CZ308112B6 - Kmen entomopatogenní houby Beauveria bassiana, způsob jeho použití a přípravek s obsahem spor kmene - Google Patents
Kmen entomopatogenní houby Beauveria bassiana, způsob jeho použití a přípravek s obsahem spor kmene Download PDFInfo
- Publication number
- CZ308112B6 CZ308112B6 CZ2019-141A CZ2019141A CZ308112B6 CZ 308112 B6 CZ308112 B6 CZ 308112B6 CZ 2019141 A CZ2019141 A CZ 2019141A CZ 308112 B6 CZ308112 B6 CZ 308112B6
- Authority
- CZ
- Czechia
- Prior art keywords
- spores
- strain
- beauveria bassiana
- forest
- ccm
- Prior art date
Links
- 241000751139 Beauveria bassiana Species 0.000 title claims abstract description 21
- 230000000967 entomopathogenic effect Effects 0.000 title claims abstract description 20
- 241000233866 Fungi Species 0.000 title claims description 18
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims description 12
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 title description 9
- 241000545593 Scolytinae Species 0.000 claims abstract description 29
- 241000531976 Molytinae Species 0.000 claims abstract description 8
- 244000005700 microbiome Species 0.000 claims abstract description 4
- 239000000203 mixture Substances 0.000 claims description 27
- 239000000843 powder Substances 0.000 claims description 25
- 241000607479 Yersinia pestis Species 0.000 claims description 20
- 239000000725 suspension Substances 0.000 claims description 15
- 230000000050 nutritive effect Effects 0.000 claims description 11
- 239000007788 liquid Substances 0.000 claims description 8
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 7
- 235000008331 Pinus X rigitaeda Nutrition 0.000 claims description 4
- 235000011613 Pinus brutia Nutrition 0.000 claims description 4
- 241000018646 Pinus brutia Species 0.000 claims description 4
- VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N Silicium dioxide Chemical compound O=[Si]=O VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 4
- 230000003449 preventive effect Effects 0.000 claims description 4
- 239000007921 spray Substances 0.000 claims description 4
- 239000005909 Kieselgur Substances 0.000 claims description 3
- 235000015112 vegetable and seed oil Nutrition 0.000 claims description 3
- 239000008158 vegetable oil Substances 0.000 claims description 3
- 240000001717 Vaccinium macrocarpon Species 0.000 claims description 2
- 235000021019 cranberries Nutrition 0.000 claims description 2
- 238000009109 curative therapy Methods 0.000 claims description 2
- 239000004476 plant protection product Substances 0.000 claims description 2
- 235000010204 pine bark Nutrition 0.000 abstract 1
- 238000009472 formulation Methods 0.000 description 13
- 239000012141 concentrate Substances 0.000 description 11
- 230000002538 fungal effect Effects 0.000 description 9
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 8
- 230000001186 cumulative effect Effects 0.000 description 6
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 6
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 5
- 241000238631 Hexapoda Species 0.000 description 4
- 241000218657 Picea Species 0.000 description 4
- 230000006378 damage Effects 0.000 description 4
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 4
- 239000006225 natural substrate Substances 0.000 description 4
- 239000000779 smoke Substances 0.000 description 4
- 238000005507 spraying Methods 0.000 description 4
- 241001302652 Bassiana Species 0.000 description 3
- 241000196324 Embryophyta Species 0.000 description 3
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 3
- 241000831652 Salinivibrio sharmensis Species 0.000 description 3
- 239000003599 detergent Substances 0.000 description 3
- 239000012153 distilled water Substances 0.000 description 3
- 238000001035 drying Methods 0.000 description 3
- 238000011156 evaluation Methods 0.000 description 3
- 208000015181 infectious disease Diseases 0.000 description 3
- 239000000047 product Substances 0.000 description 3
- 239000002023 wood Substances 0.000 description 3
- 241000193766 Arianta Species 0.000 description 2
- 241000546120 Ips typographus Species 0.000 description 2
- 235000008124 Picea excelsa Nutrition 0.000 description 2
- 238000010170 biological method Methods 0.000 description 2
- 230000001955 cumulated effect Effects 0.000 description 2
- 238000011161 development Methods 0.000 description 2
- 230000018109 developmental process Effects 0.000 description 2
- 238000009826 distribution Methods 0.000 description 2
- 239000012467 final product Substances 0.000 description 2
- 238000003306 harvesting Methods 0.000 description 2
- 239000002917 insecticide Substances 0.000 description 2
- 244000000010 microbial pathogen Species 0.000 description 2
- 238000003359 percent control normalization Methods 0.000 description 2
- 239000003016 pheromone Substances 0.000 description 2
- 235000010482 polyoxyethylene sorbitan monooleate Nutrition 0.000 description 2
- 229920000053 polysorbate 80 Polymers 0.000 description 2
- 241000238876 Acari Species 0.000 description 1
- 239000002028 Biomass Substances 0.000 description 1
- 241000254173 Coleoptera Species 0.000 description 1
- 241000258937 Hemiptera Species 0.000 description 1
- 241000257303 Hymenoptera Species 0.000 description 1
- 241000188153 Isaria fumosorosea Species 0.000 description 1
- 241000255777 Lepidoptera Species 0.000 description 1
- 230000002411 adverse Effects 0.000 description 1
- 239000007900 aqueous suspension Substances 0.000 description 1
- 230000009286 beneficial effect Effects 0.000 description 1
- 230000034303 cell budding Effects 0.000 description 1
- 238000005352 clarification Methods 0.000 description 1
- 230000007423 decrease Effects 0.000 description 1
- 230000003247 decreasing effect Effects 0.000 description 1
- 230000007123 defense Effects 0.000 description 1
- 239000000839 emulsion Substances 0.000 description 1
- 239000000835 fiber Substances 0.000 description 1
- 230000035784 germination Effects 0.000 description 1
- 210000000087 hemolymph Anatomy 0.000 description 1
- 238000009776 industrial production Methods 0.000 description 1
- 230000002458 infectious effect Effects 0.000 description 1
- 230000009545 invasion Effects 0.000 description 1
- 238000012544 monitoring process Methods 0.000 description 1
- 230000008450 motivation Effects 0.000 description 1
- 239000000575 pesticide Substances 0.000 description 1
- 238000012545 processing Methods 0.000 description 1
- 230000002035 prolonged effect Effects 0.000 description 1
- 230000033458 reproduction Effects 0.000 description 1
- 230000001850 reproductive effect Effects 0.000 description 1
- 230000009528 severe injury Effects 0.000 description 1
- 241000894007 species Species 0.000 description 1
- 230000028070 sporulation Effects 0.000 description 1
- 239000000758 substrate Substances 0.000 description 1
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 1
- 231100000331 toxic Toxicity 0.000 description 1
- 230000002588 toxic effect Effects 0.000 description 1
- 230000009466 transformation Effects 0.000 description 1
Classifications
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A01—AGRICULTURE; FORESTRY; ANIMAL HUSBANDRY; HUNTING; TRAPPING; FISHING
- A01N—PRESERVATION OF BODIES OF HUMANS OR ANIMALS OR PLANTS OR PARTS THEREOF; BIOCIDES, e.g. AS DISINFECTANTS, AS PESTICIDES OR AS HERBICIDES; PEST REPELLANTS OR ATTRACTANTS; PLANT GROWTH REGULATORS
- A01N63/00—Biocides, pest repellants or attractants, or plant growth regulators containing microorganisms, viruses, microbial fungi, animals or substances produced by, or obtained from, microorganisms, viruses, microbial fungi or animals, e.g. enzymes or fermentates
- A01N63/30—Microbial fungi; Substances produced thereby or obtained therefrom
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N1/00—Microorganisms, e.g. protozoa; Compositions thereof; Processes of propagating, maintaining or preserving microorganisms or compositions thereof; Processes of preparing or isolating a composition containing a microorganism; Culture media therefor
- C12N1/14—Fungi; Culture media therefor
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N1/00—Microorganisms, e.g. protozoa; Compositions thereof; Processes of propagating, maintaining or preserving microorganisms or compositions thereof; Processes of preparing or isolating a composition containing a microorganism; Culture media therefor
- C12N1/14—Fungi; Culture media therefor
- C12N1/145—Fungal isolates
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12R—INDEXING SCHEME ASSOCIATED WITH SUBCLASSES C12C - C12Q, RELATING TO MICROORGANISMS
- C12R2001/00—Microorganisms ; Processes using microorganisms
- C12R2001/645—Fungi ; Processes using fungi
Landscapes
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Zoology (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Mycology (AREA)
- Virology (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Botany (AREA)
- Tropical Medicine & Parasitology (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Agronomy & Crop Science (AREA)
- Pest Control & Pesticides (AREA)
- Plant Pathology (AREA)
- Dentistry (AREA)
- Environmental Sciences (AREA)
- Agricultural Chemicals And Associated Chemicals (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
Abstract
Kmen entomopatogenní houbypro ochranu lesních porostů uložený pod depozitním číslem vzorku CCM 8382 ve sbírce Česká sbírka mikroorganismů je využitelný pro biologickou ochranu lesních porostů před populacemi škůdců z čeledi Scolytinae a z čeledi Molytinae, zejména klikoroha borového.
Description
Kmen entomopatogenní houby Beauveria bassiana, způsob jeho použití a přípravek s obsahem spor kmene
Oblast techniky
Vynález se týká kmene entomopatogenní houby Beauveria bassiana pro ochranu lesních porostů před populacemi jejich škůdců, způsobu ochrany lesních porostů za pomoci entomopatogenní houby a přípravku s obsahem spor entomopatogenní houby.
Dosavadní stav techniky
V současné době trápí lesní porosty na území České republiky kůrovcové kalamity, které jsou způsobeny početnými populacemi škůdců z čeledi Scolytinae (kůrovci). V důsledku přemnožení kůrovců dochází k intenzivnímu napadání i zdravých stromů, které by za běžných podmínek měly šanci se napadení škůdci ubránit. Dlouhotrvající období sucha navíc snižuje obranyschopnost stromů, takže nárůst populací kůrovců a škody na lesním porostu jsou mnohonásobně větší. Následně na vykácených a nově osazených plochách, dochází k poškození sazenic způsobené klikorohem borovým (čeleď Molytinae), který do sazenic vyžírá drobné, kolmé nebo trychtýřovité jamky, zasahující často až do povrchové části dřeva. Při silném poškození se vyžrané jamky spojují po obvodu kmínku do plošek a sazenice hynou.
Jedním z možných postupů, jak bojovat proti škůdcům lesních porostů, je u kůrovců odkorňování napadených stromů, aktivní těžba napadených stromů, transport napadených stromů mimo lesní porosty a likvidace larev škůdců před jejich přeměnou v dospělé jedince schopné reprodukce. V důsledku intenzivní těžby kalamitních porostů je na trhu nadbytek dřeva s nízkou výkupní cenou, což má za následek nedostatečnou motivaci k dalšímu zpracování dřeva z postižených porostů.
Alternativou k těžbě a k mechanickému ošetřování stromů jsou chemické prostředky. Pro monitoring a odchyt kůrovců se využívají feromonové pasti, kdy jsou dospělci lákáni do lapačů pomocí feromonu. Po vlétnutí do lapače jsou zachyceni ve sběrné nádobě, ze které se nemohou dostat zpět do prostředí. Další opatření použité k odchytu dospělců jsou lapáky, což jsou pokácené zdravé stromy zakryté větvemi zabraňujícími vysychání. Lapák je atraktivní pro dospělce a slouží k jejich odchytu. Po napadení se lapáky ošetřují chemicky pomocí insekticidů, které zavrtané dospělce zahubí, nebo se před dokončením vývojového cyklu škůdců lapáky z lesního porostu vyvezou a jsou mimo les opět ošetřeny pesticidy, nebo odkoměny. Asanace lapáků je prováděná postřikem nebo práškovým rozptylem insekticidů, které redukují populace kůrovců hned po aplikaci.
Nevýhody využití chemických přípravků spočívají vtom, že se jedná o uměle připravené látky, které jsou toxické nejen pro škůdce, ale i pro jiné živočišné druhy, zejména necílový hmyz. Navíc existuje riziko úniku chemikálií, které v koncertované podobě mohou poškodit životní prostředí.
Nevýhody chemických řešení odstraňují rychle se rozvíjející biologické metody, při kterých se izoluje patogenní mikroorganismus, např. houba, napadající a infikující populace škůdců. Příkladem takového vynálezu je kmen entomopatogenní houby z dokumentu CZ 300 701 B6. Vynález popisuje nový kmen CCM 8367 entomopatogenní houby Isaria fumosorosea, který účinně napadá hmyzí škůdce z řádu Lepidoptera, Coleoptera, Hymenoptera a Homoptera. Výhodou biologické metody je to, že se jedná o mikroorganismy, které se v prostředí přirozeně vyskytují, takže jejich uměle navýšená přítomnost v prostředí neohrožuje jiné živočišné druhy, kromě jejich přirozených hostitelů. Jakmile poklesne populace přirozených hostitelů, nemá možnost se patogenní mikroorganismus dále reprodukovat, a jeho zastoupení v prostředí začne přirozeně ubývat.
- 1 CZ 308112 B6
Úkolem vynálezu je ochrana lesních porostů před škůdci pomocí kmene entomopatogenní houby Beauveria bassiana, který by napadal a infikoval populace lesních škůdců z čeledi Scolytinae a z čeledi Molytinae bez negativního vlivu na ostatní živočišné a rostlinné druhy, který by vykazoval vysokou životaschopnost a účinnost, a který by bylo možné průmyslově zpracovat do přípravků vhodných k masovému rozšíření.
Podstata vynálezu
Vytčený úkol je vyřešen pomocí kmene entomopatogenní houby Beauveria bassiana pro ochranu lesních porostů uložený pod depozitním číslem vzorku CCM 8382 ve sbírce Česká sbírka mikroorganismů.
Výhody kmene entomopatogenní houby podle vynálezu spočívají vtom, že houba Beauveria bassiana se přirozeně vyskytuje v lesních porostech mírného pásu, kam mimo jiné spadají i lesní porosty České republiky. Tím pádem není nový kmen houby podle vynálezu exotickým invazivním kmenem uměle implantovaným do prostředí lesních porostů, ale přirozeně koexistuje se stávajícími houbami, a dále s rostlinnými a živočišnými druhy. Další výhodou je, že kmen CCM 8382 je virulentní ke škůdcům (kůrovcům) z čeledi Scolytinae způsobujícím kůrovcové kalamity v lesních porostech a z čeledi Molytinae, zejména pak klikorohu borovému způsobujícímu poškození sazenic. V neposlední řadě je výhodné, že kmen houby CCM 8382 lze snadno produkovat v řízených podmínkách pomocí submerzní kultivace i pomocí povrchové kultivace, takže je vhodný pro masovou průmyslovou produkci a pro masové aplikace při boji s kůrovcovými kalamitami v lesních porostech.
Součástí vynálezu je také způsob použití entomopatogenní houby pro ochranu lesních porostů, jehož podstata spočívá vtom, že se pro redukci populací škůdců lesních porostů z čeledi Scolytinae a z čeledi Molytinae, zejména klikoroha borového, použije kmen CCM 8382 entomopatogenní houby Beauveria bassiana. Kmen houby CCM 8382 vytváří spory, které ulpívají na povrchu rostlin i kmenů stromů, kde mohou pasivně čekat na kontakt se škůdcem, kterého následně infikují. V případě ulpění spor na těle jedince z čeledi Scolytinae a z čeledi Molytinae dojde k průniku hyfy houby po naklíčení spor do tělní dutiny, kde se začnou tvořit blastospory (pučivé spory) houby, které v další fázi vývoje vytvoří v hemolymfě hustou masu, která hostitele usmrtí. V konečné fázi vývoje prorůstají houbová vlákna na povrch usmrceného hostitele. Mrtvý hostitel poroste bílým myceliem, které vysporuluje, tj. vytvoří se nová generace spor houby. Nové spory se šíří v prostředí a následně infikují další jedince v populacích škůdce. Započnou tak nový cyklus reprodukce na novém hostiteli.
Ve výhodném provedení způsobu podle vynálezu se pro ochranu lesních porostů použijí spory houbového kmene CCM 8382, které se aplikují v kapalném postřiku a/nebo v rozptýleném prášku. Distribuce spor je možná jak mokrou cestou, tak i suchou cestou, přičemž volba cesty závisí na podmínkách panujících v lokalitě lesního porostu. Mokrá cesta v podobě kapalných postřiků je vhodná jak pro ochranu semenáčků lesního porostu, tak i pro preventivní nebo kurativní aplikaci k ošetření lesního porostu. Suchá cesta ve formě studeného kouře je zejména výhodná pro preventivní i kurativní ošetření lesního porostu.
Nedílnou součástí vynálezu je přípravek pro ochranu lesních porostů, který obsahuje spory entomopatogenní houby rozptýlené v nutritivním nosiči spor.
Podstata vynálezu spočívá vtom, že přípravek („sporový koncentrát“) obsahuje spory houby Beauveria bassiana kmene CCM 8382 v koncentraci buď 109 nebo 1010 spor v 1 g nutritivního nosiče. Výhodou sporového koncentrátu je bezesporu vysoký obsah infekčních spor v 1 gramu přípravku. Další výhodou skladnosti sporového koncentrátu je možnost zhotovovat z přípravku „in sítu“ finální produkt v potřebném objemu s časovým předstihem, nebo i těsně před aplikací.
-2 CZ 308112 B6
Navíc přípravek v podobě sporového koncentrátu je možné dlouhodobě uchovávat při teplotě 4 °C až po dobu jednoho roku, což je výhodné z důvodu, že není potřeba v chladu skladovat velké objemy finálního produktu.
Ze sporového koncentrátu podle vynálezu je vytvořena vodní suspenze, která je určena pro kapalný postřik. Vhodnou volbou objemu kapalin lze ředit přípravek tak, aby koncentrace spor odpovídala stupni zasažení lokality lesního porostu škodlivým hmyzem. Suspenze je tak tvořena vodou, nutritivním nosičem a sporami houby Beauveria bassiana kmene CCM 8382 o koncentraci od 106 do 107 spor v 1 ml suspenze. V dalším výhodném provedení může suspenze navíc obsahovat přídavek některého z rostlinných olejů. Aplikace spor v kapalném médiu je ideální pro postřik lesního porostu, kdy kapičky přípravku stékají od vrcholu stromů ke spodním částem stromů.
Rovněž je výhodné ze sporového koncentrátu podle vynálezu vytvořit práškovou směs tvořenou jemnou křemelinou, nutritivní složkou a sporami houby Beauveria bassiana kmene CCM 8382. Vhodnou volbou množství jemné křemeliny lze snižovat koncentraci spor, aby odpovídala stupni zasažení lokality lesního porostu škodlivým hmyzem. Finální prášková směs tak může obsahovat koncentraci od 108 do 109 spor houby v 1 g směsi. Navíc distribuce spor rozptylem prášku, zejména v podobě studeného kouře, je vhodná pro lokality s vyšším lesním porostem, kdy je prouděním vzduchu prášek unášen až k vrcholům stromů a je rozptýlen i na větší plochy lesních porostů.
Vynález slouží k ochraně lesních porostů biologickou cestou, která je podle dostupných zdrojů, kromě cílových skupin škůdců, šetrná vůči ostatnímu životu nacházejícímu se v dané lokalitě. V případě likvidace populace škůdců z čeledí Scolytinae a Molytinae se houbový kmen časem začne z prostředí přirozeně odbourávat, protože se v přírodě běžně vyskytují organismy, které se živí houbami. Nicméně se v přírodě nějaké množství uchytí, neboť je ve svém přirozeném prostředí. Navíc je kmen schopen přežívat i v nižších teplotách, takže může přezimovat v prostředí a v případě nové invaze škůdců může opět začít s přirozenou expanzí bez vědomí starajícího se člověka. Navíc je houbový kmen podle vynálezu vhodný pro průmyslové namnožení spor do přípravku, ve kterém spory dokáží na nutritivním nosiči při stabilní teplotě 4 °C přežít po dobu až jednoho roku.
Objasnění výkresů
Uvedený vynález bude blíže objasněn na následujících vyobrazeních, kde obr. 1 je grafem vertikální struktury populace dospělců Ips typographus v kůře stromu v rámci třetího příkladu uskutečnění vynálezu.
Příklady uskutečnění vynálezu
Rozumí se, že dále popsané a zobrazené konkrétní případy uskutečnění vynálezu jsou představovány pro ilustraci, nikoliv jako omezení vynálezu na uvedené příklady. Odborníci znalí stavu techniky najdou nebo budou schopni zajistit za použití rutinního experimentování větší či menší počet ekvivalentů ke specifickým uskutečněním vynálezu, která jsou zde popsána.
Biomasa spor kmene CCM 8382 houby Beauveria bassiana je produkována pomocí povrchové kultivace na přirozeném substrátu. Po dosažení maximální sporulace jsou v prvé fázi formulace převedeny spory z povrchu substrátu do nutritivního nosiče a ve formě koncentrátu (109 nebo 1010 spor v 1 g) je preparát skladován při teplotě cca 4 °C.
Před expedicí je koncentrát smíchán s inertním práškem (jemná křemelina, prášková směs) v poměru 1:100 (= 1,0 x 108 spor v 1 g) (preventivní aplikace vynálezu) nebo v poměru 1:10 (=
-3 CZ 308112 B6
1,0 x 109 spor / 1 g) (kurativní aplikace vynálezu) a přípravek je po 1000 g rozvažován do transportních igelitových obalů. Každé balení je opatřeno identifikační etiketou, na které je (kromě jiných informací) uvedeno číslo kmene entomopatogenní houby a lokalita, na kterou je přípravek určen.
Nebo je koncentrát těsně před aplikací v terénu smíchán s vodou s přídavkem nebo bez přídavku rostlinného oleje a vzniklá suspenze nebo emulze následně aplikována do lesních porostů.
Po testovacích aplikacích nebyl zaznamenán úhyn přirozených nepřátel škůdců, ani jiného užitečného hmyzu, nebo roztočů.
V podkomí nice byla přítomnost kmene CCM 8382 zaznamenána pouze na druzích kůrovců čeledi Scolytinae.
Příklad 1: Použití konidiové suspenze kmene CCM 8382 houby B. bassiana k ošetření dospělců lýkožrouta smrkového Ips typographic v laboratorních podmínkách
Povrch plně vysporulovaného kmene CCM 8382 na přirozeném substrátu byl přelit sterilním roztokem destilované vody s přídavkem detergentu 0,05% Tween 80. Koncentrace konidií v získané suspenzi byla spočítána pomocí hematocytometru (Neubauerova vylepšená komůrka) a následně adjustována na standardní titr 1,0χ 107 konidií v 1 ml suspenze.
Před vlastním experimentem byly připraveny vlhké komůrky. Vlhkou komůrku tvořila sterilní jednorázová plastová krabička o velikosti 90 x 70 x 60 mm, která měla na dně navlhčenou sterilní buničinu.
Dospělci lýkožrouta smrkového byli získáni z napadeného stromu, kdy se v lese nasbíraly kusy smrkové kůry, které obsahovaly dospělce, a zároveň se přidala kůrová drť, ve které byli též přítomni dospělci lýkožrouta. V laboratorních podmínkách se dospělci z drtě a kůry vyjmuli do sterilní krabičky.
Celkem bylo v experimentu použito 100 dospělců ošetřených v suspenzi kmene a 100 dospělců ošetřené v destilované vodě s detergentem (kontrola).
Při ošetření byl každý dospělec jednotlivě ponořen po dobu 2 sekund do připravené suspenze kmene a po ošetření byl umístěn na filtrační papír, aby byla odsáta přebytečná suspenze houby. Do každé vlhké komůrky bylo vloženo 20 dospělců ošetřených suspenzí kmene, v pěti opakováních. V kontrolní variantě byli dospělci jednotlivě ponořeni do destilované vody s obsahem detergentu 0,05 % Tween 80 a po odstranění přebytečné vody byli dospělci vloženi též do vlhkých komůrek. Kontrolní varianta měla také pět opakování.
Krabičky s ošetřenými i kontrolními dospělci byly umístěny do termostatu a inkubace probíhala v podmínkách bez přístupu světla při teplotě 21 °C. Hodnocení bylo provedeno po 3, 5 a 7 dnech po založení. V rámci ošetřené varianty i kontroly byl zaznamenán stav dospělců a zařazen do kategorie: „živý - mrtvý - infikovaný“. Kumulovaná mortalita vyjadřuje součet mrtvých a infikovaných dospělců.
Struktura populace dospělců lýkožrouta smrkového po jejich namočení do konidiové suspenze kmene:
-4CZ 308112 B6
| V arianta | den | živí (%) | mrtví (%) | Infikovaní (%) | kumulovaná mortalita |
| 3 den | 94,20% | 5,80% | 0,00% | 5,80% | |
| Kontrola | 5 den | 86,60% | 13,40% | 0,00% | 13,40% |
| 7 den | 81,90% | 18,10% | 0,00% | 18,10% | |
| 3 den | 54,20% | 34,40% | 11,40% | 45,80% | |
| CCM 8382 | 5 den | 6,10% | 13,90% | 80,00% | 93,90% |
| 7 den | 0,80% | 6,40% | 92,80% | 99,20% |
Příklad 2: Použití práškové formulace kmene CCM 8382 houby B. bassiana k ošetření dospělců lýkožrouta smrkového Ips typographic v laboratorních podmínkách
Konidie z plně vysporulovaného kmene CCM 8382 na přirozeném substrátu byly po usušení smíchány s inertním nosičem. V takto vzniklé práškové formulaci byla stanovena koncentrace konidií v 1 g. Následně byla prášková směs adjustována pomocí přídavku inertního nosiče na standardní titr 1,0* 107 konidií v 1 g práškové formulace.
Před vlastním experimentem byly opět připraveny vlhké komůrky. V experimentu byli použiti dospělci získaní ze smrkového porostu.
V tomto experimentu byla prášková formulace kmene CCM 8382 nanesena v tenké vrstvě na dno Petriho misky. Na práškovou formulaci byli umístěni dospělci, kteří se po práškové formulaci pohybovali po dobu 30 sekund. Následně byli dospělci přeneseni do vlhké komůrky po 20 dospělcích v pěti opakování. V kontrolní variantě byli dospělci vystaveni jen inertnímu nosiči, bez přítomnosti konidií hub. Opět bylo založeno v kontrolní variantě pět opakování, po 20 dospělcích.
Celkem tedy bylo 100 dospělců vystaveno práškové formulaci kmene a 100 dospělců inertnímu nosiči. Krabičky s ošetřenými i kontrolními dospělci byly umístěny do termostatu a inkubace probíhala v podmínkách bez přístupu světla při teplotě 21 °C. Hodnocení bylo provedeno po 3, 5 a 7 dnech po založení. V rámci ošetřené varianty i kontroly byl zaznamenán stav dospělců a zařazen do kategorie: „živý - mrtvý - infikovaný“. Kumulovaná mortalita vyjadřuje součet mrtvých a infikovaných dospělců.
Struktura populace dospělců lýkožrouta smrkového po jejich vystavení práškové směsi:
| V arianta | den | živí (%) | mrtví (%) | infikovaní (%) | kumulovaná mortalita |
| 3 den | 94,80% | 5,20% | 0,00% | 5,20% | |
| Kontrola | 5 den | 88,30% | 11,70% | 0,00% | 11,70% |
| 7 den | 82,90% | 17,10% | 0,00% | 17,10% | |
| 3 den | 47,40% | 36,20% | 16,40% | 52,60% | |
| CCM 8382 | 5 den | 3,10% | 10,60% | 86,30% | 96,90% |
| 7 den | 0,00% | 3,20% | 96,80% | 100,00% |
Příklad 3: Použití práškové formulace kmene CCM 8382 houby B. bassiana k ošetření lesních porostů proti kůrovcům.
Kmen CCM 8382 byl produkován pomocí velko-objemnější povrchové kultivace na přirozeném substrátu. Konidie byly po usušení sklízeny do nutritivního nosiče a následně adjustovány na standardní titr IxlO10 konidií v 1 g sporového koncentrátu. Sporový koncentrát byl následně ředěn inertním nosičem za účelem dosažení koncentrace konidií IxlO8 v 1 g práškové směsi.
Prášková formulace byla aplikována v lese formou studeného kouře na porost stromů, mezi nimiž byly i stromy napadené kůrovci. Studený kouř byl vzduchem roznesen až do korun stromů. Aplikace byla v době, kdy docházelo k rojení kůrovců. Osm týdnů po aplikaci byl pokácen náhodně vybraný strom. Detailní analýzou tohoto náhodně vybraného stromu bylo zjištěno, že infekce kmenem CCM 8382 houby B. bassiana ]Q rovnoměrně rozptýlena po celém stromě, a to včetně partií v koruně a na vrcholu kmene, tj. ve výši přibližně 21 m.
Výsledky pokusu zaměřeného na ověřování účinnosti kmene houby Beauveria bassiana aplikované formou sporového prášku byly generovány z celého stromu. Strom byl rozřezán na dílčí špalky, které byly rozděleny po délce do tří skupin. Následně byla ve třech sledovacích dnech s měsíčním intervalem rozebrána třetina špalků a zaznamenána kumulativní mortalita (mrtví a infikovaní) všech přítomných dospělců, včetně těch, kteří byli zavrtáni do kůry. V rámci hodnocení byl zaznamenán stav dospělců a každý dospělec byl zařazen do kategorie: „živý - mrtvý - infikovaný“. Po vyjmutí všech dospělců byli následně všichni živí dospělci umístěni do vlhkých komůrek za účelem zjištění, zda u těchto dospělců v optimálních podmínkách vypukne nákaza.
První analýza byla tedy provedena 8 týdnů po aplikaci práškové formulace, druhá analýza 12 týdnů po aplikaci a třetí analýza 16 týdnů po aplikaci. První analýza prokázala, že kumulovaná mortalita se pohybovala na první třetině špalků ve vertikální pozici stromu od 23,3 % do 60,8 %. Ve druhé analýze byla zaznamenána kumulovaná mortalita z druhé třetiny špalků od 20,4 do 44,0 %. U prvních dvou analýz jsou uvedeny výsledky bez následné inkubace živých a mrtvých jedinců. U třetí analýzy se kumulovaná mortalita na zbylých špalcích pohybovala bez inkubace živých jedinců od 30,6 do 52,6 %. Po inkubaci živých dospělců se kumulovaná mortalita navýšila od 48,4 do 92,7 %. Pomocí inkubace bylo prokázáno, že spory kmene jsou uchycené i na živých dospělcích a v případě vhodných podmínek jsou schopny způsobit nákazu u těchto dospělců.
Na grafů uvedeném v obrázku 1 je vertikální struktura populace dospělců Ips typographies v kůře stromu po 3. analýze.
Průmyslová využitelnost
Kmen CCM 8382 entomopatogenní houby Beauveria bassiana, způsob jejího použití a přípravek s obsahem jejích spor podle vynálezu naleznou uplatnění v biologické ochraně lesních porostů před kůrovcovými kalamitami a bude jednou z metod ochrany v rámci „Integrované ochrany lesa“.
PATENTOVÉ NÁROKY
Claims (10)
1. Kmen entomopatogenní houby Beauveria bassiana pro ochranu lesních porostů uložený pod depozitním číslem vzorku CCM 8382 ve sbírce Česká sbírka mikroorganismů Přírodovědecké fakulty Masarykovy univerzity, Kamenice 753/5, 625 00 Brno.
2. Způsob použití entomopatogenní houby pro ochranu lesních porostů, vyznačující se tím, že se použije kmen CCM 8382 entomopatogenní houby Beauveria bassiana pro redukci populací škůdců lesních porostů z čeledi Scolytinae a z čeledi Molytinae, zejména klikoroha borového.
3. Způsob podle nároku 2, vyznačující se tím, že se na lesní porost aplikují spory houby Beauveria bassiana kmene CCM 8382.
-6CZ 308112 B6
4. Způsob podle nároku 3, vyznačující se tím, že se spory aplikují v kapalném postřiku a/nebo v rozptýleném prášku.
5. Způsob podle nároku 4, vyznačující se tím, že se pro ochranu sazenic stromků v lesním porostu použije aplikace kapalným postřikem.
6. Způsob podle nároku 4, vyznačující se tím, že se pro preventivní i kurativní ošetření lesního porostu použije aplikace rozptýlením prášku.
7. Přípravek pro ochranu lesních porostů s obsahem spor entomopatogenní houby rozptýlených v nutritivním nosiči, vyznačující se tím, že obsahuje spory houby Beauveria bassiana kmene CCM 8382 v koncentraci od 109 do 1O10 spor v 1 g nutritivního nosiče spor.
8. Přípravek podle nároku 7, vyznačující se tím, že je ve formě suspenze pro kapalný postřik tvořené vodou, nutritivním nosičem a sporami houby Beauveria bassiana kmene CCM 8382 v koncentraci od 106 do 107 spor v 1 g suspenze.
9. Přípravek podle nároku 8, vyznačující se tím, že suspenze obsahuje přídavek alespoň jednoho rostlinného oleje.
10. Přípravek podle nároku 7, vyznačující se tím, že je ve formě práškové směsi tvořené jemnou křemelinou, nutritivní složkou a sporami houby Beauveria bassiana kmene CCM 8382 v koncentraci od 108 do 109 spor v 1 g práškové směsi.
Priority Applications (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CZ2019-141A CZ308112B6 (cs) | 2019-03-12 | 2019-03-12 | Kmen entomopatogenní houby Beauveria bassiana, způsob jeho použití a přípravek s obsahem spor kmene |
| EP20162118.2A EP3708003A1 (en) | 2019-03-12 | 2020-03-10 | The beauveria bassiana entomopathogenic fungal species, method of its application and preparation containing the species pores |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CZ2019-141A CZ308112B6 (cs) | 2019-03-12 | 2019-03-12 | Kmen entomopatogenní houby Beauveria bassiana, způsob jeho použití a přípravek s obsahem spor kmene |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CZ2019141A3 CZ2019141A3 (cs) | 2020-01-08 |
| CZ308112B6 true CZ308112B6 (cs) | 2020-01-08 |
Family
ID=69140745
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CZ2019-141A CZ308112B6 (cs) | 2019-03-12 | 2019-03-12 | Kmen entomopatogenní houby Beauveria bassiana, způsob jeho použití a přípravek s obsahem spor kmene |
Country Status (2)
| Country | Link |
|---|---|
| EP (1) | EP3708003A1 (cs) |
| CZ (1) | CZ308112B6 (cs) |
Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CZ309914B6 (cs) * | 2022-11-10 | 2024-01-31 | Biologické Centrum Av Čr, V.V.I. | Kmen entomopatogenní houby Beauveria pseudobassiana CCM 9191 a použití tohoto kmene jako bioinsekticidu proti lýkožroutu smrkovému a/nebo lýkožroutu severskému |
| CZ309915B6 (cs) * | 2022-11-10 | 2024-01-31 | Biologické Centrum Av Čr, V.V.I. | Způsob zamezení šíření kůrovce lesním porostem |
Families Citing this family (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN117801957B (zh) * | 2021-11-09 | 2024-06-07 | 吉林省林业科学研究院(吉林省林业生物防治中心站) | 一种白僵菌的发酵方法 |
| CN118638651B (zh) * | 2024-08-15 | 2024-11-12 | 四川躬药科技有限责任公司 | 一种药用僵蚕的球孢白僵菌孢子粉的发酵工艺 |
Citations (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO2007087813A2 (en) * | 2006-02-01 | 2007-08-09 | Arab Organization For Agricultural And Development | Egyptian strain of entomopathogenic fungus beauveria bassiana |
| WO2016111480A1 (ko) * | 2015-01-06 | 2016-07-14 | 전북대학교 산학협력단 | 곤충병원성 보베리아 바시아나 및 이를 이용한 농업해충 방제용 액상제제 |
| SK50462015A3 (sk) * | 2015-10-28 | 2017-05-03 | Scientica, S.R.O. | Vysokovirulentný kmeň entomopatogénnej huby Beauveria bassiana DSM 32081 na použitie v bioregulácii lykožrúta smrekového |
Family Cites Families (8)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPH06684B2 (ja) * | 1989-04-25 | 1994-01-05 | 農林水産省森林総合研究所長 | キイロコキクイムシを伝播者としたボーベリア菌によるマツノマダラカミキリの防除法 |
| AU664888B2 (en) * | 1992-05-13 | 1995-12-07 | W.R. Grace & Co.-Conn. | Novel toxin producing fungal pathogen and uses |
| CZ300701B6 (cs) | 2008-06-23 | 2009-07-22 | Biologické centrum AV CR, v.v.i. | Kmen entomopatogenní houby Isaria fumosorosea CCM 8367 (CCEFO.001.PFR) a zpusob likvidace hmyzích škudcu a roztocu |
| KR20110084516A (ko) * | 2008-10-14 | 2011-07-25 | 그린타이드 리미티드 | 곤충병원성 진균 및 이의 용도 |
| CO7010173A1 (es) * | 2013-01-21 | 2014-07-31 | Federacion Nac De Cafeteros De Colombia | Formulaciones plaguicidas elaboradas a partir de una mezcla de extractos de la familia liliaceae y solanaceae, que incluye una mezcla de cepas del hongo beauveria bassiana para el control de artrópodos |
| CN104630075A (zh) * | 2015-02-03 | 2015-05-20 | 福建省林业科学研究院 | 一株对星天牛幼虫具有高致病力的球孢白僵菌及其应用 |
| CN108308197A (zh) * | 2018-02-05 | 2018-07-24 | 吉林省农业科学院 | 一种防治螟虫害的方法 |
| CN108617696A (zh) * | 2018-04-28 | 2018-10-09 | 广西青又青生物肥业有限公司 | 一种用于柑橘黄龙病的复合微生物菌剂及其制备方法和用其制备的柑橘黄龙病专用生物制剂 |
-
2019
- 2019-03-12 CZ CZ2019-141A patent/CZ308112B6/cs not_active IP Right Cessation
-
2020
- 2020-03-10 EP EP20162118.2A patent/EP3708003A1/en not_active Withdrawn
Patent Citations (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO2007087813A2 (en) * | 2006-02-01 | 2007-08-09 | Arab Organization For Agricultural And Development | Egyptian strain of entomopathogenic fungus beauveria bassiana |
| WO2016111480A1 (ko) * | 2015-01-06 | 2016-07-14 | 전북대학교 산학협력단 | 곤충병원성 보베리아 바시아나 및 이를 이용한 농업해충 방제용 액상제제 |
| SK50462015A3 (sk) * | 2015-10-28 | 2017-05-03 | Scientica, S.R.O. | Vysokovirulentný kmeň entomopatogénnej huby Beauveria bassiana DSM 32081 na použitie v bioregulácii lykožrúta smrekového |
Non-Patent Citations (3)
| Title |
|---|
| ANSARI M. A. et al.: „Susceptibility of different developmental stages of large pine weevil Hylobius abietis (Coleoptera: Curculionidae) to entomopathogenic fungi and effect of fumgal infection to adult weevils by formulation and application methods," Journal of Invertebrate Pathology, vol. 111, no. 1, 2012, str. 33 – 40, ISSN 0022-2011 * |
| BARTA M. et al.: „Hypocrealean fungi associated with populations of Ips typographus in West Carpathians and selection of local Beauveria strains for effective bark beetle control," Biologia, vol. 73, no. 1, leden 2018, str. 53 – 65, ISSN 0006-3088 * |
| WILLIAMS C. D. et al.: „Control of a major pest of forestry, Hylobius abietis, with entomopathogenic nematodes and fungi using eradicant and prophylactic strategies," Forest Ecology and Management, vol. 305, 2013, str. 212 – 222, ISSN 0378-1127 * |
Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CZ309914B6 (cs) * | 2022-11-10 | 2024-01-31 | Biologické Centrum Av Čr, V.V.I. | Kmen entomopatogenní houby Beauveria pseudobassiana CCM 9191 a použití tohoto kmene jako bioinsekticidu proti lýkožroutu smrkovému a/nebo lýkožroutu severskému |
| CZ309915B6 (cs) * | 2022-11-10 | 2024-01-31 | Biologické Centrum Av Čr, V.V.I. | Způsob zamezení šíření kůrovce lesním porostem |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| CZ2019141A3 (cs) | 2020-01-08 |
| EP3708003A1 (en) | 2020-09-16 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| Faleiro | A review of the issues and management of the red palm weevil Rhynchophorus ferrugineus (Coleoptera: Rhynchophoridae) in coconut and date palm during the last one hundred years | |
| Bedding et al. | Disinfesting blackcurrant cuttings of Synanthedon tipuliformis, using the insect parasitic nematode, Neoaplectana bibionis | |
| CZ308112B6 (cs) | Kmen entomopatogenní houby Beauveria bassiana, způsob jeho použití a přípravek s obsahem spor kmene | |
| Dolinski et al. | Insect cadaver applications: pros and cons | |
| Soroker et al. | The role of semiochemicals in date pest management | |
| Woreta | Control of cockchafer Melolontha spp. grubs-A review of methods | |
| Lalík et al. | Potential of Beauveria bassiana application via a carrier to control the large pine weevil | |
| Hornbostel et al. | Effectiveness of Metarhizium anisopliae (Deuteromycetes) against Ixodes scapularis (Acari: Ixodidae) engorging on Peromyscus leucopus | |
| Martin | Development of environment-friendly strategies in the management of processionary moths | |
| Harari et al. | Manipulation of insect reproductive systems as a tool in pest control | |
| Masood et al. | Bark beetle, Hypocryphalus mangiferae Stebbing (Coleoptera: Curculionidae: Scolytinae) is a vector of mango sudden death disease in Pakistan | |
| GB2419531A (en) | Biological control of insect pests | |
| Ambele et al. | Testing a co-formulation of CO2-releasing material with an entomopathogenic fungus for the management of subterranean termite pests | |
| Darus et al. | Intensive IPM for management of oil palm pests | |
| Kafle et al. | Efficacy of Beauveria bassiana against the red imported fire ant, Solenopsis invicta (Hymenoptera: Formicidae), in Taiwan | |
| Prastiwi et al. | Compatibility studies of entomopathogenic fungi and botanical pesticide for controlling Spodoptera exigua | |
| KR102387200B1 (ko) | 솔수염하늘소 방제용 조성물 및 이를 이용한 솔수염하늘소의 방제 방법 | |
| KR100421779B1 (ko) | 한국산 곤충병원성 선충 및 그에 의한 방제법 | |
| Hajek et al. | Microbial control of wood-boring insects attacking forest and shade trees | |
| Sajap et al. | Isaria fumosorosea and Metarhizium anisopliae for controlling Atteva sciodoxa (Lepidoptera: Yponomeutidae), a pest of Eurycoma longifolia | |
| Shimazu | Use of microbes for control of Monochamus alternatus, vector of the invasive pinewood nematode | |
| Ugine et al. | Insect predator odors protect herbivore from fungal infection | |
| WO2007087813A2 (en) | Egyptian strain of entomopathogenic fungus beauveria bassiana | |
| Japoshvili et al. | Studies on the parasitoid complex attacking the globose scale Sphaerolecanium prunastri (Fonscolombe)(Hemiptera: Coccoidea) on Prunus species in Turkey | |
| Farid et al. | Potential of fipronil as a feeding toxicant against the subterranean termite Heterotermes indicola (Rhinotermitidae: Isoptera) |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| MM4A | Patent lapsed due to non-payment of fee |
Effective date: 20240312 |