CZ282231B6 - Prostředek na generování nového růstu kosti v savci - Google Patents

Abstract

Prostředek na generování nového růstu kosti v savci, jenž potřebuje takovouto léčbu, obsahuje bezpečné a účinné množství sloučeniny ze skupiny vitamínu D v kombinaci s BMP (bílkovina kostní morfogenézy) vybrané ze skupiny sestávající z BMP-1, BMP-2, BMP-3, BMP-4, BMP-5, BMP-6 a BMP-7 (s popsanými odpovídajícími sekvencemi cDNA) nebo v kombinaci s osteoinduktivním extraktem obsahujícím jednu nebo víc BMP, spolu s farmaceuticky přijatelným nosičem.ŕ

Description

Farmaceutický prostředek obsahuje Jako účinné látky: a) sloučeninu vitaminu D a b) kostní morfogenetickou bílkovinu vybranou ze skupiny zahrnující BMP-1 až 7, ve spojení s nosičem. Množství sloučeniny vitaminu D Je 30 ng až 10 pg a množství BMP je alespoň 2.5 pg v jednotkové dávce. Sloučenina vitaminu D je vybrána ze skupiny zahrnující vitamin D2; vitamin D3; 1 -α-hydroxyvitamln D3; 1-a-fluorovltamin D3; 3-deoxy-l, 25-dihydroxyvitamln D3; 25-hydroxy-5,6-trans vitamin D3; 25-hydroxyvltamin

D2; 25-hydroxyvitamin D3; 1,25-dihydroxyvitaniin D2; 24,25-dihydroxyvltamin D2; 24,25-dlhydraxyvltamln D3 a 1,25-dihydroxyvitamin D3. Výhodným nosičem Je injekční nebo místně-orální nosič.

Farmaceutický prostředek na generování nového růstu kosti v savci

Oblast techniky

Vynález se tyká farmaceutického prostředku na generování nového růstu kosti v savci. Aktivními složkami farmaceutického prostředku podle vynálezu se dosahuje synergického růstu kostí.

Dosavadní stav techniky

U normálních jedinců růst kostí všeobecné probíhá normálně a zlomeniny se hojí bez potřeby farmakologického zásahu. Přesto v určitých případech mohou být kosti zeslabené nebo mohou nevykazovat řádné hojení. Hojení může probíhat pomalu například u starších pacientů nebo 15 pacientů léčených kortikosteroidy. jako jsou transplantační pacienti a pacienti léčení na chronická plicní onemocnění. Jiný příklad je osteoporóza. Osteoporóza je abnormální ztráta kostní tkáně vyskytující se u žen po menopauze a u starších mužů. Tato porucha zvyšuje riziko malých kostních zlomenin, obzvláště páteřních. V současnosti se osteoporóza léčí dodáváním vápníku, vitaminu D. estrogenu nebo kalcitonínu. hormonu jenž řídi tělesné využívání vápníku. 20 Bohužel, takovéto léčby jsou jen prevencí proti dalším ztrátám kostní hmoty. V oboru existuje potřeba léčby, která by zacházela za prevenci ztráty kostní hmoty a podporovala tvorbu kostí nebo zvrátila ztrátu kostní hmoty.

V publikaci Bone Morphogenic Proteins and Vitamin D (Bílkoviny kostní morfogenézy 25 a vitamin D). Nutrition Revievvs. sv. 47, (1989). str. 364-366 se dochází názoru, že vitamin D ve stravě brání ztrátě osteoinduktivní aktivity v kostní hmotě.

Turner. R. T., J. Farley. J. J. Vandersteenhoven. S. Epstein. N. H. Bell a D. J. Baylink (1988) Demonstration of Reduced Mitogenic and Osteoinductive Activities in Demineralized 30 Allogeneic Bone Matrix from Vitamin D-deficient Rats (Prokázání snížených mitogenických a osteoinduktivních aktivit v demineralizované alogénní kostní hmotě z krys deficientních na vitamin D). The Joumal of Clinical Investigation. Inc., sv. 82. str. 212-217. uveřejňuje implantaci demineralizované kostní hmoty z vitamin D - deficientních krys do normálních krys. Demineralizovaná kostní hmota z vitamin D - deficientních krys nepodporovala osteoindukci tak 35 účinné jako demineralizovaná kostní hmota z normálních krys.

Sampath. T. K., S. Weintraub a A. H. Reddi (1984) Extracellular Matrix Proteins involved in bone Induction are Vitamin D dependent” (Extracelulámí matrixové bílkoviny zapojené do kostní indukce jsou závislé na vitaminu D). Biochemical and Biophysical Research to Communications, sv. 124, str. 829-835 uveřejňuje studii zahrnující implantaci demineralizované kostní hmoty z normálních krys a demineralizované kostní hmoty z rachitických krys, kde rachitická kostní hmota neindukovala růst kosti zatím co normální kostní hmota ano. Studie uzavírá, že tyto výsledky ukazují, že vitamin D je potřebný k tvorbě kostních induktivních proteinů v kostní hmotě živé krysy.

U. S. Patent č. 4 761 471, Urist, udělený Universitě Kalifornie, vydaný 2. srpna 1988. popisuje prostředek s kostní morfogenetickou bílkovinou, obsahující BMP faktor a bílkovinu spojenou s BMP faktorem o molekulové hmotnosti 34 000 daltonů. Popisuje zde rovněž použití takovýchto faktorů a prostředků k indukci tvorby kosti v savcích.

U. S. Patent č. 4 455 256, Urist, udělený Universitě Kalifornie, vydaný 19. června 1984. popisuje kostní morfogenetickou bílkovinu o molekulové hmotnosti v rozmezí 1 000 až 100 000 daltonů.

Mnohé jiné morfogenetické bílkoviny/faktory, osteoinduktivní faktory, osteogenní faktory ajiné bílkoviny faktory spojené srůstem kosti se popisují v následujících publikacích: U.S. Patent

968 590, Kubersampath a Rueger. vydaný 6. listopadu 1990; U.S. Patent 4 698 328. Neer, Pots a Slovik, vydaný 6. října 1987; U.S. Patent 4 877 864. Wang, Wozney a Rosen, vydaný 31. října 1989; U.S. Patent 4 861 757, Antoniades, Lvnch a Williams. vydaný 29. srpna 1989; U.S. Patent 4 810 691. Seyedín, Thomas. Bentz. Ellingsvvoth a Armstrong, vydaný 7. března 5 1989: U.S. Patent 4 804 744, Sen, vydaný 14. února 1989: U.S. Patent 4 795 804, Urist.

vydaný 3. ledna 1990; U.S. Patent 4 789 663. Wallace. Smestad, McPerson, Piez a Ross. vydaný

6. prosince 1988; U.S. Patent 4 789 732, Urist, vydaný 6. prosince 1988; U.S. Patent 4 774 322. Sevedin. Thomas. Bentz. Ellingsvvoth a Armstrong, vydaný 27. září 1988; U.S. Patent 4 698 328. Neer, Pots a Slovik. vydaný 6. října 1987; U.S. Patent 4 627 982, Seydin a Thomas, vydaný 9. ío prosince 1986; U.S. Patent 4 619 982, Urist. vydaný 28. října 1986; U.S. Patent 4 596 5~4, Urist.

vydaný 24. června 1986; U.S. Patent 4 563 489, Urist. vydaný 7. ledna 1986; U.S.

Patent 4 526 909. Urist. vydaný 2. července 1985; U.S. Patent 4 434 894, Seydin a Thomas, vydaný 23. února 1987; U.S. Patent 4 294 753. Urist, vydaný 13. října 1981; evropská patentová přihláška 349 048, Bab, Muhlrad. Gazit a Shteyer, publikovaná 3. ledna 1990; evropská 15 patentová přihláška 309 241, Chu, Nathan a Seyedin, publikovaná 29. března 1989; evropská patentová přihláška 336 760. Bentz, Nathan. Rosen, Dash a Seyedin. publikovaná 11. října 1989; evropská patentová přihláška 145 155, Sen. publikovaná 10. června 1985; světová patentová přihláška 89/10934, Roos. Bums, Guy a McKnight, publikovaná 16. listopadu 1989; světové patentové přihlášky 89/09787 a 89/09788. Oppermann, Kubersampath, Rueger a Ozkaynak. 20 publikované 19. října 1989: světová patentová přihláška 88/00205, Wang Wozney a Rosen.

publikovaná 14. ledna 1988.

Podstata vynálezu

Předmětem vy nálezu je farmaceutický prostředek na generovaní nového růstu kosti v savcích.

Jeho podstata spočívá v tom. že jako účinné látky obsahuje:

a) sloučeninu vitaminu D a

b) kostní morfogenetickou bílkovinu vybranou ze skupiny zahrnující BMP-1, B.MP-2. BMP-3. BMP-4. BMP-5. BMP-6 a BMP-7, ve spojení

c) s farmaceuticky přijatelným nosičem.

Farmaceutický prostředek podle vynálezu obsahuje sloučeninu vitaminu D v množství od 30 ng až 10 μg a BMP v množství alespoň 2,5 μg v jednotkové dávce.

Sloučeninu vitaminu D se pro farmaceutický prostředek podle vynálezu volí ze skupiny 40 zahrnující vitamin D_;; vitamin D₃; 1 cc-hydroxyvitamin D₃; 1-a-fluorovitamin D₃; 3-deoxy-l,25dihydroxyvitamin D₃; 25-hydroxy-5,6-trans vitamin D₃; 25-hydroxyvitamin D₂; 25hydroxyvitamin D₃: 1,25-dihydroxyvitamin D₂; 24,25-dihydroxyvitamin D₂; 24,25dihydroxyvitamin D₃ a 1.25-dihydroxyvitamin D₃.

Výhodnou sloučeninou vitaminu D je 1,25-dihydroxyvitamin D₃.

Jako farmaceuticky přijatelný nosič obsahuje farmaceutický prostředek podle vynálezu injekční nosič nebo místně-orální nosič.

Podle jednoho výhodného provedení obsahuje farmaceutický prostředek podle vy nálezu BMP ve formě složky osteoinduktivního extraktu obsahujícího alespoň jednu BMP vybranou ze skupiny zahrnující BMP-1. BMP-2. BMP-3. BMP-4. BMP-5. BMP-6 a BMP-7.

Ve farmaceutickém prostředku podle vynálezu se podává sloučenina vitaminu D v množství 1 ng až 1 mg a BMP v množství 1 pg až 100 μg. Výhodné množství sloučeniny vitaminu je 30 ng až 10 μ§ a množství BMP alespoň 2,5 μg.

S překvapením bylo zjištěno, že působením sloučeniny vitaminu D v kombinaci s osteoinduktivním extraktem nebo v kombinaci s nejméně jednou BMP vede k hladině nového růstu kosti, který je větší než při podávání BMP. osteoinduktivního extraktu nebo sloučeniny vitaminu D jednotlivě. Subjekty, které potřebují takovéto léčení, mohou trpět řadou poruch, které se dají léčit tímto postupem, včetně, nikoli však výhradně, zlomenin kostí (uzavřených a otevřených), nespojitých zlomenin, vrozených vad, vedlejších důsledků plastické chirurgie, léčení onkologických resekcí, všech chorob klasifikovaných jako osteoporóza, revmatoidní artritida, osteoartritida. septická artritida, rachitis, organického zabudování protetických kloubů a dentálních implantátů, jakož i osteopenických a osteomalačních stavů a onemocnění.

Jak se zde používá, bezpečná a účinná dávka znamená množství sloučeniny nebo prostředku postačující na významné vyvolán i pozitivní změny v stavu, který se má léčit, ale dostatečné nízké, aby zabránilo vážnému vedlejšímu účinku (při rozumném poměru prospěchu a rizika), v rámci správného lékařského posouzení. Takováto bezpečná a účinná dávka se bude měnit podle konkrétního stavu, jež se má léčit, věku a tělesného stavu pacienta, jenž má být léčen, vážnosti stavu, délky léčby, povahy průvodní terapie, specifických použitých sloučenin a prostředku, konkrétního farmaceuticky přijatelného použitého nosiče a podobných faktorů, v rámci znalosti a expertízy ošetřujícího lékaře.

Jak se zde používá, redukce zlomeniny znamená nápravu kostní zlomeniny chirurgickými nebo manipulačními prostředky do její normální anatomické polohy.

Termín BMP, jak se zde používá, znamená kostní morfogenetickou bílkovinu (bone morphogenetic protein).

Jak se zde používá, q.s. znamená postačující množství (quantity sufficient).

Všechna uváděná procenta jsou hmotnostní, pokud není uvedeno jinak.

Zde používaný pojem lokální léčba zahrnuje léčbu zlomenin kostí (uzavřených a otevřených), léčbu nespojitých zlomenin, léčbu vrozených vad. vedlejších důsledků plastické chirurgie, léčbu onkologických resekcí, organické zabudování protetických kloubů a organické zabudování dentálních implantátů.

Zde používaný pojem systémová léčba zahrnuje léčbu chorob klasifikovaných jako osteoporóza, revmatoidní artritida, osteoartritida. septická artritida, rachitis a osteopenických onemocnění.

Všechny rozsahy dávek pro systémovou léčbu jsou uváděny jako suchá hmotnost aktivních složek na kilogram tělesné hmotnosti savce.

Rozsahy dávek pro lokální léčbu se zde uvádějí vždy jako suchá hmotnost aktivních složek na cm' plochy povrchu mineralizované tkáně, na níž se má působit.

Pojem mineralizovaná tkáň, jak se zde používá, znamená kost nebo zuby.

Jednou ze složek farmaceutického prostředku podle vynálezu je sloučenina ze skupiny vitaminu D. Termín sloučenina ze skupiny vitaminu D (sloučenina vitaminu D) zahrnuje vitamin D. ergokalciferol (vitamin D₂), cholekalciferol (vitamin Dý ajejich biologicky aktivní metabolity a prekurzory. Sloučeniny ze skupiny vitaminu D jimž se dává přednost jsou, ale bez jejich omezení, vitamin D₂ (Sigma, St Louis, MO), vitamin D₃ (Sigma, St. Louis, MO). 1-ahydroxyvitamin D₃, 1-a-fluorovitamin D₃, 3-deoxy-l,25-dihydroxyvitamin D₃, 25-hydroxy-5,6trans vitamin D₃, 25-hydroxvvitamin D₂, 25-hydroxyvitamin D₃ (Hoffman La Roche), 1,255 dihydroxyvitamin D₃. 24,25-dihydroxyvitamin D₂, 24.25-dihydroxyvitamin D₃ (Hoffman La

Roche). 1,25-dihydroxvvitamin D₃ (Duphar. Veenendaal, Holandsko). Přednostně je sloučenina ze skupiny vitaminu D vybrána z 25-hydroxyvitaminu D_;. 25-hydroxyvitaminu D₃. 1.25dihydroxyvitaminu D₂. 24,25-dihydroxyvitaminu D₂ a 24,25-dihydroxyvitaminu D₃. Přednost se dává 1.25-dihydroxyvitaminu D₃. Další sloučeniny ze skupiny vitaminu D užitečné 10 v předkládaném vynálezu jsou dobře známy osobám zběhlým v oboru a jsou publikovány v následujících U. S. patentech, z nichž každý se zde zahrnuje odkazem: U. S. Patent 4 970 203. DeLuca a Kwiecinski. vydaný 13. listopadu 1990; U. S. Patent 4 927 815. DeLuca. Kutner. Perlman a Schnoes. vydaný 22. května 1990; U. S. Patent 4 85 518, DeLuca. Ikekawa a Tanaka, vydaný 15. srpna 1989; U. S. Patent 4 851 400. DeLuca, Ikekawa a Tanaka, vydaný 25. července 15 1989; U. S. Patent 4 847 012. DeLuca, Kutner. Perlman, Phelps. Schnoes a Sicinski. vydaný 11.

července 1989; U. S. Patent 4 816 417, Dáme, DeLuca a Pierce. vydaný 28. března 1989: U. S. Patent 4 769 181, DeLuca. Schnoes, Sicinski a Tanaka. vy daný 6. září 1988; U. S. Patent 4 755 329, DeLuca, Lee a Schnoes, vydaný 5. července 1988: U. S. Patent 4 719 205, DeLuca. Schnoes, Sicinski a Tanaka. vydaný 12. ledna 1988; U. S. Patent 4 719 204, DeLuca. Schnoes.

Sicinski a Tanaka. vydaný 12. ledna 1988; U. S. Patent 4 717 721, DeLuca, ikekawa. Ostrém a Schnoes. vydaný 5. ledna 1988; U. S. Patent 4 689 180, DeLuca, Schnoes. Sicinski a Tanaka. vydaný 25. srpna 1987; U. S. Patent 4 619 920, DeLuca, Ikekawa, Kobayashi a Tanaka. vy daný 28. října 1986; U. S. Patent 4 594 192. DeLuca, Ikekawa. Kobayashi a Tanaka. vydaný

10. června 1986; U. S. Patent 4 588 716. DeLuca a Schnoes. vydaný 13. května 1986; U. S.

Patent 4 588 528, DeLuca. Ikekawa a Tanaka. vydaný 13. května 1986; U. S. Patent 4 564 474. DeLuca. Ikekawa, Kobayashi a Tanaka, vydaný 14. ledna 1986: (J. S. Patent 4 555 364. DeLuca. Lee, Phelps a Schnoes. vydaný 26. listopadu 1985; U. S. Patent 4 554 106, DeLuca. Lee. Phelps a Schnoes, vydaný 19. listopadu 1985; U. S. Patent 4 552 698. DeLuca, Ikekawa. Kobay ashi a Tanaka, vydaný 11. listopadu 1985; U. S. Patent 4 512 925. DeLuca, Lee. a Schnoes. vydaný

23. dubna 1985; U. S. Patent 4 505 906, DeLuca, Schnoes, Sicinski a Tanaka, vydaný 19. března

1985; (J. S. Patent 4 502 991. DeLuca, Ikekawa. Kobayashi a Tanaka, vydaný 5. března 1985; U. S. Patent 4 500 460. DeLuca. Ikekawa. Kobayashi a Tanaka. vydaný 19. února 1985; U. S. Patent 4 481 198, Chu. DeLuca. Kabakoff a Schnoes, vydaný 6. listopadu 1984; U. S. Patent 4 461 766. DeLuca. Hart, a Schnoes, vydaný 24. července 1984: U. S. Patent 4 448 726. DeLuca.

Paaren, Schnoes, a Smith, vydaný 15. května 1984; U. S. Patent 4 448 721. DeLuca. Morzycki a Schnoes, vydaný 15. května 1984; U. S. Patent 4 428 946. DeLuca, Jorgensen a Schnoes, vydaný 31. ledna 1984; U. S. Patent 4 411 833. DeLuca, Ikekawa, Kobayashi a Tanaka, vy daný 25. října 1983; U. S. Patent 4 367 177, DeLuca, Schnoes, a Wichman, vydaný 4. ledna 1983; U. S. Patent 4 358 406, DeLuca. Ikekawa, Kobayashi a Tanaka. vydaný 9. listopadu 1982; U. S.

Patent 4 338 312, DeLuca, Jorgensen a Schnoes, vydaný 6. července 1982; U. S. Patent

338 250. DeLuca. Hamer, Paaren a Schnoes. vydaný 6. července 1982; U. S. Patent 4 336 193, DeLuca, Fivizanni, Paaren, Schnoes aWichmann, vydaný 22. června 1982; U. S. Patent

313 942, DeLuca, Frank, Paaren a Schnoes. vydaný 2. února 1982; U. S. Patent 4 307 231. DeLuca, Paaren, Schnoes, Tanaka aWichmann, vydaný 22. prosince 1981; U. S. Patent 45 4 307 025, DeLuca, Ikekawa, Morisaki, Oshida, Schnoes a Tanaka, vydaný 22. prosince 1981;

U. S. Patent 4 305 880, DeLuca, Ikekawa, Kobayashi a Tanaka, vydaný 15. prosince 1982;

U. S. Patent 4 297 289. DeLuca. Fivizanni, Paaren, Schnoes a Wichmann, vydaný 27. října 1981;

U. S. Patent 4 292 250. DeLuca. Levan, a Schnoes, vydaný 29. září 1981; U. S. Patent 4 265 822. DeLuca, Hamer, Paaren a Schnoes, vydaný 5. května 1981; L'. S. Patent 4 264 513, DeLuca, 50 Fivizanni. Napoli a Schnoes, vydaný 28. dubna 1981; U. S. Patent 4 313 942. DeLuca. Napoli.

Onisko a Schnoes, vy daný 21. dubna 1981; U. S. Patent 4 260 804, DeLuca, Esvelt a Schnoes. vydaný 7. dubna 1981; U. S. Patent 4 307 231, DeLuca. Hamer, Paaren a Schnoes, vydaný

7. dubna 1981; U. S. Patent 4 254 045, DeLuca, Ikekawa. Morisaki, Oshida a Tanaka, vy daný

- 4 CZ 282231 B6

3. března 1981; Li. S. Reissue Patent 30 538, DeLuca, Lam a Schnoes. vydaný 3. března 1981 U. S. Patent 4 248 791, DeLuca, Ikekawa, Kobayashi a Tanaka, vydaný 3. února 1981 U. S. Patent 4 234 495, DeLuca, Hamer, Paaren, a Schnoes, vydaný 18. listopadu 1980 U. S. Patent 4 230 627. DeLuca, Napoli, Onisko a Shnoes, vydaný 28. října 1980; U. S. Patent 4 229 359. Alper. DeLuca, Schnoes a Tanaka, vydaný 21. října 1980: U. S. Patent 4 230 627. DeLuca, Napoli. Onisko a Shnoes, vydaný 28. října 1980; U. S. Patent 4 229 359. Alper. DeLuca, Shnoes a Tanaka, vydaný 21. října 1980; U. S. Patent 4 229 358. DeLuca, Napoli. Onisko a Shnoes. vydaný 21. října 1980; U. S. Patent 4 229 357, DeLuca, Napoli. Onisko a Shnoes, vy daný 21. října 1980; U. S. Patent 4 226 788. DeLuca, Ikekawa. Kobayashi, Schnoes a Tanaka, vydaný 7. října 1980; U. S. Patent 4 226 787, DeLuca, Napoli. Onisko a Shnoes, vydaný 7. října 1980; U. S. Patent 4 224 231, Alper, DeLuca. Shnoes a Tanaka, vydaný 23. září 1980; U. S. Patent 4 224 230, DeLuca, Napoli, Onisko a Shnoes, vydaný 23. září 1980: U. S. Patent 4 223 131, DeLuca, Shnoes, a Wichman, vydaný 16. září 1980: U. S. Patent 4 217 288. DeLuca, Onisko a Shnoes, vydaný 12. srpna 1980; U. S. Patent 4 209 634, DeLuca. Elsvelt a Shnoes, vydaný 24. června 1980; U. S. Patent 4 202 829. DeLuca. Hamer, Paaren a Shnoes, vydaný 13. května 1980; U. S. Patent 4 201 881, DeLuca. Ikekawa, Kobay ashi. Shnoes a Tanaka, vydaný 6. května 1980: U. S. Patent 4 196 133, DeLuca. Ikekawa, Kobay ashi, Shnoes a Tanaka. vydaný 1. dubna 1980: U. S. Patent 4 195 027, DeLuca, Hamer, Paaren a Shnoes, vydaný 25. března 1980; U. S. Patent 4 188 345, DeLuca, Napoli. Oniski a Shnoes. vydaný 12. února 1980 a U. S. Patent 3 906 014, DeLuca, Lam a Schnoes, vydaný 16. září 1975. Další sloučeniny ze skupiny vitaminu D užitečné podle tohoto vynálezu zahrnují, ale bez omezení, hydroxylovaný

24- homo-v itamin D; cyklopentáno-vitamin D; hydroxylovaný 26-homo-vitamin D; la- hydroxyv itamin D; 1-hydroxyvitamin D; 1-a-hydroxy vitamin Dy la.25-dihydroxy-22Zdehydroxyv itamin D; 26.26.26.27,27-pentafluoro-la-hydroxy-27-metoxyvitamin D₃; 2-afluorov itamin Dy 1,24-dihydroxy-delta 22-vitamin D: 23.23-difluoro-25-hydroxy-vitamin Dy 1hydroxy-3.5-cyklovitamin D; 23,23-difluoro-la.25-hydroxy-vitamin Dy 1.23-dihydroxyvitamin D; hydroxyvitamin Dy 23.23-difluoro-l-cc.25-dihydroxy-v itamin D₃; 23.23-difluoro-25-hydroxyvitamin D₃; 26.26.26,27,27.27-hexafluoro-la,25-dihydroxycholesterol; 23.25-dihydroxyvitamin D₃; 26.26,26,27.27,27-hexafluoro-l-a,25-dihydroxycholekalciferol; l-a.25-dihydroxy-2-[3fluorovitamin Dy 24-fluoro-25-dihydroxy-cholekalciferol: 5,6-trans-vitamin D; l-a-hydroxy-25keto-27-nor-cholekalciferol; fluorovitamin D; l-a-hydroxy-2-[3-fluorocholekalciferol; 3-deoxy-lα-hydroxycholekalciferol; 25-hydroxy-26,26,26,27,27,27-hexafluorocholekalciferol; a-hydroxy3,5-cy klov itamin D; 25-hydroxycholekalciferol; 24,24-difluoro-la.25-dihydroxycholekalciferol;

25- dihydroxycholekalciferol-26,23-lakton; 24,24-difluoro-lct,25-dihydroxycholekalciferol;

24,24-difluoro-25-hydroxycholekalciferol; 3,5-cyklo-v itamin D; a 3-deoxy-a-hydroxycholekalciferol. Další sloučeniny ze skupiny vitaminu D užitečné podle tohoto vynálezu zahrnují ty, jež jsou uveřejněny v publikaci The Handbook of Vitamins, L. J. Machlin. vydavatel, Mercel Dekker, lne. (1984). Sloučeniny ze skupiny vitaminu D užitečné podle tohoto vynálezu uveřejněné v tomto odkazu, zahrnují, ale bez omezení, 1.25-dihydroxyvitamin D; 3-deoxy-1.25dihydroxyvitamin D; 27-nor-25-hydroxyvitamin Dy 26.27-bis-nor-25-hydroxyvitamin Dy 24nor-25-hydroxyvitamin Dy 25-hydroxyvitamin D; 1,25-hydroxyvitamin D; 1-a-hydroxyvitamin Dy 25-ťIuoro-l-ci-hydroxyvitamin D₃.

Bezpečné a účinné množství sloučeniny ze skupiny vitaminu D se dávkuje v kombinaci s nejméně jednou BMP nebo v kombinaci s osteoinduktivním extraktem zahrnujícím nejméně jednu BMP.

Přednostní rozsah dávek na podávání sloučeniny ze skupiny vitaminu D pro celkovou léčbu je od asi 1 ng po asi 1 mg, lépe od asi 10 ng po asi 500 pg. ještě lépe od asi 20 ng po asi 10 pg.

Pro účely lokální léčby, rozsah dávek sloučeniny ze skupiny vitaminu D je s výhodou od asi 1 ng po asi 1 mg. lépe od asi 10 ng po asi 500 ng, ještě lépe od asi 10 ng po asi 50 ng a nejlépe od asi

- 5 CZ 282231 B6 ng po asi 30 ng.

Výhodně se dávky podávají během období 1 den až 6 měsíců, lépe 1 týden až 1 měsíc. Výhodné se dávky podávají jednou za měsíc až asi 5 krát denně, lépe asi jednou za týden až asi jednou za den.

V jednom provedení tohoto vynálezu se sloučenina ze skupiny vitaminu D podává v kombinaci s jednou nebo víc BMP na generování nového růstu kosti v savci. Tyto BMP jsou s výhodou vybrány ze skupiny sestávající z BMP-1. BMP-2, BMP-3, BMP-4, BMP-5. BMP-6 a BMP-7.

Bezpečné a účinné množství BMP, s výhodou vybrané ze skupiny zahrnující BMP-1, BMP-2. BMP-3, BMP-4, BMP-5, BMP-6 a BMP-7, se dávkuje v kombinaci se sloučeninou ze skupiny vitaminu D.

Přednostní rozsah dávek na podávání BMP pro celkovou léčbu je od asi 1 pg po asi 100 pg. lépe od asi 1 ng po asi 10 pg, ještě lépe od asi 10 ng po asi 2,5 pg.

Pro účely lokální léčby, rozsah dávek pro BMP je s výhodou od asi 1 pg po asi 100 pg. lépe od asi 1,5 pg po asi 90 pg, ještě lépe od asi 1,8 pg po asi 75 pg, ještě lépe od asi 2.0 pg po asi 50 pg, stále ještě lépe od asi 2,2 pg po asi 25 pg, ještě lépe od asi 2,3 pg po asi 10 pg. a nejlépe od asi 2,5 pg po asi 5 pg. S výhodou rozsah dávek je nejméně 2,5 pg.

Výhodně se dávky podávají během období 1 den až 6 měsíců, lépe 1 týden až 1 měsíc. Výhodně se dávky podávají jednou za měsíc až asi 5 krát denně, lépe asi jednou za týden až asi jednou za den.

Jak se zde používá, BMP-1 znamená peptid kódovaný sekvencí DNA zahrnující SEK V. ID. Č. 1.

Jak se zde používá. BMP-2 znamená peptid kódovaný sekvencí DNA zahrnující SEKV. ID. Č. 2.

Jak se zde používá. BMP-3 znamená peptid kódovaný sekvencí DNA zahrnující SEKV. ID. Č. 3.

Jak se zde používá, BMP-4 znamená peptid kódovaný sekvencí DNA zahrnující SEKV. ID. Č. 4.

Jak se zde používá, BMP-5 znamená peptid kódovaný sekvencí DNA zahrnující SEKV. ID. Č. 5.

Jak se zde používá, BMP-6 znamená peptid kódovaný sekvencí DNA zahrnující SEKV. ID. Č.6.

Jak se zde používá, BMP-7 znamená peptid kódovaný sekvencí DNA zahrnující SEKV. ID. Č. 7.

Jak se zde používá, A, T. G a C odkazují na nukleotidy obsahující adenin, thymin, guanin a cytosin.

Jiná složka vynálezu je osteoinduktivní extrakt. Jak se tu používá, osteoinduktivní extrakt znamená chemický extrakt kosti, zahrnující jednu nebo víc morfogenních bílkovin, včetně, ale bez omezení. BMP-1. BMP-2, BMP-3. BMP-4, BMP-5, BMP-6 a BMP-7. kde každá BMP má molekulovou hmotnost od asi 28 000 do asi 40 000 daltonů.

Rozsah molekulové hmotnosti 28 000 až 40 000 daltonů se vztahuje k hmotnosti BMP diméru. S výhodou, molekulová hmotnost diméru je od asi 38 000 do asi 34 000 daltonů. Dimér BMP se skládá ze dvou monomerů, z nichž každý má molekulovou hmotnost od asi 14 000 do asi 20 000 daltonů, s vvhodou od asi 15 000 do asi 17 000 daltonů.

-6CZ 282231 B6

Přednostní metoda získávání osteoinduktivního extraktu je jak následuje:

Stáhne se kůže od kolen 7 až 8-týdenních Long-Evansových krys (Charles River laboratories.

Wiimington. MA). Odstraní se obě tibie (holenní kosti) a umístí se do studené vody. Kost se opláchne destilovanou vodou k odstranění tkání jiných jako kost. Kost se nechá uschnout na vzduchu. Kost se umele v mixeru typu Osterizer (Oster Commercial. Milwaukee. WI) s vodou a ledem. S mixérem nastaveným na ztekucovací rychlost se pokračuje v přidávání kostí. Rozmixovaný materiál se nechá usadit po několik minut. Kapalná vrstva se dekantuje. Tuhá io vrstva se vloží do míchačky a přidá se destilovaná voda na promytí. Pokračuje se s promýváním destilovanou vodou dokud není čistá. Když je voda z promývání čistá, přidá se led a začne se míchat. Přidá se 1 ml ImM fenylmetylsulfonylfluoridu (PMSF). Pro mývá se po jednu hodinu s častým přidáváním ledu. Promývání se opakuje s druhou vodou. Vzorek se dá do lázně s ledovou vodou na míchací desku. Odmastí se absolutním etanolem. potom dvakrát etyléterem.

Kostní materiál se rozetře na skleněné Petriho misce. Kousky kosti se nechají vyschnout na vzduchu přes noc.

Kousky kosti po sušení přes noc se zváží. S použitím sít (Americká standardní série sít [U.S.A. Standard Sieve SeriesJ. Newark Wire Cloth Co., Newark. N.J.; síto čís. 40 zadržuje částice větší 20 než 425 pm a síto čís. 170 zadržuje částice větší než 90 pm) se izolují částice v rozsahu

425 pm. Všechny částice větší než 425 pm se melou v přístroji MicroMill (Scienceware BelArt Products, Pequannock, NJ) jednu minutu s přidáním ledu k částicím kosti pro udržení materiálu v chladu. Prosívání a MicroMill mletí částic větších než 425 pm se opakuje dokud celkový výtěžek není větší než 2/3 počáteční hmotnosti kosti. Částice se skladují při 4 °C do 25 dalšího stupně. Dosud izolované částice se zváží. Na každý gram částic se přidá 25 ml 0,6N HC1.

Míchá se důkladně 2 hodiny při 4 °C. Po dvou hodinách se míchání zastaví a částice se nechají usadit. Dekantuje se HC1. Přidá se nová 0.6N HC1 a míchá další 2 hodiny. Dekantuje se HC1 a přidá nová 0,6 N HC1 potřetí a míchá se 2 hodiny. Dekantuje se HC1 a promyje se destilovanou vodou. S použitím lakmusového papírku se zkouší pH vody na přítomnost HC1. Pokračuje se 30 v promývání destilovanou vodou dokud pH není mezi 5 a 5,5. Kostní částice se promyjí třikrát etanolem. Rozmíchají se, nechají se usadit a odstraní se supernatant. Kostní částice se promyjí třikrát etyléterem jak uvedeno shora. Usuší se přes noc na skleněných miskách. Usušené kostní částice se označují jako kyselinou demineralizované kostní částice.

Kyselinou demineralizované kostní částice se deproteinují takto: Zváží se materiál po usušení přes noc. Na každý gram materiálu se přidá roztok 30 ml 4M guanidin-HCI, lOmM Tris a 1,0mM PMSF, pH 6,4 ke kostnímu materiálu v kádince. Extrahuje se po 16 hodin při 4 ^:C s důkladným mícháním. Po 16 hodinách extrakce se míchání ukončí a materiál se nechá usadit. Odleje se guanidinový roztok a uschová. Materiál se extrahuje podruhé 6-7 hodin čerstvým roztokem 40 guanidin-HCI. Po extrakci se roztok odleje a spojí s předtím uschovaným roztokem. Kostní částice jsou teď demineralizovány a deproteinovány.

Uschovaný roztok guanidin-HCI se dialyzuje proti destilované ΗΌ při 4°C s použitím 50 mm dialyzační trubice (3 500 hranice molekulové hmotnosti). Po dialýze se materiál lyofilizuje 45 a lyofilizovaný materiál se znovu rozpustí v 4M močovině-0.05 M Tris - 0,1M NaCl, pH 7,4.

Solubilizovaný materiál se smíchá v kónické centrifugační zkumavce s heparin-agarosou a míchá přes noc na otáčecím zařízení při 4°C. Heparin-agarosová kaše se nalije do kolony. Promyje se 1 objemem kolony pufru 4M močovina, 0,05M Tris, 0,lM NaCl, pH 7.4. Sbírají se frakce. Promyje se třemi objemy kolony pufru 4 M močovina, 0,05M Tris, 0.2M NaCl. pH ⁷,4. Materiál 50 se uvolní třemi objemy pufru 4 M močovina, 0,05 M Tris, 0.75M NaCl. pH 7,4. Tento vzorek se zkoncentruje v 50 ml Amiconovém koncentrátoru (Amicon Corp.. Danvers. MA) s filtrem (10 000 hranice molekulové hmotnosti) na asi 4-5 ml. Stanoví se koncentrace bílkoviny s použitím BCA reagentu na stanovení bílkovin (Pierce, Rockford. IL) a dialyzuje se (dialyzační

- 7 CZ 282231 B6 trubice s 3 500 hranicí molekulové hmotnosti váhy) v 4M guanidinu-Ο,ΟΙΜ Tris pH 7,4. Materiál se nanese na kolonu Saphacrylu S 200 a sbírají se frakce. Frakce obsahující hlavní vrchol bílkoviny se dialyzují proti 1M kyselině octové a zkoušejí na aktivitu.

Aktivní frakce z gelové filtrace se spojí a dialyzují proti třikrát vyměňované 6M močovině. 25 mM Na acetátu, pH 4.6. Dialyzát se nanese na kolonu karboxymetylsepharosy (CMSepharose) ekvilibrované týmž pufrem. Kolona se promyje 6M močovinou, 25 mM Na acetátem, pH 4.6, a aktivita se eluuje s použitím gradientu 0 - 0.5M NaCl. Frakce se analyzují na koncentraci bílkoviny a desoxycholátu sodného gelovou elektroforézou. Aktivita lokalizovaná v sedmi frakcích před a po hlavním vrcholu bílkoviny se spojí na další purifikaci.

Spojené frakce z CM-Sepharosy se dialyzují třikrát po 24 hodin proti 1% kyselině octové. Dialyzát se lyofilizuje do sucha a bílkovina se rozpustí v 30 ml 6M močoviny. 0,5M NaCl a 25 mM Na fosfátu. pH 7,4. Vzorek se aplikuje na kolonu chelatující Sepharosy s navázaným zinkem a ekvilibrovanou pufrem jak je uvedeno výše. Kolona se tímto pufrem promyje a potom se eluuje gradientem od 6M močoviny, 0,5M NaCl a 25 mM Na fosfátu, pH 7.4 do 6M močoviny, 0,5M NaCl a 25 mM Na acetátu. pH 4,6. Alikvoty z každé frakce se označí ^l2T a analyzují SDS gelovou elektroforézou. Alikvoty (100 pl) každé frakce se spojí s 400 μΐ elučního pufru, dialyzují proti 1% kyselině octové atestují na aktivitu. Vysoce purifikované peptidy s rozsahem molekulové hmotnosti (M_r) 25-40 kD se testují v testu indukce kosti.

Bezpečné a účinné množství osteoinduktivního extraktu se dávkuje v kombinaci se sloučeninou ze skupiny vitaminu D. Pro celkovou léčbu, dávkovaný osteoinduktivní extrakt přednostně obsahuje nejméně jednu BMP v množství I pg až 100 μg, lépe 1 ng až 10 pg, ještě lépe 10 ng až 2.5 pg.

Pro účely lokální léčby, dávkovaný osteoinduktivní extrakt zahrnuje přednostně nejméně jednu BMP v množství 1 pg až asi 100 pg, lépe 1,5 pg až 90 pg, ještě lépe 1,8 pg až 75 pg. nebo 2.0 pg až 50 pg, nebo 2.2 pg až 25 pg, či 2,3 pg až 10 pg, a nejlépe 2.5 pg až 5 pg. S výhodou rozsah dávek je nejméně 2.5 pg.

Výhodně se dávky podávají během období 1 den až 6 měsíců, lépe 1 týden až 1 měsíc. Výhodně se dávky podávají jednou za měsíc až asi 5 krát denně, lépe asi jednou za týden až asi jednou za den.

Sloučenina ze skupiny vitaminu D, osteoinduktivní extrakt nebo BMP se mohou podávat s pomocí farmaceuticky přijatelného nosiče. Výraz farmaceuticky přijatelný nosič, jak se zde používá, znamená jednu nebo víc kompatibilních pevných nebo tekutých plnicích zřeďovacích nebo enkapsulujících látek vhodných na podávání lidem nebo nižším živočichům. Výraz kompatibilní jak se zde používá znamená, že složka farmaceutického prostředku je schopná smísení se složkou (složkami) tohoto vynálezu a mezi sebou navzájem takovým způsobem, že nenastanou interakce, které bv podstatně snížily farmaceutickou účinnost farmaceutického prostředku při běžné situaci používání. Farmaceuticky přijatelné nosiče musí, samozřejmě, mít dostatečně vysokou čistotu a nízkou toxicitu na to. aby byly vhodné na podávání léčeným lidem nebo nižším živočichům.

Některými příklady látek, jež mohou sloužit jako farmaceuticky vhodné nosiče jsou cukry jako laktosa. glukosa a sacharosa; škroby jako kukuřičný a bramborový škrob; celulosa a její deriváty, jako karboxymetylcelulosa. ethylcelulosa, acetát celulosy; práškový tragacanth; slad; želatina; talek; kyselina stearová; stearát horečnatý'; síran vápenatý; rostlinné oleje, jako podzemnicový olej, olej z bavlníkového semene, sezamový olej, olivový olej a olej theobromový; polyoly jako propylenglykol. glycerol, sorbitol. manitol a polyetylenglykol; cukr; alginová kyselina; voda prostá pyrogenů; isotonická sůl; fosfátové pufrovací roztoky; kakaové máslo (základ čípků);

- 8 CZ 282231 B6 emulgátory, jako Tvveen^R; jakož i jiné netoxické kompatibilní látky používané ve farmaceutických přípravcích. Zvlhčující a lubrikační činidla, jako laurylsulfát sodný, jakož i barvicí činidla, ochucovače, zvětšovače objemu, tabletovací substance, stabilizátory, antioxidancia a konzervační prostředky mohou též být přítomny. Další kompatibilní 5 farmaceutická aditiva a aktivní složky (např. NSAI léčiva, prostředky proti bolesti, svalové relaxanty) se mohou zahrnout do farmaceuticky přijatelných nosičů na použití v prostředcích podle vynálezu. Například, anestetika známá v oboru se mohou zahrnout do farmaceuticky přijatelných nosičů (např. benzylalkohol; Novokain^R; lidokain).

io Další příklady nosičů zahrnují kolagen, demineralizované kostní částice, keramické a kovové implantační materiál}, kolagenové membrány a kostní implantáty (isogenní nebo alogenní).

Výběr farmaceuticky přijatelného nosiče na použití ve spojitosti se složkou podle vynálezu je určený způsobem, jakým se složka podává. Přednostní způsoby podávání složek podle vy nálezu i? jsou injekční, orální podávání, místné orální podávání a nasofaryngické podávání, nebo jejich kombinace (tj. osteoinduktivní extrakt injekčně a sloučenina ze skupiny vitaminu D orálním podáváním). Když se má složka podávat injekčně. přednostním farmaceuticky přijatelným nosičem je sterilní fyziologický roztok soli. Vhodné farmaceuticky přijatelné nosiče na orální podávání zahrnují ty. jež jsou vhodné na tablety a kapsle. Vhodné farmaceuticky přijatelné :o nosiče na místně orální podávání zahrnují ty, jež jsou vhodné na pasty , gely a tekutiny. Vhodné farmaceuticky přijatelné nosiče na nasofaryngické podávání zahrnují ty, co jsou vhodné na kapky, spreje, aerosol} a pudry.

Zvláštní farmaceuticky přijatelný nosič může být použit ve spojitosti s každou aktivní složkou 25 podle vynálezu nebo jednotný farmaceuticky přijatelný nosič může být použit ve spojitosti se směsí aktivních složek podle vynálezu. V každém případě, farmaceuticky přijatelný nosič se používá v koncentraci dostatečné na zajištění praktického vztahu velikosti a dávkování. Farmaceuticky přijatelný nosič může celkově zahrnovat od asi 0.1 % do asi 99.99999 % hmotnostních farmaceutického prostředku, přednostně od asi 50 % do asi 99,999 %. a nejlépe od 50 asi 70 % do asi 99.9 ⁰ o.

Konkrétní orální a injekční nosiče užitečné podle vynálezu jsou popsány v následujících amerických patentech, jež se zde všechny zahrnují odkazem: U.S. Patent čís. 4 401 663. Buckwalter, et al. vydaný 30. srpna 1983; U.S. Patent čís. 4 424 205. LaHann, et al. vydaný 31. 35 ledna 1984; U.S. Patent čís. 4 443 473. Buckwalter, et al, vydaný 12. dubna 1983: U.S. Patent čís. 4 493 848, LaHann, et al, vydaný 15. ledna 1984. Reprezentativní farmaceutické prostředky podle vy nálezu jsou uváděny v následujících příkladech.

Farmaceuticky přijatelné nosiče na přípravu jednotkových dávkovačích forem na orální 40 podávání, místně orální podávání, nasofaryngické podávání a injekce jsou v oboru dobře známy.

Jejich výběr bude záviset na vedlejších úvahách jako jsou chuť, cena a/nebo skladovatelnost. které nejsou rozhodující pro účely podle vynálezu a může jej bez těžkostí vykonat osoba zběhlá v oboru. Farmaceuticky přijatelné nosiče užitečné podle vynálezu jsou siřeji popsány zde dále.

Přednostně je sloučenina ze skupiny vitaminu D podávána pomocí orálních dávkovačích forem. Různé orální dávkovači formy mohou být použity, včetně takových pevných forem jako tablety, kapsle, granule, prášky a mikrokapsle léku. Tyto formy obsahují bezpečné a účinné množství, obvykle nejméně okolo 0.5 %, přednostně okolo 1 % až 10 %, složky podle vynálezu. Tablety mohou být komprimované, entericky potažené, cukrem potažené nebo filmem potažené

5o s vhodným vázacím činidlem, lubrikantem, povrchově aktivním činidlem, zřeďovadlem. dezintegračním činidlem, barvicím činidlem, chuťovou látkou, konzervačním činidlem, látkou na ztekucení a látkou na roztaveni. Kapalné orální dávkovači formy zahrnují vodné a nevodné roztoky , emulze, suspenze, roztoky a suspenze rekonstituované z neefervescentních granulí, obsahujících vhodná rozpustidla, konzervační činidla, emulgátory, činidla na tvorbu suspenze.

- 9 CZ 282231 B6 zřeďovadla, sladidla, barvicí látky a chuťové látky. Přednostní nosiče na orální podávání zahrnují želatinu a propylenglykol. Konkrétní příklady farmaceuticky přijatelných nosičů a látek na zvětšení objemu (excipientů), které se mohou používat ve formulacích orálních dávkovačích forem podle vynálezu, jsou popsány v U.S. Patent 3 903 297. Robert, vydaném 2. září 1975. zahrnutém zde odkazem. Techniky a složení na přípravu pevných orálních dávkovačích forem jsou popsány v publikaci Marshall, Solid Oral Dosage Forms. (Orální pevné dávkovači formy i. Modem Pharmaceutics, sv. 7. (vydavatelé Bankéř a Rhodes), 359-427 (1979). zahrnuté zde odkazem. Techniky a složení na přípravu tablet (komprimovaných, složených a tavených), kapsií (měkká a tvrdá želatina) a pilulek jsou popsány v Remingtonů Pharmaceutical Sciences (vydavatel Arthur Osol), 1553-1593 (1980).

Místně-orální nosič, jak se zde používá, označuje nosič pro výslednou směs, která je podávána místně v ústní dutině, podržena tam po určitý časový úsek a potom spíše vyplivnuta než polknuta. Takovéto prostředky zahrnují zubní pasty, zubní gely, zubní prášky, ústní vody, ústní spreje, profylaktické pasty, roztoky na zubní léčbu, biogely ajiné produkty na udržované uvolňovaní, a tak podobně.

Složky místně-orálního nosiče jsou vhodné na podávání v ústní dutině člověka nebo nižšího živočicha a jsou kompatibilní s jednou nebo více jinými složkami, zvláště se sloučeninou ze skupiny vitaminu D a osteoinduktivním extraktem nebo BMP, používanými v ústních prostředcích podle vynálezu. Přednostní místně-orální nosiče takto poskytují žádané vlastnosti zubních past, zubních gelů, zubních prášků, ústní vody, ústních sprejů, profylaktických past, roztoků na zubní léčbu, atak podobné. Místně-orální nosiče podle vynálezu zahrnují složky ty picky používané v takovýchto prostředcích, jež jsou dobře známy zkušeným praktikům. Takovéto složky zahrnují, ale bez omezení, prostředky proti kazům, plakům a zubnímu kamenu, zubní abraziva, povrchově aktivní látky, chuťové látky, sladidla, vazné látky, zvlhčovače, zahušťovače, pufrujicí činidla, konzervační látky, barvicí látky a pigmenty , etanol a vodu.

Přednost se dává prostředkům ve formě zubní pasty. Složky takovéto zubní pasty obecně zahrnují zubní abrazivum (10 % až 50 %), povrchově aktivní látku (0,5 % až asi 10 %). zahušťovadlo (0,1 % až 5 %). zvlhčovadlo (10 % až 55 %), chuťovou látku (0.04 % až 2 %). sladidlo (0,01 % až 3 %). barvicí látku (od asi 0,01 % do asi 0,5 %) a vodu (od asi 2 % do asi 45 %). Takovéto zubní pasty' mohou obsahovat jednu nebo více látek proti kazům (od asi 0,05 % do asi 0.2 %, jako fluoridový iont), proti zubnímu kameni (od asi 0,1 % do asi 13 %), a proti plakům (od asi 0,1 % do asi 5 %).

Jiné prostředky podle vynálezu, kterým se dává přednost jsou ústní vody a ústní spreje. Složky takovéto ústní vody a ústního spreje zahrnují vodu (od asi 45 % do asi 95 %), etanol (od asi 0 % do asi 25 %), zvlhčovadlo (od asi 0 % do asi 50 %), povrchově aktivní látku (od asi 0,01 % do asi 7 %). chuťovou látku (od asi 0,04 % do asi 2 %), sladidlo (od asi 0,01 % do asi 3 %). barvicí látku (od asi 0,01 % do asi 0,5 %). Takovéto ústní vody a ústní spreje mohou obsahovat jednu nebo víc látek proti kazům (od asi 0,05 % do asi 0,3 %, jako fluoridový’ iont), proti zubnímu kameni (od asi 0,01 % do asi 3 %), a proti plakům (od asi 0.1 % do asi 5 %).

Jiné prostředky podle vynálezu, kterým se dává přednost jsou dentální roztoky. Složky takovýchto dentálních roztoků obecně zahrnují vodu (od asi 90 % do asi 99 %). konzervační látku (od asi 0,01 % do asi 0.5 %), zahušťovadlo (od asi 0 % do asi 5 %), chuťovou látku (od asi 0.04 % do asi 2 %). sladidlo (od asi 0.1 % do asi 3 %), povrchově aktivní látku (od asi 0 % do asi 5 %).

Místně-orální nosič jak se zde používá, také označuje vlákna, proužky a hadičky [tubes], které mohou být impregnovány aktivními složkami podle vynálezu a zavedeny nebo implantovány do periodentálního lůžka. Takovéto prostředky podle vynálezu mohou lehce dosáhnout ti. kteří mají běžné schopnosti v oboru používajícím znalosti uveřejněné dříve, v následujících odkazech.

- 10CZ 282231 B6 zahrnutých zde odkazem, a příbuzných dobře známých technikách: U.S. Patent čís. 4 666 89” vydaný Golubovi, McNamarovi a Ramamurthymu 19. května 1987; Evropská patentová přihláška čís. 244 118 Al na jméno Baker, uveřejněná 4. listopadu 1987; Evropská patentová přihláška čís. 286 802 A2 na jméno Kametaka, Miyazaki, Hayashi, Handa a Kameda. uveřejněná

19. října 1988; Addy. M., L. Ravle, R. Handlev, H. Nevvman aJ. Coventrv, The development and in vitro evaluation of acrylic strips and dialysis tubing for local drug delivery. (Vývoj a in vitro hodnocení akrylových proužků a dialyzačních trubic pro lokální dodávání léků). Journal of Periodontology. sv. 53 (1982), str. 693-698; Godson J. M., A. D. Haffajee a S. S. Socransky. Periodontal therapy by local delivery of tetracycline”, (Periodentální terapie místním dodáváním tetracyklinu), Journal of Clinical Periodontology, sv. 6 (1979), str. 83-92: Goodson.

J., D. Holborow, R. Dunn, P. Hogan a S. Dunham, Monolithic tetracycline containing fibers fcr controlled delivery to periodontal pockets, (Monolitická vlákna obsahující tetracyklin na řízené dodávání do periodentálního lůžka), Journal of Periodontology. sv. 54 (1983), str. 575-579: Dunn. R.. J. Gibson. B. Perkins, J. Goodson a L. Laufe. Fibrous delivery systems for antimicrobial agents. (Vláknové dodávací systémy pro antimikrobiální činidla), Polymer Materiál Science Engineering, sv. 51 (1984). str. 28-31; Olanoff. L.. aJ. Anderson. Controlled release of tetracycline - III.: A physiological pharmacokinetic model of the pregnat rat, (Řízené uvolňování tetracyklinu - III: Fyziologický farmakokinetický model krysy v pregnanci). Journal of Pharmacokinetics and Biopharmaceutics, sv. 8 (1980), str. 599-620; Elkayam. R.. M. Friedman, A. Stabholz. A. Soskolne, M. Sela a L. Golub, Sustained release device containing minocycline for local treatment of periodontal disease, (Zařízení na udržované uvolňování obsahující minocyklin pro lokální léčbu periodentálnych chorob). Journal of Controlled Release. sv. 7 (1988). str. 231-236; a Goodson, J. Multicenter evaluation of tetracy cline fiber therapy . (Více-centrové hodnocení tetracyklinové vláknové léčby . I. Experimentální uspořádání), Journal of Dental research. sv. 68 (1989), p. 197; a odkazy tam citované.

Aktivní složky podle vynálezu jsou užitečné také, když se podávají injekčně. Dávkovaní aktivních složek podle vynálezu, jež je bezpečné a účinné na poskytnutí aktivity' k růstu kosti se bude měnit podle konkrétního stavu co se má léčit, vážnosti [severity] stavu, délky léčby, specifické směsi použitých sloučenin a prostředků ajejich použité koncentrace, a podobných faktorů, v rámci znalostí a expertízy ošetřujícího lékaře a přiměřenosti k rozumným poměrům prospěchu a rizika spojeného s použitím každé složky léku. Navíc, nižšího dávkovaní se použije, když je žádoucí menší a lokální růst kosti, zatímco vy ššího dávkovaní se použije, když je žádoucí větší a celkový růst kosti.

Metody a materiály na výrobu injekčního materiálu se najdou v Remingtonů Pharmaceutical Sciences. 17. vydání. 1985, kapitola 85. str. 1518, uveřejnění jehož je zde zahrnuto odkazem na jeho celistvost. Přednostně, injekční prostředek je vodný roztok.

Vodné roztoky přednostně sestávají z vody (přednostně od asi 80 % do asi 99.999 %). vhodného solubilizátoru, různých typů kyselin, a antimikrobiálního činidla. Je známo několik solubilizátorů. Příklady solubilizátorů jsou jak následuje: Sloučeniny ze skupiny močoviny (např. močovina, urethan); povrchově aktivní látky (např. Tween. Spán, desoxycholát sodný a Pluronic); celulotická činidla (např. karboxymetylcelulosa); cukry (např. sorbitol, manitol); B vitaminy (např. nikotinamid); deriváty xantinu; a alkoholy (např. benzylalkohol). Příklady kyselin na použití zahrnují následující: Glukuronovou. galakturonovou. fumarovou. gentizovou. octovou, citrónovou a laktobionovou. Typy antimikrobiálních činidel, jež je možno použít jsou následující: dusičnan fenylrtuťnatý; thimerosal; benzethoniumchlorid; benzalkoniumchlorid: fenol; krezol; a chlorbutanol. Lokální anestetika známá v oboru se mohou také zahrnout (např. benzylalkohol; Novocaine^R; lidokain).

Přednostně, osteoinduktivní extrakt a BMP jsou podávány injekční dáv kovou formou.

Následující příklad} dále popisují a demonstrují přednostní provedení v rámci vynálezu.

-11CZ 282231 B6

Příklady se uvádějí jen k ilustračním účelům a nemají se vysvětlovat jako omezení wnálezu. protože mnoho obměn je možných bez odklonu od jeho ducha a rozsahu.

Příklady provedení wnálezu

Příklad 1

Injekční prostředek obsahující osteoinduktivní extrakt a orální přípravek obsahující 1.25dihydroxyvitamin D₃ na nápravu kostní zlomeniny se připraví kombinací následujících složek s použitím konvenčních míchacích technik.

BMP prostředek

Složka	Hmotnostních procent prostředku
BMP-l NaCl Sterilní voda	0.04 0.90 _________11_________ 100.0

1.25-dihvdroxvvitamin P₃ prostředek

Složka	Hmotnostních procent prostředku
1,25-dihydroxyvitamin D3 Kukuřičný škrob Laktosa Talek Kyselina stearová	0.01 18.49 63.00 18.00 0.50 100.0

OJ ml BMP prostředku se dá injekčně do místa zlomeniny v čase redukce zlomeniny a jednou denně potom. 100 μζ 1,25-dihydroxyvitamin D_? prostředku se podá orálně 24 hodin před redukcí zlomeniny a jednou denně potom. BMP a 1,25-dihydroxy vitamin D₃ se podávají dokud se nedosáhne žádaná náprava, s výhodou během období sedmi dní.

Příklad 2

Injekční prostředek na nápravu kostní zlomeniny se připraví kombinací následujících složek s použitím konvenčních míchacích technik.

Složka	Hmotnostních procent prostředku
BMP-2 25-hydroxyvitamin D; NaCl Sterilní voda na injekce	0.04 0.01 0.09 _________11_________ 100.0 1 >

CZ 282231 B6

0,1 ml prostředku se dá injekčné do místa zlomeniny v čase redukce zlomeniny a jednou denně potom dokud se nedosáhne žádané nápravy.

Příklad 3

Prostředek na indukci růstu kosti po rekonstrukčním chirurgickém zákroku se připraví kombinací následujících složek s použitím konvenčních míchacích technik.

Složka	Hmotnostních procent prostředku
BMP-3 1,25-dihydroxyvitamin D3 NaCI Sterilní voda	0.04 0.01 0.90 _________11_________ 100.0

0,1 ml prostředku na cm² povrchové plochy chirurgicky rekonstruované kosti se dá přímo na kostní povrch.

Příklad 4

Prostředek na urychlení hojení a zajištění pevnější vazby mezi přirozenou kostí a umělou protézou se připraví kombinací následujících složek s použitím konvenčních míchacích technik.

Složka	Hmotnostních procent prostředku
BMP-1 BMP-2 BMP-4 24.25-dihydroxyvitamin D3 NaCI Sterilní voda	0.04 0,04 0,04 0,01 0.90 _________11_________ 100,0

0,1 ml prostředku na cm² povrchové plochy přirozené kosti blízko protézy se dá přímo na přirozenou kost.

Příklad 5

Prostředek s místně-orálním nosičem k periodentální terapii se připraví kombinací následujících složek s použitím konvenčních míchacích technik.

Složka	Hmotnostních procent prostředku
BMP-2 NaCI Sterilní voda	0.04 0.90 _________11_________ 100,0

Po přípravě pacienta s použitím konvenční periodentální chirurgické terapie 0,1 ml prostředku na exponovaný zub se dá na místo zákroku. Měkké látkové překrytí se potom přišije na uzavření místa zákroku. Tato léčba je užitečná na alveolární nápravu a nápravu podpůrné kosti v periodontu ztraceném chorobou.

Příklad 6

Injekční prostředek obsahující BMP 2. 3, 4, a 5 a orální přípravek obsahující 1.25dihydroxyvitamin D₃ na léčbu osteoporózy se připraví kombinací následujících složek s použitím konvenčních míchacích technik.

Prostředek s osteoinduktivním extraktem

Složka	Hmotnostních procent prostředku
BMP-2 BMP-3 BMP-4 BMP-5 NaCl Sterilní voda	0,001 0,001 0,001 0,001 0,900 _________1Σ_________ 100,000

1,25-dihvdroxyvitamin P₃ prostředek

Složka	Hmotnostních procent prostředku
1,25-dihydroxyvitamin D3	0,01
Kukuřičný škrob	18.49
Laktosa	63,00
Talek	18.00
Kyselina stearová	0.50

100.0

0,1 ml BMP prostředku se podává injekčně intravenózně jednou denně. 50 mg 1.25dihydroxyvitamin D₃ prostředku se podá orálně během 1 hodiny po injekci osteoinduktivního extraktu a jednou denně potom. BMP a 1,25-dihydroxyvitamin D₃ se podávají v průběhu období sedmi dní.

Příklad 7

Injekční prostředek na indukci růstu kosti nespojité zlomeniny se připraví kombinací následujících složek s použitím konvenčních míchacích technik. Jak se zde používá, nespojitá zlomenina [non-union fracture] znamená zlomeninu, u které neprobíhá normální hojení- 14 CZ 282231 B6

Složka	Hmotnostních procent prostředku
BMP-4	0,004
1,25-dihydroxyvitamin D3	0,01
Kyselinou demineralizované	90,000
kostní částice
NaCl	0,900
Sterilní voda	_

100,000

V čase redukce zlomeniny se dá dostatečné množství prostředku popsaného nahoře přímo na místo nespojitosti, zaplňujíce takto chybějící kost.

SEZNAM SEKVENCÍ (i) OBECNÉ INFORMACE:

(i) ŽADATEL: STONE. ROGER L.

(ii) NÁZEV VYNÁLEZU: LÉČEBNÉ PROSTŘEDKY NA OSTEOINDUKCI (iii) POČET SEKVENCÍ: 7 (iv) KORESPONDENČNÍ ADRESA:

(A) ADRESÁT: The Procter & Gambie Companv (B) ULICE: 1181 East Miami River Road (C) MĚSTO: Cincinnati (D) STÁT: Ohio (E) ZEMĚ: USA (F) POŠTOVNÍ SMĚROVACÍ ČÍSLO: 45239-8707 (v) POČÍTAČOVÁ ČTECÍ FORMA:

(A) TYP MÉDIA: Floppy disk (B) POČÍTAČ: IBM kompatibilní PC (C) OPERAČNÍ SYSTÉM: PC-DOS/MS-DOS (D) SOFTWARE: Patentln Release #1.0, versia #1.25 (vi) ÚDAJE O SOUČASNÉ PŘIHLÁŠCE:

(A) ČÍSLO PŘIHLÁŠKY:

(B) DATUM PODÁNÍ:

(C) KLASIFIKACE:

(viii) INFORMACE O ZÁSTUPCI:

(A) JMÉNO: Corstanje, Brahm J.

(B) ČÍSLO REGISTRACE: 34.804 (ix) INFORMACE O SPOJENÍ:

(A) TELEFON: 513-345-2858 (B) TELEFAX: 513-741-3012

- 15 CZ 282231 B6 (2) INFORMACE O SEKVENCI ID. Č. 1:

(i) VLASTNOSTI SEKVENCE:

(A) DÉLKA: 1728 párů bází (B) TYP: nukleová kyselina (C) TYP VLÁKNA: dvojvláknová (D) TOPOLOGIE: lineární (ii) TYP MOLEKULY: cDNA

GCCGCTTCCC	TCGCCGCCGC	CCCGCCAGCA	TGCCCGGCGT	GGCCCGCCTG	CCGCTGCTGC	60
TCGGGCTGCT	GCTGCTCCCG	CGTCCCGGCC	GGCCGCTGGA	CTTGGCCGAC	TACACCTATG	120
ACCTGGCGGA	GGAGGACGAC	TCGGAGCCCC	TCAACTACAA	AGACCCCTGC	AAGGCGGCTG	180
CCTTTCTTGG	GGACATTGCC	CTGG.ACGAAG	AGGACCTGAG	GGCCTTCCAG	GTACAGCAGG	240
CTGTGGATCT	CAGACGGCAC	ACAGCTCGTA	AGTCCTCCAT	CAAAGCTGCA	GTTCCAGGAA	300
ACACTTCTAC	CCCCAGCTGC	CAGAGCACCA	ACGGGCAGCC	TCAGAGGGGA	GCCTGTGGGA	360
GATGGAGAGG	TAGATCCCGT	AGCCGGCGGG	CGGCG.ACGTC	CCGACCAGAG	CGTGTGTGGC	420
CCGATGGGGT	CATCCCCTTT	GTCATTGGGG	GAAACTTCAC	TGGTAGCCAG	AGGGCAGTCT	480
TCCGGCAGGC	CATGAGGCAC	TGGGAGAAGC	ACACCTGTGT	CACCTTCCTG	GAGCGCACTG	540
ACGAGGACAG	CTATATTGTG	TTCACCTATC	GACCTTGCGG	GTGCTGCTCC	TACGTGGGTC	600
GCCGCGGCGG	GGGCCCCCAG	GCCATCTCCA	TCGGCAAGAA	CTGTGACAAG	TTCGGCATTG	660
TGGTCCACGA	GCTGGGCCAC	GTCGTCGGCT	TCTGGCACGA	ACACACTCGG	CCAGACCGGG	720
ACCGCCACGT	TTCCATCGTT	CGTGAG.AACA	TCCAGCCAGG	GCAGGAGTAT	AACTTCCTGA	780
AGATGGAGCC	TCAGGAGGTG	GAGTCCCTGG	GGGAGACCTA	TGACTTCGAC	AGCATCATGC	840
ATTACGCTCG	GAACACATTC	TCCAGGGGCA	TCTTCCTGGA	TACCATTGTC	CCCAAGTATG	900
AGGTGAACGG	GGTGAAACCT	CCCATTGGCC	AAAGGACACG	GCTCAGCAAG	GGGGACATTG	960
CCCAAGCCCG	CAAGCTTTAC	AAGTGCCCAG	CCTGTGGAGA	GACCCTGCAA	GACAGCACAG	1020
GCAACTTCTC	CTCCCCTGAA	TACCCCAATG	GCTACTCTGC	TCACATGCAC	TGCGTGTCGC	1080
GCATCTCTGT	CAC.ACCCGGG	GAGAAGATCA	TCCTGAACTT	CACGTCCCTG	GACCTGTACC	1140
GCAGCCGCCT	GTGCTGGTAC	GACTATGTGG	AGGTCCGAGA	TGGCTTCTGG	AGGAAGGCGC	1200
CCCTCCGAGG	CCGCTTCTGC	GGGTCCAAAC	TCCCTGAGCC	TATCGTCTCC	ACTGACAGCC	1260
GCCTCTGGGT	TGAATTCCGC	AGCAGCAGCA	ATTGGGTTGG	AAAGGGCTTC	TTTGCAGTCT	1320
ACGAAGCCAT	CTGCGGGGGT	G AT GT G.AAAA	AGGACTATGG	CCACATTCAA	TCGCCCAA.CT	1380
ACCCAGACGA	TTACCGGCCC	AGCAAAGTCT	GCATCTGGCG	GATCCAGGTG	TCTGAGGGCT	1440
TCCACGTGGG	CCTCACATTC	CAGTCCTTTG	AGATTGAGCG	CCACGACAGC	TGTGCCTACG	1500
actatctgga	GGTGCGCGAC	GGGCACAGTG	AGAGCAGCAC	CCTCATCGGG	CGCTACTGTG	1560
GCTATGAGAA	GCCTGATGAC	ATCAAGAGCA	CGTCCAGCCG	CCTCTGGCTC	AAGTTCGTCT	1620
CTGACGGGTC	CATTAACAAA	GCGGGCTTTG	CCGTCAACTT	TTTCAAAGAG	GTGGACGAGT	1680
GCTCTCGGCC	CAACCGCGGG	GGCTGTGAGC	AGCGGTGCCT	CAACACCCTG	GGCAGCTACA	1740
AGTGCAGCTG	TGACCCCGGG	TACGAGCTGG	CCCCAGACAA	GCGCCGCTGT	GAGGCTGCTT	1800
GTGGCGGATT	CCTCACCAAG	CTCAACGGCT	CCATCACCAG	CCCGGGCTGG	CCCAAGGAGT	1860
ACCCCCCCAA	CAAGAACTGC	ATCTGGCAGC	TGGTGGCCCC	CACCCAGTAC	CGCATCTCCC	1920
TGCAGTTTGA	CTTCTTTGAG	ACAGAGGGCA	ATGATGTGTG	C.AAGTACGAC	TTCGTGGAGG	1980
TGCGCAGTGG	ACTCACAGCT	GACTCCAAGC	TGCATGGCAA	GTTCTGTGGT	TCTGAGAAGC	2040
CCGAGGTCAT	CACCTCCCAG	TACAACAACA	TGCGCGTGGA	GTTCAAGTCC	GACAACACCG	2100
TGTCC.AAAAA	GGGCTTCAAG	GCCCACTTCT	TCTCAG.AAAA	GAGGCCAGCT	CTGCAGCCCC	2160
CTCGGGGACG	CCCCCACCAG	CTCAAA1TCC	GAGTGCAGAA	AAGAAACCGG	ACCCCCCAGT	2220
GAGGCCTGCC	AGGCCTCCCG	GACCCCTTGT	TACTCAGG.AA	CCTCACCTTG	GACGGAA TGG	2280
GATGGGGGCT	TCGGTuCCCA	CCAACCCCCC	ACCTCCACTC	TGCCATTCCG	GCCCACCTCC	2340
CTCTGGCCGG	ACAGAACTGG	TGCTCTCTTC	TCCCCACTGT	GCCCGTCCGC	GGACCGGGGA	2400
CCCTTCCCCG	TGCCCTACCC	CCTCCCATTT	TGATGGTGTC	TGTGACATTT	CCTGTTGTGA	2460
AGTAAAAGAG	GGACCCCTGC	GTCCTGC				2487

- 16 CZ 282231 B6 (2) INFORMACE O SEKVENCI ID. Č. 2:

(i) VLASTNOSTI SEKVENCE:

(A) DÉLKA: 1547 párů bází (B) TYP: nukleová kyselina (C) TYP VLÁKNA: dvojvláknová (D) TOPOLOGIE: lineární (ii) TYP MOLEKULY: cDNA (xi) POPIS SEKVENCE: SEKVENCE ID. Č. 2:

GGGGACTTCT	TGAACTTGCA	GGGAGAAT.AA	CTTGCGCACC	CCACTTTGCG	CCGGTGCCTT	60
TGCCCCAGCO	GAGCCTGCTT	CGCCATCTCC	GAGCCCCACC	GCCCCTCCAC	TCCTCGGCCT	120
TGCCCGACAC	TGAGACGCTG	TTCCCAGCGT	GAAAAGAGAG	ACTGCGCGGC	CGGCACCCGG	180
GAGAAGGAGG	AGGCAAAGAA	AAGGAACGGA	CATTCGGTCC	TTGCGCCAGG	TCCTTTGACC	240
AGAGTTTTTC	CATGTGGACG	CTCTTTCAAT	GGACGTGTCC	CCGCGTGCTT	CTT.AGACGGA	300
CTGCGGTCTC	CTAAAGGTCG	ACCATGGTGG	CCGGGACCCG	CTGTCTTCTA	GCGTTGCTGC	360
TTCCCCAGGT	CCTCCTGGGC	GGCGCGGCTG	GCCTCGTTCC	GGAGCTGGGC	CGC.AGGAAGT	420
TCGCGGCGGC	GTCGTCGGGC	CGCCCCTCAT	CCCAGCCCTC	TGACGAGGTC	CTGAGCGAGT	480
TCGAGTTGCG	GCTGCTCAGC	ATGTTCGGCC	TGAAACAGAG	ACCCACCCCC	AGC.AGGGACG	540
CCGTGGTGCC	CCCCTACATG	CTAGACCTGT	ATCGCAGGC.A	CTC.AGGTCAG	CCGGGCTCAC	600
CCGCCCCAGA	CCACCGGTTG	GAGAGGGCAG	CCAGCCGAGC	CAACACTGTG	CGCAGCTTCC	660
ACCATGAAGA	ATCTTTGG.A.A	G.AACTACCAG	AAACGAGTGG	GAAAACAACC	CGG.AGATTCT	720
TCTTTAATTT	AAGTTCTATC	CCCACGGAGG	AGTTTATCAC	CTCAGCAGAG	CTTCAGGTTT	'80
TCCGAGAACA	GATGCAAGAT	GCT'1'TAGGAA	ACAATAGCAG	TTTCCATCAC	CGAATTAATA	840
TTTATGAAAT	CATAAAACCT	GCAACAGCCA	ACTCGAAATT	CCCCGTGACC	AGACTTTTGG	900
ACACCAGGTT	GGTGAATCAG	AATGCAAGCA	GGTGGGAAAG	TTTTGATGTC	ACCCCCGCTG	960
TGATGCGGTG	GACTGCACAG	GGACACGCC.A	ACCATGGATT	CGTGGTGGAA	GTGGCCCACT	1020
TGGAGGAGAA	ACAAGGTGTC	TCCAAGAGAC	ATGTTAGGAT	AAGCAGGTCT	TTGCACCAAG	1080
ATGAACACAG	CTGGTCAC.AG	ATAAGGCCAT	TGCTAGTAAC	TTTTGGCCAT	G.AT GGAAAAG	1140
GGCATCCTCT	CCACAAAAGA	GAAAAACGTC	AAGCCAAAC.A	CAAACAGCGG	AAACGCCTTA	1200
AGTCC.AGCTG	T.AAGAGACAC	CCTTTGTACG	TGGACTTCAG	TGACGTGGGG	TGGAATGACT	1260
GGATTGTGGC	TCCCCCGGGG	TATCACGCCT	TTTACTGCCA	CGGAGAATGC	ccttttcctc	1320
TGGCTGATCA	TCTGAACTCC	ACTAATCATG	CCATTGTTCA	GACGTTGGTC	AACTCTGTTA	1380
ACTCTAAGAT	TCCTAAGGCA	TGCTGTGTCC	CGACAGAACT	CAGTGCTATC	TCGATGCTGT	1440
ACCTTGACG.A	GAATGAAAAG	GTTGTATTAA	AGAACTATCA	GGACATGGTT	GTGGAGGGTT	1500
GTGGGTGTCG	CTAGTACAGC	AAAATTAAAT	ACATAAATAT	ATATATA		1547

(2) INFORMACE O SEKVENCI ID. Č. 3:

(i) VLASTNOSTI SEKVENCE:

(A) DÉLKA: 1774 párů bází (B) TYP: nukleová kyselina (C) TYP VLÁKNA: dvojvláknová (D) TOPOLOGIE: lineární (ii) TYP MOLEKULY: cDNA

- 17CZ 282231 B6 (xi) POPIS SEKVENCE: SEKVENCE ID. Č. 3:

AGATCTTGAA	AACACCCGGG	CCACACACGC	CGCGACCTAC	AGCTCTTTCT	CAGCGTTGGA	60
GTGGAGACGG	CGCCCGCAGC	GCCCTGCGCG	GGTGAGGTCC	GCGCAGCTGC	T GGGGAAGAG	120
CCCACCTGTC	AGGCTGCGCT	GGGTCAGCGC	AGCAAGTGGG	GCTGGCCGCT	ATCTCGCTGC	180
ACCCGGCCGC	GTCCCGGGCT	CCGTGCGCCC	TCGCCCCAGC	TGGTTTGGAG	TTCAACCCTC	240
GGCTCCGCCG	CCGGCTCCTT	GCGCCTTCGG	AGTGTCCCGC	AGCGACGCCG	GGAGCCGACG	300
CGCCGCGCGG	GTACCTAGCC	ATGGCTGGGG	CGAGCAGGCT	GCTCTTTCTG	TGGCTGGGCT	360
GCTTCTGCGT	GAGCCTGGCO	CAGGGAGAGA	GACCGAAGCC	ACCTTTCCCG	GAGCTCCGCA	420
AAGCTGTGCC	AGGTGACCGC	ACGGCAGGTG	GTGGCCCGGA	CTCCGAGCTG	CAGCCGCAAG	480
ACAAGGTCTC	TGAACACATG	CTGCGGCTCT	ATGACAGGTA	CAGCACGGTC	CAGGCGGCCC	540
GGACACCGGG	CTCCCTGGAG	GGAGGCTCGC	AGCCCTGGCG	CCCTCGGCTC	CTGCGCGAAG	600
GCAACACGGT	TCGCAGCTTT	CGGGCGGCAG	CAGCAGAAAC	TCTTGAAAGA	AAAGGACTGT	660
ATATCTTCAA	TCTGACATCG	CTAACCAAGT	CTGAAAACAT	TTTGTCTGCC	ACACTGTATT	*20
TCTGTATTGG	AGAGCTAGGA	AACATCAGCC	TGAGTTGTCC	AGTGTCTGGA	GGATGCTCCC	780
ATCATGCTCA	GAGG.AAACAC	ATTCAGATTG	ATCTTTCTGC	ATGGACCCTC	AAATTCAGCA	840
GAAACCAAAG	TCAACTCCTT	GGCCATCTGT	CAGTGGATAT	GGCCAAATCT	CATCGAGATA	900
TTATGTCCTG	GCTGTCTAAA	GATATCACTC	aattcttgag	GAAGGCCAAA	GAAAATGAAG	960
AGTTCCTCAT	AGGATTTAAC	ATTACGTCCA	AGGGACGCCA	GCTGCCAAAG	AGGAGGTTAC	1020
CTTTTCCAGA	GCCTTATATC	TTGGTATATG	CCAATGATGC	CGCCATTTCT	GAGCCAGAAA	1080
GTGTGGTATC	AAGCTTACAG	GGACACCGGA	ATTTTCCCAC	TGGAACTGTT	CCCAAATGGG	1140
ATAGCCACAT	CAGAGCTGCC	CTTTCCATTG	AGCGGAGGAA	GAAGCGCTCT	ACTGGGGTCT	1200
TGCTGCCTCT	GCAGAACAAC	GAGCTTCCTG	GGGCAGAATA	CCAGTAT.AAA	AAGGATGAGG	1260
TGTGGGAGGA	GAGAAAGCCT	TACAAGACCC	TTCAGGCTCA	GGCCCCTGAA	AAGAGTAAGA	1320
ATAAAAAGAA	ACAGAGAAAG	GGGCCTCATC	GGAAGAGCCA	GACGCTCCAA	TTTGATGAGC	1380
AGACCCTGAA	AAAGGCAAGG	AGAAAGCAGT	GGATTGAACC	TCGGAATTGC	GCCAGGAGAT	1440
ACCTCAAGGT	AGACTTTGCA	GATATTGGCT	GGAGTGAATG	GATTATCTCC	CCCAAGTCCT	1500
TTGATGCCTA	TTATTGCTCT	GGAGCATGCC	AGTTCCCCAT	GCCAAAGTCT	TTGAAGCCAT	1560
CAAATCATGC	TACCATCCAG	AGTATAGTGA	GAGCTGTGGG	GGTCGTTCCT	GGGATTCCTG	1620
AGCCTTGCTG	TGTACCAGAA	AAGATGTCCT	CACTCAGTAT	TTTATTCTTT	GATGAAAATA	1680
AG AATGTAGT	GCTTAAAGTA	TACCCTAACA	TGACAGTAGA	GTCTTGCGCT	TGCAGATAAC	1*40
CTGGCAAAGA	ACTCATTTGA	atgcttaatt	CAAT			1*74

(2) INFORMACE O SEKVENCI ID. Č. 4:

ίο (i) VLASTNOSTI SEKVENCE:

(A) DÉLKA: 1751 párů bází (B) TYP: nukleová kyselina (C) TYP VLÁKNA: dvojvláknová (D) TOPOLOGIE: lineární (ii) TYP MOLEKULY: cDNA (xi) POPIS SEKVENCE: SEKVENCE ID. Č. 4:

GGCAGAGGAG	GAGGGAGGGA	GGG.AAGGAGC	GCGGAGCCCG	GCCCGGAAGC	TAGGTGAGTG	60
TGGCATCCGA	GCTGAGGGAC	GCGAGCCTGA	GACGCCGCTG	CTGCTCCGGC	TGAGTATCTA	120
GCTTGTCTCC	CCGATGGGAT	TCCCGTCCAA	GCTATCTCGA	GCCTGCAGCG	CCACAGTCCC	180
CGGCCCTCGC	CCAGGTTCAC	TGCAACCGTT	CAGAGGTCCC	CAGGAGCTGC	TGCTGGCGAG	240
CCCGCTACTG	CAGGGACCTA	TGGAGCCATT	CCGTAGTGCC	ATCCCGAGCA	ACGCACTGCT	300
GCAGCTTCCC	TGAGCCTTTC	CAGCAAGTTT	GTTCAAGATT	GGCTGTCAAG	AATCATGGAC	360
TGTTATTATA	TGCCTTGTTT	TCTGTCAAGA	CACCATGATT	CCTGGTAACC	GAATGCTGAT	420
GGTCGTTTTA	TTAGCCAAG	TCCTGCTAGG	AGGCGCGAGC	CATGCTAGTT	TGATACCTGA	480
GACGGGGAAG	AAAAAAGTCG	CCGAGATTCA	GGGCCACGCG	GGAGGACGCC	CCTCAGGGCA	540

- 18 CZ 282231 B6

GAGCCATGAG	CTCCTGCGGG	ACTTCGAGGC	GACACTTCTG	CAGATGTTTG	GGCTGCGCCG	600
CCGCCCGCAG	CCTAGCAAGA	GTGCCGTCAT	TCCGGACTAC	ATGCGGGATC	TTTACCGGCT	660
TCAGTCTGGG	GAGGAGGAGG	AAGAGCAGAT	CCACAGCACT	GGTCTTGAGT	ATCCTGAGCG	720
CCCGGCCAGC	CGGGCCAACA	CCGTGAGGAG	CTTCCACCAC	GAAGAACATC	TGGAGAACAT	780
CCCAGGGACC	AGTGAAAACT	CTGCTTTTCG	TTTCCTCTTT	AACCTCAGCA	GCATCCCTGA	840
GAACGAGGTG	ATCTCCTCTG	CAGAGCTTCG	GCTCTTCCGG	GAGCAGGTGG	ACCAGGGCCC	900
TGATTGGGAA	AGGGGCTTCC	ACCGT.ATAAA	CATTTATGAG	GTTATGAAGC	CCCCAGCAGA	960
AGTGGTGCCT	GGGCACCTCA	TCACACGACT	ACTGGACACG	AGACTGGTCC	ACCACAATGT	1020
GACACGGTGG	GAAACTTTTG	ATGTGAGCCC	TGCGGTCCTT	CGCTGGACCC	GGGAGAAGC.A	1080
GCCAAACTAT	GGGCTAGCCA	TTGAGGTGAC	TCACCTCCAT	CAGACTCGGA	CCCACCAGGG	1140
CCAGCATGTC	AGGATTAGCC	GATCGTTACC	TCAAGGGAGT	GGGAATTGGG	CCCAGCTCCG	1200
GCCCCTCCTG	GTCACCTTTG	GCCATGATGG	CCGGGGCCAT	GCCTTGACCC	GACGCCGGAG	1260
GGCCAAGCGT	AGCCCTAAGC	ATCACTCACA	GCGGGCCAGG	AAGAAGAATA	AGAACTGCCG	1320
GCGCCACTCG	CTCT.ATGTGG	ACTTCAGCGA	TGTGGGCTGG	AATGACTGGA	TTGTGGCCCC	1380
ACCAGGCTAC	CAGGCCTTCT	ACTGCCATGG	GGACTGCCCC	TTTCCACTGG	CTGACCACCT	1440
CAACTC.AACC	AACCATGCCA	TTGTGCAGAC	CCTGGTCAAT	TCTGTCAATT	CCAGTATCCC	1500
CAAAGCCTGT	TGTGTGCCCA	CTGAACTGAG	TGCCATCTCC	ATGCTGTACC	TGGATGAGTA	1560
TGAT.AAGGTG	GTACTGAAAA	ATTATCAGGA	GATGGTAGTA	GAGGGATGTG	GGTGCCGCTG	1620
AGATCAGGCA	GTCCTTGAGG	ATAGACAGAT	ATACACACCA	CACACACACA	CCACATACAC	1680
CACACACACA GACTTTTATT	cgttcccatc T	CACTCACCCA 1751	CACACTACAC	AGACTGCTTC	CTTATAGCTG	1740

(2) INFORMACE O SEKVENCI ID. Č. 5:

(i) VLASTNOSTI SEKVENCE:

(A) DÉLKA: 2153 párů bází (B) TYP: nukleová kyselina (C) TYP VLÁKNA: dvojvláknová (D) TOPOLOGIE: lineární (ii) TYP MOLEKULY: cDNA (xi) POPIS SEKVENCE: SEKVENCE ID. Č. 5:

CTGGTATATT	TGTGCCTGCT	GGAGGTGGAA	TTAACAGTAA	GAAGGAGAAA	GGGATTGAAT	60
GGACTTACAG	GAAGGATTTC	AAGTAAATTC	AGGGAAACAC	ATTTACTTGA	ATAGTACAAC	120
CTAGAGTATT	attttacact	AAGACG.ACAC	AAAAGATGTT	AAAGTTATCA	CCAAGCTGCC	180
GGACAGATAT	ATATTCCAAC	ACCAAGGTGC	AGATCAGCAT	AGATCTGTGA	TTCAGAAATC	240
AGGATTTGTT	TTGGAAAGAG	CTCAAGGGTT	GAGAAGAACT	CAAAAGCAAG	TGAAGATTAC	300
TTTGGG.AACT	ACAGTTTATC	AGAAGATCAA	CTTTTGCTAA	TTCAAATACC	AAAGGCCTGA	360
TTATCATAAA	TTCATATAGG	AATGCATAGG	TCATCTGATC	AAATAATATT	AGCCGTCTTC	420
TGCTACATCA	ATGCAGC.AAA	AACTCTTAAC	AACTGTGGAT	AATTGGAAAT	CTGAGTTTCA	480
gctttcttag	AAATAACTAC	TCTTGACATA	TTCCAAAATA	TTTAAAATAG	GACAGGAAAA	540
TCGGTGAGGA	TGTTGTGCTC	AGAAATGTCA	CTGTCATGAA	AAATAGGTAA	ATTTGTTTTT	600
TCAGCTACTG	GGAAACTGTA	CCTCCTAGAA	CCTTAGGTTT	TTTTTTTTTT	AAGAGGACAA	660
GAAGGACT.AA	AAATATCAAC	TTTTGCTTTT	GGACAAAAAT	GCATCTGACT	GTATTTTTAC	'20
TTAAGGGTAT	TGTGGGTTTC	CTCTGGAGCT	GCTGGGTTCT	AGTGGGTTAT	GC AAAAGGAG	'80
GTTTGGGAGA	CAATCATGTT	CACTCCAGTT	TTATTTATAG	AAGACTACGG	AACCACGAAA	840
GACGGGAAAT	ACAAAGGGAA	ATTCTCTCTA	TCTTGGGTTT	GCCTCACAGA	CCCAGACCAT	900
TTTCACCTGG	AAAACA.AGCG	TCCTCTGCAC	CTCTCTTTAT	GCTGGATCTC	TACAATGCCA	960
TGACCAATGA	AGAAAATCCT	GAAGAGTCGG	AGTACTCAGT	AAGGGCATCC	TTGGCAGAAG	1020
AGACCAGAGG	GGCAAG.AAAG	GGATACCC.AG	CCTCTCCC.AA	TGGGTATCCT	CGTCGCATAC	1080
AGTTATCTCG	GACGACTCCT	CTGACCACCC	AGAGTCCTCC	TCTAGCCAGC	CTCCATGATA	1140
CCAACTTTCT	GAATGATGCT	GACATGGTCA	TGAGCTTTGT	CAACTTAGTT	GAAAGAGACA	1200
AGGATTTTTC	TCACCAGCGA	AGGCATTACA	AAGAATTTCG	ATTTGATCTT	ACCCAAATTC	1260
CTCATGG.AGA	GGCAGTGACA	GCAGCTGAAT	TCCGGATATA	CAAGGACCGG	AGCAACAACC	1320

- 19 CZ 282231 B6

GATTTGAAAA	TGAAACAATT	AAGATTAGCA	TATATCAAAT	CATCAAGGAA	T AC AC AAAT A	1380
GGGATGCAGA	TCTGTTCTTG	TTAGACACAA	GAAAGGCCCA	AGCTTTAGAT	GTGGGTTGGC	1440
TTGTCTTTGA	TATCACTGTG	ACCAGCAATC	ATTGGGTGAT	T.AATCCCCAG	AATAATTTGG	1500
GCTTACAGCT	CTGTGCAGAA	ACAGGGGATG	GACGCAGTAT	CAACGTAAAA	TCTGCTGGTC	1560
TTGTGGGAAG	ACAGGGACCT	CAGTCAAAAC	AACCATTCAT	GGTGGCCTTC	TTCAAGGCGA	1620
GTGAGGTACT	TCTTCGATCC	GTGAGAGCAG	CCAACAAACG	AAAAAATCAA	AACCGCAATA	1680
AATCCAGCTC	TCATCAGGAC	TCCTCCAGAA	TGTCCAGTGT	TGGAGATTAT	AACACAAGTG	1'40
AGCAAAAACA	AGCCTGT.AAG	AAGCACGAAC	TCTATGTGAG	CTTCCGGGAT	CTGGGATGGC	1800
AGGACTGGAT	TATAGCACCA	GAAGGATACG	CTGCATTTTA	TTGTGATGGA	GAATGTTCTT	1860
TTCCACTTAA	CGCCCATATG	AATGCCACCA	ACCACGCTAT	AGTTCAGACT	CTGGTTCATC	1920
TGATGTTTCC	TGACCACGTA	CCAAAGCCTT	GTTGTGCTCC	AACCAAATTA	AATGCCATCT	1980
CTGTTCTGTA	CTTTGATGAC	AGCTCCAATG	TCATTTTGAA	AAAATATAGA	AATATGGTAG	2040
TACGCTCATG	TGGCTGCCAC	TAATATTAAA	TAATATTGAT	AATAACAAAA	AGATCTGTAT	2100
TAAGGTTTAT	GGCTGC.AATA	AAAAGCATAC	TTTCAGACAA	ACAGAAAAAA	AAA	2153

(2) INFORMACE O SEKVENCI ID. Č. 6:

(i) VLASTNOSTI SEKVENCE:

(A) DÉLKA: 2923 párů bází (B) TYP: nukleová kyselina (C) TYP VLÁKNA: dvojvláknová (D) TOPOLOGIE: lineární (ii) TYP MOLEKULY: cDNA (xi) POPIS SEKVENCE: SEKVENCE ID. Č. 6:

CGACCATGAG	AGATAAGGAC	TGAGGGCCAG	GAAGGGGAAG	CGAGCCCGCC	GAGAGGTGGC	60
GGGGACTGCT	CACGCCAAGG	GCCACAGCGG	CCGCGCTCCG	GCCTCGCTCC	GCCGCTCCAC	120
GCCTCGCGGG	ATCCGCGGGG	GCAGCCCGGC	CGGGCGGGGA	TGCCGGGGCT	GGGGCGGAGG	180
GCGCAGTGGC	TGTGCTGGTG	GTGGGGGCTG	CTGTGCAGCT	GCTGCGGGCC	CCCGCCGCTG	240
CGGCCGCCCT	TGCCCGCTGC	CGCGGCCGCC	GCCGCCGGGG	GGCAGCTGCT	GGGGGACGGC	300
GGGAGCCCCG	GCCGCACGGA	GCAGCCGCCG	CCGTCGCCGC	AGTCCTCCTC	GGGCTTCCTG	360
TACCGGCGGC	TCAAGACGCA	GGAGAAGCGG	GAGATGCAGA	AGGAGATCTT	GTCGGTGCTG	420
GGGCTCCCGC	ACCGGCCCCG	GCCCCTGCAC	GGCCTCCAAC	AGCCGCAGCC	CCCGGCGCTC	480
CGGCAGCAGG	AGGAGCAGCA	GCAGCAGCAG	CAGCTGCCTC	GCGGAGAGCC	CCCTCCCGGG	540
CGACTGAAGT	CCGCGCCCCT	CTTCATGCTG	GATCTGTACA	ACGCCCTGTC	CGCCGACAAC	600
GACGAGGACG	GGGCGTCGGA	GGGGGAGAGG	CAGCAGTCCT	GGCCCCACGA	AGCAGCCAGC	660
TCGTCCCAGC	GTCGGCAGCC	GCCCCCGGGC	GCCGCGCACC	CGCTCAACCG	CAAGAGCCTT	'20
CTGGCCCCCG	GATCTGGCAG	CGGCGGCGCG	TCCCCACTGA	CCAGCGCGCA	GGACAGCGCC	'80
TTCCTCAACG	ACGCGGACAT	GGTCATGAGC	TTTGTGAACC	TGGTGGAGTA	CGACAAGGAG	840
TTCTCCCCTC	GTCAGCGACA	CCACAAAGAG	TTCAAGTTCA	ACTTATCCCA	GATTCCTGAG	900
GGTGAGGTGG	TGACGGCTGC	AGAATTCCGC	ATCTACAAGG	ACTGTGTTAT	GGGGAGTTTT	960
AAAAACCAAA	CTTTTCTTAT	CAGCATTTAT	CA-XGTCTTAC	AGGAGCATCA	GCACAGAGAC	1020
TCTGACCTGT	TTTTGTTGGA	CACCCGTGTA	GTATGGGCCT	CAGAAGAAGG	CTGGCTGGAA	1080
TTTGACATCA	CGGCCACTAG	CAATCTGTGG	GTTGTGACTC	CACAGCATAA	CATGGGGCTT	1140
CAGCTGAGCG	TGGTGACAAG	GGATGGAGTC	CACGTCCACC	CCCGAGCCGC	AGGCCTGGTG	1200
GGCAGAGACG	GCCCTTACGA	T.AAGCAGCCC	TTCATGGTGG	CTTTCTTCAA	AGTGAGTGAG	1260
GTCCACGTGC	GCACCACCAG	GTCAGCCTCC	AGCCGGCGCC	GACAACAGAG	TCGTAATCGC	1320
TCTACCCAGT	CCCAGGACGT	GGCGCGGGTC	TCCAGTGCTT	CAGATTACAA	CAGCAGTGAA	1380
FTGAAAACAG	CCTGCAGGAA	GCATGAGCTG	TATGTGAGTT	TCCAAGACCT	GGGATGGCAG	1440
GACTGGATCA	TTGCACCCAA	GGGCTATGCT	GCCAATTACT	GTGATGGAGA	ATGCTCCTTC	1500
CCACTCAACG	CACACATGAA	TGC.AACCAAC	CACGCGATTG	TGCAGACCTT	GGTTCACCTT	15o0
ATGAACCCCG	AGTATGTCCC	CAAACCGTGC	TGTGCGCCAA	CTAAGCTAAA	TGCCATCTCG	1620
GTTCTTTACT	TTGATGACAA	CTCCAATGTC	ATTCTGAAAA	AATACAGGAA	TATGGTTGTA	1680
AGAGCTTGTG	GATGCCACTA	ACTCGAAACC	AGATGCTGGG	GACACACATT	CTGCCTTGGA	1'40

-20CZ 282231 B6

TTCCTAGATT	ACATCTGCCT	TAAAAAAACA	CGGAAGCACA	GTTGGAGGTG	GGACGATGAG	l soo
actttgaaac	TATCTCATGC	CAGTGCCTTA	TTACCCAGGA	AGATTTTAAA	GGACCTCATT	1S60
AATAATTTGC	TCACTTGGTA	AATGACGTGA	GTAGTTGTTG	GTCTGTAGCA	AGCTGAGTTT	1920
GGATGTCTGT	AGCAT.AAGGT	CTGGTAACTG	CAGAAACATA	ACCGTGAAGC	TCTTCCTACC	1980
CTCCTCCCCC	AAAAACCCAC	CAAAATTAGT	TTTAGCTGTA	GATCAAGCTA	TTTGGGGTGT	2040
TTGTTAGTAA	ATAGGGAAAA	TAATCTCAAA	GGAGTT.AAAT	GTATTCTTGG	CTAAAGGATC	2100
AGCTGGTTCA	GTACTGTCTA	TCAAAGGTAG	ATTTTACAGA	GAACAGAAAT	CGGGGAAGTG	2160
GGGGGAACGC	CTCTGTTCAG	TTCATTCCCA	GAAGTCCACA	GGACGCACAG	CCCAGGCCAC	2220
AGCCAGGGCT	CCACGGGGCG	CCCTTGTCTC	AGTCATTGCT	GTTGTATGTT	CGTGCTGGAG	2280
TTTTGTTGGT	GT GAAAAT AC	ACTTATTTCA	GCCAAAACAT	ACCATTTCTA	CACCTCAATC	2340
CTCCATTTGC	TGTACTCTTT	GCTAGTACCA	AAAGTAGACT	GATTACACTG	AGGTGAGGCT	2400
ACAAGGGGTG	TGTAACCGTG	T.AACACGTGA	AGGCAGTGCT	CACCTCTTCT	TTACCAGAAC	2460
ggttctttga	CCAGCACATT	AACTTCTGGA	CTGCCGGCTC	TAGTACCTTT	TCAGTAAAGT	2520
GGTTCTCTGC	CTTTTTACTA	TACAGCATAC	CACGCCACAG	GGTTAGAACC	AACGAAGAAA	2580
ATAAAATGAG	GGTGCCCAGC	TTATAAGAAT	GGTGTTAGGG	GGATGAGCAT	GCTGTTTATG	2640
AACGGAAATC	ATGATTTCCC	TGTAGAAAGT	GAGGCTCAGA	TTAAATTTTA	G AATATTTTC	2'00
TAAATGTCTT	TTTCACAATC	ATGTGACTGG	GAAGGCAATT	TCATACTAAA	CTGATTAAAT	2'60
AATACATTTA	TAATCTACAA	CTGTTTGCAC	TTACAGCTTT	TTTTGTAAAT	AT.AAACTATA	2820
ATTTATTGTC	TATTTTATAT	CTGTTTTGCT	GTGGCGTTGG	GGGGGGGGCC	GGGCTTTTGG	2880
GGGGGGGGGT	TTGTTTGGGG	GGTGTCGTGG	TGTGGGCGGG	CGG		2923

(2) INFORMACE O SEKVENCI ID. Č. 7:

(i) VLASTNOSTI SEKVENCE:

(A) DÉLKA: 1448 párů bází (B) TYP: nukleová kyselina (C) TYP VLÁKNA: dvojvláknová (D) TOPOLOGIE: lineární (ii) TYP MOLEKULY: cDNA (xi) POPIS SEKVENCE: SEKVENCE ID. Č. 7:

GTGACCGAGC	GGCGCGGACG	GCCGCCTGCC	CCCTCTGCCA	CCTGGGGCGG	TGCGGGCCCG	60
GAGCCCGGAG	CCCGGGTAGC	GCGTAGAGCC	GGCGCGATGC	ACGTGCGCTC	ACTGCGAGCT	120
GCGGCGCCGC	ACAGCTTCGT	GGCGCTCTGG	GCACCCCTGT	TCCTGCTGCG	CTCCGCCCTG	180
GCCGACTTCA	GCCTGGACAA	CGAGGTGCAC	TCGAGCTTCA	TCCACCGGCG	CCTCCGCAGC	240
CAGGAGCGGC	GGGAGATGCA	GCGCGAGATC	CTCTCCATTT	TGGGCTTGCC	CCACCGCCCG	300
CGCCCGCACC	TCCAGGGCAA	GCACAACTCG	GCACCCATGT	TCATGCTGGA	CCTGTACAAC	360
GCCATGGCGG	TGGAGGAGGG	CGGCGGGCCC	GGCGGCCAGG	GCTTCTCCTA	CCCCTACAAG	420
GCCGTCTTCA	GTACCCAGGG	CCCCCCTCTG	GCCAGCCTGC	AAGATAGCCA	TTTCCTCACC	480
GACGCCGACA	TGGTCATGAG	CTTCGTCAAC	CTCGTGGAAC	ATGACAAGGA	ATTCTTCCAC	540
CCACGCTACC	ACCATCGAGA	GTTCCGGTTT	GATCTTTCCA	AGATCCCAGA	AGGGGAAGCT	600
GTCACGGCAG	CCGAATTCCG	GATCTAC.AAG	GACTACATCC	GGGAACGCTT	CGACAATGAG	660
ACGTTCCGGA	TCAGCGTTTA	TCAGGTGCTC	CAGGAGCACT	TGGGCAGGGA	ATCGGATCTC	'20
TTCCTGCTCG	ACAGCCGTAC	CCTCTGGGCC	TCGGAGGAGG	GCTGGCTGGT	GTTTGACATC	80
ACAGCCACCA	GCAACCACTG	GGTGGTCAAT	CCGCGGCACA	ACCTGGGCCT	GCAGCTCTCG	840
GTGGAGACGC	TGGATGGGCA	GAGCATCAAC	CCCAAGTTGG	CGGGCCTGAT	TGGGCGGCAC	900
GGGCCCCAGA	ACAAGCAGCC	CTTCATGGTG	GCTTTCTTCA	AGGCCACGGA	GGTCCACTTC	ChO
CGCAGCATCC	GGTCCACGGG	GAGCAAACAG	CGCAGCCAGA	ACCGCTCCAA	GACGCCCAAG	bCO
AACCAGGAAG	CCCTGCGGAT	GGCCAACGTG	GCAGAGAACA	GCAGCAGCGA	CCAGAGGCAG	1080
GCCTGTAAGA	AGCACGAGCT	GTATGTCAGC	TTCCGAGACC	TGGGCTGGCA	GGACTGGATC	1140
ATCGCGCCTG	AAGGCTACGC	CGCCTACTAC	TGTGAGGGGG	AGTGTGCCTT	CCCTCTGAAC	1200
TCCTACATGA	ACGCCACCAA	CCACGCCATC	GTGCAGACGC	TGGTCCACTT	CATCAACCCG	12o0
GAAACGGTGC	CCAAGCCCTG	CTGTGCGCCC	ACGCAGCTCA	ATGCCATCTC	CGTCCTCTAC	1320
TTCGATGACA	GCTCCAACGT	CATCCTGAAG	AAATACAGAA	ACATGGTGGT	CCGGGCCTGT	1380

-21 CZ 282231 B6

GGCTGCCACT AGCTCCTCCG AGAATTCAGA CCCTTTGGGG CCAAGTTTTT CTGGATCCTC 1440 CATTGCTC 1448

Vynález zde byl popsán s odkazy na přednostní provedení a příklady. Zřejmé variace napadnou ty, jež jsou zkušení v oboru. Proto vy nález se nemá považovat za omezený tímto popisem, ale jen nároky, které následují.

Claims (6)

PATENTOVÉ NÁROKY

1. Farmaceutický prostředek na generovaní nového růstu kosti v savci, vyznačující se tím, že jako účinné látky obsahuje:

a) sloučeninu vitaminu D a

b) kostní morfogenetickou bílkovinu BMP vybranou ze skupiny zahrnující BMP-1, BMP-2. BMP-3, BMP-4. BMP-5, BMP-6 a BMP-7 spolu s farmaceuticky přijatelným nosičem.

2. Farmaceutický prostředek podle nároku 1, vyznačující se tím. že obsahuje sloučeninu vitaminu D v množství od 30 ng až 10 pg a BMP v množství alespoň 2,5 pg v jednotkové dávce.

3. Farmaceutický prostředek podle nároku 2, vyznačující se tím. že obsahuje sloučeninu vitaminu D v množství 1 ng až 1 mg a BMP v množství 1 pg až 100 pg v jednotkové dávce.

4. Farmaceutický prostředek podle nároku 2, vyznačující se tím. že obsahuje sloučeninu vitaminu D vybranou ze skupiny zahrnující vitamin D₂; vitamin D₃: lahydroxyvitamin D₃; 1-ct-fluorovitamin D₃; 3-deoxy-1.25-dihydro.xyvitamin D₃; 25-hydroxy-5.6trans vitamin D₃; 25-hydroxyvitamin D₂; 25-hvdroxyvitamin D₃; 1.25-dihydroxyvitamin D₂; 24,25-dihydroxyvitamin D₂; 24,25-dihydroxyvitamin D₃ a 1,25-dihydroxyvitamin D₃.

5. Farmaceutický prostředek podle nároku 4, vyznačující se tím, že jako sloučeninu vitaminu D obsahuje 1,25-dihydroxyvitamin D₃.

6. Farmaceutický prostředek podle kteréhokoliv z nároků 2 až 5. vyznačující se tím, že jako BMP obsahuje složku osteoinduktivního extraktu obsahujícího alespoň jednu BMP vybranou ze skupiny zahrnující BMP-1, BMP-2, BMP-3, BMP-4, BMP-5, BMP-6 a BMP 7.