CZ294599B6 - Reagenční směs pro stanovení hemoglobinu v krevním vzorku a způsob stanovení hemoglobinu ve vzorku celé krve - Google Patents
Reagenční směs pro stanovení hemoglobinu v krevním vzorku a způsob stanovení hemoglobinu ve vzorku celé krve Download PDFInfo
- Publication number
- CZ294599B6 CZ294599B6 CZ19981461A CZ146198A CZ294599B6 CZ 294599 B6 CZ294599 B6 CZ 294599B6 CZ 19981461 A CZ19981461 A CZ 19981461A CZ 146198 A CZ146198 A CZ 146198A CZ 294599 B6 CZ294599 B6 CZ 294599B6
- Authority
- CZ
- Czechia
- Prior art keywords
- reagent
- composition
- hemoglobin
- cyanide
- surfactant
- Prior art date
Links
- 108010054147 Hemoglobins Proteins 0.000 title claims abstract description 129
- 102000001554 Hemoglobins Human genes 0.000 title claims abstract description 129
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 title claims abstract description 90
- 239000008280 blood Substances 0.000 title claims abstract description 90
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims abstract description 68
- 239000011541 reaction mixture Substances 0.000 title claims abstract description 25
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 claims abstract description 175
- 239000000203 mixture Substances 0.000 claims abstract description 117
- 210000000265 leukocyte Anatomy 0.000 claims abstract description 57
- 210000003743 erythrocyte Anatomy 0.000 claims abstract description 25
- 239000004094 surface-active agent Substances 0.000 claims abstract description 24
- 150000002825 nitriles Chemical class 0.000 claims abstract description 20
- 150000003278 haem Chemical class 0.000 claims abstract description 12
- 239000006174 pH buffer Substances 0.000 claims abstract description 12
- 206010018910 Haemolysis Diseases 0.000 claims abstract description 11
- 230000008588 hemolysis Effects 0.000 claims abstract description 11
- 210000000601 blood cell Anatomy 0.000 claims abstract description 10
- 239000000693 micelle Substances 0.000 claims abstract description 8
- 238000002156 mixing Methods 0.000 claims abstract description 6
- -1 n-tetradecyl Chemical group 0.000 claims description 31
- 239000002888 zwitterionic surfactant Substances 0.000 claims description 16
- KWIUHFFTVRNATP-UHFFFAOYSA-N glycine betaine Chemical compound C[N+](C)(C)CC([O-])=O KWIUHFFTVRNATP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 13
- 239000002585 base Substances 0.000 claims description 11
- 125000000217 alkyl group Chemical group 0.000 claims description 9
- PJWWRFATQTVXHA-UHFFFAOYSA-N Cyclohexylaminopropanesulfonic acid Chemical group OS(=O)(=O)CCCNC1CCCCC1 PJWWRFATQTVXHA-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 8
- CDBYLPFSWZWCQE-UHFFFAOYSA-L Sodium Carbonate Chemical compound [Na+].[Na+].[O-]C([O-])=O CDBYLPFSWZWCQE-UHFFFAOYSA-L 0.000 claims description 8
- MRUAUOIMASANKQ-UHFFFAOYSA-N cocamidopropyl betaine Chemical compound CCCCCCCCCCCC(=O)NCCC[N+](C)(C)CC([O-])=O MRUAUOIMASANKQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 8
- UMCMPZBLKLEWAF-BCTGSCMUSA-N 3-[(3-cholamidopropyl)dimethylammonio]propane-1-sulfonate Chemical compound C([C@H]1C[C@H]2O)[C@H](O)CC[C@]1(C)[C@@H]1[C@@H]2[C@@H]2CC[C@H]([C@@H](CCC(=O)NCCC[N+](C)(C)CCCS([O-])(=O)=O)C)[C@@]2(C)[C@@H](O)C1 UMCMPZBLKLEWAF-BCTGSCMUSA-N 0.000 claims description 7
- VTYYLEPIZMXCLO-UHFFFAOYSA-L Calcium carbonate Chemical compound [Ca+2].[O-]C([O-])=O VTYYLEPIZMXCLO-UHFFFAOYSA-L 0.000 claims description 7
- BWHMMNNQKKPAPP-UHFFFAOYSA-L potassium carbonate Chemical compound [K+].[K+].[O-]C([O-])=O BWHMMNNQKKPAPP-UHFFFAOYSA-L 0.000 claims description 7
- GUQQBLRVXOUDTN-XOHPMCGNSA-N 3-[dimethyl-[3-[[(4r)-4-[(3r,5s,7r,8r,9s,10s,12s,13r,14s,17r)-3,7,12-trihydroxy-10,13-dimethyl-2,3,4,5,6,7,8,9,11,12,14,15,16,17-tetradecahydro-1h-cyclopenta[a]phenanthren-17-yl]pentanoyl]amino]propyl]azaniumyl]-2-hydroxypropane-1-sulfonate Chemical compound C([C@H]1C[C@H]2O)[C@H](O)CC[C@]1(C)[C@@H]1[C@@H]2[C@@H]2CC[C@H]([C@@H](CCC(=O)NCCC[N+](C)(C)CC(O)CS([O-])(=O)=O)C)[C@@]2(C)[C@@H](O)C1 GUQQBLRVXOUDTN-XOHPMCGNSA-N 0.000 claims description 6
- 229960003237 betaine Drugs 0.000 claims description 6
- 229910021538 borax Inorganic materials 0.000 claims description 6
- 229940073507 cocamidopropyl betaine Drugs 0.000 claims description 6
- 238000001585 disappearance potential spectroscopy Methods 0.000 claims description 6
- 235000010339 sodium tetraborate Nutrition 0.000 claims description 6
- LZLVZIFMYXDKCN-QJWFYWCHSA-N 1,2-di-O-arachidonoyl-sn-glycero-3-phosphocholine Chemical compound CCCCC\C=C/C\C=C/C\C=C/C\C=C/CCCC(=O)OC[C@H](COP([O-])(=O)OCC[N+](C)(C)C)OC(=O)CCC\C=C/C\C=C/C\C=C/C\C=C/CCCCC LZLVZIFMYXDKCN-QJWFYWCHSA-N 0.000 claims description 5
- 229910052783 alkali metal Inorganic materials 0.000 claims description 5
- 125000004432 carbon atom Chemical group C* 0.000 claims description 5
- 239000004328 sodium tetraborate Substances 0.000 claims description 5
- GZEYLLPOQRZUDF-UHFFFAOYSA-N 7-(dimethylamino)-4-methylchromen-2-one Chemical compound CC1=CC(=O)OC2=CC(N(C)C)=CC=C21 GZEYLLPOQRZUDF-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 4
- 150000008044 alkali metal hydroxides Chemical class 0.000 claims description 4
- 229910000019 calcium carbonate Inorganic materials 0.000 claims description 4
- ONHFWHCMZAJCFB-UHFFFAOYSA-N myristamine oxide Chemical compound CCCCCCCCCCCCCC[N+](C)(C)[O-] ONHFWHCMZAJCFB-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 4
- IBOBFGGLRNWLIL-UHFFFAOYSA-N n,n-dimethylhexadecan-1-amine oxide Chemical compound CCCCCCCCCCCCCCCC[N+](C)(C)[O-] IBOBFGGLRNWLIL-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 4
- 229910000027 potassium carbonate Inorganic materials 0.000 claims description 4
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 claims description 4
- 229910000029 sodium carbonate Inorganic materials 0.000 claims description 4
- ZRXHLJNBNWVNIM-UHFFFAOYSA-N 3-methyl-1-benzofuran Chemical compound C1=CC=C2C(C)=COC2=C1 ZRXHLJNBNWVNIM-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 3
- AFVFQIVMOAPDHO-UHFFFAOYSA-N Methanesulfonic acid Chemical compound CS(O)(=O)=O AFVFQIVMOAPDHO-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 3
- ICAIHGOJRDCMHE-UHFFFAOYSA-O ammonium cyanide Chemical compound [NH4+].N#[C-] ICAIHGOJRDCMHE-UHFFFAOYSA-O 0.000 claims description 3
- 229910052799 carbon Inorganic materials 0.000 claims description 3
- KXZJHVJKXJLBKO-UHFFFAOYSA-N chembl1408157 Chemical compound N=1C2=CC=CC=C2C(C(=O)O)=CC=1C1=CC=C(O)C=C1 KXZJHVJKXJLBKO-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 3
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 claims description 3
- UQGFMSUEHSUPRD-UHFFFAOYSA-N disodium;3,7-dioxido-2,4,6,8,9-pentaoxa-1,3,5,7-tetraborabicyclo[3.3.1]nonane Chemical compound [Na+].[Na+].O1B([O-])OB2OB([O-])OB1O2 UQGFMSUEHSUPRD-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 3
- IZWSFJTYBVKZNK-UHFFFAOYSA-N lauryl sulfobetaine Chemical compound CCCCCCCCCCCC[N+](C)(C)CCCS([O-])(=O)=O IZWSFJTYBVKZNK-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 3
- FKWSMBAMOQCVPV-UHFFFAOYSA-N magnesium dicyanide Chemical compound [Mg+2].N#[C-].N#[C-] FKWSMBAMOQCVPV-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 3
- UTTVXKGNTWZECK-UHFFFAOYSA-N n,n-dimethyloctadecan-1-amine oxide Chemical compound CCCCCCCCCCCCCCCCCC[N+](C)(C)[O-] UTTVXKGNTWZECK-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 3
- 230000008569 process Effects 0.000 claims description 3
- BDHFUVZGWQCTTF-UHFFFAOYSA-M sulfonate Chemical compound [O-]S(=O)=O BDHFUVZGWQCTTF-UHFFFAOYSA-M 0.000 claims description 3
- 150000005622 tetraalkylammonium hydroxides Chemical class 0.000 claims description 3
- 150000001340 alkali metals Chemical class 0.000 claims description 2
- 150000008051 alkyl sulfates Chemical class 0.000 claims description 2
- 229940045714 alkyl sulfonate alkylating agent Drugs 0.000 claims description 2
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 claims description 2
- UEUIKXVPXLWUDU-UHFFFAOYSA-N 4-diazoniobenzenesulfonate Chemical compound [O-]S(=O)(=O)C1=CC=C([N+]#N)C=C1 UEUIKXVPXLWUDU-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims 2
- AUCGUGJYVNQWFH-UHFFFAOYSA-N 1-(dimethylamino)ethanesulfonic acid Chemical compound CN(C)C(C)S(O)(=O)=O AUCGUGJYVNQWFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims 1
- 238000001514 detection method Methods 0.000 abstract 1
- 239000000523 sample Substances 0.000 description 58
- 210000001772 blood platelet Anatomy 0.000 description 29
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 25
- XFXPMWWXUTWYJX-UHFFFAOYSA-N Cyanide Chemical compound N#[C-] XFXPMWWXUTWYJX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 24
- 238000005259 measurement Methods 0.000 description 18
- 238000004820 blood count Methods 0.000 description 16
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 13
- HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M Sodium hydroxide Chemical compound [OH-].[Na+] HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 12
- XEEYBQQBJWHFJM-UHFFFAOYSA-N Iron Chemical compound [Fe] XEEYBQQBJWHFJM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 11
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 10
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 9
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 8
- 210000003651 basophil Anatomy 0.000 description 7
- 230000002159 abnormal effect Effects 0.000 description 6
- 239000002563 ionic surfactant Substances 0.000 description 6
- VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N Hydrochloric acid Chemical compound Cl VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 5
- 229910052742 iron Inorganic materials 0.000 description 5
- 239000000463 material Substances 0.000 description 5
- KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N EDTA Chemical compound OC(=O)CN(CC(O)=O)CCN(CC(O)=O)CC(O)=O KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 150000001768 cations Chemical class 0.000 description 4
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 4
- 239000007795 chemical reaction product Substances 0.000 description 4
- 238000004163 cytometry Methods 0.000 description 4
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 4
- 210000004940 nucleus Anatomy 0.000 description 4
- PSBDWGZCVUAZQS-UHFFFAOYSA-N (dimethylsulfonio)acetate Chemical compound C[S+](C)CC([O-])=O PSBDWGZCVUAZQS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 208000001613 Gambling Diseases 0.000 description 3
- 102000003992 Peroxidases Human genes 0.000 description 3
- KWYUFKZDYYNOTN-UHFFFAOYSA-M Potassium hydroxide Chemical compound [OH-].[K+] KWYUFKZDYYNOTN-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 3
- 125000000129 anionic group Chemical group 0.000 description 3
- 125000002091 cationic group Chemical group 0.000 description 3
- 230000008859 change Effects 0.000 description 3
- 230000000875 corresponding effect Effects 0.000 description 3
- 238000011161 development Methods 0.000 description 3
- 230000018109 developmental process Effects 0.000 description 3
- 239000002245 particle Substances 0.000 description 3
- 108040007629 peroxidase activity proteins Proteins 0.000 description 3
- 239000013641 positive control Substances 0.000 description 3
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 3
- 239000011734 sodium Substances 0.000 description 3
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 3
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N Acetic acid Chemical compound CC(O)=O QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 108010003320 Carboxyhemoglobin Proteins 0.000 description 2
- LZZYPRNAOMGNLH-UHFFFAOYSA-M Cetrimonium bromide Chemical compound [Br-].CCCCCCCCCCCCCCCC[N+](C)(C)C LZZYPRNAOMGNLH-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- DGAQECJNVWCQMB-PUAWFVPOSA-M Ilexoside XXIX Chemical compound C[C@@H]1CC[C@@]2(CC[C@@]3(C(=CC[C@H]4[C@]3(CC[C@@H]5[C@@]4(CC[C@@H](C5(C)C)OS(=O)(=O)[O-])C)C)[C@@H]2[C@]1(C)O)C)C(=O)O[C@H]6[C@@H]([C@H]([C@@H]([C@H](O6)CO)O)O)O.[Na+] DGAQECJNVWCQMB-PUAWFVPOSA-M 0.000 description 2
- ZLMJMSJWJFRBEC-UHFFFAOYSA-N Potassium Chemical compound [K] ZLMJMSJWJFRBEC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000000862 absorption spectrum Methods 0.000 description 2
- 230000009471 action Effects 0.000 description 2
- 239000012491 analyte Substances 0.000 description 2
- 239000007864 aqueous solution Substances 0.000 description 2
- 150000007942 carboxylates Chemical class 0.000 description 2
- 230000001143 conditioned effect Effects 0.000 description 2
- 210000000805 cytoplasm Anatomy 0.000 description 2
- 125000003438 dodecyl group Chemical group [H]C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])* 0.000 description 2
- 238000011156 evaluation Methods 0.000 description 2
- 102000018146 globin Human genes 0.000 description 2
- 108060003196 globin Proteins 0.000 description 2
- 238000005534 hematocrit Methods 0.000 description 2
- 150000004678 hydrides Chemical class 0.000 description 2
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 2
- 229910052751 metal Inorganic materials 0.000 description 2
- 239000002184 metal Substances 0.000 description 2
- 229910021645 metal ion Inorganic materials 0.000 description 2
- 239000003921 oil Substances 0.000 description 2
- 235000019198 oils Nutrition 0.000 description 2
- 230000003647 oxidation Effects 0.000 description 2
- 238000007254 oxidation reaction Methods 0.000 description 2
- SYJCZRADGXHKOU-UHFFFAOYSA-N porphyrin-21,23-dicarbonitrile Chemical compound C(#N)N1C=2C=CC1=CC=1C=CC(=CC3=CC=C(N3C#N)C=C3C=CC(C=2)=N3)N=1 SYJCZRADGXHKOU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 229910052708 sodium Inorganic materials 0.000 description 2
- 241000894007 species Species 0.000 description 2
- 238000002798 spectrophotometry method Methods 0.000 description 2
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 2
- 229940117986 sulfobetaine Drugs 0.000 description 2
- 238000011179 visual inspection Methods 0.000 description 2
- INGWEZCOABYORO-UHFFFAOYSA-N 2-(furan-2-yl)-7-methyl-1h-1,8-naphthyridin-4-one Chemical compound N=1C2=NC(C)=CC=C2C(O)=CC=1C1=CC=CO1 INGWEZCOABYORO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- XCLZMLSHYUVCMH-UHFFFAOYSA-N 3-azaniumyl-2,2-dimethylnonadecane-3-sulfonate Chemical compound C(CCCCCCCCCCCCCCC)C(C(C)(C)C)(S(=O)(=O)[O-])[NH3+] XCLZMLSHYUVCMH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- QGZKDVFQNNGYKY-UHFFFAOYSA-O Ammonium Chemical compound [NH4+] QGZKDVFQNNGYKY-UHFFFAOYSA-O 0.000 description 1
- FERIUCNNQQJTOY-UHFFFAOYSA-M Butyrate Chemical compound CCCC([O-])=O FERIUCNNQQJTOY-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- OYPRJOBELJOOCE-UHFFFAOYSA-N Calcium Chemical compound [Ca] OYPRJOBELJOOCE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- SNRUBQQJIBEYMU-UHFFFAOYSA-N Dodecane Natural products CCCCCCCCCCCC SNRUBQQJIBEYMU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- OVGORFFCBUIFIA-UHFFFAOYSA-N Fenipentol Chemical compound CCCCC(O)C1=CC=CC=C1 OVGORFFCBUIFIA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108010044495 Fetal Hemoglobin Proteins 0.000 description 1
- WHXSMMKQMYFTQS-UHFFFAOYSA-N Lithium Chemical compound [Li] WHXSMMKQMYFTQS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108010061951 Methemoglobin Proteins 0.000 description 1
- ONYFNWIHJBLQKE-ZETCQYMHSA-N N(6)-acetimidoyl-L-lysine Chemical compound CC(=N)NCCCC[C@H](N)C(O)=O ONYFNWIHJBLQKE-ZETCQYMHSA-N 0.000 description 1
- 239000004677 Nylon Substances 0.000 description 1
- 108010064719 Oxyhemoglobins Proteins 0.000 description 1
- 240000007651 Rubus glaucus Species 0.000 description 1
- 235000011034 Rubus glaucus Nutrition 0.000 description 1
- 235000009122 Rubus idaeus Nutrition 0.000 description 1
- 108010016797 Sickle Hemoglobin Proteins 0.000 description 1
- DBMJMQXJHONAFJ-UHFFFAOYSA-M Sodium laurylsulphate Chemical compound [Na+].CCCCCCCCCCCCOS([O-])(=O)=O DBMJMQXJHONAFJ-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 239000007983 Tris buffer Substances 0.000 description 1
- 238000010521 absorption reaction Methods 0.000 description 1
- 239000000654 additive Substances 0.000 description 1
- 239000003513 alkali Substances 0.000 description 1
- 150000008052 alkyl sulfonates Chemical class 0.000 description 1
- 230000004075 alteration Effects 0.000 description 1
- 239000003945 anionic surfactant Substances 0.000 description 1
- 150000003842 bromide salts Chemical class 0.000 description 1
- 150000004649 carbonic acid derivatives Chemical class 0.000 description 1
- 150000001767 cationic compounds Chemical class 0.000 description 1
- 230000001364 causal effect Effects 0.000 description 1
- 210000003855 cell nucleus Anatomy 0.000 description 1
- 150000001805 chlorine compounds Chemical class 0.000 description 1
- 235000019864 coconut oil Nutrition 0.000 description 1
- 239000003240 coconut oil Substances 0.000 description 1
- 230000002596 correlated effect Effects 0.000 description 1
- 239000008367 deionised water Substances 0.000 description 1
- 229910021641 deionized water Inorganic materials 0.000 description 1
- 108010002255 deoxyhemoglobin Proteins 0.000 description 1
- 239000003085 diluting agent Substances 0.000 description 1
- 238000004090 dissolution Methods 0.000 description 1
- SYELZBGXAIXKHU-UHFFFAOYSA-N dodecyldimethylamine N-oxide Chemical compound CCCCCCCCCCCC[N+](C)(C)[O-] SYELZBGXAIXKHU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 210000003979 eosinophil Anatomy 0.000 description 1
- 238000013401 experimental design Methods 0.000 description 1
- 238000000605 extraction Methods 0.000 description 1
- 150000004673 fluoride salts Chemical class 0.000 description 1
- 238000005194 fractionation Methods 0.000 description 1
- 150000004820 halides Chemical class 0.000 description 1
- 230000002489 hematologic effect Effects 0.000 description 1
- 210000005096 hematological system Anatomy 0.000 description 1
- BTIJJDXEELBZFS-QDUVMHSLSA-K hemin Chemical class CC1=C(CCC(O)=O)C(C=C2C(CCC(O)=O)=C(C)\C(N2[Fe](Cl)N23)=C\4)=N\C1=C/C2=C(C)C(C=C)=C3\C=C/1C(C)=C(C=C)C/4=N\1 BTIJJDXEELBZFS-QDUVMHSLSA-K 0.000 description 1
- 108010075430 hemoglobins N Proteins 0.000 description 1
- 125000001183 hydrocarbyl group Chemical group 0.000 description 1
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-M hydroxide Chemical compound [OH-] XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 229910001411 inorganic cation Inorganic materials 0.000 description 1
- 150000002500 ions Chemical class 0.000 description 1
- PANJMBIFGCKWBY-UHFFFAOYSA-N iron tricyanide Chemical compound N#C[Fe](C#N)C#N PANJMBIFGCKWBY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000003446 ligand Substances 0.000 description 1
- 150000002632 lipids Chemical class 0.000 description 1
- 229910052744 lithium Inorganic materials 0.000 description 1
- YFVGRULMIQXYNE-UHFFFAOYSA-M lithium;dodecyl sulfate Chemical compound [Li+].CCCCCCCCCCCCOS([O-])(=O)=O YFVGRULMIQXYNE-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 210000004698 lymphocyte Anatomy 0.000 description 1
- 230000007246 mechanism Effects 0.000 description 1
- 239000012528 membrane Substances 0.000 description 1
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 1
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 1
- 210000001616 monocyte Anatomy 0.000 description 1
- 210000000440 neutrophil Anatomy 0.000 description 1
- 230000003448 neutrophilic effect Effects 0.000 description 1
- 229920001778 nylon Polymers 0.000 description 1
- 238000010979 pH adjustment Methods 0.000 description 1
- 125000000913 palmityl group Chemical group [H]C([*])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])[H] 0.000 description 1
- 238000011056 performance test Methods 0.000 description 1
- RGCLLPNLLBQHPF-HJWRWDBZSA-N phosphamidon Chemical compound CCN(CC)C(=O)C(\Cl)=C(/C)OP(=O)(OC)OC RGCLLPNLLBQHPF-HJWRWDBZSA-N 0.000 description 1
- 229920002492 poly(sulfone) Polymers 0.000 description 1
- 229910052700 potassium Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000011591 potassium Substances 0.000 description 1
- NNFCIKHAZHQZJG-UHFFFAOYSA-N potassium cyanide Chemical compound [K+].N#[C-] NNFCIKHAZHQZJG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000002244 precipitate Substances 0.000 description 1
- 239000000047 product Substances 0.000 description 1
- KCXFHTAICRTXLI-UHFFFAOYSA-N propane-1-sulfonic acid Chemical compound CCCS(O)(=O)=O KCXFHTAICRTXLI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 1
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 1
- 238000012207 quantitative assay Methods 0.000 description 1
- 125000001453 quaternary ammonium group Chemical group 0.000 description 1
- 230000000717 retained effect Effects 0.000 description 1
- 235000019333 sodium laurylsulphate Nutrition 0.000 description 1
- 229950005425 sodium myristyl sulfate Drugs 0.000 description 1
- UPUIQOIQVMNQAP-UHFFFAOYSA-M sodium;tetradecyl sulfate Chemical compound [Na+].CCCCCCCCCCCCCCOS([O-])(=O)=O UPUIQOIQVMNQAP-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 239000007787 solid Substances 0.000 description 1
- 238000001370 static light scattering Methods 0.000 description 1
- 238000007619 statistical method Methods 0.000 description 1
- 125000004079 stearyl group Chemical group [H]C([*])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])[H] 0.000 description 1
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 1
- BSVBQGMMJUBVOD-UHFFFAOYSA-N trisodium borate Chemical compound [Na+].[Na+].[Na+].[O-]B([O-])[O-] BSVBQGMMJUBVOD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000010200 validation analysis Methods 0.000 description 1
- 238000013389 whole blood assay Methods 0.000 description 1
Classifications
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/72—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving blood pigments, e.g. haemoglobin, bilirubin or other porphyrins; involving occult blood
- G01N33/721—Haemoglobin
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/5005—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving human or animal cells
- G01N33/5094—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving human or animal cells for blood cell populations
-
- Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC
- Y10T—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER US CLASSIFICATION
- Y10T436/00—Chemistry: analytical and immunological testing
- Y10T436/10—Composition for standardization, calibration, simulation, stabilization, preparation or preservation; processes of use in preparation for chemical testing
-
- Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC
- Y10T—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER US CLASSIFICATION
- Y10T436/00—Chemistry: analytical and immunological testing
- Y10T436/10—Composition for standardization, calibration, simulation, stabilization, preparation or preservation; processes of use in preparation for chemical testing
- Y10T436/107497—Preparation composition [e.g., lysing or precipitation, etc.]
-
- Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC
- Y10T—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER US CLASSIFICATION
- Y10T436/00—Chemistry: analytical and immunological testing
- Y10T436/10—Composition for standardization, calibration, simulation, stabilization, preparation or preservation; processes of use in preparation for chemical testing
- Y10T436/108331—Preservative, buffer, anticoagulant or diluent
-
- Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC
- Y10T—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER US CLASSIFICATION
- Y10T436/00—Chemistry: analytical and immunological testing
- Y10T436/25—Chemistry: analytical and immunological testing including sample preparation
- Y10T436/25125—Digestion or removing interfering materials
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Hematology (AREA)
- Immunology (AREA)
- Urology & Nephrology (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Cell Biology (AREA)
- Food Science & Technology (AREA)
- General Physics & Mathematics (AREA)
- Pathology (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Analytical Chemistry (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Tropical Medicine & Parasitology (AREA)
- Ecology (AREA)
- Investigating Or Analysing Biological Materials (AREA)
- Investigating Or Analysing Materials By The Use Of Chemical Reactions (AREA)
Abstract
Je popsána reagenční směs pro stanovení hemoglobinu v krevním vzorku, která obsahuje vodnou příměs nejméně jednoho povrchově aktivního činidla v množství, které je účinné pro hemolýzu buněk červených krvinek ve zmíněném vzorku a vznik micel; rozpustnou anorganickou kyanidovou sůl v množství, které je účinné pro vázání se na hemové molekuly, pocházející ze zmíněné hemolýzy krevních buněk; a pufr pH, schopný zachovat pH zmíněné směsi na hodnotě 10,0 až 11,2; kde zmíněná reagenční směs v příměsi se zmíněným krevním vzorkem nevyvolává interferenci způsobenou buňkami bílých krvinek v automatických způsobech stanovení hemoglobinu. Způsob stanovení hemoglobinu ve vzorku celé krve, zahrnuje smíšení alikvotního množství zmíněného krevního vzorku s reagenční směsí na reakční směs a analyzování této reakční směsi na automatickém hematologickém analyzačním přístroji za účelem stanovení hemoglobinu, při kterém se použije reagenční směs uvedená výše.ŕ
Description
Oblast vynálezu
Tento vynález se týká reagenční směsi pro stanovení hemoglobinu v krevním vzorku a způsobu stanovení hemoglobinu ve vzorku celé krve, při analyzování této reakční směsi na automatickém hematologickém analyzačním přístroji za účelem stanovení hemoglobinu.
Dosavadní stav techniky
Měření hemoglobinu (dále též Hb) v celé krvi (dále též úplné krvi) se často provádí pomocí manuálních spektrofotometrických způsobů (metod) nebo poloautomatických a automatických a hematologických analyzátorů a s nimi používaných způsobů a reagenčních látek. Poslední vývoj vysoce výkonných hematologických analyzátorů (např. až 100 vzorků za hodinu), např. řady TECHNICON H*™, včetně systémů TECHNICON H*l™, H*2™ a H*3™, na které však výčet není omezen, vedl k potřebě způsobu stanovení hemoglobinu, které jsou ukončeny za asi 30 sekund nebo méně.
Kyanidové a bezkyanidové metody stanovení hemoglobinu a reagenční látky se používají v automatických analyzátorech hemoglobinu, jako je řada měřicích přístrojů TECHNICON H*™, k rychlé a kvantitativní přeměně karboxyhemoglobinu (Hbco) v krevních vzorcích na kvantifikovatelný reakční produkt, na příklad za méně než asi 24 sekund. Bylo zjištěno, že hemoglobinové kvantitativní rozbory, prováděné za použití jakéhokoliv automatického analyzátoru, nejsou ovlivněny přítomností až 100 % HbCO jako procenta celkového hemoglobinu v krvi. Vedle toho bylo zjištěno, že kyanidová i benzkyanidová metoda za použití automatických analyzátorů TECHNICON H*™ jsou srovnatelné, pokud se týká výkonových parametrů linearity, přesnosti a převodu (carryover). Tyto metody byly dále v dobré korelaci s referenční manuální metodou stanovení hemoglobinu v normálních i abnormálních krevních vzorcích podle Mezinárodního výboru pro standardizaci v hematologii (ICSH - International Comittee for Standardization of Hematology), což ukazuje na přijatelnou přesnost (M. J. Malin a kol., 1989, Am. J. Clin. Path., 92:286 - 294), M. J. Malin a kol. 1992, Analyt. Chim. Acta, 262-67-77).
Pokud se týká analýzy abnormálních krevních vzorků, které mohou obsahovat výjimečně vysoké hladiny buněk, zvláště bílých krvinek, může být obtížně u stávajících metod stanovení Hb a v nich použitých reagenčních látek dávat přesné hodnoty. Podle Wintroba a kol. (1981, Clinical Hematology, Lea and Febiger, Philadelhia, Pa. str. 208) je normální počet bílých krvinek řádu 3 až 10 x 103 buněk/μΐ krve. Za středně vysoký normální počet lze považovat např. 8 x 103/μ1 a za abnormálně vysoký počet bílých krvinek lze považovat asi 10 x 103 buněk/μΐ a více.
Americký patent US 3 874 852 T.E. Hammilla obsahuje reagenční látku ke stanovení leukocytů a hemoglobinu v krvi, obsahující beziontový kyanoželezitanový roztok s obsahem kvartérního amonného iontového povrchově aktivního činidla a anorganické kyanidové soli, kde pH reagenční látky je přibližně 9 a pH konečného ústrojného roztoku (pufru), použitého k analýze, je 7,6 při použití s komerčním pufrovaným krevní ředidlem Isoton.
Hemoglobinové reagenční látky s obsahem kyanidu, mající pH v rozmezí 11,2 až 11,5 nebo 11,6, jsou komerčně dostupné od nabyvatele tohoto patentu. Jak je v něm popsáno, neočekávané problémy při stanovení Hb pomocí dostupných hemoglobinových reagenčních látek se zvláštními hodnotami pH nebyly vyřešeny až do současného vynálezcova objevu příčin těchto problémů a vývoje reagenčních směsí a metod podle tohoto vynálezu.
-1 CZ 294599 B6
V důsledku toho jsou v oboru potřebné metody a reagenční látky, které by eliminovaly interferenci, způsobenou středním až vysokým počtem bílých krvinek a měly přijatelnou nepřesnost při stanovení hemoglobinu. Potřebné jsou také metody a reagenční látky, které netrpí mezisystémovými rozdíly a které jsou schopné přesně kvantifikovat obsah Hb v situaci jak středního, tak i vysokého počtu bílých krvinek v normálních a abnormálních krevních vzorcích.
Další problém v tomto oboru vzniká, když krevní vzorek zůstává určitou dobu smíšen sreagenční látkou Hb v reakční směsi před analýzou Hb. Rozdíly reakčních rychlostí metod Hb mohou záviset na mechanických aspektech krve v reakční směsi s reagens Hb. Na příklad velké zvýšení reakční rychlosti u automatické metody ve srovnání s metodou ICSH může záviset na narušení molekuly Hb a extrakci vázaného heminového derivátu micelami povrchově aktivního činidla u první z výše uvedených metod. Na rozdíl od toho je u metody ICSH integrita molekulární struktury Hb zachována a oxidace krevního železa a následující vázání kyanidem nastávají v nedotčené struktuře hemoglobinu (M.J. Malin a kol., 1989, Am. J. Clin. path. 92: 286 294; M. J. malin a kol., 1992, Analyt. Chim. Acta, 262: 67 - 77). Z těchto a ještě dalších důvodů nemusí současné reagenční látky a metody ke stanovení Hb, používané pro určité automatické měření přístroje, na příklad analyzátorovou řadu TECHNICON H*, pracovat vždy optimálně za podmínek vysokého počtu bílých krvinek. V takových případech je nutné vyvinout nové reagenční látky a tyto v oboru použít tam, kde je třeba se vyhnout nepřesnému řešení a kolísání výsledků mezi odlišnými měřicími přístroji nebo různými měřicími přístroji stejné řady, jako je řada analyzátorů TECHNICON H*.
Z hlediska oblíbeného klinického použití měření Hb úplné krve a z důvodů uvedených výše, jsou znalci v oboru naladěni jak k zachování přesnosti těchto zkoušek na spektrofotometrické bázi, tak i ke zlepšování podmínek analýzy a složení reagenčních směsí, používaných při metodách stanovení Hb. Pokud se týká složení reagenčních směsí pro měření a analýzu Hb, iontový kyanid používají stále pravidelně znalci v oboru, jako reagenční látku ke stanovení Hb, která má efektivní a přesné výsledky. V oboru jsou potřebné metody a reagenční směsi k měření a analýze Hb, které se mohou použít s přijatelnou přesností ve všech typech hematologických analyzátorů, na příklad kyanidová metoda Hb a reagenční směs, mající vynikající funkční vlastnosti v každém z analyzátorů řady TECHNICON H* s malou nebo žádnou mezisystémovou odchylkou.
Reagenční směsi musí být optimálně formulovány tak, aby všechny specifické vlastnosti a složky těchto reagenčních látek, včetně specifikace pH, kyanidu, celkové alkality, koncentrace povrchově aktivního činidla, osmolality a povrchového napětí dávaly přesné výsledky analýzy pro normální i abnormální vzorky krve, které mohou obsahovat normální i neobvykle vysokou hladinu buněk bílých krvinek.
Podstata vynálezu
Předmětem tohoto vynálezu je reagenční směs pro stanovení hemoglobinu v krevním vzorku, jehož podstata spočívá v tom, že obsahuje vodnou příměs nejméně jednoho povrchově aktivního činidla v množství, které je účinné pro hemolýzu buněk červených krvinek ve zmíněném vzorku a vznik micel; rozpustnou anorganickou kyanidovou sůl v množství, které je účinné pro vázání se na hemové molekuly, pocházející ze zmíněné hemolýzy krevních buněk; a pufr pH, schopný zachovat pH zmíněné směsi na hodnotě 10,0 až 11,2; kde zmíněná reagenční směs v příměsi se zmíněným krevním vzorkem nevyvolává interferenci od buněk bílých krvinek v automatických způsobech stanovení hemoglobinu.
Předmětem tohoto vynálezu je také způsob stanovení hemoglobinu ve vzorku celé krve, zahrnující smísení alikvotního množství zmíněného krevního vzorku s reagenční směsí na reakční směsi a analyzování této reakční směsi na automatickém hematologickém analyzačním přístroji za účelem stanovení hemoglobinu, jehož podstata spočívá v tom,že se jako reagenční směs použije reagenční směs popsaná výše.
-2CZ 294599 B6
Dále se uvádějí výhodná provedení tohoto vynálezu.
Výhodné provedení tohoto vynálezu spočívá ve směsi, jejíž pH je 10,4 až méně než 11,2 zvláště výhodně 10,8 až 11,1 a účelně 11,0.
Jiné výhodné provedení tohoto vynálezu spočívá ve směsi, kde povrchově aktivní činidlo je povrchově aktivní činidlo obsahující zwitterion (neboli obojetné (dále též obojetně) povrchově aktivní činidlo), zvolené ze souboru sestávajícího z C8-C18 alkylbetainů, alkylsulfobetainů, alkylamidobetainů a alkylamidosulfobetainů.
Zvláště výhodně směs obsahuje obojetné povrchově aktivní činidlo, které je zvoleno ze souboru sestávajícího z n-alkyld imethylaminiomethankarboxylátu (DAMC), n-alkyldimethylaminioethankarboxylátu (DAEC), n~alkyldimethylaminiopropankarboxylátu (DAPC), n-alkyldimethylaminiomethansulfonátu (DAMS), n-alkyldimethylaminioethansulfonátu (DAES), n-alkyldimethylaminioprepansulfonátu (DAPS), n-tetradecyldimethylaminiopropansulfonátu (TDABS), n-tetradecyldimethylaminiopropansulfonátu (DDAPS), n-hexadexyldimethylaminiopropansulfonátu, n-alkyldimethylamoniobutansulfonátu (DAB S), n-alkylamidomethandimethylamoniomethankarboxylátu, n-alkylamidomethandimethylamonioethankarboxylátu, kokoamidopropylbetainu (CAPB), kokoamidosulfobetainu (CASB), laurylamidopropylbetainu (LAB), n-alkylamidomethandimethylamoniomethansulfonátu, n-alkylamidoethandimethylamonioethansulfonátu a n-alkylamidopropandimethylamoniopropansulfonátu.
Jiné výhodné provedené tohoto vynálezu spočívá ve směsi, která obsahuje obojetné povrchově aktivní činidlo, které je zvoleno ze souboru sestávajícího z
N,N-dimethyllaurylamin-N-oxidu (DMLAO), N,N-dimethylmyristylamin-N-oxidu,
N,N-dimethylcetylamin-N-oxidu, N,N-dimethylstearylamin-N-oxidu, 3-[(3-cholamidopropyl)dimethylamonio]-l-propansulfonátu (CHAPS) a 3-[(3-cholamidopropyl)dimethylamonio]-2-hydroxy-l-propansulfonátu (CHAPSO), jakož i ve směsi, která obsahuje povrchově aktivní činidlo zvolené ze souboru sestávajícího z alkyltrimethylamoniumhydroxidů s dlouhým řetězcem, kationtových kvartérních amoniových halogenidů a solí C]2-C18 alkylsulfátů s alkalickými kovy.
Výhodné provedení tohoto vynálezu spočívá se směsi, kde povrchově aktivní činidlo je přítomno v koncentraci 10 až 40 gramů na litr.
Jiné výhodné provedení tohoto vynálezu spočívá se směsi, kde pufr pH je zvolen ze souboru sestávající z kyseliny 3-(cyklohexylamino)-l-propansulfonové (CAPS), tetraburátu sodného, uhličitanu draselného, uhličitanu vápenatého a uhličitanu sodného.
Výhodné provedení tohoto vynálezu spočívá ve směsi, kde pufr pH je přítomen v koncentraci 0,05 až 0,15 M.
Jiné výhodné provedení tohoto vynálezu spočívá ve směsi, jež obsahuje dále zásadu, kterou je hydroxid alkalického kovu nebo tetraalkylamoniumhydroxid, kde alkylová skupina obsahuje 1 až 4 atomy uhlíku.
Při výhodném provedení tohoto vynálezu směs obsahuje anorganickou kyanidovou sůl, která je zvolena ze souboru sestávajícího z kyanidu hořečnatého, kyanidu sodného, kyanidu lithného a kyanidu amonného. Zvláště výhodně ve směsi je zásada přítomna v koncentraci 0,05 až 0,5 mol na litr a kyanidová sůl je přítomna v koncentraci 0,5 až 5 gramů na litr.
Výhodné provedení tohoto vynálezu spočívá v reagenční směsi pro stanovení hemoglobinu v krevním vzorku, která obsahuje vodnou příměs nejméně jednoho obojetného povrchově aktivního činidla v množství, které je účinné pro hemolýzu krevních buněk ve zmíněném vzorku a vznik micel; rozpustnou anorganickou kyanidovou sůl v množství, které je účinné pro vázání se na hemové molekuly, pocházející ze zmíněné hemolýz krevních buněk; alkalickou zásadu a pufr pH, schopné zachovat pH této reagenční směsi na hodnotě 10,4 až méně než 11,2; přičemž zmíněná reagenční směs v příměsi se zmíněným krevním vzorkem nevyvolává interferenci od buněk bílých krvinek v automatických metodách stanovení hemoglobinu.
Při výhodných provedeních způsobu stanovení hemoglobinu ve vzorku celé krve, zahrnujícím smíšení alikvotního množství zmíněného krevního vzorku s reagenční směsí na reakční směs a analyzování této reakční směsi na automatickém hematologickém analyzačním přístroji za účelem stanovení hemoglobinu, se výhodně, zvláště výhodně a účelně používají provedení uvedená výše.
Z výše uvedeného je zřejmé, že cílem tohoto vynálezu je zlepšený způsob a stabilní reagenční směs pro měření hemoglobinu a stanovení v celé krvi. Způsob a směs podle tohoto vynálezu zahrnující reagens s obsahem kyanidu, který se může univerzálně použít v různých typech analyzátorů hemoglobinu, zvláště automatizovaných systémech řady TECHNICOL H*™, pro spektrofotometrické stanovení hemoglobulinu v normálních i abnormálních krevních vzorcích.
Dalším cílem předloženého vynálezu je poskytnutí způsobu a reagenční směsi, které slouží k dosažení přesného stanovení hemoglobulinu za použití vzorků celé krve s normální hladinou buněk bílých krvinek, jakož i vzorků krve se zvýšenou a abnormálně vysokou hladinou buněk bílých krvinek, řádově alespoň přibližně 8 x 103 buněk bílých krvinek na mikrolitr nebo více. Směs a způsob podle předloženého vynálezu skutečně mohou poskytnout přesné hodnoty hemoglobulinu u krevních vzorků s obsahem nejméně asi 60 x 103 buněk bílých krvinek na mikrolitr.
Ještě dalším cílem předloženého vynálezu je poskytnout reagenční směs pro hemoglobin s obsahem kyanidu, která zahrnuje výše popsané zvláštní znaky reakčních činidel a reagenční pH, které brání nepřípustné nepřesnosti výsledků, zvláště u analýzy krevních vzorků s vysokou hladinou buněk bílých krvinek. Zvláště reagenční směsi podle tohoto vynálezu mají pH v rozmezí kolem 10,0 až 11,2, lépe v rozmezí kolem 10,4 až 11,2 a nejlépe v rozmezí 10,8 až 11,2. Tyto reagenční látky poskytují přesná měření hemoglobulinu ve všech analyzovaných krevních vzorcích a zmírňují problémy s mezisystémovým odchylkami při provádění těchto měření. Při způsobech podle tohoto vynálezu reaguje výše popsaná reagenční látka s krevním vzorkem na vodnou reakční směs pro stanovení hemoglobinu v krvi.
Podrobný popis vynálezu
Předložený vynález přináší zlepšení ve způsobech a reagenčních látkách, používaných k provádění přesného stanovení hemoglobulinu v normálních i abnormálních vzorcích celé krve. Zvláštní
-4CZ 294599 B6 způsob a reagenční látka podle tohoto vynálezu jsou vhodné k použití na poloautomatických plně automatických spektrofotometrických analyzátorech. Zvláště výhodně pro použití jsou analyzátorové systémy pro stanovení hemoglobulinu dostupné u nabyvatele tohoto patentu, včetně hematologických analyzátorů řady TECHNICON H*™, na které výčet však není omezen. Vzorky kapalin, na kterých se tato měření provádí, zahrnují čerstvou celou krev, starou nebo skladovanou krev (např. po dobu asi 54 hodin), upravené zkušební vzorky a speciálně připravené kontroly a kalibrátory, odvozené od celé krve, používané k provozování a/nebo kalibraci hematologických analyzátorů.
Vývoj zlepšeného způsobu stanovení hemoglobulinu a reagenční směsi podle tohoto vynálezu vznikl z nečekaného nedostatku přesnosti výsledků, získaných pomocí běžně dostupných reagencií pro stanovení hemoglobulinu s obsahem kyanidu u automatizovaných způsobů při analýze krevních vzorků s mírným až mimořádně vysokým počtem buněk bílých krvinek. Nesprávné údaje a nepřijatelné nepřesnosti byly zvláště a nečekaně zaznamenány při provádění měřicích analýz hemoglobulinu na krevních vzorcích s minimálním počtem buněk bílých krvinek, minimálně asi 8 x 103 buněk na mikrolitr, při použití komerčních kyanidových reagenčních látek pro hemoglobulin s reagenčním pH asi 11,5 až 11,6.
Nepřesnost byla pozorována také při použití automatizovaných analyzátorů, např. hematologických přístrojů řady TECHNICON H*™, kde se krevní vzorek mísí s reagenční látkou pro hemoglobulin po určitou dobu (např. asi 30 sekund) k vytvoření reakční směsi před vlastní analýzou hemoglobulinu v automatickém systému. Bylo zjištěno, že výsledná nepřijatelná nepřesnost byla důsledkem interference buněk bílých krvinek v krevním vzorku, a nebyla způsobena komponentou krevních destiček. Příklad 4 ukazuje, že buňky bílých krvinek a nikoli krevní destičky jsou příčinou interference při měření hemoglobulinu.
Původce tohoto vynálezu zjistil, že přítomnost vysokého počtu buněk bílých krvinek v krevním vzorku vedla k interferenci v hemoglobulinovém kanálu měřicího přístroje, a tím byly výsledky stanovení hemoglobulinu zkreslené. Tabulky 1 a 2 představují údaje, ilustrující náhodné a chybné výsledky získané u jednoho analyzovaného krevního vzorku hemoglobulinu (vždy s 10 opakovanými měřeními) při použití reagenční látky pro hemoglobulin, obsahující kyanid, spH 11,6 (tabulka 1) v porovnání se stejným krevním vzorkem, analyzovaným s reagenční látkou pro hemoglobulin po úpravě pH na 11,2 přidáním kyseliny chlorovodíkové (tabulka 2).
Tabulka 1
Deset opakovaných analýz jednoho krevního vzorku, reagens Hb s pH 11,6
| Číslo opakovaného měření | WBCP1 | RBC | Hb | MCV2 | PLT | MPV3 | WBCB4 | HCT5 |
| 1 | 26,9 | 5,69 | 15,4 | 81,7 | 772 | 8,6 | 26,59 | 46,5 |
| 2 | 27,07 | 5,69 | 15,2 | 81,4 | 764 | 8,6 | 26,90 | 46,3 |
| 3 | 27,28 | 5,77 | 16,0 | 81,5 | 765 | 8,5 | 27,46 | 47,1 |
| 4 | 26,82 | 5,68 | 15,1 | 81,3 | 786 | 8,5 | 27,76 | 46,2 |
| 5 | 26,09 | 5,73 | 16,4 | 81,3 | 778 | 8,4 | 27,73 | 46,6 |
| 6 | 26,35 | 5,77 | 15,0 | 81,5 | 782 | 8,6 | 28,42 | 47,0 |
| 7 | 27,11 | 5,61 | 15,1 | 81,4 | 786 | 8,6 | 27,30 | 45,7 |
| 8 | 26,20 | 5,66 | 15,4 | 81,2 | 764 | 8,5 | 27,74 | 45,9 |
| 9 | 26,74 | 5,66 | 15,8 | 81,5 | 773 | 8,5 | 28,64 | 46,2 |
| 10 | 26,23 | 5,77 | 15,7 | 81,5 | 775 | 8,4 | 28,79 | 47,0 |
| průměr | 26,76 | 5,70 | 15,5 | 81,4 | 775 | 8,5 | 27,73 | 46,5 |
| S.D. | 0,379 | 0,055 | 0,46* | 0,14 | 8,5 | 0,08 | 0,721 | 0,48 |
| C.V. | 1,4 | 1,0 | 2,9* | 0,2 | 1,1 | 0,9 | 2,6 | 1,0 |
hodnoty překračující specifikaci
WBCP: počet bílých krvinek z peroxidázového kanálu MCV: střední objem červených krvinek
MPV: střední objem destiček
WBCB: počet bílých krvinek z bazofílového kanálu HCT: hematokrit
Tabulka 2
Deset opakovaných analýz jednoho krevního vzorku; reagens Hb s pH 11,2
| Číslo opakovaného měření | WBCP1 | RBC | Hb | MCV2 | PLT | MPV3 | WBCB4 | HCT5 |
| 1 | 26,79 | 5,72 | 15,1 | 81,5 | 755 | 8,4 | 27,47 | 46,6 |
| 2 | 26,51 | 5,73 | 15,1 | 81,3 | 733 | 8,4 | 27,67 | 46,6 |
| 3 | 26,53 | 5,70 | 14,8 | 81,1 | 752 | 8,4 | 27,62 | 46,3 |
| 4 | 26,70 | 5,70 | 15,1 | 80,9 | 745 | 8,4 | 27,65 | 46,2 |
| 5 | 26,44 | 5,75 | 14,9 | 80,8 | 782 | 8,3 | 27,66 | 46,4 |
| 6 | 26,67 | 5,76 | 15,0 | 80,6 | 751 | 8,3 | 27,27 | 46,4 |
| 7 | 26,62 | 5,72 | 15,3 | 80,5 | 765 | 8,3 | 28,06 | 46,1 |
| 8 | 26,40 | 5,79 | 15,0 | 80,6 | 749 | 8,3 | 27,62 | 46,7 |
| 9 | 27,05 | 5,84 | 15,2 | 81,0 | 777 | 8,4 | 28,79 | 47,3 |
| 10 | 27,9 | 5,77 | 15,0 | 80,9 | 764 | 8,3 | 28,27 | 46,7 |
| průměr | 26,69 | 5,75 | 15,1 | 80,9 | 757 | 8,4 | 27,81 | 46,5 |
| S.D. | 0,232 | 0,044 | 0,14 | 0,32 | 14,9 | 0,05 | 0,445 | 0,34 |
| C.V. | 0,9 | 0,8 | 1,0 | 0,4 | 2,0 | 0,6 | 1,6 | 0,7 |
počet bílých krvinek z peroxidázového kanálu počet bílých krvinek z bazofilním kanálu
Jak je vidět z tabulky 1, existuje nepřijatelný rozptyl hodnot opakovaných měření Hb. Na příklad měření 3 a 5 jsou daleko od průměrné hodnoty. Dvě nebo tři takové hodnoty s velkou odchylkou byly typicky získány na krevním vzorku s obsahem > 8 x 103 bílých krvinekAul a s pH 11,6 reagenční látky Hb. Na rozdíl od toho mají hodnoty v tabulce 2 přijatelnou nepřesnost. Výskyt hodnot s velkou odchylkou byl vyloučen snížením pH reagens Hb na 11,2.
Konkrétněji byla u několika zkoušených analyzátorových systémů TECHNICON H* zjištěna přítomnost „částeček“ v reakční směsi reagenční látky Hb a krve v bazofilním kanálu přímé cytometrie (Baso DC) v důsledku diferenciálního rozptylu světla, způsobeného přítomností částeček, ve srovnání s celkovou reakční směsí. Bazofílní kanál byl použit v režimu DC k detekci a na pomoc při popisu podstaty interferenčního problému u metody stanovení Hb. Protože bazofílní kanál registruje jádra všech leukocytů zbavená cytoplazma (s výjimkou bazofilů), pozorování zjistitelných událostí za použití bazofilního kanálu DC ukazuje, že interference, kterou způsobují bílé krvinky u metody Hb, má souvislost s jejich jádry. Jak znalci v oboru vědí, mezi populacemi krevních buněk mají bílé krvinky jádra (a DNA), zatímco červené krvinky adestičky nikoliv.
Se zvláštním ohledem na přímou cytometrii Baso obsahují systémy hematologických analyzátorů H* kanál Baso, ve kterém jsou analyzovány bílé krvinky (viz patent US 5 518 928, autor J. F. Cremins a kol.). V kanálu Baso jsou krevní buňky smíchány s reagenční látkou, která lýzuje červené krvinky a zbavuje cytoplazmy všechny bílé krvinky s výjimkou bazofilů. Většina bílých krvinek se tedy zjistí jako buněčná jádra. V předložené analýze byly krevní vzorky manuálně ředěny přibližně 60-krát v reagenční směsi Hb a pak smíšeny. Výsledná reakční směs byla zavedena do kanálu Baso přes aspirační režim přímé cytometrie (DC). Každá reakční směs byla
-6CZ 294599 B6 nasáta tímto způsobem celkem čtyřikrát po asi 30 sekundách. Pak byla tabelována střední hodnota +/- SD s platných počtů buněk.
Aniž bychom si přáli se vázat jakoukoliv speciální teorií, znečišťující částečky by mohly být agregáty na bázi DNA, které absorbují nebo rozptylují světlo rozdílné od celkového vzorku a tím způsobují interferenci. Protože tyto agregáty nejsou pravděpodobně homogenně rozptýleny v reakční směsi Hb, jejich poloha v průtokové komoře vůči dráze světlaje u každé reakční směsi jiná. V kanál Hb je proto v sérii deseti nasátí často pouze velmi malý počet (např. 2 až 4) hodnot s velkou odchylkou (viz tabulka 1, měření 3 a 5), které představují velký rozptyl v uvedené datové řadě. Na rozdíl od toho u kanálu Baso DC umožnil účinek proudění snímat detektorem mnohem větší objem reakční směsi tak, že každá reakční směs obsahující reagenční směs s pH kolem 11,6 a počet bílých krvinek = />8 x 103 buněk/ μΐ krve (tzn. s vysokým BC dávaly platný počet 1250 „událostí“ (tabulka 7). U reagenční směsi Hb s pH méně než asi 11,5 nebo 11,6, nebo s pH 11,6 u vzorku s nízkým BC byl platný počet 23 až 129 událostí BC v použití zde se vztahuje na bílé krvinky a destičky.
K dosažení přijatelných hodnot nepřesnosti (tzn. v mezích statistické specifikace) při stanovení Hb v krevních vzorcích všech typů, včetně vzorků s počtem bílých krvinek od asi 8 až 35 x 103 buněk/μΐ s vyšším, byla vyvinuta zlepšená reagenční směs, která byla použita v metodách stanovení Hb. Reagens podle tohoto vynálezu je vodný roztok, obsahující anorganickou kyanidovou sůl, a s reagenčním Hp v rozmezí 10,0 až 11,2, lépe 10,4 až asi 11,2 a nejlépe asi 10,8 až 11.2. Doporučené pH reagenční směsi je asi 10,9 až 11,1. Optimální rozsah pH reagenční směsi podle tohoto vynálezu je nad 10,8 a pod 11,2. Zvláště vhodné pH reagenční směsi je, na příklad, 11,0. Při přípravě a zkouškách reagenčních látek s reagenčním pH v rozmezí 10,8 až 11,2 dávaly tyto reagens v celém rozsahu pH v odstupňovaných zkouškách po 0,2 pH na automatickém hematologickém analyzátoru TECHNICON H* přijatelnou nepřesnost (viz příklad 6).
Zlepšená reagenční směs s obsahem kyanidu s výrazným a odlišným optimem pH od reagenčních směsí Hb, v současné době používaných při metodách Hb na měřicích přístrojích řady TECHNICON H*, zmírnila nepřijatelné hodnoty nepřesnosti u krve s vysokým Bc a dávala stabilní reagenční látku pro stanovení Hb. Předpokládaná doba skladovatelnosti reagenční směsi podle tohoto vynálezu bude delší v důsledku snížení reagenční hodnoty pH (tzn. z asi 11,4 a vyšší na asi 11,2 až 10,4, nejlépe 11,2 až asi 10,8). Důvodem je to, že se kyanid odbourává hydroxidovými ionty, které se vyskytují v reagenční látce spH 11,6 (Weigand a Tremilling, 1972, J. Org. Chem. 37:914). Příklady 5 a 6 popisují zkoušky, provedené k vyhodnocení vlivu reagenčního pH na výsledné hodnoty Hb u celkových krevních vzorků.
Reagenční směs Hb s obsahem kyanidu podle tohoto vynálezu obsahuje následující složky ve vodné příměsi: iontové povrchově aktivní činidlo, včetně kationaktivního, anionaktivního a obojetně aktivního činidla, nebo jejich směsí a kombinací; iontovou kyanidovou sloučeninu nebo kyanidovou sůl k zajištění kyanidových iontů, a vhodný pufr k dosažení a zachování vhodné alkalické reagenční pH podle tohoto vynálezu.
V reagenční směsi podle tohoto vynálezu způsobuje povrchově aktivní činidlo hemolýzu červených krvinek ve vzorku. Paralelně s tím se očekává také rozpouštění buněčných úlomků a plazmových lipidů a tvoření micel v důsledku působení povrchově aktivní složky. Při alkalickém pH ztrácí struktura Hb většinu ze svých solných můstků. Proteinová struktura Hb se dále narušuje vystavením hemových molekul složkám reagpnční směsi.
Aniž bychom si přáli se vázat jakoukoliv teorií, jmenovitě působení povrchově aktivní činidla a alkalické pH uvolňují herny z jejich vazby s globinem na směs železitých a železnatých hemů. Tyto herny oxidují na vzduchu na železitou formu. Dále nastává axiální vázání a micelizace železitých hemů a vznikají specifické konečné produkty, vyznačující se charakteristickým absorpčním spektrem. Oxidace hemového železa a vázání hemového železa kyanidem nastávají po uvolnění hemů z globinových molekul. U kyanidové reakce se kyanidy (2) vážou na herny
-7CZ 294599 B6 jako axiální ligandy. Železitý dikyanoporfyrin se extrahuje do dispergované micelární fáze a zaujímá polohu uvnitř micely (tzn. micelizovaný železitý dikyanoporfyrin), kde vytváří zabarvený (červenohnědý) produkt. Další popis biochemických mechanizmů a funkcí složek reagens Hb s obsahem kyanidů lze najít v M. Malin a kol., 1992, Anal. Chim. Acta, 262: 77.
Znalci v oboru vědí, že kyanidový ion po zavedení do krevního vzorku smíšením s reagenční směsí je optimálně volně k dispozici k chemickému slučování s hemovým železem a není proto příliš pevně vázán na svůj přidružený ion kovu. Podle tohoto vynálezu se kyanidový ion dodává nejlépe ve formě soli s anorganickým kationtem, zvláště kationtem alkalického kovu, nejlépe monovalentním kationtem, jako je sodík, lithium, draslík nebo amonium. Pro použití lze uvažovat kyanidové soli polyvalentních kovových kationtů, např. divalentních a trivalentních kovových kationtů, tyto polyvalentní ionty však nemusí dovolit optimální vázání kyanidu na hemové železo v reakční směsi v důsledku silné vazby polyvalentního kovového iontu na kyanid. O divalentních a trivalentních kationtech je dále známo, že tvoří nerozpustné hydroxidové precipitáty, které nejsou vhodné pro předložený vynález. Anorganická kyanidová sůl je přítomná ve směsi v koncentraci asi 0,5 až 5 g/1, nejlépe asi 1 až 2 g/1.
Vodný roztok reagenční směsi podle tohoto vynálezu zahrnuje výše popsané složky, rozpuštěné ve vodě a má konečné reagenční pH od 10,0 do asi 11,2, lépe od asi 10,4 do asi 11,0, ještě lépe asi od 10,8 do maximálně 11,2, nejlépe asi od 10,9 do 11.1. Optimální pH reagenční směsi je asi 11,0 v souladu s tímto vynálezem. Jedna nebo více pufrovacích složek v příměsi dává vhodné pH reagenční směsi. Předložená reagenční směs neobsahuje železitokyanidový ion. Osmolalita reagenční směsi Hb je asi 450 až 490 mosm/kg. Povrchové napětí reagenční směsi podle tohoto vynálezu je asi 31 - 32 dynů/cm.
Příklady iontových povrchově aktivních činidel, vhodných pro použití podle tohoto vynálezu, ale neomezených pouze na tyto, zahrnují obojetně aktivní, anionaktivní a kationaktivní činidla. Se zvláštním ohledem na obojetně aktivní povrchová činidla lze pro použití podle tohoto vynálezu uvažovat několik obecných tříd těchto povrchově aktivních činidel. Příklady vhodných tříd obojetně povrchově aktivních činidel jsou betainy, včetně karboxybetainů, sulfobetainů (známé také jako sultainy), amidobetainů a sulfoamidobetainů. Zvláště zajímavé jsou Cg-Cig-, nejlépe Cio-Cis - alkylbentainy, sulfobetainy, amidobetainy a sulfoamidobetainy, na příklad laurylamidopropylbetainového (LAB) typu. Směsi a kombinace povrchově aktivních činidel se mohou také použít ve směsi a metodě podle tohoto vynálezu.
Některé příklady vhodných obojetně povrchově aktivních činidel v betainové třídě zahrnují n - alkyldimethylamoniometankarboxylát (DAMC), n - alkyldimetylamonioetankarboxylát (DAEC) a n - alkyldimethylamoniopropankarboxylát (DAPC).
Některé příklady sulfobetainové třídy obojetně povrchově aktivních činidel zahrnují n - alkylsultainy nebo n- alkyldimeethylamonioalkylsulfonáty, jako je n - alkyldimethylamoniometansulfonát (DAMS), n - alkyldimetylamonioetansulfonát (DAES), n - alkyldimetylamoniopropansulfonát (DAPS) a n - alkyldimetylamoniobutansulfonát (DABS).
Z obojetně povrchově aktivních činidel DAPS jsou zvláště vhodné TDAPS, kde „T“ je n - tetradecyl DDAPS, kde „D“ je dodecyl, a hexadecyldimetylamoniopropansulfonát.
-8CZ 294599 B6
Amidobetainy zahrnují mj.
n - alkylamidometandimetylamoniometankarboxylát nebo n - alkylamidometandimetylamonioetankarboxylát.
Preferovaný amidobetain je laurylamidopropylbetain (LAB). Vhodné jsou také analogické amidobutainsulfonáty, jako n - alkylamidometandimetylamoniometansulfonát, n - alkylamidoetandimetylamonioetansulfonát a n - alkylamidopropandimetylamoniopropansulfonát.
Vedle toho lze uvažovat o použití amidobetainů, které mají jako zdroj mastné kyseliny kokosový olej, např. kokoamidopropylbetain (CAPB) a kkoamidosulfobetain (CASB). Další popis betainů, sulfobetainů, amidobetainů a amidosulfobetainů je možné nalézt v příslušné literatuře, na příklad S. Takano a kol. 1977, J. Amer. Oil Chem. Soc., 54:139 - 143 a 484 - 486; Z. El. Rossi Cs Horvath, 1982, Chromatographia, 15: 75 - 82; Kaminski a linfíeld, 1979, J. Amer. Oil Chem. Soc., 56: 771 -773.
Další obojetně povrchově aktivní činidla, vhodná pro použití podle tohoto vynálezu, zahrnují N,
N - dimethyllaurylamin N - oxid (známý také jako DMLAO nebo LO), N,N - dimetylmyristylamin N - oxid, N, N - dimethylcetylamin N - oxid a N, N - dimetylstearylamin N - oxid. Vhodná pro použití jsou také obojetně povrchově aktivní činidla, která zahrnují 3 - [3 - cholamidopropyl) dimetylamonio] - 1 -propansulfonát (CHAPS) a 3- [3 - cholamidopropyl) dimetylamonio] - 2 - hydroxy - 1 - propansulfonát (CHAPSO).
Některá anionaktivní povrchová činidla, která lze zahrnout do použití, jsou soli alkalických kovů C12-C18 - alkylsulfonátů, na příklad laurylsulfát sodný, laurylsulfát lithný a myristylsulfát sodný. Obecně má iontové povrchově aktivní činidlo uhlovodíkový řetězec s asi 12 až 18 atomy uhlíku, obvykle nerozvětvený, s jednou iontovou hlavní skupinou. Hlavní skupina může být kationaktivní, anionaktivní nebo obojetně aktivní.
Jiné třídy iontových povrchově aktivních činidel, které lze uvažovat pro použití podle tohoto vynálezu, zahrnují alkyltrimetylamoniumhydridy, zvláště alkyltrimetylamoniumhydridy s dlouhým řetězcem, jako stearyltrimetylamoniumhydrid, lauryltrimetylamoniumhydrid, myristiltrimetylamoniumhydrid a ctyltrimetylamoniumhydrid.
Další třída iontových povrchově aktivních činidel zahrnuje kationaktivní kvartérní amonné halidy, nejlépe Cj2 - C]g alkyltrimetylamoniumhalidy. Na příklad alkyl Ci2 - Cjg může být cetyl, stearyl, myristil nebo lauryl; halidy mohou být chloridy nebo bromidy nebo fluoridy. CTAB neboli cetyltrimetylamoniumbromid je příklad. Obecně je povrchově aktivní činidlo přítomno ve směsi v koncentraci asi 10 až 40 g na litr (g/1), lépe asi 15 až 25 g/1, a ještě lépe asi 20 g/1. Přednostní použití podle tohoto vynálezu mají obojetně povrchově aktivní činidla.
Pufrovací systémy (nebo pufry) pro použití v této reagenční směsi Hb a metodě mají odolnost vůči změně pH reagenčního roztoku. V oboru konvenčně používané pufru s odpovídajícími hodnotami pK pro zachování reagenčního pH v rozmezí 10,0 až asi 11,2, lépe asi 10,8 až asi 11,1, a nejlépe asi 10,9 až 11,1 se mohou obecně použít v reagenční směsi Hb podle tohoto vynálezu. Optimální pH reagenční směsi je kolem 11,0. Příklady vhodných pufrů jsou mj. kyselina 3 - [cyklohexylamino] - 1 - propansulfonová (CAPS); borax (tzn. tetraborát sodný);
-9CZ 294599 B6 karbonáty, jako uhličitan draselný, vápenatý nebo sodný a TRIS. Pufry se používají ve směsi podle tohoto vynálezu v koncentraci kolem 0,05 M až 0,15 M, lépe asi 0,075 M až 0,125 M a nejlépe asi 0,10 M. Přednostní je pufrovací systém pH, obsahující borax (0,05 M) a NaOH (0,1 M), ve kterém se krevní vzorek ředí 250 x tak, aby konečné pH reakční směsi krev - reagenční látka bylo v přijatelném rozsahu pH pro tento vynález.
Reagenční směs podle tohoto vynálezu může zahrnovat alkalická činidla (zásady), podle potřeby a přiměřeně s vhodnými pufry. Vhodné zásady zahrnují mj. hydroxidy alkalických kovů, jako hydroxid sodný nebo hydroxid draselný. Také vhodné pro použití jsou zásady, jako tetraalkylamoniumhydrid, kde alkylová skupina může obsahovat 1 až 4 uhlíkové atomy, na příklad tetrabutylamoniumhydrid. Tato zásady je přednostně přítomná ve směsi v množství asi 0,05 až 0,5 mol/1, lépe asi 0,05 až 0,2 mol/1, ještě lépe kolem 0,1 mol/1.
Obecně metoda podle tohoto vynálezu zahrnuje smíšení krevního vzorku s reagenční směsí podle tohoto vynálezu na reakční směs. Z reakce komponent reagenční směsi vzniklý reakční produkt s přirozeně se vyskytujícími hemoglobinovými druhy v krevním vzorku (celková krev nebo kalibrátor nebo kontrolní materiál) se zjišťuje spektrofotometricky na 546 nm. Mezi přirozeně se vyskytujícími hemoglobinovými druhy, které lze měřit pomocí metody a reagenční směsi podle tohoto vynálezu jsou deoxyhemoglobin, oxyhemoglobin, methemoglobin, fetální hemoglobin, karboxyhemoglobin a srpkovitý hemoglobin. Krevní vzorek se zředí asi 250 krát (přesněji 251 - krát: 250 objemových jednotek reagenční směsi plus 1 objemová jednotka krevního vzorku) s reagenční látkou a výsledný reakční produkt má reprodukovatelné absorpční spektrum a maximální absorpcí na 549,5 nm (M. Malin a kol., 1992, Anal. Chim. Acta, 262 : 67).
Příklady
Následující příklady, jak jsou zde uvedeny, mají za účel ilustrovat na příkladech různá hlediska realizace vynálezu a nemají za cíl vymezit vynález žádným způsobem.
V příkladech dále jsou použity následující zkratky: BC : bufry coat; % CV: koeficient variace; df: stupeň volnosti; DC: přímá cytometrie; Hb: hemoglobin; PLT: destičky; počet PLT: PLT x 103/μ1; RBC: červené krvinky; počet RBC: RBC x 106/μ1; SD: standardní odchylka; WBC: bílé krvinky; počet WBC x 103/μΙ; WBCB: počet bílých krvinek,získaný z bazofilního kanálu hematologického systému H*; WBCP: počet bílých krvinek, získaný zperoxidázového kanálu hematologického systému H*.
Příklad 1
Příprava normálních a speciálně manipulovaných krevních vzorků
V experimentech, sestavených k testování funkce různých reagenčních látek Hb a k měření a stanovení Hb a počtu krvinek v různých typech krevních vzorků, byla odebrána úplná krev dobrovolníkům v Bayer Corporatioj („normální“ krevní vzorky) do zkumavek Vacutainer, antikoagulovaný pomocí EDTA (nejlépe K3EDTA) a uložena při normální teplotě. Tyto normální krevní vzorky byly rutinně použity do 8 hodin po odběru. Úplná krev byla odstředěna při 25 000 ot/min (700 x g) 30 minut k oddělení BC (definovaného jako bílé krvinky a destičky) od červených krvinek. Krevní vzorky byly rovněž upraveny k dosažení zkušebních vzorků s určitými vlastnostmi. Na příklad, úprava počtu bílých krvinek na asi 15 až 20 x 103 buněk/μΐ krve, BC ze dvou až tří zkumavek se zkombinoval do jedné zkumavky od stejného dárce krevního vzorku.
Při přípravě upraveného krevního vzorku na nízký WBC, vysoký PLT a normální RBC bylo osm zkumavek od jednoho dárce odstřeďováno při 2500 ot/min po dobu 25 minut. Plazmy byly převedeny do čistých zkumavek. BC byly převedeny do dvou hematokritových zkumavek
-10CZ 294599 B6
Wantrobe a tyto zkumavky byly odstřeďovány jako výše. Plazmová vrstva a většina vrstvy PLT byla převedena ze zkumavky Wintrobe do malé čisté zkumavky. Byl přidán 1 ml plazmy a zkumavka byla odstřeďována při 1000 ot/min po dobu 10 minut. Kapalina nad usazeninou pak byla dekantována do zkumavky, obsahující pouze RBC; plazma byla doplněna na původní objem a smíšena.
K přípravě upraveného krevního vzorku s vysokým WBC, nízkým PLT a normálním RBC byla vrstva WBC převedena ze zkumavky Wintrobe do zkumavky, obsahující pouze RBC. Plazma byla doplněna na původní objem a smíšena.
Příklad 2
Statistika: Validace experimentální konstrukce na bázi N = 10
Zkoušky za účelem vyhodnocení funkčních vlastností různých dávek zkušebních reagenčních směsí Hb, zvláště dávek s rozdíly v reagenčním pH, pro metodu stanovení Hb obsahovaly obecně tři prvky: negativní kontrola reagenční látky a zkušební reagenční látku, z nichž obě musely projít specifikací prováděné metody na automatickém analyzátoru, a pozitivní kontrolu reagenční látky, která nesměla splnit podmínky specifikace. Všechny datové soubory obsahovaly deset opakovaných měření. Specifikace zahrnovala SD a %CV.
Jako ilustrativní příklad pro účely systému TECHNICON H* byly předepsány dvě hodnoty pro metodu Hb, a to 0,124 pro SD a 0,78 pro %CV. U tohoto přístroje byla předepsána hodnota SD dodržena až do Hb = 15,9 g/dL, tzn. [100 (0,124/0,78) = 15,9], Při hodnotě SD nad 15,9 g/dl byla rozhodující předepsaná hodnota %CV. To znamená, že nad 15,9 g/dL bylo možné nesplnit předepsanou hodnotu SD, ale splnit předepsanou hodnotu %CV a dosáhnout přijatelnou nepřesnost výsledků Hb.
Byla použita statistika CHI-SQUARE ke stanovení SC vzorku, která se výrazně lišila od specifikace 0,124 pro sadu deseti opakovaných měření na vzorek pro koncentrace Hb ve vzorku až do 15,9 g/dl včetně.
[s2 / sigma2] > CHI2o.95/df, kde s2 je variace vzorku, sigma2 je variace normální populace, CHI20j95/DF je statistika CHI-SQUARE na úrovni signifikace 5 %, [s2/(0,124)2] 1,88 s2> 1,88 (0,0154) s>0, 170, kde s je standardní odchylka vzorku.
Tedy pro N = 10 (a 9 df), jestliže SD > 0,17 pro určitou sadu dat, pak se tato sada významně liší od specifikace, SD % 0,124 (Dixon a Massey, 1983, Instroduction to Statistical Analysis, McGraw Hill, str.110). Podle toho v každé zkoušce funkční schopnosti s koncentracemi Hb ve vzorcích do 15,9 g/dl včetně bylo cílem získat SD > 0,17 u pozitivní kontrolní reagenční látky. Pozitivní kontrolní reagenční látka ukázala, že systém byl schopen reagovat na problém nepřijatelných hodnot nepřesnosti za podmínek zkoušky.
Pro koncentraci Hb ve vzorku nad 15,9 g/dl byla k výpočtu odpovídající SD použita specifikace %CV použitím vztahu Hb v g/dl = (SD x 100) / 0,78. Byla sestavena níže uvedená tabulka 3 a k výpočtu odpovídající SD vzorku, lišící se významně od specifikace, byla použita statistika CHI-SQUARE.
- 11 CZ 294599 B6
Tabulka 3
Hb, g/dL Specifikace SD SD vzorku, který se významně liší od specifikace s N = 10
| 16,0 | 0,125 | 0,171 |
| 17,0 | 0,133 | 0,182 |
| 18,0 | 0,140 | 0,192 |
| 19,0 | 0,148 | 0,203 |
| 20,0 | 0,156 | 0,214 |
| 21,0 | 0,164 | 0,224 |
| 22,0 | 0,172 | 0,236 |
| 23,0 | 0,179 | 0,245 |
| 24,0 | 0,187 | 0,256 |
| 25,0 | 0,195 | 0,267 |
V těchto vyhodnoceních byla rozhodnutí, týkající se přijatelnosti a nepřijatelnosti zkoušené reagenční látky, založena výhradně na specifikaci SD.
Příklad 3
Ilustrativní složení reagenční látky Hb, připravené podle tohoto vynálezu a použité pro stanovení Hb, jak je uvedeno v tabulce 4.
Tabulka 4
| Složka reagens | Množství/litr |
| boritan sodný zásada (hydroxid sodný) povrchově aktivní činidlo (lauryldimetylaminoxid, 30 g/lOOml ve vodě) kyanid draselný 10N hydroxid sodný 3 N kyselina chlorovodíková deionizovaná voda, qts. | 19,07 g 4,0 g 66 mL 1,3 až 1,6 g 0,65 mL podle potřeby 1 |
Reagenční směs byla po přípravě přefiltrována na polysulfonové nebo nylonové membráně 0,2 mikronu. Konečné pH této ilustrativní reagenční směsi bylo 11,0 při 25 +/- 3*C, celková alkalita nebyla menší než 180 mEq/1, vzhledově čirá bezbarvá kapalina, která podle vizuální kontroly v podstatě neobsahovala žádné tuhé částice.
Příklad 4
Určení, že bílé krvinky a nikoliv destičky jsou zdrojem interference vBC vzorku.
Byly provedeny experimenty ke stanovení, zda bílé krvinky nebo destičky jsou zdrojem interference v analýzách Hb, prováděných na hematologických analýzách řady TECHNICON H*. Byly připraveny a vyzkoušeny reagenční látky s obsahem kyanidu, které měly stejné přísady a lišily se v reagenčním pH. Pomocí těchto analýz bylo zjištěno, že krevní vzorky s vysokými BC (tzn. se zvýšenými hodnotami WBC a PLT manipulací) byly spojeny s velkou SD při použití s reagenční látkou Hb spH 11,6 a analyzovaných na systému TECHNICON H*3. Bylo tedy provedeno vyhodnocení ke stanovení vlivu vysokého WBC nebo PLT na nepřesnost za normálního počtu RBC.
- 12CZ 294599 B6
Jak uvádí tabulka 5, byly WBC a nikoliv PLT zjištěny jako příčina problému nepřesnosti v těchto analýzách. Na příklad, SD bylo 0,22, když WBCP (vysoké), LT (nízké) byly 26,25 a 71 (tzn. CHI-SQUARE splněna). Obráceně SD byla 0,08, když WBCP (nízké), PLT (vysoké) byly 0,24 a 938. Je třeba poznamenat, že proces frakcionalizace, použitý k přípravě upravených vzorků, způsobil vysoké WBC ve vzorku, který obsahoval 93 % neutrofílních látek, které jsou proto příčinou nepřesnosti při pH 11,6. Je tedy pravděpodobné, že jiné typy WBC vedle neutrofilních látek (tzn. lymfocytů, monocyt, bazofílů a eosinofílů) by přispěly k vysokým úrovním interference ve zkouškách pro stanovení Hb.
Tabulka 5 Zkouška na nepřesnost: WBC v závislosti na PLT
Zkušební reagenční látka Hb, pH 11,6
| Pokus č. | WBCP | RBC | PLT | Hb, g/dl | Spec. SD vzorku | %CV | CHI-SQ SD |
| 1 | 0,09 | 4,99 | 3 | 15,8 | 0,07 | 0,4 | >0,17 |
| 2 | 24,27 | 5,78 | 835 | 18,3 | 0,27* | 1,5 | > 0,203 |
| 3 | 2,79 | 4,78 | 836 | 15,1 | 0,08 | 0,5 | >0,17 |
| 4 | 0,24 | 5,14 | 938 | 16,3 | 0,08 | 0,5 | >0,182 |
| 5 | 26,25 | 4,95 | 71 | 15,6 | 0,22 | 1,4 | >0,17 |
Všechny vzorky byly připraveny jako v příkladu 1.
*: nesplnil specifikaci
Příklad 5
Zkoušky, ukazující že reagenční pH je v přímém spojení s nepřesností výsledků zkoušek Hb
K upřesnění, zda pH reagenční látky je nebo není příčinným faktorem snížení hodnot přijatelné nepřesnosti zkoušek Hb, bylo pH reagenčních látek Hb upraveno na hodnotu od 11,42 do 11.66. Byly připraveny další zkušební reagenční látky, u kterých bylo pH sníženo z 11,60 na 10,8 a na 11,2 a 11.3. Jak bylo popsáno výše, bylo zjištěno, že reagenční látky s pH nad asi 11,5 až do 11,6 (a vyšší, např. 11,66) dávaly nepřijatelně vysokou nepřesnost při měření Hb ve vzorcích s vysokým počtem bílých krvinek. Tyto zkoušky byly navrženy za účelem zjištění, zda změna pH dané reagenční látky Hb může tuto reagenční látku přeměnit na reagenční látku, dávající přijatelné hodnoty nepřesnosti v analýzách Hb, prováděných na systému hematologických analyzátorů H*. Různé reagenční látky Hb takto upravené byly zkoušeny na krevních vzorcích v automatickém hematologickém analyzátoru H* a bylo jim přiřazeno hodnocení podle kritéria „splnil“, „nesplnil“ podle toho, zda získaný výsledek měření Hb měl přijatelnou nepřesnost („splnil“) nebo nepřijatelnou nepřesnost („nesplnil“). Použité krevní vzorky pro tyto experimenty obsahovaly vzorek s vysokým BC (tzn. WBCP : RBC : PLT - 19,76 : 6,37 : 704) a vzorek s nízkým BC (tzn. WBCP : RBC : PLT - 0,66 : 4,98 : 14). Výsledky těchto zkoušek jsou uvedeny v tabulce 6.
Tabulka 6
Vliv úpravy pH na funkci zkušebních reagenčních látek Hb při použití hematologického měřicího přístroje TECHNICON H*
- 13 CZ 294599 B6
| Reagenční látka | PH | BC vzorku | HB, g/dL | SD | %CV | Splnil/Nesp lnil |
| 1 | 11,42 | vysoký | 18,3 | 0,10 | 0,50 | S |
| 11,66 | vysoký | 18,5 | 0,38* | 2,00 | N | |
| 1 | 11,66 | nízký | 14,1 | 0,11 | 0,80 | S |
| 2 | 11,60 | vysoký | 18,3 | 0,27* | 1,50 | N |
| 11,17 | vysoký | 18,2 | 0,11 | 0,60 | S | |
| 3 | 11,56 | vysoký | 18,8 | 0,44* | 2,30 | N |
| 11,29 | vysoký | 18,3 | 0,10 | 0,60 | S | |
| 2** | 10,80 | vysoký | 18,3 | 0,07 | 0,40 | S |
| 11,66 | vysoký | 18,9 | 0,68* | 3,60 | N |
Specifikace 11,2 - 11,6 specifikace nesplněna
SD________________________________________Spec, SD vzorku CH-SQUARE vysoký BC = WBCP : RBC : PLT = 19,76 : 6,37 : 704 0,148 > 0,203 nízký BC = WBCP : RBC : PLT = 0,66 : 4,98 : 14 0,124>0,170 **: V tomto případě bylo pH reagenční látky 2 (pH 10,8) sníženo na 10,8 zreagenční látky s vyšším pH (tzn. 11,66) přidáním 5 mM EDTA (tzn. Na2EDTA). U reagenční látky 2 (pH 11,66) bylo pH vráceno zpět na 11,6 po přidání 5 mM EDTA.
Výsledky z těchto studií ukazují, že pH bylo významným faktorem u reagenčních látek s pH 11,6 a vyšším, použitých v automatické metodě stanovení Hb. Na rozdíl od toho reagenční látky Hb s pH od asi 10,8 do 11,4 prošly zkouškou dobře. Doporučený rozsah pH směsi a metoda podle tohoto vynálezu, tzn. asi 10,4 až 11,2 nebo méně, lépe asi 10,8 až asi 11,2 nebo méně, byl zvolen tak, že mezi horní hranicí nové specifikace a pH, při kterém dochází k selhání metody (tzn. pH vyšší nebo rovné 11,6) efektivně vzniká „bezpečná“ zóna (tzn. pH 11,3 až 11,5). Vytvoření této bezpečné zóny bere v úvahu malou chybu při analýze pH.
Jak je vidět z výsledků v tabulce 6, hodnoty SD zkušebních reagenčních látek Hb s přijatelnou nepřesností se zlepšily z 0,27 a 0,44 na 0,11 a 0,10 po snížení pH reagenční látky až na pH reagenční látky podle tohoto vynálezu. Naproti tomu u reagenční látky s pH 11,66 se hodnota SD zhoršila, tzn. z 0,10 na 0,38 po zvýšení pH reagenční látky. CHI-SQUARE byla splněna ve všech případech, kdy pH reagenční látky bylo => 11,6 a vzorek obsahoval vysokou koncentraci BC (bílých krvinek a destiček).
Příklad 6
Variace pH a přesnost metody Hb
Byly provedeny další experimenty pro zjištění vlivů na nepřesnost dat, získaných po změně pH reagenční látky H a metody. Byla připravena řada reagenčních látek Hb, kde pH bylo nastaveno pomocí 6H HC1 ve stupních po 0,2 pH tak, aby vznikla řada reagens s hodnotami pH 11,6, 11,4, 11,2, 11,0, 10,8, 10,6 a 10,4. Nepřesnost byla vyhodnocena v rozsahu pH 10,4 až 11,6 aby se zjistilo, zda v tomto intervalu existuje minimální nepřesnost. Všechny reagenční látky v řadě byly zkoušeny na vzorku s vysokým BC, tzn. WBCP RBC : PLT = 26,75 : 5,70 : 775. Reagenční látka s pH 11,6 byla zkoušena také se vzorkem s nízkým BC jako kontrolní. Zda daná reagenční látka dala výsledky s přijatelnou nepřesností (splnil) nebo nepřijatelnou nepřesností (splnil) nebo nepřijatelnou nepřesností (nesplnil) bylo vyhodnoceno za použití statistiky CHI-SQUARE ve
- 14CZ 294599 B6 spojeni s aktuálními specifikacemi. Ve všech provedených zkouškách bylo jako kritérium splnil / nesplnil použita SD.
Data z těchto zkoušek jsou uvedena v tabulce 7. Tato data ukazují, že reagenční látky Hb, připravené podle tohoto vynálezu a mající pH v rozmezí asi 10,4 až 11,4, měly přijatelnou nepřesnost v dané metodě, i u krevního vzorku s vysokým BC. Další zkoušky ukázaly, že pH reagenční látky v rozmezí asi 10,00 až 10,4 také dává přijatelnou nepřesnost v dané metodě Hb. Na rozdíl od toho vykázala nepřijatelnou nepřesnost reagenční látka spH 11,6 na vzorku s vysokým BC. Velikost vzorku deset byla příliš malá, aby dovolila statisticky platné rozlišení mezi hodnotami SD v rozsahu pH 10,4 až 11,4 z hlediska zjištění možného minima SC. Vizuální kontrola výsledných hodnot SD však ukazuje, že minimum nepřesnosti je kolem pH 11,0. To dokládají také data z Baso DC, která vykazují minimální platný počet buněk při pH 11,0.
V tabulce 7 představují vzorky „N control“ a „H control“ normální kontrolní a vysoký kontrolní materiál. IN - dáte Test Point Hematology Control Materiál byl získán od Bayer Corporation, Business Group Diagnostics, Tarrytown, NY. Čísla jsou štítkové rozsahy, očekávané u těchto parametrů.
Tyto výsledky ukazují, že přijatelná nepřesnost byla získána u reagenční směsi Hb (tabulka 4) v rozmezí pH asi 10,4 až 11,2. Nepřijatelná nepřesnost byla získána spH 11.6. Všechny tyto zkoušky byly provedeny s manipulovaným krevním vzorkem, který obsahoval 26,76 x 103 bílých krvinek/μΐ. Na základě analýz Hb a Baso DC byla nalezena minimální nepřesnost měření Hb u reagenční látky Hb s pH asi 11,0 (v širším pásmu od asi 10,0 do asi 11,2 nebo méně).
WBCP : RBC : PLT = 0,6 : 4,98 : 14). Výsledky těchto zkoušek jsou uvedeny v tabulce 6).
Tabulka 7
Vliv změny pH z 11,6 na 10,4 na nepřesnost zkušebních reagenčních látek Hb
Baso DC
| Reagen. látka | PH | Vzorek | Hb, g/dl | SD | %CV | Splnil/ Nesplnil | Platný počet |
| zkušební | |||||||
| reagens 1 | 11,40 | celá krev | 14,2 | 0,7 | 0,50 | S | |
| N control | 13,5 | 0,06 | 0,40 | s | |||
| N control | 18,5 | 0,06 | 0,30 | s | |||
| zkušební | |||||||
| reagens 2 | 11,60 | HI buffy | 15,5 | 0,46* | 2,90 | N | 1250+/-1520 |
| 11,60 | LO buffy | 14,1 | 0,11 | 0,80 | s | 25+/-3 | |
| 11,40 | HI buffy | 15,0 | 0,09 | 0,60 | s | 92 +/-122 | |
| 11,20 | HI buffy | 15,0 | 0,09 | 0,60 | s | 29 +/-7 | |
| 11,00 | HI buffy | 15,0 | 0,05 | 0,30 | s | 23 +/-15 | |
| 10,80 | HI buffy | 15,0 | 0,07 | 0,50 | s | 55 +/-38 | |
| 10,60 | HI buffy | 15,1 | 0,11 | 0,70 | s | 77+/-10 | |
| 11,40 | HI buffy | 15,0 | 0,09 | 0,60 | s | 129 +/-50 | |
| průměrná hodnota | +0,12 | +0,8 |
Specifikace; *: specifikace překročena; všechny N = 10
-15 CZ 294599 B6
| WBCP | RBC | PLT | Hb | |
| N control | 7,42 +/- 0,85 | 4,48 +/- 0,2 | 212+/-30 | 13,2+/-0,5 |
| H control | 18,43+/-2,5 | 5,53 +/- 0,3 | 450 +/-60 | 17,9+/-0,7 SD CHI-SQUARE SD |
| úplná krev | 10,90 | 5,36 | 327 | 14,2 0,124 >0,17 |
| HI buffy c. | 26,76 | 5,70 | 775 | 15,5 0,124 >0,17 |
| LO buffy | 0,80 | 5,35 | 19 | 14,1 0,124 >0,17 |
Obsah všech patentů, patentových přihlášek, publikovaných článků, knih, odkazů, příruček a abstraktů zde citovaných se tímto zahrnuje odkazem v jejich celém znění do podrobnějšího popisu stavu techniky, kterého se vynález týká.
Protože je možné provést změny ve výše uvedeném tématu bez překročení rozsahu a myšlenky a ducha tohoto vynálezu, je záměrem, aby veškerá látka, obsažená ve výše uvedeném popisu nebo definovaná v připojených nárocích, byla interpretována jako popisná a ilustrativní, a nikoliv ve vymezujícím smyslu. Mnoho úprav a změn předloženého vynálezu je možných ve světle výše uvedených učebních materiálů. Proto je třeba chápat, že v rozsahu připojených nároků lze tento vynález praktikovat i jinak, než specificky uvedeno.
PATENTOVÉ NÁROKY
Claims (27)
1. Reagenční směs pro stanovení hemoglobinu v krevním vzorku, vyznačující se tím, že obsahuje vodnou příměs nejméně jednoho povrchově aktivního činidla v množství, které je účinné pro hemolýzu buněk červených krvinek ve zmíněném vzorku a vznikl micel, rozpustnou anorganickou kyanidovou sůl v množství, které je účinné pro vázání se na hemové molekuly, pocházející ze zmíněné hemolýzy krevních buněk, a pufr pH, schopný zachovat pH zmíněné směsi na hodnotě 10,0 až 11,2 kde zmíněná reagenční směs v příměsi se zmíněným krevním vzorkem nevyvolává interferenci způsobenou buňkami bílých krvinek v automatických způsobech stanovení hemoglobinu.
2. Směs podle nároku 1, vyznačující se tím, žepH reagenční směsi je od 10,4 do 11,2.
3. Směs podle nároku 1, vy z n a č uj í c í se t í m , že pH reagenční směsi je 10,8 až 11,1.
4. Směs podle nároku 1,vyznačující se tím, že pH reagenční směsi je 11,0.
5. Směs podle nároku 1, vyznačující se tím, že povrchově aktivní činidlo je obojetné povrchově aktivní činidlo, zvolené ze souboru sestávajícího z C8 až C]8 alkylbetainů, alkylsulfobetainů, alkylamidobutainů a alkylamidosulfobetainů.
6. Směs podle nároku 5, vy z n a č u j í c í se t í m , že obojetné povrchově aktivní činidlo je zvoleno ze souboru sestávajícího z n-alkyldimethylaminiomethankarboxylátu (DAMC), n-alkyldimethylaminioethankarboxylátu (DAEC), n-alkyldimethylaminiopropankarboxylátu (DAPC), n-alkyldimethylaminiomethansulfonátu (DAMS), n-alkyldimethylaminioethansulfonátu (DAES),
-16CZ 294599 B6 n-alkyldimethylaminioprepansulfonátu (DAPS), n-tetradecyldimethylaminiopropansulfonátu (TDABS), n-tetradecyldimethylaminiopropansulfonátu (DDAPS), n-hexadexyldimethylaminiopropansulfonátu, n-alkyldimethylamoniobutansulfonátu (DABS), n-alkylamidomethandimethylamoniomethankarboxylátu, n-alkylamidomethandimethylamonioethankarboxylátu, kokoamidopropylbetainu (CAPB), kokoamidosulfobetainu (CASB), laurylamidopropylbetainu (LAB), n-alkylamidomethandimethylamoniomethansulfonátu, n-alkylamidoethandimethylamonioethansulfonátu a n-alkylamidopropandimethylamoniopropansulfonátu.
7. Směs podle nároku 1,vyznačující se tím, že obojetné povrchově aktivní činidlo je zvoleno ze souboru sestávajícího z
N,N-dimethyllaurylamin-N-oxidu (DMLAO), N,N-dimethylmyristylamin~N-oxidu, N,N-dimethylcetylamin-N-oxidu,
N, N-dimethylstearylamm-N-oxidu, 3-[(3-cholamidopropyl)dimethylamonio]-l-propansulfonátu (CHAPS) a 3-[(3-cholamidopropyl)dimethylamonio]-2-hydroxy-l-propansulfonátu (CHAPSO).
8. Směs podle nároku 1,vyznačující se tím, že povrchově aktivní činidlo je zvoleno ze souboru sestávajícího z alkyltrimethylamoniumhydroxidů s dlouhými řetězcem, kationtových kvartérních amoniových halogenidů a solí C]2 až C|8 alkylsulfonátů s alkalickými kovy.
9. Směs podle nároku 1,vyznačující se tím, že povrchově aktivní činidlo je přítomno v koncentraci 10 až 40 gramů na litr.
10. Směs podle nároku 1, vyznačující se tím, že pufr pH je zvolen ze souboru sestávajícího z kyseliny 3-(cyklohexylamino)-l-propansulfonové (CAPS), tetraborátu sodného, uhličitanu draselného, uhličitanu vápenatého a uhličitanu sodného.
11. Směs podle nároku 1, vyznačující se tím, že pufr pH je ve směsi přítomen v koncentraci 0,05 až 0,15 M.
12. Směs podle nároku 1, vyznačující se tím, že obsahuje dále zásadu, kterou je hydroxid alkalického kovu nebo tetraalkylamoniumhydroxid, kde alkylová skupina obsahuje 1 až 4 atomy uhlíku.
13. Směs podle nároku 1,vyznačující se tím, že anorganická kyanidová sůl je zvolena ze souboru sestávajícího z kyanidu horečnatého, kyanidu sodného, kyanidu lithného a kyanidu amonného.
14. Směs podle nároku 12, v y z n a č u j í c í se t í m , že zásada je přítomna v koncentraci
O, 05 až 0,5 mol na litr a kyanidová sůl je přítomna v koncentraci 0,5 až 5 gramů na litr.
15. Reagenční směs pro stanovení hemoglobinu v krevním vzorku podle nároku 1, vyznačující se tím, že obsahuje vodnou příměs nejméně jednoho obojetného povrchově aktivního činidla v množství, které je účinné pro hemolýzu krevního činidla v množství, které je účinné pro hemolýzu krevních buněk ve zmíněném vzorku a vzniku micel, rozpustnou anorganickou kyanidovou sůl v množství, které je účinné pro vázání se na hemové molekuly, pocházející ze zmíněné hemolýzy krevních buněk, alkalickou zásadu a pufr pH, schopné zacho
- 17CZ 294599 B6 vat pH této reagenční směs v příměsi se zmíněným krevním vzorkem nevyvolává interferenci způsobenou buňkami bílých krvinek v automatických metodách stanovení hemoglobinu.
16. Způsob stanovení hemoglobinu ve vzorku celé krve, zahrnující smísení alikvotního množství zmíněného krevního vzorku s reagenční směsí na reakční směs a analyzování této reakční směsi na automatickém hematologickém analyzačnímpřístroji za účelem stanovení hemoglobinu, vyznačující se tím, že se jako reagenční směs použije reagenční směs podle nároku 1.
17. Způsob podle nároku 16, vyznačující se tím, žepH reagenční směs je 10,4 až 11,2.
18. Způsob podle nároku 16, vyznačující se tím, žepH reagenční směsi je 10,8 až 11,2.
19. Způsob podle nároku 16, vyznačující se tím, že povrchově aktivním činidlem v reagenční směsi je obojetné povrchově aktivní činidlo, zvolené ze souboru sestávajícího z C8 až Cis alkylbetainů, alkylsulfobetainů, alkylamidobetainů, alkylamidosulfobetainů nebo jejich kombinace.
20. Způsob podle nároku 19, vyznačující se tím, že obojetné povrchově aktivní činidlo se volí ze souboru sestávajícího z n-alkyldimethylaminiomethankarboxylátu (DAMC), n-alkyldimethylaminioethankarboxylátu (DAEC), n-alkyldimethylaminiopropankarboxylátu (DAPC), n-alkyldimethylaminiomethansulfonátu (DAMS), n-alkyldimethylaminioethansulfonátu (DAES), n-alkyldimethylaminioprepansulfonátu (DAPS), n-tetradecyldimethylaminiopropansulfonátu (TDABS), n-tetradecyldimethylaminiopropansulfonátu (DDAPS), n-hexadexyldimethylaminiopropansulfonátu, n-alkyldimethylamoniobutansulfonátu (DABS), n-alky lam idomethand imethy lamoniomethankarboxylátu, n-alkylamidomethandimethylamonioethankarboxylátu, kokoamidopropylbetainu (CAPB), kokoamidosulfobetainu (CASB), laurylamidopropylbetainu (LAB), n-alkylamidomethandimethylamoniomethansulfonátu, n-alkylamidoethandimethylamonioethansulfonátu a n-alkylamidopropandimethylamoniopropansulfonátu.
21. Způsob podle nároku 16, vyznačující se tím, že povrchově aktivní činidlo v reagenční směsi se volí ze souboru sestávajícího z
N,N-dimethyllaurylamin-N-oxidu (DMLAO), N,N-dimethylmyristylamin-N-oxidu, N,N-dimethylcetylamin-N-oxidu, N,N-d imethylstearylamin-N-oxidu, 3-[(3-cholamidopropyl)dimethylamonio]-l-propansulfonátu (CHAPS) a 3-[(3-cholamidopropyl)dimethylamonio]-2-hydroxy-l-propansulfonátu (CHAPSO).
22. Způsob podle nároku 16, vyznačující se tím, že povrchově aktivní činidlo v reagenční směsi se volí ze souboru sestávajícího z alkyltrimethylamoniumhydroxidů s dlouhým řetězcem, kationtových kvartérních amoniových halogenidů a solí Cí2 až C|8 alkylsulfátů a alkalickými kovy.
-18CZ 294599 B6
23. Způsob podle nároku 16, vyznačující se tím, že povrchově aktivní činidlo v reagenční směsi je přítomno v koncentraci 10 až 40 gramů na litr.
24. Způsob podle nároku 16, vyznačující se tím, že pufr pH vreagenční směsi se volí ze souboru sestávajícího z kyseliny 3-(cyklohexylamino)-l-propansulfonové (CAPS), tetraborátu sodného, uhličitanu draselného, uhličitanu vápenatého a uhličitanu sodného.
25. Způsob podle nároku 16, vyznačující se tím, že pufr pH je vreagenční směsi přítomen v koncentraci 0,05 až 0,15 M.
26. Způsob podle nároku 16, vyznačující se tím, že reagenční směs dále obsahuje zásadu, kterou je hydroxid alkalického kovu nebo tetraalkylamoniumhydroxid, kde alkylová skupina obsahuje od 1 do 4 atomů uhlíku.
27. Způsob podle nároku 16, vyznačující se tím, že anorganická kyanidová sůl v reagenční směsi se volí ze souboru sestávajícího z kyanidu horečnatého, kyanidu sodného, kyanidu lithného a kyanidu amonného.
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| US08/854,914 US5858794A (en) | 1997-05-13 | 1997-05-13 | Cyanide-containing hemoglobin reagent composition and method providing acceptable precision, accuracy and freedom from white cell interference on automated hematology analyzers |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CZ146198A3 CZ146198A3 (cs) | 1998-12-16 |
| CZ294599B6 true CZ294599B6 (cs) | 2005-02-16 |
Family
ID=25319854
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CZ19981461A CZ294599B6 (cs) | 1997-05-13 | 1998-05-12 | Reagenční směs pro stanovení hemoglobinu v krevním vzorku a způsob stanovení hemoglobinu ve vzorku celé krve |
Country Status (15)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US5858794A (cs) |
| EP (1) | EP0878715B1 (cs) |
| JP (1) | JPH10319021A (cs) |
| AT (1) | ATE221664T1 (cs) |
| AU (1) | AU732528B2 (cs) |
| BR (1) | BR9801601A (cs) |
| CA (1) | CA2234568A1 (cs) |
| CZ (1) | CZ294599B6 (cs) |
| DE (1) | DE69806849T2 (cs) |
| DK (1) | DK0878715T3 (cs) |
| ES (1) | ES2181085T3 (cs) |
| HU (1) | HUP9801081A3 (cs) |
| IL (1) | IL124093A (cs) |
| PL (1) | PL326266A1 (cs) |
| PT (1) | PT878715E (cs) |
Families Citing this family (7)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JP3110017B2 (ja) * | 1998-05-26 | 2000-11-20 | 株式会社テイエフビー | 試料の抗酸化能の測定方法並びにそれを用いた糖尿病及び高脂血症の診断方法 |
| US6194218B1 (en) * | 1999-01-22 | 2001-02-27 | The Fredric Rieders Family Renaissance Foundation | Blood methemoglobin analysis |
| US6623972B2 (en) * | 2000-06-09 | 2003-09-23 | Bayer Corporation | Automated method for detecting, quantifying and monitoring exogenous hemoglobin in whole blood, plasma and serum |
| WO2010056740A1 (en) * | 2008-11-13 | 2010-05-20 | Beckman Coulter, Inc. | Method of correction of particle interference to hemoglobin measurement |
| KR101207418B1 (ko) | 2012-02-10 | 2012-12-04 | 주식회사 아이센스 | 효소법을 이용하는 당화혈색소 정량분석용 용혈시약 조성물 |
| EP3700419A4 (en) * | 2017-10-26 | 2021-11-10 | Essenlix Corporation | RAPID TEST OF BLOOD PLATES |
| WO2021011944A2 (en) * | 2019-07-18 | 2021-01-21 | Essenlix Corporation | Imaging based homogeneous assay |
Family Cites Families (6)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US3874852A (en) * | 1974-07-05 | 1975-04-01 | Coulter Diagnostics Inc | Reagent and method for determining leukocytes and hemoglobin in the blood |
| US4407961A (en) * | 1981-03-16 | 1983-10-04 | Sanders James L | Ion-exchange system and method for isolation and determination of glycosylated hemoglobin in human blood |
| US4853338A (en) * | 1987-05-20 | 1989-08-01 | Technicon Instruments Corporation | Cyanide-free hemoglobin reagent |
| DE4206932A1 (de) * | 1992-03-05 | 1993-09-09 | Boehringer Mannheim Gmbh | Immunologische methode zur bestimmung eines haemoglobinderivates |
| AU1984295A (en) * | 1994-03-11 | 1995-09-25 | Abbott Laboratories | Cyanide-free reagent and method for the determination of hemoglobin |
| US5639630A (en) * | 1995-05-16 | 1997-06-17 | Bayer Corporation | Method and reagent composition for performing leukocyte differential counts on fresh and aged whole blood samples, based on intrinsic peroxidase activity of leukocytes |
-
1997
- 1997-05-13 US US08/854,914 patent/US5858794A/en not_active Expired - Fee Related
-
1998
- 1998-04-09 CA CA002234568A patent/CA2234568A1/en not_active Abandoned
- 1998-04-14 IL IL12409398A patent/IL124093A/xx not_active IP Right Cessation
- 1998-04-28 AU AU63667/98A patent/AU732528B2/en not_active Ceased
- 1998-05-07 BR BR9801601A patent/BR9801601A/pt not_active IP Right Cessation
- 1998-05-08 ES ES98108384T patent/ES2181085T3/es not_active Expired - Lifetime
- 1998-05-08 PT PT98108384T patent/PT878715E/pt unknown
- 1998-05-08 DE DE69806849T patent/DE69806849T2/de not_active Expired - Fee Related
- 1998-05-08 EP EP98108384A patent/EP0878715B1/en not_active Expired - Lifetime
- 1998-05-08 AT AT98108384T patent/ATE221664T1/de not_active IP Right Cessation
- 1998-05-08 DK DK98108384T patent/DK0878715T3/da active
- 1998-05-12 CZ CZ19981461A patent/CZ294599B6/cs not_active IP Right Cessation
- 1998-05-13 PL PL98326266A patent/PL326266A1/xx not_active IP Right Cessation
- 1998-05-13 JP JP10148453A patent/JPH10319021A/ja active Pending
- 1998-05-13 HU HU9801081A patent/HUP9801081A3/hu unknown
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| DK0878715T3 (da) | 2002-11-25 |
| JPH10319021A (ja) | 1998-12-04 |
| ES2181085T3 (es) | 2003-02-16 |
| ATE221664T1 (de) | 2002-08-15 |
| CA2234568A1 (en) | 1998-11-13 |
| HU9801081D0 (en) | 1998-07-28 |
| EP0878715A1 (en) | 1998-11-18 |
| PT878715E (pt) | 2002-11-29 |
| PL326266A1 (en) | 1998-11-23 |
| US5858794A (en) | 1999-01-12 |
| AU732528B2 (en) | 2001-04-26 |
| HUP9801081A2 (hu) | 1999-01-28 |
| DE69806849D1 (de) | 2002-09-05 |
| AU6366798A (en) | 1998-11-19 |
| EP0878715B1 (en) | 2002-07-31 |
| HUP9801081A3 (en) | 2000-02-28 |
| IL124093A (en) | 2000-08-31 |
| DE69806849T2 (de) | 2002-11-14 |
| BR9801601A (pt) | 1999-06-29 |
| CZ146198A3 (cs) | 1998-12-16 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| EP0960333B1 (en) | A cyanide-free lytic reagent composition and method for hemoglobin and cell analysis | |
| US8192995B2 (en) | Method of correction of particle interference to hemoglobin measurement | |
| US6573102B2 (en) | Lytic reagent composition for determination of nucleated blood cells | |
| US6673618B1 (en) | Method for measurement of nucleated red blood cells | |
| WO1998032016A9 (en) | A cyanide-free lytic reagent composition and method for hemoglobin and cell analysis | |
| US6410330B1 (en) | Method for measurement of nucleated red blood cells | |
| EP0869347A2 (en) | Method and reagent for identification of reticulocytes, erythrocytes and platelets | |
| JPS60500921A (ja) | 白血球母集団の容積測定に用いる間質溶解剤 | |
| US20050048657A1 (en) | Method of using a hematology control product | |
| JP2008026317A5 (cs) | ||
| JPH11508683A (ja) | 血液中の白血球の分別測定のための試薬及び方法 | |
| JP2007532875A (ja) | 有核赤血球成分を含む参照対照 | |
| EP0770216A1 (en) | Methods and reagents for cyanide-free determination of hemoglobin and leukocytes in whole blood | |
| EP0771420A1 (en) | Quality control method of hematology instruments | |
| EP1877802B1 (en) | Cyanide-free lytic reagent composition and method of use for hemoglobin and white blood cell measurement | |
| CZ294599B6 (cs) | Reagenční směs pro stanovení hemoglobinu v krevním vzorku a způsob stanovení hemoglobinu ve vzorku celé krve | |
| US7670798B2 (en) | Automated method and reagent therefor assaying body fluid samples such as cerebrospinal fluid (CSF) | |
| US6759246B1 (en) | Hematology control composition including lymphocyte analogs and method for preparation and use | |
| CN110954489A (zh) | 一种无氰溶血剂及其应用 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| PD00 | Pending as of 2000-06-30 in czech republic | ||
| MM4A | Patent lapsed due to non-payment of fee |
Effective date: 20060512 |