosylpurin
Surový produkt: 1000 g, 2-propanol: 18 1, aktivní uhlí CXV 50 g.
Postup: Do reaktoru Al se předloží 2-propanol (15 1), zapne se míchání a násypným otvorem se přidá surový 6-(3-methoxybenzylamino)-9-3-D-arabinofuranosylpurin (1000 g). Obsah reaktoru se vyhřeje pomocí duplikace na 80 °C, přičemž by mělo dojít k rozpuštění surového produktu. Pokud nedojde k rozpuštění, pokračuje se v míchání při 80 °C, resp. se přidá další podíl 2propanolu. Jakmile je veškerá pevná fáze v roztoku, opatrně se přidá aktivní uhlí (50 g; pozor na utajený var!). Po přidání uhlí se pokračuje v míchání při 80 °C po dobu 15 minut a poté se provede karbofiltrace pomocí důkladně nahřáté Bůchnerovy nálevky (horkovzdušná sušárna, 110 °C). Kotel se vypláchne 2-propanolem (2x 1 1) a tímto 2-propanolem se prolije filtračním koláč v Bůchnerově nálevce. Filtrát a proplach se spojí a umístí do transportní nádoby ke krystalizaci. Produkt se nechá krystalovat při teplotě +5 až +10 °C (chladovka) po dobu 12 hodin, poté se odfiltruje, promyje vychlazeným (+5 °C) 2-propanolem (3x 500 ml) a suší se v horkovzdušné sušárně při 70 °C do konstantní hmotnosti. Výtěžek: 750 až 800 g, Čistota HPLC: > 98 %.
Příklad 6: Příprava 6-(3-methoxybenzylamino)-9-p-D-2'-deoxyribofuranosylpurinu
K roztoku 2'-deoxyinosinu (252 mg) a BOP (531 mg) v suchém DMF (5 ml) se za teploty místnosti pod atmosférou dusíku nebo argonu přidá DIPEA (261 μΐ) a 3-methoxybenzylamin (167 μΐ). Reakční směs se poté míchá za pokojové teploty 16 hodin. Poté se provede kontrola průběhu reakce pomocí TLC (mobilní fáze: chloroform-methanol-25% vodný amoniak; 4:1: 0,05). Pokud není konverze úplná, přidá se další podíl BOP (354 mg; 0,8 mmol), reakční směs se vyhřeje na teplotu 60 °C a při ní se dále míchá 6 hodin. Pokud již není přítomna skvrna výchozího 2'-deoxyinosinu, reakční směs se zahustí na rotační vakuové odparce (teplota lázně max. 55 °C). Odparek (cca 1,5 g ) se vyčistí chromatografícky na silikagelu (150 g); mobilní fáze: 0 až 20 % methanolu v dichlormethanu. Výtěžek: 270 mg (79 %), Čistota HPLC-MS: 98+%, [M+H+] 372, mp 165 až 170 °C, C/H/N: 58,2/58,1; 5,7/5,7; 18,9/18,8; Ή(ϋΜ8Ο-ί/6, 300 MHz) δ ppm: 2,25 - 2,37 (m, 1H), 2,45 - 2,64 (m, 1H), 3,50 - 3,68 (m, 2H), 3,70 (s, 3H), 3,85 - 3,90 (m, 1H), 4,33 - 4,45 (m, 1H), 4,67 (bs, 2H), 4,85 (t, 1H), 5,10 (d, J = 4,0 Hz), 6,30 (t, J = 6,9 Hz), 6,77 (d, J = 7,1 Hz), 6,89 (s, 1H), 6,91 (s, 1H), 7,20 (t, J = 7,6 Hz), 8,19 (s, 1H), 8,21 (s, 1H), 8,34 (bs, 1H).
Příklad 7: Příprava 6-(2-hydroxybenzylamino)-9-p-D-2'-deoxyribofuranosylpurinu
K roztoku 2'-deoxyinosinu (252 mg) a BOP (664 mg) v suchém DMF (8 ml) se za pokojové teploty pod atmosférou argonu byl přidán DIPEA (348 μΐ) a 2-hydroxybenzylaminu (131 μΐ). Reakční směs se poté míchá za teploty 50 °C 20 hodin. Poté se provede kontrola průběhu reakce pomocí TLC (mobilní fáze: chloroform-methanol-25% vodný amoniak; 4:1: 0,05). Pokud není konverze úplná, přidá se další podíl BOP (354 mg; 0,8 mmol), reakční směs se vyhřeje na teplotu 60 °C a při ní se dále míchá 10 hodin. Pokud již není přítomna skvrna výchozího 2'-deoxyinosinu, reakční směs se zahustí na rotační vakuové odparce (teplota lázně max. 55 °C). Odparek (cca 1,5 g) se vyčistí chromatografícky na silikagelu (150 g); mobilní fáze: 0 až 20 % methanolu v dichlormethanu. Výtěžek: 250 mg (70 %), Čistota HPLC-MS: 98+%, [M+H+] 358, mp 172 až 175 °C, C/H/N: 57,1/57,2; 5,3/5,4; 19,6/19,2; Ή(ϋΜ8Ο-ί/6, 300 MHz) δ ppm: 3,66 (s, 2H), 3,78 (s, 1H), 4,15 (s, 2H), 4,63 (bs 2H), 5,12 (s, 1H), 5,55 (s, 1H), 5,64 (s, 1H), 6,28 (s, 1H), 6,58 (d, J = 7,5 Hz), 6,73 (s, 1H), 6,76 (s, 1H), 7,07 (t, J = 7,5 Hz), 8,19 (s, 1H), 8,21 (s, 1H), 9,27 (bs , 1H).
Příklad 8: Příprava 6-(2-hydroxy-3-methoxybenzylamino)-9-p-D-2'-deoxyribofuranosylpurinu
- 8 CZ 308881 B6
K roztoku 2'-deoxyinosinu (252 mg) a BOP (664 mg) v suchém DMF (10 ml) se za pokojové teploty 50 °C pod atmosférou argonu přidá DIPEA (348 μΐ) a 2-hydroxy-3-methoxybenzylamin (165 μΐ). Reakční směs se poté míchá za teploty 50 °C nejméně 20 hodin. Poté se provede kontrola průběhu reakce pomocí TLC (mobilní fáze: chloroform-methanol-25% vodný amoniak; 4:1: 0,05). Pokud není konverze úplná, přidá se další podíl BOP (354 mg; 0,8 mmol), reakční směs se vyhřeje na teplotu 70 °C a při ní se dále míchá 6 hodin. Pokud již není přítomna skvrna výchozího 2'deoxyinosinu, reakční směs se zahustí na rotační vakuové odparce (teplota lázně max. 55 °C). Odparek (cca 1,5 g ) se vyčistí chromatograficky na silikagelu (150 g); mobilní fáze: 0 až 20 % methanolu v dichlormethanu. Výtěžek: 270 mg (79 %), Čistota HPLC-MS: 98 %, mp 174 až 178 °C, [M+H+] 388, C/H/N: 55,8/55,3; 5,5/5,6; 18,1/18,2; 'H(DMSO-A„ 300 MHz) δ ppm: 2,25 - 2,37 (m, 1H), 2,45 - 2,64 (m, 1H), 3,50 - 3,68 (m, 2H), 3,77 (s, 3H), 3,85 - 3,90 (m, 1H), 4,33 - 4,45(m, 1H), 4,67 (bs, 2H), 4,85 (t, 1H), 5,10 (d, J= 4,0 Hz), 5,39 (d, J = 6,0 Hz), 6,30 (t, J= 6,9 Hz), 6,77 (d, J = 7,1 Hz), 6,9 (s, 1H), 7,20 (t, J = 7,6 Hz), 8,19 (s, 1H), 8,21 (s, 1H), 8,34 (bs, 1H).
Příklad 9: Příprava 6-(fúrfurylamino)-9-p-D-2'-deoxyribofuranosylpurinu
K roztoku 2'-deoxyinosinu (252 mg) a BOP (670 mg) v suchém DMF (10 ml) se za teploty 50 °C pod atmosférou argonu přidá DIPEA (350 μΐ) a fúrfúrylamin (150 μΐ). Reakční směs se poté míchá za teploty 60 °C nejméně 10 hodin. Poté se provede kontrola průběhu reakce pomocí TLC (mobilní fáze: chloroform-methanol-25). Pokud není konverze úplná, přidá se další podíl BOP (354 mg; 0,8 mmol), reakční směs se vyhřeje na teplotu 70 °C a při ní se dále míchá 6 hodin. Pokud již není přítomna skvrna výchozího 2'-deoxyinosinu, reakční směs se zahustí na rotační vakuové odparce (teplota lázně max. 55 °C). Odparek (cca 1,5 g) se vyčistí chromatograficky na silikagelu (150 g); mobilní fáze: 0 až 20 % methanolu v dichlormethanu. Výtěžek: 300 mg (82 %), Čistota HPLC-MS: 98 %, [M+H+] 332, C/H/N: 54,4/54,3; 5,2/5,2; 19,3/19,5 Ή(ϋΜ8Ο-ί/6, 300 MHz) δ ppm: 3,61 3,72 (m, 2H), 3,78 (d, J = 3,9 Hz), 4,14 (s, 2H), 4 69 (bs, 2H), 5,11 (t, J = 5,4 Hz), 5,54 (d, J = 3,9 Hz), 5,62 (d, J = 4,8 Hz), 6,22 (d, J = 2,7 Hz), 6,27 (d, J = 4,2 Hz), 6,36 (t, J= 3,0 Hz), 7,54 (s, 1H), 8,21 (s, 3H).
Tab. 2: Látky připravené podle příkladů 6 a9
-9CZ 308881 B6
Elssaesitámí analysa vyp^tĚíenc-rLakseTio
kc *4H 0-7 ES-MS [M-H j
4 Φπϊτ&ιγ’γ 55.^5.5 5.5/5.6 18.5/18.4 346
S-msáivlfijrfun-LassisEio 55.6/55.4 5322 10/30 346
51^1,8 4,92,9 23,223.1 348
j-hvdrOxviGfcr/laEišac 51.9/52.0 4,94.8 2Ř2/2G.2 348
543/542 4.84,8 18.640 3-76
4-4ιΥ·αΟηθ3π;ητϋ 543/54.3 4.84.9 18.6/10 3-76
2 48.640 4,344 162/16.7 421
<6.48.6 434.5 167/16.8 421
48 6485 4 ^4 3 1-6,216.9 421
58.2/58,3 5,7/52 18,928.6 372
S-mAKsyfeeBgylaasB»__________ 50/58,1 5,74.9 18,928,7 372
2-hvArarrbaisv___________ 57J.27.2 5.4.53 19.6/m 358
3 -hydr 57.137,3 5,4/5,3 19,629,5 358
44:ν<Οϊ~/ύ*ηζν^ 57.127.1 5.4/5.2 19/629,5 358
54,7/545 5,12.2 18.8/18,.7 3-74
54,7/54.8 5.123 18.8718,6 3-74
2-hydrcsy-3- 55,825,7 5,5/5,6 18,120 388
55,8/554 5,52.7 13,1/18.,3 3SS
56.9/568 5.875.7 10274 4S2
56,9/56.9 525.6 17.5/17,5 402
569/50 5.82 A 17.5/17,7 402
56.9/56,9 5.875,9 17,5-27,8 402
Příklad 10: Cytotoxicita nových derivátů pro kožní buňky stanovená MTT in vitro testem
MTT test je standardní test toxicity založený na fotometrickém měření schopnosti metabolicky aktivních buněk redukovat MTT (3-(4,5-dimethylthiazol-2-yl)-2,5-difenyltetrazoliumbromid) na formazan. V testu byl sledován vliv 72hodinového působení několika koncentrací látek (šestinásobná ředící řada, maximální koncentrace = 50 mikroM) na viabilitu kožních fibroblastů BJ a kcratinocytu HaCaT. 5000 buněk bylo vyseto do jednotlivých jamek 96jamkové mikrotitrační ίο destičky 24 hodin před přidáním testovaných látek. Jako negativní kontrola bylo použito DMSO vehiculum. Po 72hodinovém působení bylo přidáno nové médium s MTT (Sigma, M2128) do konečné koncentrace 0,5 mg/ml. Po třech hodinách bylo médium odstraněno a formazan obsažený v buňkách rozpuštěn v DMSO. Absorbance byla změřena při 570 nm (640 nm referenční vlnová délka). Hodnoty IC50 byly vypočteny z dávkových křivek. 6-Benzylaminopurin ribosid a 615 fůrfurylaminopurin ribosid byly použity jako pozitivní kontroly - jsou v testu MTT hodnoceny jako toxické. Absorbance byla měřena při 570 nm (640 nm referenční vlnová délka). Hodnoty IC50 byly vypočteny z koncentračně závislých křivek. Byly obdrženy následující výsledky:
- 10CZ 308881 B6
lCJt (μΜ)
dimethylsulfbxid >50
6-benzyIamino-9-3-D-arabinofuranosylpurin >50
6-furfurylamino-9-p-D-arab.inofiiranosylpurin >50
6-(3-methoxybenzyl3imno)-9-P“D-arabinofuj:anosylpurin >50
6-(2ChlorfjenzylamiiK>)-9-JED-arabinofur^ >50
6-(3-hydroxyben2yÍamino)-9-p-D-arabinofitranosylpririn >50
6-(3-chlorbenzylam:ino)-9-p-.D«arabinofi.iranosylpurin >50
6-(2,3-ďimethoxybenzylamino)-9-p-D-arabínofuranosylpurin 49
6-(2J,4-triraethoxybenzyIamíno)-9P-D-arabínofiiranosylpurin
I 6-benzyiaminop«rin-9-ribosylpurin (srovnávací látka)
I £fiiríutylamiao-9-ribo^ (srovnávací látka)
Příklad 11: SRB in vitro test cytotoxicity
SRB test je standardní test toxicity založený na fotometrickém měření obsahu buněčného proteinu po obarvení sulforhodaminem B. Sledovali jsme v něm přežití kožních fibroblastů BJ a keratinocytů HaCaT po 72 hodinovém působení několika koncentrací (šestinásobná ředící řada, maximální koncentrace = 50 mikroM) zkoumaných látek. Přibližně 5000 buněk bylo vyseto do jednotlivých jamek 96-jamkové mikrotitrační destičky 24 h před přidáním testovaných látek. DMSO vehikulum bylo použito jako netoxická, negativní kontrola. N6-benzylaminopurin ribosid a kinetin ribosid byly použity jako pozitivní, toxická kontrola. Po třech dnech bylo médium odstraněno a buňky byly zafixovány 10% (hmotn./obj.) trichloroctovou kyselinou. Po intenzivním propláchnutí destilovanou vodou byl přidán 0,4% (hmotn./obj.) roztok SRB v kyselině octové a fixované buňky byly barveny 30 minut. Nenavázané barvivo bylo odmyto destilovanou vodou a navázaný SRB byl rozpuštěn v nepufrované 10 mM Tris bázi. Absorbance byla měřena při 564 nm. Hodnoty IC50 byly vypočteny z dávkových křivek.
1 ICS„ (mikroM)
dimeihylsulfoxid >50
6-benzyIaminopuríne-9-p-D-arabínofuranosylpurin 1 >50
6-furfurylamino-9-p-D-arabínofuranosylpurin 1 >50
6~(3-methoNybenzylamino)-9-[i-D-arabinofi.iranosylpurin 6-(2-chlorbeazylamiuo)~9-p-D-arabiuofuranosylpurm >50 1 >50
6T3-hydroKybenzylamino>9-p-D-8rabinoiurano^ 6-(3-chlorbenzylammo)-9-p-D-arabmo.furanosylpurín 6-(2s3*dimetl:mybenzylamino)A>-p-D-aralfinoftonosylpurm 6-(2,3.4triniethoxybenzylammo)-9-p4>arabÍnofiiranos^ 6-furfuryiamino-9-ribosylpurin (srovnávací látka) >50 >50 Ί >50 < 3
Příklad 12: Růstová křivka pro látku 6-(benzylamino)purin-9-p-D-arabinofiiranosylpurin
- 11 CZ 308881 B6
Experimenty byly provedeny s BJ kožními fibroblasty na 24-jamkových destičkách na tkáňové kultury. Přibližně 10 000 buněk bylo umístěno do jednotlivých jamek. Buňky byly ponechány v médiu obsahujícímu DMEM s 10% FBS po dobu 24 h. Testovaná sloučenina byla přidána k finální koncentraci pohybující se mezi 12,5 a 100 μΜ. DMSO rozpouštědlo bylo také testováno jako kontrola variability ve dvou sloupcích destičky a to A a D. Tkáňové médium s testovanou látkou nebo DMSO bylo vyměněno dvakrát týdně. Po následné tryptinizaci byly spočteny buňky ve čtyřech jamkách pro každou koncentraci na přístroji Coulter Z2 Beckman po 7 a 14 dnech. Výsledky jsou znázorněny na obr. 1 - testovaná sloučenina neovlivňuje negativně viabilitu buněk.
Příklad 13:7« vitro test podráždění kůže na modelu EpiDERM™
EpiDERM™ je 3D model epidermis vyráběný firmou Mattek, vliv testovaných látek na tkáň se hodnotí pomocí testu MTT. Testovány byly dva roztoky (dvě aplikační formy) látek 6fiirfurylamino-9-p-D-arabinofuranosylpurin a 6-(3-methoxybenzylamino)-9-p-Darabinofůranosylpurin o koncentracích 1 mM a 200 mikromolámí v 0,5 % DMSO/99,5 % PBS, přičemž byl použit standardní protokol nazvaný INVITRO EpiDermTM SKIN IRRITATION TEST. Po pre-inkubaci tkání bylo na jejich povrch naneseno 30 mikrolitrů aplikační formy roztoku. Délka expozice byla 60 min. Pro každou koncentraci a kontrolu byly použity tři tkáně. Po opláchnutí aplikovaného roztoku byly tkáně inkubovány po dobu 42 h, aby byla možná reparace případného poškození. Pak byla tkáň inkubována po dobu tří hodin s MTT vzniklý formazan byl vyextrahován do izopropanolu. Relativní viabilita buněk byla vypočtena z každé tkáně j ako úměrné procento průměru viabilit negativních kontrol. V takto nastaveném experimentu byla průměrná viabilita tkání ošetřených 1 mM roztokem testované substance 99,3 % u látky 6-(3methoxybenzylamino)-9-p-D-arabinofuranosylpurin a 98 % u látky 6-(fúrfúrylamino)-9-p-Darabinofúranosylpurin vztažené k 100 % viability z průměrných hodnot spočtených podle tkání ošetřených jen solventem. Viabilita při použití roztoku 200 μΜ činila 105,7 % u látky 6-(3methoxybenzylamino)-9-p-D-arabinofuranosylpurin a 98,6 % u látky 6-(furfúrylamino)-9-p-Darabinosylpurin. Žádná z uvedených testovaných látek ani koncentrací obou aplikačních forem nezpůsobovala žádné poškození tkáně. Látka byla vyhodnocena v daných koncentracích jako neiritující kůži, tzn. tento výsledek je příznivý pro použití látky v kosmetice
Příklad 14: Hodnocení oční dráždivosti v testu EpiOcular™
EpiOcular je model epitelu rohovky vyráběný firmou Mattek, vliv testovaných látek na tkáň se hodnotí pomocí testu MTT. Látka je považována za dráždivou/korozivní pokud je absorbance formazanu vzniklého redukcí MTT nižší než 60 procent hodnot negativní kontroly. Testovány byly roztoky látek 6-benzylamino-9-p-D-arabinofúranosylpurin, 6-furfiirylamino-9-p-Darabinofúranosylpurin a 6-(3-methoxybenzylamino)-9-p-D-arabinofúranosylpurin v médiu dodávaném v kitu v koncentraci 250 a 500 μΜ (duplikát), médium bylo použito jako negativní kontrola. Test byl proveden podle protokolu výrobce, části pro testování tekutých aplikačních forem. Pouze inkubační doba byla prodloužena z 30 minut na 18 hodin. Postup shrnut níže. Po dodání byly tkáně ponechány 15 min při teplotě místnosti. Po kontrole integrity a po odstranění agarózy byly tkáně přeneseny do jamek 6-ti jamkových desek obsahu jích 1 ml kultivačního média. Po 1 h bylo médium vyměněno a tkáně kultivovány 18 h. Poté bylo na tkáně aplikováno 20 mikrolitrů DPBS bez Ca2 a Mg2 iontů (součást kitu) a po 30 minutové inkubaci 50 mikrolitrů testovaných roztoků. Po ukončení 18 h inkubace byly tkáně vyjmuty z kultivační desky a opakovaně promyty v nadbytku DPBS bez Ca2 a Mg2 iontů (3 kádinky po 100 ml pro každou testovanou látku). Následně byly tkáně přeneseny do jamek 12 jamkové desky s 5 ml temperovaného média a inkubovány 12 minut. Poté byly tkáně přeneseny do jamek 6 jamkové desky s 1 ml média a inkubovány 2 h. Tříhodinová inkubace s MTT (1 mg/ml) proběhla ve 24 jamkových deskách (0,3 ml média na jamku). Tkáně byly přeneseny do nové 24 jamkové desky s 2 ml isopropanolu na jamku do kterého se během 3 hodin za mírného třepání vyextrahoval vzniklý formazan. 200 mikrolitrů extraktu bylo přeneseno do jamek 96-jamkové desky. Absorbance byla změřena pří 570 nm a vztažena k negativní kontrole. Veškerá manipulace před extrakčním krokem byla prováděna ve sterilních podmínkách. Kultivace probíhala ve standardních kultivačních
- 12CZ 308881 B6 podmínkách (koncentrace CO2 5,5 procenta, 37 °C). Médium a DPBS bez Ca2+ a Mg2+ iontů bylo temperováno na 37 °C. Závěr: Relativní viabilita tkání ošetřených testovanými látkami se pohybovala v rozmezí 98 až 103 %. Látky jsou tedy v testovaném koncentračním rozmezí nedráždivé a jejich použití v kosmetice je tudíž příznivé a to i do přípravků, které je možné použít na obličej a v očním okolí.
Příklad 15: Zpomalení stárnutí listů pšenice a zpomalení degradace chlorofylu při testování nových derivátů v senescenčním biotestu
Nádoby se semeny ozimé pšenice Tritium aestivum cv Hereward vyseté do vermikulity nasyceného Knopovým živným roztokem byl umístěny do klimatizované růstové komory s 16/8 hodinovou světelnou periodu (světelná intenzita 50 mmol.m ýs1) a teplotou 15 °C. Po 7 dnech měly semenáčky vyvinutý první praporcový list a druhý list začínal prorůstat. Z prvních listů vždy od 10 rostlin byly odebrány vrcholové sekce dlouhé přibližně 35 mm, které byly zkráceny tak aby jejich váha byla přesně 100 mg. Bazální konce těchto 10 listových segmentů byly umístěny do jamek mikrotitračních polystyrénových destiček obsahujících 150 ml roztoku testovaného derivátu. Destičky byly umístěny do plastického boxu vystlaného filtračním papírem, který byl nasycen vodou za účelem maximální vzdušné vlhkosti. Po 96 hodinách inkubace ve tmě při 25 °C byly listové sekce vyjmuty a chlorofyl extrahován v 5 ml 80% ethanolu zahřátím při 80 °C po dobu 10 min. Objem vzorku byl poté doplněn na 5 ml přidáním 80% ethanolu. Absorbance extraktů byla měřena při 665 nm. Jako kontroly byly měřeny rovněž chlorofylové extrakty z listů a listových vrcholů inkubované v deionizované vodě. Vypočtené hodnoty jsou průměrem z 10 opakování a celý experiment byl zopakován minimálně 3-krát. Výsledky těchto experimentů byly vyneseny ve formě grafů závislosti obsahu chlorofýlu v senescenčních listech v závislosti na koncentraci. V každém experimentu byla použita jako pozitivní kontrolní látka 6-benzylaminopurin, který je znám velmi vysokou cytokininovou aktivitou. Testované cytokininy byly rozpuštěny v dimethylsulfoxidu (DMSO) a zásobní roztok doplněn vodou na ΙΟ-3 M. Tento zásobní roztok byl dále ředěn testovacím médiem v koncentračním rozsahu 108 až ΙΟ-4 M. Finální koncentrace DMSO v médiu nepřevýšila 0,2 % a v této koncentraci neovlivňovala biologickou aktivitu testu. Ze získaných dat byla vypočítána maximální účinná koncentrace testované látky a její relativní účinnost v této koncentraci (tab. 3, obr. 2). ΙΟ-4 M koncentrace BAP byla postulována jako 100 % biologické aktivity. Výsledky známých látek a to 6-benzylaminopurin-9-p-Darabinofúranosylpurinu, 2-methylbenzylamino-9-p-D-arabinofuranosylpurinu, 3methylbenzylamino-9-p-D-arabinofúranosylpurinu a 4-methylbenzylamino-9-p-Darabinofúranosylpurinu byly také změřeny pro srovnání s nově připravenými látkami. Nově připravené látky jsou až dvakrát účinnější než známá látka 6-benzylamino-9-p-Darabinofuranosylpurin a převyšují zpravidla účinnost BAP standardu v rozmezí o 18 až 98 %. Nově vyvinuté látky mají velmi silné antisenescenční účinky. Některé z nich vyvolávají až 200% nárůst obsahu chlorofylu v extirpovaných listech pšenice oproti kontrole BAP.
Tab. 3: Účinek nových cytokinů na retenci chlorofylu v extirpovaných listových segmentech pšenice. Hodnoty v tabulce jsou vyjádřeny v % výchozího obsahu chlorofýlu v čerstvých listech před inkubací.
Laťka I maximální účinná koncentrace (moll účinnost (%) [ICHmU“1 BAP ™ W(J%]
W’4 mu
3H3bmo£uraiio&ylp«nn | H)4 11 M2
- 13 CZ 308881 B6
- 9 β-Οdeoxyr i bdutahasyipwi n ΠΓ | 178/9
* * .srabirwiicRmosylpisrHi 10'· | 172«
3 - tl uo rbenzyl animo -9 -βΌaKibinofittmosylpurin IO’4 195-6
2-brombenzybm^ arabino fwríwsý igurin 3~btOmbeii^ arabino íůmtosjdpuriu hP 10'· 186/19 19U10
Ubromhenzyl ami noQJLILarabinofuranosy Ipudn w4 176-11
3-jcdabenzyiammo-9-0-Daiabmpfijranogylpurin. 1 O'4 198M
3 3<bmethoxy Ibcwy laminj>9-^Darabinofura^^ url 147«
Příklad 16:7« vitro cytotoxická aktivita nových derivátů na nádorových buněčných liniích
Jedním z parametrů používaných jako základ pro cytotoxickou analyzuje metabolická aktivita životaschopných buněk. Například mikrotitrační analýza, kde se používá Calcein AM, je dnes rozšířena jako metoda kvantifikace buněčné proliferace a cytotoxicity. Množství zredukovaného Calceinu AM odpovídá počtu životaschopných buněk v kultuře.
Buněčné linie prsního karcinomu MCF-7, myší fibroblasty NIH3T3, lidská erythroleukemic K562, byly použity pro rutinní screening cytotoxicity sloučenin. Buňky byly udržovány v Nunc/Coming 80 cm2 plastikových lahvích a pěstovány v mediu pro buněčné kultury (DMEM obsahující 5g/l glukózy, 2mM glutaminu, 100 U/ml penicilinu, 100 pg/ml streptomycinu, 10% fetálního telecího séra a hydrogenuhličitan sodný). Buněčné suspenze byly připraveny a naředěny podle typu buněk a podle očekávané konečné hustoty buněk (104 buněk na jamku na základě charakteristik buněčného růstu), pipetovalo se 80 μΐ buněčné suspenze na 96-jamkové mikrotitrační destičky. Inokuláty byly stabilizovány 24hodinovou preinkubací při 37 °C v atmosféře CO2. Jednotlivé koncentrace testovaných látek byly přidány v čase nula jako 20 μΐ alikvotní podíl do jamek mikrotitračních destiček. Obvykle se sloučeniny ředily do šesti koncentrací v čtyřnásobné ředící řadě. Při rutinním testování byla nej vyšší koncentrace v jamce 166,7 μΜ, změny této koncentrace závisí na dané látce. Všechny koncentrace byly testovány v dubletu. Inkubace buněk s testovanými deriváty trvala 72 hodin při 37 °C, 100 % vlhkosti a v atmosféře CO2. Na konci inkubační periody byly buňky analyzovány po přidání roztoku Calceinu AM (Molecular Probes) a inkubace probíhala další 1 hodinu. Fluorescence (FD) byla měřena pomocí Labsystem FIA readeru Fluorskan Ascent (Microsystems). Přežití nádorových buněk (The tumor cell survival-TCS) bylo spočítáno podle následujícího vztahu: GLo = (FDjamkas derivátem /FDkontroini jamka) x 100 %. Hodnota GLo, která odpovídá koncentraci látky, kdy je usmrceno 50 % nádorových buněk, byla vypočtena ze získaných dávkových křivek.
Pro vyhodnocení protinádorové aktivity byla testována toxicita nových derivátů na panelech obsahujících buněčné linie rozdílného histogenetického a druhového původu (tab. 7, GLo koncentrace uváděny v μΜ). Ukázalo se, že pro všechny testované nádorové linie i pro nemaligní buněčnou linii NIH3T3 bylo působení nových sloučenin netoxické. Účinné deriváty zabíjí nádorové buňky při koncentracích blízkých 0,1 až 50 μΜ.
- 14CZ 308881 B6
Tab. 4. Cytotoxicita nově připravených látek pro různé nádorové buňky
Lá&i MCF- K5S2 NIH3 13
>W >1GG >120
á-besiizy >120 >120 >120
>120 >120 >120
$K3-nieíksK^''t^»'ía^T^^ >120 >120 >120
>120 >100 >120
3-wi^<W1hwiTOhTOw^^-fLn- >123 >120 >120
4 -me&y3b^zjr^siffio-9^-Darabůio&TasoíAfeBiin 95 >120 >120
2 -me&y&eozy^siffio-S^-D- >120 >120 >120
S-Su^beHEvl^lsa-ř-jl-D- >120 >120 >120
4-dbjcď»ěn^l^3mo-9-^-D- >120 >120 >120
S-llsBibeaEylass^ 87 >100 >120
3 -chfeů.-^zy >120 >120 >120
4-áydr^ybesisyhniús&-9^-D- >120 >100 87
3-Suec^ deox^xi^fhssi^ >120 >120 >120
3-díl«S»i3^4&£tš^94^ dec^ribtfmanan^pg^_____________ >120 >120 >120
ds^^ii&DÍbzstiosYlp^ >120 >120 >120
98 >120 >120
2-dbicr-4- fíucrbsízv^β-Ε4- >120 >120 >120
3 -rfiW^flCTnrk^^^ >120 >120 >120

Claims (5)

  1. PATENTOVÉ NÁROKY
    1. Použití 6-aryl-9-glykosidpurinů obecného vzorce
    kde
    Gly znamená β-D-arabinofuranosyl nebo β-D-2'-deoxyribofuranosyl,
    Ar znamená benzyl nebo furfuryl, které mohou být nesubstituované nebo substituované jedním nebo více, s výhodou jedním až třemi, substituenty vybranými ze skupiny zahrnující hydroxyl, alkyl, halogen, alkoxy, amino, merkapto, karboxyl, kyano, amido, sulfo, sulfamido, acyl, acylamino, acyloxy, alkylamino, dialkylamino, alkylmerkapto, trifiuormethyl, trifluormethoxy, kde alkyl znamená přímý nebo rozvětvený C1-C6, s výhodou C1-C4, alkylový řetězec, acyl znamená acylovou skupinu s počtem uhlíků 2 až 6, halogen znamená atom halogenu vybraný ze skupiny zahrnující atom fluoru, atom bromu, atom chloru a atom jodu, sulfo znamená -SO,RC. ve které Rc znamená atom vodíku, přímou nebo rozvětvenou alkylovou, alkenylovou nebo alkynylovou skupinu obsahující 1 až 6 uhlíkových atomů, sulfoamido znamená -NHSO,R(|. kde Rd znamená atom vodíku, přímou nebo rozvětvenou alkylovou skupinu obsahující 1 až 6 uhlíkových atomů, jako kosmetických přípravků pro zpomalení stárnutí savců, přípravků pro zpomalení stárnutí rostlin, a/nebo pro in vitro zpomalení stárnutí buněk rostlin či savců, například keratinocytů a fibroblastů.
  2. 2. Způsob regulace vývoje a stárnutí rostlin in vivo, nebo mikroorganismů, rostlinných a živočišných buněk in vitro, vyznačený tím, že se aplikuje látka obecného vzorce I definovaného v nároku 1.
  3. 3. 6-aryl-9-glykosidpuriny pro použití podle nároku 1 nebo způsob podle nároku 2, kde látky obecného vzorce I jsou vybrané ze skupiny zahrnující: 6-furfůrylamino-9-β-Darabinofůranosylpurin, 6-(2-fluorbenzylamino)-9-β-D-arabinofůranosylpurin, 6-(3fluorbenzylamino)-9-β-D-arabinofůranosylpurin, 6-(4-fluorbenzylamino)-9-β-D- arabinofuranosylpurin, 6-(2-brombenzylamino) -9-β-D-arabinofůranosylpurin, 6-(3- 16CZ 308881 B6 brombenzylamino)-9-p-D-arabinofuranosylpurin, 6-(4-brombenzylamino)-9-p-Darabinofuranosylpurin, 6-(3-jodbenzylamino)-9-p-D-arabinofuranosylpurin,6-(2chlorbenzylamino)-9-p-D-arabinofuranosylpurin, 6-(3-chlorbenzylamino)-9-p-Darabinofuranosylpurin, 6-(4-chlorbenzylamino)-9-p-D-arabinofuranosylpurin,6-(2methoxybenzylamino)-9-p-D-arabinofuranosylpurin, 6-(3-methoxybenzylamino)-9-p-Darabinofuranosylpurin, 6-(4-methoxybenzylamino)-9-p-D-arabinofuranosylpurin,6-(2hydroxybenzylamino)-9-p-D-arabinofuranosylpurin, 6-(3-hydroxybenzylamino)-9-p-Darabinofuranosylpurin, 6-(4-hydroxybenzylamino)-9-p-D-arabinofuranosylpurin, 6-(3,5dihydroxybenzylamino)-9-p-D-arabinofuranosylpurin, 6-(3,4-dimethoxybenzylamino)-9-p-Darabinofuranosylpurin, 6-(3,5-dimethoxybenzylamino)-9-p-D-arabinofuranosylpurin, 6-(2,3dimethoxybenzylamino)-9-p-D-arabinofuranosylpurin, 6-(2,4-dimethoxybenzylamino)-9-p-Darabinofuranosylpurin, 6-(3-hydroxy-2-methoxybenzylamino)-9-p-D-arabinofuranosylpurin, 6-(4methylfurfurylamino)-9-p-D-2'-deoxyribofuranosylpurin, 6-(5-methylfurfurylamino)-9-p-D-2'deoxyribofuranosylpurin, 6-(4-hydroxyfurfurylamino)-9-p-D-2'-deoxyribofuranosylpurin, 6-(5-hydroxyfurfurylamino)-9-p-D-2'-deoxyribofuranosylpurin, 6-(2-brombenzylamino)-9-p-D2'-deoxyribofuranosylpurin, 6-(3-brombenzylamino)-9-p-D-2'-deoxyribofuranosylpurin, 6-(4brombenzylamino)-9-p-D-2'-deoxyribofuranosylpurin, 6-(3-chlorbenzylamino)-9-p-D-2'deoxyribofuranosylpurin, 6-(4-chlorbenzylamino)-9-p-D-2'-deoxyribofuranosylpurin, 6-(2methoxybenzylamino)-9-p-D-2'-deoxyribofuranosylpurin, 6-(3-methoxybenzylamino)-9-p-D-2'deoxyribofuranosylpurin, 6-(2-hydroxybenzylamino)-9-p-D-2'-deoxyribofuranosylpurin, 6-(3hydroxybenzylamino)-9-p-D-2'-deoxyribofuranosylpurin, 6-(4-hydroxybenzylamino)-9-p-D-2'deoxyribofuranosylpurin.
  4. 4. 6-aryl-9-glykosidpuriny obecného vzorce I
    kde
    Gly znamená P-D-arabinofuranosyl nebo P-D-2'-deoxyribofuranosyl,
    Ar znamená benzyl substituovaný jedním nebo více, s výhodou jedním až třemi, substituenty vybranými ze skupiny zahrnující amino, merkapto, karboxyl, amido, sulfo, sulfamido, acyl, alkylamino, nebo furfuryl, nesubstituovaný nebo substituovaný jedním nebo více, s výhodou jedním až třemi, substituenty vybranými ze skupiny zahrnující hydroxyl, halogen, alkoxy, amino, merkapto, karboxyl, kyano, amido, sulfo, sulfamido, acyl, acylamino, acyloxy, alkylamino, dialkylamino, alkylmerkapto, trifluormethyl, trifluormethoxy, kde alkyl znamená přímý nebo rozvětvený C1-C6, s výhodou C1-C4, alkylový řetězec,
    - 17CZ 308881 B6 acyl znamená acylovou skupinu s počtem uhlíků 2 až 6, halogen znamená atom halogenu vybraný ze skupiny zahrnující atom fluoru, atom bromu, atom 5 chloru a atom jodu, sulfo znamená -SO3Rc ve které Rc znamená atom vodíku, přímou nebo rozvětvenou alkylovou, alkenylovou nebo alkynylovou skupinu obsahující 1 až 6 uhlíkových atomů, sulfoamido znamená -NHSO3Rd, kde Rd znamená atom vodíku, přímou nebo rozvětvenou alkylovou skupinu obsahující ίο 1 až 6 uhlíkových atomů.
  5. 5. Kosmetické a/nebo tkáňové a/nebo růstově-regulační přípravky, vyznačené tím, že obsahují jako účinnou látku alespoň jednu sloučeninu vzorce I podle nároku 4.
CZ2014875A 2014-12-09 2014-12-09 6-aryl-9-glykosylpuriny a jejich použití CZ308881B6 (cs)

Priority Applications (9)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CZ2014875A CZ308881B6 (cs) 2014-12-09 2014-12-09 6-aryl-9-glykosylpuriny a jejich použití
EP15774847.6A EP3229771B1 (en) 2014-12-09 2015-09-14 6-aryl-9-glycosylpurines and use thereof
PCT/CZ2015/050005 WO2016091235A1 (en) 2014-12-09 2015-09-14 6-aryl-9-glycosylpurines and use thereof
SG11201704019TA SG11201704019TA (en) 2014-12-09 2015-09-14 6-aryl-9-glycosylpurines and use thereof
US15/527,613 US10100077B2 (en) 2014-12-09 2015-09-14 6-aryl-9-glycosylpurines and use thereof
PCT/CZ2015/050013 WO2016091236A1 (en) 2014-12-09 2015-12-02 6-aryl-9-glycosylpurines and use thereof
EP15816356.8A EP3229772B1 (en) 2014-12-09 2015-12-02 6-aryl-9-glycosylpurines and use thereof
PL15816356T PL3229772T3 (pl) 2014-12-09 2015-12-02 6-arylo-9-glikozylopuryny i ich zastosowanie
US15/528,056 US10550144B2 (en) 2014-12-09 2015-12-02 6-aryl-9-glycosylpurines and use thereof

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CZ2014875A CZ308881B6 (cs) 2014-12-09 2014-12-09 6-aryl-9-glykosylpuriny a jejich použití

Publications (2)

Publication Number Publication Date
CZ2014875A3 CZ2014875A3 (cs) 2016-06-22
CZ308881B6 true CZ308881B6 (cs) 2021-08-04

Family

ID=54251269

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CZ2014875A CZ308881B6 (cs) 2014-12-09 2014-12-09 6-aryl-9-glykosylpuriny a jejich použití

Country Status (6)

Country Link
US (2) US10100077B2 (cs)
EP (2) EP3229771B1 (cs)
CZ (1) CZ308881B6 (cs)
PL (1) PL3229772T3 (cs)
SG (1) SG11201704019TA (cs)
WO (2) WO2016091235A1 (cs)

Citations (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
GB1063952A (en) * 1964-03-17 1967-04-05 Takeda Chemical Industries Ltd A process for producing purine-ribosides
GB1381932A (en) * 1971-02-26 1975-01-29 Kyowa Hakko Kogyo Kk Process for producing ribosides of heterocyclic organic bases by fermentation
WO2004058791A2 (en) * 2002-12-30 2004-07-15 Ustav Experimentalni Botaniky Akademie Ved Ceske Republiky Substitution derivatives of n6-benzyladenosine, methods of their preparation, their use for preparation of drugs, cosmetic preparations and growth regulators, pharmaceutical preparations, cosmetic preparations and growth regulators containing these compounds
EP1671616A1 (en) * 2003-09-30 2006-06-21 Lion Corporation Hair tonic composition
WO2010130233A1 (en) * 2009-05-14 2010-11-18 Univerzita Palackeho V Olomouci Substituted 6-(benzylamino) purine riboside derivatives, use thereof and compositions containing these derivatives

Family Cites Families (6)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
EP0888057B1 (en) 1996-03-15 2001-09-05 Syngenta Participations AG Herbicidal synergistic composition and method of weed control
US6294522B1 (en) 1999-12-03 2001-09-25 Cv Therapeutics, Inc. N6 heterocyclic 8-modified adenosine derivatives
US7893227B2 (en) 2006-12-05 2011-02-22 Lasergen, Inc. 3′-OH unblocked nucleotides and nucleosides base modified with non-cleavable, terminating groups and methods for their use in DNA sequencing
EP2511283A4 (en) * 2009-12-10 2013-07-03 Inst Materia Medica Cams N6-SUBSTITUTED ADENOSINE DERIVATIVES, N6-SUBSTITUTED ADENINE DERIVATIVES AND THEIR USE
US9096632B2 (en) 2010-10-27 2015-08-04 Public University Corporation Yokohama City University Modulator of activity of adenylate cyclase
US20120164641A1 (en) 2010-12-22 2012-06-28 Roche Molecular Systems, Inc. Methods and Compositions for Detecting Mutation in the Human Epidermal Growth Factor Receptor Gene

Patent Citations (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
GB1063952A (en) * 1964-03-17 1967-04-05 Takeda Chemical Industries Ltd A process for producing purine-ribosides
GB1381932A (en) * 1971-02-26 1975-01-29 Kyowa Hakko Kogyo Kk Process for producing ribosides of heterocyclic organic bases by fermentation
WO2004058791A2 (en) * 2002-12-30 2004-07-15 Ustav Experimentalni Botaniky Akademie Ved Ceske Republiky Substitution derivatives of n6-benzyladenosine, methods of their preparation, their use for preparation of drugs, cosmetic preparations and growth regulators, pharmaceutical preparations, cosmetic preparations and growth regulators containing these compounds
EP1671616A1 (en) * 2003-09-30 2006-06-21 Lion Corporation Hair tonic composition
WO2010130233A1 (en) * 2009-05-14 2010-11-18 Univerzita Palackeho V Olomouci Substituted 6-(benzylamino) purine riboside derivatives, use thereof and compositions containing these derivatives

Also Published As

Publication number Publication date
EP3229771B1 (en) 2024-04-03
US20170326168A1 (en) 2017-11-16
US10550144B2 (en) 2020-02-04
US20170334943A1 (en) 2017-11-23
WO2016091236A1 (en) 2016-06-16
CZ2014875A3 (cs) 2016-06-22
EP3229771A1 (en) 2017-10-18
SG11201704019TA (en) 2017-06-29
EP3229772B1 (en) 2020-04-29
US10100077B2 (en) 2018-10-16
EP3229772A1 (en) 2017-10-18
WO2016091235A1 (en) 2016-06-16
PL3229772T3 (pl) 2020-11-02

Similar Documents

Publication Publication Date Title
US8552013B2 (en) Heterocyclic compounds based on N6-substituted adenine, methods of their preparation, their use for preparation of drugs, cosmetic preparations and growth regulators, pharmaceutical preparations, cosmetic preparations and growth regulators containing these compounds
AU2002363362A1 (en) Heterocyclic compound based on N6-substituted adenine, methods of their preparation, their use for preparation of drugs, cosmetic preparations and growth regulators, pharmaceutical preparations, cosmetic preparations and growth regulators containing these compounds
US20060166925A1 (en) Substitution derivatives of n6-benzyladenosine, methods of their preparation, their use for preparation of drugs, cosmetic preparations and growth regulators, pharmaceutical preparations, cosmetic preparations and growth regulators containing these compounds
JP2005508386A6 (ja) Ｎ６−置換アデニンに基づく複素環状化合物およびその調製方法、ならびに、薬、化粧品、成長調節剤や、上記化合物を含む医薬品、化粧品、成長調節剤の調製のための使用
CZ2014908A3 (cs) 6,8-Disubstituované-9-(heterocyklyl)puriny, přípravky obsahující tyto deriváty a jejich použití v kosmetických a medicínských aplikacích
US10774084B2 (en) Adenine derivatives and their use as UV-photoprotective agents
US20130072506A1 (en) 6,8-disubstituted purine compositions
CZ2017237A3 (cs) Deriváty 9-(2-oxacykloalkyl)-9H-purin-2,6-diaminu, přípravky obsahující tyto deriváty a jejich použití
CZ308881B6 (cs) 6-aryl-9-glykosylpuriny a jejich použití
NZ538596A (en) Heterocyclic compound based on N6-substituted adenine, methods of their preparation, their use for preparation of cosmetic, cosmetic preparations containing these compounds