CZ282170B6

CZ282170B6 - Nově 17 ß - substituované deriváty 4-azaandrostanu, farmaceutické přípravky na jejich bázi a způsob jejich přípravy

Info

Publication number: CZ282170B6
Application number: CZ95780A
Authority: CZ
Inventors: Zoltán Tuba; Judit Horváth; László Kollár; Marsai Mária Lovasné; Gábor Balogh; Attila Csehi; András Javor; György Hajós; László Szporny
Original assignee: Richter Gedeon Vegyészeti Gyár Rt.
Priority date: 1992-10-02
Filing date: 1993-10-01
Publication date: 1997-05-14
Also published as: WO1994007909A1; HU9203135D0; AU672046B2; HUT65768A; RU95110751A; JPH08502059A; US5583138A; KR950703577A; FI951561A; ZA936774B; HU212459B; EP0662977A1; FI951561A0; CA2146164A1; CZ78095A3; SK40895A3; AU5118393A

Abstract

Nové 17.beta.-substituované deriváty 4-azaandrostanu obecného vzorce I, kde R znamená vodík nebo C.sub.1.n.-C.sub.3 .n.alkylovou skupinu, R.sup.1.n. a R.sup.2.n. jsou stejné nebo různé a představují vodík nebo C.sub.1.n.-C.sub.4.n.alkylovou skupinu, s výhradou, že oba symboly mohou znamenat vodík pouze v případě, kdy n je vyšší než 5, nebo R.sup.1.n. a R.sup.2.n. společně znamenají .alfa.,.omega.-alkylenovou skupinu s 5 až 7 uhlíkovými atomy,přičemž koncové uhlíkové atomy této alkylenové skupiny jsou vázány k témuž uhlíkovému atomu kruhu, n je 4, 5, 6 nebo 7 a představuje jednoduchou nebo dvojnou vazbu. Dále se vynález týká farmaceutických přípravků obsahujících tyto sloučeniny , jakož i způsobu přípravy těchto sloučenin obecného vzorce I. Sloučeniny obecného vzorce I jsou účinné při inhibici enzymu 5.alfa.-reduktasy a proto jsouvhodné k léčbě veškerých chorob, kde je cílem snížit hladinu dihydrotestosteronu ve tkáni, jako je benigní prostatická hyperpalsie, akné, seborrhoea, feminní hŕ

Description

Nové 17p-substltuované deriváty 4-azaandrostanu obecného vzorce I. kde R znamená vodík nebo C1-C3 alkylovou skupinu. R¹ a R² Jsou stejné nebo různé a představují vodík nebo C1-C4 alkylovou skupinu, s výhradou, že oba symboly mohou znamenat vodík pouze v případě, kdy n je vyšší než 5, nebo R¹ a R²společné znamenají d.w-alkylenovou skupinu s 5 až 7 uhlíkovými atomy, přičemž koncové uhlíkové atomy této alkylenové skupiny jsou vázány k témuž uhlíkovému atomu kruhu, n je 4, 5, 6 nebo 7 a představuje Jednoduchou nebo dvojnou vazbu. Dále se vynález týká farmaceutických přípravků, obsahujících tyto sloučeniny. Jakož i způsobu přípravy téchto sloučenin obecného vzorce I. Sloučeniny obecného vzorce I Jsou účinné při inhibici enzymu 5a-reduktázy a proto jsou vhodné k léčbé veškerých chorob, kde je cílem snížit hladinu dihydrotestosteronu ve tkáni, jako Je benigní prostatlcká hyperplasie, akné, seborrhoea, femlnní hirsutismus a androgenní alopecie.

Nové 17(3-substituované deriváty 4-azaandrostanu, farmaceutické přípravky na jejich bázi a způsob jejich přípravy

Oblast techniky

Vynález se týká nových 17P-substituovaných derivátů 4-azaandrostanu obecného vzorce I

(I) kde

R znamená vodík nebo C1.3 alkylovou skupinu,

R¹ a R² jsou stejné nebo různé a představují vodík nebo C_M alkylovou skupinu, s výhradou, že oba symboly mohou znamenat vodík pouze v případě, kdy n je vyšší než 5, nebo

R¹ a R² společně znamenají a,co-alkylenovou skupinu s 5 až 7 uhlíkovými atomy, přičemž koncové uhlíkové atomy této alkylenové skupiny jsou vázány k témuž uhlíkovému atomu kruhu, n je 4, 5, 6 nebo 7 a — představuje jednoduchou nebo dvojnou vazbu, a farmaceutických přípravků, obsahujících tyto sloučeniny.

Dále se vynález týká způsobu přípravy výše uvedených sloučenin a přípravků.

Sloučeniny obecného vzorce I podle vynálezu jsou nové a mají významnou biologickou účinnost; inhibicí funkce enzymu 5a-reduktázy totiž brání přeměně testosteronu na dihydrotestosteron.

Vynález se proto rovněž týká způsobu léčení, který spočívá v podávání terapeuticky účinného množství sloučeniny obecného vzorce I pacientovi včetně člověka za účelem inhibice enzymu 5a-reduktázy.

Dosavadní stav techniky

Androgeny představují ty ze steroidních hormonů, které jsou odpovědné za veškeré fyzické charakteristiky, odlišující jedince mužského pohlaví od jedinců ženského pohlaví. U mužských jedinců jsou za androgenní účinky primárně odpovědné dva steroidy, tj. testosteron ajeho redukovaný metabolit dihydrotestosteron (zkratka DHT). Ve tkáních savců je přeměna testosteronu na DHT katalyzována enzymem steroidní 5a-reduktázou v přítomnosti nikotinamidadenindinukleotidfosfátu (NADPH). U mužských jedinců je testosteron syntetizován převážně varlaty, odkud je veden proudem krve do různých tkání. V části androgen-senzitivních tkání, kde může být detekována významná aktivita enzymu steroidní 5a-reduktázy, například v prostatické a kožní tkáni, je přímým mediátorem androgenního účinku dihydrotestosteron, který je syntetizován in šitu z testosteronu, odebíraného z krevního řečiště.

Zvýšení koncentrace DHT ve tkáni hraje roli při vývoji a trvání různých androgenně závislých chorob, jako je například benigní prostatická hyperplasie, akné, seborrhoea, femininní hirsutismus aandrogenní alopecie [J. Clin. Invest. 49, 1737 (1970), J. Invest. Dermatol. 56, 366 (1971) a ibidem 75, 83 (1977) a dále Clin. Dermatol. 6, 122 (1988)]. Pro léčbu těchto DHTzávislých chorob mohou být použitelné všechny látky, inhibující enzym steroidní 5a-reduktázu a tak snižující koncentraci DHT ve tkáních.

Na tomto poznatku byl založen výzkum, zaměřený na syntézu inhibitorů enzymu 5a-reduktázy. V posledních 15 letech bylo v literatuře popsáno mnoho inhibitorů enzymu 5a-reduktázy, obsahujících steroidní skelet.

Dosud nejpočetnější známá skupina inhibitorů 5a-reduktázy je reprezentována 4-aza-17karbamoylsteroidy.

Jedna ze sloučenin, obsahujících strukturní jednotku 4-aza, je popsána v popisu patentu US 4 377 584 a v J. Steroid Biochem. 19, str. 385 až 390 (1988).

Syntéza 173-(N,N-diethylkarbamoyl)-4-methyl-4-aza-5a-androstan-3-onu je zdůrazněna v popisu patentu US 4 220 775. Na základě údajů z literatury byla tato sloučenina podrobena rozsáhlým biologickým studiím.

Syntéza nových 17p-(N-monosubstituovaný karbamoyl)-4-aza-5a-androstenonů, například 17(3[N-(l,l-dimethylethyl)karbamoyl]-3-oxo-4-aza-5a-androst-l-enu (sloučenina škodovým číslem MK-906 o názvu Finasteride), je popsána v popisu evropského patentu č. 155 096. Nyní byla tato sloučenina schválena pro terapeutické použití.

Syntéza oxidovaných analogů 17[3-(N-monosubstituovaný karbamoyl)-4-aza-5a-androstan-3onových derivátů je publikována v popisu evropského patentu č. 271 220. Pro popsané sloučeniny je charakteristické, že alkylový substituent skupiny 17[3-(N-monosubstituovaný karbamoyl) může nést hydroxylovou, karboxylovou nebo alkoxykarbonylovou skupinu.

Syntéza a použití 17[3-(N-monosubstituovaný karbamoyl)-4-aza-5a-androst-l-en-3-onových derivátů k léčbě alopecie jsou popsány v popisu evropského patentu č. 285 382, zatímco použití těchto sloučenin k léčbě karcinomu prostaty je navrženo v popisu evropského patentu č. 285 383.

Nový postup výstavby aminokarbonylového postranního řetězce v poloze 17 17β-substituovaných 3-oxo-4-azasteroidů pomocí Grignardovy reakce imidazolového derivátu příslušné karboxylové kyseliny je prezentován v popisu evropského patentu č. 367 502.

Popis evropského patentu č. 462 662 uvádí syntézu 17β-(N-monosubstituovaný adamantylkarbamoyl)- a (norbomylkarbamoyl)-4-aza-5a-androst-l-en-3-onu a -4-aza-5a-androstan-3-onu. V popisu patentu jsou rovněž diskutovány možnosti použití sloučenin, inhibujících 5areduktázu.

Syntéza 4-azasteroidů, obsahujících dvojné vazby v polohách 8(14), 7(8) nebo 16(17) a/nebo 1(2), je popsána v popisu evropského patentu č. 277 002. Charakteristickou strukturní jednotkou C]7-postranního řetězce je aminokarbonylová skupina, ale v poloze 17 může být přítomen ještě další postranní řetězec, obsahující kyslík nebo dusík.

Kombinace inhibitorů aromatázy s inhibitory 5a-reduktázy je v popisu patentu DE 3 607 651 navrhována pro léčbu prostatické hyperplasie. Je doporučován l-methylandrosta-l,4-dien-3,17dion jako inhibitor aromatázy a 17|3-(N,N-diethylkarbamoyl)-4-methyl-4-aza-5a-androstan-3-on jako inhibitor 5a-reduktázy.

Topické použití inhibitorů 5a-reduktázy je navrženo v popisu patentu US 4,885.289.

V patentové přihlášce PCT, zveřejněné pod č. WO 91/12261, je popsána syntéza 4-azasteroidů, jejichž Cn-postranní řetězec je odlišný od dosud popsaných sloučenin. Charakteristickým příkladem těchto sloučenin je 4-methyl-17(3-[N-isopropyl-N-(N,N-diisopropylkarbamoyl)karbamoy l]-4-aza-5 a-androstan-3 -on.

Syntéza nových 4-azasteroidů s Ci₇-postranním řetězcem obecného vzorce -X-COZ je zveřejněna v popisu evropského patentu č. 200 859. V tomto vzorci X znamená chemickou vazbu nebo přímý nebo rozvětvený alifatický Ci_6 řetězec a Z představuje alkoxyskupinu nebo substituovanou aminoskupinu. Tyto sloučeniny mohou obsahovat také oxoskupinu v poloze 12 steroidního skeletu.

Maďarská patentová přihláška č. 3396/91 (zveřejněná pod č. T/59417) se týká syntézy 4azasteroidových derivátů, obsahujících Ci₇-aminokarbonylový postranní řetězec, nesoucí alkylovou skupinu, substituovanou aromatickou skupinou. Tyto sloučeniny jsou vhodné pro léčbu a prevenci prostatické hypertrofie.

Různé typy azasteroidů, hlavně inhibujících 5a-reduktázu, jsou shrnuty v J. Med. Chem. 27, str. 1690 až 1701 (1984). Tento souhrn obsahuje rovněž biologické údaje.

Vztah struktura-aktivita u inhibitorů 5a-reduktázy, obsahujících strukturní jednotku 4-aza, je diskutován v J. Med. Chem. 29, str. 2298 až 2315 (1986).

Inhibiční účinnost 5a-reduktázy a biologický účinek antiandrogenních vlastností 4-azasteroidů, pozorovaný u krys, jsou shrnuty v Steroids 47/1, str. 1 až 19 (1986).

Transformace acylimidazolových derivátů, hlavně na karboxamidové deriváty, je zveřejněna v Synt. Comm. 30(17), str. 2683 až 2960 (1990).

Vysoký počet výše uvedených citací z literatury a patentových dokumentů podporuje rovněž význam inhibitorů 5a-reduktázy.

Cílem vynálezu bylo připravit nové sloučeniny, které vykazují vyšší biologickou účinnost ve srovnání se známými sloučeninami a/nebo mají selektivnější inhibiční účinek na aktivitu enzymu 5a-reduktázy. Výše uvedené vlastnosti mohou totiž přispívat k výhodnějšímu terapeutickému využití než u známých léčiv.

Podstata vynálezu

Překvapivě bylo zjištěno, že inhibiční účinek na 5a-reduktázu je možno významně zvýšit specifickou volbou aminokarbonylového substituentu v poloze 17 17[3-substituovaných 4azaandrostenových a -androstanových derivátů obecného vzorce I podle vynálezu.

Podle vynálezu zahrnuje příprava nových sloučenin vzorce I

- reakci 17-halogeno-4-azaandrostenového derivátu obecného vzorce II

(Π) kdeRa™ mají výše uvedený význam aX znamená chlor, brom nebo jod, scyklickým aminem obecného vzorce ΙΠ

R¹

Η- N (CH₂)_n

R² (ΙΠ) kde R¹, R²an mají výše uvedený význam, vdipolámím aprotickém rozpouštědle v přítomnosti palladnaté soli, báze, tvořené terciárním aminem, a fosfinů, nebo v přítomnosti palladnatého komplexu a báze, tvořené terciárním aminem v atmosféře oxidu uhelnatého při teplotě mezi 35 a 80 °C a

- popřípadě dehydrogenaci získané sloučeniny obecného vzorce I, kde R, R¹, R², vazba — mezi atomy C₅ aCj an mají výše uvedený význam, obsahující dvojnou vazbu mezi atomy Ci6 aCp a jednoduchou vazbu mezi atomy Cj aC₂, za vzniku sloučeniny obecného vzorce I, obsahující dvojné vazby mezi atomy Ci a C₂ a mezi atomy Ci6 a C₁₇, kde R, R¹, R², vazba — mezi atomy C5 a C₆ a n mají výše uvedený význam, a/nebo

- popřípadě transformaci získané sloučeniny obecného vzorce I, kde R, R¹, R², n, vazba — mezi atomy C5 a Cň a mezi atomy C_t a C₂ mají výše uvedený význam, obsahující dvojnou vazbu mezi atomy Ci6 a C_]7, katalytickou hydrogenací na sloučeninu obecného vzorce I, obsahující na místě vazby — jednoduchou vazbu, kde R, R¹, R² a n mají výše uvedený význam, a/nebo

- popřípadě dehydrogenaci získané sloučeniny obecného vzorce I, kde R, R¹, R² a n mají výše uvedený význam, obsahující jednoduché vazby mezi atomy C| a C₂, atomy C₅ a C₆ a atomy C₁₆aCj₇, za vzniku sloučeniny obecného vzorce I, obsahující dvojnou vazbu mezi atomy Ci aC₂, kde R, R¹, R² a n mají výše uvedený význam a vazba — znamená jednoduché vazby mezi atomy

C₅ a C₆ a atomy Ci₆ a C₁₇.

Při reakci sloučenin obecného vzorce II se sloučeninami obecného vzorce III se výhodně jako palladnaté soli používají palladium(II) diacetát nebo chlorid palladnatý, jako báze triethylamin 40 a jako fosfiny trifenylfosfin, 1,4-bis(difenylfosfino)butan, 1,2-bis(difenylfosfino)ethan nebo 1,3 bis(difenylfosfino)propan. Reakci je možno provádět také tím způsobem, že místo palladnaté soli a fosfinů je možno použít vytvořený komplex soli dvojmocného palladia s fosfinem, například [bis(trifenylfosfino)palladium(ii)]dichlorid nebo diacetát.

Při uvedené reakci je možno jako rozpouštědlo použít dipolámí aprotické rozpouštědlo, výhodně dimethylformamid nebo dimethylsulfoxid.

Sloučeniny obecného vzorce I, získané při uvedené reakci, je možno podrobit dalším přeměnám v rozsahu obecného vzorce I.

Tak například získanou sloučeninu obecného vzorce I, obsahující dvojnou vazbu mezi atomy Ci6 aC|₇ a jednoduchou vazbu mezi atomy C] aCí, je možno dehydrogenovat na sloučeninu obecného vzorce I, obsahující mezi atomy C₁ a C2 i atomy C]6 a Cp dvojné vazby.

Tuto dehydrogenaci je možno přednostně provádět s použitím látky typu chinonu, například 2,3dichlor-5,6-dikyan-l,4-benzochinonu, v přítomnosti silylačního činidla, jako je bis(trimethylsilyl)-trifluoracetamid, nebo s anhydridem kyseliny fenylselenové.

Další možnost následné přeměny vzniká tak, že získaná sloučenina, kde R, R¹, R² a vazby — mezi atomy Ci a C2 a atomy C₅ a C₆ a n mají výše uvedený význam, obsahující dvojnou vazbu mezi atomy Ciů a Cp, může být přeměněna katalytickou hydrogenací na sloučeninu obecného vzorce I, obsahující na místě vazby — jednoduchou vazbu, kde R, R¹, R² a n mají výše uvedený význam. Takto získanou sloučeninu je popřípadě možno ještě dále transformovat dehydrogenaci v polohách 1-2, jak výše uvedeno.

Podle výhodného provedení způsobu podle vynálezu se 17-halogen-4-azaandrostenový derivát obecného vzorce II nechá reagovat s aminem obecného vzorce III, například hexamethyleniminem, heptamethyleniminem, 4-methylpiperidinem, 3,3-dimethylpiperidinem, 2,6-dimethylpiperidinem, 2,5-dimethylpyrrolidinem nebo 3-azaspiro[5,5]undekanem v dimethylformamidu, v přítomnosti palladium(II) diacetátu, trifenylfosfinu a triethylaminu po dobu 1,5 až 2 h v atmosféře oxidu uhelnatého při teplotě 60 °C.

Po dokončení reakce se aminy a dimethylformamid oddestilují za sníženého tlaku. Zbytek se rozpustí v chloroformu a postupně promyje vodou, vodným roztokem kyseliny chlorovodíkové, vodným roztokem hydrogenuhličitanu sodného a opět vodou do neutrální reakce. Po vysušení se oddestiluje rozpouštědlo a zbytek se přečistí chromatografií nebo překrystalováním, nebo oběma metodami.

Získané 4-aza-17-karboxamidoderiváty obecného vzorce I, obsahující dvojnou vazbu mezi atomy Ci₆ a C17 a jednoduchou nebo dvojnou vazbu mezi atomy C₅ a C₆, mohou být dehydrogenovány v polohách 1-2 steroidního skeletu s použitím chinonů v přítomnosti silylačního činidla nebo jiným způsobem, například anhydridem kyseliny fenylselenové.

Podle vynálezu se přednostně postupuje takto: Za účelem dehydrogenace se ke sloučenině obecného vzorce I přidá toluen, 2,3-dichlor-5,6-dikyan-l,4-benzochinon, bis(trimethylsilyl)trifluoracetamid a katalytické množství kyseliny trifluoroctové. Reakční směs se 18 h míchá pod dusíkem při teplotě místnosti, přičemž průběh reakce je možno sledovat pomocí kapalinové chromatografie. Po vymizení výchozí látky se k reakční směsi přidá cyklohexan-l,3-dion a směs se míchá další 3 h za účelem rozložení zbytku 2,3-dichlor-5,6-dikyan-l,4-benzochinonu. Pak se reakční směs podrobí po dobu 20 h mírnému varu za podmínek zpětného toku. Během této doby se adukt rozloží a vytvoří se dvojná vazba mezi atomy C| aC2 steroidního skeletu. K toluenovému roztoku se po ochlazení přidá methylenchlorid a směs se míchá s nasyceným roztokem hydrogenuhličitanu sodného. Po oddělení se organická fáze znovu extrahuje roztokem hydrogenuhličitanu sodného. Po vysušení se rozpouštědlo odstraní za sníženého tlaku a zbytek se překrystaluje.

Pro získání nasycených sloučenin obecného vzorce I se získané nenasycené sloučeniny hydrogenují.

Katalytickou hydrogenací je možno provádět například v přítomnosti palladia, naneseného na aktivním uhlí, a plynného vodíku v alkoholickém roztoku, nebo v přítomnosti palladia, naneseného na aktivním uhlí, v prostředí kyseliny mravenčí, nebo s použitím oxidu platičitého a vodíku v prostředí ledové kyseliny octové.

V prvním případě se například nenasycená sloučenina obecného vzorce I rozpustí v ethanolu a hydrogenuje v přítomnosti palladia, naneseného na aktivním uhlí, a plynného vodíku za atmosférického tlaku a při teplotě místnosti. Po dokončení reakce se katalyzátor odfiltruje a po odpaření rozpouštědla se zbytek přečistí rekrystalizací.

Dvojné vazby je možno nasytit také tím způsobem, že se nenasycené sloučeniny obecného vzorce I rozpustí v kyselině mravenčí a pak se hydrogenují v přítomnosti palladia, naneseného na aktivním uhlí, nebo může být nenasycená sloučenina po rozpuštění v ledové kyselině octové hydrogenována pomocí oxidu platiny v atmosféře vodíku. Po odfiltrování katalyzátoru se kyselina mravenčí nebo octová, použitá jako rozpouštědlo, oddestiluje a zbytek se přečistí rekrystalizací nebo chromatografií.

Prováděním hydrogenačních a dehydrogenačních stupňů ve vhodném pořadí je možno připravit sloučeniny obecného vzorce I, které obsahují dvojnou vazbu pouze mezi atomy Cj a C₂. Za tím účelem se sloučenina obecného vzorce I, obsahující dvojné vazby, získaná reakcí sloučenin obecných vzorců II a III, nasycuje hydrogenací výše uvedeným způsobem a pak se získaná nasycená sloučenina obecného vzorce I dehydrogenuje výše uvedeným způsobem v polohách 1-2.

17-halogen-4-azaandrostenové deriváty obecného vzorce II, použité jako výchozí látky pro přípravu sloučenin obecného vzorce I, mohou být syntetizovány s použitím známého 4-aza-5aandrostan-3,17-dionu, 4-azaandrost-5-en-3,17-dionu nebo jejich N-alkylderivátů [J. Pharm. Sci. 63, str. 19 až 23 (1974), J. Med. Chem. 27, 1690 (1984), J. Org. Chem. 46, str. 1442 až 1446 (1981)] následujícím způsobem.

Po rozpuštění známého 4-aza-5a-androstan-3,17-dionu, resp. 4-azaandrost-5-en-3,17-dionu nebo jejich N-alkylderivátů v ethanolu se k roztoku přidá triethylamin a hydrazinhydrát a reakční směs se vaří za podmínek zpětného toku. Po dokončení reakce se oddestiluje přebytek hydrazinhydrátu a triethy laminu, zbytek se vy sráží vodou a po odfiltrování se sraženina promyje vodou do neutrální reakce a vysuší. Takto získané surové 17-hydrazonoderiváty se použijí po přečištění nebo bez něho k přípravě 17-halogen-4-azaandrostenových derivátů obecného vzorce II.

Sloučeniny obecného vzorce II, obsahující jod jako X, se připravují tak, že 17hydrazonoderiváty, získané v předešlém stupni, se nechají reagovat s jodem při teplotě místnosti v halogenovaném uhlovodíku a/nebo aromatickém rozpouštědle v přítomnosti báze, tvořené terciárním aminem. Po dokončení reakce se terciární amin a přebytek jodu odstraní působením zředěného vodného roztoku kyseliny chlorovodíkové a pak thiosulfátem sodným. Po odpaření rozpouštědla se zbytek přečistí rekrystalizací nebo chromatografií.

Sloučeniny obecného vzorce II, obsahující chlor nebo brom jako X, se připravují ze 17hydrazonoderivátů tak, že se 17-hydrazonoderivát rozpustí v pyridinu a k roztoku se při teplotě asi -10 °C po částech přidá N-chlor- nebo N-bromsukcinimid. Po dokončení reakce se surový produkt vysráží vodou a odfiltruje. Sraženina se promývá do odstranění pyridinu, pak se suší a nakonec čistí rekrystalizací nebo chromatografií.

5a-reduktázová inhibiční aktivita 4-aza-5a-androstenových derivátů obecného vzorce I podle vynálezu byla studována s použitím dále popsané standardní metody in vitro.

Příprava enzymu steroidní 5a-reduktázy

K. přípravě enzymu byla použita zmrazená lidská hyperplastická prostata. Hlubokozmrazená prostata byla roztavena v pufru na bázi 20 mM fosforečnanu draselného (pH = 6,6), obsahujícím 320 mM sacharózy, 1 mM dithiothreitolu a 50 μΜ NADPH (roztok A), o teplotě 0 °C, pak přečištěna a rozřezána nůžkami na kousky o velikosti 2 až 3 mm³. Tyto kousky tkáně pak byly v homogenizéru Ultra turrax (Janke and Kunkel, Ika-Werk) homogenizovány při teplotě 0 °C v roztoku A o 4- až 5násobném objemu vzhledem k prostatě, pak byl homogenizát protlačen přes plastový filtr o velikosti pórů 0,5 mm. Takto získaná prostatická suspenze byla dále 5 min mleta pomocí nadzvukového zařízení a buněčná hmota byla přečištěna dvojnásobnou ultracentrifugací (100 000 x g, 1 h při 0 °C). Buněčná hmota, usazená po druhé centrifugaci, byla suspendována ve dvojnásobném objemu, vztaženo na tkáň, pufru na bázi 20 mM fosforečnanu draselného o teplotě 0 °C (pH = 6,6), obsahujícího 20 % glycerolu a 1 mM dithiothreitolu. Pak byla suspenze přefiltrována přes plastový filtr o velikosti pórů 0,5 mm a skladována do použití v oddělených částech při -70 °C.

Měření inhibice 5a-reduktázy

Při rutinním zjišťování inhibice enzymu obsahovala reakční směs 0,5 μΜ [³H]-testosteronu (se specifickou aktivitou 2,7 GBq/mmol), 1 mM dithiothreitolu, 500 μΜ NADPH, 40 mM TRIS citrátového pufru (pH = 5,1) a enzymový přípravek obsahoval 0,5 až 0,6 mg proteinu v objemu 0,5 ml. [TRIS je zkratka tris(hydroxymethyl)aminomethanu]. Zkoumané látky, rozpuštěné v 5 μΐ ethanolu, byly přidávány k inkubačnímu systému v množství, dostačujícím k dosažení konečné koncentrace 10^-6 až 10‘⁹ M látek v reakční směsi. Kontrolní vzorky dále obsahovaly 5 μΐ ethanolu. Po inkubaci vzorků po dobu 10 min při 37 °C (reakce enzymu byla po dobu 20 min lineární) byla aktivita enzymu zastavena přídavkem 2 ml ethylacetátu. Poté byly organickým rozpouštědlem extrahovány steroidy (testosteron, DHT, androstandiol) a pak rozděleny chromatografií na tenké vrstvě (TLC) na fólii Poligram Sil G/UV 254 (Macherey Nagel) s dvojnásobným vyvíjením směsí chloroform/methanol 198 : 3. Kvizualizaci skvrn steroidů na fólii TLC bylo během extrakce ke vzorkům přidáno vždy 12 pg testosteronu, DHT a androstandiolu. Po dělení pomocí TLC byly skvrny steroidů vyříznuty a na základě radioaktivity, měřené metodou kapalné scintilace, bylo stanoveno procento konverze testosteronu na DHT a androstandiol (což je hlavní metabolit DHT). 5a-reduktázová inhibiční aktivita zkoumaných látek byla charakterizována jejich koncentrací (hodnota IC₅₀), snižující procento konverze testosteronu o 50 % ve srovnání s kontrolní hodnotou.

V těchto testech byl jako referenční látka použit 17(3-[N-(l,l-dimethylethyl)karbamoyl]-3-oxo-4aza-5a-androst-l-en (sloučenina MK-906, Finasteride), vyvinutá firmou Měrek Sharp and Dohme Company (USA). Výsledky srovnávacích testů jsou uvedeny v tabulce.

Tabulka sloučenina______________________________________________________________________IC50__________

17[3-[N-(l,l-dimethylethyl)karbamoyl]-3-oxo-4-aza-5a-androst-l-en (MK-906) l,84.10'⁸ M

17p-(2,2-dimethylpiperidinokarbonyl)-3-oxo-4-aza-5a-androst-1 -en 8,59.10'⁹ M

17|3-(hexamethyleniminokarbonyl)-3-oxo-4-aza-5a-androst-l-en 1,31.10‘⁸ M

17[3-(heptamethyleniminokarbonyl)-3-oxo-4-aza-5a-androst-l-en 8,64. ΙΟ’⁹ M

Z údajů vyplývá, že sloučeniny obecného vzorce I podle vynálezu mají silnější 5a-reduktázovou inhibiční aktivitu v porovnání se 17p-[N-(l,l-dimethylethyl)karbamoyl]-3-oxo-4-aza-5a-androstl-enem, používaným jako referenční látka.

Na základě své steroidní 5a-reduktázové inhibiční aktivity jsou sloučeniny obecného vzorce I podle vynálezu vhodné k léčbě veškerých chorob, kde je terapeutickým cílem snížit koncentraci DHT ve tkáni. Mezi choroby tohoto druhu patří například benigní prostatická hyperplasie, akné, seborrhoea, femininní hirsutismus a androgenní alopecie.

Sloučeniny obecného vzorce I podle vynálezu je možno přednostně používat k léčbě benigní prostatické hyperplasie. K dosažení požadovaného účinku je možno sloučeniny pacientům podávat různými způsoby. V souvislosti s léčbou benigní prostatické hyperplasie se pacienty rozumějí teplokrevní živočichové, jako jsou psí samci, stejně jako mužští lidští jedinci.

Sloučeniny podle vynálezu mohou být podávány samotné nebo v kombinaci s dalšími sloučeninami. Výhodně je možno sloučeniny podávat ve formě farmaceutických přípravků orální nebo parenterální, tj. například intravenózní, intraperitoneální, intramuskulámí nebo subkutánní cestou včetně přímých injekcí účinného prostředku do prostaty. Je možno použít i takové farmaceutické přípravky, jako jsou implantáty s trvalým uvolňováním. Používané množství sloučenin se může pohybovat v širokých mezích a může se jednat o jakékoli účinné množství. V závislosti na konkrétním pacientu, vážnosti léčené choroby a způsobu podávání může účinné množství sloučeniny činit denně asi 0,001 až 10 mg/kg tělesné hmotnosti.

Farmaceutické přípravky, vhodné k orálnímu nebo parenterálnímu podávání, mohou obsahovat například 0,1 až 100 mg sloučeniny podle vynálezu. Meze dávkování, definované pro sloučeniny podle vynálezu, jsou vhodné ke zmenšování velikosti prostaty, tj. představují množství, účinné při léčbě benigní prostatické hyperplasie. Sloučeniny podle vynálezu je možno používat pro léčbu rozvinuté choroby (benigní prostatické hyperplasie), resp. pro léčbu symptomů, vyvolaných chorobou, je však možno je používat i k profylaktickému ošetření.

Sloučeniny podle vynálezu je rovněž možno používat k léčbě akné, seborrhoey, androgenní alopecie nebo femininního hirsutismu. V těchto případech mohou být sloučeniny podávány topicky, orálně, parenterálně, například intramuskulámě nebo subkutánně. Je vhodné používat topickou aplikaci. Ošetřovaným pacientem zde může být kterýkoli savec, například primát včetně člověka, a to mužský i ženský jedinec. Sloučeniny mohou být aplikovány samotné nebo v kombinaci s dalšími sloučeninami ve formě vhodných farmaceutických přípravků.

Množství použité účinné látky závisí na způsobu ošetření, stavu pacienta a vážnosti choroby (akné, seborrhoea, androgenní alopecie, femininní hirsutismus). Pro orální a parenterální podávání může účinná dávka sloučeniny činit denně 0,001 až 10 mg/kg tělesné hmotnosti. Pro tyto způsoby podávání mohou farmaceutické přípravky obsahovat 0,1 až 100 mg sloučeniny podle vynálezu jako účinné složky. Pro topickou aplikaci se může obsah účinné složky přípravku pohybovat od 0,001 až do 5 %. Při topickém podávání může být účinná složka aplikována přímo na ošetřované místo nebo na ústní nebo nosní sliznici.

Příklady provedení vynálezu

Vynález je podrobně osvětlen na příkladech provedení, které však neomezují jeho rozsah.

Příklad 1

Příprava 17-hydrazono-4-aza-5a-androstan-3-onu

K suspenzi 10 g (0,0346 mol) 4-aza-5a-androstan-3,17-dionu ve 100 ml ethanolu se přidá 14 ml (0,1 mol) triethylaminu a 50 ml (1,0 mol) hydrazinhydrátu a směs se 3 h vaří za podmínek zpětného toku. [Postup reakce se sleduje chromatografii na tenké vrstvě (TLC).] Po dokončení reakce se směs ochladí, roztok se odpaří na desetinu původního objemu a pak se produkt vysráží přídavkem asi lOnásobného objemu vody. Po zhutnění se sraženina odfiltruje, promyje vodou do neutrální reakce a vysušením se získá titulní sloučenina s výtěžkem 9,44 g (90 %); teplota tání 254-258 °C.

'H NMR (300 MHz, CDC1₃) δ ppm: 0,86 (s,3H,18-CH₃), 0,93 (s,3H,19-CH₃), 2,41 (m,2H,H-2), 3,07 (dd,lH,H-5), 4,77 (br,2H,NH₂), 5,74 (br,lH,NH).

Příklad 2

Příprava 17-hydrazono-4-azaandrost-5-en-3-onu

Postupem podle příkladu 1, avšak s použitím 4-azaandrost-5-en-3,17-dionu jako výchozí látky, se získá titulní sloučenina s výtěžkem 35 %; teplota tání 379-382 °C.

IR [KBr, v (cm'¹)]: 1633 (C=C), 1661 (C=N), 1693 (C=O), 3200 (NH), 3350 (NH₂).

Příklad 3

Příprava 17-hydrazono-4-methyl-4-aza-5a-androstan-3-onu

Postupem podle příkladu 1, avšak s použitím 4-methyl-4-aza-5a-androstan-3,17-dionu jako výchozí látky, se získá titulní sloučenina s výtěžkem 75 %; teplota tání 211-218 °C.

'H NMR (300 MHz, CDC1₃) δ ppm: 0,86 (s,3H,18-CH₃), 0,91 (s,3H,19-CH₃), 2,93 (s,3H,NCH₃), 3,05 <dd(J=3,6;J=12,6),lH,H-5>, 4,78 (vbr,2H,NH₂).

Příklad 4

Příprava 17-jod-4-aza-5a-androst-16-en-3-onu

A) Po rozpuštění 9,1 g (0,03 mol) 17-hydrazono-4-aza-5a-androstan-3-onu ve 1200 ml směsi chloroform/benzen 1 : 1 a přídavku 90 ml triethylaminu se k roztoku po kapkách přidá 11,4 g (0,045 mol) jodu, rozpuštěného ve 110 ml benzenu, a roztok se pak míchá ještě 60 až 90 min při teplotě místnosti. (Postup reakce se sleduje metodou TLC.) Po dokončení reakce se roztok zředí 500 ml chloroformu, postupně promyje 10% vodným roztokem kyseliny chlorovodíkové, vodou, 5% vodným roztokem thiosíranu sodného, vodou a nakonec 5% vodným roztokem hydrogenuhličitanu sodného a vodou, pak se vysuší nad bezvodým síranem sodným. Po odpaření rozpouštědel za sníženého tlaku se zbytek přečistí chromatografii na sloupci silikagelu s použitím chloroformu a směsi chloroform/aceton jako eluentů. Získaný produkt se překrystaluje z ethanolu a titulní sloučenina se získá s výtěžkem 5,9 g (50 %).

B) Postupuje se stejně, avšak jako báze se místo triethylaminu použije tetramethylguanidin. Tímto způsobem se titulní sloučenina získá s výtěžkem 65 %; teplota tání 278-282 °C.

’H NMR (300 MHz, CDC1₃) δ ppm: 0,73 (s,3H,18-CH₃), 0,91 (s,3H,19-CH₃), 3,1 (dd,lH,H-5), 6,18 (m,lH,H-16), 6,9 (br,lH,NH).

Příklad 5

Příprava 17-jod-4-azaandrosta-15,16-dien-3-onu

Postupem podle příkladu 4A, avšak s použitím 17-hydrazono-4-azaandrost-5-en-3-onu jako výchozí látky se s výtěžkem 57 % získá titulní sloučenina; teplota tání 227-230 °C.

’H NMR (300 MHz, CDC1₃) δ ppm: 0,78 (s,3H,18-CH₃), 1,13 (s,3H,19-CH₃),

4,9<dd(J=2,4;J=5,l),lH,H-6>, 6,15 <dd(J=3,2;J=l,7),lH,H-16), 8,27 (br,lH,NH).

Příklad 6

Příprava 17-jod-4-methyl-4-aza-5a-androst-16-en-3-onu

Postupem podle příkladu 4A, avšak s použitím 17-hydrazono-4-methyl-4-aza-5a-androstan-3onu jako výchozí látky a benzenu jako rozpouštědla, se získá titulní sloučenina s výtěžkem 52 %; teplota tání 176-181 °C.

*H NMR (300 MHz, CDC1₃) δ ppm: 0,74 (s,3H,18-CH₃), 0,92 (s,3H,19-CH₃), 2,94 (s,3H,NCH₃), 3,07 <dd(J=3,7;J=12,6),lH,H-5>, 6,13 <dd(J=3,2;J=l,7),lH,H-16).

Příklad 7

Příprava 17-chlor-4-methyl-4-aza-5a-androst-l 6-en-3-onu

Po rozpuštění 4 g (0,0126 mol) 17-hydrazono-4-methyl-4-aza-5a-androstan-3-onu ve 40 ml bezvodého pyridinu a ochlazení roztoku na 0 °C se po kapkách za intenzivního míchání přidá roztok 3,2 g (0,024 mol) N-chlorsukcinimidu, rozpuštěného ve 40 ml pyridinu. Po ustání prudkého vývinu dusíku se reakční směs míchá dalších 15 min a pak se přikape do 800 ml vody. Po zhutnění sraženiny se surový produkt odfiltruje, promyje vodou do neutrální reakce a suší za sníženého tlaku při teplotě místnosti nad oxidem fosforečným. Získaný surový produkt se přečistí chromatografií na sloupci silikagelu s použitím chloroformu jako eluentu. Po překrystalování odparku z petroletheru se získá titulní sloučenina s výtěžkem 2,15 g (53 %); teplota tání 139-140 °C.

'H NMR (60 MHz, CDC1₃) δ ppm: 0,88 (s,3H,18-CH₃), 0,93 (s,3H,19-CH₃), 2,89 (s,3H,N-CH₃), 3,0 (dd,lH,H-5), 5,53 (m,lH,H-16).

Příklad 8

Příprava 17-brom-4-methyl-4-aza-5a-androst-16-en-3-onu

Postupuje se podle příkladu 7, přičemž se jako výchozí látka použije podobně 17-hydrazono-4methyl-4-aza-5a-androstan-3-on, ale nechá se reagovat s N-bromsukcinimidem za vzniku titulní sloučeniny s výtěžkem 55 %; teplota tání 159-161 °C.

'H NMR (60 MHz, CDC1₃) δ ppm: 0,82 (s,3H,18-CH₃), 0,91 (s,3H,19-CH₃), 2,86 (s,3H,N-CH₃), 3,0 (dd,lH,H-5), 5,68 (m,lH,H-16).

Příklad 9

Příprava 17(3-(2,6-dimethylpiperidinokarbonyl)-3-oxo-4-aza-5a-androst-l 6-enu

Po rozpuštění 3,99 g (0,01 mol) 17-jod-4-aza-5a-androst-16-en-3-onu ve 150 ml dimethylformamidu se k roztoku přidá 0,224 g (0,001 mol) palladium(II) diacetátu, 0,524 g (0,002 mol) trifenylfosfinu, 10 ml triethylaminu a 18,9 ml (0,14 mol) cis-2,6-dimethylpiperidinu a roztok se udržuje 1,5 až 2 h v atmosféře oxidu uhelnatého při 60 °C. (Průběh reakce se sleduje pomocí TLC a plynové chromatografie.) Po úplném proběhnutí reakce se za sníženého tlaku oddestilují aminy a dimethylformamid (zkratka DMF), zbytek se rozpustí ve 150 ml chloroformu a postupně promyje vodou, 5% vodným roztokem kyseliny chlorovodíkové, nasyceným vodným roztokem hydrogenuhličitanu sodného a nakonec nasyceným vodným roztokem soli do neutrální reakce. Chloroformový roztok se vysuší nad bezvodým síranem sodným a po odfiltrování sušidla a odpaření rozpouštědla se zbytek přečistí chromatografií na sloupci silikagelu s použitím ethylacetátu jako eluentu a získá se titulní sloučenina s výtěžkem 3,50 g (85 %); teplota tání 307309 °C.

'H NMR (60 MHz, CDC1₃) δ ppm: 0,94 (s,3H,19-CH₃), 1,09 (s,3H,18-CH₃), 1,24 (d,6H,CHCH₃), 2,04 a 2,23 (2*m,2H,H-15), 2,40 (m,2H,H-2), 3,07 (dd,lH,H-5), 3,95-5,05 (vbr,2H,NCHCH₃), 5,70 (m,lH,H-16), 6,20 (br,lH,NH).

Příklad 10

Příprava 17(3-(2,5-dimethylpyrrolidinokarbonyl)-3-oxo-4-aza-5a-androst-16-enu

Postupuje se podle příkladu 9 s použitím 17-jod-4-aza-5a-androst-16-en-3-onu jako výchozí látky a dále 2,5-dimethylpyrrolidinu a získá se titulní sloučenina s výtěžkem 95 %; teplota tání 281-286 °C.

Příklad 11

Příprava 17 (3-(heptamethy lenim inokarbony l)-3 -oxo-4-aza-5 α-androst-16-enu

Postupuje se podle příkladu 9 s použitím 17-jod-4-aza-5a-androst-16-en-3-onu jako výchozí látky a dále heptamethyleniminu a získá se titulní sloučenina s výtěžkem 88 %; teplota tání 282285 °C.

Příklad 12

Příprava 17(3-(2,6-dimethylpiperidinokarbonyl)-3-oxo-4-aza-5a-androstanu

Po rozpuštění 2 g (0,0048 mol) 17(3-(2,6-dimethylpiperidinokarbonyl)-3-oxo-4-aza-5a-androst- 11

16-enu v 80 ml kyseliny mravenčí se pod dusíkem přidá suspenze, obsahující 2 g palladiového katalyzátoru na aktivním uhlí ve 12 ml vody a heterogenní reakční směs se míchá 4 až 5 h při teplotě místnosti. (Postup reakce se sleduje metodou TLC.) Po úplném proběhnutí reakce se odfiltruje katalyzátor a promyje směsí chloroformu a methanolu 1 : 1. Po odpaření spojeného roztoku dosucha se zbytek důkladně trituruje s vodou, sraženina se odfiltruje a promyje vodou a získá se titulní sloučenina s výtěžkem 1,74 g (87 %); teplota tání 300-303 °C.

Titulní sloučenina byla připravena rovněž výše popsanou hydrogenací 17(3-(2,6-dimethylpiperidinokarbonyl)-3-oxo-4-azaandrosta-5,16-dienu s výtěžkem 70 %.

'H NMR (300 MHz, CDC1₃) δ ppm: 0,71 (s,3H,18-CH₃), 0,90 (s,3H,19-CH₃), 1,18 a 1,20 (2*d,6H,CH-CH₃), 2,40 (m,2H,H-2), 2,71 (t,lH,H-17), 3,04 (dd,lH,H-5), 4,28 a 4,73 (2*m,2H,NCH-CH₃), 6,12 (br,lH,NH).

Příklad 13

Příprava 17(3-(2,5-dimethylpyrrolidinokarbonyl)-3-oxo-4-aza-5a-androstanu

Roztok, obsahující 2 g (0,005 mol) 17(3-(2,5-dimethylpyrrolidinokarbonyl)-3-oxo-4-aza-5aandrost-16-enu ve 140 ml ethanolu, se hydrogenuje 5 až 8 h za atmosférického tlaku v přítomnosti 0,5 g palladiového katalyzátoru na aktivním uhlí. (Průběh reakce se sleduje metodou TLC.) Po dokončení hydrogenace a odfiltrování katalyzátoru se roztok odpaří a získá se 1,9 g (95 %) titulní sloučeniny; teplota tání 295-300 °C.

‘H NMR (300 MHz, CDC1₃) δ ppm: 0,79 (s,3H,18-CH₃), 0,90 (s,3H,19-CH₃), 1,18 a 1,31 (2*d,6H,CH-CH₃), 2,40 (m,2H,H-2), 2,53 (t,lH,H-17), 3,05 (dd,lH,H-5), 4,11 (m,2H,NCHCH₃), 6,27 (br,lH,NH).

Příklad 14

Příprava 17(3-(heptamethyleniminokarbonyl)-3-oxo-4-aza-5a-androstanu

Postupuje se podle příkladu 13, avšak s použitím 17(3-(heptamethyleniminokarbonyl)-3-oxo-4aza-5a-androst-16-enu jako výchozí látky se získá titulní sloučenina s výtěžkem 85 %; teplota tání 256-266 °C.

'H NMR (60 MHz, CDC1₃) δ ppm: 0,82 (s,3H,18-CH₃), 0,91 (s,3H,19-CH₃), 2,8-4,1 (m,5H,H-5 aNCH₂), 6,69 (br,lH,NH).

Příklad 15

Příprava 17(3-(hexamethyleniminokarbonyl)-3-oxo-4-aza-5a-androstanu

Postupuje se podle příkladu 13, avšak s použitím 17(3-(hexamethyleniminokarbonyl)-3-oxo-4aza-5a-androst-16-enu jako výchozí látky se získá titulní sloučenina s výtěžkem 86 %; teplota tání 276-281 °C.

Příklad 16

Příprava 17(3-(4-methylpiperidinokarbonyl)-3-oxo-4-aza-5a-androstanu

Postupuje se podle příkladu 12, avšak s použitím 17(3-(4-methylpiperidinokarbonyl)-3-oxo-4-aza5a-androst-16-enu jako výchozí látky se získá titulní sloučenina s výtěžkem 83 %; teplota tání 314-319 °C.

Příklad 17

Příprava 17(3-(2,6-dimethylpiperidinokarbonyl)-3-oxo-4-aza-5a-androst-l-enu

K. suspenzi, obsahující 2,07 g (0,005 mol) 17p-(2,6-dimethylpiperidinokarbonyl)-3-oxo-4-aza5a-androstanu ve 24 ml toluenu, se po částech během 30 min přidá 1,25 g (0,0055 mol) 2,3dichlor-5,6-dikyan-l,4-benzochinonu, načež se reakční směs míchá dalších 30 min pod dusíkem. Pak se k suspenzi během 20 až 30 min přikape 5,5 ml (0,021 mol) bis-(trimethylsilyl)trifluoracetamidu a po dokončení tohoto přídavku se přidají 2 kapky kyseliny trifluoroctové, načež se směs míchá 20 h při teplotě místnosti. (Průběh reakce se sleduje metodou TLC.) Po úplném proběhnutí reakce se přidá 0,05 g (0,0005 mol) 1,3-cyklohexandionu a reakční směs se míchá další 3 h při teplotě místnosti, načež se vaří 18 až 20 h při zpětném toku. Po zředění 6 ml methylenchloridu se reakční směs promyje roztokem hydrogenuhličitanu sodného, vysuší nad bezvodým síranem sodným a za sníženého tlaku se odstraní rozpouštědla. Po překrystalování zbytku z ethylacetátu se získá titulní sloučenina s výtěžkem 1,44 g (70 %); teplota tání 288292 °C.

'H NMR (300 MHz, CDC1₃) δ ppm: 0,72 (s,3H,18-CH₃), 0,97 (s,3H,19-CH₃), 1,19 a 1,21 (2*d,6H,CH-CH₃), 2,73 (t,lH,H-17), 3,32 (m,lH,H-5), 4,28 a 4,73 (2*m,2H,NCH-CH₃), 5,80 (dd,lH,H-2), 6,02 (br,lH,NH), 6,77 (d,lH,H-l).

Příklad 18

Příprava 17|3-(2,5-dimethylpyrrolidinokarbonyl)-3-oxo-4-aza-5a-androst-l-enu

Postupuje se podle příkladu 17, avšak s použitím 17(3-(2,5-dimethylpyrrolidinokarbonyl)-3-oxo4-aza-5a-androstanu jako výchozí látky se získá titulní sloučenina s výtěžkem 67 %; teplota tání 291-295 °C.

'H NMR (300 MHz, CDC1₃) δ ppm: 0,80 (s,3H,18-CH₃), 0,97 (s,3H,19-CH₃), 1,19 a 1,31 (2*d,6H,CH-CH₃), 2,54 (t,lH,H-17), 3,32 (m,lH,H-5), 4,12 (m,2H,NCH-CH₃), 5,80 (dd,lH,H2), 6,03 (br,lH,NH), 6,77 (d,lH,H-l).

Příklad 19

Příprava 17(3-(heptamethyleniminokarbonyl)-3-oxo-4-aza-5a-androst-1 -enu

Postupuje se podle příkladu 17, avšak s použitím 17(3-(heptamethyleniminokarbonyl)-3-oxo-4aza-5a-androstanu jako výchozí látky se získá titulní sloučenina s výtěžkem 72 %; teplota tání 278-281 °C.

*H NMR (60 MHz, CDC1₃) δ ppm: 0,82 (s,3H,18-CH₃), 0,98 (s,3H,19-CH₃), 2,66 (t,lH,H-17), 3,32 (m,5H,H-5), 3,07-3,3 a 3,63-3,86 (m,4H,NCH₂), 5,80 (dd,lH,H-2), 6,02 (br,lH,NH), 6,78 (d,lH,H-l).

Příklad 20

Příprava 17(3-(hexamethyleniminokarbonyl)-3-oxo-4-aza-5oc-androst-1 -enu

Postupuje se podle příkladu 17, avšak s použitím 17(3-(hexamethyleniminokarbonyl)-3-oxo-4aza-5a-androstanu jako výchozí látky se získá titulní sloučenina s výtěžkem 71 %; teplota tání 270-273 °C.

'H NMR (60 MHz, CDC1₃) δ ppm: 0,81 (s,3H,18-CH₃), 0,98 (s,3H,19-CH₃), 2,9-4,1 (m,5H,H-5 aNCH₂), 5,79 (dd,lH,H-2), 6,5 (br,lH,NH), 6,79 (d,lH,H-l).

Příklad 21

Příprava 17(3-(4-methylpiperidinokarbonyl)-3-oxo-4-aza-5a-androst-l-enu

Postupuje se podle příkladu 17, avšak s použitím 17(3-(4-methylpiperidinokarbonyl)-3-oxo-4-aza5a-androstanu jako výchozí látky se získá titulní sloučenina s výtěžkem 75 %; teplota tání 318324 °C.

Příklad 22

Příprava 17(3-(3,3-dimethylpiperidinokarbonyl)-3-oxo-4-aza-5a-androst-1 -enu

Postupuje se podle příkladu 17, avšak s použitím 17p-(3,3-dimethylpiperidinokarbonyl)-3-oxo-4aza-5a-androstanu jako výchozí látky se získá titulní sloučenina s výtěžkem 73 %; teplota tání 278-282 °C.

Příklad 23

Příprava 17 p-(4,4-pentamethylenpiperidinokarbonyl)-3 -oxo-4-aza-5a-androst-1 -enu

Postupuje se podle příkladu 17, avšak s použitím 17(3-(4,4-pentamethylenpiperidinokarbonyl)-3oxo-4-aza-5a-androstanu jako výchozí látky se získá titulní sloučenina s výtěžkem 75 %; teplota tání 308-311 °C.

Příklad 24

Příprava 17[3-(2,6-dimethylpiperidinokarbonyl)-3-oxo-4-aza-5a-androsta-l,16-dienu

Postupuje se podle příkladu 17, avšak s použitím 17(3-(2,6-dimethylpiperidinokarbonyl)-3-oxo-4aza-5a-androst-16-enu jako výchozí látky se získá titulní sloučenina s výtěžkem 62 %; teplota tání 288-290 °C.

'H NMR (300 MHz, CDC1₃) δ ppm: 1,01 (s,3H,19-CH₃), 1,10 (s,3H,18-CH₃), 1,24 a 1,25 (2*d,6H,CH-CH₃), 2,05 a2,23 (2*m,2H,H-15), 3,35 (m,lH,H-5), 4,00-5,1 (vbr,2H,NCH-CH₃), 5,71 (m,lH,H-16), 5,80 (dd,lH,H-2), 6,19 (br,lH,NH), 6,80 (d,lH,H-l).

Příklad 25

Příprava 17(3-(2,5-dimethylpyrrolidinokarbonyl)-3-oxo-4-aza-5a-androsta-l,16-dienu

Postupuje se podle příkladu 17, avšak s použitím 17(3-(2,5-dimethylpyrrolidinokarbonyl)-3-oxo4-aza-5a-androst-16-enu jako výchozí látky se získá titulní sloučenina s výtěžkem 57 %; teplota tání 284-287 °C.

'H NMR (300 MHz, CDC1₃) δ ppm: 1,01 (s,3H,19-CH₃), 1,12 (s,3H,18-CH₃), 1,22 a 1,29 (2*d,6H,CH-CH₃), 2,05 a 2,24 (m,2H,H-15), 3,35 (m,lH,H-5), 3,95-4,18 (m,2H,NCH-CH₃), 5,82 (dd,lH,H-2), 5,87 (m,lH,H-16), 6,24 (br,lH,NH), 6,81 (d,lH,H-l).

Příklad 26

Příprava 17(3-(2,6-dimethylpiperidinokarbonyl)-4-methyl-3-oxo-4-aza-5a-androstanu

Postupuje se podle příkladu 13, avšak s použitím 17|3-(2,6-dimethylpiperidinokarbonyl)-4methyl-3-oxo-4-aza-5a-androst-16-enu jako výchozí látky se získá titulní sloučenina s výtěžkem 88 %; teplota tání 200-203 °C.

'H NMR (60 MHz, CDC1₃) δ ppm: 0,71 (s,3H,18-CH₃), 0,90 (s,3H,19-CH₃), 1,21 (d,6H,CHCH₃), 2,92 (s,3H,NCH₃), 3,05 (dd,lH,H-5), 4,0-5,0 (2*vbr,2H,NCH-CH₃), 6,12 (br,lH,NH).

Příklad 27

Příprava 17(3-(heptamethyleniminokarbonyI)-4-methyl-3-oxo-4-aza-5a-androstanu

Postupuje se podle příkladu 13, avšak s použitím 17|3-(heptamethyleniminokarbonyl)-4-methyl3-oxo-4-aza-5a-androst-16-enu jako výchozí látky se získá titulní sloučenina s výtěžkem 85 %; teplota tání 126-129 °C.

'HNMR (60 MHz, CDC1₃) δ ppm: 0,83 (s,3H,18-CH₃), 0,91 (s,3H,19-CH₃), 2,94 (s,3H,NCH₃), 2,8-4,1 (m,5H,H-5 a CH₃).

Příklad 28

Příprava 17(3-(hexamethyleniminokarbonyl)-4-methyl-3-oxo-4-aza-5a-androstanu

Postupuje se podle příkladu 13, avšak s použitím 17|3-(hexamethyleniminokarbonyl)-4-methyl-3oxo-4-aza-5a-androst-16-enu jako výchozí látky se získá titulní sloučenina s výtěžkem 87 %; teplota tání 135-137 °C.

'H NMR (60 MHz, CDC1₃) δ ppm: 0,80 (s,3H,18-CH₃), 0,91 (s,3H,19-CH₃), 2,94 (s,3H,NCH₃), 2,8-4,1 (m,5H,H-5 aNCH₂).

Příklad 29

Příprava olejového injekčního roztoku

Účinná složka se rozpustí ve směsi benzylbenzoátu a ricinového oleje, vhodného pro přípravu injekčních roztoků, pak se roztok doplní na požadovaný objem ricinovým olejem. Poté se roztok filtruje do odstranění bakterií a cizorodých látek a pak se plní do ampulí a sterilizuje teplem.

Obsah složek v 1 ml objemu je účinná složka benzylbenzoát ricinový olej doplnit do 1 ml mg

120 mg

Místo ricinového oleje je možno se stejným výsledkem použít rovněž slunečnicový olej.

PATENTOVÉ NÁROKY

Claims

1. Nové 17 β-substituované deriváty 4-azaandrostanu obecného vzorce I (I), kde

R znamená vodík nebo C1.3 alkylovou skupinu,

R^l a R² jsou stejné nebo různé a představují vodík nebo C_M alkylovou skupinu, s výhradou, že oba symboly mohou znamenat vodík pouze v případě, kdy n je vyšší než 5, nebo

R¹ a R² společně znamenají α,οο-alkylenovou skupinu s 5 až 7 uhlíkovými atomy, přičemž koncové uhlíkové atomy této alkylenové skupiny jsou vázány k témuž uhlíkovému atomu kruhu, n je 4, 5, 6 nebo 7 a — představuje jednoduchou nebo dvojnou vazbu.

2. 17(3-substituovaný derivát 4-azaandrostanu podle nároku 1, vybraný ze skupiny, zahrnující 17(3-(2,6-dimethylpiperidinokarbonyl)-3-oxo-4-aza-5a.-androst-16-en,

17(3-(2,5-dimethylpyrrolidinokarbonyl)-3-oxo-4-aza-5a-androst-16-en,

17(3-(heptamethyleniminokarbonyl)-3-oxo-4-aza-5a-androst-16-en,

17(3-(2,6-dimethylpiperidinokarbonyl)-3-oxo-4-aza-5a-androstan,

17(3-(2,5-dimethylpyrrolidinokarbonyl)-3-oxo-4-aza-5a-androstan,

17(3-(heptamethyleniminokarbonyl)-3-oxo-4-aza-5a-androstan,

17(3-(2,6-dimethylpiperidinokarbonyl)-3-oxo-4-aza-5a-androst-1 -en,

17(3-(2,5-dimethylpyrrolidinokarbonyl)-3-oxo-4-aza-5a-androst-l -en,

17(3-(heptamethyleniminokarbonyl)-3-oxo-4-aza-5a-androst-l-en,

17 [3-(hexamethy leniminokarbonyl)-3-oxo-4-aza-5a-androst-1 -en,

17(3-(4-methylpiperidinokarbonyl)-3-oxo-4-aza-5a-androst-1 -en,

17(3-(3,3-dimethylpiperidinokarbonyl)-3-oxo-4-aza-5a-androst-1 -en,

17(3-(4,4-pentamethylenpiperidinokarbonyl)-3-oxo-4-aza-5a-androst-1 -en,

17|3-(2,6-dimethylpiperidinokarbonyl)-3-oxo-4-aza-5a-androsta-1,16-dien,

17(3-(2,5-dimethylpyrrolidinokarbonyl)-3-oxo-4-aza-5a-androsta-l, 16-dien,

17(3-(2,6-dimethylpiperidinokarbonyl)-4-methyl-3-oxo-4-aza-5a-androstan,

17(3-(heptamethyIeniminokarbonyl)-4-methyl-3-oxo-4-aza-5a-androstan, 17(3-(hexamethyleniminokarbonyl)-4-methyl-3-oxo-4-aza-5a-androstan,

17(3-(hexamethyleniminokarbonyl)-3-oxo-4-aza-5a-androstan a

17(3-(4-methylpiperidinokarbonyl)-3-oxo-4-aza-5a-androstan.

3. Farmaceutický- přípravek s inhibičním účinkem vůči enzymu 5a-reduktáze, vyznačující se tím, že jako účinnou složku obsahuje terapeuticky účinné množství jednoho nebo více 17(3-substituovaných derivátů 4-azaandrostanu obecného vzorce I, kde R, R¹, R² n a — má význam uvedený v nároku 1, ve směsi s přísadami plnicími, ředicími, stabilizačními, upravujícími pH aosmotický tlak a/nebo usnadňujícími formulaci, obvykle používanými ve farmaceutickém průmyslu.

4. Způsob přípravy nových 17(3-substituovaných derivátů 4-azaandrostanu obecného vzorce I (I) kde

R znamená vodík nebo Ci.₃ alkylovou skupinu,

R¹ a R² společně znamenají a,co-alkylenovou skupinu s 5 až 7 uhlíkovými atomy, přičemž koncové uhlíkové atomy této alkylenové skupiny jsou vázány k témuž uhlíkovému atomu kruhu, n je 4, 5, 6 nebo 7 a — představuje jednoduchou nebo dvojnou vazbu, vyznačující se tím, že zahrnuje

- reakci 17-halogeno-4-azaandrostenového derivátu obecného vzorce II

X

R (Π), kde R a — mají výše uvedený význam a X znamená chlor, brom nebo jod, s cyklickým aminem obecného vzorce III

H-N (CH₂)_n (ΠΙ), kde R¹, R² a n mají výše uvedený význam, v dipolámím aprotickém rozpouštědle v přítomnosti palladnaté soli, báze, tvořené terciárním aminem, a fosfinů, nebo v přítomnosti palladnatého komplexu a báze, tvořené terciárním aminem, v atmosféře oxidu uhelnatého při teplotě mezi 35 a 80 °C a

- popřípadě dehydrogenaci získané sloučeniny obecného vzorce I, kde R, R¹, R², vazba — mezi atomy C5 aQ an mají výše uvedený význam, obsahující dvojnou vazbu mezi atomy Ci6 aC17 a jednoduchou vazbu mezi atomy Ct aC2, za vzniku sloučeniny obecného vzorce I, obsahující dvojné vazby mezi atomy Ci a C2 a mezi atomy Ci6 a C17, kde R, R¹, R², vazba — mezi atomy C5 a C₆ a n mají výše uvedený význam, a/nebo

- popřípadě transformaci získané sloučeniny obecného vzorce I, kde R, R¹, R², n, vazba — mezi atomy C5 a Cé a mezi atomy Ci a C₂ mají výše uvedený význam, obsahující dvojnou vazbu mezi atomy Ci6 a C17, katalytickou hydrogenací na sloučeninu obecného vzorce I, obsahující na místě vazby — jednoduchou vazbu, kde R, R¹, R² a n mají výše uvedený význam, a/nebo

- popřípadě dehydrogenaci získané sloučeniny obecného vzorce I, kde R, R¹, R² an mají výše uvedený význam, obsahující jednoduché vazby mezi atomy Ci a C2, atomy C5 a C6 a atomy Ci6 aC[7, za vzniku sloučeniny obecného vzorce I, obsahující dvojnou vazbu mezi atomy Ci a C2, kde R, R¹, R² a n mají výše uvedený význam a vazba — znamená jednoduché vazby mezi atomy C5 a Cg a atomy C|6 a C17.

5. Způsob podle nároku 4, vyznačující se tím, že se použije jako palladnatá sůl palladium(II) diacetát nebo chlorid palladnatý, jako báze triethylamin a jako fosfín trifenylfosfm, 1,4-bis(difenylfosfino)butan, l,2-bis(difenylfosfino)ethan nebo l,3-bis(difenylfosfmo)propan.

6. Způsob podle nároku 4, vyznačující se tím, že se jako palladnatý komplex použije komplex soli dvojmocného palladia s trifenylfosfinem, výhodně [bis(trifenylfosfino)palladium(II)]dichlorid nebo diacetát.

7. Způsob podle nároku 4, vyznačující se tím, že se jako dipolámí aprotické rozpouštědlo použije dimethylformamid nebo dimethylsulfoxid.

8. Způsob podle nároku 4, vyznačující se tím, že se dehydrogenace mezi atomy Ci a C₂ sloučenin obecného vzorce I, kde R, R¹, R², n a vazba — mezi atomy C5 a C₆ i atomy C]6 aCn má význam uvedený v nároku 1, obsahující jednoduchou vazbu mezi atomy Ci aC₂, provádí s použitím látky typu chinonu, výhodně 2,3-dichlor-5,6-dikyan-l,4-benzochinonu, v přítomnosti silylačního činidla, výhodně bis(trimethylsilyl)-trifluoracetamidu.

9. Způsob podle nároku 4, vyznačující se tím, že se dehydrogenace mezi atomy Ci a C₂ sloučenin obecného vzorce I, kde R, R¹, R~, n a vazba — mezi atomy C5 a Cď i atomy C|6 aC]₇ má význam uvedený v nároku 1, obsahující jednoduchou vazbu mezi atomy Ci aC₂, provádí s použitím anhydridu kyseliny benzenselenové.

10. Způsob podle nároku 4, vyznačující se tím, že katalytická hydrogenace sloučenin obecného vzorce I, kde R, R¹, R², n a vazby — mezi atomy C_t a C₂ a atomy C₅ a Cg mají výše uvedený význam, obsahující dvojnou vazbu mezi atomy Cjů aC|₇, se provádí v alkoholickém roztoku v přítomnosti plynného vodíku a palladia, naneseného na aktivním uhlí, nebo v přítomnosti palladia, naneseného na aktivním uhlí v prostředí kyseliny mravenčí, nebo v přítomnosti plynného vodíku a oxidu platičitého v prostředí ledové kyseliny octové.