CZ307227B6 - C-3 biotinylované triterpeny lupanového typu a jejich využití - Google Patents

C-3 biotinylované triterpeny lupanového typu a jejich využití Download PDF

Info

Publication number
CZ307227B6
CZ307227B6 CZ2015-549A CZ2015549A CZ307227B6 CZ 307227 B6 CZ307227 B6 CZ 307227B6 CZ 2015549 A CZ2015549 A CZ 2015549A CZ 307227 B6 CZ307227 B6 CZ 307227B6
Authority
CZ
Czechia
Prior art keywords
lupine
biotinylated
type
triterpenes
biotin
Prior art date
Application number
CZ2015-549A
Other languages
English (en)
Other versions
CZ2015549A3 (cs
Inventor
Milan Urban
Miroslav Soural
arek Jan Ĺ
Original Assignee
Univerzita Palackého v Olomouci
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Univerzita Palackého v Olomouci filed Critical Univerzita Palackého v Olomouci
Priority to CZ2015-549A priority Critical patent/CZ307227B6/cs
Publication of CZ2015549A3 publication Critical patent/CZ2015549A3/cs
Publication of CZ307227B6 publication Critical patent/CZ307227B6/cs

Links

Landscapes

  • Heterocyclic Carbon Compounds Containing A Hetero Ring Having Oxygen Or Sulfur (AREA)

Description

C-3 biotinylované triterpeny lupanového typu a jejich využití
Oblast techniky
Vynález se týká C-3 biotinylovaných triterpenů lupanového typu a jejich využití při hledání molekulárních cílů. Jedná se o triterpeny lupanového typu navázané k biotinu přes variabilní raménko s využitím hydroxylové skupiny v poloze č. 3. Tyto konjugáty je možné využít pro stanovení molekulárního cíle, tedy proteinu v nádorové buňce, se kterým tyto aktivní triterpeny lupanového typu interagují, což má za následek její smrt. Využití se předpokládá zejména ve farmaceutickém průmyslu. V současné době je popsáno několik tisíc aktivních triterpenů lupanového typu přírodního nebo syntetického původu a další deriváty v literatuře neustále přibývají. Molekulární cíl je však znám pouze u několika z nich, což podstatně limituje jejich potenciální využití v humánní medicíně.
Dosavadní stav techniky
Triterpeny jsou přírodní sloučeniny, u kterých byla objevena řada biologických aktivit, z nichž nej významnější je selektivní protinádorová aktivita (Dzubak P., Hajduch M., Vydra D., Hustova Biedermann D., Markova L., Urban M., Šarek J. Nat. Prod. Rep. 2006, 23, 394 - 411). Jejich mechanizmus účinku je již studován řadu let a bylo objeveno několik typů proteinů, jejichž inhibice triterpeny vede k inhibici růstu rakovinných buněk, významná je např. inhibice proteasomu (K. Quian, S.-Y. Kim, H.-Y. Hung, L. Huang, C.-H. Chen, K.-H. Lee: Bioorg. Med. Chem. Letí. 2011, 21, 5944). Je však zřejmé, že i malá změna ve struktuře triterpenů může mít podstatný vliv na mechanizmus účinku a tedy pro každý nový, cytotoxicky aktivní triterpen je vhodné najít jeho konkrétní molekulární cíle. Mezi triterpeny vynikají svými protinádorovými aktivitami triterpeny lupanového typu, kterých se týká tento vynález.
Jednou z metod hledání molekulárních cílů je dobře známá afinitní chromatografie (Rylova, G.; Ozdian, T.; Varanasi, L.; Šoural, M.; Hlavac, J.; Holub, D.; Dzubak, P.; Hajduch, M. Current Drug Targets 2015, 16, 60-76). Nejčastějším uspořádáním této metody je pevná fáze modifikovaná avidinem a aktivní molekula navázaná na biotin přes definované raménko. Tímto raménkem je myšlena organická molekula protáhlého tvaru, která spojuje molekulu biotinu se studovanou sloučeninou. Raménko může mít různý charakter, nejčastěji je však založeno na bázi ethylenoxy jednotek. Takto modifikovaná aktivní molekula se přidá k lyzátu nádorových buněk, přičemž vznikne slabá interakce protein-inhibitor (aktivní molekula). Poté se k tomuto roztoku přidá pevná fáze modifikovaná avidinem, vytvoří se velmi pevná vazba biotin-avidin. Pevná fáze se odfiltruje od zbytku lyzátu, promyje vhodnými pufry a následuje eluce pomocí soustavy jiných pufrů, kdy se postupně vymývají proteiny z kolony v závislosti na síle jejich interakce s aktivní molekulou. V tandemu s výkonným MALD1-TOF spektrometrem se určí struktura proteinů, které s aktivní molekulou interagují. Pak následuje validace cílů. Jedním ze způsobů, jak cíl validovat, je metoda navázání molekuly z různých poloh a zopakování afinitní chromatografie pro všechny takto navázané molekuly. Cíl by se měl objevit pouze tehdy, když je molekula navázána mimo farmakofor (uspořádání v molekule zodpovědné za její aktivitu). Pokud tedy navážeme molekulu přes farmakofor, měl by tento být zablokovaný a experiment s takovou molekulou sloužit jako negativní kontrola. Jedním z výhodných uspořádání této metody je její kombinace s evaluací pomocí kvantitativní proteomiky a SILAC, např. v lit. S. Sakamoto,
M. Hatakeyama, T. Ito, H. Handa Bioorg. Med. Chem. 2012, 20, 1990 nebo v S.-E. Ong, X. Li, M. Schenone, S. L. Schreiber, S. A. Carr, Methods Mol. Biol 2012, 803, 129.
Je tedy zřejmé, že pro stanovení molekulárního cíle pomocí afinitní chromatografie je důležité spojit aktivní molekulu na vhodné části jejího skeletu s biotinem přes vhodné raménko. Za tímto účelem existuje řada metod. V literatuře je hojně popsána příprava a použití derivátů typu 1 (vzorec 1). Některé z těchto derivátů jsou i komerčně dostupné.
- 1 CZ 307227 B6
Hl. skelet bitoinu Skelgt raménl<a 'n -------
í O r-
γ_ΝΗ Vs o H N^COOH >________________/
n= l - 12
Vzorec l: Příklad biotinylačního derivátu s raménkem na bázi methylenových jednotek s koncovou karboxylovou skupinou
Znázorněný typ raménka, tj. pouze na bázi uhlíkatého skeletu -(CH2)n-, však není považován pro účely afinitní chromatografie za zcela vhodný a nebude mu proto zde věnována další pozornost. Uvedeny budou pouze některé konkrétní příklady derivátů s raménkem na bázi ethylenoxy jednotek nebo deriváty s raménky podobné konstituce, která jsou považována z pohledu struktury za optimální. V literatuře je např. popsána příprava derivátu 2 dle vzorce 2 a jeho následné použití pro studium glykokonjugátů (McReynoIds, Katherine D.; Hadd, Michael J.; GervayHague, Jacquelyn, Bioconjugate Chemistry 1999, 10(6), 1021-1031). Popsána je také syntéza derivátu 3 a jeho použití pro studium protein-fosfoinositid vazebných interakcí (Gong, Denghuang: Smith, Matthew D.: Manna, Debasis; Bostic, Heidi E.; Cho, Wonhwa; Best, Michael D, Bioconjugate Chemistry 2009, 20(2), 310-316).
°^nh h
2: n = 3
3: n = 4
Vzorec 2: Příklad biotinylačního činidla s raménkem na bázi ethylenoxy jednotek s koncovou karboxylovou skupinou
Derivát 4 s raménkem obsahujícím disulfidickou vazbu (vzorec 3) byl připraven pomocí biotinu, ethylendiaminu a merkaptoethanolu ve výtěžku 72 % a použit pro studium β-laktamáz (Marchand-Brynaert, Jacqueline; Bouchet. Michele; Touillaux, Roland; Beauve, Cecile; Fastrez, Jacques, Tetrahedron 1996, 52(15), 5591-606).
COOH
Vzorec 3: Příklad biotinylačního činidla s raménkem obsahujícím -S-S- vazbu a koncovou karboxylovou skupinou
V poslední době se pro syntézu konjugátů malých molekul s biotinem rozšířilo použití Huisgenovy 1,3-cykloadice, tzv. click chemie a pro tento účel byly syntetizovány deriváty biotinu substituované molekulou azidu (vzorec 4), např. 5. (Vundyala Neeraja, Sun Chiin, Šidíme
-2 CZ 307227 B6
Francoise. Shi Wei, LAmoreaux William, Raja Krishnaswami. Peetz, Ralf. M., Tetrahedron Letters 2008, 49(45), 6386-6389).
5: n = 2 nebo 6
Vzorec 4: Příklad biotinylačního činidla s ethylenoxy raménkem a koncovou azidoskupinou
Dále je možné k syntéze biotinylovaných sloučenin pro afinitní chromatografií využít tzv. syntézy na pevné fázi, kde systém biotin-raménko je kovalentně uchycen na polymemí matrici. Syntéza na pevné fázi ve srovnání se syntézou v roztoku obecně poskytuje řadu výhod. Mezi největší výhody patří především jednoduché instrumentální vybavení a jednoduché experimentální provedení syntézy, dále snadná příprava malých množství látek (i při mnohastupňových syntézách) a zejména velmi jednoduchá izolace meziproduktů syntézy.
Příkladem takového přistupuje příprava polymemí matrice 5 s navázaným biotinem a raménkem zakončeným aminoskupinou (schéma 1, Cankarova Naděžda. Funk Petr, Hlavac Jan. and Šoural Miroslav, 2011, Tetrahedron Lett. 52, 5782 - 5788). Pryskyřice 5 následně reaguje s příslušnou 20 aktivní molekulou, která pro tento účel musí obsahovat vhodnou funkční skupinu.
Fmoc
Ffnoc tq tkrok(«)
2. krok (««)
Q Potjmcmi matrice (kcpotymer ítyrenu a dMntftenMnu)
Schéma 1. (i) 2-(2-aminoethoxy)ethanol, 10% AcOH/DMF, 20 °C, 16 h, potom NaBH(OAc)3, 2:5 20 °C, 6 h; (ii) Fmoc-Osu, DCM, 20 °C, 16 h; (iii) biotin, HOBt, DIC, D1EA, DMF, 20 °C, 16 h, zopakováno 3x; (iv) 20% piperidin/DMF, 20 °C, 30 min.; (v) [2-[2-(Fmocamino)ethoxy]ethoxy]octová kyselina, HOBt, DIC, DCM/DMF (1:1). 20 °C, 16 h.
Právě výše uvedený způsob je využitelný pro jednoduchou a rutinní modifikaci triterpenů 33 lupanového typu. Je však nutné vést v patrnosti, že triterpeny lupanového typu většinou neobsahují vhodnou funkční skupinu pro účel biotinylace. Za vhodnou (tedy dostatečně reaktivní) funkční skupinu se typicky považuje např. karboxylová skupina, aminoskupina nebo alkylhalogenidová skupina. Takové skupiny sice u triterpenů lupanového typu existují, nejsou však dostatečně reaktivní ze sterických důvodů. Pro vlastní biotinylaci triterpenů je proto nutné 35 triterpeny lupanového typu premodifikovat. Vybrané příklady premodifikace ukazuje schéma 2:
výchozí triterpeny 6-9 jsou modifikovány inkorporací karboxylové skupiny za vzniku karboxylových kyselin 10-13. Tyto reakce jsou popsané v literatuře (Šarek, J., Hajduch, M., Svoboda, M., Nováková, K., Spáčilová, P., Kubelka, T., Biedermann, D.: Method of preparation of a soluble formulation of water - insoluble pentacyelic and tetracyclic terpenoids, a soluble 40 formulation of a pentacyelic or tetracyclic terpenoid and a pharmaceutical composition containing this soluble formulation, 2008 WO 2008/037226 A2 a Mukherjee, R., Jaggi, M., Siddiqui, M. J. A., Srivastava, S. K., Rajednran, P., Vardhan, A., Burman, A. C.: Bioorg. Med. Chem. Lett. 2004, 14, 4087-4091.)
Í.X-CHj 1 X«CHO a y = co. z*ch2 S Y,Z · co
Schéma 2. (i) Sukcinanhydrid, THF, DMAP, reflux 12 h.
Jediným biotinylovaným triterpenem nalezeným v literatuře je bardoxolone methyl (CDDO), ze kterého byly syntetizovány konjugáty s biotinem, například typu 14 a 15 (vzorec 5) (Honda Tadashi, Janošík Tomasz, Honda Yukiko, Han Jie, Liby Karen T., Williams Charlotte R.; Couch, Robin D., Anderson Amy C., Sporn Michael B., Gribble Gordon W. Journal of Medicinal Chemistry 2004, 47, 4923 - 4932). Tyto konjugáty mají dvě zásadní nevýhody: 1) obsahují příliš krátké raménko, což může u některých cílových proteinů vést k tomu, že ze sterických důvodů se při provedení afinitní chromatografie nezachytí; 2) toto raménko je pouze na bázi uhlíkatého skeletu (-(CH2)n-), který není považován pro účely afinitní chromatografie za zcela vhodný, protože má tendenci zaujímat nevhodné prostorové uspořádání. Zcela podstatný je především fakt, že Bardoxolone methyl není triterpen lupanového typu. Konjugáty triterpenů lupanového typu s biotinem přes raménko na bázi ethylenoxy jednotek, kterých se týká tento vynález, nejsou v literatuře vůbec popsány a z pohledu afinitní chromatografie jako metody pro studium molekulárních cílů těchto látek jsou molekuly obsažené v tomto patentovém spisu jedinečné.
Vzorec 5: Jediné biotinylované triterpeny popsané v literatuře
Podstata vynálezu
Podstata vynálezu spočívá v C-3 biotinylovaných triterpenech lupanového typu obecného vzorce I, Schéma 3. Lupanový skelet je v tomto případě modifikován přes atom C-3, Základní skelet (Schéma 3) znázorňuje tuto polohu na základním terpenickém skeletu lupanového typu. Obecný vzorec 1 (Schéma 3) znázorňuje strukturu C-3 biotinylovaných triterpenů lupanového typu.
Modifikace C3
Triterpen lupanového typu (základní skelet)
Biotinylované triterpeny lupanového typu (Obecný vzorec I)
Schéma 3: Obecná struktura cílových látek
Rámcový popis syntézy C-3 biotinylovaných triterpenů lupanového typu
Byla připravena biotinylovaná pryskyřice 5 a triterpenoidní prekurzory 10, 11, 12, 13 (Schéma 2).
Vzorec 6: Sloučenina biotin-L-NH2 ukotvená na polystyrénové matrici (tzv. biotinylovaná pryskyřice 5).
Obecný postup pro acylace pryskyřice 5 terpenickými kyselinami
Triterpen lupanového typu 10-13 (0,3 mmol) byl rozpuštěn v DMF (1,5 ml) a k roztoku byl následně přidán HOBt.2H2O (45 mg, 0,3 mmol), DIC (45 pL, 0,3 mmol) a DCM (1,5 ml). Roztok byl následně přidán k pryskyřici 5 (250 mg). Směs byla třepána přes noc, následně promyta 3 x DMF a 3 x DCM.
Odštěpení cílových produktů (C-3 biotinylovaných triterpenů lupanového typu) z pryskyřice
Pryskyřice po acylačním/alkylačním kroku byla třepána s 50% TFA v DCM (3 ml) po dobu 30 min za laboratorní teploty. Roztok byl odebrán a pryskyřice ještě 3 x promyta 50% TFA v DCM. Spojené promývací roztoky byly odpařeny proudem dusíku a surový produkt byl rozpuštěn ve 2 ml MeCN a chromatografován na HPLC s reverzní fází. Chromatograficky jednotné frakce byly odpařeny a lyofilizovány z vody, 2-methyl-2-propanolu nebo jejich směsi.
Těmito reakcemi je možné připravit kombinací jednotlivých ramének a jednotlivých triterpenů lupanového širokou škálu produktů.
C-3 biotinylované triterpeny lupanového typu uvedené v tomto patentovém spisu zahrnují následující provedení:
Raménko je vždy tvořeno uhlíkatým řetězcem s deseti až čtyřiceti atomy uhlíku s jednoduchými nebo jednou či více dvojnými nebo jednou či více trojnými vazbami a tento uhlíkatý řetězec může obsahovat jednu či více karbonylových skupin nebo jeden či více atomů uhlíků v tomto uhlíkatém řetězci může být substituováno atomem kyslíku, síry nebo -NH- skupinou, • b je jednoduchá nebo dvojná vazba, c je jednoduchá nebo dvojná vazba, • R1 je skupina CH2OR2, kde R2 je alkyl s jedním až pěti uhlíky nebo benzyl, nebo R2 je acyl odvozený od alifatické kyseliny obsahující jeden až pět atomů uhlíku, nebo R2 je acyl odvozený od kyseliny benzoové, fialové, skořicové, nebo R2 je skupina COOR3, kde R3 je alkyl s jedním až pěti uhlíky, nebo R3 je benzyl, nebo R3 je acyl odvozený od alifatické kyseliny s jedním až pěti uhlíky, • X je CH3, CH=O, CONH2, nebo X je skupina COOH, nebo X je CONHR4, kde R4 je alkyl s jedním až pěti atomy uhlíku nebo R4 je cykloalkyl s pěti nebo šesti uhlíky, • Y je CH2, C=O, C=NOH, nebo CHOH, • Z je skupina CH2; C=O; C=NOH nebo CHOH.
Příklady uskutečnění vynálezu
Podstata přípravy a použití derivátů podle vynálezu je blíže objasněna v následujících příkladech. Molekuly 16 - 21 byly připraveny dle rámcového popisu syntézy C-3 biotinylovaných triterpenů lupanového typu uvedeného v podstatě vynálezu a zde jsou uvedeny výtěžky těchto reakcí a data z hmotnostního spektrometru a NMR prokazující strukturu produktu.
Příklad 1
Výtěžek 20,4 mg (31 %). HRMS (ESI-TOF) m/z vypočteno pro C54H86N4O|2S [M+H]+ 1015,6036. nalezeno 1015,6061. 'H-NMR: 0,78 (s, 3H); 0,78 (s, 3H); 0,82 (s, 3H); 0,87 (s, 3H); 0,93 (s, 6H, 6 x CH3): 1,84 (bd, 1H, J = 10,9 Hz); 2,30 (t, 2H, J = 6,9 Hz); 2,36 (t, 2 H, J = 5,7 Hz); 2,58 (d, 1H, J = 12,6 Hz); 2,82 (dd, 1H, J, = 12,0 Hz, J2 = 5,4 Hz, SCHH biotin); 3,05 3,3 (m, 6H, Η-19β, 5 x H-biotin); 3,45 - 3,65 (m, 10H, H-linker, H-biotin); 3,87 (s, 2H, NHC(O)CH2O-linker); 3,99 (bs, 1H, H-3a); 4,11 (m, 3H, tercCH-biotin, 1 x CH2-linker); 4,29 (d, 1H, J = 4,6 Hz, (bs, 1H, H-29 pro E); 4,38 (d, 1H, J = 3,8 Hz, H-29pro Z); 6,36 (s, 1 Η, NHbiotin); 6,42 (s, IH, NH-biotin); 7,65 (bs, 1H, NH-linker); 7,92 (bs, 1H, NH-linker).
Příklad 2
Výtěžek 27,8 mg (39 %). HRMS (ESI-TOF) m/z vypočteno pro C66HhoN40|8S [M+H]+ 1279,7609, nalezeno 1279,7618.
Příklad 3
C-3 biotinylovaný triterpen lupanového typu 18
Výtěžek 35,5 mg (54 %). HRMS (ESI-TOF) m/z vypočteno pro C54H84N4Oi3S [M+H]+ 1029,5828, nalezeno 1029,5841. 'H-NMR: 0,76 (s, 3H); 0,77 (s, 3H); 0,78 (s, 3H); 0,85 (s, 3H); 0,91 (s, 3H, 5 x CH3); 1,78- 1,85 (m, 2H); 1,88-2,00 (m, IH); 2,10-2,21 (m,2H); 2,30 (t, IH, J = 7,3 Hz); 2,25 -2,37 (m, IH); 2,44 - 2,48 (m, 2H); 2,50 (m, 4H); 2,55 - 2,62 (m, 2H); 2,81 (dd, IH, J, = 12,3 Hz, J2 = 5 Hz); 3,05 - 3,15 (m, IH); 3,15 - 3,22 (m, 2H); 3,23 - 3,30 (m, 4H); 3,38 - 3,46 (m, 6H); 3,50 - 3,65 (m, 7H, CH2 linker, H - biotin); 3,87 (s, 2H, NHC(O)CH2Olinker); 4,02 - 4,15 (m, 3H, tercCH-biotin, 1 x CH2-linker); 4,25 -4,34 (m, IH); 6,09 (s, IH, H29pro Eý 6,36 (s, IH, NH-biotín); 6,43 (s, IH, NH-biotin); 6,47 (s, H-29pro Z); 7,65 (t, IH, J = 5,7 Hz, NH-linker); 7,92 (t, IH, J = 5,5 Hz, NH-linker); 9,49 (s, IH, H-30).
_ 7 CZ 307227 B6
Příklad 4
Výtěžek 7 mg (10 %). HRMS (ESI-TOF) m/z vypočteno pro C55H86N4O|3S [M+H]+ 1043,5985, nalezeno 1043,5995. 'H-NMR: 0,78 (s, 3H); 0,79 (s, 3H); 0,86 (s, 3H); 0,97 (s, 3H); 1,12 (d, 3H, J = 1,8 Hz); 1,14 (d, 3H, J = 1,9 Hz, 7 x CH3); 1,80 - 1,90 (m, 2H); 2,16 (d, 1H, J = 18,8 Hz); 2,35 -2,60 (m, 10H); 2,82 (dd, 1H, J, = 12,4 Hz, J2 = 5,0 Hz); 3,07 (m, 1H); 3,15 - 3,30 (m, 6H); 3,40 - 3,50 (m, 2H); 3,50 - 3,51 (m, 7H); 3,63 (s, 3H, COOMe): 3,88 (s, 2H, NHC(O)CH2Olinker); 4,12 (m, 3H, tercCH-biotin, 1 x CH2-linker): 4,30 (dd, 1H, J, = 7,9 Hz, J2 = 5,4 Hz); 4,38 (dd, 1H, J, = 11,4 Hz, J2 = 5,0 Hz): 6,37 (s, 1H, NH-biotin); 6,44 (s, 1H, NH-biotin); 7,64 (t, 1H, J = 5,5 Hz, NH-linker); 7,91 (t, 1H, J = 5,5 Hz, NH-linker).
Příklad 5
C-3 biotinylovaný triterpen lupanového typu 20
Výtěžek 32,6 mg (43 %). HRMS (ESI-TOF) m/z vypočteno pro C67HnoN4Oi9S [M+H]+ 1307,485, nalezeno 1307,7481.
_ 8 _
Příklad 6
Výtěžek 20 mg (30%). HRMS (ES1-TOF) m/z vypočteno pro C55H84N4O14S [M+H]+ 1057,5778, nalezeno 1057,5794. 'H-NMR: 0,79 (s, 3H); 0,79 (s, 3H); 0,86 (s, 3H); 0,96 (s, 3H); 1,18 (d, 3H, 10 J = 2,3 Hz); 1,20 (d, 3H, J = 2,3 Hz, 7 x CH0; 1,85 - 2,10 (m, 4H); 2,20 - 2,41 (m, 4H); 2,44 2,54 (m, 3H); 2,54 - 2,60 (d, 1H, J = 12,4 Hz); 2,71 (dd, 1H, JI = 4,1 Hz, J2 = 10,2 Hz); 2,82 (dd, 1H, J, = 12,8 Hz, J2 = 4,6 Hz); 3,09 (m, 1H); 3,13-3,50 (m, 15H); 3,52 - 3,63 (m, 7H); 3,66 (s, 3H, COOMe); 3,88 (s, 2H, NHC(O)CH2O-linker); 4,12 (m, 3H, tercCH-biotin, 1 x CH2linker); 4,30 (t, 1H, J = 6,8 Hz); 4,39 (dd, 1H, J, = 11,5 Hz, J2 = 5,0 Hz); 6,35 (s, 1H, NH-biotin);
6,42 (s, 1H, NH-biotin); 7,64 (t, 1H, J = 5,7 Hz. NH-linker); 7,91 (t, 1H, J = 5,5 Hz, NH-linker).
Průmyslová využitelnost
2(i C-3 biotinylované triterpeny lupanového typu jsou konjugáty cytotoxicky aktivních triterpenů lupanového typu (potenciálních protinádorových léčiv) s biotinem a jsou využitelné ve farmaceutickém průmyslu pro stanovení molekulárních cílů příslušných triterpenů pomocí afinitní chromatografie. S jejich využitím je možné identifikovat proteiny, se kterými tyto cytotoxicky aktivní triterpeny vytváří specifickou interakci, případně je inhibují, a tím ozřejmit 25 jejich mechanizmus účinku, což je pro potenciální nová léčiva zásadní informace.

Claims (2)

1. C-3 biotinylované triterpeny lupanového typu, které jsou složené z biotinu, na který je přes raménko navázán triterpen lupanového typu, obecného vzorce 1, kde raménko je tvořeno uhlíkatým řetězcem s deseti až čtyřiceti atomy uhlíku s jednoduchými nebo jednou či více dvojnými nebo jednou či více trojnými vazbami a tento uhlíkatý řetězec může obsahovat jednu či více karbonylových skupin nebo jeden či více atomů uhlíků v tomto uhlíkatém řetězci může být substituováno atomem kyslíku, síry nebo -NH- skupinou a • b je jednoduchá nebo dvojná vazba, c je jednoduchá nebo dvojná vazba, • R1 je skupina CH2OR2, kde R2 je alkyl s jedním až pěti uhlíky nebo benzyl, nebo R2 je acyl odvozený od alifatické kyseliny obsahující jeden až pět atomů uhlíku, nebo R2 je acyl odvozený od kyseliny benzoové, fialové, skořicové, nebo R2 je skupina COOR3, kde R3 je alkyl s jedním až pěti uhlíky, nebo R3 je benzyl, nebo R3 je acyl odvozený od alifatické kyseliny s jedním až pěti uhlíky, • X je CH3, CH=O, CONH2, nebo X je skupina COOH, nebo X je CONHR4, kde R4 je alkyl s jedním až pěti atomy uhlíku nebo R4 je cykloalkyl s pěti nebo šesti uhlíky, • Y je CH2, C=O, C=NOH, nebo CHOH, • Z je skupina CH2; C=O; C=NOH nebo CHOH.
2. Použití biotinylovaných triterpenů lupanového typu podle nároku 1 pro stanovení molekulárních cílů triterpenů lupanového typu.
CZ2015-549A 2015-08-10 2015-08-10 C-3 biotinylované triterpeny lupanového typu a jejich využití CZ307227B6 (cs)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CZ2015-549A CZ307227B6 (cs) 2015-08-10 2015-08-10 C-3 biotinylované triterpeny lupanového typu a jejich využití

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CZ2015-549A CZ307227B6 (cs) 2015-08-10 2015-08-10 C-3 biotinylované triterpeny lupanového typu a jejich využití

Publications (2)

Publication Number Publication Date
CZ2015549A3 CZ2015549A3 (cs) 2017-02-22
CZ307227B6 true CZ307227B6 (cs) 2018-04-11

Family

ID=58449108

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CZ2015-549A CZ307227B6 (cs) 2015-08-10 2015-08-10 C-3 biotinylované triterpeny lupanového typu a jejich využití

Country Status (1)

Country Link
CZ (1) CZ307227B6 (cs)

Cited By (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN111333692A (zh) * 2020-03-02 2020-06-26 湖南省中医药研究院 一种白桦脂酸衍生物及其制备方法和应用

Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CZ2008528A3 (cs) * 2008-09-01 2009-11-18 Univerzita Karlova v Praze, Prírodovedecká fakulta Deriváty triterpenoidu pro lécbu nádorových onemocnení a farmaceutická kompozice je obsahující

Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CZ2008528A3 (cs) * 2008-09-01 2009-11-18 Univerzita Karlova v Praze, Prírodovedecká fakulta Deriváty triterpenoidu pro lécbu nádorových onemocnení a farmaceutická kompozice je obsahující

Non-Patent Citations (6)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
CANKAROVA, Nadezda, et al. Novel preloaded resins for solid-phase biotinylation of carboxylic acids. Tetrahedron Letters, 2011, 52.44: 5782-5788. *
HONDA, Tadashi, a kol. Design, synthesis, and biological evaluation of biotin conjugates of 2-cyano-3, 12-dioxooleana-1, 9 (11)-dien-28-oic acid for the isolation of the protein targets. Journal of medicinal chemistry, 2004, 47, 4923-4932. *
LACORN, Markus, et al. Use of biotinylated 17β-estradiol in enzyme-immunoassay development: Spacer length and chemical structure of the bridge are the main determinants in simultaneous streptavidin–antibody binding. Journal of immunological methods, 2005, 297.1: 225-236. *
RYLOVA, Gabriela, et al. Affinity-Based Methods in Drug-Target Discovery. Current drug targets, 2015, 16.1: 60-76. *
TO C. a kol. The Synthetic Triterpenoid 2-Cyano-3,12-dioxooleana-1,9-dien-28-oic Acid-Imidazolide Alters Transforming Growth Factor β-dependent Signaling and Cell Migration by Affecting the Cytoskeleton and the Polarity Complex. Journal of Biol. Chem. 2008, 283, 11700–11713. *
YORE, Mark M., et al. Proteomic analysis shows synthetic oleanane triterpenoid binds to mTOR. PLoS One, 2011, 6.7: e22862. *

Cited By (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN111333692A (zh) * 2020-03-02 2020-06-26 湖南省中医药研究院 一种白桦脂酸衍生物及其制备方法和应用

Also Published As

Publication number Publication date
CZ2015549A3 (cs) 2017-02-22

Similar Documents

Publication Publication Date Title
Kacprzak et al. Alkaloids and isoprenoids modification by copper (I)-catalyzed Huisgen 1, 3-dipolar cycloaddition (click chemistry): toward new functions and molecular architectures
Drag-Zalesinska et al. Esters of betulin and betulinic acid with amino acids have improved water solubility and are selectively cytotoxic toward cancer cells
Huang et al. Synthesis and anti-HIV activity of bi-functional betulinic acid derivatives
Goncalves et al. Synthesis and anticancer activity of novel fluorinated asiatic acid derivatives
Medina-O'Donnell et al. Semi-synthesis and antiproliferative evaluation of PEGylated pentacyclic triterpenes
Yang et al. Synthesis and in vitro antitumor evaluation of betulin acid ester derivatives as novel apoptosis inducers
Wu et al. Synthesis and biological evaluation of podophyllotoxin derivatives as selective antitumor agents
Parra et al. Solution-and solid-phase synthesis and anti-HIV activity of maslinic acid derivatives containing amino acids and peptides
WO2015085447A1 (zh) 新的雷公藤甲素衍生物及其制备方法和用途
WO2013012737A1 (en) New natural and synthetic compounds for treating cancer and other diseases
US10214558B2 (en) Natural and synthetic compounds for treating cancer and other diseases
Soural et al. Preparation of conjugates of cytotoxic lupane triterpenes with biotin
Ramalhete et al. Triterpenoids from Momordica balsamina: Reversal of ABCB1-mediated multidrug resistance
AU2016202477A1 (en) Natural and synthetic compounds for treating cancer and other diseases
Borkova et al. Lupane and 18α-oleanane derivatives substituted in the position 2, their cytotoxicity and influence on cancer cells
Tong et al. The derivatives of Pulsatilla saponin A, a bioactive compound from Pulsatilla chinensis: Their synthesis, cytotoxicity, haemolytic toxicity and mechanism of action
Rathore et al. Cationic lipid-conjugated hydrocortisone as selective antitumor agent
Carrigan et al. The engineering of membrane-permeable peptides
CN104395318A (zh) 一类多氧孕甾烷化合物及用途
Shen et al. Synthesis and structure–activity relationships of boswellic acid derivatives as potent VEGFR-2 inhibitors
Khusnutdinova et al. The synthesis and selective cytotoxicity of new Mannich bases, derivatives of 19-and 28-alkynyltriterpenoids
Yin et al. Synthesis and in vitro/in vivo anticancer evaluation of pentacyclic triterpenoid derivatives linked with l-phenylalanine or l-proline
US9434677B2 (en) Natural and synthetic compounds for treating cancer and other diseases
CZ307227B6 (cs) C-3 biotinylované triterpeny lupanového typu a jejich využití
CN110256522A (zh) 雷公藤红素肉桂酸酯类衍生物及其制备方法与用途

Legal Events

Date Code Title Description
MM4A Patent lapsed due to non-payment of fee

Effective date: 20190810