CZ288568B6 - Polymerní konjugáty lecirelinu s protrahovaným účinkem a jejich použití - Google Patents
Polymerní konjugáty lecirelinu s protrahovaným účinkem a jejich použití Download PDFInfo
- Publication number
- CZ288568B6 CZ288568B6 CZ1998950A CZ95098A CZ288568B6 CZ 288568 B6 CZ288568 B6 CZ 288568B6 CZ 1998950 A CZ1998950 A CZ 1998950A CZ 95098 A CZ95098 A CZ 95098A CZ 288568 B6 CZ288568 B6 CZ 288568B6
- Authority
- CZ
- Czechia
- Prior art keywords
- lecirelin
- protracted
- conjugates
- sheep
- units
- Prior art date
Links
- 108010080415 lecirelin Proteins 0.000 title claims abstract description 104
- 230000000694 effects Effects 0.000 title claims abstract description 12
- 230000002611 ovarian Effects 0.000 claims abstract description 24
- 229920000642 polymer Polymers 0.000 claims abstract description 22
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 claims abstract description 20
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 claims abstract description 19
- 108010038807 Oligopeptides Proteins 0.000 claims abstract description 12
- 102000015636 Oligopeptides Human genes 0.000 claims abstract description 12
- 230000012010 growth Effects 0.000 claims abstract description 8
- 239000000178 monomer Substances 0.000 claims abstract description 6
- OKPYIWASQZGASP-UHFFFAOYSA-N n-(2-hydroxypropyl)-2-methylprop-2-enamide Chemical group CC(O)CNC(=O)C(C)=C OKPYIWASQZGASP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 4
- 159000000000 sodium salts Chemical class 0.000 claims abstract description 3
- 241001494479 Pecora Species 0.000 claims description 62
- 241000283707 Capra Species 0.000 claims description 27
- 238000011282 treatment Methods 0.000 claims description 23
- 230000016087 ovulation Effects 0.000 claims description 20
- 150000001413 amino acids Chemical group 0.000 claims description 11
- 150000003431 steroids Chemical class 0.000 claims description 10
- 239000004480 active ingredient Substances 0.000 claims description 9
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 claims description 9
- 230000009471 action Effects 0.000 claims description 8
- 230000033228 biological regulation Effects 0.000 claims description 8
- 230000003444 anaesthetic effect Effects 0.000 claims description 7
- 239000004475 Arginine Substances 0.000 claims description 6
- ODKSFYDXXFIFQN-UHFFFAOYSA-N arginine Natural products OC(=O)C(N)CCCNC(N)=N ODKSFYDXXFIFQN-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 6
- 230000006698 induction Effects 0.000 claims description 6
- 230000029849 luteinization Effects 0.000 claims description 6
- 230000035800 maturation Effects 0.000 claims description 6
- 206010028980 Neoplasm Diseases 0.000 claims description 5
- 230000001419 dependent effect Effects 0.000 claims description 5
- 230000000938 luteal effect Effects 0.000 claims description 5
- 230000001850 reproductive effect Effects 0.000 claims description 5
- 230000021595 spermatogenesis Effects 0.000 claims description 5
- 239000000126 substance Substances 0.000 claims description 5
- 230000001548 androgenic effect Effects 0.000 claims description 4
- 230000001456 gonadotroph Effects 0.000 claims description 4
- ZRALSGWEFCBTJO-UHFFFAOYSA-N guanidine group Chemical group NC(=N)N ZRALSGWEFCBTJO-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 4
- 230000003054 hormonal effect Effects 0.000 claims description 4
- 210000002394 ovarian follicle Anatomy 0.000 claims description 4
- 230000013812 regulation of steroid biosynthetic process Effects 0.000 claims description 4
- 230000028327 secretion Effects 0.000 claims description 4
- 208000037273 Pathologic Processes Diseases 0.000 claims description 3
- 230000010933 acylation Effects 0.000 claims description 3
- 238000005917 acylation reaction Methods 0.000 claims description 3
- 238000007918 intramuscular administration Methods 0.000 claims description 3
- 244000144972 livestock Species 0.000 claims description 3
- 230000009054 pathological process Effects 0.000 claims description 3
- NIXOWILDQLNWCW-UHFFFAOYSA-N acrylic acid group Chemical group C(C=C)(=O)O NIXOWILDQLNWCW-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 2
- 230000001737 promoting effect Effects 0.000 claims description 2
- 230000004044 response Effects 0.000 claims description 2
- 125000001424 substituent group Chemical group 0.000 claims description 2
- 239000003814 drug Substances 0.000 abstract description 5
- SMZOUWXMTYCWNB-UHFFFAOYSA-N 2-(2-methoxy-5-methylphenyl)ethanamine Chemical compound COC1=CC=C(C)C=C1CCN SMZOUWXMTYCWNB-UHFFFAOYSA-N 0.000 abstract description 4
- 229940079593 drug Drugs 0.000 abstract description 2
- 230000001747 exhibiting effect Effects 0.000 abstract 2
- 125000005395 methacrylic acid group Chemical group 0.000 abstract 1
- 230000005070 ripening Effects 0.000 abstract 1
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 47
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 37
- HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M Sodium hydroxide Chemical compound [OH-].[Na+] HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 30
- XEKOWRVHYACXOJ-UHFFFAOYSA-N Ethyl acetate Chemical compound CCOC(C)=O XEKOWRVHYACXOJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 24
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 22
- RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N Diethyl ether Chemical compound CCOCC RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 20
- 101150108262 gnrh1 gene Proteins 0.000 description 17
- 239000000047 product Substances 0.000 description 17
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 15
- 241000700159 Rattus Species 0.000 description 13
- YMWUJEATGCHHMB-UHFFFAOYSA-N Dichloromethane Chemical compound ClCCl YMWUJEATGCHHMB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 12
- 210000001672 ovary Anatomy 0.000 description 12
- 206010002091 Anaesthesia Diseases 0.000 description 11
- 241000283690 Bos taurus Species 0.000 description 11
- 230000037005 anaesthesia Effects 0.000 description 11
- 238000003756 stirring Methods 0.000 description 11
- 239000011541 reaction mixture Substances 0.000 description 10
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 10
- CSCPPACGZOOCGX-UHFFFAOYSA-N Acetone Chemical compound CC(C)=O CSCPPACGZOOCGX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 9
- QOSSAOTZNIDXMA-UHFFFAOYSA-N Dicylcohexylcarbodiimide Chemical compound C1CCCCC1N=C=NC1CCCCC1 QOSSAOTZNIDXMA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 9
- 210000004246 corpus luteum Anatomy 0.000 description 9
- 238000011156 evaluation Methods 0.000 description 9
- VOXZDWNPVJITMN-ZBRFXRBCSA-N 17β-estradiol Chemical compound OC1=CC=C2[C@H]3CC[C@](C)([C@H](CC4)O)[C@@H]4[C@@H]3CCC2=C1 VOXZDWNPVJITMN-ZBRFXRBCSA-N 0.000 description 8
- BTJIUGUIPKRLHP-UHFFFAOYSA-N 4-nitrophenol Chemical compound OC1=CC=C([N+]([O-])=O)C=C1 BTJIUGUIPKRLHP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 8
- 230000001932 seasonal effect Effects 0.000 description 8
- 230000001568 sexual effect Effects 0.000 description 8
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 8
- 101000904177 Clupea pallasii Gonadoliberin-1 Proteins 0.000 description 7
- 239000000579 Gonadotropin-Releasing Hormone Substances 0.000 description 7
- 101000857870 Squalus acanthias Gonadoliberin Proteins 0.000 description 7
- 238000007792 addition Methods 0.000 description 7
- XLXSAKCOAKORKW-AQJXLSMYSA-N gonadorelin Chemical compound C([C@@H](C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N1[C@@H](CCC1)C(=O)NCC(N)=O)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@H](CC=1C2=CC=CC=C2NC=1)NC(=O)[C@H](CC=1N=CNC=1)NC(=O)[C@H]1NC(=O)CC1)C1=CC=C(O)C=C1 XLXSAKCOAKORKW-AQJXLSMYSA-N 0.000 description 7
- -1 4-nitrophenoxy Chemical group 0.000 description 6
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 235000013365 dairy product Nutrition 0.000 description 6
- VHRYZQNGTZXDNX-UHFFFAOYSA-N methacryloyl chloride Chemical compound CC(=C)C(Cl)=O VHRYZQNGTZXDNX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 210000002381 plasma Anatomy 0.000 description 6
- 230000011514 reflex Effects 0.000 description 6
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 6
- 201000009273 Endometriosis Diseases 0.000 description 5
- MUMGGOZAMZWBJJ-DYKIIFRCSA-N Testosterone Natural products O=C1CC[C@]2(C)[C@H]3CC[C@](C)([C@H](CC4)O)[C@@H]4[C@@H]3CCC2=C1 MUMGGOZAMZWBJJ-DYKIIFRCSA-N 0.000 description 5
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 5
- 208000025661 ovarian cyst Diseases 0.000 description 5
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 5
- ADFXKUOMJKEIND-UHFFFAOYSA-N 1,3-dicyclohexylurea Chemical compound C1CCCCC1NC(=O)NC1CCCCC1 ADFXKUOMJKEIND-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 241000282849 Ruminantia Species 0.000 description 4
- 229920005654 Sephadex Polymers 0.000 description 4
- 239000012507 Sephadex™ Substances 0.000 description 4
- 239000013543 active substance Substances 0.000 description 4
- UCMIRNVEIXFBKS-UHFFFAOYSA-N beta-alanine Chemical compound NCCC(O)=O UCMIRNVEIXFBKS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 229940011871 estrogen Drugs 0.000 description 4
- 239000000262 estrogen Substances 0.000 description 4
- 238000005227 gel permeation chromatography Methods 0.000 description 4
- YMAWOPBAYDPSLA-UHFFFAOYSA-N glycylglycine Chemical compound [NH3+]CC(=O)NCC([O-])=O YMAWOPBAYDPSLA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 239000012535 impurity Substances 0.000 description 4
- 239000012704 polymeric precursor Substances 0.000 description 4
- 239000002243 precursor Substances 0.000 description 4
- 208000024891 symptom Diseases 0.000 description 4
- 210000001550 testis Anatomy 0.000 description 4
- HXKKHQJGJAFBHI-UHFFFAOYSA-N 1-aminopropan-2-ol Chemical compound CC(O)CN HXKKHQJGJAFBHI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- VHSHLMUCYSAUQU-UHFFFAOYSA-N 2-hydroxypropyl methacrylate Chemical group CC(O)COC(=O)C(C)=C VHSHLMUCYSAUQU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- CERQOIWHTDAKMF-UHFFFAOYSA-N Methacrylic acid Chemical compound CC(=C)C(O)=O CERQOIWHTDAKMF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 239000002253 acid Substances 0.000 description 3
- 238000010171 animal model Methods 0.000 description 3
- 229910021538 borax Inorganic materials 0.000 description 3
- UQGFMSUEHSUPRD-UHFFFAOYSA-N disodium;3,7-dioxido-2,4,6,8,9-pentaoxa-1,3,5,7-tetraborabicyclo[3.3.1]nonane Chemical compound [Na+].[Na+].O1B([O-])OB2OB([O-])OB1O2 UQGFMSUEHSUPRD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- FYSNRPHRLRVCSW-UHFFFAOYSA-N dodecasodium;tetraborate Chemical class [Na+].[Na+].[Na+].[Na+].[Na+].[Na+].[Na+].[Na+].[Na+].[Na+].[Na+].[Na+].[O-]B([O-])[O-].[O-]B([O-])[O-].[O-]B([O-])[O-].[O-]B([O-])[O-] FYSNRPHRLRVCSW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 230000004064 dysfunction Effects 0.000 description 3
- 150000002148 esters Chemical class 0.000 description 3
- 229930182833 estradiol Natural products 0.000 description 3
- 238000001914 filtration Methods 0.000 description 3
- 230000003325 follicular Effects 0.000 description 3
- 239000012071 phase Substances 0.000 description 3
- 230000035935 pregnancy Effects 0.000 description 3
- 210000002307 prostate Anatomy 0.000 description 3
- 238000003307 slaughter Methods 0.000 description 3
- 235000010339 sodium tetraborate Nutrition 0.000 description 3
- 239000004328 sodium tetraborate Substances 0.000 description 3
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 description 3
- 229960003604 testosterone Drugs 0.000 description 3
- RYHBNJHYFVUHQT-UHFFFAOYSA-N 1,4-Dioxane Chemical compound C1COCCO1 RYHBNJHYFVUHQT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- JTYHSQYLBPKGNA-UHFFFAOYSA-N 2-[[2-(2-methylprop-2-enoylamino)acetyl]amino]acetic acid Chemical compound CC(=C)C(=O)NCC(=O)NCC(O)=O JTYHSQYLBPKGNA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- LTMXLMUNEFWJAX-UHFFFAOYSA-N 3-(2-methylprop-2-enoylamino)propanoic acid Chemical compound CC(=C)C(=O)NCCC(O)=O LTMXLMUNEFWJAX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- SLXKOJJOQWFEFD-UHFFFAOYSA-N 6-aminohexanoic acid Chemical compound NCCCCCC(O)=O SLXKOJJOQWFEFD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N Atomic nitrogen Chemical compound N#N IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 108010008488 Glycylglycine Proteins 0.000 description 2
- VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N Hydrochloric acid Chemical compound Cl VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 206010062767 Hypophysitis Diseases 0.000 description 2
- 102000009151 Luteinizing Hormone Human genes 0.000 description 2
- 108010073521 Luteinizing Hormone Proteins 0.000 description 2
- 102000035195 Peptidases Human genes 0.000 description 2
- 108091005804 Peptidases Proteins 0.000 description 2
- RJKFOVLPORLFTN-LEKSSAKUSA-N Progesterone Chemical compound C1CC2=CC(=O)CC[C@]2(C)[C@@H]2[C@@H]1[C@@H]1CC[C@H](C(=O)C)[C@@]1(C)CC2 RJKFOVLPORLFTN-LEKSSAKUSA-N 0.000 description 2
- VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N Silicium dioxide Chemical compound O=[Si]=O VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 229960002684 aminocaproic acid Drugs 0.000 description 2
- 229940000635 beta-alanine Drugs 0.000 description 2
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 2
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 2
- 125000003178 carboxy group Chemical group [H]OC(*)=O 0.000 description 2
- 229920001577 copolymer Polymers 0.000 description 2
- 238000007334 copolymerization reaction Methods 0.000 description 2
- 238000004090 dissolution Methods 0.000 description 2
- 239000012153 distilled water Substances 0.000 description 2
- 230000008030 elimination Effects 0.000 description 2
- 238000003379 elimination reaction Methods 0.000 description 2
- 230000002124 endocrine Effects 0.000 description 2
- 229960005309 estradiol Drugs 0.000 description 2
- SRCZQMGIVIYBBJ-UHFFFAOYSA-N ethoxyethane;ethyl acetate Chemical compound CCOCC.CCOC(C)=O SRCZQMGIVIYBBJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000000605 extraction Methods 0.000 description 2
- 238000009472 formulation Methods 0.000 description 2
- 229940043257 glycylglycine Drugs 0.000 description 2
- 229940088597 hormone Drugs 0.000 description 2
- 239000005556 hormone Substances 0.000 description 2
- 210000003016 hypothalamus Anatomy 0.000 description 2
- 230000001965 increasing effect Effects 0.000 description 2
- 230000009027 insemination Effects 0.000 description 2
- 239000010410 layer Substances 0.000 description 2
- 238000002386 leaching Methods 0.000 description 2
- 230000007774 longterm Effects 0.000 description 2
- 229940040129 luteinizing hormone Drugs 0.000 description 2
- 230000007246 mechanism Effects 0.000 description 2
- 238000002844 melting Methods 0.000 description 2
- 230000008018 melting Effects 0.000 description 2
- 238000000034 method Methods 0.000 description 2
- 239000012044 organic layer Substances 0.000 description 2
- 230000001575 pathological effect Effects 0.000 description 2
- 230000001817 pituitary effect Effects 0.000 description 2
- 210000003635 pituitary gland Anatomy 0.000 description 2
- 238000001556 precipitation Methods 0.000 description 2
- 230000002028 premature Effects 0.000 description 2
- 230000008569 process Effects 0.000 description 2
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 description 2
- 239000000583 progesterone congener Substances 0.000 description 2
- 229940024999 proteolytic enzymes for treatment of wounds and ulcers Drugs 0.000 description 2
- 230000003248 secreting effect Effects 0.000 description 2
- 210000002955 secretory cell Anatomy 0.000 description 2
- 230000000638 stimulation Effects 0.000 description 2
- 238000001356 surgical procedure Methods 0.000 description 2
- 238000013268 sustained release Methods 0.000 description 2
- 239000012730 sustained-release form Substances 0.000 description 2
- 230000002381 testicular Effects 0.000 description 2
- 230000001225 therapeutic effect Effects 0.000 description 2
- 238000002560 therapeutic procedure Methods 0.000 description 2
- 239000000273 veterinary drug Substances 0.000 description 2
- 230000003442 weekly effect Effects 0.000 description 2
- BXKNAXPTGOHKJJ-LBPRGKRZSA-N (2s)-2-[[2-(2-methylprop-2-enoylamino)acetyl]amino]-3-phenylpropanoic acid Chemical compound CC(=C)C(=O)NCC(=O)N[C@H](C(O)=O)CC1=CC=CC=C1 BXKNAXPTGOHKJJ-LBPRGKRZSA-N 0.000 description 1
- STOPANFMPLJRSQ-SFHVURJKSA-N (4-nitrophenyl) (2s)-2-[[2-(2-methylprop-2-enoylamino)acetyl]amino]-3-phenylpropanoate Chemical compound C([C@H](NC(=O)CNC(=O)C(=C)C)C(=O)OC=1C=CC(=CC=1)[N+]([O-])=O)C1=CC=CC=C1 STOPANFMPLJRSQ-SFHVURJKSA-N 0.000 description 1
- NASINQZGKRQIRS-UHFFFAOYSA-N (4-nitrophenyl) 2-[[2-(2-methylprop-2-enoylamino)acetyl]amino]acetate Chemical compound CC(=C)C(=O)NCC(=O)NCC(=O)OC1=CC=C([N+]([O-])=O)C=C1 NASINQZGKRQIRS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- CIOUJHCVWKGWSD-UHFFFAOYSA-N (4-nitrophenyl) 3-(2-methylprop-2-enoylamino)propanoate Chemical compound CC(=C)C(=O)NCCC(=O)OC1=CC=C([N+]([O-])=O)C=C1 CIOUJHCVWKGWSD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- IIZPXYDJLKNOIY-JXPKJXOSSA-N 1-palmitoyl-2-arachidonoyl-sn-glycero-3-phosphocholine Chemical compound CCCCCCCCCCCCCCCC(=O)OC[C@H](COP([O-])(=O)OCC[N+](C)(C)C)OC(=O)CCC\C=C/C\C=C/C\C=C/C\C=C/CCCCC IIZPXYDJLKNOIY-JXPKJXOSSA-N 0.000 description 1
- OZAIFHULBGXAKX-UHFFFAOYSA-N 2-(2-cyanopropan-2-yldiazenyl)-2-methylpropanenitrile Chemical compound N#CC(C)(C)N=NC(C)(C)C#N OZAIFHULBGXAKX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- FPQQSJJWHUJYPU-UHFFFAOYSA-N 3-(dimethylamino)propyliminomethylidene-ethylazanium;chloride Chemical compound Cl.CCN=C=NCCCN(C)C FPQQSJJWHUJYPU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- FSFFIYOYBDBDMQ-UHFFFAOYSA-N 6-(2-methylprop-2-enoylamino)hexanoic acid Chemical compound CC(=C)C(=O)NCCCCCC(O)=O FSFFIYOYBDBDMQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- OZAIFHULBGXAKX-VAWYXSNFSA-N AIBN Substances N#CC(C)(C)\N=N\C(C)(C)C#N OZAIFHULBGXAKX-VAWYXSNFSA-N 0.000 description 1
- VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-M Chloride anion Chemical compound [Cl-] VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- OKJCFMUGMSVJBG-ABEVXSGRSA-N Delta(1)-dihydrotestosterone Chemical compound C1C(=O)C=C[C@]2(C)[C@H]3CC[C@](C)([C@H](CC4)O)[C@@H]4[C@@H]3CC[C@H]21 OKJCFMUGMSVJBG-ABEVXSGRSA-N 0.000 description 1
- 241001669679 Eleotris Species 0.000 description 1
- 102000012673 Follicle Stimulating Hormone Human genes 0.000 description 1
- 108010079345 Follicle Stimulating Hormone Proteins 0.000 description 1
- JBCLFWXMTIKCCB-VIFPVBQESA-N Gly-Phe Chemical compound NCC(=O)N[C@H](C(O)=O)CC1=CC=CC=C1 JBCLFWXMTIKCCB-VIFPVBQESA-N 0.000 description 1
- 108010086677 Gonadotropins Proteins 0.000 description 1
- 102000006771 Gonadotropins Human genes 0.000 description 1
- LESXFEZIFXFIQR-LURJTMIESA-N Leu-Gly Chemical compound CC(C)C[C@H](N)C(=O)NCC(O)=O LESXFEZIFXFIQR-LURJTMIESA-N 0.000 description 1
- 206010033122 Ovarian atrophy Diseases 0.000 description 1
- 102000004451 Pituitary Gonadotropins Human genes 0.000 description 1
- 108010081865 Pituitary Gonadotropins Proteins 0.000 description 1
- 241000282887 Suidae Species 0.000 description 1
- 238000007098 aminolysis reaction Methods 0.000 description 1
- 239000003098 androgen Substances 0.000 description 1
- 239000008346 aqueous phase Substances 0.000 description 1
- 229920002988 biodegradable polymer Polymers 0.000 description 1
- 239000004621 biodegradable polymer Substances 0.000 description 1
- 230000004071 biological effect Effects 0.000 description 1
- 230000017531 blood circulation Effects 0.000 description 1
- 230000037396 body weight Effects 0.000 description 1
- 210000000481 breast Anatomy 0.000 description 1
- 238000009395 breeding Methods 0.000 description 1
- 230000001488 breeding effect Effects 0.000 description 1
- 210000002533 bulbourethral gland Anatomy 0.000 description 1
- 150000001718 carbodiimides Chemical class 0.000 description 1
- 230000015556 catabolic process Effects 0.000 description 1
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 1
- OQNGCCWBHLEQFN-UHFFFAOYSA-N chloroform;hexane Chemical compound ClC(Cl)Cl.CCCCCC OQNGCCWBHLEQFN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000001816 cooling Methods 0.000 description 1
- 239000012043 crude product Substances 0.000 description 1
- 239000013078 crystal Substances 0.000 description 1
- 238000002425 crystallisation Methods 0.000 description 1
- 230000008025 crystallization Effects 0.000 description 1
- 230000001351 cycling effect Effects 0.000 description 1
- 230000003247 decreasing effect Effects 0.000 description 1
- 238000011161 development Methods 0.000 description 1
- 125000004177 diethyl group Chemical group [H]C([H])([H])C([H])([H])* 0.000 description 1
- 239000002552 dosage form Substances 0.000 description 1
- 230000000857 drug effect Effects 0.000 description 1
- 238000001035 drying Methods 0.000 description 1
- 239000003480 eluent Substances 0.000 description 1
- 210000000918 epididymis Anatomy 0.000 description 1
- 201000010063 epididymitis Diseases 0.000 description 1
- IDGUHHHQCWSQLU-UHFFFAOYSA-N ethanol;hydrate Chemical compound O.CCO IDGUHHHQCWSQLU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- MDKXBBPLEGPIRI-UHFFFAOYSA-N ethoxyethane;methanol Chemical compound OC.CCOCC MDKXBBPLEGPIRI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000001704 evaporation Methods 0.000 description 1
- 230000008020 evaporation Effects 0.000 description 1
- 230000007717 exclusion Effects 0.000 description 1
- 210000004996 female reproductive system Anatomy 0.000 description 1
- 239000000706 filtrate Substances 0.000 description 1
- 229940028334 follicle stimulating hormone Drugs 0.000 description 1
- 238000004108 freeze drying Methods 0.000 description 1
- 230000003152 gestagenic effect Effects 0.000 description 1
- 210000004907 gland Anatomy 0.000 description 1
- 230000024924 glomerular filtration Effects 0.000 description 1
- 108010081551 glycylphenylalanine Proteins 0.000 description 1
- 230000002710 gonadal effect Effects 0.000 description 1
- 239000002622 gonadotropin Substances 0.000 description 1
- 229940094892 gonadotropins Drugs 0.000 description 1
- 230000035876 healing Effects 0.000 description 1
- 230000013632 homeostatic process Effects 0.000 description 1
- 230000002267 hypothalamic effect Effects 0.000 description 1
- 230000006872 improvement Effects 0.000 description 1
- 230000001939 inductive effect Effects 0.000 description 1
- 230000002401 inhibitory effect Effects 0.000 description 1
- 239000003999 initiator Substances 0.000 description 1
- 230000000977 initiatory effect Effects 0.000 description 1
- 229940067606 lecithin Drugs 0.000 description 1
- 235000010445 lecithin Nutrition 0.000 description 1
- 239000000787 lecithin Substances 0.000 description 1
- 210000004995 male reproductive system Anatomy 0.000 description 1
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 1
- 210000003205 muscle Anatomy 0.000 description 1
- 210000004237 neck muscle Anatomy 0.000 description 1
- 239000000712 neurohormone Substances 0.000 description 1
- 102000008434 neuropeptide hormone activity proteins Human genes 0.000 description 1
- 108040002669 neuropeptide hormone activity proteins Proteins 0.000 description 1
- 229910052757 nitrogen Inorganic materials 0.000 description 1
- 231100001043 ovarian atrophy Toxicity 0.000 description 1
- 230000000624 ovulatory effect Effects 0.000 description 1
- 125000000636 p-nitrophenyl group Chemical group [H]C1=C([H])C(=C([H])C([H])=C1*)[N+]([O-])=O 0.000 description 1
- 230000020477 pH reduction Effects 0.000 description 1
- 238000002559 palpation Methods 0.000 description 1
- 239000003208 petroleum Substances 0.000 description 1
- 230000003285 pharmacodynamic effect Effects 0.000 description 1
- 239000002504 physiological saline solution Substances 0.000 description 1
- 230000036470 plasma concentration Effects 0.000 description 1
- 238000006116 polymerization reaction Methods 0.000 description 1
- 230000003389 potentiating effect Effects 0.000 description 1
- 239000002244 precipitate Substances 0.000 description 1
- 239000000186 progesterone Substances 0.000 description 1
- 229960003387 progesterone Drugs 0.000 description 1
- 230000000541 pulsatile effect Effects 0.000 description 1
- 238000001953 recrystallisation Methods 0.000 description 1
- 230000001105 regulatory effect Effects 0.000 description 1
- 210000001625 seminal vesicle Anatomy 0.000 description 1
- 230000035945 sensitivity Effects 0.000 description 1
- 230000001953 sensory effect Effects 0.000 description 1
- 230000019491 signal transduction Effects 0.000 description 1
- 239000000741 silica gel Substances 0.000 description 1
- 229910002027 silica gel Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000011734 sodium Substances 0.000 description 1
- 239000012265 solid product Substances 0.000 description 1
- 125000006850 spacer group Chemical group 0.000 description 1
- 230000001629 suppression Effects 0.000 description 1
- 238000004448 titration Methods 0.000 description 1
- 230000001960 triggered effect Effects 0.000 description 1
- 201000010653 vesiculitis Diseases 0.000 description 1
- 229920003169 water-soluble polymer Polymers 0.000 description 1
- 238000005303 weighing Methods 0.000 description 1
- 230000004584 weight gain Effects 0.000 description 1
- 235000019786 weight gain Nutrition 0.000 description 1
Landscapes
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
Abstract
eÜen se t²k polymern ch konjug t lecirelinu s protrahovan²m · inkem vzorce I, kde P je polymer, LEC je lecirelin a X je .alfa. nebo .epsilon. aminokyselina nebo oligopeptid, sest vaj c ch z polymern ho nosi e obsahuj c ho 30 a 1000 monomern ch jednotek spojen²ch do polymern ho °et zce z nich je 60 a 98 % jednotek N-(2-hydroxypropyl)methakrylamidu, 0 a 38 % jednotek kyseliny akrylov nebo methakrylov ve form sodn²ch sol a 1 a 40 % jednotek methakryloylovan²ch .alfa. nebo .epsilon. aminokyselin nebo oligopeptid s termin ln kovalentn vazbou p°ipojen²m lecirelinem. eÜen zahrnuje pou it polymern ch konjug t lecirelinu s protrahovan²m · inkem jako veterin rn ch l iv pro ovliv ov n reproduk n ho cyklu hospod °sk²ch zv °at, jako prost°edek pro ovlivn n r stu a zr n ovari ln ch folikul , indukci ovulace, regulaci stroidogeneze, podporu luteinizace ovari ln ch struktur, p°eruÜen anestru, start ovari ln aktivity, l bu atresie ovari , formov n lute ln tk n p°i patologi\
Description
Oblast techniky
Vynález se týká polymemích konjugátů lecitinu s protrahovaným účinkem, jejich použití jako veterinárních léčiv pro ovlivňování reprodukčního cyklu hospodářských zvířat a farmaceutických veterinárních přípravků je obsahujících.
Dosavadní stav techniky
Uvolňování hypofyzámích gonadotropinů je regulováno dekapeptidem tvořeným v paraventrikulámích jádrech hypothalamu. Tento neurohormon je označován jako gnRH, resp. LH-RH. Největší koncentrace gnRH se nachází v rostrální části preoptické oblasti hypothalamu, mezi supreoptickým a preoptickým jádrem. Vysoké koncentrace gnRH byly zároveň nalezeny v oblasti lokalizované nad mamilámím tělískem (procesus mamilaris) v bazálním hypothalamu. Uvolňování gnRH do hypofyzámího krevního oběhu probíhá pulzativně a po dosažení sekrečních buněk předního laloku hypofýzy dochází kjeho navázání na jejich receptorový systém. Po navázání gnRH je spuštěn celý mechanismus signální transdukce. Tento mechanismus spustí systém tvorby obou genadotropinů (LH - luteinizačního hormonu, i FSH - folikuly stimulujícího hormonu). Nízké intermitentní dávky gnRH vedou k vylévání gonadotropinů ze sekrečních buněk adenohypofýzy, zatímco dlouhodobá expozice těchto sekrečních buněk vysokými dávkami gnRH vede k zastavení jejich sekreční aktivity. Sensitivita hypofýzy k působení gnRH se zvyšuje při její estrogenizaci.
Zvýšení sekreční amplitudy a frekvence píků LH vede u samic ke stimulaci ovulace a formování žlutého tělíska (CL - corpus luteum), popř. formování luteální tkáně v případě patologických stavů na ovariích samic (ovariální cysty). U samců vede k zvýšení androgenní sekrece. Zvýšený pulsativní výdej FSH stimuluje růst a vývoj ovariálních folikulů samic a spermatogenezi samců. Podaří-li se zajistit působení gnRH v organismu po dostatečně dlouhou dobu, lze podáním různých dávek gnRH prakticky ovlivnit celou hierarchii osy pohlavního systému jak samic, tak samců. Podáním gnRH lze tedy stimulovat, nebo potlačit stereidogenezi, ovulaci a spermatogenezi, koncepci a kontracepci, léčebně nástup předčasné puberty, endometriózy, steroidodependentní tumory (prostaty, resp. prsu), luteinizaci ovariálních cyst, start růstu ovariálních folikulů a jejich zrání při atreziích ovarií, resp. v průběhu sezónních anestrií.
Primární struktura gnRH izolovaného z prasete je známá od roku 1971. V průběhu 70. a 80. let bylo syntetizováno mnoho analogů gnRH a zároveň byly zaváděny léčebné přípravky na jejich bázi. Mezi nejúčinnější analoga gnRH patří lecirelin. Podání lecirelinu má stejný účinek jako podání přirozeného dekapeptidu, avšak jeho potřebné aplikační množství je výrazně nižší. Indikační pole pro tento i jiné superanalogy zůstává v podstatě shodné s indikačním polem přirozených gnRH.
Navázáním peptidu na vodorozpustný vysokomolekulámí polymemí nosič je v principu možné ovlivnit jak dobu jeho setrvání, tak i biologickou stabilitu v živém organismu, tedy jeho farmakodynamiku a farmakokinetiku. Vazbou na polymemí nosič je totiž možné peptid ochránit před účinkem proteolytických enzymů a zároveň také zamezit jeho vyloučení např. glomerulámí filtrací. Tímto způsobem je tedy možné získat nové výhodnější vlastnosti hormonu, zvýšit specifitu jeho účinku a zároveň zvýšit i jeho stabilitu a tedy i využitelnost v organismu. Není nám známo, že by za tímto účelem byly dříve polymemí formy lecirelinu připraveny a použity ve veterinární medicíně.
-1CZ 288568 B6
Podstata vynálezu
Předmětem vynálezu jsou polymemí konjugáty lecirelinu s protrahovaným účinkem sestávající z polymemího nosiče obsahujícího 30 až 1000 monomemích jednotek spojených do polymemího řetězce, z nichž je 60 až 98 % jednotek N-(2-hydroxypropyl)methakrylamidu (HPMA), 0 až 38 % jednotek kyseliny akrylové nebo methakrylové ve formě sodných solí a 2 až 40 % jednotek methakryloylovaných α nebo ε aminokyselin nebo oligopeptidú s terminálně chemickou vazbou připojeným lecirelinem.
Význakem polymemích konjugátu lexirelinu s protrahovaným účinkem podle předloženého vynálezu je, že lecirelin je v konjugátech vázán k polymeru přes spojku hydrolyticky nestálou vazbou, vzniklou acylací guanidinové skupiny argininu, jedné z aminokyselin tvořící biologicky aktivní oligopeptid lecirelinu vzorce I i
P-X-NH-C-NH-(CH2)3-(LEC)
NH (I), kde P je polymer, LEC je zbytek molekuly lecirelinu bez postranního substituentu u argininu a X je α nebo ε aminokyselina nebo oligopeptid.
Lecielin je tady vázán k nosiči přes spojku vazbou vzniklou acylací guanidinové skupiny argininu, jedné z aminokyselin tvořící biologicky aktivní oligopeptid lecirelin. Tato vazba je hydrolyticky nestálá a umožňuje v prostředí organismu pozvolné uvolňování účinné látky z nosiče. Rychlost tohoto uvolňování může být ovlivněna změnami ve struktuře, především hydrofobicitě či hydrofilitě použitého „spáčem“.
Příprava polymemí formy lecirelinu podle vynálezu probíhá ve dvou krocích a spočívá v syntéze monomerů a jejich kopolymerizaci za vzniku polymemího prekurzorů obsahujícího postranní řetězce zakončené karboxylovou nebo reaktivní esterovou (například 4-nitrofenoxy nebo oxysukcinimidovou) skupinou a jeho následné reakce s uanidinovou skupinou lecirelinu za vzniku chemické vazby. Polymemí prekurzor může být připraven kopolymerizaci N-(2hydroxypropyl)-methakiylamidu (HPMA) s methakryloylovanými aminokyselinami nebo oligopeptidy, případně jejich reaktivními estery a případně s kyselinou akrylovou nebo methakrylovou. Vazba lecirelinu může být provedena buď přímou reakcí polymemích reaktivních esterů s lecirelinem, nebo reakcí karboxylové skupiny do polymeru zabudované kyseliny, aminokyseliny či oligopeptidú s guanidinovou skupinou argininu v lecirelinu, katalyzovanou dicyklohexylkarbodiimidem, nebo jinými, např. vodorozpustnými karbodiimidy.
O
II
-C-NH-C-NH-(CH2)3II
NH
V lékové formě podle vynálezu je biologicky aktivní látka, oligopeptid lecirelin (LEC), vázána na vodorozpustný polymer pomocí chemické vazby. Dostatečně vysoká molekulová váha polymeru snižuje rychlost glumerulámí filtrace látky z organismu a zajišťuje tedy podstatné prodloužení doby setrvání účinné látky v krevním řečišti. Zároveň dlouhý řetězec polymeru ochrání oligopeptid před účinkem proteolytických enzymů a zvýší stabilitu účinné látky v prostředí živého organismu. Oba tyto efekty zajistí podstatné zlepšení účinku léčiva a možnosti ovlivnění celé osy pohlavního systému samic i samců hospodářských zvířat.
-2CZ 288568 B6
Význakem předloženého vynálezu je také použití polymemích konjugátů lecirelinu s protrahovaným účinkem jako veterinárních léčiv pro ovlivňování reprodukčního cyklu hospodářských zvířat.
Předložený vynález dále zahrnuje použití polymemích konjugátů lecirelinu s protrahovaným účinkem ve veterinární medicíně jako prostředek pro ovlivnění růstu a zrání ovariálních folikulů, indukcí ovulace, regulace steroidogeneze, podporu luteinizaci ovariálních struktur, přerušení anestru, start ovariální aktivity, léčbu atrezie ovarií, formování luteální tkáně při patologických 10 procesech na ovariích, regulaci androgenní aktivity, spermatogeneze, ovulace, koncepce a kontracepce, regulaci předčasného nástupu puberty, léčbu endometrióz a hormonálních disbalancí pohlavních steroidů, léčbu steroidodependentních novotvarů a léčbu gonádotropních dysfunkcí hospodářských zvířat, zvláště pak krav, ovcí a koz.
Předmětem předloženého vynálezu jsou také farmaceutické veterinární přípravky obsahující jako účinnou látku polymemí konjugáty lecirelinu s protrahovaným účinkem.
Na obr. 1 je znázorněna struktura příkladu polymemích konjugátů lecirelinu, kde X může být Ala, -β-Ala, -Akap-, -Gly-D, L-PheLeuGly-, -GlyGlyCHg c---I co I NH I
CH-OH I CH,
CHj•CHj·
CAWVW
I co
CONH—CjHc ó
CHz—CHz
O=C\ /CH—CO—His—Trp—Ser—Tyr—t-Leu—Leu—NH—C—CO—I NH
Obr. 1
Příklady provedení
Příklady syntézy a biologických účinků polymemích konjugátů lecirelinu
-3CZ 288568 B6
Příklad 1
Syntéza monomerů a polymemích prekurzorů:
Příprava p-nitrofenylového esteru N-methakryloyl-p-alaninu (Ma-^-Ala-ONp)
N-Methakryloyl-P-alanin byl připraven Schotten-Baumanovou reakcí methakryloylchloridu s β-alaninem v přítomnosti vodného roztoku hydroxidu sodného.
V trojhrdlé baňce byl rozpuštěn β-alanin (5 g, 0,056 mol) v roztoku hydroxidu sodného (2,35 g, 0,057 mol) v 20 ml vody. Po rozpuštění bylo přidáno 50 ml dichlormethanu a pak byl roztok ochlazen na 0 °C. K ochlazenému roztoku byl zároveň přikapán methakryloylchlorid (5,7 ml, 0,057 mol) a roztok NaOH (2,35 g, 0,057 mol) v 20 ml vody. Reakční směs byla udržována ještě 0,5 hod při 0 °C a pak 1 h při laboratorní teplotě. Vrstva dichlormethanu byla oddělena a po okyselení roztoku na pH = 2 až 3 byl produkt vytřepán octanem ethylnatým. Organická vrstva byla usušena MgSO4 a vakuově zahuštěna. Produkt byl krystalován ze směsi octan ethylnatýdiethylether. Bylo získáno 5 g Ma-p-Ala-OH. Teplota tání 76 až 80 °C.
N-Methakryloyl-|3-alanin-p-nitrofenylester (ΜΑ-β-Ala-ONp) byl připraven reakcí Ma-βAla-H s p-nitroenolem v THF v přítomnosti dicyklohexylkarbodiimidu. Ma-p-Ala-OH (3,3 g, 0,021 mol) a p-nitrofenol (3,2 g, 0,023 mol) byly rozpuštěny ve 25 ml THF, roztok ochlazen za míchání na -15 °C a pak přidán roztok dicyklohexylkarbodiimidu (DCC) (5,1 g, 0,024 mol) v 18 ml THF. Reakční směs byla udržována 10 h při 0 °C, vy loučená dicyklohexylmočovina byla odfiltrována a produkt byl přečištěn na koloně 3 x 30 cm naplněné silikagelem (Kieselgel 60, Fluka). Jako mobilní fáze byl použit octan ethylnatý. Produkt byl izolován, octan ethylnatý byl vakuově odpařen a produkt byl krystalován z diethyletheru. Bylo získáno 2,6 g Ma-P-Ala-ONp.
Příprava p-nitrofenylového esteru N-methakryloyl-e-aminokapronové kyseliny (Ma-AkapONp)
N-Methakryloyl-e-aminokapronová kyselina byla připraven Schotten-Baumanovou reakcí methakiyloylchloridu s ε-aminokapronovou kyselinou v přítomnosti vodného roztoku hydroxidu sodného obdobně, jako v případě methakryloyl-P-alaninu.
V trojhrdlé baňce byla rozpuštěna kyselina ε-aminokapronová (5 g, 0,056 mol) v roztoku hydroxidu sodného (2,35 g, 0,058 mol) v 20 ml vody. Po rozpuštění bylo přidáno 50 ml dichlormethanu a pak byl roztok ochlazen na 0 °C. K ochlazenému roztoku bylo zároveň přidán methakryloylchlorid (5,7 ml, 0,057 mol) a roztok hydroxidu sodného (2,35 g, 0,058 mol) a 20 ml vody. Reakční směs byla udržována ještě 0,5 h při 0 °C a 1 h při laboratorní teplotě. Vrstva dichlormethanu byla oddělena a po okyselení roztoku na pH = 2 až 3 byl produkt vytřepán octanem ethylnatým. Organická vrstva byla usušena MgSO4 a vakuově zahuštěna. Produkt byl krystalován ze směsi octan ethylnatý - diethylether.
p-Nitrofenylový ester N-methakryloyl-8-aminokapronové kyseliny (Ma-Akap-ONp) byl připraven reakcí s p-nitrofenolem v THF v přítomnosti dicyklohexylkarbodiimidu. Ma-AkapOH (4 g, 0,020 mol) a p-nitrofenol (3,06 g, 0,022 mol) byly rozpuštěny ve 30 ml THF, roztok ochlazen za míchání na -15 °C a pak přidán roztok DCC (4,9 g, 0,024 mol) v 15 ml THF. Reakční směs byla udržována 10 h. při 0 °C, vyloučená dicyklohexylmočovina byla odfiltrována a produkt byl překrystalován ze směsi chloroform-hexan. Vyloučené krystaly byly odfiltrovány, promyty směsí diethylether-petrolether (1:1) a usušeny. Bylo získáno 4,5 g Ma-Akap-ONp.
Příprava p-nitrofenylového esteru N-methakryloylglycylglycinu (Ma-Gly-Gly-ONp)
-4CZ 288568 B6
N-Methakryloylglycylglycin byl připraven Schotten-Baumanovou reakcí methakryloylchloridu s glycylglycinem ve vodném roztoku hydroxidu sodného.
Glycylglycin (33,5 g) byl rozpuštěn v 92 ml 3M vodném roztoku NaOH a za intenzivního míchání a při teplotě 0 °C současně přikapáno 27,1 ml methakryloylchloridu a 92 ml 3M roztoku NaOH. Po 3 h reakce byla reakční směs přefiltrována, okyselena zředěnouHCl na pH3, vyloučená sraženina byla promyta chlazeným ethanolem a diethyletherem. Produkt byl překrystalován ze směsi etanol - voda 1:1. Teplota tání: 194 až 196 °C.
N-Methakryloyl-glycylglycin (21,2 g) a p-nitrofenol (14,7 g) byly rozpuštěny v 200 ml DMF a po ochlazení na -10 °C byl přikapán dicyklohexylkarbodiimid (24 g) rozpuštěný v 30 ml DMF. Roztok byl míchán 8 h při teplotě -10 °C, pak 16 h při 0 °C a nakonec 1 h při laboratorní teplotě. Vyloučená dicyklohexylmočovina byla odfiltrována a roztok zahuštěn na vakuové odparce. Z viskózního olejovitého zbytku se po 1 h stání vyloučil krystalický produkt, který byl promyt diethyletherem a překrystalován ze směsi ethanol - voda (1:1).
Příprava p-nitrofenylového esteru N-methakryloylglycyl-D,L·-fenylalanylleucyl-glycinu (MaGly-D,L-PheLeuGly-ONp)
N-Methakryloyl-glycylfenylalanin byl připraven Schotten-Baumanovou reakcí methakryloylchloridu s glycylfenylalaninem v přítomnosti vodného roztoku hydroxidu sodného obdobně, jako v případě methakryloyl-p-aminu. Surový produkt byl po reakci a okyselení reakční směsi na pH 2 až 3 izolován z vodné fáze extrakcí do octanu ethylnatého a po vysušení roztoku (bezv. Na2SO4) a zahuštění byl krystalován z roztoku octanu ethylnatého. Rekrystalizace byla provedena ze směsi methanol - diethylether. Teplota tání: 140 až 142 °C.
N-Methakryloyl-glycylfenylalanin-p-nitrofenylester (MA-GlyPhe-ONp) byl připraven reakcí s p-nitrofenolem v THF v přítomnosti dicyklohexylkarbodiimidu.
K roztoku MA-GlyPhe-ONp (4,11 g) v 75 ml dioxanu byl přidán za míchání roztok obsahující L-leucylglycin (2,06 g) a NaHCOj (0,92 g) v 60,0 ml vody a reakční směs byla míchána při laboratorní teplotě 14 h. Po odpaření dioxanu a filtraci roztoku byla reakční směs okyselena na pH 2 až 3, produkt byl izolován extrakcí do octanu ethylnatého a přečištěn krystalizaci ze směsi octan ethylnatý - diethylether. Výtěžek MA-Gly-D,L-PheLeuGly-OH: 3,2 g, teplota tání: 148 až 153 °C.
MA-Gly-D,L-PheLeuGly-OH (2,3 g) a p-nitrofenol (0,77 g) byly rozpuštěny ve 40 ml THF, ochlazeno za míchání na -15 °C a přidán roztok DCC (1,13 g) ve 4 ml THF. Reakční směs byla udržována 10 h při 0 °C, vyloučená dicyklohexylmočovina byla odfiltrována a produkt izolován vysrážením do diethyletheru. Výtěžek: 2,1 g.
Příprava polymemích prekurzorů
Obecný předpis
Kopolymery N-(2-hydroxypropyl)methakrylamidu s N-methakryloylovanými aminokyselinami, oligopeptidy nebo jejich p-nitrofenylovými estery byly připraveny radikálovou srážecí kopolymerizací v acetonu podle obecného předpisu:
Polymerizační směs o složení 86,9 % hmotn. acetonu, 12,5 % hmotn. monomerů v odpovídajícím molámím poměru složek (HPMA, methakryloylované aminokyseliny, oligopeptidy nebo jejich -ONp ester a případě kyselina akrylová nebo kyselina methakrylová) a 0,6 % hmotn. iniciátoru (AIBN) byla po probublání žárovkovým dusíkem zatavena v polymerizačních ampulích a polymerizována při 50 °C po dobu 24 h. Vyloučený polymer byl odfiltrován, promyt acetonem, diethyletherem a usušen za vakua.
-5CZ 288568 B6
Připravené polymemí prekurzory byly charakterizovány titrací COOH skupin (u kopolymerů s kyselinami) UV spektrofotometru (obsah postranních oligopeptidických řetězců zakončených p-nitrofenoxy skupinami) a po případné aminolýze -ONp skupin l-amino-2-propanolem gelovou permeační chromatografií (Mw, Mn, Mw/Mn).
Příklad 2
Příprava konjugátů lecirelinu
Příprava konjugátu Ρ-β-Ala-LEC mg polymemího prekurzoru Ρ-β-Ala-ONp (4,60 mol % ONp, Mw = 35 900, Mw/Mn = 1,33) bylo rozpuštěno ve 1,0 ml 0,15N NaCl a k tomuto roztoku bylo při 4 °C za míchání přidáno 5 mg lecirelinu. Reakce byla prováděna při 9 °C a konstantní hodnotě pH 7,5, která byla udržována přídavkem nasyceného roztoku tetraboritanu sodného na pH státu (Radiometer) po dobu 6 h a po dobu dalších 12 h na hodnotě pH 8,0. Reakce byla ukončena přídavkem 3 μΐ l-amino-2propanolu. Produkt byl vyčištěn od nízkomolekulámích příměsí (reakcí uvolněného 4-nitroenolu, nenavázaného lecirelinu, NaCl a tetraboritanu sodného) dvojnásobnou gelovou chromatografií na kolonce PD-10 (Pharmacia) naplněné Sephadexem g-25. Jako mobilní fáze byla použita destilovaná voda. Vyčištěný polymemí konjugát lecirelinu byl zmrazen a lyofilizován. Bylo získáno 45 mg polymemího konjugátu lecirelinu.
Příprava konjugátu P-Akap-LEC mg polymemího prekurzoru P-Akap-ONp (3,67 mol % ONp, Mw = 28 800, Mw/Mn = 1,37) bylo rozpuštěno ve 1,0 ml 0,15M NaCl a k tomuto roztoku bylo při 4 °C za míchání přidáno 5 mg lecirelinu. Reakce byla prováděna při 9 °C a konstantní hodnotě pH 7,5, která byla udržována přídavkem nasyceného roztoku tetraboritanu sodného na pH státu (Radiometer) po dobu 6 h a po dobu dalších 12 h na hodnotě pH 8,0. Reakce byla ukončena přídavkem 3 μΐ l-amino-2propanolu. Produkt byl vyčištěn od nízkomolekulámích příměsí (reakcí uvolněného 4nitrofenolu, nenavázaného lecirelinu, NaCl a tetraboritanu sodného) dvojnásobnou gelovou chromatografií na kolonce PD-10 (Pharmacia) naplněné Sephadexem g-25. Jako mobilní fáze byla použita destilovaná voda. Vyčištěný polymemí konjugát lecirelinu byl zmrazen a zlyofilizován. Bylo získáno 48 mg polymemího konjugátu lecirelinu.
Příprava konjugátu P-Gly-D,L-PheLeuGly-LEC
150 mg polymemího prekurzoru P-Gly-D,L-PheLeuGly-ONp (5,69 mol % ONp, Mw = 25 100, Mw/Mn = 1,34) bylo rozpuštěno v 1,5 ml 0,15N NaCl a k tomuto roztoku byl při 4 °C za míchání přidán roztok 19 mg lecirelinu v 1 ml 0,15N NaCl. Reakce byla prováděna při 9 °C a konstantní hodnotě pH 7,5, která byla udržována přídavkem nasyceného roztoku tetraboritanu sodného na pH státu (Radiometer) po dobu 6 h a po dobu dalších 12 h na hodnotě pH 8,0. Reakce byla ukončena přídavkem 10 μΙ l-amino-2-propanolu. Produkt byl vyčištěn od nízkomolekulámích příměsí (reakcí uvolněného 4-nitrofenolu, nenavázaného lecirelinu, NaCl a tetraboritanu sodného) dvojnásobnou gelovou chromatografií na koloně o rozměrech 3 x 30 cm naplněné Sephadexem g-25.
Příprava konjugátu P-Gly-D,L-PheLeuGly-LEC z P-Gly-D,L-PheLeuGly-OH
P-GlyPheLeu-OH (0,30 g) bylo rozpuštěno v 4 ml vody při teplotě 4 °C. Za stálého míchání byl přidán lecielin (40 mg). Zředěnou HCI bylo upraveno pH roztoku na hodnotu 6,5 a za míchání byl přidán N-ethyl-N'-(3-dimethyl-aminopropyl)karbodiimid hydrochlorid (1,3 g). Reakční
-6CZ 288568 B6 směs byla míchána 4 h při teplotě 4 °C a pH bylo udržováno na konstantní hodnotě 6,5. Reakční směs byla ponechána v klidu stát při 4 °C po dobu 20 hod. Po filtraci byl filtrát zbaven nízkomolekulámích příměsí na gPC koloně o rozměrech 6 x 20 cm naplněné Sephadexem g 25 při použití vody jako eluentu. Pevný produkt byl získán lyofilizací.
Příklad 3
Farmakokinetika protrahované formy lecirelinu.
Provedení experimentu:
Farmakokinetika protrahované formy lecirelinu byla sledována na čtyřech dospělých merinových ovcích o hmotnosti asi 45 kg. Aplikováno bylo 40 pg účinné látky lecirelinu v polymemí 15 protrahované formě, aplikace byla provedena intramuskulámě (i.m). Pro doplnění je uvedena i farmakokinetika protrahované formy lecirelinu u prasniček (prasničky o průměrné hmotnosti 110 kg, pohlavně dospělé, cyklující). Protrahovaná forma lecirelinu byla aplikována hluboko do krční svaloviny (i.m.).
Výsledky a zhodnocení experimentu:
Časová závislost koncentrace z polymeru uvolněného lecirelinu je znázorněna na grafu 1. První vlna zvýšení koncentrace nastupuje bezprostředně po aplikaci a kulminuje po 8. hodině (473,6 pg-ml'1). Tato vlna prakticky končí mezi 36. a 40. hodinou po aplikaci. Několik píků mezi 25 první a druhou výraznou vlnou, která se objevuje mezi 180. a 216. hodinou po aplikaci, je zatíženo velkou variabilitou. V grafu zachycujícím farmakokinetiku lecirelinu u ovcí jsou pro srovnání uvedena stanovení lecirelinu v krevní plazmě kontrolních, neaplikovaných ovcí. Ze srovnání průběhu obou křivek vyplývá, že druhá vlna vyplavení lecirelinu může být artefaktem, nebo je způsobena rozrušením amidických vazeb ve „spaceru“ biodegradabilního polymeru. 30 Z průběhu koncentrace lecirelinu byly vypočítány farmakokinetické parametry, které uvádíme v tabulce níže. Srovnáním farmakokinetických parametrů obou forem lecirelinu u ovcí zjistíme, že biologická dostupnost (vyjádřená hodnotou AUC) je 38krát vyšší a parametr eliminace (ti/2e) je 109,9krát delší u polymemí protrahované formy lecirelinu, než u formy neprotrahované.
Srovnání farmakokinetických studií protrahované a neprotrahované formy lecirelinu
| Aplikační forma | druh zvířete (dávka) | ti/2 e hod. | Cmax pg-ml-1 | Tmax hod | AUC pg.ml^.hod. |
| neprotrahovaná | ovce (10 mg) | 0,84 | 829,0 | 0,16 | 545,00 |
| protrahovaná | ovce (40 mg) | 91,20 | 473,60 | 4,0 | 20 723 |
| protrahovaná | prase (100 mg) | 16,90 | 1781,0 | 5,00 | 38 141,0 |
tI/2e - poločas eliminace Cmax - nejvyšší dosažená koncentrace
Tmax - čas, ve kterém bylo dosaženo Cmax AUC - vyjádření plochy pod křivkou
Příklad 4
Studium účinnosti protrahované formy lecirelinu:
1) Vliv podání protrahované formy lecirelinu na sekreci luteinizačního hormonu.
Provedení experimentu:
Do experimentu bylo zařazeno 10 pohlavně dospělých ovcí. Protrahovaná forma lecirelinu byla i.m. aplikována šesti ovcím v dávce 40 pg účinné látky pro toto, čtyřem kontrolním ovcím byl i.m. aplikován fyziologický roztok v množství 3,0 ml pro toto. V krevní plazmě ovcí byla provedena endokrinologická RIA vyšetření.
Výsledky a zhodnocení experimentů:
Kinetika vyplavování lecirelinu a sekreční odpověď LH je uvedena v grafu 2. NejvyšŠí koncentrace lecirelinu v krevní plazmě byla zaznamenána za 4 hodiny a postupně se snižuje do asi 50. hodiny po aplikaci. Ovce odpověděly na podání protrahované formy lecirelinu vylitím LH do krevního řečiště v trvání asi 4 hodin. Druhé zvýšení koncentrace LH, které je zachyceno 72. hodinu po aplikaci, je pravděpodobně preovulační pík LH a souvisí s fyziologickým růstem a zráním folikulů.
2) Inhibiční účinek lecirelinu v protrahované formě na steroidní aktivitu samců.
Provedení experimentu:
Experiment byl proveden na dvaceti pohlavně dospělých samcích laboratorního potkana o průměrné hmotnosti 246,4 g. Potkani byli rozděleni do pokusné a kontrolní skupiny. Pokusná skupina byla i.m. aplikována protrahovanou formou lecirelinu v týdenních intervalech dávkou 16,8 pg účinné látky na kg živé hmoty. V kontrolní skupině bylo v týdenních intervalech podáváno 0,25 ml fyziologického roztoku.
První, třicátý, šedesátý a devadesátý den pokusu byly zvířatům odebírány krevní vzorky a sonograficky vyšetřována prostata a velikost varlat. Devadesátý den pokusu byla všechna pokusná zvířata utracena a pitvána. Byla sledována hmotnost varlat a přídatných pohlavních žláz. Z krevní plazmy a varlat byly stanoveny koncentrace 17b-estradiolu a testosteronu. V průběhu pokusu byly sledovány též přírůstky a konverze krmivá.
Výsledky a zhodnocení experimentu:
V průměrné měsíční spotřebě krmivá nebyly zaznamenány statistiky průkazné rozdíly mezi skupinami. Přírůstek hmotnosti od začátku do konce pokusu byl statisticky významně vyšší u potkané ošetřených protrahovanou formou lecirelinu než u kontrolní skupiny. Od 30. dne až do ukončení experimentu byl sonograficky zjišťován statisticky vysoce průkazný nižší objem varlat u aplikované skupiny proti skupině kontrolní. Hmotnosti varlat a nadvarlat byly u pokusných potkanů statisticky vysoce nižší, než u kontrolních potkanů. Neprůkazné byly rozdíly mezi hmotnostmi prostaty, Cowperových žláz a semenných váčků. Koncentrace 17b-estradiolu v plazmě byla 30. den pokusu vyšší u aplikovaných potkanů, v dalším období nebylo zvýšení jeho koncentrace pozorováno, stejně jako při stanovení ve tkáni varlat. Od 30. dne byly u aplikovaných potkanů koncentrace testosteronu nižší v porovnání s kontrolními potkany, 30. a 60. den byla zaznamenána statistická průkaznost. Koncentrace testosteronu ve tkáni varlat byla při ukončení pokusu zjištěna také statisticky průkazně nižší.
Dlouhodobým podáním vysokých dávek protrahované formy lecirelinu bylo prokázáno snížení pohlavní aktivity samců laboratorního potkana.
-8CZ 288568 B6
3) Terapie chirurgicky vyvolané endometrózy u samic laboratorního potkana.
Provedení experimentu:
Do experimentu bylo zařazeno 27 samic laboratorního potkana, u kterých byla chirurgickým zákrokem vyvolána endometrióza. Aplikace protrahované formy lecirelinu byla provedena subkutánně dvakrát v týdenním intervalu v jednotlivé dávce 2,5 pg pro toto.
Výsledky a zhodnocení experimentu:
Plazmatické koncentrace hormonů po aplikaci protrahované formy lecirelinu jsou uvedeny v tabulce.
| Skupina | n zvířat | progesteron ng.mf1 | 17b-estradiol pg-mf1 | testosteron pg-mf1 |
| Kontrolní | 7,0 | 9,9±4,0 | 381,9±7,8 | 581,8±115,1 |
| Pokusná | 20,00 | 16,9±0,8 | 138,1±6,9** | 476,3+45,6 |
** statisticky vysoce průkazný rozdíl
Průkazný pokles koncentrace 17b-estradiolu byl zaznamenán u krys pokusné skupiny. Hyperestrogenní, hyperandrogenní a hypogestagenní stav navozený chirurgickým zásahem byl po aplikaci protrahované formy lecirelinu u krys normalizován.
4) Použití protrahované formy lecirelinu při léčbě poporodní anestrie krav.
Provedení experimentu:
Do experimentu byly zařazeny dojnice různého plemene a stáří s diagnostikovanou anestrií po 60. dnu po porodu. V anamnéze dojnice byla uvedena neříjivost, dojnice nebyla v období do 60. dnu po porodu inseminována. Při palpačním vyšetření ovarií nebyly na ovariích nalezeny patrné ovariální struktury, ovaria byla hladká, popř. drobně zrnitá, atretická. Při ultrasonografickém vyšetření byly diagnostikovány folikuly do velikosti 0,3 až 0,5 cm v různém stupni luteinizace. Protrahované forma lecirelinu byla aplikována i.m. v dávce 0,2 mg lecirelinu pro toto. Do kontrolní skupiny byly zařazeny dojnice ošetřené neprotahovanou formou lecirelinu - Supergestranem inj. v dávce 0,1 mg i.m. pro toto.
Výsledky a zhodnocení experimentu:
Výsledky pokusu jsou uvedeny v následující tabulce.
Terapie postpartální anesterie krav
| Pokusná skupina - protrahované forma | ||||
| počet | čas (dny) od aplikace do | |||
| ošetřených | vyléčených | vyléčení (nálezu ovariál. struktur) | 1. inseminace | zabřeznutí |
| 21,00 | 20 = 95 % | 10,5 ±6,26 (n=12) | 20,87 ±15,88 (n=15) | 27,6 ±39,38 (n = 5) |
| Kontrolní s | cupina - neprotrahovaná forma | |||
| 25,00 | 25 =100 % | 15,13 ± 10,74 (n=15) | 27,13 ±20,05 (n-23) | 65 ± 45,33 (n=10) |
-9CZ 288568 B6
Do vyhodnocení experimentu byly zařazeny dojnice, u kterých se v provozních podmínkách podařily získat reprodukční ukazatele, ale ze zkráceného přehledu jsou patrny kratší intervaly ve všech sledovaných ukazatelích.
5) Terapie ovariálních cyst u krav.
Provedení experimentu:
Do experimentu bylo zařazeno celkem 76 dojnic, u kterých byly diagnostikovány ovariální cysty folikulámího typu. K léčbě byla použita protrahovaná forma lecirelinu v dávce 0,2 mg úč. látky pro toto a byla srovnána s neprotrahovanou formou lecirelinu (Supergrestran inj.) v dávce 0,1 mg lecirelinu pro toto.
Výsledky a zhodnocení experimentu:
Srovnatelné osu počty vyléčených zvířat celkem, vyšší terapeutická účinnost protrahované formy lecirelinu se však projevuje ve všech ostatních reprodukčních ukazatelích. Srovnání účinností obou preparátů je uvedeno v následující tabulce.
Terapie ovariálních cyst u skotu
| Po | cusná skupina - protrahovaná forma | ||||
| počet | čas(dny)od a | plikace do | |||
| aplik. | z toho vyléčených | vyléčení (bez pat. nálezu) | 1. říje | 1. inseminace | zabřeznutí |
| 43 | 34 = 79 % po 1 apl. 32 = 74 % | 11,8 ± 5,17 (n = 25) | 18,31 ± 10,04 (n=13) | 28,28 ± 17,9 (n=18) | 49,5 ± 57,2 (n=12) |
| Kontrolní skupina - neprotrahovaná forma | |||||
| 33 | 27 = 81 % po 1 apl. 17 = 52% | 14,79 ±7,72 (n=14) | 20,45 ± 10,99 (n=ll) | 46,13 ±26,01 (n = 23) | 93,04 ± 69,3 (n=10) |
6) Indukce ovulace u ovcí.
Provedení experimentu:
Ovulace byla indukována u šestnácti usperovulovaných ovcí. Ovce byly superovulovány přípravkem na bázi pFSH po předchozí zástavě pohlavního cyklu poševními tampóny s gestagenní aktivitou. Superovulované ovce byly rozděleny do dvou skupin po osmi kusech. Pokusná skupina byla ošetřena protrahovanou formou lecirelinu v dávce 5 pg účinné látky pro toto. Ovcím byl aplikován lecirelin (obě formy) v intervalech 24, resp. 32 hodin před porážkou. Po aplikacích byly sledovány koncentrace lecirelinu a LH v krvi experimentálních zvířat.
Výsledky a zhodnocení experimentu:
V průběhu experimentu nebyl prokázán rozdíl mezi aplikací obou forem lecirelinu. Na vaječnících ovcích aplikovaných LH-RH 32 hodin před porážkou byly pozorované zkolabované folikuly těsně po ovulaci (do 2 hodin), zároveň byly zjištěny i folikuly ještě neovulované. U skupin pokusných zvířat, kterým byl aplikován LH-RH 24 hodin před porážkou, ovulační body nalezeny nebyly. K ovulaci grafových folikulů u superovulovaných ovcí dochází kolem 32. hodiny po aplikaci indukční dávky lecirelinu.
Vrchol koncentrace obou přípravků byly pozorovány za 2 hodiny po aplikaci. Absolutní hodnoty koncentrace LH-RH po aplikaci Supergestranu byly o 75 % nižší, než po aplikaci polymemí
-10CZ 288568 B6 formy lecirelinu. Hladina LH-RH uvolňovaného z polymemí formy lecirelinu přetrvávala v krevní plazmě o 20 hodin déle, než po aplikaci Spergestranu. Terapeutický efekt byl u obou preparátů srovnatelný.
7) Použití protrahované formy lecirelinu na přerušení sezónní anestrie malých přežvýkavců.
Úvod:
Ovce a kozy se vyznačují výraznou pohlavní sezónností. Pohlavní cyklus probíhá se zřetelem ke klimatickým podmínkám a plemenné příslušnosti u ovcí většinou v období pozdního léta a na podzim. Jen asi u 10 až 20 % ovcí se říje objeví na jaře a v létě. Délka pohlavního cyklu se pohybuje mezi 14 až 21 dny, vlastní říje trvá 24 a až 36 hodin, příznaky říje jsou málo zřejmé a obtížně rozeznatelné. K vyhledání a rozpoznání říjících se ovcí se využívají beraní prubíři. U koz pohlavní cykly probíhají především od poloviny září do prosince, méně často i na jaře. Délka pohlavního cyklu je 19 až 22 dny, říje trvá zpravidla 24 hodin, příznaky říje jsou relativně zřejmé. Protrahovaná forma lecirelinu nám dává možnost tento sezónní anestrus přerušit a vyvolat fyziologickou říji.
Provedení experimentů:
Možnost přerušení sezónního anestru, popřípadě možnost synchronizace pohlavního cyklu i.m. podáním 40 pg protrahované formy lecirelinu byla ověřována v 11 experimentech na 60 ovcích a 26 kozám. V kontrolních skupinách bylo zařazeno 14 ovcí a 7 koz. V experimentech na ovcích byly použity ovce merinového typu, ovce východofrížského plemene a kříženky merinových ovcí s plemenem Kent (Oxford - down). V experimentech na kozách bylo použito plemeno kozy bílé, resp. jeho kříženky tohoto plemene.
U všech pokusných zvířat byla před aplikací provedena laparoskopická kontrola ovarií, v experimentech, kde nebyla přesvědčivě vyjádřena anestrie (u koz v roce 1994) byly pokusy provedeny u zvířat po předchozí zástavě cyklu. Aplikace přípravků byla provedena intramuskulámě hluboko do šíjové svaloviny v dávce 0,04 mg účinné látky pro toto. Podáním podprahových dávek estrogenů - 0,25 mg estradiolu ve specialitě Agofollin inj. ad us. vet. spolu s aplikací polymemí protrahované formy lecirelinu, byl proveden pokus o sensibilizaci hypofýzy pokusných zvířat k působení lecirelinu u zvýšení celkové estogenizace organismu. Účinnost preparátu byla ověřována opětovným laparoskopickým vyšetřením. Nástup ovariální cyklicity byl charakterisován nálezem preovulačních folikulů nebo žlutých tělísek.
Výsledky a zhodnocení experimentů:
Účinnost ošetření se pohybovala od 40 do 100 % ošetřených zvířat. Příznaky říje, zejména u ovcí, byly u indukovaných říjí nevýrazné Berani prubíři projevovali zájem o pokusné ovce, u těch však nebyl vyjádřen reflex stání a nebylo možné připuštění. K nastartování fyziologického pohlavního cyklu došlo u 44 ovcí z 60 pokusných, tj. 73 % a 21 koz z 26 pokusných, tj. 81 %. Plnohodnotná ovulace byla laparoskopicky diagnostikována u 34 ovcí a 17 koz, tj. 57 a 65 %, u zbývajících 10 ovcí a 4 koz byly nalezeny preovulační folikuly. U kontrolních skupin byl pozorován nástup říjových změn na ovariích u 1 ze 14 ovcí, tj. 7,14 % a 4 ze 7 koz, tj. 57 %. Nulové výsledky v experimentu na ovcích v srpnu 1995 byly pravděpodobně způsobeny plemenou příslušností ovcí. Do experimentu byly zařazeny ovce východofrížského plemene, u kterých je velmi silně vyjádřen mimo sezónní i laktační anestrus. Podáním podprahových dávek estrogenů - 0,25 mg estradiolu ve specialitě Agofillin inj. ad us.vet. spolu s aplikací konjugátu lecirelinu jsme u ovcí dosáhli zvýraznění sexuálního chování. U kontrolní skupiny, které byl podán pouze estradiol, se říjové chování nedostalo a laparoskopicky byla nalezena anestrická ovaria. Obdobný pokus byl proveden u koz se zástavou cyklu, kde se však říjové chování dostavilo u všech zvířat pokusné i kontrolní skupiny. Při těchto kombinovaných ošetřeních ke zlepšení zevních příznaků říje, reflex stání se dostavil u 12 z 15 pokusných ovcí a u 4 ze 4 pokusných koz.
-11CZ 288568 B6
Souhrnné výsledky účinnosti aplikace protrahované formy lecirelinu při přerušenní sezónní anestrie u malých přežvýkavců protrahovanouformou LH-RH
| druh zvířete | celkový počet | nástup ovariální aktivity | nález CL |
| ovce | 60 | 44 = 73 % | 34 = 57 % |
| kozy | 26 | 21 = 81 % | 17 = 65% |
Přehled jednotlivých experimentů uvádíme v následujících tabulkách.
Přehled experimentů - přerušení sezónní anestrie malých přežvýkavců - 1994
| číslo pokusu | č. skupiny aplikace | počet zvířat | laparoskopický nález | účinnost |
| pokus č. 1 10 ovcí (březen) | p-lec | 6 | 3 ovce Cl 2 ovce pF 1 ovce atrofie ovarií | účinnost 83% |
| fyziol. roztok | 4 | 1 ovce pF 3 ovce anestrická ovaria | neúplná anestrie | |
| pokus č.2 15 ovcí (červen) | p-lec + E2 | 5 | 3 ovce Cl 2 ovce pF | účinnost 100% reflex stání 3 zv. |
| p-lec | 5 | 3 ovce CL 2 ovce pF | účinnost 100 % | |
| e2 | 5 | 5 ovcí anestrická ovaria | účinnost 0% | |
| pokus č.3 14 ovcí (srpen) | p-lec | 9 | 6 ovcí Cl 3 ovce anesterická ovaria | účinnost 67% |
| fyziol. roztok | 5 | 5 ovcí anestrická ovaria | ||
| pokus č. 4 10 ovcí (květen) | p-lec | 10 | 3 ovce pF 1 ovce SOC | účinnost 40% |
| pokus č.5 6 koz (květen) | p-lec | 3 | 1 kozaCl 1 koza pF 1 koza anesterická ovaria | účinnost 67% |
| fyziol. roztok | 3 | 3 kozy anestrická ovaria | účinnost 0% | |
| pokus č. 6 12 koz (květen) | p-lec + e2 | 4 | 3 kozy Cl 1 koza pF | účinnost 100% reflex stání 4 zv. |
| p-lec | 4 | 4 kozy Cl | účinnost 100% reflex stání 2 zv. | |
| e2 | 4 | 3 kozy Cl 1 koza pF | reflex stání 4 zv. |
p-lec - protrahovaná forma lecirelinu lec - neprotrahovaná forma lecirelinu E2 - přípravek na bázi estrogenů tamp. - přípravek na bázi gestagenů
CL - žluté tělísko pF - preovulační folikul LF - luteinizovaný folikul
-12CZ 288568 B6
Přehled experimentů - přerušení sezónní anestrie malých přežvýkavců - 1995
| číslo pokusu počet zvířat | č. skupiny aplikovaná látka | počet zvířat | laparoskopický nález po aplikaci | účinnost |
| pokus č.1 10 ovcí květen 95 | p-lec + tampóny | 5 | 4 ovce Cl | účinnost 80% RS 5 zv., přip. 2 zv. |
| p-lec | 5 | 5 ovcí CL | účinnost 100 % RS u 2 zv., | |
| pokus č. 2 10 ovcí srpen 95 | lec. (15 mg) + E2 (0,25 mg) | 5 | bez Cl, atypický nález ovulace? u 1 zv. ovulace | přip. 4 z 5 neúčinná apl.? |
| p-lec +E2 (0,25 mg) | 5 | bez CL, atypický nález ovulace? u 3 zvířat | přip. 5 zv. neúčinná apl.? | |
| 10 ovcí říjen 1995 srovnání 2 šarží Polygestranu | p-lec | 5 | 5 ovcí Cl | účinnost 100% připuš. 0 zv. RS3zv. |
| p-lec | 5 | u 5 zvířat CL | účinnost 100% připuš. 0 zv. RS 3 zv. | |
| pokus č. 4 Kozy duben 95 | Polygestranu 0,05 mg LH-RH | 5 | z nepřipuštěných zv. 1 x ovulace 2x nezovulovaný PF | účinnost 100% 2 x přip., březost 0 |
| pokus č. 5 Kozy srpen 95 | Polygestranu 0,04 mg | 10 | z nepřipuštěných zvířat u 2 ovcí CL | účinnost 60% přip. 4 zv. 1 zv. přip. až 9. den |
p-lec - protrahovaná forma lecirelinu lec - neprotrahovaná forma lecirelinu E2 - přípravek na bázi estrogenů tamp. - přípravek na bázi gestagenů
Cl - žluté tělísko pF - preovulační folikul LF - luteinizovaný folikul
Přehled indikačních oblastí pro využití protrahované formy gnRH:
Pro navozování endokrinní homeostázy v organismu zvířat se nám jeví jako nejvhodnější použít protrahovanou formu, která zabezpečí postupné uvolňování gnRH po dobu 2 až 4 dnů.
Protrahovaná forma s takovou dobou uvolňování je vhodná pro následující indikace:
Potlačení (vysoké dávky), resp. stimulace (nízké dávky):
Růst a zrání ovariálních folikulů, indukce ovulace, regulace steroidogeneze, podpora luteinizace ovariálních struktur, přerušení anestru, start ovariální aktivity, léčba atrezie ovarií, formování luteální tkáně při patologických procesech na ovariích, regulace androgenní aktivity, spermatogeneze, ovulace, koncepce a kontracepce, nástup puberty, léčba endometrióz a hormonálních disbalancí pohlavních steroidů, léčba steroidodependentních novotvarů, léčba gonádotropních dysfunkcí.
-13CZ 288568 B6
Využitelnost vynálezu
Polymemí forma lecirelinu podle vynálezu může zajistit uvolňování účinné látky - lecirelinu z polymemího nosiče v průběhu několika dní. V této formě může být polymemí konjugát použit 5 především jako veterinární léčivo v následujících indikačních oblastech:
Ovlivnění růstu a zrání uvariálních folikulů, indukce ovulace, regulace steroidogeneze, podporu luteinizace ovariálních struktur, přerušení anestru různé etiologie, start ovariální aktivity, léčba atresie ovarií, formování luteální tkáně při patalogických procesech na ovariích, regulace 10 androgenní aktivity, sparmatogeneze, regulace ovulace, koncepce a kontracepce, ovlivnění nástupu puberty, léčbu endometrióz a hormonálních disbalancí pohlavních steroidů, léčbu steroidodependentních novotvarů a léčbu gonádotropních dysfunkcí.
Claims (2)
- PATENTOVÉ NÁROKY20 1. Polymemí konjugáty lecirelinu s protrahovaným účinkem sestávající z polymemího nosiče obsahujícího 30 až 1000 monomemích jednotek spojených do polymemího řetězce, z nichž je 60 až 98 % jednotek N-(2-hydroxypropyl)methakrylamidu, 0 až 38 % jednotek kyseliny akrylové nebo methakiylové ve formě sodných solí a 2 až 40 % jednotek methakryloylovaných a nebo ε aminokyseliny nebo oligopeptidů, s terminálně chemickou vazbou připojeným lecirelinem.2. Polymemí konjugáty lecirelinu sprotrahovaným účinkem podle nároku 1, vyznačené tím, že lecirelin je v konjugátech vázán k polymeru přes spojku hydrolyticky nestálou vazbou, vzniklou acylací guanidinové skupiny argininu, jedné z aminokyselin tvořící biologicky aktivní oligopeptid lecirelin, vzorce IP-X-NH-C-NH-<CH2)3-(LEC)IINH (I), kde P je polymer, LEC je zbytek molekuly lecirelinu bez postranního substituentu u argininu a X je a nebo ε aminokyselina nebo oligopeptid.3. Polymemí konjugáty lecirelinu s protrahovaným účinkem podle nároku 1 a 2 pro použití při 40 ovlivňování reprodukčního cyklu hospodářských zvířat.4. Polymemí konjugáty lecirelinu s protrahovaným účinkem podle nároku 1 a 2 pro použití při ovlivnění růstu a zrání ovariálních folikulů, indukci ovulace, regulaci steroidogeneze, podporu luteinizace ovariálních struktur, přerušení anestru, start ovariální aktivity, léčbě atresie ovarií,45 formování luteální tkáně při patologických procesech na ovariích, regulaci androgenní aktivity, spermatogeneze, ovulace, koncepce a kontracepce, regulaci předčasného nástupu puberty, léčbu endomerióz a hormonálních disbalancí pohlavních steroidů, léčbě steroidodependentních novotvarů a léčbě gonádotropních dysfunkcí hospodářských zvířat, zvláště pak krav, ovcí a koz.50 5. Farmaceutické veterinární přípravky, v y z n a č e n é tí m , že jako účinnou látku obsahují polymemí konjugáty lecirelinu s protrahovaným účinkem podle nároků 1 a 2.
- 2 výkresy-14CZ 288568 B6Graf 1. Kinetika protrahované formy lecirelinu po i.m. aplikaci 40 mg pro toto u ovcí-15CZ 288568 B6Graf 2. Kinetika protrahované formy lecirelinu a sekreční odpověď LH v plazmě ovcí poi.m. aplikaci 40 mg pro toto
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CZ1998950A CZ288568B6 (cs) | 1998-03-27 | 1998-03-27 | Polymerní konjugáty lecirelinu s protrahovaným účinkem a jejich použití |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CZ1998950A CZ288568B6 (cs) | 1998-03-27 | 1998-03-27 | Polymerní konjugáty lecirelinu s protrahovaným účinkem a jejich použití |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CZ95098A3 CZ95098A3 (cs) | 1999-10-13 |
| CZ288568B6 true CZ288568B6 (cs) | 2001-07-11 |
Family
ID=5462516
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CZ1998950A CZ288568B6 (cs) | 1998-03-27 | 1998-03-27 | Polymerní konjugáty lecirelinu s protrahovaným účinkem a jejich použití |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| CZ (1) | CZ288568B6 (cs) |
-
1998
- 1998-03-27 CZ CZ1998950A patent/CZ288568B6/cs not_active IP Right Cessation
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| CZ95098A3 (cs) | 1999-10-13 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| JP2621970B2 (ja) | 極く僅かのヒスタミンを放出するホルモン放出黄体形成ホルモンの効果的拮抗物質 | |
| CN100488560C (zh) | 制备大量微胶囊的方法 | |
| KR930008095B1 (ko) | Lhrh 길항제로서 유용한 lhrh의 노나펩타이드 및 데카펩타이드 동족체 | |
| FI72527C (fi) | Foerfarande foer framstaellning av en terapeutiskt anvaendbar polypeptid. | |
| JP2719233B2 (ja) | 黄体形成ホルモン放出ホルモン拮抗ペプチド | |
| EP0500695A4 (en) | Gnrh analogs | |
| WO1991005563A1 (en) | Therapeutic decapeptides | |
| WO1990009799A1 (en) | GnRH ANALOGS FOR DESTROYING GONADOTROPHS | |
| JPH09500110A (ja) | ＧｎＲＨの拮抗ペプチドの調製に有用な、グアニジノ又は修飾されたグアニジノ基を有するフェニルアラニン誘導体又は同族体の調製法 | |
| SK283926B6 (sk) | Implantovateľné zariadenie na dodávanie liečiva, spôsob jeho prípravy a použitie formulácie peptidovej zlúčeniny | |
| HU217552B (hu) | GnRH-antagonista peptidek | |
| JPH09503742A (ja) | ワクチン用免疫原性ｌｈｒｈペプチド構築体および合成普遍免疫刺激器 | |
| RU2004102507A (ru) | Композиция с регулируемым высвобождением и способ ее получения | |
| US20050245455A1 (en) | Gonadotropin releasing hormone antagonists in gel-forming concentrations | |
| EP2335736B1 (en) | Pharmaceutical composition utilising combinations of variants of the gonadotropin-releasing hormone (gnrh) as immunogen | |
| KR0123009B1 (ko) | 쥐이엔알에이취(GnRH) 유사체 | |
| US6326467B1 (en) | Hormone-recombinant toxin compounds and methods for using same | |
| Finstad et al. | Synthetic luteinizing hormone releasing hormone (LHRH) vaccine for effective androgen deprivation and its application to prostate cancer immunotherapy | |
| JP2020528070A (ja) | 持続型パルミチン酸結合ＧｎＲＨ誘導体及びこれを含む薬剤学的組成物 | |
| US3888838A (en) | Decapeptide having luteinizing hormone (lh)-and follicle stimulating hormone (fsh)-releasing activity, salts and compositions thereof, a process for preparing same, and intermediates therefor | |
| CZ288568B6 (cs) | Polymerní konjugáty lecirelinu s protrahovaným účinkem a jejich použití | |
| JPH08504209A (ja) | ６位修飾デカペプチドｌｈｒｈ拮抗薬 | |
| CA2500897A1 (en) | Long-acting gonadotropin-releasing hormone analogs and methods of use thereof | |
| US20060100154A1 (en) | Long-acting gonadotropin-releasing hormone analogs and methods of use thereof | |
| US11957732B2 (en) | Compositions and methods for sensitizing low responsive tumors to cancer therapy |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| PD00 | Pending as of 2000-06-30 in czech republic | ||
| MM4A | Patent lapsed due to non-payment of fee |
Effective date: 20130327 |