CZ305571B6 - Deriváty tamoxifenu k léčbě neoplastických chorob, zejména s vyšší hladinou proteinu HER2 - Google Patents
Deriváty tamoxifenu k léčbě neoplastických chorob, zejména s vyšší hladinou proteinu HER2 Download PDFInfo
- Publication number
- CZ305571B6 CZ305571B6 CZ2014-66A CZ201466A CZ305571B6 CZ 305571 B6 CZ305571 B6 CZ 305571B6 CZ 201466 A CZ201466 A CZ 201466A CZ 305571 B6 CZ305571 B6 CZ 305571B6
- Authority
- CZ
- Czechia
- Prior art keywords
- formula
- tamoxifen
- triphenylphosphonium
- treatment
- mixture
- Prior art date
Links
Landscapes
- Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
- Acyclic And Carbocyclic Compounds In Medicinal Compositions (AREA)
Abstract
Předmětem vynálezu je způsob přípravy mitochondriálně cílených E a/nebo Z izomerů přes alifatický řetězec vázaných trifenylfosfoniových derivátů tamoxifenu obecného vzorce I a IA, kde významy obecných substituentů jsou uvedeny v popisné části. Derivát vzorce IA nebo jeho odpovídající sole terciálního aminu. Použití tohoto derivátu pro léčbu nádorů zejména s vyšší hladinou proteinu HER2. Léčivo s jeho obsahem pro léčení neoplastických chorob. Použití derivátu vzorce IA nebo ve směsi s derivátem vzorce I pro léčení neoplastických chorob vybraných ze skupiny astrocytom, neuroblastom, glioblastom, mesotheliom, nádor prostaty, atd.
Description
Deriváty tamoxifenu k léčbě neoplastických chorob, zejména s vyšší hladinou proteinu HER2
Oblast techniky
Vynález se týká nových mitochondriálně cílených derivátů tamoxifenů k léčbě neoplastických chorob, zejména nádorů s vyšší hladinou proteinu HER2 (human epidermal growth factor receptor 2), který ovlivňuje spontánní dělení buněk a růst nádorů.
Dosavadní stav techniky
Současné pokroky v molekulární medicíně vedly k určitému zlepšení v diagnose a léčbě neoplastických chorob. Přes tyto dílčí úspěchy je tato oblast onemocnění stále obrovským problémem. U některých typů nádorových onemocnění dokonce současná léčba selhává z řady důvodů. Jednak je to vrozená rezistence nádorových buněk, jejich schopnost neustále mutovat a léčbě se „vyhnout“, jednak velká heterogenita nádorového prostředí (Hanahan D, Weinberg RA. Hallmarks of cancer: the next generation. Cell 2011; 144:646-674). Bylo ukázáno, že nádory téhož typu se u jednotlivých pacientů velmi liší z hlediska genomického profilu (Jones S et al. Core signaling pathways in human pancreatic cancers revealed by globál genomic analyses. Science 2008;321:1801-1806. Parsons DW et al. An integrated genomic analysis of human glioblastoma multiforme. Science 2008;321:1807-1812), což ukazuje na nutnost tak zvané „personální“ léčby. Ještě větším problémem je heterogeneita mutací v tomtéž nádoru, jak bylo nedávno ukázáno u nádoru ledvin (Gerlinger M et al. Intratumor heterogeneity and branched evolution revealed by multiregion sequencing. N Engl J Med 2012;366:883-892.) a tento jev lze očekávat i u jiných typů nádorů. Proto je nutné hledat nové přístupy a neměnné zásahové místo, které by bylo společné všem či většině maligních buněk v nádoru a které přednostně ovlivňuje zásadní funkce v rakovinných buňkách. Takovým zásahovým místem se jeví mitochondrie, tedy organely, které jsou zásadní pro tvorbu energie nutné pro veškeré fyziologické i patoíyziologické procesy v buňce. Přestože nádorové buňky z velké části pro tvorbu energie využívají tzv. aerobní glykolýzu, mitochondriální respirace (tedy spotřeba kyslíku spojená s tvorbou ATP) je vlastní většině (teoreticky všem) typům nádorů (Ralph SJ et al. The causes of cancer revisited: „mitochondrial malignancy“ and ROS-induced oncogenic transformation - why mitochondria are targets for cancer therapy. Mol Aspects Med 2010;31:145-170.).
Skupina látek s protirakovinnou aktivitou byla definována pod názvem „mitokany“ (odvozeno od „mitochondria and cancer“) (Neužil J et al. Molecular mechanism of „mitocan“-induced apoptosis in cacer cells epitomizes the multiple roles of reactive oxygen species and Bcl-2 family proteins. FEBS Lett 2008;580:5125-5129. Neužil J et al. Classification of mitocans, anti-cancer drugs acting on mitochondria. Mitochondrion 2013;13:199-208.). Tyto látky jsou rozděleny od několika skupin podle jejich mechanismu účinku. Jsou to: 1, Inhibitory hexokinázy; 2. Látky zacílené na proteiny z rodiny Bcl-2; 3. Redox-aktivní látky inhibující thioly; 4. Látky zacílené na proteiny VDAC a ANT; 5. Látky cílící na elektronový redoxní řetězec; 6, Lipofilní látky cílené na vnitřní mitochondriální membránu; 7. Látky cílené na Krebsův cyklus; 8. Látky cílené na mitochondriální DNA. 9 Látky nezařazené do žádné z těchto skupin. Příklady těchto látek a místo jejich působení jsou uvedeny v obrázku 1.
Nádor prsu je velmi těžko léčitelné neoplastické onemocnění postihující v současné době jednu z osmi žen. K léčbě rakoviny prsu se běžně používá tamoxifen (TAX). Pro zhruba 30 % případů této choroby je typická vysoká hladina proteinu HER2, který patří do skupiny receptorových tyrosinových kináz a kteiý zvyšuje proliferační schopnost buněk zvyšující jejich maligní potenciál (Arteaga CL et al. Treatment of HER2-positive breast cancer: current status and future perspectives. Nat Rev Clin Oncol. 2011;9:16-32.). Zavedená léčba, kdy hlavním používaným lékem je TAX je neúčinná, protože jsou vůči ní nádory s vysokou hladinou HER2 resistentní. TAX
- 1 CZ 305571 B6 působí na estrogenní receptory v plazmatické membráně buněk rakoviny prsu, čímž inhibuje důležité procesy pro proliferační vlastnosti rakovinné buňky. V nedávné době bylo publikováno, že TAX při vyšší koncentraci působí nejen přes estrogenní receptor, ale také zasahuje do mitochondriální vnitřní membrány, kde interaguje s komplexem I respiračního řetězce, který je umístěn právě ve vnitřní mitochondriální membráně (Moreira Pl et al. Tamoxifen and estradiol interact with the flavin mononucleotide site of complex I leading to mitochondrial failure. J Biol Chem 2006;281:10143-10152.). K tomuto ovšem dochází při farmakologicky nesnadno dosažitelných dávkách. Navíc lze při těchto vysokých dávkách očekávat zvýšenou toxicitu látky TAX.
Momentálně jsou nádory prsu s vysokou hladinou proteinu HER2 léčeny humanizovanou protilátkou trastuzumab, který inhibuje aktivitu HER2. Tato léčba je ekonomicky velmi náročná a vyznačuje se sekundární toxicitou; navíc významné procento pacientek s vysokou hladinou proteinu HER2 je vůči látce trastuzumab rezistentní (odhaduje se kolem 30 %). Problematická je i nedávno zavedená látka lapatinib, která se vyznačuje inhibici receptorových tyrozinových kináz (Ewer MS, Ewer SM. Cardiotoxicity of anticancer treatments: what the cardiologist needs to know. Nat Rev Cardiol 2010;7:564-575. Lin SX et al. Molecular therapy of breast cancer: progress and future directions. Nat Rev Endocrinol 2010;6:485-493. Ahn ER et al. Is the improved efficacy of trastuzumab and lapatinib combination worth the added toxicity? Breast Cancer 2012;6:191-207.). Problémem je, že lapatinib není specifickým inhibitorem HER2, což může vést k inhibici i dalších receptorových tyrazinových kináz a k sekundární toxicitě a lze předpokládat i reálný vývoj rezistence vůči této léčbě (Wetterskog D et al. Identification of novel determinants of resistance to lapatinib in ERBB2-amplified cancers. Oncogene 2013; 1-11).
CZ patent 304 553 popisuje nové izomery alkyl trifenylfosfoniových derivátů tamoxifenu, obecného vzorce I,
kde n = 8 až 12, a kde Z je vybrané ze skupiny organických solí jako například citrát, acetát, laktát, tartarát, oxalát, askorbát, mesylát, tosylát nebo anorganických solí jako například sulfát, halogenid, fosfát a překřížená vazba v obecném vzorci I, nacházející se v subjednotce tamoxifenu zahrnuje uspořádání dvojné vazby jak v konfiguraci E tak Z, které jsou účinné proti nádorům s vysokou hladinou proteinu HER2, a které cíleně působí přímo na mitochondrie, a které si poradí s výše uvedenými problémy.
Podstata vynálezu
Nyní autoři CZ patentu 304 553 připravili další novou skupinu látek, které jsou účinné proti nádorům s vysokou hladinou proteinu HER2, které cíleně působí přímo na mitochondrie, a které si poradí svýše uvedenými problémy. Jsou to E/Z izomery alkenyl trifenylfosfoniové deriváty tamoxifenu obecného vzorce IA,
-2CZ 305571 B6
kde n = 6 až 10, a Z je vybrané ze skupiny organických solí jako je citrát, acetát, laktát, tartarát, oxalát, askorbát, mesylát, tosylát nebo anorganických solí jako je sulfát, halogenid nebo fosfát a/nebo jejich směsi, a kde překřížená vazba v obecném vzorci IA, nacházející se v subjednotce tamoxifenu zahrnuje uspořádání dvojné vazby v konfiguraci E a/nebo Z, ajejich odpovídající sole terciálního aminu vybrané ze skupiny organických solí jako je citrát, acetát, laktát, tartarát, oxalát, askorbát, mesylát, tosylát nebo anorganických solí jako je sulfát, halogenid nebo fosfát a/nebo jejich směs.
Způsob přípravy alkenyl trifenylfosfoniových derivátů tamoxifenu obecného vzorce IA podle vynálezu spočívá v tom, že se na alkyl bis(trifenylfosfonium) obecného vzorce VIII,
(VIII), kde n = 7 až 11 a X je I, Br, Cl nebo mesyl nebo jejich kombinace, ve směsi tetrahydrofuranu (THF) a dimethylsulfoxidu (DMSO) v atmosféře argonu při pokojové teplotě působí organickou bází (s výhodou lithium hexamethyldisilazanem). Vzniklý ylid se následně kondenzuje s aldehydem vzorce III
za vzniku alkenyl trifenylfosfoniových derivátů tamoxifenu obecného vzorce IA.
Alkyl bis(trifenyl fosfonium) obecného vzorce VIII se připraví reakcí příslušného alkylu s trifenyl fosfinem za zvýšené teploty.
Autoři dále vylepšili způsob přípravy alkyl trifenylfosfoniových derivátů tamoxifenu obecného vzorce I, ajejich odpovídajících solí terciálního aminu, vybraných ze skupiny organických solí
-3CZ 305571 B6 jako například citrát, acetát, laktát, tartarát, oxalát, askorbát, mesylát, tosylát nebo anorganických solí jako například sulfát, halogenid, fosfát a/nebo jejich směs, který podle tohoto vynálezu spočívá v tom, že se na aldehyd III působí (hydroxyalkyljtrifenylfosfonium bromidem v přítomnosti báze (s výhodou lithium hexamethyldisilazanem) při pokojové teplotě a při použití směsi THF a dimethylsulfoxidu (DMSO), která zvýší rozpustnost (hydroxyalkyl)trifenylfosfonium bromidu, za vzniku alkenolu obecného vzorce V,
(V), ío kde n = 5 až 9.
Jeho syntéza se tím oproti dříve navrženému postupu v patentu CZ 304 553 výrazně zkrátí a zlevní.
Alkenol obecného vzorce V se dále podle CZ patentu 304 553 v atmosféře vodíku a v přítomnosti katalyzátoru redukuje na alkohol obecného vzorce VI,
kde n = 5 až 9, alkohol obecného vzorce VI se substitucí převede na příslušný derivát obecného vzorce VII,
(VII), kde n = 5 až 9 a Xje I, Br, Cl nebo mesyl, který se zahříváním s trifenyl fosfmem převede na mitochondriálně cílený alkyl trifenylfosfoniový derivát tamoxifenu obecného vzorce I,
-4CZ 305571 B6
(I), kde n = 8 až 12 a Z je citrát, acetát, laktát, tartarát, oxalát, askorbát, mesylát, tosylát nebo anorganická sůl jako například sulfát, halogenid, fosfát a/nebo jejich směs a překřížená vazba v obecném vzorci I, nacházející se v subjednotce tamoxifenu zahrnuje uspořádání dvojné vazby jak v konfiguraci E tak Z.
V případě použití alkenolu obecného vzorce V ve formě sole terciálního dusíku se zvýší výtěžek dalším výše uvedeným postupem získaného alkoholu obecného vzorce VI, ze kterého lze bez izolace látky obecného vzorce VII získat příslušnou sůl terciálního aminu trifenylfosfoniového derivátu tamoxifenu obecného vzorce I.
Kationická skupina trifenylfosfina (TPP+) umožňuje interakci alkyl nebo alkenyl trifenylfosfoniového derivátu tamoxifenu látky obecného vzorce I nebo IA s mitochondriemi. Tyto látky, které dále nazýváme MitoTAX byly připraveny adicí kationické skupiny alkyl-TPP+ k látce TAX. V biologickém prostředí je pozitivní náboj na fosforu TPP+ skupiny delokalizován, takže látka se chová neutrálně. Jedinou výjimkou jsou buněčné struktury s negativním potenciálem, což je vnitřní povrch plazmatické (buněčné) membrány a již výše zmíněná vnitřní mitochondriální membrána. V jejich blízkosti se náboj lokalizuje na fosforu a pozitivně nabitá TPP+ skupina působí jako kotva, způsobující masivní koncentraci alkyl nebo alkenyl trifenylfosfoniového derivátu tamoxifenu obecného vzorce I nebo IA (MitoTAX) na interfázi mitochondriální matrix a vnitřní membrány mitochondrie.
Část molekuly MitoTAXu, na jejímž konci je skupina TPP+, je orientována do mitochondriální matrix, přičemž biologicky aktivní část je ve vnitřní mitochondriální membráně, kde je lokalizováno molekulární zásahové místo látky MitoTAX, jímž je mitochondriální komplex I. Pro fyzickou interakci biologicky aktivní části MitoTAXu, s mitochondriálním komplexem I, který je součástí vnitřní mitochondriální membrány, je nutné, aby mezi biologicky aktivní částí molekuly MitoTAXu a TPP+ skupinou byl alifatický řetězec o určité délce, zdá se, že není podstatné zda alifatický řetězec je alkyl nebo alkenyl- viz příklad 24. Z hlediska biologických a fyzikálněchemických vlastností mitochondriální membrány se jako ideální jeví délka alifatického řetězce o délce 8 až 12 uhlíků.
MitoTAX je výrazně účinnější při zabíjení buněk nádoru prsu než původní TAX. Dalším velmi významným zjištěním je poznatek, že MitoTAX účinněji zabíjí buňky rakoviny prsu s vysokou expresí proteinu HER2 než buňky s nízkou expresí proteinu HER2. U TAXu je tomu přesně naopak, proto je klinicky vůči rakovině prsu s vysokým HER2 neúčinný. Důvodem zvýšené citlivosti látky MitoTAX vůči buňkám nádoru prsu s vysokou hladinou proteinu HER2 tkví pravděpodobně v lokalizaci tohoto proteinu HER2 také v mitochondriích, přičemž u buněk s nižší či velmi nízkou expresí HER2 je tento onkoprotein lokalizován v plazmatické membráně nádorové buňky.
Látka trastuzumab, která je používána k léčbě rakoviny prsu s vysokou hladinou proteinu HER2, je v řadě případů neúčinná. Pravděpodobným důvodem je skutečnost, že v případě vysoké hladiny proteinu HER2 je jeho značná část lokalizovaná v mitochondriích a při působení látky trastu-5CZ 305571 B6 zumab na nádorovou buňku se protein HER2 tím více přesouvá do mitochondrií. Rakovinná buňka tak „skrývá“ HER2 před látkou trastuzumab, který inhibuje jeho aktivitu. Mitochondriální asociace HER2 také mění mitochondriální metabolismus tak, že rakovinná buňka přechází na glykolýzu a lépe přežívá v prostředí chudém na živiny a kyslík.
Na rozdíl od látky trastuzumab MitoTAX vstupuje do buňky a akumuluje se v mitochondriích na základě negativního potenciálu na vnitřním povrchu vnitřní mitochondriální membrány. Buňky rakoviny prsu s vysokou hladinou proteinu HER2, v mnoha případech rezistentní k látce trastuzumab, jsou vůči látce MitoTAX citlivější.
Důležitou vlastností MitoTAXu, je účinná inhibice růstu spontánního nádoru prsu s vysokým HER2 v myším modelu, kdy je růst inhibován asi z 90 %, přičemž účinnost látky TAX je zhruba 20- až 30krát nižší. MitoTAX je vůči myším netoxický.
Nádory prsu jsou heterogenní z hlediska exprese proteinů HER2. Lze očekávat, že pouze část nádoru bude odpovídat na léčbu látkou trastuzumab, přičemž MitoTAX bude účinný. Zabíjí buňky jak s nízkou tak i s vysokou expresí proteinu HER2.
Jako mitokan, který působí na mitochondriální komplex 11 byl popsán vitamin E sukcinát (Dong LF et al. α-Tocopheryl succinate induces apoptosis by targeting ubiquinone-binding sites in mitochondrial respirátory complex II. Oncogene 2008;27:4324-4335. Dong LF et al. Suppression of tumour growth in vivo by the mitocan α-tocopheryl succinate requires respirátory complex II. Clin Cancer Res 2009;15:1593-1600.). V nedávné době jsme připravili a testovali látku, která vznikla adicí TPP+ skupiny k vitamin E sukcinátu. Tato nová látka cílí na stejné molekulární zásahové místo, jeho aktivita je ale vyšší než aktivita původního vitamin E sukcinátu díky zvýšené koncentraci této látky na interfázi vnitřní mitochondriální membrány a mitochondriální matrix. (Dong LF et al. Mitochondrial targeting of vitamin E succinate enhances its pro-apoptotic and anti-cancer activity via mitochondrial complex II. J Biol Chem 2011;286:3717-3728. Dong LF et al. Mitochondrial targeting of α-tocopheryl succinate enhances its pro-apoptotic efficacy: A new paradigm of efficient anti-cancer therapy. Free Radíc Biol Med 2011 ;50:1546—1555. Rohlena J et al Mitochondrially targeted α-tocopheryl succinate is antiangiogenic: Potential benefit against tumor angiogenesis but caution against wound healing. Antiox Redox Signál 2011; 15:2923-2935.). Podobně jako vitamin E sukcinát s adicí TPP+ skupiny se i látka MitoTax zvýšenou měrou akumuluje na interfázi vnitřní mitochondriální membrány a mitochondriální matrix. MitoTAX podle předkládaného vynálezu však zasahuje do mitochondriálního komplexu I, čímž se mění jeho spektrum účinků oproti TAX, který působí převážně na estrogenní receptory v plazmatické membráně buněk rakoviny prsu, čímž inhibuje jejich aktivitu důležitou pro proliferační vlastnosti rakovinné buňky.
MitoTAX obecného vzorce IA stejně jako obecného vzorce 1 se akumuluje v mitochondriích, vyvolává buněčnou smrt selektivně v rakovinných buňkách, jejichž mitochondrie mají vyšší negativní potenciál ve srovnání s mitochondriemi normálních buněk. Zabíjí velmi účinně buňky rakoviny prsu s vysokým HER2 aje účinný proti rakovině prsu s vysokým HER2, kdy cílovým místem pro MitoTAX je mitochondriální komplex I (viz Obr. 1).
MitoTax lze použít k přípravě léčiva pro léčbu neoplastických chorob, zejména karcinomů, sarkomů, lymfomů a leukémií, pro onemocnění vybraná ze skupiny:
astrocytom, neuroblastom, glioblastom, mesotheliom, nádor prostaty, nemalobuněčný nádor plic, nádor děložního čípku, osteosarkoma, kolorektální nádor, hepatokarcinoma, leukémie.
Seznam použitých zkratek:
DCM dichlormethan
DMSO dimethylsulfoxid
ERa estrogenní receptor-a
-6CZ 305571 B6
ESI MShmotnostní spektrometrie s ionizací elektron sprejem HER2 human epidermal growth factor receptor 2
LiHMDS lithium hexamethyldisilazan
MitoTAX mitochondriálně cílený tamoxifen
NMR nukleární magnetická rezonance
TAX tamoxifen
THF tetrahydrofuran
TLC chromatografie na tenké vrstvě
Objasnění výkresů
Obr. 1 znázorňuje klasifikaci jednotlivých tříd mitokanů, potenciálně protirakovinných látek působících na mitochondrie.
Obr. 2 znázorňuje vliv účinků různých derivátů MitoTAXu na apoptózu rakovinných buněk MCF7 (A) a MCF7 HER2+ (B).
Příklady uskutečnění vynálezu
Příklad 21
Látku vzorce V lze získat přímo z látky vzorce III reakcí s (9-hydroxynonyl)trifenylfosfonium bromidem místo s (9-((tert-butyldimethylsilyl)oxy)nonyl)trifenylfosfonium bromidem. Syntéza se proti CZ patentu 304 553 zkrátí a zlevní. Hlavní změnou je použití směsi THF a DMSO, čímž se zvýší rozpustnost a reakci lze provést přímo s (9-hydroxynonyl)trifenylfosfonium bromidem, což bylo v samotném THF nemožné. Postup je proveden za pokojové teploty místo -78 °C. Výrazně se také zkrátí celkový čas přípravy požadované látky.
Příprava látky vzorce 5
(9-hydroxynonyl)trifenylfosfonium bromid (3,920 g, 8,082 mmol) se rozpustí v DMSO (10 ml) a poté se přidá THF (30 ml). Do reakční směsi se po dobu 3 minut přikapává roztok LiHMDS (14,800 ml, 1M v THF). Barva reakční směsi se změní na výrazně oranžovou. Poté se do reakční směsi přikape roztok aldehydu vzorce III (1,000 g, 2,694 mmol) v THF (15 ml) a reakce se nadále míchá po dalších deset minut při laboratorní teplotě. Průběh reakce se monitoruje pomocí TLC ve směsi chloroform - methanol (10:1). Reakční směs se nalije do studeného nasyceného roztoku chloridu amonného (100 ml) a extrahuje se diethylétherem (5x 100 ml). Spojené organické vrstvy se suší nad síranem hořečnatým. Sušidlo se zfiltruje a produkt se zakoncentruje pod vakuem. Surový materiál se rozpustí v diethylétheru (10 ml) a po kapkách se přidá nasycený étherový roztok HC1 (5 ml). Precipitovaný produkt se zfiltruje a extrahuje roztokem NaOH (5 ml, 1M) a diethylétherem (25 ml). Organická vrstva se suší nad síranem hořečnatým. Sušidlo se zfiltruje a
-7CZ 305571 B6 produkt se zakoncentruje pod vakuem. Tímto postupem, se získá 1,102 g (82 %) produktu vzorce 5 ve formě slabě nažloutlého oleje, který je tak připraven pro další reakce.
Příklad 22
V případě použití alkenolu vzorce 5 ve formě sole terciálního dusíku se redukcí získá alkohol vzorce 6,
ze kterého lze bez izolace jednotlivých stupňů získat příslušnou sůl terciálního aminu trifenylfosfoniového derivátu tamoxifenu vzorce 9a. Zvýší se výtěžek a zkrátí se doba přípravy proti CZ patentu 304 553.
Příprava látky vzorce 9a
K alkoholu vzorce 6 (300 mg, 0,600 mmol) rozpuštěnému v diethylétheru (6 ml) se přidá nasycený étherový roztok HC1 (6 ml), směs se zakoncentruje pod vakuem a znovu rozpustí v DCM (6 ml). K reakční směsi se přidá CBr4 (298 mg, 0,901 mmol) a po jeho úplném rozpuštění se přidá ještě trifenylfosfin (252 mg, 960 mmol). Reakce se ukončí za 5 minut přidáním methanolu (1 ml) a nasyceného étherového roztoku HC1 (3 ml). Roztok se zakoncentruje pod vakuem a přidá se trifenylfosfin (2,000 g, 7,625 mmol). Reakční směs se míchá přes noc při teplotě 100 °C. Směs se zchladí na pokojovou teplotu a rozpustí se v DCM (10 ml). Roztok se za stálého míchání přikape do ledovou lázní chlazeného roztoku diethylétheru (100 ml). Vzniklý precipitát se zfiltruje a usuší pod vakuem. Takto se získá 334 mg (74 %) produktu vzorce 9a ve formě bílé slabě olejovité pevné látky. Produkt může být přečištěn opakovaným rozpuštěním v DCM (2 ml) a následným vysrážením v diethylétheru (20 ml).
(9a),
Příklad 23
Příprava látky vzorce 11 - isomemího decenyl trifenylfosfoniového derivátu tamoxifenu
Nonan-l,9-diylbis(trifenylfosfonium)bromid se připraví působením trifenylfosfinu na 1,9—dibromnonan v roztoku dimethylformamidu při teplotě 100 °C po dobu 16 hodin a následnou krystalizací z ethylacetátu.
-8CZ 305571 B6
Nonan-l,9-diylbis(trifenylfosfonium)bromid (545 mg, 674 mmol) se rozpustí v DMSO (1 ml) a poté se přidá THF (3 ml). Do reakční směsi se po dobu 3 minut přikapává roztok LiHMDS (670 μΐ, 1M v THF). Barva reakční směsi se změní na výrazně oranžovou. Poté se do reakční směsi přikape roztok aldehydu vzorce III (100 g, 2,269 mmol) v THF (1 ml) a reakce se nadále míchá po dalších deset minut při pokojové teplotě. Průběh reakce se monitoruje pomocí TLC ve směsi chloroform - methanol (10:1). Reakční směs se nalije do studeného nasyceného roztoku chloridu amonného (10 ml) a extrahuje se dichlormethanem (5x 20 ml). Spojené organické vrstvy se suší nad síranem hořečnatým. Sušidlo se zfiltruje a produkt se zakoncentruje pod vakuem. Chromatografií koncentrátu na sloupci silikagelu v systému chloroform/metanol (gradient 0 až 10 %) se získá 56 mg (30 %) požadovaného produktu vzorce 11.
6,72 (d, J = 8,3 Hz, 2H), 6,53 (d, J = 8,3 Hz, 2H), 6,00 (d, J= 11,5 Hz, 1H), 5,26 (dt, J= 11,5, 7,4 Hz, 1H), 4,02 (t, J= 4,8 Hz, 1H), 3,80 - 3,53 (m, 2H), 2,88 (t, J= 5,3 Hz, 2H), 2,42 (s, 6H), 2,06 - 1,79 (m, 2H), 1,64 - 1,36 (m, 4H), 1,38 - 1,05 (m, 4H), 1,06 - 0,73 (m, 4H). ESI MS: 742.
Biologické srovnávací testy mitochondriálně cíleného alkyl a alkenyl trifenylfosfoniového derivátu tamoxifenu (MitoTAX).
Příklad 24
Na obr. 2 je znázorněn účinek alkyl a alkenyl trifenylfosfoniových derivátů MitoTAXu, jak je ukázáno v Tabulce 3, na apoptózu buněk rakoviny prsu MCF7 (A) a sublinie buněk MCF7 se zvýšenou hladinou proteinu HER2 (B). Procento apoptotických buněk bylo stanoveno na základě barvení indikátoru apoptózy annexinu V metodou průtokové cytometrie. Buňky MCF7 a MCF7 HER2+ byly vystaveny jednotlivým derivátům MitoTAXu v koncentraci 2μΜ po dobu 24 hodin. Sloupec „CTRL“ označuje procento apoptotických buněk v populaci buněk bez přidání testovaných látek a odpovídá tak bazální hladině apoptózy v testovaných liniích. Všechny testované deriváty MitoTAXu vyvolávají apoptózu.
-9CZ 305571 B6
Tabulka 3
| Látka vzorce 9 | /°\ | 0 | ox | y BrAs | ||
| HBr | Π | |||||
| Pl i | f | \ | ||||
| l | ||||||
| Látka vzorce 9a | ||||||
| A | 0 X | |||||
| M | ||||||
| HCI | Π | |||||
| Π V | f | 1 | ||||
| l | Br- | |||||
| Látka vzorce 9b | r\X* | %| | ||||
| A | 0 x | |||||
| P | ||||||
| χΟ | ιΊ T | f | \ | |||
| Látka vzorce 10 | S I- | |||||
| A | 0 | |||||
| M | ||||||
| Hl | P | |||||
| P 1 | f | 1 | ||||
| 1 | A | Λ | ||||
| Látka vzorce 10a | PP H | |||||
| řii | 0 | |||||
| /% | ||||||
| A T | ||||||
| Látka vzorce 11 | P+ ΒΓ | |||||
| A | v | |||||
-10CZ 305571 B6
Závěrem lze říci, že jsme připravili zcela nové látky, které vycházejí z látky TAX, což je běžně používané terapeutikum k léčbě rakoviny prsu, onemocnění, které je na vzestupu (DeSantis C et al. Breast cancer statistics, 2011. CA Cancer J Clin 2011;1:409-4018.). Výše popsané alkyl a alkenyl trifenylfosfoniové deriváty tamoxifenu (MitoTAX) dle vynálezu se přednostně akumulují v mitochondriích, kde je jejich zásahové místo komplex I. Interakcí MitoTaxu s komplexem I dojde k přerušení toku elektronů, které reagují s molekulárním kyslíkem. Tím dojde ke vzniku kyslíkových radikálů, které pak vyvolají buněčnou smrt.MitoTAX je účinný vůči nádorům prsu s nízkou i vysokou hladinou proteinu HER2, který velmi komplikuje dosavadní způsoby léčby. MitoTAX může doplnit či nahradit v léčbě nádorů jak látku TAX tak i látku trastuzumab.
Průmyslová využitelnost
Nové deriváty tamoxifenu, obecného vzorce I a IA podle vynálezu jsou využitelné k léčbě rakoviny ve zdravotnictví a ve farmaceutickém průmyslu k přípravě léků pro léčbu rakoviny.
Claims (8)
- PATENTOVÉ NÁROKY1. Způsob přípravy mitochondriálně cílených E a/nebo Z izomerů přes alifatický řetězec vázaných trifenylfosfoniových derivátů tamoxifenu obecného vzorce I kde n = 8 až 12, a obecného vzorce IA kde n = 6 až 10, a Z je vybrané ze skupiny organických solí jako je citrát, acetát, laktát, tartarát, oxalát, askorbát, mesylát, tosylát nebo anorganických solí jako je sulfát, halogenid nebo fosfát a/nebo jejich směs, a kde překřížená vazba v obecném vzorci I a IA, nacházející se v subjednotce tamoxifenu zahrnuje uspořádání dvojné vazby v konfiguraci E a/nebo Z,- 11 CZ 305571 B6 a jejich odpovídající sole terciálního aminu vybrané ze skupiny organických solí jako je citrát, acetát, laktát, tartarát, oxalát, askorbát, mesylát, tosylát nebo anorganických solí jako je sulfát, halogenid nebo fosfát a/nebo jejich směs, vyznačující se tím, že se na aldehyd vzorce III působí (hydroxyalkyl)trifenylfosfonium bromidem a bází při pokojové teplotě ve směsi tetrahydrofuranu a dimethylsulfoxidu, za vzniku alkenolu obecného vzorce (V) kde n = 5 až 9, který se dále v atmosféře vodíku v přítomnosti katalyzátoru redukuje na alkohol, který se působením CBr4 a trifenylfosfinu převede na alkyl trifenylfosfoniový derivát tamoxifenu obecného vzorce I, nebo se aldehyd vzorce III kondenzuje s ylidem, který se připraví působením organické báze na alkyl bis(trifenylfosfonium) obecného vzorce VIII (VIII), kde n = 7 až 11 a Xje I, Br, Cl nebo mesyl nebo jejich kombinace, ve směsi tetrahydrofuranu a dimethylsulfoxidu v atmosféře argonu při pokojové teplotě, výsledkem kondenzace aldehydu vzorce III s ylidem je alkenyl trifenylfosfoniový derivát tamoxifenu obecného vzorce IA.
- 2. Mitochondriálně cílený E a/nebo Z izomer přes alifatický řetězec vázaných trifenylfosfoniových derivátů tamoxifenu obecného vzorce IA- 12CZ 305571 B6 a Z je vybrané ze skupiny organických solí jako je citrát, acetát, laktát, tartarát, oxalát, askorbát, mesylát, tosylát nebo anorganických solí jako například sulfát, halogenid nebo fosfát a/nebo jejich směs, a kde překřížená vazba v obecném vzorci IA, nacházející se v subjednotce tamoxifenu zahrnuje uspořádání dvojné vazby v konfiguraci E a/nebo Z, a jejich odpovídající sole terciálního aminu vybrané ze skupiny organických solí jako je citrát, acetát, laktát, tartarát, oxalát, askorbát, mesylát, tosylát nebo anorganických solí jako je sulfát, halogenid nebo fosfát a/nebo jejich směs.
- 3. Použití mitochondriálně cílených E a/nebo Z izomerů alkenyl trifenylfosfoniového derivátu tamoxifenu obecného vzorce IA podle nároku 2, nebo jejich směsi s alkyl trifenylfosfoniovými deriváty tamoxifenu obecného vzorce I k přípravě léčiva pro léčbu neoplastických chorob.
- 4. Použití podle nároku 3 k přípravě léčiva pro léčbu karcinomů, sarkomů, lymfomů a leukémií.
- 5. Použití podle nároku 3 k přípravě léčiva pro léčbu nádorových onemocnění vybraných ze skupiny: astrocytom, neuroblastom, glioblastom, mesotheliom, nádor prostaty, nemalobuněčný nádor plic, nádor děložního čípku, osteosarkoma, kolorektální nádor, hepatokarcinoma, leukémie.
- 6. Použití mitochondriálně cílených E/Z izomerů alkenyl trifenylfosfoniových derivátů tamoxifenu obecného vzorce IA podle nároku 2, nebo jejich směsi s alkyl trifenylfosfoniovými deriváty tamoxifenu obecného vzorce I k přípravě léčiva pro zabíjení rakovinných buněk v různých oblastech nádoru prsu bez ohledu na rozdílnou hladinu proteinů jako jsou HER2, ERa, GATA3 či KÍ67.
- 7. Léčivo pro léčení neoplastických chorob, vyznačující se tím, že obsahuje nejméně jeden E/Z izomer alifatického trifenylfosfoniového derivátu tamoxifenu obecného vzorce IA, podle nároku 2.
- 8. Léčivo podle nároku 7, v y z n a č u j í c í se t í m , že neoplastickou chorobou je rakovina s nízkou a/nebo vysokou hladinou proteinu HER2 v nádorových buňkách jiných než jsou nádory prsu.
Priority Applications (23)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CZ2014-66A CZ305571B6 (cs) | 2014-01-29 | 2014-01-29 | Deriváty tamoxifenu k léčbě neoplastických chorob, zejména s vyšší hladinou proteinu HER2 |
| DK14721738.4T DK2989110T3 (en) | 2013-04-24 | 2014-04-07 | Tamoxifen derivatives for the treatment of neoplastic diseases, especially with high HER2 protein levels |
| PT14721738T PT2989110T (pt) | 2013-04-24 | 2014-04-07 | Derivados de tamoxifeno para o tratamento de doenças neoplásicas, especialmente com nível elevado de proteína her2 |
| CN201480033316.9A CN105452265B (zh) | 2013-04-24 | 2014-04-07 | 用于治疗肿瘤性疾病尤其具有高her2蛋白水平的肿瘤性疾病的他莫昔芬衍生物 |
| SI201430928T SI2989110T1 (sl) | 2013-04-24 | 2014-04-07 | Derivati tamoksifena za zdravljenje neoplastičnih bolezni, predvsem z višjo stopnjo proteina HER2 |
| ES14721738T ES2699099T3 (es) | 2013-04-24 | 2014-04-07 | Derivados de tamoxifeno para el tratamiento de enfermedades neoplásicas, especialmente con alto nivel de proteína HER2 |
| PCT/CZ2014/000035 WO2014173374A1 (en) | 2013-04-24 | 2014-04-07 | Tamoxifen derivatives for treatment of neoplastic diseases, especially with high her2 protein level |
| CA2909994A CA2909994C (en) | 2013-04-24 | 2014-04-07 | Tamoxifen derivatives for treatment of neoplastic diseases, especially with high her2 protein level |
| EA201591918A EA029881B1 (ru) | 2013-04-24 | 2014-04-07 | Производные тамоксифена для лечения новообразований, особенно с высоким уровнем белка her2 |
| NZ713589A NZ713589A (en) | 2013-04-24 | 2014-04-07 | Tamoxifen derivatives for treatment of neoplastic diseases, especially with high her2 protein level |
| EP14721738.4A EP2989110B1 (en) | 2013-04-24 | 2014-04-07 | Tamoxifen derivatives for treatment of neoplastic diseases, especially with high her2 protein level |
| US14/786,710 US9896466B2 (en) | 2013-04-24 | 2014-04-07 | Tamoxifen derivatives for treatment of neoplastic diseases, especially with high HER2 protein level |
| UAA201510642A UA116469C2 (uk) | 2013-04-24 | 2014-04-07 | Похідні тамоксифену для лікування новоутворень, особливо з високим рівнем білка her2 |
| PL14721738T PL2989110T3 (pl) | 2013-04-24 | 2014-04-07 | Derywaty tamoxyfenu do leczenia chorób nowotworowych, szczególnie z wyższym poziomem białka her2 |
| MD20150117A MD4626C1 (ro) | 2013-04-24 | 2014-04-07 | Derivaţi de tamoxifen pentru tratamentul afecţiunilor neoplazice, în special cu nivel înalt de proteină HER2 |
| AU2014256546A AU2014256546B2 (en) | 2013-04-24 | 2014-04-07 | Tamoxifen derivatives for treatment of neoplastic diseases, especially with high HER2 protein level |
| KR1020157030376A KR101764991B1 (ko) | 2013-04-24 | 2014-04-07 | 특히 높은 her2 단백질 농도를 갖는 신생물성 질환의 치료를 위한 타목시펜 유도체 |
| HUE14721738A HUE042239T2 (hu) | 2013-04-24 | 2014-04-07 | Tamoxifen deriváltok neoplasztikus betegségek gyógyításához, fõként magasabb HER2 proteinszinttel |
| JP2016509298A JP6375091B2 (ja) | 2013-04-24 | 2014-04-07 | 腫瘍性疾患であって特に高ｈｅｒ２タンパク質レベルの腫瘍性疾患を治療するためのタモキシフェン誘導体 |
| GEAP201513996A GEP20186868B (en) | 2013-04-24 | 2015-04-07 | Tamoxifen derivatives for treatment of neoplastic diseases, especially with high her2 protein level |
| HK16104277.8A HK1216317A1 (zh) | 2013-04-24 | 2016-04-14 | 用於治療腫瘤性疾病尤其具有高 蛋白水平的腫瘤性疾病的他莫昔芬衍生物 |
| CY181101155T CY1120821T1 (el) | 2013-04-24 | 2018-11-06 | Παραγωγα ταμοξιφαινης για θεραπεια νεοπλασματικων ασθενειων, ειδικα με υψηλο επιπεδο πρωτεϊνης her2 |
| HRP20181872TT HRP20181872T1 (hr) | 2013-04-24 | 2018-11-08 | Derivati tamoksifena za liječenje neoplastičnih bolesti, posebice s višom razinom proteina her2 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CZ2014-66A CZ305571B6 (cs) | 2014-01-29 | 2014-01-29 | Deriváty tamoxifenu k léčbě neoplastických chorob, zejména s vyšší hladinou proteinu HER2 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CZ201466A3 CZ201466A3 (cs) | 2015-08-05 |
| CZ305571B6 true CZ305571B6 (cs) | 2015-12-16 |
Family
ID=53838115
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CZ2014-66A CZ305571B6 (cs) | 2013-04-24 | 2014-01-29 | Deriváty tamoxifenu k léčbě neoplastických chorob, zejména s vyšší hladinou proteinu HER2 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| CZ (1) | CZ305571B6 (cs) |
Citations (6)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO1992006068A1 (en) * | 1990-10-01 | 1992-04-16 | Board Of Regents, The University Of Texas System | High affinity tamoxifen derivatives and uses thereof |
| EP0702961A2 (en) * | 1994-09-20 | 1996-03-27 | Eli Lilly And Company | Compositions for minimizing the uterotrophic effect of tamoxifen and its analogs |
| WO2001083971A1 (de) * | 2000-05-03 | 2001-11-08 | Robert Bosch Gmbh | Verfahren und vorrichtung zur überwachung eines kraftstoffzumess-systems einer brennkraftmaschine |
| US20070270381A1 (en) * | 2000-05-25 | 2007-11-22 | Antipodean Pharmaceuticals, Inc. | Mitochondrially targeted antioxidants |
| US20090220419A1 (en) * | 2008-02-29 | 2009-09-03 | Marcos Lopez | 99mTc-LABELED TRIPHENYLPHOSPHONIUM DERIVATIVE CONTRASTING AGENTS AND MOLECULAR PROBES FOR EARLY DETECTION AND IMAGING OF BREAST TUMORS |
| CZ2013308A3 (cs) * | 2013-04-24 | 2014-07-02 | Smart Brain s.r.o. | Deriváty tamoxifenu účinné proti nádorům, zejména s vyšší hladinou proteinu HER2 |
-
2014
- 2014-01-29 CZ CZ2014-66A patent/CZ305571B6/cs unknown
Patent Citations (6)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO1992006068A1 (en) * | 1990-10-01 | 1992-04-16 | Board Of Regents, The University Of Texas System | High affinity tamoxifen derivatives and uses thereof |
| EP0702961A2 (en) * | 1994-09-20 | 1996-03-27 | Eli Lilly And Company | Compositions for minimizing the uterotrophic effect of tamoxifen and its analogs |
| WO2001083971A1 (de) * | 2000-05-03 | 2001-11-08 | Robert Bosch Gmbh | Verfahren und vorrichtung zur überwachung eines kraftstoffzumess-systems einer brennkraftmaschine |
| US20070270381A1 (en) * | 2000-05-25 | 2007-11-22 | Antipodean Pharmaceuticals, Inc. | Mitochondrially targeted antioxidants |
| US20090220419A1 (en) * | 2008-02-29 | 2009-09-03 | Marcos Lopez | 99mTc-LABELED TRIPHENYLPHOSPHONIUM DERIVATIVE CONTRASTING AGENTS AND MOLECULAR PROBES FOR EARLY DETECTION AND IMAGING OF BREAST TUMORS |
| CZ2013308A3 (cs) * | 2013-04-24 | 2014-07-02 | Smart Brain s.r.o. | Deriváty tamoxifenu účinné proti nádorům, zejména s vyšší hladinou proteinu HER2 |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| CZ201466A3 (cs) | 2015-08-05 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| EP2989110B1 (en) | Tamoxifen derivatives for treatment of neoplastic diseases, especially with high her2 protein level | |
| Hearn et al. | Organometallic iridium (III) anticancer complexes with new mechanisms of action: NCI-60 screening, mitochondrial targeting, and apoptosis | |
| Jaouen et al. | Ferrocifen type anti cancer drugs | |
| Burmaoglu et al. | Synthesis, biological evaluation and molecular docking studies of bis-chalcone derivatives as xanthine oxidase inhibitors and anticancer agents | |
| Gumus et al. | Synthesis, cytotoxicity, and DNA interactions of new cisplatin analogues containing substituted benzimidazole ligands | |
| Qin et al. | Novel tacrine platinum (II) complexes display high anticancer activity via inhibition of telomerase activity, dysfunction of mitochondria, and activation of the p53 signaling pathway | |
| Lopes-Rodrigues et al. | A novel curcumin derivative which inhibits P-glycoprotein, arrests cell cycle and induces apoptosis in multidrug resistance cells | |
| JP2016522179A5 (cs) | ||
| Ortega-Forte et al. | COUPY coumarins as novel mitochondria-targeted photodynamic therapy anticancer agents | |
| Luo et al. | Novel SERMs based on 3-aryl-4-aryloxy-2H-chromen-2-one skeleton-A possible way to dual ERα/VEGFR-2 ligands for treatment of breast cancer | |
| Talhi et al. | Bis (4-hydroxy-2H-chromen-2-one): Synthesis and effects on leukemic cell lines proliferation and NF-κB regulation | |
| Gibadullina et al. | New 2, 6-diaminopyridines containing a sterically hindered benzylphosphonate moiety in the aromatic core as potential antioxidant and anti-cancer drugs | |
| Roy et al. | Synthesis, inverse docking-assisted identification and in vitro biological characterization of Flavonol-based analogs of fisetin as c-Kit, CDK2 and mTOR inhibitors against melanoma and non-melanoma skin cancers | |
| Chipoline et al. | Molecular mechanism of action of new 1, 4-naphthoquinones tethered to 1, 2, 3-1H-triazoles with cytotoxic and selective effect against oral squamous cell carcinoma | |
| Gariganti et al. | Design, synthesis, anticancer activity of new amide derivatives derived from 1, 2, 3-triazole-benzofuran hybrids: An insights from molecular docking, molecular dynamics simulation and DFT studies | |
| Liu et al. | Design and biological features of platinum (II) complexes with 3-hydroxy-3-(Trifluoromethyl) cyclobutane-1, 1-Dicarboxylate as a leaving ligand | |
| US6248305B1 (en) | Boron heterocycle steroid mimics and associated pharmaceutical compositions and methods of use | |
| CN104592091B (zh) | 一种含吲哚乙酸核心结构的化合物及其应用 | |
| El-Kardocy et al. | Aryl azide-sulfonamide hybrids induce cellular apoptosis: synthesis and preliminary screening of their cytotoxicity in human HCT116 and A549 cancer cell lines | |
| CZ305571B6 (cs) | Deriváty tamoxifenu k léčbě neoplastických chorob, zejména s vyšší hladinou proteinu HER2 | |
| CZ304553B6 (cs) | Deriváty tamoxifenu účinné proti nádorům, zejména s vyšší hladinou proteinu HER2 | |
| Yang et al. | In vitro and in vivo antitumor activities of Ru and Cu complexes with terpyridine derivatives as ligands | |
| AU2013331764B2 (en) | N-substituted 3,4-bis (catechol) pyrrole compounds, and the preparation and use thereof in the treatment of cancer | |
| Zhang et al. | Design, synthesis and biological evaluation of bakuchiol derivatives as multi-target agents for the treatment of Alzheimer's disease | |
| Adegbulugbe | Synthesis and evaluation of tetramethoxy stilbenes related to combretastatin A-4 as potential anticancer agents |