CZ30206U1 - Kit pro stanovení vazebné kapacity krevního séra pro měď a analytická sada jej obsahující - Google Patents
Kit pro stanovení vazebné kapacity krevního séra pro měď a analytická sada jej obsahující Download PDFInfo
- Publication number
- CZ30206U1 CZ30206U1 CZ2016-32875U CZ201632875U CZ30206U1 CZ 30206 U1 CZ30206 U1 CZ 30206U1 CZ 201632875 U CZ201632875 U CZ 201632875U CZ 30206 U1 CZ30206 U1 CZ 30206U1
- Authority
- CZ
- Czechia
- Prior art keywords
- mixture
- copper
- kit
- mol
- binding capacity
- Prior art date
Links
- 239000010949 copper Substances 0.000 title claims description 47
- 229910052802 copper Inorganic materials 0.000 title claims description 42
- RYGMFSIKBFXOCR-UHFFFAOYSA-N Copper Chemical compound [Cu] RYGMFSIKBFXOCR-UHFFFAOYSA-N 0.000 title claims description 39
- 230000027455 binding Effects 0.000 title claims description 36
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 title claims description 35
- 239000000203 mixture Substances 0.000 claims description 48
- HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M Sodium hydroxide Chemical compound [OH-].[Na+] HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M 0.000 claims description 39
- 239000000243 solution Substances 0.000 claims description 29
- DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N Glycine Chemical compound NCC(O)=O DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 18
- JPVYNHNXODAKFH-UHFFFAOYSA-N Cu2+ Chemical compound [Cu+2] JPVYNHNXODAKFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 17
- 229910001431 copper ion Inorganic materials 0.000 claims description 16
- AIJULSRZWUXGPQ-UHFFFAOYSA-N Methylglyoxal Chemical compound CC(=O)C=O AIJULSRZWUXGPQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 14
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 14
- JKMHFZQWWAIEOD-UHFFFAOYSA-N 2-[4-(2-hydroxyethyl)piperazin-1-yl]ethanesulfonic acid Chemical compound OCC[NH+]1CCN(CCS([O-])(=O)=O)CC1 JKMHFZQWWAIEOD-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 11
- 239000007995 HEPES buffer Substances 0.000 claims description 11
- STTGYIUESPWXOW-UHFFFAOYSA-N 2,9-dimethyl-4,7-diphenyl-1,10-phenanthroline Chemical compound C=12C=CC3=C(C=4C=CC=CC=4)C=C(C)N=C3C2=NC(C)=CC=1C1=CC=CC=C1 STTGYIUESPWXOW-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 10
- ZNBNBTIDJSKEAM-UHFFFAOYSA-N 4-[7-hydroxy-2-[5-[5-[6-hydroxy-6-(hydroxymethyl)-3,5-dimethyloxan-2-yl]-3-methyloxolan-2-yl]-5-methyloxolan-2-yl]-2,8-dimethyl-1,10-dioxaspiro[4.5]decan-9-yl]-2-methyl-3-propanoyloxypentanoic acid Chemical compound C1C(O)C(C)C(C(C)C(OC(=O)CC)C(C)C(O)=O)OC11OC(C)(C2OC(C)(CC2)C2C(CC(O2)C2C(CC(C)C(O)(CO)O2)C)C)CC1 ZNBNBTIDJSKEAM-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 10
- 229910000378 hydroxylammonium sulfate Inorganic materials 0.000 claims description 10
- 239000004471 Glycine Substances 0.000 claims description 9
- DGAQECJNVWCQMB-PUAWFVPOSA-M Ilexoside XXIX Chemical compound C[C@@H]1CC[C@@]2(CC[C@@]3(C(=CC[C@H]4[C@]3(CC[C@@H]5[C@@]4(CC[C@@H](C5(C)C)OS(=O)(=O)[O-])C)C)[C@@H]2[C@]1(C)O)C)C(=O)O[C@H]6[C@@H]([C@H]([C@@H]([C@H](O6)CO)O)O)O.[Na+] DGAQECJNVWCQMB-PUAWFVPOSA-M 0.000 claims description 9
- 229910052708 sodium Inorganic materials 0.000 claims description 9
- 239000011734 sodium Substances 0.000 claims description 9
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 claims description 7
- 229910021591 Copper(I) chloride Inorganic materials 0.000 claims description 6
- 238000003149 assay kit Methods 0.000 claims description 6
- OXBLHERUFWYNTN-UHFFFAOYSA-M copper(I) chloride Chemical compound [Cu]Cl OXBLHERUFWYNTN-UHFFFAOYSA-M 0.000 claims description 6
- 239000012528 membrane Substances 0.000 claims description 6
- PTFCDOFLOPIGGS-UHFFFAOYSA-N Zinc dication Chemical compound [Zn+2] PTFCDOFLOPIGGS-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 5
- 229940120731 pyruvaldehyde Drugs 0.000 claims description 3
- 239000002253 acid Substances 0.000 claims description 2
- 159000000000 sodium salts Chemical class 0.000 claims description 2
- 239000011701 zinc Substances 0.000 claims description 2
- 102000009027 Albumins Human genes 0.000 description 20
- 108010088751 Albumins Proteins 0.000 description 20
- 238000001479 atomic absorption spectroscopy Methods 0.000 description 10
- 238000000034 method Methods 0.000 description 8
- 102000007562 Serum Albumin Human genes 0.000 description 6
- 108010071390 Serum Albumin Proteins 0.000 description 6
- 239000000706 filtrate Substances 0.000 description 5
- -1 copper cations Chemical class 0.000 description 4
- 229910052751 metal Inorganic materials 0.000 description 4
- 239000002184 metal Substances 0.000 description 4
- 238000007430 reference method Methods 0.000 description 4
- 238000012546 transfer Methods 0.000 description 4
- MUBZPKHOEPUJKR-UHFFFAOYSA-N Oxalic acid Chemical compound OC(=O)C(O)=O MUBZPKHOEPUJKR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- KRKNYBCHXYNGOX-UHFFFAOYSA-N citric acid Chemical compound OC(=O)CC(O)(C(O)=O)CC(O)=O KRKNYBCHXYNGOX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 206010012601 diabetes mellitus Diseases 0.000 description 3
- 150000002500 ions Chemical group 0.000 description 3
- 239000000523 sample Substances 0.000 description 3
- 239000011573 trace mineral Substances 0.000 description 3
- 235000013619 trace mineral Nutrition 0.000 description 3
- 238000000108 ultra-filtration Methods 0.000 description 3
- 206010009944 Colon cancer Diseases 0.000 description 2
- PXHVJJICTQNCMI-UHFFFAOYSA-N Nickel Chemical compound [Ni] PXHVJJICTQNCMI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 208000015634 Rectal Neoplasms Diseases 0.000 description 2
- 238000002835 absorbance Methods 0.000 description 2
- 230000003872 anastomosis Effects 0.000 description 2
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 2
- 210000001072 colon Anatomy 0.000 description 2
- 208000029742 colonic neoplasm Diseases 0.000 description 2
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 2
- 238000013399 early diagnosis Methods 0.000 description 2
- 150000002739 metals Chemical class 0.000 description 2
- 210000002381 plasma Anatomy 0.000 description 2
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 2
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 2
- 206010038038 rectal cancer Diseases 0.000 description 2
- 201000001275 rectum cancer Diseases 0.000 description 2
- 238000000926 separation method Methods 0.000 description 2
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 2
- 238000001356 surgical procedure Methods 0.000 description 2
- 231100000331 toxic Toxicity 0.000 description 2
- 230000002588 toxic effect Effects 0.000 description 2
- PKMVDLKINPUDEK-UHFFFAOYSA-N 2-oxidanylidenepropanal Chemical compound CC(=O)C=O.CC(=O)C=O PKMVDLKINPUDEK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 206010053567 Coagulopathies Diseases 0.000 description 1
- 238000010521 absorption reaction Methods 0.000 description 1
- 150000001299 aldehydes Chemical class 0.000 description 1
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 description 1
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 1
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 1
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 1
- 230000023555 blood coagulation Effects 0.000 description 1
- 150000001720 carbohydrates Chemical class 0.000 description 1
- 230000015556 catabolic process Effects 0.000 description 1
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 1
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 description 1
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 1
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 1
- 238000005352 clarification Methods 0.000 description 1
- 230000035602 clotting Effects 0.000 description 1
- 150000004699 copper complex Chemical class 0.000 description 1
- 238000011161 development Methods 0.000 description 1
- 235000014113 dietary fatty acids Nutrition 0.000 description 1
- 238000010790 dilution Methods 0.000 description 1
- 239000012895 dilution Substances 0.000 description 1
- 239000012154 double-distilled water Substances 0.000 description 1
- 239000000975 dye Substances 0.000 description 1
- 239000000194 fatty acid Substances 0.000 description 1
- 229930195729 fatty acid Natural products 0.000 description 1
- 150000004665 fatty acids Chemical class 0.000 description 1
- 239000007850 fluorescent dye Substances 0.000 description 1
- 125000003630 glycyl group Chemical group [H]N([H])C([H])([H])C(*)=O 0.000 description 1
- 239000005556 hormone Substances 0.000 description 1
- 229940088597 hormone Drugs 0.000 description 1
- NXPHCVPFHOVZBC-UHFFFAOYSA-N hydroxylamine;sulfuric acid Chemical compound ON.OS(O)(=O)=O NXPHCVPFHOVZBC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 1
- 238000011835 investigation Methods 0.000 description 1
- DLBFLQKQABVKGT-UHFFFAOYSA-L lucifer yellow dye Chemical compound [Li+].[Li+].[O-]S(=O)(=O)C1=CC(C(N(C(=O)NN)C2=O)=O)=C3C2=CC(S([O-])(=O)=O)=CC3=C1N DLBFLQKQABVKGT-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 230000004060 metabolic process Effects 0.000 description 1
- 230000007935 neutral effect Effects 0.000 description 1
- 229910052759 nickel Inorganic materials 0.000 description 1
- 230000009871 nonspecific binding Effects 0.000 description 1
- 235000006408 oxalic acid Nutrition 0.000 description 1
- 159000000001 potassium salts Chemical class 0.000 description 1
- 239000013074 reference sample Substances 0.000 description 1
- 238000011160 research Methods 0.000 description 1
- 239000012465 retentate Substances 0.000 description 1
- 229920006395 saturated elastomer Polymers 0.000 description 1
- 238000002798 spectrophotometry method Methods 0.000 description 1
- 239000011782 vitamin Substances 0.000 description 1
- 229940088594 vitamin Drugs 0.000 description 1
- 229930003231 vitamin Natural products 0.000 description 1
- 235000013343 vitamin Nutrition 0.000 description 1
Landscapes
- Investigating Or Analysing Biological Materials (AREA)
Description
CZ 30206 Ul
Kit pro stanovení vazebné kapacity krevního séra pro měď a analytická sada jej obsahující
Oblast techniky
Předkládané technické řešení se týká kitu pro stanovení vazebné kapacity krevního séra pro měď a analytické sady jej obsahující, které lze využít pro snadné stanovení pyruvaldehydu v krevním séru a s tím související včasnou diagnózu diabetů nebo rozpadu anastomózy po operaci karcinomu tlustého střeva a konečníku.
Dosavadní stav techniky
Zcela dominantním přenašečem biologicky dostupné mědi v lidské plazmě je sérový albumin. Albumin je hlavní složkou lidské krevní plazmy a po vysrážení krve rovněž krevního séra. Mezi hlavní fyziologické role tohoto proteinu patří udržování onkotického tlaku séra, přenos některých hormonů, vitaminů, mastných kyselin a stopových prvků. K přenosu stopových prvků (kovů) slouží několik vazebných míst. Univerzální vazebné místo pro kovy (multi metal binding site) má schopnost vazby řady stopových prvků nebo toxických kovů nezávisle na jejich mocenství. Toto místo vykazuje nízkou specifitu a rovněž relativně nízkou afinitu.
Pro kationty nikelnaté a měďnaté však existuje další, vysoce specifické a vysoce afinitní vazebné místo na N-terminálním konci albuminu (N-terminal binding site, NTS). Toto vazebné místo je citlivé na konformační změny molekuly albuminu a rovněž na vazbu některých patofyziologicky významných aldehydů, především methylglyoxalu.
Methylglyoxal (pyruvaldehyd) je toxickým meziproduktem metabolizmu sacharidů, aminokyselin i tuků. Ve zvýšených koncentracích se vyskytuje např. u diabetiků a je pokládán za zodpovědného za rozvoj pozdních komplikací v diabetů. Jeho přímé stanovení je však příliš náročné a zatížené značnou nejistotou vzhledem ke schopnosti molekuly se navázat na řadu bílkovinných struktur. Podle recentních výzkumů se methylglyoxal váže na N-terminální vazebné místo mědi v molekule albuminu a touto vazbou ruší schopnost dané molekuly albuminu přenášet měď.
Dosud byla při výzkumu vazebných vlastností albuminu využívána buď fluorescenční barviva (např. Lucifer yellow), kdy nenavázaný ion mědi tlumí fluorescenci tohoto barviva, nebo atomová absorpční spektrometrie (AAS) po separaci molekul albuminu s navázanými atomy mědi různými technikami. Oba způsoby využívají přístrojové vybavení (fluorescenční spektrometr, atomový absorpční spektrometr), které není běžně dostupné ve standardních klinicko-biochemických laboratořích.
Podstata technického řešení
Dle našich výsledků lze tedy využít stanovení vazebné kapacity albuminu pro měď rovněž k nepřímému stanovení koncentrace methylglyoxalu, například při časné diagnóze rozpadu anastomózy po operaci karcinomu tlustého střeva a konečníku nebo při diabetů. Snadné stanovení vazebné kapacity albuminu pro měď se proto jeví jako velmi potřebné. Podstatou předkládaného technického řešení je kit pro stanovení vazebné kapacity krevního séra pro měď, který využívá běžné instrumentace standardního spektrofotometru a je proto běžně dostupný ve standardních klinicko-biochemických laboratořích.
Předmětem předkládaného technického řešení je kit pro stanovení vazebné kapacity krevního séra pro měď, který obsahuje směs A, směs B a membránový filtr s nominálním limitem molekulové hmotnosti (Nominal Molecular Weight Limit, NMWL) 10 až 60 kDa, přičemž směs A obsahuje 69 až 87,95 mol. % HEPES ve formě kyseliny, její sodné soli nebo jejich kombinace, 12 až 18 mol. % glycinu, 0,05 až 1 mol. % měďnatých iontů ve formě ve vodě rozpustné soli, a směs B obsahuje alespoň 98 mol. % hydroxylamin sulfátu, 0,05 až 1 mol. % bathocuproin disulfonátu sodného a 0,05 až 1 mol. % zinečnatých iontů ve formě ve vodě rozpustné soli, a přičemž molámí poměr měďnatých iontů a bathocuproin disulfonátu sodného je alespoň 1:3.
CZ 30206 Ul
S výhodou má membránový filtr NMWL v rozmezí od 10 do 50 kDa, nejvýhodněji 30 kDa. Membránový filtr slouží k oddělení vysokomolekulámích látek krevního séra, zejména k oddělení albuminu.
Principem metody stanovení vazebné kapacity krevního séra pro měď, k níž slouží předkládané technické řešení, je inkubace vzorku krevního séra s roztokem směsi A, obsahujícím glycinem chelatované měďnaté kationty, při stabilním pH 7,0. Při inkubaci dojde ke kompetici o měďnaté ionty mezi glycinem a vysoce afmitním NTS vazebným místem sérového albuminu. Glycin vytváří s měďnatými ionty dostatečně silné cheláty, aby zabránil vazbě měďnatých iontů na nespecifická vazná místa nebo na univerzální vazebné místo pro kovy s nízkou afinitou. Nicméně vysoce afinitní NTS vazebné místo sérového albuminu kvantitativně naváže měďnaté ionty. Následuje separace molekul albuminu s navázanými měďnatými ionty pomocí ultrafiltrace přes membránový filtr, který propustí nízkomolekulámí sloučeniny, nicméně zadrží vysokomolekulámí látky včetně albuminu s navázanými Cu11 ionty. Měďnaté kationty v ultrafiltrátu, které albumin nebyl schopen navázat na NTS místo, jsou potom zredukovány roztokem směsi B na měďné kationty pomocí hydroxylaminsulfátu. Cu1 ionty vytvářejí s přítomným bathocuproinem intenzivně oranžový komplex, jehož koncentrace je následně stanovena spektrofotometricky na standardním spektrofotometru při vlnové délce 470 nm. Nízkomolekulámí chelatační sloučeniny běžně přítomné v lidském séru (např. kyselina citrónová, šťavelová, atd.), které by za normálních okolností komplexovaly Cu11 a znepřesňovaly stanovení, jsou saturovány přebytkem zinečnatých iontů ve směsi B. Snížení koncentrace komplexu mědi s bathocuproinem oproti referenčnímu vzorku, ve kterém nebyla žádná měď navázána na albumin, odpovídá vazebné kapacitě krevního séra pro měď. Výpočet vazebné kapacity krevního séra pro měď je rutinní prací odborníka v oboru nepřesahující rámec pouhé odborné dovednosti a je daný obecným vzorcem (I).
koncentrace mědi navázané na albumin
Vazebná kapacita séra pro měď =------------------------------------------------------ (I) koncentrace albuminu v séru
Ve výhodném provedení je ve vodě rozpustná sůl měďnatých iontů vybraná ze skupiny zahrnující CuCb, CuSO4, Cu(NO3)2.
Ve výhodném provedení je ve vodě rozpustná sůl zinečnatých iontů vybraná ze skupiny zahrnující ZnCl2, ZnBr2i Znl2> Zn(NO3)2i ZnSO4.
Vjednom provedení obsahuje směs A a/nebo směs B dále NaOH a/nebo KOH, s výhodou v množství do 3,5 násobku molámího množství HEPES ve směsi A a do trojnásobku molámího množství hydroxylamin sulfátu ve směsi B. Přítomnost hydroxidu slouží k úpravě pH roztoku při rozpuštění směsi A a/nebo směsi B ve vodě na hodnotu blízkou neutrálnímu pH 7,0. NaOH a/nebo KOH vytváří sodnou a/nebo draselnou sůl s HEPES a glycinem ve směsi A. Při pH 7,0 dochází k ekvimolámímu navázání měďnatých iontů na albumin.
V jednom konkrétním provedení podle předkládaného technického řešení obsahuje směs A 0,4 g (1,68 mmol; 82,7 mol %) HEPES, 26 mg (3,46-10’1 mmol; 17,1 mol %) glycinu, 0,55 mg (4,09-10'3 mmol; 0,20 mol %) CuCl2 a 235 mg (5,88 mmol; 3,5násobek molámího množství HEPES) NaOH; směs B obsahuje 656 mg (4,00 mmol; 98,8 mol %) hydroxylamin sulfátu, 14 mg (0,0248 mmol; 0,61 mol %) bathocuproin disulfonátu sodného, 3,5 mg (0,0257 mmol; 0,64 mol %) ZnCl2 a 22 mg (0,55 mmol; 0,14násobek molámího množství hydroxylamin sulfátu) NaOH.
Předmětem předkládaného technického řešení je rovněž analytická sada pro nepřímé stanovení pyruvaldehydu v krevním séru, která obsahuje kit pro stanovení vazebné kapacity krevního séra pro měď podle předkládaného technického řešení a návod k použití analytické sady, přičemž směs A a směs B jsou ve formě roztoků v redestilované vodě a/nebo roztoku NaOH a/nebo roztoku KOH tak, aby výsledné pH roztoku směsi A bylo 7,0. S výhodou je použité množství redestilované vody takové, aby výsledná koncentrace Cu2+ iontů v roztoku směsi A byla v rozmezí od 0,05 do 0,50 mM, výhodněji v rozmezí od 0,10 do 0,25 mM, nej výhodněji 0,16 mM; a výsledná koncentrace bathocuproinu v roztoku směsi B byla v rozmezí od 0,10 do 1,0 mM, výhodněji
CZ 30206 Ul v rozmezí od 0,2 do 0,75 mM, nejvýhodněji 0,50 mM. Roztoky směsi A a směsi B při pH 7,0 jsou stabilní po dobu nejméně tří měsíců.
V jednom konkrétním provedení analytické sady, kdy směs A obsahuje 0,4 g HEPES, 26 mg glycinu, 0,55 mg CuCl2 a 235 mg NaOH a směs B obsahuje 656 mg hydroxylamin sulfátu, 14 mg bathocuproin disulfonátu sodného, 3,5 mg ZnCl2 a 22 mg NaOH, je směs A ve formě roztoku ve 25 ml redestilované vody a směs B je ve formě roztoku v 50 ml redestilované vody.
Objasnění výkresu
Obr. 1 znázorňuje xy graf porovnávající výsledky stanovení koncentrace měďnatých iontů ve filtrátu, získaného v průběhu Příkladu 1, získané s použitím kitu podle předkládaného technického řešení na ose y a s použitím atomové absorpční spektrometrie (AAS) jako referenční metody na ose x.
Příklady uskutečnění technického řešení
Příklad 1: Způsob analýzy krevního séra s použitím kitu pro stanovení vazebné kapacity krevního séra pro měď
Vzorek srážlivé krve ponecháme koagulovat po dobu 30 min a centrifugací dle zvyklostí laboratoře připravíme sérum. Do plastové zkumavky napipetujeme 75 μΐ séra, přidáme 450 μΐ roztoku směsi A, obsahujícího 0,4 g HEPES, 26 mg glycinu, 0,55 mg CuCl2 a 235 mg NaOH ve 25 ml redestilované vody, a zkumavku promícháme. Směs inkubujeme při laboratorní teplotě po dobu 2 min a následně přeneseme 500 μΐ směsi do ultrafiltrační cartridge (Amicon ULTRA 0,5 ml vybavené membránou Ultracel 30kDa, katalogové číslo UFC5030BK vyráběné divizí Millipore firmy Merck, Německo), která je součástí kitu. Provedeme centrifugační ultrafiltrací při přetížení 14 000 g po dobu 10 min. Retentát v cartridgi zlikvidujeme. Do další plastové zkumavky přeneseme 200 μΐ ultrafiltrátu a přidáme 1 ml roztoku směsi B, obsahujícího 656 mg hydroxylamin sulfátu, 14 mg bathocuproin disulfonátu sodného, 3,5 mg ZnCl2 a 22 mg NaOH v 50 ml redestilované vody. Tento vzorek inkubujeme 1 min při laboratorní teplotě a následně odečteme absorbanci při 470 nm v kyvetě o délce 1 cm. Spektrofotometr nulujeme na blank směsi 1 ml roztoku směsi B a 200 μΐ redestilované vody.
Kalibrace metody:
Kalibrujeme pomocí použitých roztoků směsi A a B.
Blank: 200 μΐ redestilované vody, 1 ml roztoku směsi B použitého v Příkladu 1.
Koncentrace mědi 82,5 pmol/l v ultrafiltrátu: 100 μΐ redestilované vody, 100 μΐ roztoku směsi A, 1 ml roztoku směsi B
Koncentrace mědi 165 pmol/l v ultrafiltrátu: 200 μΐ roztoku směsi A, 1 ml roztoku směsi B Linearita a opakovatelnost metody:
Absorbance oranžového komplexu mědi vykazuje lineární závislost na koncentraci mědi v celém rozsahu 0 až 165 pmol/l, který připadá v úvahu. Variační koeficient opakovatelnosti stanovém vazebné kapacity séra pro měď je < 6 %.
Příklad 2: Porovnání s referenční metodou atomové absorpční spektrometrie (AAS)
Spektrofotometrické stanovení mědi ve filtrátu výše uvedenou metodou používající kit podle předkládaného technického řešení a pomocí atomové absorpční spektrometrie (AAS) jako referenční metody. Obr. 1 znázorňuje xy graf porovnávající výsledky stanovení koncentrace měďnatých iontů ve filtrátu, získaného v průběhu Příkladu 1, s použitím kitu podle předkládaného technického řešení a s použitím AAS jako metodou referenční. Regresní přímka je popsána rovnicí y = l,0021x - 4,2824 a koeficientem R2 = 0,9468.
CZ 30206 Ul
Z Obr. 1 vyplývá, že výsledky stanovení pomocí obou metod jsou srovnatelné, způsobem stanovení mědi ve filtrátu za použití kitu podle předkládaného technického řešení lze tedy nahradit nákladnou a na přístrojové vybavení náročnou AAS.
K interpretaci výsledku je třeba znát albuminémii pacienta. Vazebnou kapacitu séra pro měď na základě analýzy krevního séra podle Příkladu 1, kterou lze posléze využít k nepřímému stanovení koncentrace methylglyoxalu, vypočítáme podle následujícího vzorce (II):
141 - koncentrace mědi v ultrafiltrátu (pmol/l)
Vazebná kapacita séra pro měď =---------------------------------------------------------------- (Π) koncentrace albuminu v séru (g/1) x 2,15 kde konstanta 141 značí maximální možnou koncentraci měďnatých iontů v ultrafiltrátu v pmol/l při použití kitu podle Příkladu 1 (6 dílů směsi A o koncentraci měďnatých iontů 165 pmol/l + 1 díl séra, kde fyziologicky nejsou přítomny volné měďnaté ionty), koncentrace mědi ve filtrátu v pmol/l je stanovena odečtením z kalibrační přímky, v čitateli je tedy záchyt mědi způsobený albuminem naředěným 7x do činidla A (75 μΐ séra a 450 μΐ roztoku směsi A); konstanta 2,15 ve jmenovateli vznikla dělením koncentrace albuminu v séru v g/1 (střední hodnota u lidí 40 g/1) molekulovou hmotností albuminu 66,5 kDa, násobením 1000 (pro převod zmmol/1 na pmol/l) a dělením 7 (pro kompenzaci ředění albuminu v čitateli).
Úprava výše uvedeného vzorce pro jiné koncentrace roztoků směsi A a B a jiné kalibrační přímky stanovující koncentraci mědi v ultrafiltrátu je rutinní prací odborníka v oboru nepřesahující rámec pouhé odborné dovednosti.
Výsledkem stanovení je průměrný počet atomů mědi, které je za daných reakčních podmínek schopna vázat průměrná molekula albuminu. Referenční interval populace je 1,05 až 1,29. Výsledky svědčící pro poškození molekuly albuminu leží pod dolní hranicí referenčního intervalu.
NÁROKY NA OCHRANU
Claims (7)
1. Kit pro stanovení vazebné kapacity krevního séra pro měď, vyznačený tím, že obsahuje směs A, směs B a membránový filtr s nominálním limitem molekulové hmotnosti 10 až 60 kDa, přičemž směs A obsahuje 69 až 87,95 mol. % HEPES ve formě kyseliny, její sodné soli nebo jejich kombinace, 12 až 18 mol. % glycinu, 0,05 až 1 mol. % měďnatých iontů ve formě ve vodě rozpustné soli, a směs B obsahuje alespoň 98 mol. % hydroxylamin sulfátu, 0,05 až 1 mol. % bathocuproin disulfonátu sodného a 0,05 až 1 mol. % zinečnatých iontů ve formě ve vodě rozpustné soli, a přičemž molámí poměr měďnatých iontů a bathocuproin disulfonátu sodného je alespoň 1:3.
2. Kit pro stanovení vazebné kapacity krevního séra pro měď podle nároku 1, vyznačený tím, že ve vodě rozpustná sůl měďnatých iontů je vybraná ze skupiny zahrnující CuCl2, CUSO4, Cu(NO3)2.
3. Kit pro stanovení vazebné kapacity krevního séra pro měď podle nároku 1 nebo 2, vyznačený tím, že ve vodě rozpustná sůl zinečnatých iontů je vybraná ze skupiny zahrnující ZnCl2, ZnBr2> Znl2j Zn(NO3)2; ZnSO4.
4. Kit pro stanovení vazebné kapacity krevního séra pro měď podle kteréhokoliv z nároků laž3, vyznačený tím, že směs A a/nebo směs B dále obsahuje NaOH a/nebo KOH, s výhodou v množství do 3,5 násobku molámího množství HEPES ve směsi A a do trojnásobku molámího množství hydroxylamin sulfátu ve směsi B.
5. Kit pro stanovení vazebné kapacity krevního séra pro měď podle nároku 4, vyznačený tím, že směs A obsahuje 0,4 g (1,68 mmol; 82,7 mol %) HEPES, 26 mg (3,46 10'1
CZ 30206 Ul mmol; 17,1 mol %) glycinu, 0,55 mg (4,09· 10'3 mmol; 0,20 mol %) CuCl2 a 235 mg (5,88 mmol; 3,5násobek molámího množství HEPES) NaOH; směs B obsahuje 656 mg (4,00 mmol; 98,8 mol %) hydroxylamin sulfátu, 14 mg (0,0248 mmol; 0,61 mol %) bathocuproin disulfonátu sodného, 3,5 mg (0,0257 mmol; 0,64 mol %) ZnCl2 a 22 mg (0,55 mmol; 0,14násobek molámího
5 množství hydroxylamin sulfátu) NaOH.
6. Analytická sada pro nepřímé stanovení pyruvaldehydu v krevním séru, vyznačená tím, že obsahuje kit pro stanovení vazebné kapacity krevního séra pro měď podle kteréhokoliv z předchozích nároků a návod k použití analytické sady, přičemž směs A a směs B jsou ve formě roztoků v redestilované vodě a/nebo roztoku NaOH a/nebo roztoku KOH tak, aby výsledné pH ío roztoku směsi A bylo 7,0.
7. Analytická sada podle nároku 6, vyznačená tím, že obsahuje kit pro stanovení vazebné kapacity krevního séra pro měď podle nároku 5 a návod k použití analytické sady, přičemž směs A je ve formě roztoku ve 25 ml redestilované vody a směs B je ve formě roztoku v 50 ml redestilované vody.
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CZ2016-32875U CZ30206U1 (cs) | 2016-09-30 | 2016-09-30 | Kit pro stanovení vazebné kapacity krevního séra pro měď a analytická sada jej obsahující |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CZ2016-32875U CZ30206U1 (cs) | 2016-09-30 | 2016-09-30 | Kit pro stanovení vazebné kapacity krevního séra pro měď a analytická sada jej obsahující |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CZ30206U1 true CZ30206U1 (cs) | 2016-12-27 |
Family
ID=57793913
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CZ2016-32875U CZ30206U1 (cs) | 2016-09-30 | 2016-09-30 | Kit pro stanovení vazebné kapacity krevního séra pro měď a analytická sada jej obsahující |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| CZ (1) | CZ30206U1 (cs) |
-
2016
- 2016-09-30 CZ CZ2016-32875U patent/CZ30206U1/cs not_active IP Right Cessation
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| Robertson et al. | Calcium measurements in serum and plasma—total and ionized | |
| JP3523878B2 (ja) | ヘモグロビンの定量用無シアン化物試薬及び方法 | |
| Saris et al. | Magnesium: an update on physiological, clinical and analytical aspects | |
| Artiss et al. | Spectrophotometric study of several sensitive reagents for serum iron | |
| Parmar et al. | Picric acid capped silver nanoparticles as a probe for colorimetric sensing of creatinine in human blood and cerebrospinal fluid samples | |
| Williams et al. | Simultaneous spectrophotometry of Fe2+ and Cu2+ in serum denatured with guanidine hydrochloride. | |
| JPS6259265B2 (cs) | ||
| Jones | Normal values for some biochemical constituents in rabbits | |
| EP0097472B1 (en) | Method of determining calcium in a fluid sample | |
| Anisimovich et al. | Spectrophotometric determination of proteins in biological fluids | |
| JP4151023B2 (ja) | カルシウム測定用試薬および測定方法 | |
| JPS626170A (ja) | 蛋白測定用試験片 | |
| Milne | Laboratory assessment of trace element and mineral status | |
| EP0099923A4 (en) | TEST PROCEDURE AND REAGENT FOR DETERMINING A CHLORIDE. | |
| CZ30206U1 (cs) | Kit pro stanovení vazebné kapacity krevního séra pro měď a analytická sada jej obsahující | |
| JP6276611B2 (ja) | 試料中の総タンパク質の定量方法および該方法に使用する試薬 | |
| Kekki | Microdetermination of Amino Nitrogen as Copper Complexes a Modification for Plasma and Urine | |
| JPH0453265B2 (cs) | ||
| WO2011025711A1 (en) | Method of using ligand-free lysing agent in hemoglobin analysis | |
| US3282649A (en) | Determination of oxidizing and reducing substances | |
| JP2018194453A (ja) | 酸化型アルブミン形成剤、アルブミン測定キット、及びアルブミン測定方法 | |
| US4800168A (en) | Two reagent system for the colorimetric determination of chloride ions in body fluids | |
| CN114705640A (zh) | 一种抗干扰能力强的高灵敏度血清锌测定试剂及制备方法 | |
| JP4123181B2 (ja) | カルシウムの測定方法および測定試薬 | |
| JP4733596B2 (ja) | 液体試料の総蛋白質を測定するための液状試薬 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| FG1K | Utility model registered |
Effective date: 20161227 |
|
| MK1K | Utility model expired |
Effective date: 20200930 |